A hipóxia-isquemia neonatal (HI) é um dos principais motivos de mortalidade e morbidade perinatal. Diferentes causas estão associadas à HI, tais como: interrupção do fluxo sanguíneo, ineficientes trocas gasosas pela placenta, prematuridade, pré-eclâmpsia (PE), entre outras. Achados prévios do nosso grupo, utilizando o ácido fólico (AF) como estratégia terapêutica na HI, mostraram que o tratamento foi efetivo em amenizar alguns danos em animais submetidos ao modelo de encefalopatia hipóxico-isquêmica (EHI). Os objetivos do presente estudo foram investigar os efeitos/consequências do tratamento/suplementação com AF durante: (i) a EHI em ratos submetidos ao modelo Rice-Vannucci, e (ii) o tratamento com tert-butil-hidroperóxido (TBH) em células trofoblásticas humanas (linhagem BeWo e HTR-8 SV/neo), simulando o estresse oxidativo ocasionado por PE. Para a realização do experimento in vivo, aos sete dias de vida ratos Wistar foram divididos em quatro grupos experimentais: controle salina (CT-S), controle ácido fólico (CT-AF), hipóxico-isquêmico salina (HI-S) e hipóxico-isquêmico ácido fólico (HI-AF). Para o experimento in vitro células das linhagens BeWo e HTR-8 SV/neo foram cultivadas, suplementadas com três distintas concentrações de AF (deficiente, fisiológica e supra-fisiológica) e expostas durante 24 horas ao TBH. Nossos resultados demonstraram que a EHI dificultou a memória e aprendizado nos testes do labirinto aquático de Morris e do ox-maze, reduziu a atividade da Na+, K+-ATPase em animais adultos, causou atrofia em importantes áreas encefálicas como estriado e hipocampo, contribuiu para o desequilíbrio das enzimas antioxidantes SOD e CAT, além de causar um aumento da reatividade astrocitária em diferentes períodos do desenvolvimento animal. No entanto, quando observado o efeito do tratamento com AF nos diferentes parâmetros analisados foi constatado que este contribuiu para o déficit cognitivo no teste do labirinto aquático, enquanto que esse efeito foi amenizado no teste do ox-maze. Também, observou-se que, enquanto o tratamento com AF contribuiu para a inibição da enzima Na+, K+ -ATPase nos animais HI adolescentes, este foi efetivo em reverter essa inibição nos adultos. Além do mais, o tratamento com AF promoveu a recuperação parcial da atrofia hipocampal, aumentou a atividade das enzimas SOD e CAT e atrasou a formação da cicatriz glial. No modelo in vitro com exposição ao TBH, o tratamento com AF foi responsável pelo aumento da peroxidação lipídica, da carbonilação proteica e dos níveis de glutationas. Além disso, houve também um efeito antiproliferativo, antimigratório e citotóxico. Interessantemente, todos esses resultados foram intensificados quando observados nas células cultivadas sob a concentração supra-fisiológica de AF. Tendo em vista que cerca de 1 a 8% das gestantes desenvolvem pré-eclâmpsia e essas normalmente estão expostas a altas dosagens de AF devido à suplementação e à ingestão de alimentos fortificados, mais atenção é necessária especialmente na população de risco para essa doença. Os resultados obtidos neste estudo contribuem para o avanço das pesquisas nesta área e destacam a importância de mais investigações a fim de esclarecer até que ponto a suplementação com AF e sua dosagem adequada trariam benefícios para neonatos com EHI e gestantes com PE. / Hypoxia-ischemia (HI) is one of the main causes of perinatal death and morbidity. There are many imbalances related to the onset of HI, such as: interrupted blood flow, placenta gas exchange insufficiency, prematurity, preeclampsia (PE), among others. Previously, our group have investigated folic acid (FA) as a therapeutic agent of HI and showed it was able to reduce some deficits observed in animals submitted to the hypoxic-ischemic encephalopathy model (HIE). The aim of this study was the investigation of the effects and consequences of the treatment/supplementation with FA during (i) the HIE in rats subject to the Rice-Vannucci model, and (ii) the treatment of human trophoblastic cells (BeWo and HTR-8SV/neo) with tert-butyl-hydroperoxide (TBH) chemical agent, which mimics the oxidative stress during PE. During the in vivo experiment, seven-days Wistar rats were divided into four groups, as follows: control saline (CT-S), control folic acid (CT-FA), hypoxia-ischemia saline (HI-S) and hypoxia-ischemia folic acid (HI-FA). During the in vitro experiment BeWo and HTR-8 SV/neo cells were cultured under three distinct