Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:50Z : No. of bitstreams: 1 000847714_20170226.pdf: 398877 bytes, checksum: 1c5a7cb0d627e81c66d8680f36c5dc89 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-03T11:01:28Z: 000847714_20170226.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-03T11:02:38Z : No. of bitstreams: 1 000847714.pdf: 13242420 bytes, checksum: 9bd279660ca7b927284ab05d7d343cb8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O hormônio concentrador de melanina (MCH) do rato é um nonadecapeptídeo presente em neurônios localizados, principalmente, na área hipotalâmica lateral (LHA) que se projetam para diversas regiões do neuro-eixo. O MCH está envolvido em diversas funções, tais como: reprodução, certos aspectos do comportamento motivado, atividade locomotora, percepção sensorial, controle de temperatura, memória, aprendizagem, ansiedade, ciclo sono-vigília e comportamento alimentar. Nesse, o MCH atua como neuropeptídeo orexígeno. Durante o envelhecimento, ocorre a diminuição no consumo de energia associada à idade. Nesse trabalho, analisamos em diferentes faixas etárias, as variações da expressão do MCH na área hipotalâmica lateral, empregando métodos esterológicos (para estimar o número de neurônios MCH-ir, área, volume e densidade neuronal), reconstrução tridimensional (para estudo da distribuição dos neurônios MCH-ir) e densitometria óptica de tecido hibridizado para reconhecimento do RNAm do ppMCH (para mensuração da área hibridizada, densidade óptica média e densidade óptica integrada [DOI]) na LHA e em suas regiões. Foram utilizados 35 ratos Sprague-Dawley machos, divididos em 7 grupos experimentais de diferentes idades: 14 (lactente), 28 (pré-púbere), 50 (púbere), 90 (adulto jovem), 210 (adulto maduro), 540 (adulto senescente) e 750 (adulto senil) dias pós-natais. Os animais foram submetidos à perfusão transcardíaca, seus encéfalos coletados e processados para análise da expressão do MCH na área hipotalâmica lateral, segundo protocolos de imuno-histoquímica e hibridização in situ. A LHA apresentou um aumento significativo no número de neurônios apenas entre os grupos de 14 e 28 dias e sua área e volume foram significativamente menores apenas no grupo de 14 dias em relação a todos os grupos, com exceção do grupo de 750 dias. No entanto, com relação a densidade neuronal não foram observadas... / The Melanin-Concentrating Hormone (MCH) is a nonadecapeptide located mainly in neurons in the lateral hypothalamic area (LHA), which innervate several regions of neuraxis. MCH is involved in many functions as reproduction, aspects of motived behaviors, motor activity, sensorial information, temperature control, memory, learning, anxiety, sleep-wake cycle and feeding behavior in which the MCH plays an orexigenic role. The energy consumption in aging is reduced as well as, the expression of MCH presents alterations associated with age. Therefore, we analyzed the variations in the expression of MCH at different ages in the lateral hypothalamic area, using stereology (to estimate the number of MCH-ir neurons, area, volume and neuronal density), 3D reconstruction (to study the distribution of MCH-ir neurons) and optical density after in situ hybridization protocol for ppMCH RNAm (to measure the hibridizated area, the mean optical density and the integrated optical density [IOD]) in the LHA and its three regions. In this study, 35 animals were divided in 7 experimental groups of 14 (neonate), 28 (prepubescent), 50 (pubescent), 90 (young adult), 210 (middle aged adult), 540 (senescent adult) and 750 (elderly adult) postnatal days. All the animals were perfused via the ascending aorta, the brains were collected and processed by immunohistochemistry and in situ hybridization protocols to analyze the expression of MCH in the lateral hypothalamic area. LHA neurons number increased only between groups of 14 and 28 days, and its area and volume significantly smaller in 14-days group when in respect to all other groups but the 750-days one. However, there weren't differences in neuronal density among groups. MCH-ir neurons distribution in LHA and contiguous regions was similar among all groups as well. Hypothalamic MCH-ir neurons has shown uniform rates in and out of LHA, but after analyzing its distribution in mamillary, tuberal and anterior ... / FAPESP: 2013/08618-3

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-29Bitstream added on 2014-06-13T20:33:23Z : No. of bitstreams: 1 silva_ds_me_araca.pdf: 824748 bytes, checksum: a5191c74f89f8870aa31a3483beae50a (MD5) / O tumor venéreo transmissível canino (TVTC) é uma neoplasia transmitida entre cães saudáveis pelo contato direto de pele e/ou mucosas lesionadas. Face aos escassos estudos relacionados aos eventos celulares envolvidos nas fases de crescimento do TVTC, o presente estudo teve por objetivo identificar a presença do gene TP53 e o RNAm referente a proteína codificada, além de detectar a expressão das proteínas p53, Bcl-2 e p63 em cortes histológicos de 13 amostras de TVTC. Com relação à evolução da neoplasia, 46% das amostras foram consideradas em fase de progressão e 54% no estágio de regressão. Foram utilizadas as técnicas de hibridização in situ (ISH) e RT-PCR in situ, que demonstrou a presença do DNA homólogo ao TP53 e seu respectivo RNAm em 92,30% das amostras. A expressão das proteínas p53, p63 e Bcl-2 foram detectadas em 50%, 70% e 100% das amostras, respectivamente. A p63 foi expressa de forma evidente nas amostras em regressão, porém a p53 e a Bcl-2 não apresentaram relação com o estágio evolutivo do tumor