Extratos vegetais ricos em compostos antioxidantes têm sido amplamente utilizados em produtos cosméticos uma vez que esses compostos poderiam proteger a pele contra os danos da radiação ultravioleta (UV). Assim, o objetivo do presente trabalho foi desenvolver formulações cosméticas contendo extratos de chá verde (CV) e Ginkgo biloba (GB) a fim de avaliar a eficácia pré-clínica, na proteção contra danos causados pela radiação UV, a penetração cutânea e a segurança de tais formulações. Para tal, foram desenvolvidas 13 formulações e após os testes de estabilidade e sensorial, foi selecionada uma formulação a base de fosfato de trilaureth-4 e goma polissacarídica para a realização dos estudos propostos. A eficácia pré-clínica foi realizada por testes in vitro (atividade antioxidante) e in vivo em animais de laboratório, os quais foram submetidos à radiação UV para a avaliação dos efeitos fotoprotetores das formulações objeto de estudo. O estudo de penetração cutânea foi feito em células de difusão de Franz utilizando pele humana e o de segurança por meio da avaliação da compatibilidade cutânea (estudo clínico). Ambos os extratos, CV e GB, apresentaram atividade antioxidante in vitro, no entanto, CV apresentou maior efeito que GB. Na avaliação da eficácia in vivo, foi observado que somente as formulações acrescidas dos extratos vegetais protegeram a pele dos animais contra os danos induzidos pela radiação UV, quando comparadas ao controle irradiado. A formulação que continha GB apresentou efeitos mais pronunciados na proteção da função barreira da pele e contra o eritema, enquanto que a formulação acrescida de CV atuou de maneira mais pronunciada na proteção contra a formação de células de queimadura solar. Os resultados referentes ao estudo de penetração cutânea mostraram que a epigalocatequina-3- galato (EGCG), proveniente da formulação que continha CV, e, a quercetina proveniente da formulação acrescida de GB, penetraram na pele, mas não permearam até o líquido receptor, ou seja, ficaram retidas no estrato córneo e na epiderme viável, sendo que no caso de EGCG, pequenas concentrações também foram encontradas na derme. O estudo de segurança mostrou que as diferentes formulações objeto de estudo apresentaram uma ótima compatibilidade cutânea. Considerando que as formulações contendo os extratos vegetais de CV e de GB apresentaram efeitos fotoprotetores in vivo, penetração e retenção de seus flavonóides majoritários na pele e ótima compatibilidade cutânea, pode-se considerar que tais formulações apresentam eficácia e segurança para uso cosmético. Além disso, os resultados obtidos neste estudo contribuíram para mostrar a importância da associação dos extratos de chá verde e de Ginkgo biloba em formulações cosméticas com finalidades fotoprotetoras uma vez que estes extratos apresentam efeitos que se complementam na proteção da pele contra o conjunto de danos induzidos pela radiação UV. / Botanical extracts rich in antioxidant compounds have been widely used in cosmetic products since they could protect the skin against UV-induced damages. Thus, the objective of this study was to develop cosmetic formulations containing green tea (GT) and Ginkgo biloba (GB) extracts in order to evaluate the preclinical efficacy on the skin protection against UV-induced damages, skin penetration and safety of these formulations. For this, 13 formulations were developed and the formulation number 11, containing trilaureth-4 phosphate and a polysaccharide gum, was chosen for the next studies, after stability and sensorial analysis. The pre-clinical efficacy was done by in vitro (antioxidant activity) and in vivo tests in animal skin submitted to UV radiation in order to evaluate the photoprotective effects of the formulations. The skin penetration study was carried out by using human skin biopsies and Franz diffusion cells. The safety study was performed by a skin compatibility test (clinical study). Both extracts presented antioxidant activity, however GT showed higher antioxidant effect than GB. The in vivo efficacy evaluation showed that only the extracts supplemented formulations protected the skin against UV damages, when compared to the irradiated control. The formulation containing GB was more effective in protecting against skin barrier damages and erythema formation, while the formulation containing GT had more pronounced effects against sunburn cell formation. The results of the skin penetration study showed that epigalocatechin-3- galate (EGCG) from GT containing formulation, and quercetin from GB containing formulation penetrated the skin but they were not able to permeate further through the skin to the receptor fluid, that is, these flavonoids were retained into the stratum corneum and viable epidermis. In addition, small quantities of EGCG were found in dermis. The safety study showed that the formulations under study presented very good skin compatibility. Considering that the formulations containing GT and GB provided in vivo photoprotective effects, penetration and retention of their mainly flavonoids into the skin and good skin compatibility as well, we can consider that these formulations present efficacy and safety for cosmetic use. In addition, the results contributed to demonstrate the importance of the combination of these two extracts in cosmetic formulations with photoprotective purpose since both extracts had complementary effects on the constellation of UV-induced skin damages.