FA concentrations (deficient/physiological/supra-physiological) and exposed to TBH during 24 hours. Results showed HIE promoted memory and learning impairments as observed during the Moris water maze and ox-maze tests, reduced the activity of Na+, K+ -ATPase in adult rats, promoted atrophy in important areas as striatum and hippocampus, contributed to the imbalances in the oxidative enzymes SOD and CAT, and promoted the increase of astrocytic reactivity in distinct periods of development. Nevertheless, the treatment with FA contributed to the cognitive deficits observed in the water maze, while this effect was reduced in the ox-maze test. It was also observed that while FA treatment contributed to the inhibition of Na+, K+ -ATPase in HI adolescent rats, it was effective to recover this activity in HI adult rats. Moreover, FA treatment was able to partially recover hippocampal atrophy, to increase the activity of SOD and CAT enzymes and to delay the glial scar. The FA treatment in the in vitro model, where cells were challenged with TBH, was responsible for the increase in lipid peroxidation, protein cabonilation and glutathione levels. Moreover, it was observed antiproliferative, antimigration and cytotoxic effect. Interestingly, these outcomes were more intense when cells were cultured under a supra-physiological concentration of FA. Considering that about 1-8% of pregnant women suffer from PE and are often exposed to high doses of FA due to the supplementation and the ingestion of fortified food, more attention should be given to this group of risk. Results obtained during this work contribute to the improvement of research in this field and highlight the need of further studies to better understand to each extent the FA supplementation and daily dose intake are beneficial to EHI newborns and pregnant women with PE.

Glioblastoma (GB) é o tumor cerebral humano mais frequente e maligno. O prognóstico dos pacientes com GB permanece alarmante, principalmente devido à baixa eficácia das estratégias terapêuticas atuais além da natureza invasiva desse tipo de câncer. Uma característica de tumores sólidos é apresentar áreas hipóxicas. Microambientes hipóxicos contribuem para a progressão do câncer, resistência ao tratamento e ao prognóstico ruim da doença. Dessa forma, neste trabalho, desenvolvemos um modelo in vitro que se aproxima ao microambiente hipóxico tumoral in vivo. Nossos resultados sugerem que a privação de oxigênio (PO) em combinação com ausência de soro forneceu um ambiente favorável à desdiferenciação das células C6 em células tronco tumorais (CTT). A doxazosina (DOX), um antihipertensivo utilizado na clínica, apresenta efeitos antitumorais em diversos tipos de câncer. Assim, avaliamos o efeito antitumoral da doxazosina em linhagens de glioma de rato (C6) e humano (U138-MG) e a toxicidade do fármaco em culturas primárias de astrócitos e culturas organotípicas de hipocampo. A doxazosina induziu morte celular nas linhagens de glioma e apresentou baixa neurotoxicidade. Além disso, o fármaco inibiu a via da PI3K/Akt e ativou GSK-3β e p53, resultando em indução de apoptose e parada no ciclo celular na fase G0/G1. Considerando a importância da mitocôndria na plasticidade de células tumorais e a resistência ao tratamento apresentada pelos GB, nós analisamos os efeitos da DOX nas interações entre núcleo e mitocôndrias. A DOX induziu biogênese mitocondrial e apoptose nas células C6 e diminuiu secreção de TNF-α. Ao analisar a estrutura química da DOX, encontramos diversas características que indicam que ela possui autofluorescência. Dessa forma, caracterizamos a autofluorescência da DOX em diversos meios. Observamos que há um padrão de distribuição do fármaco nas células C6: ele se encontra ao redor do núcleo e parece estar vesiculado. A superexpressão do receptor do fator de crescimento epidermal (EGFR) está relacionada às formas mais malignas e resistentes de GBs. Portanto, analisamos se a ação antiglioma da DOX está envolvida com EGFR. O tratamento com DOX foi capaz de diminuir os níveis de p-EGFR. O co-tratamento de DOX e AG1478 (inibidor de receptores de tirosina cinase) diminuiu a fosforilação de EGFR e causou necrose. Em vista disso, nossos resultados sugerem que o mecanismo de ação da DOX envolve sinalização de EGFR. Por fim, nós avaliamos os efeitos da DOX livre e nanoencapsulada (DOX-NC) em modelos in vitro e in vivo de glioma. Demonstramos que a DOX-NC induziu morte celular em