e provavelmente não podem ser analisados como fatores de prognóstico do TVTC. Observou-se, nesse estudo que, através das técnicas de ISH e RT-PCR in situ foi possível detectar o DNA do TP53 e seus transcritos, porém esse fato não significou a transcrição da p53, devido aos baixos níveis de expressão nas análises quantitativa e qualitativa nas amostras de TVTC / The canine transmissible venereal tumor (CTVT) is transmitted by direct contact of skin or mucosal presenting lesions. In fact, few reports have been found describing the cellular immune response related to the evolution of the tumor. The objective of this study was to identify the TP53 gen and its transcription in CTVT in different stages of evolution, collected from dogs (N=13) examined at veterinary school, UNESP, Aracatuba, SP, Brasil. In addition, it was also evaluated the expression of p53, p63 and Bcl-2 in histological sections by the use of immunohistochemystry assay. The p53, p63 and Bcl-2 were evident in 50, 70 and 100% of analyzed samples. Regarding to tumor evolution, 6 out of 13 were considered in a progressive stage (46%), was list 7 out of 13 were classified in a regressive stage (54%). The use of in situ hybridization and reverse transcriptase polymerase chain reaction in situ (RT-PCR), revealed that TP53 was present in all samples and P63 was more expressed than p53. Take all results together, the real role of those marker are extremely important to understand the biological behavior and to improve therapeutic procedures for CTVT

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-23Bitstream added on 2014-06-13T19:01:39Z : No. of bitstreams: 1 kuwana_as_dr_sjc.pdf: 2949815 bytes, checksum: 9e2579e94e33824b702cad531113e505 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desta pesquisa foi avaliar em MEV a influência da irradiação com laser Nd:YAG na qualidade da hibridização da dentina bovina, empregando-se sistema adesivo convencional Adper Single Bond – 3M ESPE (SB) ou autocondicionante Clearfil SE Bond – Kuraray (CSEB). Para tanto, foram utilizados 12 incisivos bovinos, extraídos e congelados. Os dentes foram seccionados em duas hemicoroas e incluídos em resina acrílica. Em seguida, a superfície vestibular foi desgastada até a obtenção da dentina de profundidade média. Cada hemi-coroa do mesmo dente, foi submetida em sua porção incisal ao SB e em sua porção cervical ao CSEB, sendo divididas em 3 grupos, de 6 hemi-coroas cada: Controle - após a aplicação dos sistemas adesivos foi realizada a fotopolimerização ; G1 – após a aplicação dos sistemas adesivos a amostra foi irradiada com laser Nd:YAG com 60mJ de energia/pulso previamente à fotopolimerização e G2 – após a aplicação dos sistemas adesivos a amostra foi irradiada com laser Nd:YAG com 140mJ de energia/pulso previamente à fotopolimerização. Todas as amostras receberam a aplicação de dois incrementos de resina composta Filtek Z350 – 3M ESPE e fotopolimerização de acordo com as orientações do fabricante. Após 24h de armazenagem em água destilada a 37ºC, os perfis de adesão foram polidos, submetidos a um desafio ácido-base, e processados para análise em MEV da espessura da camada híbrida, presença de falhas e de tags e microtags. Foram obtidas quatro medidas e a média para cada amostra. Os resultados foram submetidos aos testes estatísticos de Análise de Variância (ANOVA) e de Tukey (p<0,05), segundo os quais, independente do sistema adesivo o G2 apresentou a maior média de espessura da camada híbrida (1,89±0,15) e o Controle com o Clearfil SE Bond apresentou a menor média de espessura de camada híbrida, diferindo... / The aim of this study was to assess through analyses in scanning electronic microscopy (SEM), the Nd:YAG laser influence on the hybridization quality of bovine dentine, using conventional adhesive system Adper Single Bond - 3M ESPE (SB) or self-etching adhesive system - Clearfil SE Bond - Kuraray (CSEB). Twelve extracted and frozen bovine incisors were used. The teeth were sectioned and divided in half mesio-distal section built-in acrylic resin. The buccal dentinal surface was worn out until the dentin medium depth was reached. Each specimen of the same tooth was treated on its incisal portion with SB and with CSEB in its cervical portion. The samples were divided into 3 groups with 6 specimens in each: Control group - after the application of the adhesive systems the polymerization was done; G1 - after the application of the adhesive systems the samples were lased with 60mJ /pulse and polymerized and G2 - after the application of the adhesive systems the samples were lased with with 140mJ /pulse and also polymerized. All the samples received the composite resin (Filtek Z350 - 3M ESPE) increments. After 24h storage in distilled water at 37ºC, the adhesion profiles were polished, submitted to the acid-base challenge, and the presence of imperfections and tags or microtags in the hybrid layer analysed using the SEM. Four measures and the mean value of each sample were obtained. The results were submitted to Analysis of Variance (ANOVA) and Tukey statistical tests (p 0,05). Independent of the adhesive system used the G2 presented the higher average of hybrid layer thickness (1,89±0,15) and the Control group with the Clearfil SE Bond presented the smaller hybrid layer thickness presenting significant statistical difference from the other groups. Different scores were attributed for the degree of imperfections (0-3) and for the degree of presence of tags and microtags (0-2)... (Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4015.pdf: 10035531 