Orientador: Irene Lorand-Metze / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T06:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_Elisangela_D.pdf: 5950588 bytes, checksum: d00f171d21ca1cf1430070e17e34ace6 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Síndromes Mielodisplásicas (SMDs) são desordens clonais da célula precursora hematopoética pluripotencial caracterizadas por alterações na proliferação e maturação celulares e presença de apoptose medular excessiva. Alterações cariotípicas na mielodisplasia são comuns. Apesar dos critérios de diagnóstico estarem bem estabelecidos, o uso da citometia de fluxo (CF) no estudo desta doença tem sido muito explorado, pois desordens não-clonais (DNCs), que também apresentam citopenias periféricas, podem dificultar o diagnóstico. Populações eritroblástica, granulocítica, monocítica, linfóide e blástica em medula óssea (MO) de pacientes com SMD foram estudadas e comparadas à MO normal (doadores para transplante de MO) e às DNCs. Foram incluídos no estudo 32 casos de SMD (20 AR, 05 ARSA, 07 AREB), 11 controles normais e 10 pacientes com DNCs confirmadas. Selecionamos as populações celulares pelo dot plot CD45/side scatter (SSC). A análise quantitativa dos marcadores eritroblásticos CD71 e Glicoforina A (GlyA); granulocíticos e monocíticos CDllb, CD13, CDI6, CDI0 e CD64; linfóide CDI9, CD3, CD4, CD8 e CDI6; além do precursor CD34 e o pan leucocitário CD45, foi obtida através da intensidade média de fluorescência (IMF). A granularidade citoplasmática das células granulocíticas foi observada pela baixa IMF do SSC. Mielopoiese, presença de aberrações fenotípicas e o padrão maturacional também foram avaliados nestas células. Todos os pacientes com SMD tiveram algum tipo de alteração nas populações avaliadas pela CF. Os eritroblastos apresentaram perfil maturacional alterado em 20 casos (64,4%) e os monócitos em 22 (68,7%). Os granulócitos em 7 casos tiveram 1 anormalidade imunofenotípica, em 9 pacientes houve 2, em 9 casos 3 e em 2 pacientes 4 expressões anormais foram encontradas. O SSC esteve alterado em 7 casos (23%), os perfis do CDI6/CDl1b e CDI6/CD13 em 18 (56,2%) e 20 casos (66%), respectivamente, , o CD13 em 22 (73%), o CDllb em 17 (56%), , o CD16 em 11 (36%), o CD45 em 17 (56%), e por fim a deficiência do CDlO encontrada em 3 casos (10,3%). Assincronismo maturacional na população granulocítica foi encontrado enquanto nasDNCs a maturação granulocítica foi mantida. Os monócitos tiveram número aumentado tanto nos pacientes com SMD quanto nos com DNCs. A expressão do SSC, CD13 e CDl1b foram similares nos 3 grupos. CD64 esteve aumentado nos 2 grupos de pacientes enquanto o CD16 apenas na SMD. O CD45 esteve diminuído somente no grupo das DNCs. Os linfócitos B nos pacientes AREB tiveram uma diminuição intensa em relação aos outros subtipos FAR A maturação B está comprometida na SMD tanto numericamente quanto na expressão antigênica dos grupos de baixo e alto risco. Uma aberração fenotípica CD19+/cCD79a-foi encontrada nas células B na SMD mas não nos controles. As células T não tiveram alterações consideráveis. Os mieloblastos foram analisados nos dot plots CD16/CD11b e CD16/CD13 e CD34. Houve uma correlação entre a porcentagem de blastos visualizados pela morfologia (mielograma) com os do dot plot CD16/CD13 e número de células CD34 positivas, mas não com aqueles quantificados pelo dot plot CD16/CDllb. A técnica da CF pôde demonstrar presença de assincronismo maturacional, aberrações fenotípicas, granulopoiese alterada e utilidade na detecção de anormalidades imunofenotípicas na SMD. Além disso, possibilita monitorar a evolução da doença, observada pelo aumento de blastos na MO, e é capaz de diferenciar a SMD das citopenias periféricas não-clonais / Abstract: Myelodysplastic syndromes (MDSs) are characterized by abnormalities in proliferation, apoptosis and maturation of the hemopoietic cell lines. MDS is known by bone marrow (BM) celIs abnormalities identified by morphology. Although MDS diagnostic criteria are well established, flow cytometry (FCM) technique has been explored. Even so, non-clonal disorders that present periphera1 cytopenias such as MDS can difficult the diagnostic, mainly in MDS cases with normal karyotype. lnitially, we analyzed the erythroid, granulocytic and monocytic lineages maturation patterns, and the blastic population in BM from patients with MDS and compared them with normal BM (BM transplantation donors) and patients with pancytopenia due to non-clonal diseases (NCD). MDS are considered as hematopoietic myeloid stem celIs clonal disorders. However, accumulating evidence support that more immature stem celI, which has ability to differentiate into both myeloid and lymphoid celIs, could origin the disease. BM cell populations were separated in CD45/side scatter (SSC) plot. Staining intensity quantitative pattems assessment for CD45, CDI6, CD13, CDllb, CDIO, CD34 and CD64 were performed in 32 MDS BM cases and compared with 10 non-clonal diseases and 11 contrals. Granulocytic and monocyticabnormalities were identified per case and with 2 or more detected alterations. Antigenic expression pattems were determined during maturation. CDI6/CDI3, CD16/CDllb and CDIO/CD64plots were used for monitoring of granulocyte maturation and monocytic celIs, CD711GlyA for erythroblastic population and CD34+/SSC for blasts cells. Mostly MDS patients presented some kind of expression abnonnalities: 7 (23%) low SSC, 18 (56.2%) CD16/CDllb and 20 (66%) CDI6/CD13 abnonnal pattems, 1I (36%) CD16, 22 (73%) CD13, 17 (56%) CDllb, 17 (56%) CD45, 3 (10.3%) CDIO deficiency. Monocytes were increased in both MDS and NCD, but increase in expression of CDI6 occurred exclusively in MDS. The monocytes had similar expression in SSC, CD13 and CDllb among 3 groups. CD64 had increased in both patients groups but the CD45 was decreased more pronounciated in NCD. Asynchronous maturation was found in MDS patients, but was maintained in .NCD. Several abnormalities in CD71/Gly A expression were found in erythroblasts in MDS, but they were normal in NCD. Neither GlyA nor CD71 deficiency were observed in NCD. Myeloblastic celIs were analyzed in the CD16/CDllb and CDI6/CDI3 dot plots and CD34 expression. There was positive