Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-03-21T14:59:22Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3716003 bytes, checksum: 3011b5cf3648f69aa355d3ce6312b5c6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-21T14:59:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3716003 bytes, checksum: 3011b5cf3648f69aa355d3ce6312b5c6 (MD5) Previous issue date: 2015-06-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As lipocalinas constituem uma família de pequenas proteínas extracelulares com cerca de 200 resíduos de aminoácidos e massa molecular de 20 Kda possuem forte divergência em suas sequências de aminoácidos mas mantêm a sua estrutura tridimensional estritamente conservada. Sua diversidade funcional e reconhecimento molecular, contribuem para a utilização dessas proteínas como base para o desenvolvimento de alguns biofármacos. Os genes constitutivos participam de diversas funções do metabolismo celular e são utilizados como controle endógeno sendo fundamentais para validação dos resultados no estudo da expressão utilizando real time RTq-PCR. Em relação a esses genes, ainda não foram publicados trabalhos que identifiquem e validem genes constitutivos como genes de referência para a espécie Amblyomma sculptum (Complexo Amblyomma cajennense). Atualmente, transcriptomas de órgãos e tecidos de carrapatos do gênero Amblyomma têm sido publicados identificando uma variedade de transcritos de lipocalinas com domínio de ligação a histamina e serotonina (SHBP). Neste trabalho, realizamos por predição in silico a identificação de nove lipocalinas com domínio de ligação a serotonina e histamina estabelecendo possíveis relações filogenéticas funcionais de transcritos de lipocalinas identificadas no transcriptoma de glândula salivar do A. sculptum. Realizamos o desenho e a validação de 3 primers de genes de lipocalinas identificadas, lip4, lip7 e lip24. Foram analisados e validados 3 primers de genes constitutivos (g6pdh, 3ohcoadh e gapdh) candidatos potenciais a genes de referência em glândulas salivares, intestinos e ovários do carrapato A. sculptum em situação de não infecção/infecção com R. amblyommii. Foram validados 3 modelos estruturais correspondentes às proteínas lipocalina 4, lipocalina 7 e lipocalina 24. E ainda, realizou-se a análise da expressão diferencial de lipocalinas e potenciais genes de referência em glândula salivar, intestino e ovário de A. sculptum. Os dados obtidos na análise de expressão gênica por real time RT-qPCR suportam a hipótese de que os três genes de lipocalinas interferem na interação microrganismo-vetor sendo necessários trabalhos adicionais para verificação da validade desta hipótese, uma vez que dentre as 121 lipocalinas preditas no transcriptoma de glândulas salivares, somente nove apresentam domínios SHBP sugerindo um papel especial na função destas nos tecidos estudados. / The lipocalin’s family compound a small extracellular protein of about 200 amino acid residues and a molecular mass of 20 kDa present strong divergence in their amino acid sequences but retain its strictly conserved three dimensional structure. Its functional diversity and molecular recognition, contributing to the use of these proteins as a basis for the development of some biopharmaceuticals. The reference genes involved in various cellular metabolism functions and are used, as endogenous control is necessary to validate the results in the study of the expression for real RTQ-PCR analisys. For these genes have not yet been published works to identify and validate constitutive genes as the reference genes for Amblyomma sculptum (Amblyomma cajennense complex) species. Currently, transcriptomes of organs and tissues of the genus Amblyomma ticks have been published identifying a variety of lipocalins transcripts with binding domain histamine and serotonine (SHBP). We carried out by prediction in silico identification of nine lipocalins with serotonine and histamine binding domain setting possible functional phylogenetic relationships of lipocalins transcripts identified in salivary gland transcriptome of A. sculptum. We carry out the design and validation of three primers identified lipocalin genes, lip4, lip7 and lip24. They were analyzed and validated three primers of constitutive genes (g6pdh, 3ohcoadh and gapdh) potential candidate reference genes in the salivary glands, ovaries and intestines A. sculptum tick for a situation of no infection / infection with R. amblyommii. Were validated three corresponding structural models to lipocalins 4, 7 and 24. Yet, there was the analysis of differential expression of lipocalins and potential reference genes in the salivary gland, gut and ovarian A. sculptum tick. The results of analysis in experiment of gene expression by real time RT-qPCR support the hypothesis that the three lipocalins genes interfere with the microorganism-vector interactions. Finaly it is necessary a further work to verify the validity of this hypothesis, since among the 121 lipocalins predicted in transcriptome salivary glands, only nine have SHBP domains suggesting a special role in the function of these tissues studied.