linhagem de glioma em concentrações 100 vezes menores do que as que utilizamos para a DOX na sua forma livre. Além disso, analisamos o efeito da DOX-NC em culturas organotípicas de hipocampo e, da mesma maneira que o observado com a DOX, a DOX-NC demonstrou baixa toxicidade e diminuiu a área tumoral in vivo, sendo seletiva para células cancerosas. Nesta tese, alteramos o microambiente in vitro de células de glioma, avaliamos os efeitos antitumorais da doxazosina em sua forma livre e nanoencapsulada. Além disso, utilizamos modelos de glioma in vitro e in vivo e em diversos parâmetros celulares, descrevemos a autofluorescência do fármaco e também utilizamos essa característica para avaliar a captação e a distribuição da doxazosina em células de glioma. Nossos resultados contribuíram para aproximar os modelos de estudo com o que ocorre em gliomas in vivo e para evidenciar o potencial terapêutico da doxazosina como um agente antiglioma com baixa toxicidade neural e sistêmica. / Glioblastoma (GB) is the most frequent and malignant human brain tumor. The prognosis of patients with GB remains dismal, mainly due to the low effectiveness of current therapeutic strategies and the invasive nature of this type of cancer. A characteristic of solid tumors is the presence of hypoxic areas. Hypoxic microenvironments contribute to cancer progression, resistance to treatment, and poor prognosis of the disease. Thus, we developed an in vitro model that approximates the hypoxic tumor microenvironment found in vivo. Our results suggest that OD in combination with absence of serum provided an environment favorable to the dedifferentiation of C6 cells in cancer stem cells. Doxazosin (DOX), an antihypertensive used in the clinic, has antitumor effects in several types of cancer. Thus, we evaluated the antitumor effect of DOX on rat (C6) and human (U138-MG) glioma cell lines and drug toxicity in primary astrocyte cultures and organotypic hippocampal cultures. DOX induced cell death in glioma lines and showed low neurotoxicity. In addition, the drug inhibited the PI3K/Akt pathway and activated GSK-3β and p53, resulting in induction of apoptosis and cell cycle arrest in the G0/G1 phase. Considering the importance of mitochondria in the plasticity of tumor cells and the resistance to treatment presented by glioblastomas, we analyzed the effects of DOX the interactions between nucleus and mitochondria. DOX induced mitochondrial biogenesis and apoptosis in C6 cells, and decreased TNF-α secretion. When analyzing the chemical structure doxazosin, we find several characteristics that indicate that it has autofluorescence. Thus, we characterized the autofluorescence of DOX in several media. We observed that there is a pattern of distribution of the drug in the cell: it is around the nucleus and appears to be vesiculated. Overexpression of the Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) is related to the more malignant and resistant forms of GBs. Therefore, we analyzed whether the antiglioma action of DOX is involved with EGFR. DOX treatment was able to decrease p-EGFR levels. Co-treatment of DOX and AG1478 (a receptor tyrosine kinase inhibitor) decreased EGFR phosphorylation and caused necrosis. Thus, our results suggest that the mechanism of action of doxazosin involves EGFR signaling. We evaluated the effects of free and nanoencapsulated doxazosin (DOX-NC) in in vitro and in vivo models of glioma. We demonstrated that nanoencapsulated doxazosin (DOX-NC) induced cell death in a glioma line at concentrations 100 times lower than those used for doxazosin in its free form. In addition, we analyzed the effect of DOX-NC on organotypic hippocampal cultures and, in the same way as observed with DOX, DOX-NC demonstrated low toxicity and decreased tumor area in vivo, being selective for cancer cells. In this dissertation, we altered the in vitro microenvironment of glioma cells, we evaluated the antitumor effects of doxazosin in its free and nanoencapsulated form. In addition, we used glioma models in vitro and in vivo and analyzed several cellular parameters, we described the autofluorescence of the drug and also used this characteristic to evaluate the uptake and distribution of doxazosin in glioma cells. Our results have contributed to approximate the study models with what occurs in gliomas in vivo and to evidence the therapeutic potential of doxazosin as an antiglioma agent with low neural and systemic toxicity.