correlation between blasts percentage with CDI6/CD13 dot plot and absolut number of CD34 positive celIs, but not with those quantified by CDI6/CDllb dot plot. Ongoing the study, specific enumeration and characterization of CD34+/CDI9+ and CD34-/CDI9+ B-cell precursors and mature B-Iymphocytes was performed in all MDS cases by multiparameter FCM. Both quantitative and qualitative immunophenotypic abnormalities involving BM B-cells were shown in B population. CDI9+/cCD79a- phenotype asynchronous antigen expression was detected on CD34+ B-cell precursors but only when detectable levels of those precursos were shown in the MDS BM. There were not any considerable abnormalities for T lymphocytes. Abnormal B-cell maturation in MDS patients were shown by imunophenotypic evidences, and further investigations shall be used to undertand its nature. Concluding, FCM is an useful toei for differential diagnosis between donal and non-clonal disorders / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T23:55:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marques_VanessaAlvesArruda_D.pdf: 1717936 bytes, checksum: 37ac1f747e37b8fb133778d014bd61d5 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Com os recentes progressos na compreensão dos complexos mecanismos moleculares relacionados a diferentes aspectos da modulação imunológica, cada vez mais vem se tornando possível ampliar os conhecimentos acerca das potenciais interferências do ponto de vista imunopatogênico induzidas pela presença e evolução tanto de processos infecciosos quanto tumorais. Modelos experimentais vêm sendo desenvolvidos e aprimorados com a finalidade de criar condições controladas para avaliações de diferentes aspectos relativos a potenciais modificações no comportamento imunológico de linhagens celulares frente à ação de novos agentes. O modelo do Tumor Ascítico de Erlich apresentou-se como uma opção de interesse, uma vez que os conhecimentos experimentais sobre diferentes aspectos relativos a sua manipulação já fazem parte de consagrada linha de pesquisa nacional. Um dos comportamentos mais recentemente estudados a seu respeito se refere a condições onde ocorre a migração do fenótipo Th1 para Th2, relacionadas ao agravamento da doença. A busca de fontes naturais para conhecimento e aplicação de novos princípios ativos vem se caracterizando como uma das mais promissoras soluções do ponto de vista farmacêutico, e pode corresponder a uma importante área de exploração da biodiversidade nacional. Dessa forma, a proposta do presente estudo foi, unindo linhas de pesquisa bastante consolidadas e conhecimentos relativos à nossa biodiversidade, avaliar o potencial terapêutico, com foco em abordagens imunopatológicas, do extrato da planta Tabebuia avellanedae (ETA) através do modelo experimental Tumor ascítico de Ehrlich. Neste trabalho investigamos os efeitos do ETA e seu constituinte isolado, a ß-lapachona (ß-lap), sobre o crescimento e diferenciação de progenitores hematopoéticos [células formadoras de colônias de granulócitos e macrófagos (CFU-GM)], a capacidade funcional das células ¿Natural Killer¿(NK) e a produção das citocinas do perfil Th1 [fator de necrose tumoral- a (TNF-a ) e interferon- ? (IFN-?)] e do perfil Th2 [interleucina (IL)-10] de animais normais e portadores do TAE. Como esperado, o TAE produziu, concomitante à mielosupressão, um aumento no número de CFU-GM esplênico. O tratamento destes animais com a dose de 120mg/kg de ETA, administrado por 7 dias após a inoculação do tumor, demonstrou uma maior eficácia, produzindo aumento na mielopoiese, redução no numero de colônias esplênicas e reversão dos fatores estimuladores de colônias (CSF) induzidos pelo TAE. Além disso, esta dose de ETA produziu a melhor eficácia na sobrevida de animais portadores do TAE, aumentando em 42% a duração da sobrevida. No entanto, doses de 30 e 500mg/kg não afetaram a mielosupressão e a hematopoese extramedular induzidas pelo tumor. O tratamento dos animais portadores do TAE com 1, 2 ou 5mg/kg de ß-lap por 3 dias após a inoculação do tumor resultou em um padrão semelhante de dose resposta, sendo a mielosupressão prevenida apenas com a dose de 1mg/kg. Interessante observar que esta dose prolongou a duração na sobrevida de animais portadores do TAE de maneira similar à dose mais eficaz do ETA, ambos em 42%. Nosso estudo também demonstrou importantes diferenças entre os tratamentos com ETA e ß-lap. Neste sentido, animais normais tratados com 2 e 5mg/kg de ß-lap apresentaram hematopoese extramedular, respectivamente 2 e 3 vezes maior que o CFU-GM de animais normais. Além disso, uma drástica mielosupressão foi observada após tratamento com ß-lap 5mg/kg, atingindo valores similares aos observados nos animais portadores do TAE e não tratados. Quanto à produção de citocinas, o tratamento com 120mg/kg de ETA impediu a polarização Th1-Th2 encontrada nos animais portadores do TAE. Neste sentido, o tratamento destes animais aumentou os níveis de secreção de TNF-a e IFN-? e reduziu os níveis de IL-10, aumentados durante a evolução temporal do TAE. O estudo da atividade funcional das células NK em animais portadores do tumor e tratados com EAT demonstrou um aumento na capacidade citotóxica das células NK, a qual se encontrava reduzida. O tratamento destes animais com ß-lap 1mg/kg impediu parcialmente a polarização Th1-Th2 em animais portadores, assim como demonstrou aumento parcial na capacidade citotóxica das células NK. Estes resultados sugerem que a eficácia antitumoral demonstrada pelo ETA pode estar relacionada com seu constituinte, a ß-lap. Por outro lado, a ausência de constituintes associados presentes no extrato bruto pode ser responsável pelos efeitos inibitórios dose-dependentes deste composto na hematopoese de animais normais. A comparação entre efeitos de um extrato vegetal e um de seus constituintes ativos isolado é outro aspecto a ser considerado, sendo importante etapa no desenvolvimento de novos fármacos de origem vegetal / Abstract: In accordance with the recent progress in the understanding of immunological and molecular mechanisms related to the different aspects of immunological modulation, the improvement of knowledge about the potential interferences, at the immunopathogenic point of view, induced by