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-25 / A pele dos anfíbios atua em muitas funções vitais, relacionadas à atividade de dois tipos de glândulas cutâneas: mucosas e granulosas. As glândulas granulosas (de veneno) atuam na defesa química que caracteriza os anfíbios, secretando uma grande diversidade de compostos. A presença de secreções de alta toxicidade está frequentemente associada a padrões de colorido chamativos, ditos apossemáticos, reconhecidos e evitado por predadores. O colorido de espécies apossemáticas pode estar presente também em certas espécies indefesas, que assim adquirem proteção, um fenômeno designado mimetismo batesiano. Por outro lado, um conjunto de espécies tóxicas pode apresentar colorido semelhante, caracterizando o chamado mimetismo mulleriano. Dentre os anfíbios, muitos casos de mimetismo envolvem rãs tóxicas e apossemáticas da família Dendrobatidae. A rã Leptodactylus lineatus (família Leptodactylidae) possui colorido similar ao de vários dendrobatídeos, em especial ao de Ameerega picta. Embora assumido como um mímico de A. picta, dentre outros dendrobatídeos, não há de fato evidências de que L. lineatus não secrete toxinas. Uma terceira espécie, Leptodactylus andreae, guarda semelhanças com essas duas no padrão de colorido. Essa investigação tencionou esclarecer a síndrome mimética envolvendo essas três espécies. Objetivou-se determinar: há mimetismo entre elas? Se sim, ele é de natureza batesiana ou mulleriana? Para tanto, atentou-se para a morfologia cutânea, com foco na estrutura e distribuição das glândulas de veneno, assim como para a bioquímica das secreções, o colorido da pele e informações de sua história natural. Foi observado que L. lineatus possui grande número de glândulas granulosas, que se apresentam concentradas em regiões de acúmulo na face dorsal e ventral do corpo. No dorso, esses acúmulos apresentam notável correlação com a posição de listas e manchas, sugerindo que o colorido sinaliza regiões onde o veneno está concentrado. Essas regiões são enfatizadas por um conjunto de posturas defensivas, que podem aumentar as chances de contato do predador com as toxinas ou favorecer o reconhecimento de L. lineatus. A distribuição glandular de L. andreae é semelhante, mas os acúmulos são mal definidos e possuem muito baixa densidade. A. picta, por outro lado, possui distribuição de glândulas uniforme no dorso e ventre. A caracterização histoquímica, bioquímica e ultraestrutural sugerem grande quantidade e diversidade de proteínas nas secreções de L. lineatus, dotadas de significativa atividade enzimática proteolítica. Por outro lado, as proteínas estão praticamente ausentes das secreções de A. picta, nas quais foram detectadas mucossubstâncias de caráter glicídico, que podem contribuir para a toxicidade da espécie. Os dados sugerem que, assim como A. picta, L. lineatus é uma espécie tóxica, que parece atuar como um co-mímico mulleriano desse e possivelmente de outros dendrobatídeos. Em contraste, a morfologia cutânea sugere que L. andreae apresenta baixa toxicidade, possivelmente atuando como um mímico batesiano de A. picta e L. lineatus. São apresentados dados sobre outros atributos da pele, como as glândulas mucosas e a presença de uma camada calcificada na derme. Os resultados são discutidos no contexto de diferenças entre as espécies com relação ao comportamento e ecologia. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Introdução: O carcinoma adenoide cístico (CAC) é uma das neoplasias de glândula salivar mais comuns para o qual não se encontra quimioterapia eficaz. Um conceito emergente na terapia do câncer é atingir proteínas especificas do tumor. MDM2 (murine double minute 2) é um importante inibidor do supressor tumoral p53, e sua expressão é aumentada em CAC. O objetivo do Artigo 1 foi avaliar o efeito de um novo inibidor da interação MDM2-p53 (MI-773) no CAC in vitro e in vivo. O Artigo 2 teve como objetivo entender o papel da combinação de MI-773 com cisplatina, além de avaliar a recorrência de CAC frente a regime neoadjuvante de MI-773. Materiais e Métodos: 3 modelos de xenoenxerto derivado de paciente (XEDP, UM-PDXHACC- 5; ACCx6; ACCx9) e 5 culturas primarias de CAC (UM-HACC-1, -2A, -2B, -5, -6) foram usados para experimentos in vitro e in vivo. Ensaio de Sulforrodamina B (SRB) foi realizado para avaliar o efeito dos agentes experimentais na viabilidade celular, além de determinar valores de IC50. Western blots revelaram a expressão de p53, fosfo-p53, MDM2, p21, PUMA, BAX, Bcl-2 e Bcl-xL. Lâminas histológicas (UMPDX- HACC-5) foram avaliadas por imunohistoquímica e imunofluorescência para determinar a localização de p53. Técnica de TUNEL in situ revelou o número de células de UM-PDX-HACC-5 no processo de apoptose. Citometria de fluxo foi realizada para determinar o efeito da terapia na proporção de células-tronco tumorais (ALDHhighCD44high) e para avaliar o ciclo celular. Para os estudos in vivo, animais transplantados com tumores (UM-PDX-HACC5, ACCx6, ou ACCx9) receberam protocolo terapêutico (MI-773 – gavagem; cisplatina – injeção intraperitoneal; ou veículo controle) conforme indicado. ANOVA, seguido de testes post-hoc (Tukey), Mann-Whitney U-test ou Student’s t-test foram usados para determinar as diferenças no crescimento tumoral, peso, volume, apoptose, viabilidade celular, expressão de TUNEL e p53. Significância estatística: p<0.05. Resultados: MI-773 causa regressão do tumor em todos os modelos préclínicos de CAC. Doses diárias de 100mg/kg de MI-773 reduziram significativamente o volume tumoral quando comparado com doses intermediárias (10 ou 50 mg/kg MI-773) ou veículo controle, em todos os modelos de CAC. Alternativamente, camundongos transplantados com tumores UM-PDX-HACC-5 receberam doses semanais de