INTRODUÇÃO E OBJETIVOS: O pão tornou-se, ao longo de sua história, um dos principais alimentos em nível mundial, sendo que nos últimos tempos o enriquecimento da farinha usada no processamento de pães, torna-o um alimento funcional. O bagaço de uva Isabel, o chá verde (Camellia sinensis) e a erva mate (Ilex paraguariensis) são fontes de compostos fenólicos de considerável valor. Popularmente, têm sido estudados por oferecerem benefícios à saúde, como forma de prevenir doenças degenerativas e por trazerem benefícios às indústrias de panificação. O presente trabalho teve como objetivo a adição de extratos de bagaço de uva Isabel, chá verde (Camellia sinensis) e erva mate (Ilex paraguariensis), ricos em compostos fenólicos à farinha de trigo, avaliando o efeito na reologia da farinha, características tecnológicas e sensoriais no processamento de pães de forma.MÉTODOS: Para estudar o efeito dos compostos fenólicos extraídos do bagaço de uva Isabel, chá verde (Camellia sinensis) e erva mate (Ilex paraguariensis) sobre algumas propriedades da farinha de trigo e do pão de forma padronizou-se as concentrações dos extratos sobre a farinha de 1000, 2000, 3000 e 4000 mg EAG/kg e usou-se o método de análise físico-química, reológica e sensorial, sendo no extrato: Quantificação de compostos; Na farinha: Umidade, alveografia, farinografia, falling number e glúten; No pão: Volume específico, colorímetria e análise sensorial (sabor, aroma, textura e aceitação global). PRINCIPAIS RESULTADOS: O extrato de erva mate (Ilex paraguariensis,) apresentou a maior concentração de composto fenólicos, seguido respectivamente pelo bagaço de uva Isabel e chá verde (Camellia sinensis). Nas análises reológicas a farinha com aplicação de extrato de bagaço de uva (EBU) apresentou melhorias nas características desejadas para a panificação, evidenciadas pelo aumento da força do glúten e da absorção de água, apresentando uma farinha com maior tolerância a força mecânica (stress). O extrato de erva mate apresentou bons resultados quando aplicado na panificação, confirmados pelo aumento do volume específico, pela coloração mais próxima do controle (miolo branco) e pela preferência no atributo aceitação global do teste sensorial. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: As diferenças observadas nas propriedades reológicas, físico-químicas e sensoriais nas farinhas e nos pães formulados com extratos de bagaço de uva Isabel, chá verde (Camellia sinensis) e erva mate (Ilex paraguariensis) em diferentes dosagens, são atribuídas às interações por diversos mecanismos entre compostos fenólicos e proteínas, sendo essas formadoras da rede de glúten, influenciando diretamente na força da farinha e na capacidade de retenção do gás aumentando o volume dos pães. / INTRODUCTION AND OBJECTIVES: The bread became, throughout its history, a major food worldwide, and the enrichment of flour making the functional bread has become a practice of recent times. The grape marc Isabel, green tea (Camellia sinensis) and yerba mate (Ilex paraguariensis) are sources of phenolic compounds of considerable value. Popularly, have been studied for offering health benefits, in order to prevent degenerative diseases and for bringing benefits to bakery industries. This study aimed to the addition of Isabel grape pomace extracts, green tea (Camellia sinensis) and yerba mate (Ilex paraguariensis), rich in phenolic compounds wheat flour, to evaluate the effect on the rheology of flour, features technological and sensory. METHODS: To study the effect of phenolic compounds extracted from grape pulp Isabel, green tea (Camellia sinensis) and yerba mate (Ilex paraguariensis) on some properties of wheat flour and bread so it was standardized concentrations of the extracts in flour 1000, 2000, 3000 and 4000 mg GAE / kg and used the method of physical-chemical, rheological and sensory, and the extract: Quantification of compounds; In flour: Moisture, alveography, farinography, falling number and gluten; In the bread: Specific volume, colorimetry and sensory analysis (taste, aroma, texture and overall acceptability). MAIN RESULTS: The yerba mate extract (Ilex paraguariensis) had the highest concentration of phenolic compound, followed respectively by marc Isabel and green tea (Camellia sinensis). All rheological tests with flour grape pomace extract application (EBU) showed improvements in the characteristics desired for baking, as evidenced by the increased gluten strength and water absorption, with a flour with increased tolerance to mechanical stress (stress). The yerba mate extract showed good results when applied in baking, confirmed by the increase in specific volume, the closest color control (white pith) and preferably in the global acceptance of the sensory test attribute. DISCUSSION AND CONCLUSION: The observed differences in rheological properties, physicochemical and sensory in flours and breads made with grape pomace extracts Isabel, green tea (Camellia sinensis) and yerba mate (Ilex paraguariensis) in different dosages, are attributed to interactions by different mechanisms between phenolic compounds and proteins, and those forming the gluten network, directly influencing the strength of flour and gas retention capacity by increasing the volume of the bread.