the presence and evolution of infectious diseases or neoplastic process has increased. Experimental models have been developed and refined in order to create appropriate conditions to evaluate different aspects related to potential changes in the immunological behaviors of determinate cell lines with the presence of new pharmacological agents. The Ehrlich ascites tumor (EAT) model is an option of interest, since the accumulated experimental knowledge about its manipulation is part of a consolidated research line. One of its more recently studied behaviors is concerned with situations where the migration from Th1 to Th2 phenotype occurs, at the same time with the disease impairment. The search for new natural sources of pharmaceutical active principles and the careful and detailed studies about them, has been characterized as one of most promising therapeutic solutions at the moment, and would be seen as a strategic way to explore the national biodiversity. Therefore, the aim of the present study was to combine the well known techniques related to the Ehrlich ascites tumor changing behavior with a potential active principle from our botanical biodiversity, the Tabebuia avellanedae extract (TACE), in order to evaluate its immunological therapeutic potential. The effects of TACE and its isolated naphtoquinone, ß-lapachone (ß-lap), on the growth and differentiation of granulocyte-macrophage progenitor cells in normal and EAT-bearing mice were studied. Myelosupression concomitant with an increased number of spleen CFU-GM was observed in tumour-bearing mice. Treatment of these animals with the dose of 120mg/Kg TACE given for seven days after tumour inoculation elicited optimal modulatory effects on bone marrow formation and also produced a favourable response for the reduction of splenic haematopoiesis. Increased serum colony-stimulating activity induced by the tumour was also reversed with this dose-regimen. In addition, this dose-schedule showed the better efficacy in prolonging life span of EAT-bearing mice, with an extension of 42% in the duration of survival. Conversely, the doses of 30 and 500mg/kg hardly affected the myelosuppression and extramedular hematopoiesis induced by the tumor. Treatment of tumour-bearing mice with 1, 2 and 5mg/kg ß-lap given for 3 days after tumour inoculation resulted in a similar pattern of dose response, with tumour-induced myelosupression being prevented only with the 1mg/kg dose. Surprisingly, this dose-schedule prolonged the duration of survival by the same rate of 42% observed with the optimal dose of TACE. However, an important divergent response of ß-lap was its stimulating effect on the extramedular hematopoiesis of normal mice treated with the doses of 2 and 5mg/kg, which produced, respectively, 2 and 3-fold increases of CFU-GM in the spleen. In addition, in the group of normal mice exposed to the dose of 5mg/kg, a drastic reduction in the number of bone marrow CFU-GM was observed, reaching levels as low as those found in non-treated tumour bearers. We also investigated the effects of TACE and ß-lap on the natural killer cell activity (NK) and on Th1 [tumor necrosis factor- a (TNF-a ) and interferon- ? (IFN-?)] and Th2 [interleukin (IL)-10] responses in normal and EAT-bearing mice. Regarding the production of cytokines, the treatment with TACE blocked the Th1-Th2 polarization found during the EAT progression. In this respect, the treatment of these animals with TACE 120mg/kg increased the TNF-a and IFN-? levels and reduced the levels of IL-10, increased during the temporal evolution of EAT. In relation to the functional activity of NK cells, the treatment with this same dose of TACE enhanced the NK cell function, reduced during the EAT growth. The treatment of these animals with ß-lap 1mg/kg produced a significant, but partial response on NK cell activity on EAT-bearing mice. In this respect, this compound only partially increased the TNF-a and IFN-? levels and reduced the levels of IL-10, increased during the temporal evolution of EAT. These findings suggest that the antitumoral efficacy demonstrated by the crude extract of T. avellanedae might be related to its constituent, the ß-lapachone. On the other hand, the absence of the associated constituents present in the crude extract might be responsible for the dose-dependent inhibitory effect of this biosynthetic compound on normal murine hematopoiesis. The comparison between a total vegetal extract and some of its isolated compounds remain another significant aspect in phytochemical research, specially focused in new medicines discovery / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador : Mary Luci de Souza Queiroz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T16:26:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mirandola_Luciana_M.pdf: 9985145 bytes, checksum: 851a0f6ce0ca7bb51b8fc411415498d7 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Neste trabalho, investigamos os efeitos antitumorais de diferentes doses dos extratos hidroalcoólico, aquoso, butanólico e clorofórmico da Acanthospermum australe utilizando o modelo experimental de inoculação de células do tumor ascítico de Ehrlich. Os parâmetros avaliados consistiram do crescimento e diferenciação de células progenitoras hematopoiéticas da medula óssea e do baço para a série granulócito-macrófago (CFU-GM) e da sobrevida dos animais portadores do tumor e tratados com os diferentes extratos da A. australe. Para realização dos experimentos, inoculou-se o tumor na dose de 6x10 6células/animal. Iniciou-se, 24 horas após a inoculação, o tratamento com os diferentes extratos da A. australe, que consistiu da administração oral (gavagem) de diferentes doses (100, 500 ou 1000mg/kg)por 3 dias consecutivos. Vinte e quatro horas após a administração da última dose do extrato hidroalcoólico da A. australe observamos, no animal normal, não portador de tumor, um aumento no número de CFU-GM da medula óssea com as três doses, enquanto que após, a administração do extrato butanólico observamos um aumento no número de CFU-GM na medula apenas com as duas menores doses ou seja, 100 e 500mg/kg, em relação ao grupo de animais controle. Por outro lado, a administração dos extratos aquoso e clorofórmico não produziu