MI-773 (200 mg/kg) e/ou cisplatina (5 mg/kg) por 30 dias, a fim de se avaliar o efeito da combinação das drogas. MI-773, como agente único, causou regressão tumoral, sendo mais efetivo do que a cisplatina. Cisplatina, por outro lado, mostrou limitado efeito terapêutico, estabilizando o crescimento tumoral. Notavelmente, a combinação MI-773 + cisplatina foi mais efetiva do que os agentes isoladamente, e não foi verificada retomada do tumor no período pósoperatório. Importantemente, os protocolos experimentais não comprometeram a saúde geral dos animais. Coletivamente, estes resultados in vivo demonstram que MI-773 atua como mediador na regressão tumoral de CAC e sensibiliza os tumores à cisplatina. A inibição terapêutica da interação MDM2-p53 ativa p53 e induz apoptose. MI-773 potentemente induz expressão de p53, seu alvo p21 e proteínas relacionadas à apoptose, como PUMA, BAX, Bcl-2 e Bcl-xL in vitro e in vivo. Análise do ciclo celular mostrou que a inibição terapêutica da interação MDM2-p53 por MI- 773 causa parada no ciclo celular no primeiro ponto de checagem (G1). Marcação por TUNEL revelou número significativamente maior de células em apoptose quando tumores de UM-PDX-HACC-5 foram tratados com MI-773 em comparação com controle (p<0.05) Utilizando o mesmo modelo de xenoenxerto, a técnica de imunohistoquímica mostrou que MI-773 não somente aumentou a porcentagem de células p53-positivas (p<0.001), como causou uma translocação parcial de p53 ao citoplasma. MI-773 reduz a fração de células-tronco tumorais (CTT) e previne recorrência do CAC. Tratamento com MI-773 como agente único ou combinado com cisplatina reduziu a fração de CTT (p<0.05). Notavelmente, nenhum animal tratado com regime neoadjuvante de MI-773 apresentou recorrência tumoral mesmo após 300 dias de acompanhamento. Em contraste, em 62,5% dos animais do grupo controle houve recorrência (p=0.0097). Conclusões: Em resumo, os estudos demonstram que a inibição terapêutica da interação MDM2-p53 com MI-773 é uma estratégia antitumoral eficaz, é capaz de sensibilizar tumores à cisplatina e previne recorrência neste modelo pré-clínico de CAC. Coletivamente, os dados sugerem que pacientes com carcinoma adenoide cístico podem ser beneficiados através de terapias-alvo contra MDM2. / Introduction: Adenoid cystic carcinoma (ACC) is one of the most common salivary gland malignancies for which no effective chemotherapy is available. An emerging concept in cancer therapy is to target specific tumor-related proteins. Murine double minute 2 (MDM2) is an important inhibitor of the tumor suppressor p53 and has been found overexpressed in ACC. Paper #1 aimed to evaluate the effect of a novel small molecule inhibitor of the MDM2-p53 interaction (MI-773) on ACC in vitro and in vivo. Paper #2 aimed to understand the role of combining MI-773 with cisplatin, and to evaluated ACC recurrence using a neoadjuvant regimen of MI-773. Material and Methods: 3 patient-derived xenograft (PDX) models (UM-PDX-HACC-5; ACCx6; ACCx9) and 5 low passage primary human ACC cells pools (UM-HACC-1, -2A, -2B, - 5, -6) were used for in vivo and in vitro experiments. Sulforhodamine B (SRB) assay was performed to evaluate the effect of experimental agents on ACC cell viability and to determine IC50 values. Western blots revealed the expression of p53, phosphop53, MDM2, p21, PUMA, BAX, Bcl-2 and Bcl-xL. Histological sections from UM-PDXHACC- 5 tumors were stained using immunohistochemistry and immunofluorescence techniques to determine p53 status. In situ TUNEL staining revealed the number of UM-PDX-HACC-5 cells undergoing apoptosis. Flow cytometry was carried out to determine the effect of therapy on the proportion of cancer stem cells (ALDHhighCD44high) and for cell cycle analysis. For in vivo studies, mice harboring UM-PDX-HACC5, ACCx6, or ACCx9 tumors were treated following specific therapeutic protocol (MI-773 – gavage; cisplatin – intraperitoneal injection; or vehicle control), as opportunely indicated. One-way ANOVA, followed by post-hoc tests (Tukey), Mann-Whitney U-test or Student’s t-test were used to determine significant differences in tumor growth, weight, volume, apoptosis levels, cell viability, TUNEL and p53 expression. Significance was determined at p<0.05. Results: MI-773 caused tumor regression in all ACC PDX models. Daily doses of 100 mg/kg MI- 773 significantly reduced tumor volume when compared to intermediate doses (10 or 50 mg/kg MI-773) or vehicle-treated controls in all ACC xenograft models. Alternatively, mice harboring UM-PDX-HACC-5 tumors received either weekly doses of MI-773 (200 mg/kg) and/or cisplatin (5 mg/kg) for 30 days, in order to evaluate the effect of this drug combination. MI-773 as single agent caused tumor regression, being more effective than single agent cisplatin. Cisplatin showed limited therapeutic response stabilizing tumor growth. Notably, combination of MI-773 with cisplatin was more effective than single agent therapies and no tumor rebound was observed during the follow up period. Importantly, experimental protocols did not compromise the overall health status of mice. Collectively, these in vivo results demonstrate that MI-773 mediates ACC tumor regression, and sensitizes ACC xenograft tumors to cisplatin. Therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction activates p53 and induces apoptosis. MI-773 potently induced the expression of p53, its downstream target p21 and apoptosis-related proteins