Orientadores : Edi Lucia Sartorato, Denise Yvone Janovitz Norato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:03:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caldas_HeloisaCristina_M.pdf: 16831040 bytes, checksum: 18bbddcc1afb7e9b973df9e22e2bc68b (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: As doenças de depósito de glicogênio (GSD) incluem aproximadamente 12 tipos, onde existe falta de uma ou de diversas enzimas que metabolizam o glicogênio normal e são também chamadas de glicogenoses. Os acúmulos intracelulares do glicogênio afetam principalmente células hepáticas, renais, músculo cardíaco e esquelético. As diferentes formas de GSD foram classificadas de acordo com a ordem cronológica em que os defeitos enzimáticos foram identificados. A GSDI compreende um grupo de doenças raras, com padrão de herança autossômico recessivo apresentando grande heterogeneidade clínica e bioquímica. Existem dois principais subgrupos, GSDIa e Ib, confirmados em nível molecular. O subtipo Ia se refere à deficiência da enzima glicose-6-fosfatase (G6Pase), enzima responsável pela manutenção da glicose sanguínea; a GSDIb relacionada à deficiência da glicose-6-fosfato translocase (G6PTl) responsável pelo transporte da glicose-6-fosfato para o lúmen do retículo endoplasmático, onde a unidade catalítica da G6Pase está situada. Outros subgrupos menos comuns foram também identificados, tais como o subgrupo Ic que envolve o transporte de fosfato e pirofosfato e, finalmente, Id que envolve a enzima responsável pelo retomo da glicose do lúmen do retículo para o citosol, existindo, no entanto, controvérsia com relação à classificação desses últimos subtipos. A GSDID é causada pela deficiência da enzima bifuncional AGL, uma proteína monomérica com dois sítios catalíticos diferentes: oligo-l, 4-1,4 glucontransferase e amilo-1,6-glucosidase, e para o funcionamento normal, ambas as atividades são requeridas. A enzima AGL combinada à ação da fosforilase é responsável pela completa degradação do glicogênio. Devido à heterogeneidade clínica dos tipos I e m, durante a infância é difícil se diferenciar clinicamente as duas formas, ambas apresentando sintomas similares de hepatomegalia, hipoglicemia, hiperlipidemia,retardo de crescimento entre outros. Neste trabalho foram estudados 14 indivíduos com sinais clínicos sugestivos de GSDI onde não foram encontradas alterações no gene da G6Pase, responsável pelo subtipo Ia, esses pacientes são, portanto classificados como tipo I non-Q. O gene G6PTl foi seqüenciado completamente em todos os pacientes estudados e dois deles foram diagnosticados em nível molecular como sendo na verdade GSDIb. Foram estudados 6 exons do gene AGL, onde estão localizadas a maioria das mutações descritas até o momento no gene, e somente foram detectados polimorfismos em todos os indivíduos estudados. O protocolo molecular desenvolvido no presente trabalho mostrou-se adequado para o rastreamento de mutações, apesar de terem sido diferenciados molecularmente somente dois indivíduos com subtipo Ib / Abstract: There are 12 types of glycogen storage disease (GSD). There disease are characterized by the absence of one or many of enzymes called glycogenoses, which are responsible for normal glycogen metabolismo The intracelular increase of glycogen mainly affects hepatic, kidney, cardiac and squeletic muscle cells. GSDs have been classified according to the cronological order in which enzymatic defects were identified. GSDI includes a group of rare disease of autosomal recessive disorders and clinical and biochemical heterogeneity. There are two main subgroups GSDIa and Ib. A diagnosis can only be confirmed by molecular studies. Subtype Ia is caused by a deficiency glucose-6-phosphatase (G6Pase), is responsible for the mantainance of blood glucose homeostasis. Subtype Ib results trom a deficiency of the glucose-6-phosphate translocase enzyme. This enzyme transports glucose-6-phosphato into the lumen ofthe endoplasmic reticulum, where the G6Pase catalitic site situated. Such as Ic and Id have also been identified. Subtype Ic is related to phosphate and pyrophosphate transporter and Id is related to the enzyme responsable for glucose transport trom lumen to cytosol. GSDm is caused deficiency of bifunctional enzyme (AGL) is a monomeric protein, with both amylo-l,6-glucosidase and 0Iigol,4-1,4 glycosyl transferase activity at two separate catalytic sites. The AGL enzyme, together with phosphorylase, is responsible for degradation of glycogen. During infancy, type m disease may be almost indistinguishable from type I disease, as hepatomegaly, hypoglycemia, hyperlipidemia, and growth retardation are similar predominant features. In the present study, we report molecular and clinical finding in 14 patients with suggestive clinical symptoms of GSDI which didn't be found mutations in the G6Pase gene, responsable by subtype Ia, these patients are thus, classifieds as type I non-a. DNA sequencing of the exons ofthe G6PTl in 14 patients mutations in the G6PTl gene were found in two patients. Six exons of AGL gene were studied, which are found the majority of describe mutation, and just be found polymorphism in all studieds individuals. The molecular protocol that was studied, showed suitable to mutation screemng, whowever to be were find only two individuals with subtype Ib / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Fernanda Klein Marcondes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:21:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bianchi_FabioJose_M.pdf: 1507476 bytes, checksum: fe0a31e90743ed0f1ec35a9dec958c54 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi analisar a influência do sexo e do ciclo estral nas respostas metabólicas e hormonais em ratos submetidos a estresse agudo. Ratos com 3 meses de idade, machos e fêmeas ovariectomizadas, ou com ciclo estral regular, foram usados (n = 7-11/grupo). Após a identificação da fase do ciclo estral, manipulação (machos) ou 21 dias após a castração, os animais foram submetidos a uma