nenhum efeito no número de CFU-GM na medula. Nenhuma alteração foi observada com os diferentes extratos no número de CFU-GM do baço, em relação ao controle não tratado. A inoculação do tumor nos animais produziu uma diminuição no número de CFU-GM na medula óssea e um aumento no número de CFU-GM no baço. Os animais inoculados com células tumorais e tratados com as 3 doses dos extratos da planta apresentaram uma proteção contra a mielossupressão. Essa proteção variou de acordo com o tipo de extrato e com a dose. No caso dos extratos hidroalcoólico e aquoso, as doses de 100 e 500mg/kg foram mais efetivas que a dose de 1000mg/k:gno quanto ao aumento da mielopoiese. Além disso, a administração do extrato hidroalcoólico, na dose de 500mg/kg produziu um efeito mieloestimulador significativamente maior, quando comparados com as doses de 100 e 1000mg/kg. As 3 doses dos extratos butanólico e clorofórmico também induziram a mielopoiese. No entanto, os efeitos produzidos pelas doses de 100 e 1000mg/kg foram significativamente inferiores que ao observado para a dose de 500mg/kg. Quanto à hematopoiese esplênica, observamos que, com as 3 doses dos diferentes extratos, o número de CFU-GM reduziu significativamente em relação aos animais portadores de TAE, porém níveis normais não foram atingidos. Nos animais inoculados com o tumor ascítico de Ehrlich observamos um aumento no peso do baço, que foi revertido pelo tratamento com os diferentes extratos da planta nas doses de 100, 500 e 1000mg/kg. O tratamento dos animais portadores do tumor com 500mg/kg dos extratos hidroalcoólico, aquoso, butanólico e clorofórmico da planta aumentou a sobrevida em 10%, 10%, 25% e 15%, respectivamente, diante da morte de 100% dos animais do grupo não tratado. As doses de 100 e 1000mg/kg dos quatros extratos não aumentaram a sobrevivência dos animais em relação aqueles não tratados. Os resultados obtidos neste trabalho, de que os extratos hidroalcoólico, aquoso, butanólico e clorofórmico da A. australe promovem proteção contra os efeitos causados pelo tumor sobre os precursores hematopoiéticos da medula óssea e do baço e são capazes de aumentar a sobrevida dos animais portadores do tumor, sugerem que a A. australe poderia proteger contra a mielossupressão provocada por agentes quimioterapêuticos usados na clínica, além de aumentar a resistência do hopedeiro.resistência do hospedeiro / Abstract: ln this work we have investigated the growth and differentiation of granulocyte/macrophage progenitor cells (CFU-GM) in the bone marrow and spleen of Ehrlich ascites tumour-bearing mice (EAT) treated with Acanthospermum australe extracts. Male BALB/c mice were inoculated intraperitoneally (i.p.) with 6 x 106viable tumor cells/mouse and 100, 500 or 1000mg/kgA. australe hidroalcoholic, aqueous, butanolic and chloroformic extracts were given orally, for 3 consecutive days. The bone marrow and spleen progenitor cells were collected 24 hours after the treatment and the growth and differentiation of colony-forming cells were studied by the donal culture ofhematopoietic cells in semi-solid medium. The number of bone marrow CFU-GM in normal mice treated with the three doses of the hidroalcoholic extract, as well as 100 and 500mg/kg doses of the butanolic extract was significant1yincreased above normallevels. On the other hand, treatment of normal mice with the three doses of the aqueous and chloroformic extracts produced no changes in the number of CFU-GM in bone marrow, when compared to the controls. No statistical differences were observed among the effects ofthe three doses 100, 500 and 1000mg/kg ofthe different extracts LofA. australe on the CFU-GM number in the spleen when compared with the control group. ln tumor-bearing mice, the total number of CFU-GM per femur was significantly reduced whereas in the spleen the number of these progenitors was dramatically increased. Treatment of these animaIs with the three doses of the four extracts reverted the medullar suppression and reduced the increased extramedullar hematopoiesis induced by the tumor. Although, the treatment with 100, 500 and 1000mg/kg of the four extracts reduced the number of CFU-GM in the spleen, these values have not retumed to normallevels. The administration of 100, 500 and 1000mg/kg of the hidroalcoholic and aqueous extracts caused a recovery in the number of bon e marrow CFU-GM, compared to the control and tumor-bearing groups. In addition, statistical difference was observed among the 3 treatment schedules. In relation to the butanolic and chloroformic extracts, the 500mg/kg dose was the most effective to recover the medullar hematopoiesis An increase in spleen weight of the tumor-inoculated animaIs was observed, reverted with the administration of 100, 500 and 1000mg/kg of the different extracts of A. australe. The survival rate of the animaIs was evaluated for 30 days after inoculation of EAT. Whereas all the untreated tumor-bearing mice died within 20 days. Survival rates of 10%, 10%, 25% and 15%, were observed with the administration of 500mg/kg of the hidroalcoholic, aqueous, butanolic and chloroformic extracts, respectively. Treatment ofthese animaIs with the different extracts at the doses of 100 and 1000mg/kgproduced no significant protective effects. These results demonstrated that Acanthospermum australe extracts promote protection against the effects caused by the tumor on the hematopoietic response in the bone marrow and the spleen and increase survival oftumor-bearing mice at a dose of500mg/kg ofall the extracts / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Claudia Brincoletto Trindade / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:34:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dieamant_GustavodeCampos_M.pdf: 13079941 bytes, checksum: 707f968d3cec2bc7423a09f1d5259293 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Avaliamos, neste trabalho, os efeitos da Geléia Real (GR) sobre o crescimento e diferenciação dos precursores hematopoiéticos da medula óssea e baço em animais infectados com Listeria monocytogenes. Além disso, a atividade estimuladora de colônias do soro, as alterações no peso do baço e a resistência dos animais frente a infecção também foram avaliados. Para tanto, camundongos BALB/c