PUMA, BAX, Bcl-2 and Bcl-xL in vitro and in vivo. Cell cycle analysis showed that therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction by MI-773 causes cell cycle arrest at the first checkpoint (G1). In situ TUNEL revealed a significant higher number of cells undergoing apoptosis in UMPDX- HACC-5 tumors treated with MI-773 compared to vehicle control (p<0.05). Using the same xenograft model, immunohistochemistry assay showed that MI-773 not only increased the percentage of p53-positive cells (p<0.001), but also caused a partial translocation of p53 to the cytoplasm. MI-773 reduces the fraction of cancer stem cells (CSC) and prevents recurrence in ACC. Treatment with MI-773 as single agent or combined with cisplatin significantly reduced the fraction of CSC (p<0.05). Notably, not a single animal treated with neoadjuvant MI-773 presented recurrence even after 300 days of follow-up. In contrast, 62,5% of mice that received vehicle control experienced tumor reappearance within this time period (p=0.0097). Conclusions: In summary, these studies demonstrate that therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction with MI-773 is an effective anti-tumor strategy that mediates tumor regression, sensitizes tumors to cisplatin and prevents recurrence in this pre-clinical model of ACC. Collectively, these data suggest that patients with adenoid cystic carcinoma might benefit from MDM2-targeted therapies.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T19:50:52Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoVivoEfeito.pdf: 1898867 bytes, checksum: f85eee9ac16ab6cce5a6d1e2f8473061 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T20:20:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoVivoEfeito.pdf: 1898867 bytes, checksum: f85eee9ac16ab6cce5a6d1e2f8473061 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-09T20:20:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoVivoEfeito.pdf: 1898867 bytes, checksum: f85eee9ac16ab6cce5a6d1e2f8473061 (MD5) Previous issue date: 2013 / O aumento dos níveis plasmáticos de aldosterona após infarto do miocárdio (IM) está relacionado com a piora do prognóstico da doença e contribui para patogênese da insuficiência cardíaca. O tratamento do IM com antagonistas de receptores mineralocorticoides (MR) da aldosterona, espironolactona e eplerenona, têm reduzido a remodelação do ventrículo esquerdo e a morte súbida. Entretanto, existem evidências clínicas e experimentais de que a cardioproteção promovida por esses antagonista pode ser em parte independente do bloqueio da ação da aldosterona. O objetivo do presente estudo foi avaliar comparativamente os efeitos cardioprotetores da espironolactona e eplerenona em um modelo agudo de isquemia cardíaca em ratos. Ratos machos wistar, submetidos a adrenalectomia lateral ou não foram tratados, via oral, com Espironolactona 20mg/kg ou Eplerenona 10mg/kg, na presença e na ausência de um antagonista de receptor GR (Mifepristona 20mg/kg) e submetidos a isquemia cardíaca. O sinal de ECG em ratos anestesiados foi obtido antes e após a ligadura coronária esquerda, durante 1 hora. A área sob a curva do segmento ST do ECG, um parâmetro que indica isquemia do miocárdio, foi significativamente menor para a espironolactona (53.9.3 ± 13,07) e eplerenona (31,3 ± 10,08) de animais tratados em comparação com os animais de controle (179,4 ± 32,3). Mifepristona (76,6 ± 14,54) não foi capaz de alterar os efeitos de espironolactona. Estes resultados sugerem que doses baixas de espironolactona e eplerenona são cardioprotetoras mesmo quando os níveis de aldosterona não estão aumentados e que este efeito não é dependente da ativação dos receptores GR. ______________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The increasing plasma levels of aldosterona after myocardial infarction (MI) is related to its prognostic aggravation and contributes to the cardiac failure pathogenesis. The MI treatment with the mineralocorticoid receptors (MR) antagonists, spironolactone and eplerenone, can reduce the left ventricular remodeling and sudden death occurrence. However, clinical and experimental evidences demonstrated that this cardioprotection could be in part independent of the aldosterone inhibition. The mechanisms activated by these two drugs in the heart remain unknown. Spironolactone also presents glucocorticoid receptors (GR) affinity, which also shows cardioprotective properties. The objective of the present work was to evaluate the cardioprotective effects of spironolactone and eplerenone in a model of acute cardiac ischemia in rats. Male Wistar rats were first subjected to adrenalectomy and received by oral route 20mg/kg of spironolactone or 10mg/kg eplerenone in the presence and in the absence of mifepristone (20mg/kg), a GR receptor antagonist. The ECG signal was obtained in anaesthetized rats before and after the left coronary ligature, during 1 hour. The area under the curve of the ST segment of ECG, a parameter that indicates myocardial ischemia, was significantly smaller for the spironolactone (53.9.3±13.07) and eplerenone (31.3±10.08) treated animals compared to the control animals (179.4 ± 32.3). Mifepristone (76.6±14.54) was not able to alter the effects of spironolactone. These results suggest that low doses of spironolactone and eplerenone are cardioprotective even when plasma levels of aldosterone are not augmented and that this effect is not dependent of GR receptors activation.