bytes, checksum: 9f66b1eda402485df89e3da690e02c59 (MD5) Previous issue date: 2011-12-19 / Universidade Federal de Minas Gerais / The fishes from the Erythrinidae family present a wide karyotypic variation with several karyomorphs already identified for some species, including the presence of different sex chromosome systems. In Erythrinus erythrinus a well-differentiated X1X2Y system occurs in karyomorph D, as well as undifferentiated sex chromosomes in other karyomorphs of this species. In Hoplias malabaricus, single and multiple sex chromosome systems, as well as undifferentiated, can also be found. Among these, there is a well-differentiated XY system in karyomorph B, a nascent XY system in karyomorph C and a X1X2Y system in karyomorph D. The purpose of this thesis was to analyze the genomic differentiation occurred between E. erythrinus and H. malabaricus karyomorphs, with a particular focus on the sex chromosomes. To this end, besides the classical chromosomal analysis, repetitive DNA sequences and microdissected sex chromosomes were used as probes for fluorescence in situ hybridization (FISH) procedures. The evolutionary pathways for the sex chromosome systems of H. malabaricus and E. erythrinus karyomorphs were investigated. Allopatric populations of E. erythrinus karyomorphs A and D were analyzed and showed significant differences in relation to their karyotypes, where chromosomal rearrangements and genomic changes stood out as significant events during the evolutionary process. The genomic dispersion of transposable elements Rex3 associated with the 5S ribosomal DNA, as well as the differentiation of a multiple X1X2Y sex chromosome system were prominent events in the differentiation of karyomorph D. The role of repetitive elements in the process of differentiation of sex chromosomes was also analyzed. In this sense, we performed a comparative study of the distribution of twelve microsatellites (mono-, di-and trinucleotide) in the XY and X1X2Y systems, present in karyomorphs B and D of H. malabaricus, respectively. The differential distribution of microsatellites along the chromosomes in both systems were demonstrated, possibly as a direct reflection of their modes of origin, with a significant accumulation of repeats on the X chromosome of the XY system, in contrast to that found in the X1X2Y sex chromosomes system. The processes acting in the differentiation of sex chromosomes are not yet completely understood. However, the accumulation of repetitive DNA sequences may represent an early step in the differentiation of simple sex chromosomes systems (XY and ZW), highlighting the role of these sequences in their differentiation, and contributing to the reduction of recombination between the undifferentiated ancestor sex pair. On the other hand, in multiple systems, the chromosomal rearrangements implicated in the origin of these systems, appear to represent the primary factors responsible for the reduction of recombination without the need for additional genomic modifications. The comparative mapping of different repetitive DNA sequences in meiotic and mitotic chromosomes pointed for an independent differentiation process of the X1X2Y sex chromosomes in E. erythrinus and H. malabaricus. Additionally, sex chromosomes probes, isolated by microdissection, were used in experiments of whole chromosome painting (wcp), proving to be a powerful tool for the study of sex chromosomes evolution. It was shown that the chromosomes of the X1X2Y system have evolved independently in H. malabaricus and E. erythrinus where different autosomes were firstly converted to a slightly different XY sex pair in each species, followed by dinstinct chromosomal rearrangements in the origin of these systems. In turn, the chromosome painting also showed the independent origin for the XY system of H. malabaricus karyomorphs B and C. Again, distinct autosomal pairs present in the ancestor karyomorphs were converted into the XY chromosomes, now present in karyomorphs B and C. It has been well characterized the direct relationship between the XY system of karyomorph C and the origin of the X1X2Y system present in karyomorph D. Thus, even between congeneric species (E. erythrinus and H. malabaricus), as well as between karyomorphs of the same nominal species (H. malabaricus), the sex chromosomes have evolved independently, demonstrating the great plasticity of this evolutionary process in fishes. / Os peixes da família Erythrinidae apresentam uma ampla variação cariotípica, com diversos cariomorfos já identificados para algumas espécies, incluindo diferentes sistemas de cromossomos sexuais. Em Erythrinus erythrinus, um sistema X1X2Y bem diferenciado ocorre no cariomorfo D, assim como cromossomos sexuais indiferenciados em outros cariomorfos desta espécie. Em Hoplias malabaricus, sistemas de cromossomos sexuais simples e múltiplos, bem como indiferenciados, podem ser também encontrados. Entre estes, destaca-se um sistema XY bem diferenciado no cariomorfo B, um sistema XY nascente no cariomorfo C e um sistema X1X2Y no cariomorfo D. A proposta desta tese foi analisar a diferenciação genômica entre cariomorfos de E. erythrinus e H. malabaricus, com um enfoque especialmente voltado para os cromossomos sexuais. Para tanto, além das análises cromossômicas clássicas, foi realizado o mapeamento citogenético de seqüências de DNAs repetitivos, assim como a obtenção de sondas por microdissecção de cromossomos sexuais e a hibridização fluorescente in situ (FISH) nos cromossomos. Procurou-se testar o caminho evolutivo, quanto à origem