foram tratados profilaticamente, por um período de 7 dias consecutivos, com GR nas doses de 12S, 2S0, SOOe 7SO mg/Kg, por gavagem. Posteriormente, os animais foram infectados intraperitonealmente com uma dose subletal (1,Sx103 bactérias/animal) de Listeria monocytogenes. Para avaliarmos a resistência dos animais frente à infecção, realizamos uma curva de sobrevida utilizando uma dose letal desta bactéria (1,Sx105 bactérias/animal). Nossos resultados demonstraram um decréscimo significativo no número de precursores hematopoiéticos da medula óssea nos animais infectados com Listeria monocytogenes, além de uma significativa hematopoiése extramedular. No entanto, quando os animais foram tratados profilaticamente com GR, independentemente da dose administrada, houve uma reversão da mielossupressão induzida pela infecção, resultando em níveis normais de CFUGM. Outro aspecto importante é com relação à produção de fatores estimuladores de colônias de células hematopoiéticas. Neste sentido, observamos que os animais infectados apresentaram uma maior atividade estimuladora de colônias no soro. A administração prévia de GR, nas quatro doses avaliadas, nos animais infectados, aumentou significativamente a atividade estimuladora do soro, resultando em um aumento no número de CFU-GM em relação aos grupos apenas infectados. Além disso, observamos também, um aumento do peso do baço dos animais infectados, enquanto que valores normais foram obtidos quando os animais receberam GR antes da infecção, em todas as doses administradas. o tratamento com GR aumentou a resistência dos animais frente à listeriose, sendo que a probabilidade de sobrevida para as doses de 125, 250, 500 e 750 mg/Kg foi de 37,5, 37,5, 25 e 12,5%, respectivamente, não havendo diferenças estatisticamente significativas entre si. Nossos resultados sugerem que a GR possui uma potente atividade imunomoduladora, corroborando com resultados existentes na literatura e anteriormente obtidos em nosso laboratório. A ampla faixa terapêutica do composto frente à listeriose foi comprovada, visto que não houve uma alteração significativa entre as respostas imuno-hematopoiéticas nas doses avaliadas, sugerindo que mesmo em baixas concentrações, a GR é capaz de restaurar o sistema imunológico frente à infecção / Abstract: We evaluated in this work the effects of Royal Jelly (RJ) on growth and differentiation of bone marrow and spleen hematopoietics progenitors in Listeria monocytogenes (LM) infected mice. We also evaluated serum colonystimulating activity, alterations in spleen weight and animal resistance front to the infection. In such way, BALB/c mice were profilacticly treated with RJ by gavage for 7 consecutive days with doses at 125, 250, 500 and 750 mg/Kg. Three hours after the last treating day the animais were infected intraperitoneally with a sublethal dose of the bacteria (1x103 LM/animal). To evaluate animal resistance front to the infection we carried out a survival analysis with a lethal dose of the bacteria (1x105 LM/animal). Our results demonstrated significant decrease on the hematopoietic progenitor numbers in LM bearing mice and significant extramedullar hematopoiesis as consequence. In the other hand, myelossupression induced by listeriosis was reverted when bearing mice were treated profilacticly with ali doses of RJ, resulting in normal levels of CFU-GM. Another important aspect regards colony-stimulating factor production by hematopoietic cells. In this direction, we observed that the infected animais presented higher serum colony-stimulating activity. Previous administration of RJ at ali doses in infected mice significantly increased serum stimulatory activity as well as CFU-GM number when compared to non-treated bearing groups. We also observed spleen weight increase in the non-treated infected group at ali doses, which contrasted with normal values obtained in previously treated bearing mice. In addition, the administration of RJ at 125, 250, 500 and 750 mg/Kg increased animal resistance front to listeriosis to 37,5%, 37,5%, 25% and 12,5%, respectively. Our results have demonstrated that RJ has a stimulating effect on the modulation of the immuno-hematopoietic response in mice infected with LM. Moreover, the treatment with RJ increased survival rate in infected mice with lethal dose of the bacteria. We demonstrated that RJ presents extensive therapeutic dose range since the adminisitration of ali evaluated doses (125, 250, 500 and 750 mg/Kg) presented similar results / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Malacrida_SolangeAparecida_D.pdf: 2637555 bytes, checksum: 4cab03e4ab1ef1f1045bcc26432ea8fe (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Neste trabalho, investigamos o efeito do extrato de Maytenus i/icifolia Mart. ex Reissek (ES), sobre o crescimento e diferenciação de precursores hematopoeticos para granulócitos e macrófagos (CFU-GM) da medula óssea e do baço, a atividade estimuladora de colônias do soro de animais infectados com dose sub-Ietal (5xI03 BaclmL) de Listeria monocytogenes, a atividade das células "natural killer" (NK) e a produção de INF-y. Redução significativa no número de CFU-GM da medula óssea foi observada na fase inicial da infecção em paralelo a um aumento significativo na hematopoése esplênica. O tratamento dos camundongos, com as doses de 250, 500 e 1000 mgIKgldia por 5 dias anteriores .