Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2018-03-27T18:48:03Z No. of bitstreams: 1 2017 - Tays Araujo Camilo.pdf: 3555895 bytes, checksum: 8b6818596f8654186472296bc3b528aa (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-27T18:48:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017 - Tays Araujo Camilo.pdf: 3555895 bytes, checksum: 8b6818596f8654186472296bc3b528aa (MD5) Previous issue date: 2017-03-07 / CNPq / Infectious Bronchitis Virus (vBIG) is a highly contagious viral agent among the species Gallus gallus, being considered one of the pathologies that most affects small and lare world poultry producers. Vaccination as a form of prevention to this disease, has not been effective, due to the great genetic variability found. As in the world, in Brazil there are already several studies characterizing the genetic variability found in this virus. In Rio de Janeiro, poultry farming suffers from the disease, but there is no recent study to analyze the genetic variability of the strains found, as a way of supporting epidemiological studies that may help in the future, in the choice of Protocols. The objective of this study was to characterize the S1 gene of the Chicken Infectious Bronchitis virus (vBIG) in chickens farms in the southern region of Rio de Janeiro, as well as to evaluate the genetic variability of the S1 gene in a BIG outbreak on a farm Of laying hens of the northern region of. Tissue samples were collected from animals presenting BIG-compatible clinical signs, such as weight loss, respiratory problems and low productivity. Samples of collected tissues were stored in solution of RNA Later and formalin 10% buffered for molecular and histopathological diagnoses, respectively. In order to perform the molecular analyzes, RNA extraction techniques, as well as RT-PCR (Reverse Transcriptase, Polymerase Chain Reaction), real-time PCR (RT-qPCR), Nested PCR (RT-nPCR), and Sequencing of some samples collected. For the histopathological analyzes, cleavage and preparation of microscopy slides were performed. The results obtained from the sequencing were compared to the sequence of the Ma5 vaccine strain as reference strain, in addition to other sequences deposited on GenBank, exhibiting a variable identity percentage of 72.41% to 100%. Among the samples from each farm, there was variability, even within the same bird. All sequences analyzed were described as genotype 1, belonging to strains 1 and 11; In the comparison of amino acids, there were changes in the hypervariable regions of the virus in the sequences classified as BR-1, being able to explain the low cross-protection that have been occurring in Brazilian plants. These results demonstrated the importance of virus identification, since it becomes an important tool in epidemiological surveillance and in the elaboration of efficient vaccine protocols. / O v?rus da Bronquite Infecciosa das Galinhas (vBIG) ? um agente viral altamente contagioso entre a esp?cie Gallus gallus, sendo considerado uma das patologias que mais acomete a avicultura mundial. A vacina??o como forma de preven??o a esta doen?a, n?o tem sido eficaz, devido a grande variabilidade gen?tica encontrada. Assim como no mundo, no Brasil tamb?m j? existem diversos estudos caracterizando a variabilidade gen?tica encontrada neste v?rus. No Rio de Janeiro, a cria??o av?cola sofre com a doen?a, por?m ainda n?o existe um estudo recente com o objetivo de analisar a variabilidade gen?tica das cepas encontradas, como uma forma de apoio a estudos epidemiol?gicos, que possam auxiliar no futuro, na escolha de protocolos vacinais mais adequados. Este estudo teve como objetivo realizar a caracteriza??o molecular do gene S1 do v?rus da Bronquite Infecciosa das Galinhas (vBIG) em granjas de frangos de corte na regi?o Sul fluminense, como tamb?m avaliar a variabilidade gen?tica do gene S1 em um surto de BIG em uma granja de poedeiras da regi?o Norte fluminense. Foram realizadas coletas de tecidos dos animais que apresentavam sinais cl?nicos compat?veis com BIG, como perda de peso, problemas respirat?rios e baixa produtividade. Amostras de tecidos coletados foram armazenadas em solu??o de RNA Later e formalina 10% tamponada para os diagn?sticos molecular e histopatol?gico, respectivamente. Para realiza??o das an?lises moleculares foram utilizadas t?cnicas de extra??o de RNA, bem como RT-PCR (?Reverse Transcriptase, Polymerase Chain Reaction?), PCR em tempo real (RT-qPCR), ?Nested? PCR (RT-nPCR), e sequenciamento de algumas amostras coletadas. Para as an?lises histopatol?gicas foram realizadas clivagem e elabora??o de l?minas de microscopia. Os resultados obtidos do sequenciamento foram comparados a sequ?ncia da cepa vacinal Ma5, como cepa refer?ncia, al?m de outras sequencias depositadas no GenBank, apresentando um percentual de identidade vari?vel de 72,41% a 100%. Dentre as amostras de cada granja, houve variabilidade, at? mesmo dentro de uma mesma ave. Todas as sequencias analisadas foram descritas como gen?tipo 1, pertencentes as linhagens 1 e 11; Na compara??o de amino?cidos, houve mudan?as nas regi?es hipervari?veis do v?rus nas sequ?ncias classificadas como BR-1, podendo explicar a baixa prote??o-cruzada que v?m ocorrendo nos plant?is brasileiro. Estes resultados demonstraram a import?ncia da identifica??o g?nica do v?rus, pois se torna uma ferramenta importante na vigil?ncia epidemiol?gica e em elabora??es de protocolos vacinais que sejam eficientes.