independente ou em comum entre os sistemas de cromossomos sexuais dos cariomorfos de H. malabaricus e de E. erythrinus. Populações alopátricas dos cariomorfos A e D de E. erythrinus foram analisadas evidenciando diferenças significativas em relação ao cariótipo, onde rearranjos cromossômicos e alterações genômicas destacaram-se como eventos significativos durante o processo evolutivo. A dispersão genômica dos elementos transponíveis Rex3, associados ao DNA ribossomal 5S, bem como a diferenciação de um sistema de cromossomos sexuais múltiplos X1X2Y, foram eventos de destaque na diferenciação do cariomorfo D. Foi também analisado o papel de elementos repetitivos no processo de diferenciação dos cromossomos sexuais. Neste sentido, foi realizado um estudo comparativo da distribuição de doze microssatélites (mono-, di- e trinucleotídeos) nos sistemas XY e X1X2Y, presentes nos cariomorfos B e D de H. malabaricus, respectivamente. Foi demonstrada a distribuição diferencial de microsatélites ao longo dos cromossomos em ambos os sistemas, possivelmente como reflexo direto dos seus modos de origem, com um acúmulo significativo no cromossomo X do sistema XY, em contraste com o que se verifica nos cromossomos sexuais do sistema X1X2Y. Os processos que atuam na diferenciação dos cromossomos sexuais ainda não estão completamente esclarecidos. No entanto, o acúmulo de seqüências repetitivas de DNA pode representar um dos primeiros passos na diferenciação dos sistemas simples de cromossomos sexuais (XY e ZW), destacando o papel dessas seqüências na sua diferenciação, podendo contribuir para a redução da recombinação entre o par sexual ancestral indiferenciado. Por outro lado, nos sistemas múltiplos, os próprios rearranjos cromossômicos, implicados na origem desses sistemas, parecem representar fatores primários para redução da recombinação, sem a necessidade de modificações adicionais no genoma. O mapeamento comparativo de diversas seqüências repetitivas de DNA em cromossomos mitóticos e meióticos apontou para um processo de diferenciação independente dos cromossomos sexuais X1X2Y em E. erythrinus e H. malabaricus. Adicionalmente, sondas de cromossomos sexuais, isolados por microdissecção, foram empregadas em experimentos de pintura cromossômica total (wcp), mostrando-se uma ferramenta esclarecedora para a elucidação desse processo. Foi demonstrado que os cromossomos do sistema X1X2Y evoluíram de forma independente em H. malabaricus e E. erythrinus, onde diferentes autossomos foram primeiramente convertidos em um par sexual XY pouco diferenciado em cada espécie, seguindo-se rearranjos cromossômicos diferenciados na origem desse sistema. Por sua vez, a pintura 1 cromossômica também mostrou a origem independente para o sistema XY dos cariomorfos B e C de H. malabaricus. Novamente, distintos pares autossômicos de cariomorfos ancestrais foram convertidos nos cromossomos XY, agora presentes nos cariomorfos B e C. Foi bem caracterizado o relacionamento direto do sistema XY nascente do cariomorfo C com a origem do sistema X1X2Y do cariomorfo D. Assim sendo, tanto entre espécies cofamiliares (E. erythrinus e H. malabaricus), assim como entre cariomorfos de uma mesma espécie nominal (H. malabaricus), os cromossomos sexuais apresentam evolução independente, evidenciando a grande plasticidade desse processo evolutivo entre os peixes.

Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Coorientador: Alício Martins Júnior / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Eunice Oba / Resumo: Este estudo foi delineado com objetivo de verificar os efeitos da exposição experimental do sêmen fresco bovino ao BoHV-5, previamente à congelação, através de análises in vitro e de produção de embriões. Os seguintes testes foram avaliados no Grupo I (sêmen não exposto ao vírus) e II (sêmen exposto ao vírus): motilidade e movimento espermático, através de análise computadorizada, integridade da membrana plasmática/acrossomal (IMPA) e função mitocondrial (FM), utilizando sondas fluorescentes, translocação da fosfatidilserina (PS) na membrana do espermatozóide, com Anexina-V, desenvolvimento embrionário in vitro, evidenciado pela proporção de embriões gerados, detecção viral em espermatozóides e embriões, através do emprego da técnica de hibridização in situ (ISH) e PCR. Nenhuma diferença significativa foi observada para IMPA e FM entre os grupos. Entretanto, resultados da translocação da PS no Grupo II foram significativamente diferentes (P=0,00005) dos encontrados no Grupo I; valores maiores (P<0,05) para velocidade média (VAP), velocidade curvilínea (VCL) e amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH) e menores para a retilinearidade (STR) e linearidade (LIN) foram obtidos no Grupo II quando comparados com o Grupo I. Concluindo, a ISH revelou a presença de DNA viral nos espermatozóides e embriões infectados; além disso, o BoHV-5 levou à alterações funcional e morfológica nos espermatozóides, sem comprometer o desenvolvimento embrionário, mesmo após ser carreado para os embriões, através da infecção dos oócitos na fertilização in vitro / Abstract: This study was designed to verify the effects of experimental exposure of fresh bull semen to BoHV-5, previously to the freezing process, on in vitro sperm evaluations and embryo production. The following tests were performed in groups I (semen not exposed to virus) and II (semen exposed to virus): sperm motility and movement by computerized analysis (CASA), plasma/acrosomal membrane integrity (PAMI) and mitochondrial function (MF) by fluorocromes dyes, sperm membrane phosphatidylserine (PS) transposition using Annexin-V, in vitro embryonic development evidenced by the proportion of yielded embryos, and viral detection in sperm and embryos performed by in situ hybridization (ISH) assay and PCR. No significant difference was observed for PAMI and MF between groups. However, results of PS transposition in group II were significantly different (P=0.00005) from those found in group I; higher values (P<0.05) for mean velocity (VAP), curvilinear velocity (VCL) and lateral head displacement (ALH) and lower values for straightness (STR) and linearity (LIN) were obtained in group II when compared to those observed in group I. In conclusion, the ISH assay showed the presence of viral DNA on spermatozoa and embryos; besides, BoHV-5 induced functional and morphological sperm alterations, but did not compromise the embryonic development even after being carried to the embryos through the IVF infected oocytes / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-29Bitstream added on 2014-06-13T18:31:15Z : No. of bitstreams: 1 souza_dg_me_araca.pdf: 1858727 bytes, checksum: 571362381118ee9810c1695198ec90f5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo foi delineado com objetivo de verificar os efeitos da exposição experimental do sêmen fresco bovino ao BoHV-5, previamente à congelação, através de análises in vitro e de produção de embriões. Os seguintes testes foram avaliados no Grupo I (sêmen não exposto ao vírus) e II (sêmen exposto ao vírus): motilidade e movimento espermático, através de análise computadorizada, integridade da membrana plasmática/acrossomal (IMPA) e função mitocondrial (FM), utilizando sondas fluorescentes, translocação da fosfatidilserina (PS) na membrana do espermatozóide, com Anexina-V, desenvolvimento embrionário in vitro, evidenciado pela proporção de embriões gerados, detecção viral em espermatozóides e embriões, através do emprego da técnica de hibridização in situ (ISH) e PCR. Nenhuma diferença significativa foi observada para IMPA e FM entre os grupos. Entretanto, resultados da translocação da PS no Grupo II foram significativamente diferentes (P=0,00005) dos encontrados no Grupo I; valores maiores (P<0,05) para velocidade média (VAP), velocidade curvilínea (VCL) e amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH) e menores para a retilinearidade (STR) e linearidade (LIN) foram obtidos no Grupo II quando comparados com o Grupo I. Concluindo, a ISH revelou a presença de DNA viral nos espermatozóides e embriões infectados; além disso, o BoHV-5 levou à alterações funcional e morfológica nos espermatozóides, sem comprometer o desenvolvimento embrionário, mesmo após ser carreado para os embriões, através da infecção dos oócitos na fertilização in vitro / This study was designed to verify the effects of experimental exposure of fresh bull semen to BoHV-5, previously to the freezing process, on in vitro sperm evaluations and embryo production. The following tests were performed in groups I (semen not exposed to virus) and II (semen exposed to virus): sperm motility and movement by computerized analysis (CASA), plasma/acrosomal membrane integrity (PAMI) and mitochondrial function (MF) by fluorocromes dyes, sperm membrane phosphatidylserine (PS) transposition using Annexin-V, in vitro embryonic development evidenced by the proportion of yielded embryos, and viral detection in sperm and embryos performed by in situ hybridization (ISH) assay and PCR. No significant difference was observed for PAMI and MF between groups. However, results of PS transposition in group II were significantly different (P=0.00005) from those found in group I; higher values (P<0.05) for mean velocity (VAP), curvilinear velocity (VCL) and lateral head displacement (ALH) and lower values for straightness (STR) and linearity (LIN) were obtained in group II when compared to those observed in group I. In conclusion, the ISH assay showed the presence of viral DNA on spermatozoa and embryos; besides, BoHV-5 induced functional and morphological sperm alterations, but did not compromise the embryonic development even after being carried to the embryos through the IVF infected oocytes

Orientador: Sanae Kasahara / Banca: Yatiko Yassuda / Banca: César Martins / Banca: Itamar Alves Martins / Banca: José Maurício Barbanti Duarte / Resumo: A classe Amphibia, especialmente a família Hylidae, passou por extensas modificações na taxonomia e sistemática, realizadas com base, principalmente, em dados moleculares, mas quase nenhuma contribuição das informações citogenéticas. Os hilídeos são os anuros mais abundantes em número de espécies, porém, a maioria delas foi sequer cariotipada e grande parte das informações disponíveis na literatura está restrita apenas ao número e morfologia dos cromossomos. No presente trabalho, foram cariotipadas 28 espécies da subfamília Hylinae, sendo da tribo Cophomantini Aplastodiscus arildae, A. callipygius, A. eugenioi, A. leucopygius, A. perviridis, Hypsiboas aff. polytaenius, Hypsiboas sp. aff. albopunctatus, H. albomarginatus, H. albopunctatus, H. bakeri, H. caingua, H. caipora, H. crepitans, H. faber, H. latistriatus, H. lundii, H. pardalis, H. polytaenius, H. prasinus, H. raniceps e H. semilineatus; da tribo Lophiohylini, as espécies Aparasphenodon bokermanni, Itapotihyla langsdorffii, Phyllodytes edelmoi, P. luteolus, Trachycephalus sp., T. mesophaeus e T. typhonius; e da subfamília Phyllomedusinae, duas espécies, Phyllomedusa distincta e P. tetraploidea, bem como seus híbridos triploides. A maioria das espécies da subfamília Hylinae compartilha cariótipo 2n=24, FN=48, bandas C majoritariamente centroméricas e RON em cromossomos pequenos do par 11 em Cophomantini e do par 10 em Lophiohylini. As exceções são as do gênero Phyllodytes, da tribo Lophyohylini, cujas espécies têm 2n=22, FN=44 e RON no par 2, e as do gênero Aplastodiscus, da tribo Cophomantini, cujas espécies têm diferentes números cromossômicos de 2n=24, 2n=22, 2n=20 e 2n=18, mas compartilham o mesmo padrão de bandamento C e o mesmo par marcador de RON. As bandas de replicação por incorporação de BrdU... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Amphibia class, especially the family Hylidae, went through extensive changes in taxonomy and systematics, based mainly on molecular data, but with almost no contribution of cytogenetic information. This family is the most speciose among the anurans, however, the great majority of the species was never karyotyped, and most of the cytogenetic information on hylids available in the literature is restricted to the number and morphology of the chromosomes. In the present work we karyotyped 28 representatives of the subfamily Hylinae, belonging to the tribe Cophomantini the species Aplastodiscus arildae, A. callipygius, A. eugenioi, A. leucopygius, A. perviridis, Hypsiboas aff. polytaenius, Hypsiboas sp. aff. albopunctatus, H. albomarginatus, H. albopunctatus, H. bakeri, H. caingua, H. caipora, H. crepitans, H. faber, H. latistriatus, H. lundii, H. pardalis, H. polytaenius, H. prasinus, H. raniceps e H. semilineatus; to the tribe Lophiohylini the species Aparasphenodon bokermanni, Itapotihyla langsdorffii, Phyllodytes edelmoi, P. luteolus, Trachycephalus sp., T. mesophaeus e T. typhonius; and two species of the subfamily Phyllomedusinae, Phyllomedusa distincta and P. tetraploidea, as well as their triploid hybrids. Most species of the subfamily Hylinae share the same karyotype with 2n=24, FN=48, C bands with predominantly centromeric distribution, and NOR located on small chromosomes belonging to the pair 11 in Cophomantini and to the pair 10 in Lophiohylini. The exceptions are the genus Phyllodytes, from the tribe Lophyohylini, whose species have 2n=22, FN=44 and NOR in the pair 2, and the genus Aplastodiscus, from the tribe Cophomantini, whose species have different chromosome numbers of 2n=24, 2n=22, 2n=20, Abstract and 2n=18, but sharing the same C-banding pattern and the same pair of NOR marker... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438924-Texto+Completo-0.pdf: 1388538 bytes, checksum: afb7ca8f25e199e05b398d5b916bb622 (MD5) Previous issue date: 2012 / The pampas cat, Leopardus colocolo, is a little-known species of Neotropical felid that has a broad geographic distribution in South America, and is strongly associated with grasslands. The presence of phenotypic differences among geographic populations of this species has raised questions about the demographic history and taxonomy of this felid. More recently, initial phylogeographic studies showed that this species indeed possesses a strong genetic structure, but were mostly restricted to Andean samples, so that much of its distribution was not analyzed in detail. Furthermore, the recent discovery of evidence of hybridization between L. colocolo and another Neotropical felid (L. tigrinus) in central and northeastern Brazil, added an even greater complexity to the evolutionary history of this species, and emphasized the need for more detailed studies on its phylogeographic patterns and historical demography. Previous studies have indicated that this hybridization event is relatively old, and is currently detected only as an introgression of L. colocolo mitochondrial DNA (mtDNA) into L. tigrinus populations, without any trace so far identified in the nuclear genome. Therefore, the aim of this study was to analyze four mitochondrial segments in L. colocolo individuals sampled broadly across their geographic distribution, along with samples of L. tigrinus hybrids from central and northeastern Brazil. The analysis of 2,141 base pairs of the mtDNA control region and ATP8, ND5 and Cyt-b genes revealed a strong population structure in L. colocolo, with high haplotype and nucleotide diversity in comparison with others Neotropical cats. Haplotypes from Chile, Bolivia and Argentina were positioned as the most basal in the phylogeographic structure of L. colocolo, while samples from Brazil and Uruguay formed recent, internal groups, suggesting a west-to-east colonization for this species. Demographic analyses indicated the occurrence of two episodes of population expansion, an earlier one (ca. 200,000 years ago) in the west, and another ca. 50,000 years ago in the east. The latter coincides with paleoclimatic and paleogeographic studies that indicated an expansion of grasslands in Brazil and consequent loss of forests. The joint analysis with the L. tigrinus hybrid samples revealed a complex history of hybridization. We found no haplotype sharing between L. colocolo and L. tigrinus hybrids, supporting the hypothesis that this hybridization event is quite old. Moreover, the analysis of population structure revealed that the pampas cat populations from southern Brazil and Uruguay are phylogenetically closer to L. tigrinus hybrid haplotypes than to the extant lineages of L. colocolo from central and northeastern Brazil. The most plausible interpretation to this unusual pattern is that ancestral L. colocolo haplotype lineages from central Brazil have only been sampled in present-day hybrids, and may be extinct in their original species. The observed pattern also indicates that southern Brazil and Uruguay were colonized by L. colocolo from central Brazil, with no immediate connection to nearby populations still present in Argentina. This has direct consequences for the conservation of this group, which is geographically isolated and appears to evolve without gene flow (at least mitochondrial) with nearby populations. If this result is confirmed with nuclear markers, it will emphasize the immediate prioritization of these populations for conservation and management. From an evolutionary standpoint, our results showed the importance of analyzing L. colocolo populations from eastern South America, as well as the inclusion of L. tigrinus hybrids, because an essential portion of the pampas cat mitochondrial history seems to be currently recorded only by these introgressed haplotypes. / Leopardus colocolo (popularmente conhecido como gato-palheiro) é uma espécie pouco conhecida de felídeo neotropical que possui uma ampla distribuição geográfica na América do Sul, sendo fortemente associada a habitats com vegetação aberta. A presença de diferenças fenotípicas entre populações geográficas desta espécie levantou questões quanto à taxonomia e a história demográfica deste táxon. Posteriormente, estudos filogeográficos iniciais indicaram que a espécie apresenta realmente uma forte estrutura genética, mas ficaram predominantemente restritos a amostras de regiões andinas, de forma que grande parte da distribuição deste felídeo não foi analisada detalhadamente. Além disso, a recente descoberta de evidências de hibridação entre L. colocolo e outra espécie de felídeo neotropical, Leopardus tigrinus, nas regiões centro-oeste e nordeste do Brasil, revelou uma complexidade ainda maior de sua história evolutiva, e enfatizou a necessidade de estudos mais detalhados acerca de seus padrões filogeográficos e demografia histórica. Estudos prévios revelaram que este evento de hibridação é relativamente antigo, sendo atualmente detectado apenas como uma introgressão de DNA mitocondrial (mtDNA) de L. colocolo em populações de L. tigrinus, sem qualquer vestígio até o momento identificado no genoma nuclear. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi analisar quatro segmentos mitocondriais de indivíduos de L. colocolo amostrados amplamente em sua distribuição geográfica, em conjunto com amostras de L. tigrinus híbridos provenientes das regiões centro-oeste e nordeste do Brasil. A análise de 2141 pares de bases da região controle e dos genes ATP8, ND5 e Cit-b do DNA mitocondrial indicou uma forte estruturação populacional em L. colocolo, com altas diversidades haplotípica e nucleotídica em comparação com outros felídeos neotropicais. Os haplótipos chilenos, bolivianos e argentinos foram posicionados como os mais basais na estrutura filogeográfica de L. colocolo, enquanto as amostras brasileiras e uruguaias formaram grupos mais recentes, sugerindo uma colonização oeste – leste das linhagens desta espécie. Análises demográficas indicaram uma expansão populacional há aproximadamente 50 mil anos, o que coincide com estudos paleoclimáticos e paleogeográficos que indicam uma expansão das vegetações do tipo savana no Brasil e consequente diminuição das florestas. As análises em conjunto com as amostras de L. tigrinus híbridos revelaram uma história complexa de hibridação. Não encontramos compartilhamento de haplótipos entre L. colocolo e L. tigrinus híbridos quando os segmentos mitocondriais foram analisados em conjunto (concatenados), apoiando a hipótese de que este evento de hibridação seja bastante antigo. Além disto, a análise da estrutura populacional revelou que as populações do gato-palheiro oriundas do sul do Brasil e do Uruguai são mais próximas a amostras de L. tigrinus híbridos do que a linhagens atuais de L. colocolo do centro-oeste e do nordeste brasileiro. Este fato, além de surpreendente do ponto de vista evolutivo, tem consequências diretas para a conservação destes grupos do sul, os quais se encontram isolados geograficamente e parecem evoluir sem fluxo gênico (ao menos mitocondrial) com populações próximas. Caso este resultado seja confirmado com marcadores nucleares, isto enfatizaria a priorização imediata destas populações para fins de manejo e conservação. Do ponto de vista evolutivo, este trabalho evidenciou a importância de analisar as populações de L. colocolo do leste da América do Sul em conjunto com as amostras de híbridos de L. tigrinus, visto que uma parte essencial da história mitocondrial do gato-palheiro parece estar sendo retratada apenas pela inclusão de amostras desta outra espécie.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000426433-Texto+Completo-0.pdf: 8008637 bytes, checksum: 3bef41f6527942b391494e5d3fa788a6 (MD5) Previous issue date: 2010 / The occurrence of contact zones of the distribution of Alouatta species and their likely hybridization were recently described for A. palliata and A. pigra in Mexico and A. caraya and A. guariba clamitans in south Brazil and northeast Argentina. The present study focused on determining the extension of one of these contact zones and potential hybridization (Cerro dos Negros) in São Francisco de Assis region, state of Rio Grande do Sul, Brazil. Population surveys were conducted in five sites in the neighborhood of Cerro dos Negros. A total of 108 howler monkey group sightings were obtained during 80 days of field research and 387 km of trails walked. Twelve groups of A. caraya, one containing individuals identified as hybrids on the basis of their mosaic pelage coloration, and 17 groups of A. guariba clamitans, seven containing putatively hybrid individuals, were identified. Five mixed-species groups containing hybrids and four groups composed exclusively by putative hybrids were also seen. The mosaic pelage coloration was seen in adult males, adult females and immature individuals. In sum, 44. 6% of all individuals were identified as pure A. guariba clamitans, 30. 8% as pure A. caraya and 24. 5% as putative hybrids. Despite the fact that allopatric A. caraya forms larger groups than alloptaric A. guariba clamitans, the sighted groups were similar in size, regardless of study site and group membership. The infant to adult female ratio also was similar among all types of groups, allowing to suggest that hybridization is not compromising the reproductive process. Although genetic analyses are required to confirm the hybrid or pure status, as well as the fertility, of the howlers from the surveyed populations, this study showed that the contact zone is wider and that hybridization between sympatric A. caraya and A. guariba clamitans is probably common. / A ocorrência de zonas de contato da distribuição de espécies de Alouatta e sua provável hibridação foram recentemente descritos para A. palliata e A. pigra no México e A. caraya e A. guariba clamitans no sul do Brasil e nordeste da Argentina. O presente estudo avaliou a extensão de uma dessas zonas de contato e potencial hibridação (Cerro dos Negros) na região de São Francisco de Assis, Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Foram realizados levantamentos populacionais em cinco áreas localizadas no entorno do Cerro dos Negros, onde foram obtidos 108 avistamentos durante 80 dias de campo e 387 km percorridos. Foram identificados 12 grupos de A. caraya, dos quais um continha indivíduos classificados como híbridos com base na coloração em mosaico de sua pelagem, e 17 grupos de A. guariba clamitans, dos quais sete continham indivíduos potencialmente híbridos. Também foram avistados cinco grupos mistos com híbridos e quatro grupos formados exclusivamente por indivíduos híbridos. Os indivíduos com pelagem em mosaico eram machos adultos, fêmeas adultas ou imaturos. Ao todo, 44,6% dos indivíduos avistados foram classificados como A. guariba clamitans puros, 30,8% como A. caraya puros e 24,5% como provavelmente híbridos. Apesar de A. caraya formar grupos maiores que A. guariba clamitans em alopatria, o tamanho dos grupos avistados nesse estudo foi semelhante, independente da área de estudo e de sua composição ser monoespecífica ou conter híbridos. A razão entre infantes e fêmeas adultas também foi semelhante entre esses tipos de grupos, o que permite sugerir que a hibridação não está comprometendo o processo reprodutivo. Embora análises genéticas sejam necessárias para confirmar o status de híbrido ou puro dos bugios dos grupos avistados, bem como sua fertilidade, o presente trabalho mostrou que a zona de contato é mais extensa e que a hibridação entre esses táxons parece ser comum nessas áreas de simpatria.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-03-13T14:36:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Tyago_Eufrásio_de_Souza.pdf: 1734818 bytes, checksum: b0cd86fb8616eb74b44913092c3b337f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T14:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Tyago_Eufrásio_de_Souza.pdf: 1734818 bytes, checksum: b0cd86fb8616eb74b44913092c3b337f (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / FACEPE / As espécies de gafanhotos Ommexecha virens (Ommexechidae), Xyleus discoideus angulatus, Tropidacris collaris (Romaleidae) e Schistocerca pallens (Acrididae) ocorrem na região do Nordeste do Brasil. Apresentam seus cariótipos simétricos com número cromossômico, 2n=23 (X0, machos) e 2n=24 (XX, fêmeas), porém T. collaris, S. pallens e X. d. angulatus apresentam os cromossomos com morfologia acrocêntrica, enquanto que O. virens apresenta o par cromossômico G1 submetacêntrico. Variações rítmicas no comportamento apresentadas por diversos organismos são pertencentes ao ciclo circadiano. Com o uso da técnica de Hibridização in situ Permanente (PISH), foi mapeada a posição do gene de cópia única Per, um dos genes do relógio circadiano, em cromossomos meióticos das espécies O. virens, X. d. angulatus, T. collaris e S. pallens. Os cromossomos meióticos destas espécies foram obtidos através da técnica clássica de esmagamento de folículos testiculares. As sondas utilizadas foram obtidas de plasmídeos carregando fragmentos do gene Per originários do genoma do drosofilídio Zaprionus indianus. Após a hibridização in situ, o material foi fotografado usando contraste de fase. Nas quatro espécies de gafanhotos citadas anteriormente, o gene Per foi mapeado no maior par autossômico, G1. Analisados conjuntamente os resultados de mapeamento do gene Per nestas espécies com a localização de outros genes de cópia única e de cópia repetitiva, observa-se uma localização preferencial dos genes de cópia única nos pares autossômicos grandes e, genes de cópia repetitiva, nos pares médios e pequenos. Estes resultados também apontam para uma conservação molecular deste gene nos Orthoptera, como observado em Díptera e Lepdoptera; possívelmente a conservação na localização cromossômica seja um reflexo da conservação molecular. Localizações cromossômicas de diversos genes constitutivos em representantes das famílias Ommexechidae, Romaleidae e Acrididae são informações relevantes para o entendimento das relações evolutivas entre estes gafanhotos, além disso, fornecem marcadores para o sequenciamento do genoma destas espécies.