sessão de natação. Imediatamente após a aplicação do estresse, os animais foram sacrificados sob anestesia para coleta do sangue e dos tecidos. Estes procedimentos também foram realizados em animais controle. Amostras do fígado, coração, músculos sóleo, gastrocnêmio vermelho e branco foram usados para determinação da concentração tecidual de glicogênio (método colorimétrico do fenol-sulfúrico). Após a coleta de sangue e centrifugação, o plasma foi usado para determinação da concentração plasmática de glicose, triglicerídeos, corticosterona, estradiol e progesterona. A glicose e o triglicerídeo plasmáticos foram determinados por ensaios enzimáticos-colorimétricos. As determinações hormonais foram feitas por radioimunoensaio. Os dados foram analisados por ANOVA bifatorial seguida do teste de Tukey com nível de significância 5%. Ratos machos e fêmeas em diestro controle apresentaram maior concentração de glicogênio hepático quando comparados às demais fases do ciclo estral. A natação induziu uma diminuição neste parâmetro em todos os grupos analisados. Com relação ao glicogênio no músculo cardíaco, ratas em metaestro controle apresentaram menor concentração comparadas aos demais grupos e o estresse por natação causou mobilização em todos os grupos, exceto nesta fase do ciclo estral. Ratos machos e ratas em proestro controle apresentaram respectivamente concentração estatisticamente maior e menor de glicogênio no músculo sóleo comparados aos demais grupos e o estresse por natação induziu uma diminuição deste carboidrato em machos e fêmeas em estro, sem ocorrer alteração nas demais fases. Com relação ao glicogênio nos músculos gastrocnêmico vermelho e branco, machos apresentaram maior concentração basal deste polissacarídeo comparado aos demais grupos controle. Neste tecido o estresse por natação induziu diminuição nas concentrações de glicogênio em todos os grupos analisados. O grupo de ratas em metaestro controle apresentou maior glicemia em relação aos demais grupos. Após o estresse, ratos machos e fêmeas em proestro e em diestro apresentaram elevação neste parâmetro, sem alteração em fêmeas em estro e em metaestro. Com relação às concentrações plasmáticas de triglicerídeos, ratas em diestro controle apresentaram valores mais elevados que os demais grupos. Machos, fêmeas em proestro, estro e em metaestro submetidos à natação apresentaram elevação neste parâmetro, enquanto que o grupo de ratas em diestro apresentou diminuição. Ratas em metaestro apresentaram maiores concentrações plasmáticas de corticosterona em relação aos demais grupos controle. Após o estresse, houve elevação neste parâmetro em todos os animais, validando o modelo de estresse utilizado, porém este aumento foi menor em machos. As concentrações basais de estradiol foram mais elevadas em ratas em proestro em relação aos outros grupos analisados. Após a sessão de natação somente nesta fase foi observado aumento, sem alterações nas demais fases do ciclo estral. Com relação à concentração plasmática de progesterona, ratas em metaestro controle apresentaram concentração mais elevada comparadas às demais fases. O estresse induziu aumento e queda respectivamente no metaestro e no proestro. Desta forma, o sexo e o ciclo estral influenciaram a mobilização tecidual de glicogênio, a glicemia, a concentração plasmática de triglicerídeos e a secreção de corticosterona. Também, o ciclo estral influenciou a secreção de estradiol e progesterona após estresse agudo por natação / Abstract: The aim of this work was to analyze the influence of the sex and of the estrous cycle in the metabolic and hormonal responses from rats submitted to acute stress. Bilaterally ovariectomized rats with 3 months of age, males and females, with regular estrous cycle, were used (n = 7-11/grupo). After the identification of the phase of the estrous cycle, manipulation (male) or 21 days after the ovariectomizared, the animals were submitted to one swimming session. Immediately after the stress session, the animals were sacrificed under anesthesia for collection of the blood and tissues. These procedures were also done in control animals. Samples of liver, cardiac, soleus, red and white gastrocnemius muscles were used for glycogen determination (phenol-sulphuric method). After the collection of blood and centrifugation, the plasma was used for determination of the concentration of glucose, triacylglicerol, corticosterone, estradiol and progesterone. The plasmatic glucose and triacylglicerol levels were determined by enzymatic-colorimetric assay. The hormonal determinations were made by radioimunoassay. The data were analyzed by bifactorial ANOVA followed of the Tukey test with level of significance 5%. Male and Female rats in diestrus and ovareictomized control presented higher concentration of hepatic glycogen when compared to the other phases of the estrous cycle. Swimming induced a decreased in this parameter in all groups. Metestrus control rats presented lower glycogen concentration compared to the other control groups. Stress caused its mobilization in all the groups, but not in females at metestrus. Control male and female rats at proestrus showed respectively higher and lower concentration of glycogen in the soleus muscle compared to the other groups. Swimming stress decreased these levels only in males and female rat at estrus. Male and females ovarietomized rats presented higher basal concentration of glycogen in the muscles gastrocnemius red and white, compared to the other control groups. In this tissue the stress induced reduction in the glycogen concentrations in all groups. Control female rats at metestrus presented glucose plasmatic higher in relation to other control groups. After the swimming session, males and ovariectomized and at proestrus and diestrus females presented an increase in this parameter, without alteration in females at estrus and metestrus. Control female at diestrus presented higher plasmatic concentrations of triacylglicerol compared to the other control groups. In males, females at