à infecção, estimulou a produção de CFU-GM na medula óssea, reduziu, aos níveis normais o número de CFU-GM no baço e aumentou a atividade hematopoética do soro. A presença da infecção estimulou a produção de IFN-y e a atividade lítica das células NK nestes animais, o tratamento com as três doses do extrato de ES utilizando-se o mesmo protocolo anterior, potencializou a produção de IFN-y e a atividade lítica das células NK, sendo este efeito mais marcante às 48 horas para as células NK e às 72 horas para o IFN-y . A avaliação da eficácia terapêutica do extrato de ES, avaliada através da resistência produzida em camundongos infectados com dose letal da bactéria (5xI05 BaclmL), demonstrou proteção de 40% com a dose de 1000 mglKg e 30% com a dose de 250 mgIKg, sendo que esta diferença entre as doses não foi significativa. Nossos resultados demonstram que o extrato de ES pode aumentar a resistência antibacteriana na listeriose através da geração de CFU-GM, da produção de IFN-y e do aumento na atividade lítica das células NK / Abstract: In this work, we have investigated the effects of Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek (ES) extract on the growth and differentiation of bone marrow and spleen granulocyte- macrophage progenitor cells (CFU-GM), serum colony stimulating activity (CSA), natural killer (NK) cell activity and IFN-y production in a Listeria monocytogenes infected mice.A significant rOOuction in the CFU-GM number was observed in the initial phase of the infection with sublethal dose of (5x103 baclrnL), in parallel to a signiticant increase in the spleen hematopoiesis. The treatment of mice with 250, 500 and 1000 mg/Kg/day ES extract for tive days prior to the infection stimulated bone marrow myelopoiesis, reduced to normal levels CFU-GM number in the spleen and increased the serum colony stimulating activity. The infection enhanced IFN-y levels and NK cell activity. Treatment with ES extract using the same dose schOOule presented above, 100 to further increases in IFN-y levels and NK cell activity. Peak levels of IFN-y was seen at 72 h after the infection and NK cell activity was mostly increased at 48 h after the infection. Evaluation of the therapeutic efficacy of the ES extract, evaluatOO by the resistence of infected mice exposed to letha1 dose of the bacteria (5x10s BaclmL), resulted in protection of 400.10 with dose of 1000 mg/Kg and of 30% with 250 mg/Kg. Difference between the doses was not significant. Our results show that ES extract can increase antibacterial resistance in the listeriosis by modulation of CFU- GM generation, increased IFN-y production and lytic NK cells activity / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Mary Luci de Souza Queiros / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T19:13:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bincoletto_Claudia_D.pdf: 4247184 bytes, checksum: a0026bf456d6bf0cd05ab5acf14add45 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Neste trabalho estudamos o crescimento e diferenciação dos precursores hematopoiéticos da medula óssea, na ausência de fatores estimuladores de colônias (autoproljferação) em vinte e oito pacientes com Leucemia Mielóide Aguda (LMA), doze pacientes com Síndrome Mielodisplásica (SMD) e dezenove controles (indivíduos normais). Os nossos resultados demonstraram que pacientes com LMA e SMD apresentam um aumento autócrino no número de colônias hematopoiéticas que é significativamente superior ao observado em indivíduos normais (p = 0.001). Além disso, verificamos que a presença de autoproliferação celular está associada a um mau prognóstico nas leucemias agudas, pois os pacientes com autoproliferação celular (n = 15) apresentaram uma sobrevida menor em relação aos pacientes com ausência de capacidade autoproliferativa (n = 13), (p = 0.01). O estudo da sobrevida celular, realizado através da caracterização morfológica por microscopia óptica de células apoptóticas, revelou um baixo índice de células apoptóticas em pacientes com LMA (n = 18, P = 0.001) em relação aos controles. Por outro lado, pacientes com SMD apresentaram um alto índice de apoptose celular quando comparado aos indivíduos normais (n = 11, p = 0.001). Em relação à expressão do proto-oncogene bcl-2, verificamos novamente resultados opostos entre os pacientes com LMA e SMD, pois observamos um alto índice de expressão do bcl-2 em células mononucleares de pacientes com LMA (n = 28, P = 0.002) em relação aos controles, e um baixo índice de expressão do proto-oncogene bcl-2 em células mono nucleares de pacientes com SMD (n = 15, p = 0.002). Além disso, verificamos uma correlação linear negativa entre a expressão do proto-oncogene bcl-2 e apoptose celular em pacientes com LMA (rs = - 0.664; P < 0.001). A elevada expressão do bcl-2 verificada nos pacientes com LMA também indica uma interferência deste proto-oncogene na resposta celular à quimioterapia, pois sua expressão estava significativamente maior em pacientes refratário& à quimioterapia (p = 0.03). Sendo assim, os resultados obtidos neste trabalho contribuem para uma melhor compreensão dos mecanismos envolvidos no processo de resistência celular à quimioterapia nos pacientes com LMA e também ajudam a esclarecer, pelo menos em parte, alguns processos envolvidos na hematopoiese desordenada nos casos de SMD / Abstract: In this work we studied the growth and differentiation of early bone marrow progenitor cells in the absence of exogenous growth factors (autonomous proliferation), the bcl-2 expression and the number of apoptotic cells in mononuclear bone marrow cells from patients with confirmed diagnosis of Acute Myeloid Leukaemia (AML) and Myelodysplastic Syndrome (MDS). Bone marrow cells from normal individuals were used as controls. We observed an increased percentage of bcl-2 expression on mononuclear bone marrow cells from AML patients in relation to controls (p = 0.002). Accordingly, the number of apoptotic cells was reduced (p = 0.001) and there was a negative correlation between bcl-2 expression and the number of apoptotic cells (r= - 0.664, P < 0.001) in these patients. In addition, bcl-2 expression was significantly increased in the chemotherapy resistant group in relation to the responsive group (p = 0.03). Survival in the group of AML patients with autonomous proliferation was reduced (p = 0.01). These results suggest that a high bcl-2 expression and the presence of autonomous proliferation are related with a poor prognosis in AML. In the MDS patients, the autonomous proliferation and the percentage of apoptotic cells were also significantly greater when compared to controls (p = 0.001). However, bcl-2 expression was significantly lower on mononuclear bone marrow cells from MDS patients In relation to normal individuals (p = 0.002 - Wilcoxon). These results suggest that the autonomous proliferation observed in these patients is counteracted by the high range of cell death which is probably related to the lower bcl-2 expression / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