O chá verde (CV) é um fitoterápico produzido a partir da planta Camellia sinensis e apresenta propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias, anticancerígenas e antiobesidade. Foi realizado um estudo para investigar se o CV seria capaz de modular alguns parâmetros funcionais de linfócitos de animais induzidos à obesidade por dieta hipercalórica. Os grupos suplementados receberam 500 mg/kg de CV durante 22 dias seguida da dieta hipercalórica por mais 44 dias acompanhada também do tratamento com o CV. O tratamento com o CV reduziu a proliferação celular, a atividade das enzimas metabólicas hexoquinase e glicose-6-fosfato desidrogenase, aumentou a atividade de enzimas antioxidantes, diminuiu a produção de espécies reativas de oxigênio, a produção de citocinas pró- inflamatórias (IL-6, IL-1β, TNF-α) e restaurou os índices de IL-10 que se encontrava diminuído no grupo obeso. Os efeitos observados pelo CV podem proporcionar um ambiente mais adequado para o bom funcionamento celular, diminuindo a produção de mediadores inflamatórios que estão presente na obesidade. / Green tea (GT) is a phytochemical produced from Camellia sinensis and it has anti-inflammatory, anti-cancer, anti-obesity and antioxidant properties. This study was conducted to investigate whether the GT was able to modulate some lymphocyte functional parameters of obesity - induced animals by hypercaloric diet. Supplemented groups received 500 mg/kg GT for 22 days followed by hypercaloric diet for additional 44 days, together with the GT treatment. Treatment with GT reduced the cell proliferation capacity, the activity of metabolic enzymes hexokinase and glucose-6-phosphate dehydrogenase, increased the activity of antioxidant enzymes, decreased the production of reactive oxygen species, production of proinflammatory cytokines (IL-6, IL-1β, TNF-α) and restored the levels of IL-10 which was reduced by obesity. The GT effects can provide a more suitable environment for proper lymphocyte function, also reducing production of inflammatory mediators in obesity.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-09-02T12:53:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação CCB - Kátia Albuquerque 2016.pdf: 1508022 bytes, checksum: 82278b56e00cafb789bead747a3af48d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T12:53:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação CCB - Kátia Albuquerque 2016.pdf: 1508022 bytes, checksum: 82278b56e00cafb789bead747a3af48d (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / CAPEs / Enzimas são proteínas com atividade catalítica capazes de integrar diferentes processos biotecnológicos. Dentre as enzimas com aplicação na indústria destaca-se a tanino acil hidrolase (EC 3.1.1.20) ou simplesmente tanase, uma enzima extracelular produzida na presença de ácido tânico por fungos filamentosos, bactérias e leveduras. A tanase (TAH) catalisa a hidrólise de taninos liberando ácido gálico e glicose. TAH pode ser utilizada no tratamento de efluentes, na indústria farmacêutica, de alimentos, bebidas entre outros. Na biotecnologia, o grande desafio na produção de enzimas é extrair a molécula a partir de métodos economicamente viáveis. Assim, o sistema de duas fases aquosas (SDFA) tem sido cada vez mais utilizado para purificar parcialmente diversos produtos biológicos. Neste sentido, o presente trabalho teve como finalidade extrair em SDFA, caracterizar bioquimicamente e aplicar em chá verde a enzima tanase obtida de Aspergillus sp. SIS 25 por fermentação em estado sólido, utilizando a fibra do coco como substrato. Um planejamento fatorial 23 foi utilizado para avaliar a influência das variáveis principais: massa molar (MMPEG) do PEG (1000, 3350 e 6000 g/mol), concentração (20, 22 e 24% m/m) do PEG (CPEG) e concentração (15, 17,5 e 20% m/m) de citrato de sódio (CCIT), sobre as variáveis resposta: coeficiente de partição (K), recuperação (Rec) e aumento de pureza (AP), em pH 6. A tanase foi preferencialmente particionada para a fase sal do sistema uma vez que em todos os ensaios os valores de K foram menores do que 1. As variáveis MMPEG e a interação entre MMPEG-CPEG apresentaram os resultados mais significativos para o valor de K, sendo ambos os efeitos negativos. Com relação ao aumento de pureza, o melhor resultado (3,2) foi observado no ensaio 8 com 24% de PEG 6000 e 20% de sal. A tanase extraída do sistema apresentou temperatura ótima a 30° C e pH ótimo 5,0. A perda da estabilidade foi observada a 50 °C. A TAH desse estudo foi estimulada na presença de Na+ e completamente inibida na presença de Zn2+. Os surfactantes não interferiram significativamente em sua atividade, com exceção do Triton X-100 a 2% que diminuiu a atividade relativa em aproximadamente 50%. No processo de hidrólise dos compostos fenólicos do chá verde, a tanase pré-purificada em SDFA apresentou melhor resultado se comparada ao extrato bruto; 0,75 mL da enzima do sistema reduziu 44% dos fenóis do chá. Os resultados demonstram que o modelo estatístico montado para o SDFA além de permitir a extração de uma tanase parcialmente pura tornou conhecido outros modelos que favorecem a otimização das variáveis estudadas, principalmente o aumento de pureza. Com isso, é possível afirmar que a tanase de Aspergillus sp. SIS 25 pode ser extraída através de um método de baixo custo, que emprega material reutilizável, biodegradável e que o processo conservou as características biquímicas dessa enzima devido à abundância de água que ocorre no sistema e pela utilização de componentes inertes à maioria das bimoléculas. A criação desse ambiente favorável para separar moléculas biológicas pode explicar o fato da tanase não ter perdido sua atividade durante o estudo, mantendo sua ação catalítica principalmente durante a aplicação em chá verde. / Enzymes are proteins with catalytic activity capable of integrating different biotechnological processes. One of the enzymes with application in industry stands out the tannin acyl hydrolase (EC 3.1.1.20) or simply tannase, an extracellular