proestrus, estrus and metestrus swimming stress increased this parameter, and reduced it at diestrus female rats. Rats at metestrus presented higher plasmatic concentration of corticosterone compared to other control groups. After the stress, there was an increase in this parameter in all groups, validating the model of stress used. However this increase was lower in males. The basal concentration of estradiol was higher in rats at proestrus compared to the other control groups. After swimming stress the levels of this hormone increased in females at proestrus at control proestrus, without changes in the other groups. Rats at metestrus presented higher plasmatic concentration of progesterone compared to the other phases. Stress increased and decreased this hormone levels respectively at metestrus and proestrus. In summary, the sex and the estrous cycle influenced the tissue glycogen mobilization, glucose and triacylglicerol and corticosterone secretion after acute stress. Also, the estrous cycle influenced the estradiol and progesterone production after acute swimming stress / Mestrado / Fisiologia Oral / Mestre em Odontologia

Orientador: Marta H. Krieger-Azzolini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T01:49:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Latorraca_MarciaQueiroz_M.pdf: 6621008 bytes, checksum: 63432fa26d4c46ce898f71f4c391c0ba (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Este trabalho teve o propósito de padronizar um modelo para estudo de intervenção hormonal, usando o teleósteo Piaractus mesopotamicus. O efeito da insulina in vivo sobre o metabolismo de carboidratos e lipídios, foi investigado em Piaractus mesopotamicus juvenis, com cânula crônica implantada na aorta dorsal e mantidos em caixa de experimentação especial. O estudo foi conduzido emtrês etapas: 1- verificou-se a viabilidade do implante da cânula crônica aortica nessa espécie, da sua manutenção em caixa de experimentação especial, do período de tempo necessário para a recuperação do estresse cirurgico e para o inicio da intervenção hormonal, através da monitoração dos níveis de glicose, ácidos graxos livres e cortisol plasmáticos; 2- determinou-se a menor dose capaz de promover hipoglicemia, os tempos de efeito máximo e de recuperação frente a várias doses de insulina suma regular-BIOBRÁS (O.25U/Kg; 1.0U/Kg; 2.5U/Kg e 5.0U/Kg) ; 3- verificou-se o efeito da menor dose hipoglicemiante sobre as reservas de gIicogênio hepático. muscular esquelético branco e vermelho, muscular cardíaco. cerebral e a concentração de ácidos graxos livres plasmáticos. Os resultados demonstraram que a espécie estudada tolerou os procedimentos de implante de cânula e adaptou-se às condições experimentais. Houve aumento dos níveis de glicose, cortisol e ácidos graxos livres plasmáticos em resposta aos procedimentos de captura, manuseio, anestesia e cirurgia, sendo necessárias quarenta e oito horas para a estabilização dos indicadores mensurados e para o início da intervenção hormonal. A menor dose hipoglicemiante foi 1.0U/Kg de peso corporal, com efeito máximona terceira hora e retomo aos níveis iniciais na vigésima quarta hora após a administração hormonal, considerando a hipoglicemia invariavelmente presente nos animais controle no curso das seis horas iniciais. Devido a este fato. investigou-se a influência da coleta seriada e/ou adminstração de solução salina como agentes promotores da resposta hipoglicêmica dos animais controle. Os resultados indicaram que a hipoglicemia não foi promovida pelos procedimentos testados. enquanto o cortisol e os ácidos graxos livres plasmáticos sofreram alterações, verificando-se uma relação inversa entre ambos seis e doze horas após a primeira amostragem. A menor dose efetiva (l.OU/Kg peso corporal) produziu declinio imediato e pronunciado dos ácidos graxos livres plasmáticos, em contraste com a hipoglicemia mais lenta e duradoura. As reservas teciduais de glicogênio não foram alteradas, possivelmente por influência da queda da temperatura. Os resultados do presente trabalho indicam que o modelo padronizado permitiu a amostragem de sangue seriada, a administração hormonal (após adequado período de recuperação pós-cirúrgico) e minimizou os efeitos do estresse causado pelo manuseio. Em Piaractus mesopotamicus juvenis, a insulina exerceu um efeito anti-lipolftico e lipogênico. que parece ser mais rápido do que a ação hipoglicemiante, indicando função importante na regulação do metabolismo lipidico / Abstract: The main aim of this work was to standardize a model for studing the hormone intervention, using the teleost Piaractus mesopotamicus. It was investigated the effect of insulin in vivo on the carbohydrate and lipid metabolism of young Piaractus mesopotamicus, using a cronic cannulain serted into the dorsal aorta and kept in special experimentation boxes. The research was carried out in three stages: 1- It was verified the viability of implanting the aortic cronic cannula into Piaractus mesopotamicus and keeping it in a special experimentation box ;the period of time necessary for overcoming surgical stress, and the beginning of the hormone intervention by the monitoration of glucose. free fat and plasma cortisol levels; 2-It was also determined the lowest dose which is able to cause hypoglycemia, the maximum effect and recovering time towards several regular suine insulin doses-BIOBRAS (O.25U/Kg;1.0U/Kg; 2.5UIKge 5.0U/Kg); 3- It has been verified the effect of the lowest hypoglicemic dose upon the liver, white and red squeletic muscles, brain, myocardium glycogen contents and the concentration of plasmatic free fat. The results have shown that the studied species had tolerated the cannula implantation procedures and got used to the experimental conditions. There was an increase of glucose, cortisol and plasmatic free fat levels in response to the capture, handling, anesthesia and surgery procedures, being necessary 48 hours for the stabilization of the measured indicators and for beginning the hormones intervention.The lowest hypoglicemic dose was 1.0U/Kg of body weight, with maximmum effect in the third hour and the return to the beginning levels in the 24th hour after the hormone ministration, considering hypoglycemia invariably present in the control animals during the first 6 hours. Doe to this fact, it was investigated the influence of the repetead blood sampling and/or administration of saline solution as promoting agents ofthe response of the control animals. The results indicated that hypoglycemia was not promoted by the tested procedure, whereas cortisol and plasmatic free fat underwent alterations, showing an inverse relationship between cortisol and plasmatc free fat six and twelve hours after the first sampling. The lowest effective dose (l.OU/Kg body weigbt) caused immediate and pronounced decrease of the plasmatic free fat, contrasted to the slower and more lasting hypoglycemia. The glycogen tissue reservations did not altero possibly because of the influence of the temperature decrease. The results of the work have shown that the standardized model allowed the serial blood sampling and hormone administration (after adequate postsurgery recovery period), minimizing the effects of stress caused by handling. In young Piaractus mesopotamicus , insulin caused an antilipolitic and/or antilipogenic effect which seemed to be faster than the hypoglicemic action, indicating an important whole on the regulation of lipid metabolism / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Rui Erreiras Maciel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T01:27:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gallani_MariaCeciliaBuenoJayme_M.pdf: 8332593 bytes, checksum: fe088db346823a32249f80ef32acb477 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Com o propósito de avaliarmos o efeito do exercício físico agudo e sob forma de treinamento e da suplementação de vitamina C sobre alguns parâmetros biométricos e variáveis bioquímicas, estipulamos um protocolo experimental para o qual utilizamos cobaias (Caviaporcellus ) fêmeas, com 3 meses de idade... ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Carlos Eduardo Steiner, Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T18:18:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlin_MarceloPaschoalete_M.pdf: 1614647 bytes, checksum: 62e5b428719069b2b173ab2baf51970f (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A transformação de glicogênio em glicose acontece através de reações químicas realizadas por enzimas específicas e uma deficiência em uma delas leva ao acúmulo de glicogênio, resultando em distúrbios hereditários conhecidos como doenças de depósito de glicogênio (GSD, da sigla em inglês), ou glicogenoses. A glicogenose tipo I (GSDI), responsável por mais de 90% dos casos, é causada pela deficiência de G6Pase, enzima chave na homeostase da glicose sanguínea. Seu complexo enzimático é constituído por duas subunidades (catalítica e translocase) que determinam os subtipos Ia e Ib. A GSDIa, também conhecida como doença de von Gierke, é a mais comum das GSDI com 80 a 90% dos casos e corresponde a uma deficiência na sub-unidade catalítica da G6Pase. A GSDIb é a segunda forma mais prevalente e mais grave. É resultante da deficiência da glicose-6-fosfato translocase que transporta a glicose-6-fosfato para o lúmen do retículo endoplasmático, onde a unidade catalítica da G6Pase está situada. Em ambas, a deficiência enzimática é o resultado de mutações genéticas nos genes que codificam estas enzimas, conhecidos respectivamente como G6PC e G6PT1. O diagnóstico bioquímico é recomendável caso se queira desvendar e recomendar modalidades de tratamento, porém não fornece informação suficiente para a determinação do subtipo envolvido. Para essa diferenciação é necessário análise enzimática da G6Pase. Como essa enzima não é expressa em tecidos como fibroblastos ou linfócitos, sua aferição só é possível por procedimento cirúrgico, através de biópsia hepática. Nesse contexto, a clonagem do cDNA do G6PC e G6PT1 possibilitou o rastreamento de mutações responsáveis pelos subtipos Ia e Ib, o que permite a alternativa de um diagnóstico menos invasivo baseado em técnicas de biologia molecular através de amostras de sangue. No presente estudo, treze pacientes com sintomas clínicos sugestivos de GSDIa e Ib foram investigados através do sequenciamento genético. Foram detectadas para o gene G6PC cinco alterações, incluindo, três mutações de ponto (G68R, R83C e Q347X) e dois polimorfismos (c.511G>A e c.1176T>C), todos previamente descritos. Já para o gene G6PT1 foram encontradas quatro alterações: uma mutação de ponto conhecida (G149E), uma inserção do tipo frameshift inédita na literatura especializada (c.1338_1339insT) e dois polimorfismos (c.1287G>A e c.1076-28C>T). A frequência das mutações em nosso meio é semelhante à observada na literatura, na qual a mutação R83C também é a mais frequente. Além disso, o presente estudo acrescentou a descrição de uma nova mutação. A pesquisa de ambos os genes deve ser considerado na investigação dessa condição para definir os subtipos envolvidos, pois no caso de ausência de alterações no gene 6PC, sugere-se o rastreamento no gene G6PT1. O estudo molecular dessa condição abre a possibilidade do diagnóstico precoce que é importante para estabelecer um tratamento correto aos pacientes, evitando o surgimento de complicações tardias e melhorando a qualidade de vida. Além disso, contribui para o aconselhamento genético adequado do casal podendo confirmar a estimativa do isco entre os próximos filhos e, eventualmente, permitir diagnóstico pré-natal por nálise de mutação / Abstract: Glucose transformation into glycogen is mediated by specific enzymes and a deficiency in one of them may cause glycogen accumulation, resulting in hereditary disorders known as glycogen storage diseases (GSD), or glycogenosis. Glycogenosis type I (GSDI), responsible for more than 90% of cases, is caused by deficiency of the glucose-6-phosphatase (G6Pase), the key enzyme in blood glucose homeostasis. Its enzyme complex consists