O aumento da adiposidade corpórea pode gerar diversos mediadores inflamatórios com capacidade de influenciar a proliferação e a diferenciação hematopoética e, consequentemente, a complexa regulação da hematopoese. Por isso, propusemo-nos, neste trabalho, avaliar a influência do aumento da adiposidade corpórea sobre a proliferação e a diferenciação de células hematopoéticas, bem como sua capacidade em sintetizar citocinas. Ratos Wistar, machos foram alimentados com uma dieta rica em lipídios durante 14 semanas. Após esse período foram avaliados hemograma, mielograma, perfil lipídico, concentrações séricas de leptina, insulina e adiponectina. Citômetria de fluxo foi utilizada para avaliação da porcentagem de células CD34+/CD133+, bem como o ciclo celular de células medulares. Células medulares foram utilizadas para avaliar a atividade proliferativa in vitro e a capacidade de diferenciação, in vitro, na presença de IL-3, EPO, GM-CSF e G-CSF. Animais, alimentados com dieta hiperlipídica, apresentaram maiores concentrações de leptina circulante, com aumento de gordura corporal, aumento da concetração de proteína C reativa, colesterol total, LDL, VLDL e triacilglicerol. O hemograma apresentou neutrofilia absoluta e a medula óssea apresentou-se hipercelular com aumento do número de granulócitos maduros e da população celular CD133-/CD34+. Os resultados dos testes in vitro demonstraram aumento da capacidade de síntese de IL-3 e aumento de G-CSF, com aumento do potencial proliferativo, também evidenciado pelo maior número de células medulares na fase S/G2/M, bem como o aumento da diferenciação granulocítica. Esses resultados sugerem que a leucocitose e neutrofilia observadas em situações de aumento da adiposidade corpórea são decorrentes de uma complexa modulação do sistema hematopoético. / The body fat increase can generate various inflammatory mediators, that are capable to influence the proliferation and differentiation of hematopoietic cells and consequently modulate the complex regulation of the hematopoiesis. In this study we have proposed to evaluate the effect of increase body fat on the proliferation and differentiation of hematopoietic cells, as well as its ability to synthesize cytokines. Male Wistar rats were subjected to a high fat diet during a period of 14 weeks. After that period were evaluated hemogram, mielogram, lipid profile and the serum concentrations of leptin, insulin and adiponectin. Flow cytometry was used to evaluate the percentage of CD34+/CD133+, as well as the cell cycle of bone marrow cells. Bone marrow cells were used to perform the proliferation and differentiation capacity in vitro in the presence of IL-3, EPO, GM-CSF and G-CSF. Animals fed high-fat diet had higher concentrations of circulating leptin with increase body fat, and increase of C-reactive protein, total cholesterol, LDL, VLDL and triacylglycerol concentrations. The hemogram showed absolute neutrophilia and a hypercellular bone marrow with increase of granulocytic mature population and CD133-/CD34+ cells. The results in vitro, showed an increase of IL-3 and G-CSF production, and higher proliferative potential with an increase in S/G2/M bone marrow cell cycle phases, as well as an increase of the granulocytic differentiation. The results suggest that leukocytosis and neutrophilia observed in this model of body fat increase are in fact a result of a complex modulation of the hematopoietic system.

Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Coorientador: Suely Mogami Bomfim / Banca: Hélio José Montassier / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Bárbara Cristina Mazzucatto / Resumo: A avaliação da medula óssea e das células do sangue em cães com leishmaniose visceral (LV) pode proporcionar valiosas informações, tanto quantitativas quanto qualitativas, relativas à hematopoiese. Os objetivos deste estudo foram avaliar a medula óssea de cães com LV, por meio de exame citológico, histopatológico e imuno-histoquímico (IHC), avaliando-se a carga parasitária, a quantidade de linfócitos e macrófagos, além de células expressando MHC de classe II, IFN-, IL-10, TNF-α e TGF-β, bem como sua repercussão nas células do sangue. Para tanto, foram utilizados 60 cães, sendo 54 infectados e seis animais não infectados. Os cães infectados apresentaram anemia normocítica normocrômica, porém sem alterações na linhagem eritroide da medula óssea, além de displasia granulocítica, megacariocítica e granulomas na medula óssea. A linfocitose observada na medula óssea se refletiu no sangue. No exame citológico, observou-se grande infiltração de macrófagos, linfócitos e plasmócitos nos animais infectados. Quanto à IHC, os cães infectados apresentaram grande quantidade de células imunomarcadas para TNF-α, IL-10, IFN-,TGF-β e macrófagos / Abstract: The evaluation of the bone marrow and blood cells in dogs with visceral leishmaniasis (VL) can provide valuable information, both quantitative and qualitative, on the hematopoiesis. The objectives of this study were to evaluate the bone marrow of dogs with VL through cytological, histopathological and immunohistochemical (IHC) examination, evaluating the parasitic load, the amount of lymphocytes and macrophages and by cells expressing MHC class II, IFN-, IL-10, TNF-α and TGF-β, as well as its effect on blood cells. To this end, 60 dogs, 54 infected and six uninfected animals were used. Infected dogs showed normochromic normocytic anemia, but without any changes in the erythroid lineage bone marrow, and dysplasia granulocytic, megakaryocytic and granulomas in the bone marrow. The lymphocytosis in the bone marrow was reflected in the blood. On cytological examination, there was extensive infiltration of macrophages, lymphocytes and plasma cells in infected animals. As for IHC, infected dogs showed large amount of immunostained cells to TGF-β, TNF-α, IL-10, IFN- and macrophages / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-05Bitstream added on 2014-06-13T19:23:19Z : No. of bitstreams: 1 000749254.pdf: 1885169 bytes, checksum: 24b6601284053d8b99b0722497bb3702 (MD5) / A avaliação da medula óssea e das células do sangue em cães com leishmaniose visceral (LV) pode proporcionar valiosas informações, tanto quantitativas quanto qualitativas, relativas à hematopoiese. Os objetivos deste estudo foram avaliar a medula óssea de cães com