Orientador: Luciane Helena Gargaglioni Batalhão / Coorientador: Lilian Francisco Arantes de Souza / Banca: Lizandra Amoroso / Banca: Mirela Dias Barros / Resumo: A temperatura é um dos requerimentos fisiológicos fundamental para o bom desenvolvimento embrionário de aves. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito de alterações da temperatura de incubação sobre parâmetros da incubação (perda de peso dos ovos, eclosão e eclodibilidade, bicagem interna, externa e nascimento e avaliação dos neonatos), ventilação (VE), temperatura corporal (TC) e peso do pulmão e peso do coração em condições basais, e após a exposição à hipóxia (10%O2) ou à hipercapnia (7%CO2) de frango de corte. Foram incubados ovos férteis de matrizes da linhagem Cobb®, com 44 semanas de idade, procedentes de incubatório comercial, de acordo com os seguintes tratamentos: ovos incubados em condições normais de temperatura (37,5ºC); com temperatura elevada (38,5ºC) por 10 dias finais de incubação e com temperatura reduzida (36,5ºC) por 10 dias finais da incubação. Durante a incubação foi observado que a temperatura não afetou eclosão e eclodibilidade. A perda de peso foi maior nos animais incubados em temperatura quente e menor em temperatura fria. A temperatura não influenciou na qualidade dos pintainhos, contudo, ovos incubados em temperatura quente apresentaram redução no tempo de nascimento diferente da temperatura fria que prologa o tempo. Após a eclosão, os animais foram mantidos à temperatura 37,5ºC no 10º e 20º dias de idade e foram avaliados os parâmetros respiratórios e peso do pulmão e coração. Os animais de 10 dias incubados em temperatura fria apresentaram maior resposta ventilatória à hipóxia do que animais incubados em temperatura quente, o que não ocorreu nos animais de 20 dias. Em hipercapnia houve diferença entre os tratamentos tantos em animais de 10 e 20 dias, sendo que animais incubados em temperatura fria apresentaram maior resposta ventilatória com 10 dias e 20 dias comparados ao controle. A hipóxia causou ... / Abstract: The physiological requirements, like temperature, are essential for adequate embryonic development of birds. The aim of this study was to evaluate the effect of changes in temperature on incubation and hatching parameters (eggs' weight loss, hatch and hatchability, internal and external pipping and birth and evaluation of newborns), ventilation (VE), body temperature (Tc) and weight of lungs and heart of broilers in basal conditions and after exposure to hypoxia (10%O2) or hypercapnia (7%CO2). Fertile eggs were incubated arrays Cobb® with 44 weeks old, coming from commercial hatchery, according to the following treatments: eggs incubated at normal temperature (37.5°C), high temperature (38.5°C) and reduced temperature (36.5°C) at 10 final days of incubation. It was observed during incubation that the temperature did not affect hatchability and hatching. The weight loss was greater in animals incubated in high temperature and smaller in warm temperature. The temperature did not affect the quality of the chicks; however, incubated eggs in high temperature decreased the time of birth and cold temperature prolong that time. After hatching, the animals were kept at thermoneutral temperature and between 10 and 20 days old respiratory parameters, the weight of heart and lungs were assessed. Animals of 10 days old incubated in cold temperature had higher ventilatory response to hypoxia than animals incubated in warm temperature, which did not occur in animals of 20 days old. In hypercapnia, there was no difference between treatments in animals of 10 and 20 days old, whereas animals incubated in cold temperature had higher ventilatory response in 10 days and 20 days old compared to control. Hypoxia caused a decrease in Tc in all groups, but the fall was lower at 30 min in animals incubated in warm temperature. Hypercapnia Tc caused to the animals 10 days of age. The weight of lungs and heart ... / Mestre

A encefalopatia hipóxico-isquêmica neonatal é uma causa importante de dano cerebral que ocorre durante o desenvolvimento cerebral podendo levar a seqüelas neurológicas de grande impacto na vida do indivíduo. Outra condição que afeta o desenvolvimento neurológico é o estado nutricional. A desnutrição durante o período perinatal afeta vários aspectos do desenvolvimento neural, incluindo alterações morfológicas, bioquímicas e comportamentais. Além disso, a desnutrição pode influenciar diferentes etapas da cascata de eventos fisiopatológicos responsáveis pelo dano cerebral hipóxico-isquêmico. Este trabalho teve por objetivo estudar os efeitos da desnutrição protéica gestacional e lactacional sobre parâmetros bioquímicos, comportamentais e morfológicos em ratos submetidos à hipóxia-isquemia neonatal. Ratas Wistar foram submetidas à restrição protéica durante a gestação e a lactação (grupo controle: 25% de proteína de soja e grupo desnutrido: 7% de proteína). Aos sete dias de vida pósnatal, seus filhotes foram submetidos ao procedimento de hipóxia-isquemia cerebral unilateral. Esses animais foram quanto a parâmetros bioquímicos aos 7 dias de vida, comprtamentais, aos 7 e 60 dias de vida e morfológicos aos 60 dias. Os animais apresentaram marcada redução de peso corporal durante o período lactacional. Aos 60 dias, quando sacrificados, os animais desnutridos apresentavam peso encefálico significativamente menor. O estado oxidativo celular foi avaliado 4 horas após o final da hipóxia, não tendo sido encontradas alterações na formação de radicais livres, lipoperoxidação, danos a proteínas e sistemas de defesa antioxidante. Não foram observados atrasos no desenvolvimento motor, quanto ao fator dieta, nem quanto ao fator hipóxiaisquemia nos animais de 7 e 60 dias de vida, observados pelos testes de geotaxia negativa, reflexo de endireitamento, preensão palmar, Rota-rod e campo aberto. Foi encontrado um prejuízo ao sitema olfatório dos animais, medido pela capacidade dos animais em encontrar seus ninhos, sendo esse prejuízo significativamente maior nos animais hipóxico-isquêmicos desnutridos, o que indica uma interação entre a dieta e a hipóxia-isquemia neonatal. Quanto ao dano morfológico ocasionado pelo evento hipóxico-isquêmico, foi verificada uma diminuição do dano hemisférico gerado pela HI nos animais desnutridos. Com base nestes resultados, podemos sugerir que ocorreu uma adaptação relativa à adversidade metabólica aguda (privação de oxigênio e glicose da hipóxiaisquemia) nos animais submetidos à dieta hipoprotéica, parecendo haver, ao menos com relação a alguns dos parâmetros avaliados, um caráter protetor gerado pela desnutrição protéica.