Submitted by CHESTON CÉSAR HONORATO PEREIRA null (cheston@bol.com.br) on 2016-01-19T22:39:51Z No. of bitstreams: 1 Tese_Cheston_Cesar_Honorato_Pereira.pdf: 2607975 bytes, checksum: 4fe741cf6ad1a893c8fbc6017c62699a (MD5) / Approved for entry into archive by Sandra Manzano de Almeida (smanzano@marilia.unesp.br) on 2016-01-20T16:40:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_cch_dr_jabo.pdf: 2607975 bytes, checksum: 4fe741cf6ad1a893c8fbc6017c62699a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-20T16:40:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_cch_dr_jabo.pdf: 2607975 bytes, checksum: 4fe741cf6ad1a893c8fbc6017c62699a (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Estudou-se a anatomia do timo em 30 filhotes de avestruzes, 13 machos e 17 fêmeas com idade variando entre 10 a 20 dias, mediante fixação de cada ave em solução aquosa de formol a 10%. As cadeias de lobos tímicos localizaram-se no terço distal da região ventral do pescoço, dispondo-se de forma linear e paralela, desde a décima primeira até a décima quinta vértebra cervical, relacionando-se com o nervo vago e veia jugular. O número de lobos variou de 1 a 3 e 1 ou 2, para os antímero direito e esquerdo respectivamente. A média das dimensões dos lobos foram 2,09 x 0,71 x 0,41 cm para o lobo cranial, 0,69 x 0,38 x 0,27 cm para o lobo médio e 0,55 x 0,33 x 0,29 cm para o lobo caudal do antímero direito. No antímero esquerdo foram registrados de 2,14 x 0,71 x 0,37 cm para o lobo cranial e 0,60 x 0,31 x 0,22 cm para o lobo caudal. Os lobos tímicos direitos e esquerdos mostraram-se nutridos, em todos os casos, por vasos oriundos, direta e exclusivamente, das artérias comuns dos nervos vagos, esofágicas ascendentes e cervicais cutâneas ascendentes direitas e esquerdas. Os lobos tímicos do antímero direito receberam, independentemente de sua origem, de um a cinco ramos e do antímero esquerdo, houve uma variação de um a quatro ramos. A morfologia e vascularização arterial do timo apresentaram comportamentos bem definidos, possuindo características comuns que identificam a espécie que foi objeto de nosso estudo. / It was studied the morphology and the biometry of the thymus in 30 young ostriches, 13 males and 17 females aged from 10 to 20 days, by setting each bird in aqueous solution of 10% formaldehyde. Chains of thymic lobes were located in the third distal part of the ventral neck, offering up linear and parallel, from the eleventh to the fifteenth cervical vertebra, relating to the vagus nerve and jugular vein. The number of lobes varied from 1 to 3 and 1 or 2, to right and left antimeres respectively. The average dimensions of the lobes were 2.09 x 0.71 x 0.41 cm to the cranial lobe, 0.69 x 0.38 x 0.27 cm to the middle lobe and the 55 x 0.33 x 0.29 cm to the caudal lobe of the right side. On left antimere were found the average dimensions of the lobes of 2.14 x 0.71 x 0.37 cm for cranial lobes and 0.60 x 0.31 x 0.22 cm to the caudal lobes. Thymic right and left lobes shown to be nourished , in all cases , for vessels coming directly and exclusively , common arteries of the vagus nerves , skin and cervical esophageal ascending upward right and left . Thymic lobes of the right side received , regardless of its source , from one to five branches and left antimere , there was a variation of one to four branches. The morphology and thymus biometrics showed well-defined behaviors, possessing common characteristic who characterized the specie that was the subject of our study.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissRLA.pdf: 423500 bytes, checksum: 48847345bf5289e81fbcf58a5684edce (MD5) Previous issue date: 2004-12-17 / Universidade Federal de Sao Carlos / The present work had as objective to investigate the participation of the mechanisms adrenergics of the medial preoptic area (APM) in the salivary secretion induced for the peripheral colinergic stimulation (pilocarpine injection). Holtzman rats had been used (280-320 g). A part of the animals suffered electrolytic lesion in the APM through the ticket from electric chain (1mA x 3x10s), to serve as control, and another part of the animals was submitted to the same procedures of cerebral surgery, except that it was not displayed to the electric chain ticket (SHAM). Animals that suffered the surgery from implant of cannulas guides in the APM for the injection of adrenergics agonists and antagonists were also used. The saliva was collected using previously weighted and inserted balls of cotton in the mouth of the animal that was under anesthesia with quetamina (1mg/mL/kg). Salivation was induced for intraperitoneal injection (IP) of pilocarpine (1mg/mL/kg). The APM lesion in such a way reduced peripheral the pilocarpine-induced salivation group that suffered APM lesion 24 hours before the experiment (APM lesion 340,7 ± 41,1 mg/7min, versus SHAM 428,4 ± 31,6 mg/7min) as much as in the group that suffered APM lesion 5 days before the experiment (APM lesion 310,2 ± 35,4 mg/7min, versus SHAM 494,9 ± 35,5 mg/7min). Reduction in the peripheral pilocarpine-induced salivation was not verified in those animals that had suffered APM lesion 15 days before the experiment (APM lesion 461,6 ± 81,4 mg/7min, versus SHAM 575,7 ± 34,9 mg/7min). The injection of noradrenaline (80 nmol/0,5µL) in the APM did not reduce the peripheral pilocarpine-induced salivation (NOR + Pilo 356,0 ± 36,0 mg/7min versus Saline + Pilo 475,0 ± 73,0 mg/7min). This same drug in the dose of 160 nmol/0,5 µL reduced the peripheral pilocarpine-induced salivation (NOR + Pilo 251,0 ± 50,0 mg/7min versus Saline + Pilo 468,0 ± 59,0 mg/7min). The inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenaline (160 nmol/0,5µL) in the peripheral pilocarpine-induced salivation was not reduced by the previous injection of the antagonist of adrenoceptors &#945;2, RX-821002 in the dose of 80 nmol/0,5µL (RX + NOR + Pilo 244,1 ± 29,2 mg/7 min, versus Saline + NOR + Pilo 202,3 ± 34,8 mg/7 min). On the other hand, this same drug injected in the dose of 160 nmol/0,5µL, partially reverted the inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenalina (160 nmol/0,5µL) in the peripheral pilocarpine-induced salivation (RX + NOR + Pilo 329,9 ± 77,8 mg/7min, versus Saline + NOR + Pilo 148,2 ± 30,3 mg/7min). The RX- 821002 injected in the APM in the dose of 320 nmol/0,5µL, failed in showing the reversion of the inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenaline (160nmol/0,5µL) in the peripheral pilocarpine-induced salivation (RX + NOR + 261,3 ± 18,9 mg/7min, versus Saline + NOR + Pilo 320,4 ± 30,2 mg/7min). The antagonist of adrenergics receptors &#945;1, Prazosin, did not reveal efficient, therefore the inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenaline (160 nmol/0,5µL) in the peripheral pilocarpine-induced salivation was not reduced by the previous injection of the adrenergic antagonist &#945;1, Prazosin, in the dose of 160 nmol/0,5µL (Prazosin + NOR + Pilo 223,6 ± 35,8 mg/7min, versus Saline + NOR + Pilo 256,0 ± 58,5 mg/7min). The results show that the noradrenaline injected in the APM reduces the peripheral pilocarpine-induced salivation and this effect is reduced by the previous blockade of the receiving adrenergics &#945;2 of the same area, suggesting to the existence of an adrenergic &#945;2 inhibitory mechanism of the salivation in the APM. / O objetivo deste trabalho foi investigar a participação dos mecanismos adrenérgicos da área preóptica medial (APM) na secreção salivar induzida pela estimulação colinérgica (injeção de pilocarpina) periférica. Foram utilizados Ratos Holtzman (280-320 g). Uma parte dos animais sofreu lesão na APM através da passagem de corrente elétrica (1mA x 3x10s), para servir de controle, uma outra parte dos animais foi submetida aos mesmos procedimentos de cirurgia cerebral, exceto que não foi exposta à passagem de corrente elétrica (lesão fictícia). Foram utilizados também animais que sofreram a cirurgia de implante de cânulas guia na APM para a injeção de agonistas e antagonistas adrenérgicos. A saliva foi coletada utilizando-se bolas de algodão previamente pesadas e inseridas na boca do animal que se encontrava sob anestesia por quetamina (1mg/mL/kg). A salivação foi induzida por injeção intraperitoneal (ip) de pilocarpina (1mg/mL/kg). A lesão da APM reduziu a salivação induzida por pilocarpina ip tanto no grupo que sofreu lesão da APM 24 horas antes do experimento (lesão APM 340,7 ± 41,1 mg/7min, vs. LF 428,4 ± 31,6 mg/7min) quanto no grupo que sofreu a lesão 5 dias antes do experimento (lesão APM 310,2 ± 35,4 mg/7min, vs. LF 494,9 ± 35,5 mg/7min). Não foi verificada redução na salivação induzida por pilocarpina ip nos animais que sofreram lesão 15 dias antes do experimento. (lesão APM 461,6 ± 81,4 mg/7min, vs. LF 575,7 ± 34,9 mg/7min). A injeção de noradrenalina (80 nmol/0,5µL) na APM não reduziu a salivação induzida por pilocarpina ip (NOR + Pilo 356,0 ± 36,0 mg/7min vs. Salina + Pilo 475,0 ± 73,0 mg/7min) Essa mesma droga na dose de 160 nmol/0,5µL reduziu a salivação induzida por pilocarpina ip (NOR + Pilo 251,0 ± 50,0 mg/7min vs. Salina + Pilo 468,0 ± 59,0 mg/7min). O efeito inibitório da injeção na APM de noradrenalina (160 nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip não foi reduzido pela injeção prévia do antagonista de receptores adrenégicos &#945;2, RX-821002 na dose de 80 nmol/0,5µL (RX + NOR + Pilo 244,1 ± 29,2 mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo 202,3 ± 34,8 mg/7min). Já essa mesma droga injetada na dose de 160 nmol/0,5µL, reverteu parcialmente o efeito inibitório da injeção na APM de noradrenalina (160 nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip (RX + NOR + Pilo 329,9 ± 77,8 mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo 148,2 ± 30,3 mg/7min). O RX-821002 injetado na APM na dose de 320 nmol/0,5µL, falhou em mostrar a reversão do efeito inibitório da injeção também na APM de noradrenalina (160nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip (RX + NOR + Pilo 261,3 ± 18,9 mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo 320,4 ± 30,2 mg/7min). O antagonista de receptores adrenégicos &#945;1, Prazosin, não se mostrou eficaz pois o efeito inibitório da injeção na APM de noradrenalina (160 nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip não foi reduzido pela injeção prévia do antagonista adrenégico &#945;1, Prazosin, na dose de 160 nmol/0,5µL (Prazosin + NOR + Pilo 223,6 ± 35,8 mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo 256,0 ± 58,5 mg/7min). Os resultados mostram que a noradrenalina injetada na APM reduz a salivação induzida pela pilocarpina ip e que esse efeito é reduzido pelo bloqueio prévio dos receptores adrenérgicos &#945;2 da mesma área, sugerindo a existência de um mecanismo adrenérgico &#945;2 inibitório da salivação na APM.