LV, por meio de exame citológico, histopatológico e imuno-histoquímico (IHC), avaliando-se a carga parasitária, a quantidade de linfócitos e macrófagos, além de células expressando MHC de classe II, IFN-, IL-10, TNF-α e TGF-β, bem como sua repercussão nas células do sangue. Para tanto, foram utilizados 60 cães, sendo 54 infectados e seis animais não infectados. Os cães infectados apresentaram anemia normocítica normocrômica, porém sem alterações na linhagem eritroide da medula óssea, além de displasia granulocítica, megacariocítica e granulomas na medula óssea. A linfocitose observada na medula óssea se refletiu no sangue. No exame citológico, observou-se grande infiltração de macrófagos, linfócitos e plasmócitos nos animais infectados. Quanto à IHC, os cães infectados apresentaram grande quantidade de células imunomarcadas para TNF-α, IL-10, IFN-,TGF-β e macrófagos / The evaluation of the bone marrow and blood cells in dogs with visceral leishmaniasis (VL) can provide valuable information, both quantitative and qualitative, on the hematopoiesis. The objectives of this study were to evaluate the bone marrow of dogs with VL through cytological, histopathological and immunohistochemical (IHC) examination, evaluating the parasitic load, the amount of lymphocytes and macrophages and by cells expressing MHC class II, IFN-, IL-10, TNF-α and TGF-β, as well as its effect on blood cells. To this end, 60 dogs, 54 infected and six uninfected animals were used. Infected dogs showed normochromic normocytic anemia, but without any changes in the erythroid lineage bone marrow, and dysplasia granulocytic, megakaryocytic and granulomas in the bone marrow. The lymphocytosis in the bone marrow was reflected in the blood. On cytological examination, there was extensive infiltration of macrophages, lymphocytes and plasma cells in infected animals. As for IHC, infected dogs showed large amount of immunostained cells to TGF-β, TNF-α, IL-10, IFN- and macrophages

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T12:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Monte-Mor_BarbaradaCostaReis_D.pdf: 7171978 bytes, checksum: 5c73cb6c7edd6138186b17d972fce769 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Policitemia vera (PV) é uma síndrome mieloproliferativa (SMP) crônica que ocorre por proliferação clonal de progenitores hematopoéticos multipotenciais. Pacientes com PV apresentam expansão das três principais linhagens mielóides na medula óssea, levando à produção aumentada de hemácias, granulócitos e plaquetas. Características importantes de PV incluem elevação de hematócrito em presença de níveis normais ou diminuídos de eritropoetina (EPO) e a formação de colônias eritróides endógenas (CEE). A mutação JAK2 V617F, presente na maioria dos pacientes com PV, causa ativação constitutiva de JAK2 e parece ser responsável pelo fenótipo observado. Apesar disso, as mudanças transcricionais desencadeadas pela mutação ainda não foram completamente caracterizadas. Neste trabalho, utilizou-se Serial Analysis of Gene Expression (SAGE) para realizar um estudo de expressão gênica global em células da medula óssea de um paciente com PV portador da mutação, ao diagnóstico e em células normais de doadores saudáveis. Genes com expressão aumentada em PV estão envolvidos em processos biológicos importantes, como transdução de sinal, diferenciação e proliferação celular, ciclo celular, apoptose, resposta imune e regulação da transcrição. JUNB foi um dos genes identificados e, usando reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR), detectou-se expressão aumentada de JUNB em dois outros pacientes com PV JAK2 V617F-positivos. Por meio de linhagens murinas Ba/F3-REPO e culturas primárias de eritroblastos humanos, observou-se que JUNB é expresso após adição de EPO e que a proteína JunB é constitutivamente induzida por JAK2 V617F. Além disso, interferência na expressão de JUNB diminuiu o potencial clonogênico e proliferativo de progenitores eritróides humanos Ainda, em PV, a eritropoese causada por JAK2 V617F mostrou-se mais sensível à diminuição de expressão de JunB do que a eritropoese normal. Assim, esses resultados sugerem que JunB tenha um papel fundamental no desenvolvimento de SMPs causadas por JAK2 V617F / Abstract: Polycythemia vera (PV) is a chronic myeloproliferative disorder that arises through clonal proliferation of multipotent hematopoietic progenitors. PV patients present bone marrow trilineage expansion, leading to increased production of mature red cells, granulocytes and platelets. Important PV features are elevated red cell mass, despite normal or subnormal erythropoietin (EPO) levels, and endogenous erythroid colony (EEC) formation. The JAK2 V617F mutation, present in the majority of polycythemia vera (PV) patients, causes a JAK2 constitutive activation and seems to be responsible for the PV phenotype. However, the transcriptional changes triggered by the mutation have not yet been totally characterized. Serial analysis of gene expression (SAGE) was used to perform a large scale gene expression study in bone marrow cells of a newly-diagnosed PV patient harboring the JAK2 V617F mutation and in normal bone marrow cells from healthy donors. Genes overexpressed in PV are involved in important biological processes, such as signal transduction, cellular differentiation, cellular proliferation, cell cycle, apoptosis, immune response and transcriptional regulation. JUNB was one of the genes up-regulated in PV and overexpression of JUNB was also detected by quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) in hematopoietic cells of another two JAK2 V617F PV patients. Using Ba/F3-EPOR cell lines and primary human erythroblast cultures, JUNB was found to be expressed after Epo addition and JunB protein was shown to be constitutively induced by JAK2 V617F. In addition, JUNB knock down reduced the clonogenic and proliferative potential of human erythroid progenitors. Furthermore, in PV, the JAK2 V617F driven erythropoisis was more sensitive to JunB downregulation than normal erythropoiesis. Hence, these results demonstrate that JunB may play a major role in the development of JAK2 V617F myeloproliferative disorders / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica