O avanço da bioengenharia atual tem sido motivado pela crescente necessidade da humanidade em se buscar formas para amenizar o sofrimento, garantir tempo para um tratamento, melhorar a qualidade de vida ou sanar quadros clínicos de pacientes. Assim, a crescente necessidade de órgãos artificiais impulsiona a área de bioengenharia para que seja dado um suporte no desenvolvimento destes mecanismos. Neste contexto se encontra o presente trabalho. Aqui, apresenta-se uma metodologia numérica para que seja aplicada a desenvolvimento e testes de Dispositivos de Assistência Cardíaca, de forma a otimizar o processo de desenvolvimento e estimar os possíveis problemas inerentes ao seu funcionamento. Compondo a metodologia, uma ampla discussão de cada etapa numérica foi elaborada, contribuindo para uma metodologia flexível para uma ampla variedade de aplicações. A hemólise também foi investigada através dos principais modelos da literatura, bem como foram propostos modelos adaptados para tentar estimar a hemólise verificada experimentalmente. Além das metodologias para cada etapa, uma metodologia geral utilizando Sistemas de Referências Múltiplas (SRM) compõe os resultados, para uma sequência de passos numéricos que possa obter resultados satisfatórios em comparação com resultados de bancada por loop test. Outros resultados encontrados e devidamente discutidos foram inerentes a uma densidade de malha a ser utilizada para que ocorra simulações com independência de malha, na qual uma densidade a partir de 318,43 elementos/mm³ para referenciais não-inerciais é proposta. O mapeamento da turbulência por seis modelos que aplicam a média de Reynolds também é discutido, indicando os melhores modelos a serem empregados para um número de Reynolds relativo (Re*) que relaciona a influência dos contornos nos resultados numéricos obtidos. Além disso, uma nova abordagem por tensão fisiológica é proposta para o cálculo da hemólise, sendo comparada aos modelos clássicos adotados. Os resultados para hemólise indicam um bom ajuste para o novo modelo proposto, bem como indica o correto tratamento de unidades para os modelos tradicionais. Por fim, as análises recaem na melhoria do dispositivo e conclui a metodologia numérica a ser empregada, preenchendo lacunas em cada etapa e determinando uma maneira de análise numérica cujos resultados são confiáveis. / The advance of current bioengineering has been driven by the increasing need of humanity to seek ways to alleviate the suffering, ensure time to treatment, improve the quality of life or cure medical conditions of patients. Thus, the growing need for artificial organs boosts bioengineering area to be given a support in the development of these mechanisms. In this context is the present work. Here, we present a numerical methodology to be applied to development and Cardiac Assist Devices tests in order to optimize the development process and estimate the potential problems inherent in their operation. Compounding the methodology, a comprehensive discussion of each numerical step was developed, contributing to a flexible methodology for a wide variety of applications. Hemolysis was also investigated through the main models of literature, and have been proposed models adapted to try to estimate hemolysis verified experimentally. In addition to the methodologies for each step, a general methodology using Multiple Reference Systems (MRF) makes up the results for a sequence of numeric steps you can get satisfactory results compared to bench test results for loop. Other findings were discussed and properly attached to a mesh density being used for simulations occurring independently mesh in which a density from 318.43 elements/mm³ Non-inertial frames is proposed. The mapping of turbulence six models applying Reynolds medium is also discussed, indicating the best designs to be employed for a number of relative Reynolds (Re*) that relates the influence of the contours of numerical results obtained. In addition, a new approach by physiological stress is proposed for the calculation of hemolysis, being compared to classic models adopted. The results for hemolysis indicate agreement with the proposed new model, and indicates the correct treatment units to the traditional models. The final analyses fall into improved device and completes the numerical methodology to be used by filling gaps in each step and determining a way to numerical analysis results which are dependable.

Introdução: Anemias hemolíticas induzidas por fármacos (AHIF) são caracterizadas por uma anemia hemolítica imune após exposição a um fármaco. Testes sorológicos têm o potencial de confirmar a presença de anticorpo contra fármacos, mas a realização destes testes ainda é um desafio. Os anticorpos IgM e IgG envolvidos na AHIF são principalmente de dois tipos: fármaco-dependentes e fámaco-independentes. Os anticorpos fármaco-independentes reagem com os eritrócitos \"in vitro\" sem a presença do fármaco, e os resultados imunohematológicos são idênticos aos encontrados nas anemias hemolíticas autoimunes idiopáticas. Anticorpos fármaco-dependentes resultam em teste da antiglobulina direto (TAD) positivo e eluato negativo, os anticorpos só reagem \"in vitro\" com os eritrócitos na presença do fármaco. Indivíduos saudáveis podem desenvolver anticorpos contra fármacos, mesmo na ausência de anemia hemolítica. Os indivíduos podem ser sensibilizados durante exposição prévia a fármacos, exposição a antibióticos usados em ração animal, tanques de piscicultura, berçários de criação de suínos ou tratamento de mastite em bovinos. Estes indivíduos apresentam um maior risco de desenvolvimento de AHIF grave na ocasião de uma segunda exposição ao fármaco. Objetivos: Padronizar testes imunohematológicos para a detecção de anticorpos dirigidos contra fármaco-dependentes. Materiais e métodos: Amostras de 162 doadores de sangue foram submetidas a pesquisa de anticorpos fármaco-dependentes anti-cefalexina, anti-rifampicina e anti-diclofenaco de sódio. Amostra de um doador de plaquetas colhidas por aférese com TAD positivo foi investigada para detecção de anticorpos fármaco-dependentes anti-valsartana. Amostras de 8 pacientes com suspeita diagnóstica de AHIF foram investigadas para a presença de anticorpos contra os fármacos que foram prescritos ao paciente no período de duas semanas prévias ou até o momento em que a hemólise aguda foi constatada. Anticorpos fármaco-dependentes que reagem na presença do fármaco ligado covalentemente à membrana da hemácia, ou na presença do fármaco em solução, foram investigados em doadores de sangue (técnicas em gel) e em pacientes (técnicas em tubo e em gel). Resultados: Os testes laboratoriais detectaram a presença de anticorpo anti-valsartana no eluato de um doador de plaquetas colhidas por aférese com TAD positivo e a presença de anticorpo anti-ceftazidima no soro de um paciente com suspeita clínica de AHIF. A investigação de anticorpo anti-cefalexina e anti-rifampicina foi negativa em amostras de doadores de sangue. O teste laboratorial para investigação de anticorpo anti-diclofenaco de sódio não foi finalizado devido a presença de hemólise em hemácias sensibilizadas com o fármaco e após a adição do fármaco na solução de hemácias. Conclusão: A detecção de anticorpo anti-valsartana em um doador de plaquetas colhidas por aférese evidenciou a presença de anticorpo anti-fármaco na ausência de hemólise. A detecção de anticorpo anti-ceftazidima em amostra de um paciente com anemia hemolítica confirmou a suspeita clínica de AHIF. Reconhecer os sinais clínicos da AHIF precocemente e a disponibilidade de testes sorológicos é essencial para confirmação diagnóstica, orientação terapêutica e prevenção de uma hemólise potencialmente fatal. / Introduction: Drug-induced immune hemolytic anemia (DIHA) is characterized by immune hemolytic anemia following exposure to a drug. Serological testing has the potential to confirm the presence of anti-drug antibodies, but the testing is still a challenge. The IgM and IgG antibodies involved in DIHA comprise mainly two types: drug-dependent and drug-independent. Drug-independent antibodies react with erythrocytes in vitro without the presence of the drug, and the immunohematologic results are identical to those found in idiopathic autoimmune hemolytic anemias. Drugdependent antibodies induce positive direct antiglobulin tests (DAT) and negative eluates, and in vitro antibody reactions with erythrocytes are only detected in presence of the drug. Healthy individuals can develop antibodies against drugs even in the absence of hemolytic anemia. Individuals may be sensitized during previous exposure to drugs, exposure to antibiotics used in animal feed, fish culture ponds, swine nurseries or mastitis treatment in bovines. These individuals present higher risk of developing severe DIHA on the second exposition. Aims: To standardize immunohematological tests for detection of anti-drug dependent antibodies. Materials and methods: Samples from 162 blood donors were tested for anti-cephalexin, anti-rifampicin and antidiclofenac antibodies. Sample from one platelet apheresis donor with positive DAT was investigated for anti-valsartan drug-dependent antibody. Samples from 8 patients with suspected DIHA were investigated for the presence of antibodies directed against the drugs that were prescribed to the patient in the period of two weeks prior to or until the time when acute hemolysis was detected. Drug-dependent antibodies that react in presence of the drug covalently attached to the erythrocyte membrane, or in presence of the drug in solution were investigated in samples from blood donors (gel techniques) and from patients (tube and gel techniques). Results: Laboratory tests detected antivalsartan antibody in the eluate of an platelet apheresis donor with positive TAD and anti-ceftazidime antibody in the serum of a patient with clinical suspicion of DIHA. Investigation of anti-cephalexin and anti-rifampicin antibody was negative in blood donor samples. The laboratory test for anti-diclofenac antibody was not possible due to the presence of hemolysis in erythrocytes sensitized with the drug and when the drug in solution was added to the erythrocyte. Conclusion: The detection of anti-valsartan antibody in an platelet apheresis donor revealed the presence of an anti-drug antibody in the absence of hemolysis. Detection of anti-ceftazidime antibody in a patient with hemolytic anemia confirmed the clinical suspicion of DIHA. It is essential to recognizing early clinical signs of DIHA and have serological tests available for diagnostic confirmation, therapeutic guidance and prevention of potentially fatal hemolysis.

Segundo a legislação brasileira e normas internacionais, os concentrados de hemácias (CH) devem ser mantidos sob controle rigoroso de temperatura, armazenados de 2 a 6°C e transportados de 1 a 10°C, por até 24 horas. Entretanto, não existem evidências científicas de que estes valores sejam relevantes para manutenção de qualidade, segurança e viabilidade dos CH. O objetivo deste trabalho foi monitorar parâmetros laboratoriais in vitro em dois tipos de CH (CPDA-1, preparado pela metodologia do plasma rico em plaquetas e em SAGM preparado pelo buffy-coat), no decorrer de condições normais de armazenamento e em temperaturas de transporte inadequadas. O trabalho foi executado em três etapas. Na primeira etapa, foram estabelecidos os valores de referência para os dois tipos de CH armazenados em condições normais, através de testes laboratoriais semanais para determinação de hematócrito, hemoglobina total, hemoglobina plasmática, grau de hemólise, glicose, lactato, desidrogenase lática e potássio. Na segunda etapa, amostras de CH foram submetidas a temperaturas entre -2°C e +1°C, ou entre 11 e 15°C, por um período de 6 horas ou 24 horas, no 14º dia de armazenamento. Na terceira etapa os CH foram expostos a condições de estresse extremo, submetendo-os a temperaturas entre -2°C e +1°C ou entre 22°C e 25°C, por período de 48 horas. Os resultados dos testes laboratoriais das segunda e terceira etapas foram comparados com controles e aos valores de referência da primeira etapa. Nas unidades de CH em CPDA-1 foram encontrados valores significativamente mais elevados de potássio, hemoglobina livre, grau de hemólise, lactato e LDH do que nos CH em SAGM, enquanto que a concentração de glicose foi muito mais baixa em CH-CPDA1. Na 2ª etapa, exposições por até 24 horas em temperaturas de até - 2°C ou até 15°C não causaram diferenças significativas nas dosagens de hemoglobina livre, grau de hemólise, glicose, lactato, LDH e potássio quando comparados aos controles. Amostras de CH-CPDA1, quando avaliadas imediatamente após período de 48 horas de exposição, apresentaram resultados de glicose superiores aos controles quando submetidas a -2°C e inferiores ao controle quando a 25°C. Exposições por até 48 horas em temperaturas de até -2°C ou até 25°C não causaram diferenças significativas na hemoglobina livre, grau de hemólise, lactato, LDH e potássio quando comparados aos controles, nos dois tipos de CH. Nesse trabalho foram elaborados perfis padrão de parâmetros laboratoriais para dois tipos de CH. Estes perfis padrão constituirão uma ferramenta de grande utilidade para controle de qualidade e monitoramento das lesões de armazenamento em bolsas de CH produzidas na Fundação HEMOMINAS. Nossos resultados demonstraram que bolsas dos dois tipos de CH submetidas a temperaturas de - 2°C ou 14°C por períodos inferiores a 24 horas não apresentam alterações significativas nos parâmetros laboratoriais avaliados in vitro e permitiram algumas elaboramos recomendações práticas e importantes para serviços de hemoterapia. Entretanto, ainda não existem ainda evidências suficientes na literatura para modificação das normas de temperatura e tempo de transporte atualmente preconizadas pela legislação nacional e internacional. / The Brazilian legislation and international guidelines require that red blood cell concentrates (RBC) are kept under a strict temperature control, stored between 2 and 6°C and transported between 1 and 10°C for up to 24 hours. Nevertheless, there is no scientific evidence that these values are relevant to maintain RBC quality, safety and viability. This study was performed in order to monitor in vitro laboratorial variables of two different RBC types (CPDA-1, prepared using the platelet-rich plasma methodology, or SAGM, prepared using the buffy-coat) stored under normal conditions or under inadequate temperatures during transportation. The study had three phases. In the first phase, weekly laboratorial tests were performed to establish the reference values of hematocrit, total hemoglobin, plasma hemoglobin, rate of hemolysis, glucose, lactate, lactic acid dehydrogenase (LDH) and potassium, for each of the RBC types stored under normal conditions. In the second phase, RBC samples were submitted to temperatures between -2°C and +1°C, or between 11 and 15°C, for 6 hours or 24 hours, on the 14th storage day. Laboratorial test results were compared to a control group (2-6°C) and to the reference values established in the 1st phase. In the third phase, RBCs were exposed to extreme stress, i.e., temperatures between -2°C and +1°C or between 22°C and 25°C, for 48 hours, and the laboratory test results were compared to a control group. CPDA1-RBC had higher levels of potassium, free hemoglobin, rate of hemolysis, lactate and LDH compared to SAGM-RBC, whereas glucose was significantly lower in CPDA1. In the second phase, exposure for up to 24 hours in temperatures until -2°C or 15°C had no effect on free hemoglobin, rate of hemolysis, glucose, lactate, LDH and potassium when compared to control. CPDA1 samples right after the 48-h exposure had higher glucose levels than controls when kept at -2°C and lower than control if exposed to 25°C. Exposures up to -2°C or 25°C for up to 48 hours had no effect on free hemoglobin, rate of hemolysis, lactate, LDH and potassium when compared to control groups, both for CPDA1-RBC and SAGM-RBC. In this study, it was established standards for laboratory analyses for two different RBC types. Such standards will comprise valuable and useful tools for the quality control and monitoring of storage lesions of RBC units produced by Fundação HEMOMINAS. Our results demonstrate that units from both RBC types submitted to -2°C or 14°C for up to 24 hours had no significant changes in in vitro laboratory variables and allow some practical and important recommendations for hemotherapy services. Nevertheless, there are not enough evidences in the literature to support changes in the current guidelines for transportation recommended by national and international legislation.

O grau de hemólise (GH) é um dos parâmetros de qualidade de concentrados de hemácias (CH). Conforme a Portaria 158/2016, ao menos 1% da produção mensal de CH deve ser controlada para o GH e 75% desta parcela deve apresentar resultado inferior a 0,8% de hemólise em relação à massa eritrocitária no último dia de validade do CH. O GH é definido como a porcentagem de hemoglobina livre (HbL) em relação à hemoglobina total (HbT) com a devida correção do volume globular do CH. O método analítico utilizado para a dosagem da HbL pela maioria dos hemocentros da rede pública nacional não referencia a fonte bibliográfica consultada. A hemoglobina liberada dos eritrócitos devido à hemólise é tóxica e desencadeia reações fisiopatológicas, resultando em implicações clínicas com gravidade que varia em função do grau de hemólise e do volume de hemácias transfundidas. O objetivo deste estudo foi avaliar os resultados de três metodologias analíticas espectrofotométricas para a determinação da HbL. Foram comparados o método de espectrofotometria direta de Harboe, o método de espectrofotometria direta de Cinco comprimentos de onda (5CO) e o método espectrofotométrico de Primeira derivada (1ªD). Os métodos de Harboe e de 5CO utilizam fórmulas matemáticas que convertem diretamente as absorbâncias lidas no espectrofotômetro UV/Visível em concentração de HbL. O método de 1ªD requer espectrofotômetro de varredura para a visualização dos espectros e a concentração da HbL é dada pelo valor referente à distância entre o vale e o pico de absorção da hemoglobina e do fator de correção, resultante de curva de calibração. Nesse estudo foram testados os sobrenadantes de 187 CH com CPDA-1 e CH com solução aditiva de SAG-Manitol. As amostras foram diluídas segundo o aspecto visual de hemólise do sobrenadante. A cada corrida analítica foram incluídas amostras controle preparadas in-house a partir de CH com concentração de HbT conhecida. O método de Harboe emprega leituras espectrofotométricas em 380, 415 e 450 nm. Para o método de 5 CO as absorbâncias são lidas em 370, 415, 510, 577 e 600 nm. O método da 1ªD utiliza o espectro de absorção analisado em 568 nm e 580 nm. A correlação entre as três metodologias testadas foi considerada ótima, evidenciando a equivalência entre os métodos. O método de Harboe mostrou-se compatível para a dosagem de baixas e de altas concentrações de HbL. O intervalo de linearidade espectrofotométrica oscilou de 0,00041 a 0,06075 g/dL. Entretanto, para resultados confiáveis de HbL, é imprescindível que o espectrofotômetro tenha especificação de largura da banda espectral igual ou inferior a 5 nm. O método de Harboe é embasado cientificamente, de fácil execução e baixo custo. Este método proporciona resultados fidedignos, reprodutíveis e padronizados, além de dispensar o uso de substâncias químicas perigosas. Complementarmente, disponibilizou-se um Procedimento Operacional Padrão para a determinação da HbL pelo método de Harboe e um Guia visual de hemólise para assessorar os profissionais que atuam na área de controle de qualidade de hemocomponentes em hemocentros nacionais. / The hemolysis is one of the parameters of the red cell concentrate (RCC) control quality. According to the Brazilian Ordinance 158/2016, at least 1% of the monthly production of RCC should be controlled regarding hemolysis and 75% of this amount should present below than 0.8% of hemolysis in relation to the red cell mass at end of RCC storage. The hemolysis is defined as the percentage of free hemoglobin (FHb), relative to the total hemoglobin (THb), with the appropriate correction of the RCC hematocrit. The analytical method used by most the national public healthcare blood centers to dosage FHb does not reference the bibliography that has been consulted. Hemoglobin released from the erythrocytes due to hemolysis is toxic and triggers pathophysiological reactions, resulting in clinical implications whose severity varies depending on the hemolysis grade and the amount of transfused RCC. The aim of this study was to evaluate the results of three spectrophotometric analytical methodologies for the determination of FHb. The Harboe spectrophotometry method, the method of five wavelengths direct spectrophotometry (5Wa) and the first derivative spectrophotometric method (1stD) were compared to each other. The Harboe and the 5Wa methods use mathematical formulas that directly convert the absorbance read from the UV/visible spectrophotometer in FHb concentration. The 1stD method requires scanning spectrophotometer to visualize the spectra and concentration of the FHb is given by the value calculated from the distance between the valley and the peak absorption of hemoglobin and a correction factor, resulting from the calibration curve. One hundred eighty-seven (187) RCC supernatants with CPDA-1 and RCC with SAG-mannitol additive solution were tested in this study. The samples were diluted according to the visual appearance of supernatants hemolysis. For each analytical run in-house control samples, prepared from RCC with known THb concentration, were included. The Harboe method employs spectrophotometric readings at 380, 415 and 450 nm. Absorbance is read at 370, 415, 510, 577 and 600 nm with the 5 Wa method. In the 1stD method the absorption spectrum is analyzed at 568 and 580 nm. There was correlation between the three tested methodologies that were tested, demonstrating equivalence between the methods. The Harboe method was compatible for dosage of low and high FHb concentrations. The spectrophotometer linear range varied from 0.00041 to 0.06075 g/dL. However, in order to achieve reliable FHb dosages it is imperative that the spectrophotometer has a spectral bandwidth equal to 5 nm or below. The Harboe method is scientifically based, easy to perform and inexpensive. It provides reliable, reproducible and standardized results, dismissing the use of dangerous chemical substances. In addition, this study has provided an Operational Procedure to determine FHb by the Harboe method and a Visual Guide of hemolysis to assist professionals working in the quality control of blood products.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade antioxidante de extrato de folhas de oliveira (EFO) (Olea europaea L.) por diferentes metodologias analíticas in vitro e in situ, para verificação de efeito em sistemas biológicos. O extrato foi obtido a partir de folhas secas de oliveira, previamente micronizadas, em metanol/água (80/20%) na proporção 1:20 (m/v), após remoção de compostos solúveis em n-hexano. Após liofilização, no EFO foi avaliado o poder redutor por Folin-Ciocalteau, conteúdo de flavonoides totais, teor de oleuropeina, poder de redução do íon férrico (FRAP) e atividade antioxidante sobre DPPHo, ABTSo+, ânion superóxido (O2o-), ácido hipocloroso (HOCl) e óxido nítrico (NOo). O extrato foi também avaliado quanto ao efeito protetor sobre danos oxidativos em eritrócitos humanos. O ácido ascórbico foi utilizado como referência. O experimento foi repetido seis vezes (n = 6) e os ensaios realizados em duplicata. O poder redutor do extrato e o conteúdo de flavonoides totais e oleuropeína foram 131,7 ± 9,4 mg equivalente de ácido gálico/g extrato seco (ms), 19,4 ± 1,3 mg equivalente de quercetina/g ms e 25,5 ± 5,2 mg oleuropeína/g ms, respectivamente. O ensaio de FRAP apresentou 281,8 ± 22,8 mg equivalente de trolox/g ms. O EFO foi efetivo na inibição dos radicais DPPHo e ABTSo+, dependente da concentração de extrato, com valores de IC50 de 13,8 ± 0,8 e 16,1 ± 1,2 µg/mL, respectivamente. Com relação à atividade antioxidante sobre espécies reativas de importância biológica, o EFO apresentou forte capacidade de inibição de O2o- (IC50 = 52,6 ± 2,1 µg/mL) e NOo (IC50 = 48,4 ± 6,8 µg/mL), quando comparado ao ácido ascórbico. Porém, a inibição de HOCl não foi tão eficiente (IC50 = 714,1 ± 31,4 µg/mL). O EFO inibiu a hemólise induzida em eritrócitos de maneira dependente da concentração (IC50 = 7,8 ± 1,1 µg/mL), assim como a peroxidação lipídica e a formação de meta-hemoglobina, com valores de IC50 de 38,0 ± 11,7 e 186,3 ± 29,7 µg/mL, respectivamente. Os resultados obtidos neste estudo sugerem que extrato de folhas de oliveira possui efetiva atividade antioxidante em sistemas biológicos, pelo efeito sequestrador de determinadas espécies reativas que participam dos processos bioquímicos, e pela prevenção de danos oxidativos em eritrócitos humanos. Portanto, sua ingestão pode estar relacionada com a prevenção de estresse oxidativo in vivo, com consequentes benefícios à saúde. / The aim of this study was to evaluate the antioxidant activity of olive leaf extract (OLE) (Olea europaea L.) by different in vitro and in situ analytical methodologies for determination of its effect in biological systems. The extract was obtained from dried olive leaves, previously micronized, in methanol/water (80/20%) in ratio 1:20 (w/v), after removal of n-hexane soluble compounds. After lyophilization, OLE was analyzed for reducing power by Folin-Ciocalteau, total flavonoid content, oleuropein content, ferric reducing antioxidant power (FRAP) and antioxidant activity against DPPHo, ABTSo+, superoxide anion (O2o-), hypochlorous acid (HOCl), and nitric oxide (NOo). The extract was also analyzed against oxidative damage in human erythrocytes. Ascorbic acid was used as reference. The experiment was repeated six times (n = 6) and the assays were performed in duplicate. The reducing power and total flavonoid and oleuropein contents of extract were 131.7 ± 9.4 mg galic acid equivalent/g dry extract (dw), 19.4 ± 1.3 mg quercetin equivalent/g dw, and 25.5 ± 5.2 mg oleuropein/g dw, respectively. The FRAP assay was 281.8 ± 22.8 mg trolox equivalent/g dw. The OLE was effective in inhibition of DPPHo and ABTSo+ radicals, in a concentration dependent manner, with IC50 values of 13.8 ± 0.8 and 16.1 ± 1.2 µg/mL, respectively. In relation to the antioxidant activity against reactive species of biological importance, the OLE showed high ability to inhibit O2o- (IC50 = 52.6 ± 2.1 µg/mL) and NOo (IC50 = 48.4 ± 6.8 µg/mL), when compared to ascorbic acid. However, inhibition of HOCl was not as efficient (IC50 = 714.1 ± 31.4 µg/mL). The OLE inhibited induced erythrocyte hemolysis in a concentration dependent manner (IC50 = 7.8 ± 1.1 µg/mL) as well as lipid peroxidation and the formation of methemoglobin, with IC50 values of 38.0 ± 11.7 and 186.3 ± 29.7 µg/mL, respectively. The results suggest that olive leaf extract has effective antioxidant activity in biological systems, based on its scavenging effect of certain reactive species that participate in biochemical processes, and the prevention of oxidative damage in human erythrocytes. So, the intake of olive leaf extract may be related to the prevention of in vivo oxidative stress, with health benefits.

O veneno de aranhas Loxosceles consiste em uma mistura de proteínas com atividade enzimática ou tóxica, incluindo as esfingomielinases D (SMases D), consideradas como os principais componentes tóxicos do veneno, responsáveis pelo estabelecimento dos efeitos locais e sistêmicos. O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial inibitório de moléculas selecionadas por docking molecular sobre as propriedades tóxicas das SMases D. Os dados obtidos mostram que as moléculas selecionadas foram capazes de inibir a atividade hidrolítica da toxina, o mecanismo de hemólise dependente de complemento e eficazes no controle da progressão das lesões dermonecróticas em coelhos. Estes resultados indicam que inibidores específicos para as SMases D são capazes de controlar as reações locais e sistêmicas induzidas pelo veneno de Loxosceles. Estas são ferramentas promissoras para estudos de estrutura/função e para o desenvolvimento de novas intervenções terapêuticas para o loxoscelismo. / Loxosceles spider venom is a mixture of proteins with enzymatic or toxic activity, including sphingomyelinases D (SMases D), considered as the main toxic components of the venom responsible for the establishment of local and systemic effects. This study aimed to evaluate the inhibitory potential of molecules selected by molecular docking on the toxic properties of SMases D. The results demonstrated that selected molecules were able to inhibit the hydrolytic activity of the toxin, the mechanism of complement-dependent hemolysis and effective in reducing the progression of the dermonecrotic lesion in rabbits. These results indicate that specific inhibitors for SMases D are capable of controlling local and systemic reactions induced by Loxosceles venom. These are promising tools for function/structure studies and for developing new therapeutic interventions for the loxoscelism.

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No. of bitstreams: 1 PDF - Nathália Alexandra de Oliveira Cartaxo.pdf: 1587194 bytes, checksum: 60766da222502f8476607dd32500b432 (MD5) Previous issue date: 2014-04-22 / The aim of this study was to characterize the vegetable raw material, as well as analyze the phytochemical profile, cytotoxicity and antimicrobial activity of the leaf extract of Syzygium cumini (L.) Skeel on microorganisms associated with dental biofilm. The characterization was performed by the determination of physicochemical properties: particle size, apparent uncompressed density, pH, ash content and loss on drying powder of Syzygium cumini plant drug L. Skeels and application of analytical techniques (electron microscopy scanning, thermal analysis - Differential scanning calorimetry (DSC) and Termogravimetry (TG), X-ray diffraction and infrared spectroscopy) to characterize and implement a quality control of the lyophilized extract of leaves jambolan, which has antimicrobial property. In addition, was determined the antimicrobial activity of the extract of Syzygium cumini (L.) Skeel on microorganisms associated with dental plaque, as well as the phytochemical profile and cytotoxicity. The antimicrobial activity was performed by microdilution broth. Was determined Minimum Inhibitory Concentration (MIC), Minimum Bactericidal Concentration (MBC) and Minimum Fungicidal Concentration (MFC) of the lyophilized extract against Streptococcus mutans (ATCC 25175), Streptococcus parasanguis (ATCC 903), Streptococcus oralis (ATCC 10557), Streptococcus salivarius (ATCC 7073) and Candida albicans (ATCC 10231). Phytochemical analysis was performed by spectroscopy in the visible region and was quantified polyphenols, flavonoids, condensed tannins and total saponins. Cytotoxicity was measured by the hemolysis method. The results demonstrate that particle size of the powder leaves of S. cumini is thick, the pH is acidic and has good density. The ash content and loss on drying were within the parameters recommended by the Pharmacopoeia. The analysis of the extract showed a typical feature of plant extracts, in other words, the particles showed amorphous property. Furthermore, such particles could be observed in the microscopy irregularly shaped, forming agglomerates of different sizes and morphology. In thermal characterization of the extract, five events of decomposition, presented by TG and DSC curves occurred; this had endothermic characteristic. The IR spectrum suggested various functional groups of compounds present in the lyophilized extract in different absorption bands.For Streptococcus, S. cumini was only active against S. mutans and S. oralis (MIC 1mg/mL).The extract showed potential antifungal activity against C. albicans, demonstrating strong fungistatic and fungicidal activity. The quantification of secondary metabolites obtained satisfactory results, especially with high concentrations of total polyphenols and saponins. The extract showed low cytotoxicity. Therefore, the profile of leaves of S. cumini was drawn, showing up in general good physico-chemical, chemical and thermal characteristics. S. cumini has a good antimicrobial potential, with acceptable levels of phytochemicals and compounds with low cytotoxicity and is therefore recommended for use with safety and efficacy in the prevention and treatment of diseases resulting biofilm. / O objetivo desse estudo foi caracterizar a matéria prima vegetal, bem como analisar o perfil fitoquímico, a citotoxicidade e a atividade antimicrobiana do extrato de folhas de Syzygium cumini (L.) Skeel sobre microrganismos associados ao biofilme dental. A caracterização foi realizada por meio da determinação de propriedades físicoquímicas: granulometria, densidade aparente não compactada, pH, teor de cinzas e teor de água do pó da droga vegetal de Syzygium cumini L. Skeels e aplicação de técnicas analíticas (microscopia eletrônica de varredura, análise térmica– Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC) e Termogravimetria (TG), difração de raio-X e espectroscopia de infravermelho - IV) para caracterizar e verificar a autenticidade do extrato liofilizado de folhas de jambolão, que possui propriedade antimicrobiana. Além disso, determinou-se a atividade antimicrobiana do extrato de Syzygium cumini(L.) Skeel sobre microrganismos associados ao biofilme dental, assim como o perfil fitoquímico e a citotoxicidade. A atividade antimicrobiana foi realizada através da técnica de microdiluição em caldo. Determinou-se a Concentração Inibitória Mínima (CIM), Concentração Bactericida Mínima (CBM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) do extrato liofilizado frente a Streptococcus mutans (ATCC 25175), Streptococcus parasanguis (ATCC 903), Streptococcus oralis (ATCC 10557), Streptococcus salivarius (ATCC 7073) e Candida albicans (ATCC 10231). A análise fitoquímica foi realizada por espectroscopia na região visível e quantificou-se polifenóis, flavonóides, taninos condensados e saponinas totais. A citotoxicidade foi realizada pelo método de hemólise. Os resultados de granulometria demonstram que o pó de folhas de S. cumini é grosso, apresenta boa densidade e o pH é ácido. O teor de cinzas e o teor de água estiveram dentro dos parâmetros preconizados pela Farmacopeia. A análise do extrato mostrou uma característica típica de extratos vegetais, ou seja, as partículas apresentaram propriedade amorfa. Além disso, essas partículas puderam ser observadas nas microscopias com formatos irregulares, formando aglomerados de diferentes tamanhos e morfologia. Na caracterização térmica do extrato, ocorreram cinco eventos térmicos, apresentados por curvas de DSC e TG, de caráter endotérmico. O espectro de IV sugeriu diversos grupos funcionais dos compostos presentes no extrato liofilizado, em distintas bandas de absorção. Para Streptococcus, Syzygium cumini só foi ativo frente a Streptococcus mutans e aStreptococcus oralis(CIM de 1mg/mL). O extrato apresentou grande potencial antifúngico sobre C. albicans, demonstrando forte atividade fungistática e fungicida. A quantificação de metabólitos secundários obteve resultados satisfatórios, especialmente com altas concentrações de saponinas e polifenóis totais. O extrato apresentou baixa citotoxicidade. Portanto, o perfil de folhas de S. cumini foi traçado, mostrando-se no geral com boas características físico-químicas, químicas e térmicas. S. cumini é uma planta com bom potencial antimicrobiano, com aceitáveis concentrações de compostos fitoquímicos e com baixa citotoxicidade, sendo por isso recomendada a sua utilização com segurança e eficácia na prevenção e tratamento de doenças decorrentes do biofilme dental.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 530480 bytes, checksum: 56489dd34103dd0c6bf8b9c5101d98cb (MD5) Previous issue date: 2011-10-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Natural products represent a rich source of biologically active compounds and are an example of molecular diversity, with recognized potential in the discovery and development of new drugs The genus Mimosa is distributed in various environments and various types of vegetation in tropical regions. In northeast Brazil can be found in the state of Bahia, Pernambuco and Paraíba. Many species of Mimosa are economically important, however, few biological studies of plants of this kind were carried out so far, with proven antibacterial and allelopathic activity. Therefore, the objective of this study was to evaluate the cytotoxic and genotoxic activities of the species M. arenosa (Willd.) Poir. tannins. The minimum inhibitory concentration (MIC) obtained for Pseudomonas aeruginosa ATCC 8027 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619 was 1000μg, for Bacillus subtilis ATCC 0516 and Escherichia coli ATCC 2536 MIC was 500μg, as to the strains of Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus aureus ATCC 25925 and Escherichia coli ATCC 10536 the amount of tannin required to inhibit the growth of these bacteria was 250μg. The antibacterial activity exerted by Mimosa arenosa tannins against all strains tested was bacteriostatic. In the evaluation of cytotoxicity in any of the tested concentrations of tannins M. arenosa no caused significant hemolysis of red cells in any of the blood groups tested. However, the tannins were unable to protect the erythrocyte cells when exposed to hypotonic salt solutions. The tannins were not affected in any of the oxidant concentrations tested but they have reduced the oxidation of hemoglobin when exposed to an oxidizing agent. The tannins were not able to induce mutations but showed antimutagenic effect in strains of S. thyphimurium. Tannins did not induce structural cromossomal damage and/or numerical in erythrocytes of mouse. / Os produtos naturais representam uma rica fonte de compostos biologicamente ativos e são um exemplo de diversidade molecular, com reconhecido potencial na descoberta e desenvolvimento de novos medicamentos. O gênero Mimosa se distribui nos mais variados ambientes e nos diversos tipos de vegetação das regiões tropicais. No nordeste do Brasil pode ser encontrado nos estados da Bahia, Pernambuco e Paraíba. Muitas espécies de Mimosa são economicamente importantes, no entanto, poucos estudos biológicos de plantas desse gênero foram realizados ate o momento, sendo comprovadas atividade antimicrobiana e alelopática. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar as atividades citotóxica e genotóxica de taninos da espécie Mimosa arenosa (Willd.) Poir. A concentração inibitória mínima (CIM) obtida para Pseudomonas aeruginosa ATCC 8027 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 25619 foi 1000μg, para Bacillus subtilis ATCC 0516 e Escherichia coli ATCC 2536 a CIM foi de 500μg, já para as linhagens de Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus aureus ATCC 25925 e Escherichia coli ATCC 10536 a quantidade necessária de taninos para inibir o crescimento dessas bactérias foi de 250μg. A atividade antibacteriana exercida pelos taninos de M. arenosa frente a todas as linhagens testadas foi bacteriostática. Na avaliação de citotoxicidade, em nenhumas das concentrações testadas, os taninos de M. arenosa causaram hemólise significativa dos eritrócitos em nenhum dos grupos sanguineos testados. Entretanto, os taninos não conseguiram proteger as células eritrocitárias quando expostas a soluções hipotônicas de sal. Os taninos não apresentaram efeito oxidante em nenhuma das concentrações testadas, entretanto estes conseguiram reduzir a oxidação da hemoglobina quando expostas a um agente oxidante. Os taninos não foram capazes de induzir mutações, porém apresentaram efeito antimutagênico em linhagens de S. thyphimurium e também não promoveram dano cromossômico estrutural e/ou numérico em eritrócitos de camundongo in vivo .

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-05T20:42:15Z No. of bitstreams: 1 Bruno Antonio Veloso Cerqueira Inflamação, hemólise e ativação celular....pdf: 113176346 bytes, checksum: 334b7eba1166d09c726b10fc80dc284d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-05T20:42:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruno Antonio Veloso Cerqueira Inflamação, hemólise e ativação celular....pdf: 113176346 bytes, checksum: 334b7eba1166d09c726b10fc80dc284d (MD5) Previous issue date: 2011 / Universidade Federal da Bahia. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A anemia falciforme (AF) é uma desordem genética caracterizada por hemólise, estresse oxidativo, infecções recorrentes, estado inflamatório crônico e eventos de oclusão vascular, com ocorrência de crises de dor, danos teciduais e possibilidade de óbito precoce. Os eventos vasculares na AF envolvem a participação de hemácias, leucócitos, células endoteliais, plaquetas, fatores da coagulação e proteínas plasmáticas. Neste estudo, avaliou-se o papel de marcadores hematológicos, de hemólise, inflamação e de ativação celular na fisiopatologia da ativação endotelial na AF. Foi realizado um estudo de corte transversal, seguido por caso-controle. Quarenta e cinco (45) indivíduos com AF em estado estável, com idade média 20,5 anos participaram do estudo. O perfil de hemoglobinas foi confirmado por HPLC. Os marcadores bioquímicos foram investigados por kits específicos; a expressão de moléculas na superfície dos leucócitos por citometria de fluxo e a quantificação de citocinas e moléculas de adesão solúveis por ELISA. Níveis elevados de lactato desidrogenase (LDH) e bilirrubinas foram associados a eventos de Síndrome Torácica Aguda e úlcera de perna, respectivamente. A leucocitose foi observada em pacientes com histórico de hepatomegalia e úlcera de perna. Os pacientes com histórico de terapia transfusional apresentaram concentrações aumentadas da aspartato aminotransferase (AST) e contagem de reticulócitos. Os níveis diminuídos de HDL estiveram associados a eventos de sequestro esplênico e esplenomegalia. A expressão do CD11b em neutrófilos, linfócitos e monócitos foi maior nos pacientes que nos controles; entretanto, a expressão do CD62L nos neutrófilos foi menor nos pacientes do que nos controles antes e após o desafio com o lipopolissacarídeo bacteriano (LPS). A expressão do CD11b e CD32 em neutrófilos teve correlação positiva com plaquetas e com o LDL, respectivamente. A expressão do CD62L em neutrófilos apresentou correlação negativa com plaquetas. A expressão do CD11b e CD18 em linfócitos teve correlação positiva com o ácido úrico e com a molécula de adesão vascular solúvel 1 (VCAM-1s), respectivamente. A expressão do CD62L em linfócitos foi negativamente correlacionada com o número de plaquetas, molécula de adesão intercelular solúvel 1 (ICAM-1s) e TNF-alfa. A expressão do CD32 em monócitos foi menor nos pacientes que nos controles e apresentou correlação negativa com a AST e hemoglobina S. A expressão reduzida do CD32 em monócitos de pacientes foi associada ao aumento da LDH, enquanto que a expressão do CD62L nessas células apresentou correlação positiva com o HDL e com as concentrações de hemoglobina. Os níveis de IL-18 e do ácido úrico foram associados a marcadores de hemólise, de disfunção endotelial e citocinas e podem representar a participação do complexo inflammasome. Os resultados apresentados sugerem o papel importante de biomarcadores na avaliação do perfil clínico de pacientes com AF, além de sugerir a provável influência de moléculas expressas na superfície de leucócitos, da IL-18 e do ácido úrico no processo inflamatório crônico e na gravidade clínica da AF. Acreditamos que a interação desses biomarcadores envolve processos complexos relacionados à hemólise, inflamação e ativação celular com importância na avaliação da gravidade dos eventos vasculares presentes na AF. Em conjunto, todos esses marcadores podem ser considerados como alvos terapêuticos promissores em intervenções clínicas futuras na doença. / Sickle cell anemia (SCA) is a common, severe monogenetic disorder characterized by chronic hemolysis, oxidative stress, frequent infections, a chronic inflammatory state and recurrent occlusions of the microcirculation, resulting in painful crises, organ damage and premature death. Vaso-occlusive episodes in SCA involve interactions between sickle red blood cells, endothelial cells, leukocytes, platelets, coagulation factors and plasma proteins. Herein, we evaluated the role of oxidative stress, inflammation and the profile of cell activation on pathophysiology of vascular occlusion in SCA. We conducted a cross-sectional study, followed by case control study. Forty-five SCA patients without general symptoms, median age 20.5 years, were included in this study. Hemoglobin profile was confirmed by HPLC; biochemical markers by biochemical kits; surface molecule expressions on leukocytes were determined by flow cytometry and the concentration of cytokines and soluble adhesion molecules were measured by ELISA kits. The increase serum levels of lactate dehydrogenase (LDH) and bilirubins were associated with acute thoracic syndrome and leg ulcer respectively. The clinic aspects like hepatomegaly and leg ulcer were associated with increase number of leukocyte. The blood transfusion therapy was associated positively with aspartate aminotransferase (AST) levels and reticulocytes number. The decreased levels of HDL-C were associated with splenic sequestration and splenectomy. The surface CD11b expression of neutrophils, lymphocyte and monocytes in patients was higher than in controls; however, CD62L expression on neutrophils was lower in patients than in controls before and after lipopolysaccharide (LPS) challenge. CD11b and CD32 expression level on neutrophils were positively correlated with platelet counts and LDL-C levels respectively. CD62L expression on neutrophils was negatively correlated with platelet counts. CD11b and CD18 expression levels on lymphocytes were positively correlated with uric acid and soluble vascular adhesion molecule 1(sVCAM-1) levels respectively. CD62L expression on lymphocyte was negatively correlated with platelet count, soluble intercellular adhesion molecule 1 (sICAM-1) and TNF-alpha levels. CD32 expression on monocytes in patients was lower than in controls, further correlated negatively with AST and hemoglobin S. Decrease CD32 expression on monocytes was associated with high LDH levels and CD62L expression was positively correlated with HDL-C and hemoglobin concentration. The IL-18 and uric acid plasma concentrations were correlated closely with markers of hemolysis, endothelial dysfunction and cytokine levels, possibly representing the participation of inflammasome complex. We believe that the interaction of these biomarkers involve complex processes related to hemolysis, inflammation and cellular activation with importance in assessing severity of the vascular events on the SCA. So, together, all these biomarkers can be considered as promising therapeutic targets in future clinical interventions in SCA

Made available in DSpace on 2014-07-28T18:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 105.pdf: 763272 bytes, checksum: 5b08e5b3e276180cfde228711ff06a51 (MD5) Previous issue date: 2008 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 105.pdf: 763272 bytes, checksum: 5b08e5b3e276180cfde228711ff06a51 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A sociedade científica mundial vem sofrendo pressão para que seja efetuada a substituição de ensaios in vivo por ensaios in vitro, sendo o teste de irritação ocular de Draize um dos testes in vivo mais fortemente combatidos pelos setores ativistas que lutam pela promoção e preservação do bem estar animal. Como a substituição do teste de Draize por metodologia alternativa se mostrou tarefa mais difícil do que se imaginava inicialmente, sobretudo devido ao grande número de desfechos que esta metodologia quantifica, as agências internacionais de validação de metodologia alternativas adotaram como conduta a busca por uma bateria de ensaios in vitro que possam servir de triagem para avaliação do potencial irritante ocular de produtos e ingredientes. Neste caso, o uso de animais só é recomendado, quando os resultados obtidos in vitro sugerem um baixo potencial irritante. Neste contexto, o presente estudo objetivou avaliar o grau de preditibilidade do método de Quantificação de Proteínas Totais (QPT) na avaliação do potencial citotóxico de tensoativos (N=6) e produtos cosméticos acabados (xampus e condicionadores, N=19). Todos os produtos avaliados no presente estudo foram previamente analisados quanto ao seu potencial irritante pela metodologia in vivo. O teste in vitro foi realizado utilizando linhagem celular proveniente de fibroblasto de embrião de camundongo (3T3) e o corante Azul Brilhante de Coomassie R-250. A avaliação do coeficiente de variação do teste de QPT em células 3T3 mostrou um valor de CV por cento global de 30,00 por cento. Para a comparação entre os resultados in vivo (MEM) e in vitro (IC50) utilizamos o coeficiente de correlação de Pearson. / The world scientific community is under pressure to find effective ways to substitute in vivo by in vitro tests. The Draize Eye Test is one of the most disapproved in vivo tests by the animal welfare activists. Since the substitution of the Draize Eye Test by an alternative method turned out to be a more difficult issue than it was first thought, mainly due to the great number of endpoints that this assay is able to quantify, the international validation agencies for alternative methods adopted, as a conduct, the search for a set of in vitro assays, which might work as a screening for the evaluation of the ocular irritant potential of products and ingredients. The use of animals would only be recommended if the results obtained with the in vitro screening tests indicate a low irritant potential for a determined substance. In this context, the main goal of the present study was to evaluate the degree of predictability of the Total Protein Quantification Methodology (QPT) in the evaluation of the citotoxic potential of surfactants (n=6) as well as in cosmetics (shampoos and hair conditioners, n=19). All the evaluated products in this study were previously analyzed in vivo, regarding their irritant potential. The in vitro test was performed using a cellular lineage derived from embryo mouse fibroblast (3T3) and the dye Blue Brilhant of Coomassie – R 250. The evaluation of the test variation coefficient (CV%) in 3T3 cells demonstrated a global CV% of 30%. In order to compare the in vivo (MMS) results with the ones obtained in vitro (IC50), we applied the Pearson´s coefficient of correlation. The value obtained for the correlation between the two methods was –0.420 (p=0.022). The analysis of the IC50 and MMS values of the different ocular structures showed a better correlation of the in vitro method with the injuries on the conjunctive, than with the damage found on the iris or cornea in vivo. Furthermore, an enhanced correlation of the in vitro versus in vivo method was observed for surfactants, when compared to whole products. In order to evaluate the predictability of the in vitro test in regard to the in vivo method a cut-off point was established, where substances with values of IC50<1 mg/ml were determined as irritant and substances with levels of IC50 higher then 1mg/ml were considered as non-irritant. Hence, under the experimental conditions of the present study, the assay accuracy was of 80%, the sensibility was 94% and the specificity was of 43%. Based on the results obtained we conclude that the QPT method, using Dye Blue Brilliant of Comassie R-250 and the cellular lineage 3T3, shows a better ability to predict the irritant potential of isolated products (surfactants) than of entire products. Even though the global CV% value found with our in vitro method, according to WHO, is considered suitable for assays performed with cell lines, the comparison of our results with the published data shows that the SIRC cell line is more interesting once considering inter-assay accuracy. We also conclude that the proposed assay has a better capacity to predict the irritant effect on the conjunctive than on the other ocular structures. At last, it is worth pointing out that this method shows a high sensibility degree and moderate level of specificity, and the application of the QPT assay may be useful to add the screening set assays for the evaluation of toxicity induced by products under the scope of Sanitary Surveillance.