of two subunits (catalytic and transporter) that determine subtypes Ia and Ib. GSDla, also known as von Gierke disease, is the most common GSDI responsible for 80 to 90% of cases and corresponds to a deficiency in the catalytic subunit of G6Pase. GSDIb is the second most prevalent but also the most severe, resulting from deficiency of lucose-6- phosphate translocase that transports glucose-6-phosphate into the lumen of the endoplasmic reticulum, where the catalytic unit of G6Pase is located. In both types, enzymatic deficiency results from genetic mutations in the genes that codify these enzymes, known as G6PC and G6PT1. Biochemical essay for GSDI is useful to confirm the diagnosis and to recommend treatment, however it does not allow the determination of the disease subtype. For this differentiation, enzymatic analysis of G6Pase is necessary. Since this enzyme is not expressed in tissues such as fibroblasts or lymphocytes, activity determination is only possible by liver biopsy. In this context, the cDNA cloning of G6PC and G6PT1 allowed the screening of mutations responsible for subtypes Ia and Ib, which gives the alternative of a less invasive diagnosis based on molecular biology techniques, using blood samples. In this study, thirteen patients with clinical symptoms suggestive of GSDIa and Ib were investigated through genetic sequencing. Five changes were detected in G6PC, including three known point mutations (G68R, R83C and Q347X) and two polymorphisms (c.511G> A and c.1176T>C). Concerning the G6PT1 gene, four changes were found: a known point mutation (G149E), a novel frameshift insertion (c.1338_1339insT) and two polymorphisms (c.1287G>A and c.1076-28C>T). The frequency of mutations in this population is similar to that observed in the literature, in which R83C is also the most frequent. Additionally, this study added a description of a new mutation. As result of this study, molecular analysis of both genes should be considered in he investigation of individuals with this GSDI in order to define the subtypes involved. Molecular analysis of G6PC and G6PT1 genes enable the achievement of positive diagnosis of GSDIa and Ib, securely without the need for liver biopsy. It also allows the differentiation of types and subtypes, which is not possible by the biochemical diagnosis. Finally, the identification of the mutation provides an additional tool for the genetic counseling (and eventually prenatal diagnosis) of the parents and other family members / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Hoje a criação de avestruz ((Struthio camelus, Linnaeus 1758)) é uma atividade de grande potencial, porém não existem padrões definidos sobre a histologia do seu fígado, que é um órgão de grande importância no metabolismo, o conhecimento de sua histologia e anatomia pode contribuir para a detecção de doenças e deficiências nutricionais que influenciam no crescimento e desenvolvimento do animal. Os objetivos desta pesquisa são: Estudar a anatomia e histologia do fígado e a ramificação de sua artéria hepática, veia porta hepática e ducto biliar. Para a realização da parte macroscópica foram utilizados quinze avestruzes com idades entre 12 e 18 meses (com peso médio em torno de 80 a 100 kg), provenientes do abatedouro Don Pig, situado próximo à cidade de Botucatu no estado de São Paulo. Os animais foram abatidos com pistola pneumática e posteriormente submetidos a sangria. Foram injetadas com látex a artéria hepática, o ducto biliar e a veia porta. O fígado dos avestruzes apresentam dois lobos (direito e esquerdo). No caso o direito é maior que o esquerdo e ambos são subdivididos em dorsal, intermédio e ventral. Além disso, amostras do fígado foram processadas para a observação em microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão (MET). A hematoxilina e eosina (H.E), picrossírius, Gordon e Sweets, Sudan black e o ácido peródico de Schiff (PAS) são colorações usadas respectivamente para observar a morfologia do fígado, colágeno, fibras reticulares, gordura e glicogênio. Foram encontrados os espaços porta- hepáticos (artéria hepática, veia porta e ducto biliar e as veias centrolobulares). O glicogênio presente mostrou a média de 5,68%. O conteúdo lipídico, conferiu um aspecto goticular compatível com um quadro de esteatose hepática e a média obtida foi de 9,83%. Foi encontrado colágeno ao redor dos espaços porta-hepáticos, artérias centrolobulares e capilares sinusóides e a média foi de 14,71%. Encontrou-se também fibras reticulares ao redor dos capilares sinusóides e a média foi de 5,96%. Quanto à MET notou-se que no citoplasma dos hepatócitos desses animais existem numerosas mitocôndrias, glicogênio, muitas gotas de gordura, alguns lisossomos, retículo endoplasmático granular ao redor das mitocôndrias, algumas células estreladas, eritrócitos, núcleo, célula em degeneração e o canalículo biliar ao centro. Provavelmente o quadro sugestivo de esteatose é resultante do estado nutricional dos animais, já que nenhum outro aspecto relevante foi encontrado. Como estas aves são destinadas ao abate, sua alimentação é formulada para que os animais apresentem rápido desenvolvimento e alto ganho de peso, provavelmente com níveis de lipídios acima do necessário, causando uma deposição de micelas de gordura nos hepatócitos. Estes resultados demontraram que os hepatócitos dos avestruzes são muito simulares as outras aves apesar de também serem muito similares na estrutura das células do fígado de mamíferos. / At present the ostrich (Struthio camelus) breeding has been showing a great economical potential, although yet there are not distinct patterns about the histology of its liver, which is an organ of key importance in terms of metabolism. The knowledge of its histology and anatomy can help the detection of diseases and nutritional deficiencies that affect the growth and development of this bird. The aims of this work are to study the liver anatomical and histological structure and the branching of the hepatic artery, hepatic portal vein and bile duct. In the macroscopic study 15 ostriches with an average age of 12-18 months and average weight of 80-100 Kg, proceeding from Don Pig Abatteur, located next to Botucatu, São Paulo, were used. The birds were slaughtered with air gun and subsequently submitted to bleeding. The hepatic artery, the bile duct and the hepatic portal vein were injected with latex. The ostrich liver presents two lobules (right and left), being the right one larger than the left and both are subdivided into dorsal, intermediate and ventral. Liver samples were processed for light and electron transmission microscopic studies. Hematoxilin and eosin (HE), picrosirius, Gordon and Sweets, Sudan black and Schiff periodic acid (PAS) were respectively used to observe the liver morphology, collagen, reticular fibers, lipids and glycogen. The liver portal spaces were determined (hepatic artery, portal vein, bile duct and centrolobular veins). An average of 5.68% of glycogen was observed. The lipidic content provided a droplet aspect compatible to hepatic esteatosis, with an average of 9.83%. Collagen fibers around the liver portal spaces, centrolobular arteries and sinusoidal cappilaries were detected, at an average of 14.71%, as well as reticular fibers located in the vicinity of sinusoidal capillaries with an average of 5.96%. Through transmission electron microscopy we noticed in the hepaticyte cytoplasm the presence of numerous mithocondria, glycogen, several lipidic droplets, some lysosomes, granular endoplasmatic reticulum around the mithocondria, some stellate cells, erythrocytes, nucleus and degenerating cells, besides the central biliary canaliculus. The suggestive steatotic results might result from the animals nutritional status, once no other relevant aspect was detected. The birds are slaughtered for food comsumption and their ration is balanced striving for faster growth and higher weight gains, which are achieved through extra lipidic levels, motivating deposition of lipidic micelles in the hepatocytes. Our results demonstrated that ostrich and other birds hepatocytes are very similar.

A peritonite neutrofílica induzida por glicogênio acarreta antinocicepção em camundongos submetidos ao teste de contorção abdominal, a qual é mediada por uma proteína ligante de cálcio, com peso molecular de 14 kDa, denominada S100A9. O objetivo do presente trabalho foi aprofundar o estudo sobre o envolvimento dos neutrófilos na antinocicepção induzida pelo glicogênio em ratos submetidos ao teste de pressão de pata e avaliar a expressão da proteína S100A9 nos tempos onde foi detectado esse efeito. O glicogênio induz antinocicepção em ratos entre 2 e 12 horas após sua injeção intraplantar. O pré-tratamento dos animais com fucoidina, um inibidor de selectinas, não só reverte o efeito antinociceptivo observado como também induz hiperalgesia entre 2 e 6 horas após a injeção do glicogênio. Após 8 horas do tratamento com glicogênio, a fucoidina apenas inibiu a antinocicepção induzida pelo agente inflamatório. A análise histológica demonstrou um aumento na migração de células polimorfonucleares entre 2 e 8 horas após a administração de glicogênio, a qual foi inibida pelo pré-tratamento com fucoidina. Tanto a injeção subcutânea como intraplantar de naloxona, um inibidor inespecífico de receptores opioides, não interferiram no efeito antinociceptivo induzido pelo glicogênio, em nenhum dos tempos avaliados. Quanto à expressão da S100A9, analisada por "Western Blotting", foi observado que as amostras obtidas do coxim plantar dos animais injetados com o glicogênio, entre 2 e 12 horas, apresentaram uma banda com peso molecular aproximado de 14 kDa, o qual equivale ao peso da proteína S100A9. A quantificação das bandas marcadas com o anticorpo anti-S100A9, nos tempos entre 2 e 12 horas, demonstrou um aumento significativo da expressão dessa proteína nas amostras obtidas dos animais tratados com glicogênio, em comparação com os tratados com salina. A injeção intraperitoneal de glicogênio induziu um aumento significativo no número total de células presentes na cavidade abdominal dos animais entre a 2º e a 12º hora após o tratamento, representado pelo aumento do número de células polimorfonucleares migradas. Os sobrenadantes obtidos do exsudato peritoneal entre 2 e 12 horas após a injeção de glicogênio, administrados via intraplantar, não só reverteram a hiperalgesia induzida pela carragenina (Cg) como induziram efeito antinociceptivo. Já, o sobrenadante obtido após 24 horas da injeção de glicogênio reverteu apenas parcialmente o efeito hiperalgésico induzido pela Cg. O tratamento do sobrenadante obtido 4 horas após a injeção do glicogênio com o anticorpo anti-S100A9 aboliu totalmente o efeito antinociceptivo observado com esse sobrenadante sobre a hiperalgesia induzida pela Cg. Esses dados sugerem que a antinocicepção acarretada pelo glicogênio em ratos submetidos ao modelo de pressão de pata é dependente da migração neutrofílica, não está relacionado à liberação de peptídeos opioides, mas possivelmente à secreção da proteína S100A9 por essas células. Ainda, os resultados obtidos com os sobrenadantes do exsudato peritoneal após a injeção do glicogênio, demonstram que durante a peritonite neutrofílica é secretada uma molécula capaz tanto de inibir a hiperalgesia acarretada pela carragenina quanto induzir antinocicepção, a qual possivelmente é a proteína S100A9. / Neutrophilic peritonitis induced by glycogen causes antinociception in mice subjected to the writhing test, which is médiated by a calcium-binding protein with a molecular mass of 14 kDa, named S100A9. The purpose of this study was to deepen the study on the involvement of neutrophils in glycogen-induced antinociception in rats subjected to the paw pressure test and evaluate the expression of S100A9 protein in time periods when this effect was detected. Glycogen induces antinociception in rats between 2 and 12 hours after intraplantar injection. Pretreatment of animals with fucoidan, a selectin inhibitor, not only reversed the antinociceptive effect, but also induces hyperalgesia between 2 and 6 hours after glycogen injection. Eight hours after treatment with glycogen, fucoidan only inhibited the antinociception induced by the inflammatory agent. Histological analysis showed an increased migration of polymorphonuclear cells between 2 and 8 hours after glycogen administration, which was inhibited by pretreatment with fucoidan. Both intraplantar and subcutaneous injection of naloxone, a nonspecific inhibitor of opioid receptors, did not affect the antinociceptive effect induced by glycogen at all evaluated times. In relation to the expression of S100A9 analyzed by Western blotting, it was observed that the samples obtained from the footpad injected with glycogen, between 2 and 12 hours, had a band with a molecular weight of 14 kDa, which is similar to molecular weight of S100A9. Relative quantification of the bands marked with anti-S100A9 in the time periods between 2 and 12 hours showed a significant increase in protein expression in samples obtained from animals treated with glycogen, compared with those treated with saline. Intraperitoneal injection of glycogen induced a significant increase in the total number of cells in the abdominal cavity of animals between 2 and 12 hours after treatment, represented by increased numbers of migrated polymorphonuclear cells. The supernatants obtained from peritoneal exudate between 2 and 12 hours after injection of glycogen, administered intraplantarly, not only reversed the hyperalgesia induced by carrageenan (Cg) but also induced antinociceptive effect. Already, the supernatant obtained 24 hours after injection of glycogen only partially reversed the hyperalgesic effect induced by Cg. The treatment of the supernatant obtained 4 hours after injection of glycogen with anti-S100A9 abolished the antinociceptive effect observed with the supernatant on hyperalgesia induced by Cg. These data suggest that antinociception entailed by glycogen in rats submitted to the paw pressure is dependent on neutrophil migration. Moreover, this effect is not related to the release of opioid peptides but possibly to the S100A9 protein secretion by these cells. In addition, the results obtained with the supernatants of peritoneal exudate after glycogen injection show that during neutrophilic peritonitis a molecule able to inhibit carrageenan-induced hyperalgesia is secreted and induce antinociception entailed by glycogen, which is possibly the S100A9 protein.

Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Banca: Hugo Alberto Domitrovic / Banca: Sergio Fonseca Zaiden / Banca: Joaquim Gonçalves Machado Neto / Banca: Laura Satiko Okada / Resumo: Este trabalho teve por objetivos avaliar as respostas sistêmicas induzidas pela injeção intraperitoneal de 3,0 mg/kg de lipopolissacrídeo (LPS) de Escherichia coli e os eventuais efeitos da suplementação alimentar com cromo trivalente. Para tanto foram utilizados 300 pacus Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887) pesando em média 80 g; distribuídos em 20 aquários e cinco tratamentos, quais sejam um grupo Controle, não suplementado e que não recebeu LPS; um grupo que recebeu somente LPS e outros três, CRa, CRb e CRc que receberam LPS e dois, quatro e seis partes por milhão de cromo trivalente na ração. Material para determinação de hematócrito, concentração plasmática de cortisol e glicose, concentração de glicogênio hepático, índice hepatossomático e avaliação histológica de brânquias foram colhidos antes e um, dois, quatro, nove, 14, 19 e 24 dias após a injeção do LPS. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 5 x 8, com 4 repetições representadas pelos aquários. Os resultados demonstraram que os níveis de cortisol circulantes aumentaram em todos os grupos assim como houve incremento do estoque de glicogênio hepático. O hematócrito não apresentou diferença significativa e as brânquias apresentaram ligeiras modificações estruturais / Abstract: This work had for objectives to evaluate the response systemic induced by the injection intraperitoneal of 3,0 mg/kg of lipopolissacharideo (LPS) of Escherichia coli and the eventual effects of the alimentary supplementation with mixed trivalent chromium to the ration. Were used three hundred fish Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887), weighing 80 g on average.; distributed in 20 aquariums and five treatments, which are a group control, non supplemented and that didn't receive LPS; a group that received only LPS and other three, CRa, CRb and CRc that received LPS and two, four six parts for millions of trivalent chrome in the ration. Material for haematocrit determination, concentration cortisol plasmático and glucose, concentration of hepatic glycogen, index hepatosomático and modifications in the branchial structure were appraised by histology picked before and a, two, four, nine, 14, 19 and 24 days after the injection of LPS. The experimental design was randomized entirely, in a 5 x 8 factorial. The results demonstrated that the levels of circulating cortisol increased in all the groups as well as there was increment of the stock of hepatic glycogen. The haematocrit didn't present significant difference and the gills presented quick structural modifications / Doutor

Orientador: José Corrêa de Lacerda Neto / Banca: Thiago Luiz de Salles Gomes / Banca: Claudia Acosta Duarte / Banca: Flora Helena de Freitas D'Angelis / Banca: Antonio de Queiroz Neto / Resumo: Objetivou-se avaliar o efeito da suplementação com diferentes concentrações de óleo de soja e do treinamento de resistência nas adaptações do músculo glúteo médio de 20 eqüinos da raça Puro Sangue Árabe. Os animais foram distribuídos em cinco grupos, cada grupo foi composto por quatro cavalos. O grupo controle não recebeu óleo e os demais foram suplementados com 6, 12, 18 e 24% de óleo. Os animais foram submetidos a sete semanas consecutivas de exercício em esteira rolante e trilha. Analisou-se a influência do treinamento e da suplementação com óleo sobre o peso e escore corporal, concentração de glicogênio muscular e características das fibras do músculo glúteo médio. Os resultados demonstraram que as diferentes concentrações de óleo na dieta não influenciaram as variáveis estudadas. Houve redução significativa do peso corpóreo após o treinamento, no entanto o escore corporal permaneceu constante. O músculo glúteo médio expressou três tipos de fibras puras: I, IIA, IIX. O treinamento não induziu hipertrofia das fibras do músculo glúteo médio. O treinamento ocasionou aumento na proporção e na área relativa das fibras tipo IIA em detrimento das fibras IIX, melhorando a capacidade oxidativa muscular. Tanto as dietas com óleo como o treinamento não aumentaram as concentrações de glicogênio muscular. / Abstract: The aim of this study was evaluate the effects of supplementation with different concentrations of soy oil and endurance training on gluteus medius muscle adaptations in twenty Arabian horses. The horses were randomized in five groups (four horses each group). The control group did not receive the oil and the other groups were supplemented with 6%, 12%, 18% and 24% of soy oil. The animals were submitted to seven weeks of exercise on treadmill and track. The influence of training and oil supplementation on body weight, corporal score, muscular glycogen stores and characteristics of the gluteus medius muscular fibers were analyzed. The results showed that the supplementation of soy oil in diet was not significantly effective on the studied parameters. There was a significant reduction of the body weight after the end of training; however the corporal score showed no changes. The gluteus medius muscle expressed three types of pure fibers: I, IIA and IIX. The training induced a increase in the proportion and relative area of the type IIA fibers in detriment of type IIX fibers, improving the oxidative capacity muscular. No hypertrophy of the muscular fibers was observed. There were no significant changes in the values of the total glycogen after the training period. / Doutor

Orientador: Maria Célia Bertolini / Co-orientador: Fernanda Barbosa Cupertino / Banca: Ian Malavazi / Banca: Márcia Eliana da Silva Ferreira Balieiro / Resumo: O fungo filamentoso Neurospora crassa é um organismo modelo amplamente utilizado para estudos de diversos aspectos da biologia dos eucariotos. Nosso laboratório tem utilizado este fungo para estudar os mecanismos moleculares e bioquímicos envolvidos na regulação do metabolismo de glicogênio. A avaliação de uma coleção de linhagens mutantes individualmente nocauteadas em genes que codificam fatores de transcrição permitiu identificar várias proteínas potencialmente envolvidas na regulação do metabolismo de glicogênio do fungo N. crassa. Dentre as proteínas, o fator de transcrição FLBC foi identificado como uma possível proteína regulatória do metabolismo de glicogênio. A linhagem mutante apresentou alterações no perfil de acúmulo de glicogênio e na expressão do gene gsn em relação à linhagem selvagem, quando submetidas a estresse térmico. Estudos preliminares realizados anteriormente em nosso laboratório mostraram severas alterações morfológicas na linhagem flbCKO, como reduzida capacidade de conidiação, com a presença de poucos microconídios, formação de hifas aéreas reduzidas, morfologia das extremidades das hifas alterada, aspecto e morfologia alterados das colônias e produção acentuada do pigmento melanina, indicando que a proteína FLBC desempenha importante papel no desenvolvimento do fungo. O fator de transcrição FLBC, objeto de estudo deste trabalho, é uma proteína homóloga às proteínas FlbC e FLE1 dos fungos Aspergillus nidulans e Podospora anserina, respectivamente, ambas envolvidas nos processos de conidiação e desenvolvimento dos fungos. O objetivo deste trabalho foi realizar uma caracterização funcional detalhada deste fator de transcrição em N. crassa. Análises de expressão gênica mostraram níveis elevados do transcrito flbC durante o crescimento vegetativo do fungo e após a indução do desenvolvimento assexual. A linhagem nocaute mostrou uma desregulação... / Abstract: The filamentous fungus Neurospora crassa is a model organism widely used for studies of several aspects of the biology in eukaryotes. We have been studying the molecular and biochemical mechanisms involved in glycogen metabolism regulation in this fungus. The screening of a knocked-out strains set in genes encoding transcription factors has identified many proteins likely involved in the regulation of glycogen metabolism in the fungus N. crassa. Among the proteins, the transcription factor FLBC was identified as a regulatory protein of the glycogen metabolism. The mutant strain showed changes in the glycogen accumulated and in the gsn gene expression when compared to the wild-type strain under heat stress. Preliminary studies carried out in our laboratory showed severe morphological changes in the strain flbCKO, such as reduced ability to conidiate, presence of a few microconidia, reduced production of aerial hyphae, altered morphology of hyphae tips, changes in the colonies morphology and high production of the pigment melanin, suggesting that FLBC plays an important role in the fungus development. The transcription factor FLBC, object of study in this work, is the Aspergillus nidulans and Podospora anserina FlbC/FLE1 homologous protein, respectively, both involved in conidiation and fungal growth. The purpose of this study was to perform functional characterization of this transcription factor in N. crassa. Analysis of gene expression showed high levels of the transcript flbC during vegetative growth and after induction of asexual development. The knockout strain presented a misregulation in the accumulation of reserve carbohydrate (glycogen and trehalose) during vegetative growth accumulating higher levels of both carbohydrates as compared to the wildtype strain. Analysis of gene expression in the strains wild-type and flbCKO showed that gdn (encoding for debranching enzyme) and gpn (encoding glycogen phosphorylase) genes are... / Mestre