enzyme produced in the presence of tannic acid by filamentous fungi, bacteria and yeast. The tannase (TAH) catalyzes the hydrolysis of tannins releasing gallic acid and glucose. TAH can be used for effluent treatment, pharmaceutical industry, food, beveragesand others. In biotechnology, the big challenge in the production of enzymes is to extract the molecule from economically viable methods. Thus, the aqueous two-phase system (ATPS) has been increasingly used to partiallypurify biological products. In this sense, the present work had as purpose to extract in ATPS, characterize biochemically and apply in green tea the tannase enzyme obtained from Aspergillus sp. SIS 25 by solid state fermentation using coconut fiber like substrate. A factorial design 23 was used to evaluate the influence of major variables: PEG molar mass (1000, 3350 and 6000 g/mol), PEG concentration (CPEG) and sodium citrate concentration (CCIT), on the response variables: partition coefficient (K), recovery (Rec) and purity increase (AP), at pH 6. The tanase was preferentially partitioned to stage the salt system once in all tests the values of K were lower than 1. The variables MMPEG and the interaction between MMPEG-CPEG presented the results more meaningful for the value of K, being both negative effects. With regard to the increase in purity, the best result (3.2) was observed in 8 test with 24% of PEG 6000 and 20% salt. The tannase extracted from system showed optimum temperature at 30 ° C and optimum pH 5.0. The loss of stability was observed at 50° c. TAH this study was stimulated in the presence of Na+ and completely inhibited in the presence of Zn2+. Surfactants not significantly interfere in their activity, with the exception of Triton X-100 2% that decreased the relative activity by approximately 50%. In the process of hydrolysis of phenolic compounds from green tea, tannase pre-purified in ATPS showed better results when compared to the crude extract; 0.75 ml of the enzyme from system has reduced 44% of tea phenols. The results show that the statistical model fitted to the ATPS and allow the extraction of a pure and partially known other models that favor the optimization of the studied variables, especially the increase in purity. With this, it is possible to affirm that the tanase of Aspergillus sp. SIS 25 can be extracted through a low-cost method, employing reusable, biodegradable material and the process preserved the biquímicas features of this enzyme because of the abundance of water that occurs in the system and by the use of inert components to most bimoléculas. The creation of this favourable environment to separate biological molecules can explain the fact of tannase didn't lose its activity during the study, keeping their catalytic action primarily during application in green tea.

Kronisk parodontit orsakar vävnadsdestruktion till följd av matrixmetalloproteinasaktivitet. Dessa enzym härrör från värdcellerna och är en del av det immunologiska svaret på bakteriella virulensfaktorer. Grönt te har studerats för sina hälsofrämjande egenskaper, som omfattar bland annat anti-inflammatoriska effekter. Effekten beror delvis på enzyminhibering av tepolyfenoler. Syftet med denna studie var att ytterligare undersöka den inhiberande effekten av grönt te, med fokus på enzymatisk aktivitet i gingivalvätska från patienter med parodontal sjukdom. Patienter med kronisk parodontit valdes ut för att delta i studien. Gingivalvätska extraherades med mikropipetter från patienternas gingivala sulci. Proverna behandlades med grönt te och jämfördes med obehandlade prover från samma försöksperson. Fluorescens proteasanalys med kasein som substrat utfördes på fjorton prover för att detektera skillnader i kaseinolytisk aktivitet. Zymogramanalys med användning av gelatin som substrat utfördes på fyra prover, för att undersöka skillnader i gelatinolytisk aktivitet och analysera molekylvikter för de olika enzymerna. Den fluorometriska analysen visade en signifikant lägre enzymaktivitet i prover med tillsatt grönt te jämfört med obehandlade prover (p<0.001). Zymogramanalysen visade en skillnad i enzymaktivitet som var mest uttalad i banden för molekylär vikt runt 255 kDa, analogt med komplex av matrixmetalloproteinas-9. Sammanfattningsvis har det i denna studie påvisats att grönt te har en hämmande effekt på kaseinolytisk aktivitet och en mindre, mer specifik, hämmande effekt på gelatinasaktivitet. / Chronic periodontitis involves tissue destruction by matrix metalloproteinase, derived from the host cells, as part of the immunological response to bacterial virulence factors. Green tea has been studied for its health promoting properties, which includes anti-inflammatory effects. The effect is in part due to enzyme inhibition by tea polyphenols. The aim of this study was to further investigate the inhibitory effect of green tea, focusing on enzymatic activity in gingival crevicular fluid from patients with periodontal disease. Patients with chronic periodontitis were selected for participation in the study. Gingival crevicular fluid was extracted with micropipettes from the gingival sulci of the patients. Samples were treated with green tea and compared with untreated samples from the same subject. Fluorescence protease assay with casein as substrate was made using fourteen samples for detecting differences in caseinolytic activity. Zymogram assay using gelatin as substrate was done using four samples to test gelatinolytic activity and analyse molecular weights of the different enzymes. The fluorometric assay showed a significantly lower enzyme activity in samples mixed with green tea than untreated samples (p<0.001). The zymogram assay showed a difference in band strength which was most pronounced in the bands of molecular weight around 255 kDA, analogous to complexes of matrix metalloproteinase-9. In conclusion, green tea has been shown in this study to have a strong inhibitory effect on caseinolytic activity and a lesser, more specific, inhibitory effect on gelatinase activity.

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.

O chá verde, obtido da Camellia sinensis, é uma das bebidas mais populares em todo o mundo e, recentemente, tem sido foco de pesquisas científicas por apresentar efeitos benéficos na saúde geral. Estudos laboratoriais e epidemiológicos sugerem que, dentre os polifenóis que compõem o chá verde, a Epigalocatequina-3-galato (EGCG) é o mais bioativo e responsável por sua ação antioxidante, anti-inflamatória, antimicrobiana, inativadora de LPS bacteriano, anticarcinogênica, antitumoral, anti-angiogênica, anti-hipertensiva e reparadora tecidual, podendo atuar na prevenção e tratamento do câncer, doenças cardiovasculares, neurodegenerativas, hepáticas e renais. Em diversas doenças ósseas, a EGCG também desempenha um importante papel protetor, atuando na indução da mineralização e inibição da osteoclastogênese. No entanto, seus possíveis efeitos na inflamação e na reabsorção óssea associadas à lesão periapical ainda não foram avaliados. Portanto, o objetivo do presente estudo foi desenvolver uma formulação para uso endodôntico à base de EGCG com propriedades físico-químicas e biológicas que permitam seu uso como curativo de demora entre sessões. As formulações testadas incluíram: EGCG diluída em água e diferentes concentrações de EGCG (1,25; 5; 10 e 20 mg/mL) veiculadas em polietilenoglicol 400 (PEG). O óxido de zinco foi utilizado como agente radiopacificador. Em função da possível degradação dos produtos fenólicos em função do ambiente e do tempo, uma solução obtida por meio do contato prolongado da EGCG com o dente também foi avaliada (produto da degradação). Inicialmente, foi realizada a caracterização físico-química da formulação de EGCG por meio de espectrofotometria em Ultravioleta/Visível (UV/Vis), em contato com soluções contendo zinco, óxido de zinco e acetato de zinco. Os estudos biológicos foram realizados para avaliar sua compatibilidade tecidual no tecido subcutâneo de camundongos, por meio da avaliação do extravasamento plasmático após 24 horas e da análise de aspectos macroscópicos e microscópicos aos 7, 21 e 63 dias após a inserção de tubos de polietileno contendo as formulações. Neste estudo, uma pasta a base de hidróxido de cálcio (Calen®) foi utilizada como controle. Na análise macroscópica, realizada por meio de fotografias, foram atribuídos escores aos parâmetros de ulceração epitelial, vascularização, necrose e edema. Na análise microscópica, realizada em microscopia de luz convencional e de fluorescência, foram avaliados os parâmetros de infiltrado inflamatório, vascularização, focos de abscessos, cápsula fibrosa, edema e necrose. Os escores dos resultados biológicos foram submetidos à análise estatística utilizando o teste do Qui-quadrado ou Exato de Fisher e para análise dos resultados quantitativos do extravasamento plasmático foi utilizada análise de variância (ANOVA), seguida pelo pós-teste de Tukey. O nível de significância adotado foi de 5%. Os estudos físico-químicos mostraram que a EGCG manteve seu comprimento de onda original em 274 nm quando associada ao óxido de zinco, tendendo à formação de uma banda de absorção em 325 nm. A associação da EGCG com acetato de zinco ocasionou diminuição da banda de absorção em 274 nm e formação de uma nova banda em 323 nm. Os estudos biológicos mostraram, nos parâmetros macroscópicos que, em todos os períodos avaliados, todas as formulações apresentaram compatibilidade tecidual, com ausência de ulceração epitelial, presença de leve necrose tecidual superficial, edema e vascularização, não havendo diferença significante entre os grupos avaliados (p>0,05). Na análise microscópica, em todos os períodos foi verificada ausência de focos de abscesso, edema e necrose e presença de suave ou moderado infiltrado inflamatório, cápsula fibrosa e neovascularização, semelhante entre todos os grupos (p>0,05). A avaliação dos espécimes corados com HE em microscopia de fluorescência favoreceu a visualização dos vasos sanguíneos e de fibras colágenas, constituindo metodologia adicional para esta finalidade. Na avaliação do extravasamento plasmático, o produto da degradação da ECGG apresentou extravasamento de corante azul de Evans por grama de tecido inferior (0,0514 ±0,0220 mg/mL) às demais formulações testadas (p<0,05). Conclui-se que a formulação tópica à base de EGCG, desenvolvida para uso endodôntico, apresenta propriedades físico-químicas estáveis e compatibilidade tecidual. / The green tea, obtained from the Camellia sinensis, is one of the most popular drinks in the world and has recently been in the focus of scientific research due its beneficial effects on general health. Laboratory and epidemiological studies suggest that, among the polyphenols found on green tea, the epigallocatechin-3-gallate (EGCG) is the most bioactive and responsible for its antioxidant, anti-inflammatory, anti-microbial, bacterial LPS inactivation, anticarcinogenic, anti-tumoral, anti-angiogenic, anti-hypertensive and tissue repair and can act in the prevention and treatment of cancer, cardiovascular disease, neurodegenerative, liver and kidney diseases. In several bone diseases, EGCG also plays a major protective role, acting in inhibition of osteoclastogenesis and induction of mineralization. However, their possible effects on inflammation and bone resorption associated to apical periodontitis have not been evaluated. Therefore, the aim of this study was to develop a EGCG based formulation for endodontic use with physicochemical and biological properties that allow its use as intracanal dressing between sessions. The formulations tested included: EGCG diluted in water and different concentrations of EGCG (1.25, 5, 10 and 20 mg/ml) diluted in polyethylene glycol 400 (PEG). Zinc oxide was used as radiopacifier agent. Due to the possible degradation of phenolic compounds as a function of the environment and time, a solution obtained through prolonged contact with the tooth EGCG was also evaluated (degradation product). Initially, physicochemical characterization of EGCG formulation was performed by ultraviolet spectrophotometry/Visible (UV/Vis) in contact with solutions containing zinc, zinc oxide and zinc acetate. Biological studies were conducted to evaluate its tissue compatibility with subcutaneous tissue of mice by means of the evaluation of plasma leakage after 24 hours and the examination of macroscopic and microscopic features at 7, 21 and 63 days after insertion of polyethylene tubes containing the formulations. In this study, a calcium hydroxide pastebase (Calen®) was used as control. The macroscopic analysis performed by means of photographs, assigned scores to epithelial ulceration, vascularization, necrosis and edema parameters. Microscopic examination performed in conventional and fluorescence microscopy assessed the inflammatory infiltrate, vascularization, abscesses spots, fibrous capsule, edema and necrosis parameters. The scores of biological results were statistically analyzed by the chisquare test or Fisher\'s exact and for the quantitative analysis of the results of plasma extravasation the analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey\'s post-test were used. The significance level was 5%. The physico-chemical studies showed that EGCG maintained its original wavelength at 274 nm when added to zinc oxide, tending to the formation of an absorption band at 325 nm. The combination of EGCG with zinc acetate led to decreased absorption band at 274 nm and formation of a new band at 323 nm. Biological studies showed, in the macroscopic parameters in all periods, that all formulations showed tissue compatibility, with no epithelial ulceration, presence of mild superficial tissue necrosis, edema and vascularization, with no significant difference between the groups (p > 0.05). On microscopic examination, in all periods was verified absence of abscess foci, edema and necrosis and the presence of mild or moderate inflammatory infiltrate, fibrous capsule and neovascularization, similar among all groups (p> 0.05). The evaluation of the specimens stained with HE under fluorescence microscopy enhancve the visualization of the blood vessels and collagen fibers, constituting an additional methodology for this purpose. In the evaluation of plasma extravasation, the product of degradation of ECGG presented values of Evans blue dye extravasation by gram of tissue (0.0514 ± 0.0220 mg / mL) lower to the other tested formulations (p <0.05). It is concluded that the topical formulation based on EGCG developed for endodontic use, presented stable physical and chemical properties and tissue compatibility.

A biomembrana, que é uma membrana de celulose bacteriana (C6H10O5)n formada na superfície do meio de cultivo durante a fermentação acética, foi obtida através do cultivo associado de Gluconacetobacter xylinus (formalmente Acetobacter xylinum) e Saccharomyces cerevisiae em meio de folhas de chá verde, resíduos de frutas (abacaxi, mamão, laranja), resíduos de vegetais (beterraba), vinho e colágeno em condições estáticas a 28 ± 2°C de 7 a 30 dias de cultivo. Foi incorporado à biomembrana, extrato hidroalcoólico de Calendula officinalis, devido as suas propriedades anti-inflamatórias, antioxidantes e cicatrizantes. A espessura, o diâmetro e o peso da biomembrana foram mensurados e foram calculados a produtividade, bem como o fator de conversão de açúcar em celulose. A caracterização da biomembrana foi realizada por Differential Scanning Calorimetric, espectroscopia infravermelho, Brunauer-Emmett-Teller, resistência à tração e alongamento, microscopia eletrônica (Escola Politécnica - USP) e difração de raio-X. Através destas análises verificou-se que a biomembrana obtida nos diferentes meios de cultivo é composta por celulose, o tamanho médio dos poros variou de 517,9 a 1582,0 nm, a resistência à tração variou de 0,76 a 4,32 kN/m e o índice de cristalinidade entre 75% e 91%, a espessura da biomembranas variou de 0,16 a 6,38 mm. Foram realizados 576 experimentos, a maior produtividade (8,23 g de celulose/dia) foi atingida no meio de mamão com suco de laranja (suco de mamão: 50% v/v e suco de laranja: 19% v/v) em 7 dias de cultivo. O maior fator de conversão (2,36 g celulose/g de açúcar) foi obtido no meio de chá verde em 25 dias de cultivo. A adição de 1,5% p/v de colágeno ao meio de chá verde dobrou a massa da biomembrana. A incorporação do extrato de calêndula aumentou a flexibilidade, a cristalinidade e as propriedades mecânicas da biomembrana de chá verde. / The biomembrane, cellulose membrane (C6H10O5)n formed in medium surface, was obtained from an associate culture Gluconacetobacter xylinus (formally Acetobacter xylinum) and Saccharomyces cerevisiae in green tea leaves, fruit residues (pineapple, papaya, orange), vegetables residues (beet), wine and collagen media in static condition , at 28 ± 2 ºC in 7 - 30 days cultivation. The Calendula officinalis hydroalcoholic extract was incorporated in the Biomembrane, due to its anti-inflammatory, anti-oxidants and cicatrizing proprieties. The biomembrane thickness, diameter and weight were measured. The productivity and conversion factor from cellulose to sugar were calculated. The biomembrane caracterization was performed by Differential Scanning Calorimetric, infrared spectroscopy, Brunauer-Emmett-Teller, resistance to tension, elongation, eletrocnic microscopy and raio-X difraction. In these analyses were verified that biomembrane obtained in different media were composed by cellulose, average porous size varied from 517.9 to 1582.0 nm, the resistance to tension varied from 0.76 to 4.32 kN/m and cristalinity index varied from 75% to 91%. The biomembrane thickness varied from 0,16 to 6,38 mm. It was performed 596 tests, the highest bacterial cellulose yield (8.23 ± 0.58 g cellulose/day) was obtained in papaya with orange (papaya juice: 50% v/v and orange juice: 19% v/v) in 7 cultivation days. The highest conversion factor (2,36 g cellulose/g sugar) was obtained in green tea medium in 25 days. The addition of 1.5% w/v collagen to the green tea media increased 2 times the biomembrane weight. The biomembrane absorption capacity for water and Marigold hydroalcoholic extract (1:1), were from 1.73 to 22 and, from 1.75 to 24 times dry weight, respectively. The Marigold extract improved the green tea biomembrane flexibility, cristalinity, and physical proprieties.

Eine Gemeinsamkeit verschiedener neurodegenerativer Erkrankungen ist die abnormale Ansammlung von Proteinen im Gehirn, wie z. B. von alpha-Synuclein (Syn)-Aggregaten bei der Parkinson''schen Krankheit (PD) oder von Huntingtin (Htt)-Aggregaten bei Chorea Huntington (HD). Am Anfang dieser Studie wurde eine Bibliothek von ca. 5000 natürlichen Substanzen nach Inhibitoren der Htt-Aggregation durchsucht. Eine der wirksamen Substanzen war (-)-Epigallocatechingallat (EGCG), eine Verbindung, die in grünem und schwarzem Tee vorkommt. Die antioxidativen Eigenschaften von EGCG wurden bereits mit einer neuroprotektiven Wirkung in Verbindung gebracht, was EGCG zu einem vielversprechenden Kandidaten für die Entwicklung einer neuen Behandlungsmethode macht. Eine inhibierende Wirkung auf Proteinaggregation wurde jedoch bis jetzt noch nicht nachgewiesen. Diese Studie zeigt, dass EGCG die Aggregation von Htt und Syn hemmt, indem es dosisabhängig eine oligomere Proteinkonformation stabilisiert. Diese Oligomere wirken jedoch nicht als Keime in Aggregationsreaktionen. Zusätzlich verändert EGCG die Exposition bestimmter Epitope, die von konformationsspezifischen Antikörpern im Laufe der Aggregation erkannt werden. Daher könnte die Substanz Proteine, die zur Aggregation neigen, auf einen alternativen Faltungspfad in der Missfaltungskaskade führen. Weiterhin legen die Ergebnisse nahe, dass eine direkte Wechselwirkung zwischen EGCG und Proteinen in einer ungefalteten Konformation stattfindet. In verschiedenen Zellkultur-Modellsystemen verringerte EGCG die Toxizität, die von missgefalteten Proteinen ausgeht, was nahelegt, dass die neu geformten oligomeren Spezies nicht toxisch sind. EGCG könnte daher ein chemisches Chaperon darstellen, das die Missfaltung und Toxizität von Proteinen, die mit neurodegenerativen Krankheiten assoziiert sind, verringert. Die Substanz könnte daher die Basis zur Entwicklung einer neuen Therapie für diese unheilbaren Krankheiten darstellen. / A common feature of neurodegenerative disorders is the abnormal accumulation of aggregated protein the brain, such as alpha-Synuclein (Syn) aggregates in Parkinson''s disease (PD) and Huntingtin (Htt) aggregates in Huntington''s disease (HD). In this study, a library of approximately 5000 natural compounds was screened for inhibitors of Htt aggregation. One of the hits was (-)- Epigallocatechin gallate (EGCG), a compound present in green and black tea. The antioxidant properties of this substance have been linked to neuroprotection before, making it a promising candidate for the development of a treatment for neurodegenerative diseases. Inhibition of protein aggregation by EGCG, however, has not been demonstrated so far. This study shows that EGCG inhibits the aggregation of Htt and Syn by stabilizing an oligomeric conformation of the respective proteins in a dose-dependent manner. These oligomers do not seed the aggregation of Htt and Syn. Also, EGCG modifies the exposure of different epitopes recognized by conformation-specific antibodies during the aggregation process. The compound might therefore lead aggregation-prone proteins on an alternative folding pathway in the misfolding cascade. The results furthermore suggest that direct interaction occurs between EGCG and proteins in an unfolded conformation. EGCG also reduces toxicity caused by misfolded Htt or Syn in cell culture model systems, suggesting that the oligomeric protein species formed in the presence of EGCG are not toxic to living cells. EGCG might therefore represent a chemical chaperone that can modulate misfolding and toxicity of proteins associated with neurodegenerative diseases and could provide the basis for the development of a novel pharmacotherapy for these fatal disorders.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2017-06-05T14:03:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) JEFFERSON ROSA DE MENEZES.pdf: 2848766 bytes, checksum: e87a7c0a040b93eb5052a1ea902c099e (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2017-06-05T14:03:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) JEFFERSON ROSA DE MENEZES.pdf: 2848766 bytes, checksum: e87a7c0a040b93eb5052a1ea902c099e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T14:03:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) JEFFERSON ROSA DE MENEZES.pdf: 2848766 bytes, checksum: e87a7c0a040b93eb5052a1ea902c099e (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / A deprivação maternal é um potente estressor na fase inicial da vida de mamíferos, ocasionando diversos déficits cognitivos que se mantêm na vida adulta. Dentre os mecanismos envolvidos nestes déficits estão o desiquilíbrio oxidativo e as alterações em determinadas proteínas, como o fator neurotrófico derivado do cérebro (do inglês Brain-Derived Neurotrophic Factor, BDNF). Estes eventos podem ocorrer em diferentes regiões do no cérebro, entre elas o hipocampo, principal região responsável pela formação e consolidação das memórias. Esta dissertação investigou os efeitos de diferentes estratégias neuroprotetoras (exercício físico, suplementação com chá verde, e, enriquecimento ambiental) nos déficits de memória advindos da deprivação maternal. Para avaliar a função mnemônica, foi utilizado um modelo animal de DM (em ratos Wistar) e os testes de reconhecimento de objetos, esquiva inibitória e labirinto aquático de Morris. Para avaliar o balanço redox hipocampal quantificamos espécies reativas de oxigênio (EROs), espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), níveis de glutationa (GSH) e capacidade antioxidante total (FRAP), além disso, determinamos a atividade da enzima acetilcolinesterase e a quantificamos os níveis de BDNF. Nossos resultados demonstram que o exercício físico e o chá verde são estratégias antioxidantes eficazes de neuroproteção em um modelo de DM. Também demonstram que o enriquecimento ambiental é capaz de reverter os efeitos deletérios oriundos da DM por meio do incremento dos níveis de BDNF. Estes resultados revelam a possibilidade da utilização dessas intervenções como estratégia de neuroproteção. / Maternal deprivation is a potent stressor in the early life of mammalian, leading to several cognitive deficits that remain until adulthood. Among the mechanisms involved in these deficits are the oxidative imbalance and the alterations in some proteins, such as Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF), events that can occur in different brain regions, as the hippocampus, the main region responsible for the memory formation and consolidation. This master thesis investigated the effects of different neuroprotective strategies (physical exercise, green tea supplementation, and environmental enrichment) on memory deficits related to maternal deprivation (MD). To evaluate the mnemonic function was used an animal model of MD (using Wistar rats) and the object recognition, inhibitory avoidance and Morris water maze memory tests. To evaluate hippocampal redox balance we quantified the reactive oxygen species (ROS), the thiobarbituric acid reactive species (TBARS), the glutathione levels (GSH) and the total antioxidant capacity (FRAP), as well as determine the acetylcholinesterase activity and the BDNF levels. Our results show that physical exercise and green tea are effective neuroprotective antioxidant strategies in a MD model. They also demonstrate that environmental enrichment is capable to reverse the deleterious effects of MD by increasing BDNF levels. These results reveal the possibility of using these interventions as a neuroprotection strategy.