Coronavírus, incluindo-se o Coronavírus aviário (ACoV), possuem o maior genoma composto por RNA conhecido entre os vírus. Aproximadamente dois terços desse genoma codificam proteínas não estruturais (Nsps), cujas funções parecem estar associadas à replicação e patogênese viral. Até o momento, esses alvos têm sido pouco explorados quanto a sua diversidade em diferentes linhagens de ACoV. O presente estudo teve como objetivo investigar a diversidade dos genes codificadores das proteínas não estruturais Nsp2 e protease Papaína-like (Plpro), utilizando-se linhagens brasileiras de ACoV. Para tanto, 10 linhagens de ACoV, isoladas em ovos embrionados, foram submetidas à RT-PCR direcionada aos genes codificadores de Plpro e Nsp2, seguindo-se o sequenciamento de DNA e a análise filogenética, juntamente com sequências homólogas obtidas no GenBank. Além disso, realizou-se a genotipagem por meio do sequenciamento parcial do gene codificador da proteína de espícula (região S1). Três das amostras virais obtidas e investigadas no presente trabalho apresentaram padrão de segregação discordante para os genes estudados. O isolado CRG I22 agrupou-se com linhagens virais pertencentes ao genótipo Massachusetts para S1 e com o grupamento de ACoVs brasileiros os genes da Nsp2 e Plpro. O isolado CRG I33 agrupou-se com linhagens virais pertencentes ao genótipo brasileiro para s1 e plpro e de maneira divergente para o gene da Nsp2. Para o isolado CRG I38, não foi obtida a genotipagem por s1, entretanto, similarmente ao observado para o isolado CRG I33, esse isolado agrupo-se com linhagens virais brasileiras para o gene plro e de maneira independente para o gene nsp2. As demais linhagens estudadas resultaram na formação de um grupamento especificamente brasileiro de ACoV, para os três genes estudados. Esses achados sugerem a ocorrência de recombinação nessas amostras discrepantes. Quanto às identidades médias entre as sequencias nucleotídicas analisadas, a região de s1 analisada apresentou as menores identidades (73,75% ±16,78), seguido pelo gene plpro (88,06% ±5,7) e do gene nsp2 (92,28% ±4,37), em acordo com a literatura. Assim sendo, os alvos investigados podem constituir ferramentas úteis na epidemiologia molecular do ACoV e na investigação de linhagens recombinantes do vírus. O presente estudo é o primeiro a investigar a diversidade genética de genes codificadores de proteínas não-estruturais em linhagens brasileiras de ACoV. Os resultados aqui apresentados reforçam a existência de um genótipo brasileiro de ACoV, para os 3 genes estudados. Entretanto, discrepâncias pontuais encontradas no padrão genotípico para s1, nsp2 e nsp3 permitem inferir uma diversidade genética maior do que a conhecida até o momento, possivelmente resultante de eventos de recombinação entre ACoVs brasileiros, ACoVs vacinais e outros ainda desconhecidos. Os resultados obtidos auxiliam na compreensão dos padrões e evolução dos ACoVs / Coronaviruses, including Avian coronavirus (ACoV), have the largest known RNA genome. Nearly two thirds of its genome codes for non-structural proteins (Nsps), whose functions appear to be linked to viral replication and pathogenesis. Hitherto these targets have been poorly explored regarding the ACoV lineages diversity. The present study aimed to assess the diversity of non-structural protein 2 (nsp2), papain-like protease (plpro) and spike protein (S1 subunit) coding genes, in Brazilian ACoV strains. To this end, 10 ACoV strains, isolated in embryonated eggs, had its 3rd and 5th passages submitted to RT-PCR targeting nsp2, plpro and s1, followed by DNA sequencing and phylogenetic analysis, herewith homologous sequences obtained from GenBank. Three of the ACoV strains sequenced showed a discordant segregation pattern for target genes. CRG I22 strain clustered with Massachusetts genotipe strains for S1, and with Brazilian cluster for nsp3 and plpro genes. CRG I33 strain, clustered with Brazilian strains for S1 and plpro genes, and was divergent for nsp2 gene. For CRG I38 strain, the S1 sequence was not obtained, however, similarly to what was observed for CRG I33, this strain grouped with the Brazilian lineage for plpro gene and was divergent for nsp2 gene. All the other ACoV here sequenced resulted in a specific Brazilian cluster for the three studied genes. Regarding the mean nucleotide identities measured, s1 gene showed the lowest identity (73.75% ±16.78), followed by plpro gene (88.06% ±5.7) and nsp2 gene (92.28% ±4.37), in accordance with previous reported data. Therefore, the targets of the present study are useful tools for ACoV molecular epidemiology studies and for the survey of recombinant ACoV strains. The presented study is the first one investigating the molecular diversity of non-structural proteins coding genes in Brazilian strains of ACoV. Results achieved herein reinforce the data over the circulation of ACoV Brazilian strains in this country, for the three investigated genes. However, divergences found between S1, nsp2 and plpro genetic patters allow inferring a higher molecular diversity than previously known. It is possible that this divergence is due to recombination events between ACoV from vaccines, Brazilian field strains and others still unknown. These results contribute on the comprehension over genetic patters and evolution of ACoV

O endotélio corneano é uma monocamada de células poligonais localizadas na face posterior da córnea e é essencial para a manutenção da transparência corneana. Não foram encontradas referências na literatura a respeito dos parâmetros morfológicos e morfométricos do endotélio da córnea de galinhas, apesar destes animais serem amplamente utilizados como modelo experimental em estudos oftálmicos, devido à similitude com a córnea de humanos. O objetivo deste estudo foi o de avaliar os parâmetros morfométricos e o pleomorfismo da região central do endotélio da córnea de galinhas (Gallus gallus domesticus) de diferentes faixas etárias, utilizando a microscopia especular de contato. Avaliaram-se a densidade, a área celular média e o pleomorfismo das células do endotélio da córnea de 60 olhos de 30 galinhas da raça Leghorn branca. Os animais foram divididos em três grupos composto por 10 animais cada: G1 (animais com 30 dias de idade), G2 (animais com 45 dias de idade) e G3 (animais com 60 dias de idade). O presente estudo revelou que o endotélio da córnea de galinhas é composto por células poligonais de padrão regular, com predomínio de formato hexagonal. O endotélio corneano de galinhas sofreu alterações decorrentes da idade no que tange a morfometria, mas no que diz respeito ao pleomorfismo, não ocorreram alterações em resposta ao envelhecimento. / The corneal endothelium is a monolayer of polygonal cells located on the posterior face of the cornea and it is essential for the maintenance of corneal transparency. We found no references in the literature concerning the morphological and morphometric parameters of the corneal endothelium of chickens, although these animals are widely used as experimental model in ophthalmic studies due to the similarity with the human cornea. The objective of this study was to evaluate the morphometric parameters and the pleomorphism of central corneal endothelium of chickens (Gallus gallus domesticus) of different ages using the contact specular microscopy. The density, the average cell area and the pleomorphism of the corneal endothelial cells were evaluated on 60 eyes of 30 white Leghorn chickens. The animals were divided into three groups of 10 animals each: G1 (animals with 30 days of age), G2 (animals with 45 days of age) and G3 (animals with 60 days of age). The present study revealed that the corneal endothelium of chickens is composed of regular polygonal cells, with predominance of hexagonal shape. The corneal endothelium of chickens has changed due to age in respect to morphometry, but in regard to pleomorphism, no changes occurred in response to aging.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-10-25T18:52:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1131282 bytes, checksum: 4b747a1e5ad763d8e9d494973ee074cc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-25T18:52:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1131282 bytes, checksum: 4b747a1e5ad763d8e9d494973ee074cc (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foram conduzidos dois ensaios experimentais com objetivo de avaliar o efeito da redução da proteína bruta em dietas, suplementadas ou não com nitrogênio não essencial (experimento I), e de diferentes relações dietéticas de nitrogênio essencial:nitrogênio não essencial (experimento II) para poedeiras leves. Em ambos ensaios, o período experimental teve duração de 112 dias, sendo subdividido em 4 períodos de coleta de dados de 28 dias cada. No experimento I, 240 galinhas poedeiras Hy-Line W-36 aletoriamente distribuídas a 40 unidades experimentais, divididas em cinco grupos de tratamentos com 48 aves cada. Os tratamentos consistiram de 3 rações com os níveis de proteína bruta de 170.0, 150.0 e 130.0g de proteína/kg de dieta com as relações nitrogênio essencial:nitrogênio não essencial de 37/63, 42/58 e 47/53, respectivamente. Adicionalmente, as duas rações contendo os níveis de proteína bruta de 150.0 e 130.0g de proteína/kg de dieta, foram suplementadas com 37.60 e 60.80g de ácido glutâmico/kg de dieta, respectivamente, com objetivo de igualar a relação nitrogênio essencial:nitrogênio não essencial da dieta de maior nível proteico (37/63). A redução dietética da proteína bruta de 170.0g/kg para 150.0g/kg resultou na redução do peso e massa de ovos, enquanto a redução para 130.0g/kg além de acarretar piora das variáveis antes descritas, também piorou a conversão alimentar por massa de ovos, reduziu o consumo de ração e o peso de albumen. Não observou-se diferenças no desempenho e qualidade de ovos de aves alimentadas com dietas em que o conteúdo de proteína foi reduzido. A suplementação de ácido glutâmico em dietas contendo 150.0g de proteína/kg promoveu mesmo desempenho das aves alimentadas com 170.g de proteína/kg, enquanto em dietas contendo 130.0g de proteína/kg a inclusão de ácido glutâmico resultou nas piores médias de desempenho e qualidade de ovos em comparação aos demais tratamentos. Os resultados demonstram que o déficit de nitrogênio não essencial resulta em piora no desempenho de galinhas poedeiras e revela potencial de utilização de ácido glutâmico como fonte de nitrogênio não essencial, desde que utilizado em baixas concentrações. No experimento II, 360 galinhas Hy-Line W-36 foram distribuídas em seis tratamentos, com dez repetições e seis aves por unidade experimental. Os tratamentos foram obtidos a partir da suplementação gradativa da mistura de L-alanina, L-glicina e ácido glutâmico (proporção 60%/20%/20%) em uma dieta basal com reduzida proteína bruta e relação nitrogênio essencial:nitrogênio não essencial de 55/45 com objetivo de produzir as relações entre nitrogênios de 55/45, 52/48, 48/52, 44/56 e 41/59. Uma sexta dieta com maior teor de proteína bruta, denominada grupo controle, foi formulada com relação nitrogênio essencial:nitrogênio total de 41/59. As relações de 55/45 e 52/48 resultaram em menor peso de ovo e pior conversão alimentar por massa de ovos em comparação ao grupo controle. Observou-se redução nos valores de massa de ovos somente no grupo de aves alimentado com a relação de 55/45. Baseado nos resultados, recomenda-se que a relação dietética de nitrogênio essencial:nitrogênio não essencial para poedeiras leves não ultrapasse o valor de 48/52 / Two trials were performed in order to evaluate laying hen responses to reduction on dietary crude protein supply and non-essential nitrogen supplementation (Experiment I) and to determine the essential to non-essential nitrogen ratio, which warrants optimum performance, and egg quality of laying hens (Experiment II). Both trials lasted 112 days, being divided in four 28-day intervals. In experiment I, a total of 240 Hy-Line W-36 laying hens were randomly assigned to 5 treatments, eight replicates with six hens each. The treatments consisted diets containing 170g (control diet), 150 and 130g crude protein/kg, which corresponded to the essential nitrogen to non-essential nitrogen ratios of 37/63, 42/58 and 47/53, respectively. The other two treatments consisted of the same diets containing 150 and 130g crude protein/kg, but supplemented with 37.60 and 79.15g glutamic acid/kg respectively in replacement to cornstarch to equal the essential nitrogen to non-essential nitrogen ratio in control diet (37/63). Reduction on dietary crude protein by 20g/kg elicited a decrease in egg weight and egg mass, whereas the reduction on dietary crude protein by 40g/kg decreased feed intake, egg weight, egg mass and albumen weight, beyond worsening feed conversion ratio per kilogram of eggs. Layers fed diets with 150 and 130g crude protein/kg had similar performance and egg quality. Glutamic acid-added diets with 150g crude protein/kg maintained similar layer performance and egg quality to that observed in layers fed control diet. However, when added to diets with 130g crude protein/kg, glutamic acid impaired layer performance and egg quality, leading to the lowest means for variables assessed herein when compared with all treatments. Based on results, the lack of non-essential nitrogen compromises layer productivity and glutamic acid may be considered as a potential source of non-essential nitrogen when added in low concentration to low-protein diets. In experiment II, 360 Hy-Line W-36 laying hens were randomly assigned to 5 treatments, eight replicates with six hens each. Experimental diets were obtained through the graded supplementation of a mixture of L- alanine, L-glycine and glutamic acid, at the proportion of 60%,20% and 20% respectively, in a low protein diet with the essential nitrogen to non-essential nitrogen ratio of 55/45. Four more diets with the ratios of 52/48, 48/52, 44/46 and 41/59 were produced from the aforementioned low-protein diet. Additionally, a diet with a higher crude protein content was formulated to contain the essential nitrogen to non-essential nitrogen ratio of 41/59. Layers given dietary essential to non-essential nitrogen ratios of 55/45 and 52/48 had lower egg weight and worsen feed conversion ratio per kilogram of eggs compared with layers fed control diet. Egg mass was impaired only when essential to non-essential nitrogen ratios reached the 55/45. Egg quality was unaffected by dietary treatments. Based on results, the dietary essential to non-essential nitrogen ratio for laying hens must not reach 48/52 / O título contido no resumo em inglês não confere com a ficha catalográfica

Orientador: Ana Silvia Alves Meira Tavares Moura / Banca: Luiz Lehmann Coutinho / Banca: Mônica Corrêa Ledur / Banca: Millor Fernandes do Rosário / Banca: José Roberto Sartori / Resumo: A partir de resultados de um estudo anterior, no qual foram mapeados QTLs para características de peso vivo, peso do coração e pulmões no GGA1, foi definida uma região no intervalo entre os marcadores ADL0234 e LEI0071, abrangendo 82,3 cM. Foram avaliadas três famílias de meios-irmãos paternos que compreendiam sete famílias de irmãos completos, num total de 652 F2 para as características: peso vivo aos 35 e 41 dias de idade, pesos do coração e pulmões e rendimentos de coração e pulmões. Os genótipos de seis marcadores microssatélites foram adicionados aos dez utilizados anteriormente. O mapa de ligação obtido da região compreendeu 110,8 cM com espaçamento médio entre os marcadores de 7,4 cM. Na análise de F2, em um único intervalo (LEI0146-LEI0174), compreendendo 28,8 cM, foram mapeados QTLs para todas as características estudadas, com exceção dos rendimentos de coração e pulmões. Neste intervalo estão localizados o gene IGF1 e o centrômero do cromossomo. A adição de seis marcadores confirmou os QTLs mapeados anteriormente, porém alguns em diferentes posições. A análise de meios-irmãos paternos indicou que os principais QTLs estavam segregando em apenas uma das famílias (7716), na qual cinco QTLs foram mapeados. Na análise de meios-irmãos maternos, duas famílias segregaram QTLs tanto na análise Individual como na Conjunta (7810 e 7971). As diferentes análises permitiram selecionar dois casais F1, que devem ser o alvo dos próximos estudos. Este estudo restringiu a busca por genes candidatos responsáveis pelas características de interesse a uma região de 28,8 cM (9,82 Mb) no GGA1. / Abstract: Based on the results from a previous study, in which QTL for body weight, heart and lungs weights and heart and lungs percentages were mapped to GGA1, a region was defined between markers ADL0234 and LEI0071, spanning 82.3 cM. Three paternal half-sib families, comprising seven full-sib families, totaling 652 F2 were evaluated for body weight at 35 and 41 days of age, heart and lungs weights and heart and lungs yields. Genotypes of six microsatellite markers were added to those of ten previously used. The linkage map of this region spanned 110.8 cM, with average spacing of 7.4 cM between markers. In a single interval (LEI0146-LEI0174), comprising 28.8 cM, QTLs for all traits, except for heart and lungs yields were mapped in the F2 analysis. In this same interval the IGF1 gene, and the chromosome centromere, are located. The use of six additional markers confirmed the same QTLs mapped previously, but some of them, in different positions. The paternal half-sib analysis indicated that the main QTLs were segregating in one of the families only (7716), in which five QTLs were mapped. In the maternal half-sib analysis, two families segregated QTLs both, in the across and within families analyses (7810 and 7971). These analyses allowed the selection of two F1 couples to be the target for future studies. This study restricted the search for candidate genes responsible for the traits of interest to a region of 28.8 cM (9.82 Mb) in GGA1. / Doutor

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Ricardo Luiz Moro de Souza / Banca: Luis Francisco Prata / Banca: Antonio Carlos Paulillo / Resumo: O vírus da bronquite infecciosa aviária (VBIG) permanece como um dos principais problemas para a avicultura industrial. Para a imunoprofilaxia dessa virose existem vacinas "vivas" atenuadas ou inativadas, mas elas não são efetivas para o controle dessa doença infecciosa a longo prazo, especialmente contra estirpes variantes desse vírus. A função primordial das vacinas usuais contra o VBIG são estimular as respostas imunes sistêmicas e locais, mediadas por anticorpos ou por células T efetoras. Com a finalidade de investigar os mecanismos envolvidos na imunidade protetora, os níveis de anticorpos locais e sistêmicos e a expressão de genes associados a respostas de linfócitos T citotóxicos, tais como o CD8 e a granzima A foi avaliada na mucosa traqueal, após a imunização primária de pintinhos de 1 dia de idade com vacinas atenuadas contra o VBIG seguida do desafio 42 dias depois. Proteção ao desafio foi avaliada por meio da ciliostase traqueal, histopatologia e detecção de vírus pela técnica de RT-PCR em tempo real na traquéia. Os níveis de anticorpos no soro e na secreção lacrimal foram mensurados pelo Sandwich- Concanavalina A - ELISA. A expressão dos genes de CD8 e de granzima A foram avaliadas pela técnica de RT-PCR em tempo real. Os resultados demonstraram que a proteção contra a infecção pelo VBIG em aves vacinadas se correlacionou com os níveis de anticorpos anti-virais específicos dos isótipos IgG, IgM e IgA na secreção lacrimal e com os níveis de expressão de CD8 e de granzima A. Concluindo, os resultados possibilataram definir o perfil cinético do desenvolvimento das respostas imunes de memória contra o VBIG na mucosa que é o sítio primário de replicação viral e indicaram que os mecanismos de imunidade humoral e celular podem ser muito importantes para a proteção de hospedeiros naturais contra a infecção pelo VBIG. / Abstract: Avian infectious bronchitis (IBV) remains a major problem in the poultry industry. Live and inactivated vaccines are available, but they are not effective long term in controlling IBV infection, specially against variant strains. The essential function of existing IBV vaccines is to elicit, ideally, local and systemic specific antibodies, as well as cell-mediated immunity to this virus. To investigate the mechanisms of protective immunity, the levels of systemic and local specific antibodies and the expression of genes responsible for cytotoxic T cell killing such as CD8-marker and granzyme-A at tracheal mucosa was evaluated after the primary immunization of 1- day-old chicks with an attenuated avian infectious bronchitis virus (IBV) and challenge 42 days later. Challenge protection was evaluated by tracheal ciliostasis, histopathology and virus detection by real time RT-PCR. The serum and lachrymal anti-IBV antibody levels of IgG, IgM and IgM isotypes were measured with a Sandwich-ELISA Concanavalina-A method. The expression of CD8 and granzyme A genes were evaluated by real time RT-PCR. The results showed protection against challenge with the M-41. Lachrymal IgG, IgM and IgA anti-IBV specific antibodies and the levels of expression of CD8 and granzyme A genes correlated significantly with the protection to challenge. Overall, the results provided the kinetics on the development of memory mucosal immune responses against IBV at the primary replication site and indicate that tracheal humoral and cellular immune mechanisms may be very important in protecting natural hosts against IBV infection. / Mestre

Dentre o setor agropecuário, a avicultura é a que mais tem demonstrado índices de evolução nos últimos anos. Esses avanços são obtidos principalmente por meio da nutrição, manejo dos animais e seleção genética. A biotecnologia tem ganhado papel de destaque com o uso de marcadores moleculares como ferramenta para acrescentar informações genômicas aos processos de melhoramento convencional. Estudos anteriores em uma população F2 originada do cruzamento de frangos de corte e postura permitiram a identificação de um SNP no gene FGFBP1 (Proteína de ligação do fator de crescimento do fibroblasto 1) (g. 2014 G> A) no cromossomo 4 de Gallus gallus (GGA4). Este gene está em uma região de QTLs associado com rendimentos de coxa e sobrecoxa, peso vivo aos 35 e 41 dias de idade. O objetivo deste trabalho foi investigar um QTL previamente descrito para identificação de polimorfismos adicionais e suas associações com características de importância econômica utilizando testes de associação de um ou mais marcadores. Três genes candidatos posicionais foram identificados nesta região de QTL: KLF3(Krüeppel-like factor 3), SLIT2 (Slit homolog 2) e PPARG (Peroxisome proliferator-activated receptor gamma, coactivator 1alpha). O sequenciamento destes genes em onze (n=11) animais F1 permitiu a identificação de um polimorfismo em cada gene: g.6763 C> T (KLF3), g.187737 C> A (SLIT2) e g.76638826 -/TTTCT (PPARGC1A). Essas mutações foram genotipadas em uma população segregante F2 (n=276) e em uma linhagem pura de corte TT (n=840) da Embrapa Suínos e Aves. A frequência dos alelos para o gene KLF3 na população F2 foi de C=50% T=50% e na pura TT de C=98% T=2%, para o gene SLIT2 na população F2 foi de A=25% C=75% e na pura TT de A=30% C=70%, para o gene PPARGC1A na população F2 foi de Del=43% In=57% e na pura TT Del=33% C=67%, representando que estes polimorfismos estão segregando nas duas populações. Associações destes polimorfismos foram observadas (P<0,05) com várias características de desenvolvimento e carcaça na população F2 e na linhagem pura TT, sendo que algumas foram confirmadas nesta população como: pesos de fígado, coxas, ganhos de peso dos 35 aos 41 dias com g.6763 C> T (KLF3) e pesos das asas, cabeça, carcaça, dorso, coxas, peito, fígado e gordura abdominal com g.76638826 -/TTTCT (PPARGC1A) indicando que esta região de QTL é importante para características de produção e desempenho em frangos de corte. / Within the livestock sector, the broiler industry has showed fastest growing rates in past decades. Those advances were achieved mainly because a better understanding of the nutrition requirements, animal management and animal genetics. Biotechnology has gained a prominent role with the use of molecular markers as a tool for adding genomic information to conventional breeding processes. Previous studies using an F2 population developed from a broiler x layer cross led to the identification of a SNP on the Fibroblast growth factor binding protein 1 (FGFBP1) (g. 2014G> A) on Gallus gallus chromosome 4 (GGA4). This gene is part of a QTL associated with thigh & drumstick yields, weight gain at 35 and 41 days. This paper investigates the previously identified QTL for the identification of additional polymorphisms and their associations with important economic traits using a single and multiple markers tests. Three positional candidate genes were identified on the QTL region: KLF3 (Krüeppel-like factor 3), SLIT2 (Slit homolog 2) and PPARG (Peroxisome proliferator-activated receptor gamma, coactivator 1alpha). Sequencing of those genes was conducted in eleven (n=11) F1 animals and one polymorphism was identified in each gene g.6763 C> T (KLF3), g.187737 C> A (SLIT2) and g.76638826 -/TTTCT (PPARGC1A). These mutations were genotyped in an F2 (n=276) and a pure broiler line (n=840) from Embrapa. The frequency of the genes alleles were: KLF3 gene in F2 population C = 50% T = 50% and pure TT population C = 98% T = 2%; SLIT2 gene in F2 population A = 25% C = 75% and pure TT population A = 30% C = 70%; PPARGC1A gene in F2 population Del =43% and In = 57% and pure TT population Del = 33% C = 67% indicating that those polymorphisms are still segregating in both populations. Association was identified (P < 0,05) with several carcass and development traits in the F2 and Pure TT population, some which were confirmed like liver, drumstick weights, weight gain from 35 to 41 days with g.6763 C> T (KLF3) and wings, had, carcass, back, drumstick, breast and liver and abdominal fat weights with g.76638826 -/TTTCT (PPARGC1A) indicating that this QTL region is important for production and performance traits of broiler.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T18:57:29Z : No. of bitstreams: 1 scatolini_am_me_jabo.pdf: 330543 bytes, checksum: 54b67073b91a36e157abc78552e1234c (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Alltech Ltda / Esse experimento objetivou avaliar o desempenho zootécnico e as características de qualidade de ovos de galinhas poedeiras pós-muda forçada, ou seja, em segundo ciclo de produção, as quais foram submetidas à dietas suplementadas ou não com microminerais complexados a moléculas orgânicas (Bioplex Mn®, Bioplex Zn®, Sel-Plex®, Bioplex Cu® e Bioplex Fe®), e à suplementação individual e/ou associações entre si dos microminerais Mn, Zn e Se na forma complexada (Bioplex Mn®, Bioplex Zn®, Sel-Plex®, respectivamente). Foram utilizadas 288 aves da linhagem Hy-Line W-36, com 74 semanas de idade, as quais foram submetidas ao processo tradicional de muda forçada mediante restrição de alimento. As aves receberam rações isoproteícas e isoenergéticas durante toda a fase experimental (112 dias), o que correspondeu de 76 a 92 semanas de idade. Foi utilizado um delineamento inteiramente casualizado contendo 9 tratamentos e 4 repetições, com 8 aves por parcela experimental. As médias obtidas foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de significância, utilizando o sistema SAS – GLM Procedure (1999). A suplementação da dieta com minerais na forma orgânica não exerceu qualquer influencia (P>0,05) nos parâmetros de desempenho estudados (consumo de ração, peso médio dos ovos, porcentagem de postura, conversão alimentar e porcentagem de ovos viáveis) durante todo período experimental. Não houve influencia (P>0,05) dos tratamentos sobre algumas características de qualidade dos ovos, tais como: resistência da casca, gravidade especifica, índice gema e índice gema no armazenamento durante 14 dias. Os demais parâmetros qualitativos (espessura e porcentagem de casca, unidade Haugh, pH do albúmen, pH da gema, manutenção de peso no armazenamento e unidade Haugh no armazenamento), diferiram entre si, porém nem sempre a forma complexada dos microminerais foi melhor que... / This experiment evaluated the performance and egg quality of laying hens in second production cycle which were submitted to diets supplemented or not with organic minerals (Bioplex Mn®, Bioplex Zn®, Sel-Plex®, Bioplex Cu® and Bioplex Fe®), and to the individual supplementation and/or associations to each other (Mn, Zn and Se) in the organic form (Bioplex Mn®, Bioplex Zn®, Sel-Plex®, respectively). Two hundred and eighty-eight 74 week old birds Hy-Line W-36 after forced moulting traditional process by food restriction were subjected to the basal diet was formulated with corn and soybean meal, according the layers nutritional requirement during the whole experimental phase (112 days), what corresponded from 76 to 92 weeks of age. It was used nine treatments and four repetitions with 8 birds per pen in a completely randomized design. The means were compared by Tukey`s test (P<0,05) using the GLM procedure of the SAS system (1999). The diet supplementation with organic minerals didn't affect (P>0,05) the productive parameters studied (consumption of ration, egg weight, egg production, feed conversion and egg viable) and some egg quality characteristics (shell strength, specific gravity, yolk index and yolk index in the storage for 14 days) during the experimental phase. The treatments influenced the qualitative parameters of shell thickness, percentage of shell, Haugh units, albumen pH, yolk pH, weight maintenance and Haugh units of the stored eggs), however not always the organic form of the minerals was better than the inorganic one. Better weight maintenance and albumen quality preservation (Haugh units) of the stored eggs were obtained with the association of Mn/Zn from the organic form, when compared it some treatments that contained organic minerals, though it didn't overcome the inorganic minerals treatment.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Campylobacter sp is recognized as one of the main causes of human gastroenteritis of food origin. Among the foods that circulate these microorganism, chicken is the meat most involved. Existent studies about the vertical transmission of Campylobacter sp are scarce and inconclusive. The aim of this study was to verify the vertical transmission of Campylobacter sp from heavy matrixes to the progeny. With the use of the traditional culture method, cloacal swabs of 279 heavy matrix samples were analyzed from the follow sits: 6 bed, 4 nest, 11 ovary and oviduct, 11 liver, spleen and heart and 11 intestine. In 11 cloacal swab samples polymerase chain reaction (PCR) was also performed, using the automated BAX® system. In progeny samples, the following were analyzed: 78 and 44 fresh eggs, disinfected and not disinfected, respectively, 12 infertile eggs, 45 unhatched eggs, 13 hatching environment samples, 121 meconium samples and 36 organ samples (heart, liver, spleen) and 36 intestines from one-day old chickens. The analyses were performed by the traditional culture method. In another 10 meconium samples, analysis was performed by the BAX® method. The positivity in the cloacal swab samples by the traditional culture method was 13.97% and by the BAX® methodology it was 54.54%. The bed samples, positivity was 83.33% and in the nest samples it was 0.25%. In matrix organs, Campylobacter sp was only isolated in 27.27% of samples and only in the intestines. There was no positivity in any of the samples of fresh eggs, infertile eggs, embryonic eggs, chicken organs or from the hatching environment. By the traditional culture method there was no positivity in the meconium, but with the use of the BAX® system, positivity was 80%. Although the physiological characteristics of the matrixes, the eggs and Campylobacter sp are favorable to the entry and survival of bacteria in the eggs, and consequently in the one-day old chickens, in this study, positivity in the progeny was only found with the use of the BAX® system. These findings suggest that further studies with the use of molecular techniques should be conducted to verify vertical transmission. / Campylobacter sp é reconhecida como uma das principais causas de gastroenterite humana de origem alimentar e dentre os alimentos veiculadores desses microrganismos, a carne de frango é a mais implicada. As pesquisas existentes sobre a transmissão vertical da Campylobacter sp são escassas e não conclusivas. O objetivo desse estudo foi verificar a transmissão vertical da Campylobacter sp de matrizes pesadas para a progênie. Utilizando o método de cultura tradicional, foram analisados suabes cloacais de 279 amostras matrizes pesadas, 6 de cama, 4 de ninho, 11 de ovário e oviduto, 11 de fígado, baço e coração e 11 de intestino. Em 11 amostras de suabe cloacal, também foi realizada a reação da polimerase em cadeia (PCR) utilizando o sistema automatizado BAX®. Em amostras da progênie foram analisadas: 78 e 44 ovos frescos desinfetados e não desinfetados, respectivamente, 12 ovos inférteis, 45 ovos não eclodidos, 13 amostras ambientais de nascedouro, 121 de mecônio e 36 amostras de órgãos (coração, fígado, baço) e 36 intestinos de pintainhos de um dia. As análises foram realizadas pelo método de cultura tradicional e em outras 10 amostras de mecônio, pelo método BAX®. A positividade em amostras de suabe cloacal pelo método de cultura tradicional foi de 13,97% e pela metodologia BAX® 54,54%. Nas de cama, a positividade foi de 83,33% e nas de ninho, 25%. Em órgãos de matrizes, Campylobacter sp foi isolada em 27,27% das amostras e somente em intestinos. Não houve positividade em nenhuma das amostras de ovos frescos, inférteis, ovos embrionados, órgãos de pintainhos ou ambiente de nascedouro. Pelo método de cultura tradicional, não houve positividade em mecônio, embora com o uso do sistema BAX® a positividade foi de 80%. Apesar das características fisiológicas das matrizes, dos ovos e da Campylobacter sp serem favoráveis à entrada e sobrevivência da bactéria nos ovos, e conseqüentemente, nos pintainhos de 1 dia de idade, nesse estudo, as positividades na progênie foram apenas encontradas com a utilização do sistema BAX®. Esses achados sugerem que outros estudos com utilização de técnicas moleculares devem ser aplicados para verificação da transmissão vertical. / Mestre em Ciências Veterinárias

O endotélio corneano é uma monocamada de células poligonais localizadas na face posterior da córnea e é essencial para a manutenção da transparência corneana. Não foram encontradas referências na literatura a respeito dos parâmetros morfológicos e morfométricos do endotélio da córnea de galinhas, apesar destes animais serem amplamente utilizados como modelo experimental em estudos oftálmicos, devido à similitude com a córnea de humanos. O objetivo deste estudo foi o de avaliar os parâmetros morfométricos e o pleomorfismo da região central do endotélio da córnea de galinhas (Gallus gallus domesticus) de diferentes faixas etárias, utilizando a microscopia especular de contato. Avaliaram-se a densidade, a área celular média e o pleomorfismo das células do endotélio da córnea de 60 olhos de 30 galinhas da raça Leghorn branca. Os animais foram divididos em três grupos composto por 10 animais cada: G1 (animais com 30 dias de idade), G2 (animais com 45 dias de idade) e G3 (animais com 60 dias de idade). O presente estudo revelou que o endotélio da córnea de galinhas é composto por células poligonais de padrão regular, com predomínio de formato hexagonal. O endotélio corneano de galinhas sofreu alterações decorrentes da idade no que tange a morfometria, mas no que diz respeito ao pleomorfismo, não ocorreram alterações em resposta ao envelhecimento. / The corneal endothelium is a monolayer of polygonal cells located on the posterior face of the cornea and it is essential for the maintenance of corneal transparency. We found no references in the literature concerning the morphological and morphometric parameters of the corneal endothelium of chickens, although these animals are widely used as experimental model in ophthalmic studies due to the similarity with the human cornea. The objective of this study was to evaluate the morphometric parameters and the pleomorphism of central corneal endothelium of chickens (Gallus gallus domesticus) of different ages using the contact specular microscopy. The density, the average cell area and the pleomorphism of the corneal endothelial cells were evaluated on 60 eyes of 30 white Leghorn chickens. The animals were divided into three groups of 10 animals each: G1 (animals with 30 days of age), G2 (animals with 45 days of age) and G3 (animals with 60 days of age). The present study revealed that the corneal endothelium of chickens is composed of regular polygonal cells, with predominance of hexagonal shape. The corneal endothelium of chickens has changed due to age in respect to morphometry, but in regard to pleomorphism, no changes occurred in response to aging.