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Orientadora: Maria Izabel Souza Camargo / Coorientadora: Karen Cristiane Martinez de Moraes / Banca: Flavio Flavio Henrique Caetano / Banca: Edson Luis Maistro / Resumo: Os carrapatos, ectoparasitas hematófagos, produzem uma saliva em cuja composição encontram-se moléculas capazes de modular o sistema imuneinflamatório e hemostático do hospedeiro. No presente estudo, foi realizada a caracterização do extrato de glândulas salivares de fêmeas do carrapato Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) alimentadas por quatro dias em coelhos hospedeiros, por meio de espectrometria de massas (LCMS-IT-TOF) pela estratégia de Shotgun, que identificou 14 proteínas, com as mais diversas funções como componentes estruturais de junções celulares, do citoesqueleto, do nucleossomo, além de proteínas com ações anticoagulante e anti-inflamatória corroborando os dados presentes na literatura. Neste trabalho buscou-se, ainda, analisar o potencial antitumoral desse extrato em células das linhagens tumorais SK-HEP-1 e HEP-G2, por meio de ensaios de MTT; análise, por técnicas de Microscopia de Confocal de Varredura a Laser, do núcleo e citoesqueleto; e análise do padrão de transcrição de mRNAs envolvidos nos eventos ou mecanismos de morte celular por apoptose, incluindo os produtos dos genes Bax, Bcl-2, Caspases 3 e 9, Fas e Interleucina 1 α. Os resultados obtidos mostraram que o extrato na concentração de 50 μg/mL inibiu significativamente a proliferação celular das duas linhagens testadas. Pela análise dos núcleos e filamentos de actina das células expostas, não foram verificadas características morfológicas que indicassem processos de morte celular por apoptose. Já a análise do padrão de transcrição de mRNAs envolvidos nos mecanismos de morte celular por apoptose, evidenciou a expressão significativa de alguns genes anti e pró-apotóticos nas células tratadas quando comparadas às do grupo controle, sugerindo que a ação do extrato pode causar o desbalanço na homeostase celular, que pode desencadear processos de morte celular por apoptose, corroborando os dados apresentados na... / Abstract: Ticks, hematophagous ectoparasites produces saliva that presents molecules capable of modulating the immune-inflammatory and hemostatic system of the host. The present study was performed to characterize the salivary gland extract of female Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) fed for four days in rabbits by mass spectrometry (LCMS-IT-TOF) by shotgun strategy, which identified 14 proteins with diverse functions: as structural components of cell junctions, cytoskeleton, the nucleosome, and protein with anticoagulant and antiinflammatory actions corroborating data in the literature. In this study, we attempted to also examine the antitumor potential of this extract on tumor cell lines SK HEP-1 and HEP-G2, by MTT assay; analysis by Laser Scanning Confocal Microscopy techniques, and pattern analysis of mRNA transcription involved in cell death by apoptosis, including the products of genes Bax, Bcl-2, Caspases 3 and 9 Fas and Interleukin-1 α. The results showed that the extract obtained in concentration of 50 μg/ml significantly inhibited the proliferation of both cell lines tested. In the analysis of cores and actin filaments, of the treated cells were not observed morphological characteristics that indicate cell death processes by apoptosis. The analysis of the pattern of transcription of mRNAs involved in mechanisms of cell death by apoptosis, showed a significant expression of some apoptotic genes, in treated cells compared to the control group, suggesting that the action of the extract can cause an unbalance homeostasis in the cell, which can trigger processes of cell death by apoptosis, confirming the data presented in the literature / Mestre

Orientador: Yasmin Rodarte Carvalho / Banca: Carlos Eduardo Dias Colombo / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Resumo: Dentre as neoplasias de glândulas salivares com participação das células mioepiteliais, encontra-se o adenoma pleomórfico (AP), o mioepitelioma (ME), o adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade (APBGM) e o carcinoma adenóide cístico (CAC). A proposta deste trabalho foi estudar a expressão de actinas, vimentina, calponina e caldesmona no AP, ME, APBGM e CAC, buscando estabelecer diferenças entre essas neoplasias e facilitar o diagnóstico definitivo das mesmas. Foram estudados 27 casos de AP, 6 de ME, 9 de CAC e 6 de APBGM. Foram realizadas reações imunoistoquímicas, pela técnica da streptavidina biotina peroxidase com os anticorpos HHF35 (anti-actina músculo específica), 1A4 (anti-α-actina de músculo liso), V9 (anti-vimentina), CALP (anticalponina) e h-CD (anti-h-caldesmona). Nos adenomas pleomórficos a maioria das células não luminais, fusiformes e plasmocitóides exibiu forte marcação para vimentina. As células luminais foram sempre negativas. Grande número de células não luminais e fusiformes foi positivo para α-AML e CALP e algumas para HHF35. Nos mioepiteliomas, a marcação para vimentina e HHF35 foi semelhante à dos AP. Nos carcinomas adenóide císticos a maioria das células não luminais mostrou forte coloração para VIM, α-AML e CALP. Nos APBGM houve marcação positiva para VIM. A maioria das células neoplásicas foi negativa para HHF35, α-AML e CALP. Concluiu-se que a VIM foi o melhor marcador de células mioepiteliais neoplásicas em AP, ME e CAC, seguida da α-AML e CALP nos AP e CAC. A VIM foi o melhor marcador de células neoplásicas em APBGM. / Abstract: Among the salivary gland tumors in which there are participation of myoepithelial cells, it is found the pleomorphic adenoma (PA) and the myoepithelioma (ME), which may have overlapping histopathological features with polymorphous low-grade adenocarcinoma (PLGA), and adenoid cystic carcinoma (ACC). The aim of this work is to study the expression of actins, vimentin, calponin and caldesmon in the PA, ME, PLGA, ACC, seeking to establish differences between these tumours and facilitate the definitive diagnosis of them. We studied 27 PA, 6 ME, 9 ACC, and 6 PLGA. Immunohistochemical reactions were held, by the technique of streptavidin biotin peroxidase with antibodies HHF35 (Anti-specific muscle actin, 1A4 (anti-α-smooth muscle actin), V9 (anti-vimentin), CALP (anti-calponin) e h-CD (anti-h-caldesmon). In PA, most non luminal cells, spindle and plasmocytoid cells exhibited strong stainning for VIM. The luminal cells were always negative. A lot of non-luminal and spindle cells were positive for α-SMA and CALP and some for HHF35. In ME, the staining for VIM and HHF35 was similar to PA. In ACC the majority of nonluminal cells showed strong staining for VIM, α-SMA and CALP. In PLGA, there was positive staining for VIM. Most tumoral cells were negative for HHF35, α-SMA and CALP. In conclusion, VIM was the best marker for neoplastic myoepithelial cells in PA, ME and ACC, followed by α-smooth muscle actin and CALP in PA and the ACC. VIM was the best marker for neoplastic cells of PLGA. / Mestre

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Coorientador: Débora Colombi / Banca: Maria Anice Sallum Mured / Banca: Marcelo Urbano Ferreira / Banca: Marcos Fontes / Banca: Valber de Albuquerque Pedrosa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Instituto de Biociências de Botucatu / Resumo: A invasão da glândula salivar pela forma de esporozoítos do gênero Plasmodium é um passo crucial para o ciclo de vida nos mosquitos do gênero Anopheles, e um passo obrigatório para que a transmissão da malária ocorra. A TRAP domínio-A, uma proteína de esporozoítos que é secretada na face anterior do parasita quando em contato com a glândula salivar, interage com a saglin, proteína majoritária da glândula. Esta interação é fundamental para que ocorra a invasão. Este processo ocorre em Anopheles gambiae infectado com Plasmodium0berghei ou Plasmodium0 falciparum. No Brasil, o Anopheles darlingi é o principal veto do parasita da malária. Aproximadamente 80% dos!casos de malária são!causados por Plasmodium vivax, anualmente e aproximadamente 20% por Plasmodium falciparum. Em um estudo prévio de nosso grupo, foi observado! 80% de infecção por P. 0falciparum nos An. darlingi coletados em Rondônia, Porto Velho. Isto pode ser provavelmente porque o An. darlingi pode se infectar facilmente com P. falciparum, mas não o transmite de uma maneira eficiente. Comparamos a sequência da saglin de An. gambiae com sequências!de An. darlingi, e SG1 e SG1B foram as sequências mais relacionadas, com 27% de similaridade. Sequenciamos isolados de P alciparum!brasileiros, e!aminoácidos chave no!processo de invasão da glândula se apresentaram conservados. Caracterizamos, pela primeira vez, a região da saglin de An. gambiae, responsável pela interação com o domínio-A da TRAP, e observamos que esta sequência nao encontra homologia com sequências de An. darlingi. Anofelinos!da espécie An.gambiae e An. darlingi, divergiram há aproximadamente 79 milhões de anos, e o processo de especiação provocou o surgimento de algumas barreiras para o desenvolvimento de espécies de Plasmodium, que habitam regiões geográficas distintas. Parasitas da espécie P. falciparum chegaram no Brasil a aproximadamente 500 anos junto... / Abstract: Salivary!gland!invasion!by!sporozoites!of!Plasmodium!genus!is!a!crucial!step! to! life! cycle! in! mosquitoes! of! Anopheles! genus, and! an! obligate! step! to! malaria! transmission! occurs.! TRAP! A! domain,! a! sporozoite! protein! that! is! secreted! on! anterior! tip! of! parasite! upon! contact! with! salivary! glands,! interacts! with! saglin,! a! major!gland!protein.!This!interaction!is!fundamental!to!gland!invasion.!This!process! occurs! in! Anopheles0 gambiae! infected! with! Plasmodium0 berghei! or! Plasmodium0 falciparum.!In!Brazil,!Anopheles0darlingi!is!the!main!vector!of!malaria!parasite.!Near! 80%! of!malaria! cases! are! due! Plasmodium0vivax,! annually,! and! about! 20%! due! to! Plasmodium0falciparum.! In! previous! studies! of! our! lab,! it!was! observed! 80%! of! P.! falciparum! infection! in! An.0 darlingi! collected! in! Rondonia,! Porto! Velho.! This! probably!happens!because!An.0darlingi!can!be!easily!infected!with!P.0falciparum,!but! can!not!efficiently!transmit!them.!We!compare!An.0gambiae!saglin!sequence!with0An.0 darlingi0sequences,!and!SG1!and!SG1B!were!the!most!related!sequences,!with!27%! of!similarity.!Brazilian!P.0falciparum!isolated!were!sequenced,!and!key!amino!acids! related!to!salivary!gland!invasion,!are!preserved.!We!characterize!for!the!first!time,! An.0gambiae! saglin! region! responsible! to! interact!with! A!domain!of!TRAP,! and!we! observed!that!these!sequences!have!no!homology!with!An.0darling!ones.!An.gambiae... / Mestre