A osteoartrose (OA) de joelho é uma das doenças osteomioarticulares mais comuns no mundo, afetando 2693 em cada 100.000 mulheres e 1770 em cada 100.000 homens. Embora o treinamento de força (TF) seja amplamente recomendado para a melhoria das debilidades físicas encontradas em pacientes com OA, o uso de cargas entre 70-85% da força dinâmica máxima (FDM) pode ser limitado não somente pela dor, mas também pela própria etiologia da doença, representando uma limitação para esta prática. O treinamento de força associado à oclusão vascular (TFOV) baseia-se na execução do TF em intensidades entre 20 e 50% da FDM, combinado à oclusão do fluxo sanguíneo através do uso de torniquetes. Estudos têm mostrado que a magnitude das mudanças na força e massa musculares após um período de treinamento com esta técnica é similar as causadas pelo TF de alta intensidade (70-85% FDM) sem adição da oclusão vascular. O objetivo do presente trabalho foi investigar a eficácia da associação da oclusão vascular ao TF como modelo de intervenção não farmacológica para melhoria da dor, força muscular, funcionalidade e qualidade de vida em pacientes diagnosticadas com OA de joelho. Diante disso, 48 participantes mulheres foram randomicamente distribuídas em três grupos: treinamento de força de baixa intensidade (TFB), treinamento de força de alta intensidade (TFA) ou treinamento de força de baixa intensidade associado à oclusão vascular (TFOV) e receberam treinamento duas vezes por semana durante doze semanas. No período basal e após a intervenção, as pacientes passaram por avaliações físicas (testes de funcionalidade e força), responderam questionários de qualidade de vida e de dor (índice WOMAC \"Western Ontario and McMaster Universities Osteoarthritis Index\" e SF-36 \"The Short Form 36 Health Survey\") e exame de imagem da área da secção transversa (AST) do músculo quadríceps por meio de tomografia computadorizada. Durante o período de treinamento, quatro pacientes do grupo TFA foram excluídas do protocolo por dor no joelho. Após a intervenção, no WOMAC, apenas os grupos TFOV e TFB apresentaram diminuições significativas na dor (p=0,0358 e p=0,0044, respectivamente), nos demais domínios, o único grupo que apresentou diminuições significativas de escore foi o TFOV (rigidez: p=0,0167 e funcionalidade p=0,0358). Nos testes de funcionalidade, os grupos TFOV e TFA apresentaram aumentos significativos no desempenho do \"Timed-stands test\" (p=0,0251 e p=0,003), no \"Timed-up-and-go\" não foram encontradas melhoras significantes nos grupos. Com relação a força, apenas os grupos TFOV e TFA aumentaram significativamente os valores no leg-press (p<0,0001) e na extensão de joelhos (p<0,0001). Comportamento similar foi encontrado no aumento da AST, grupos TFOV e TFA apresentaram aumentos significativos (p<0,0001). A melhora de qualidade de vida foi significante nos três grupos quando analisamos a somatória dos domínios do WOMAC (TFOV: p=0,0173; TFA: p=0,0438; TFB: p=0,0301), porém o SF-36 não foi capaz encontrar melhoras significativas nos grupos. Dessa forma, concluímos que o TFOV apresenta-se como uma estratégia relevante e segura de intervenção não farmacológica para mulheres acometidas por OA sintomática de joelhos, constituindo um modelo de tratamento capaz de induzir adaptações funcionais e morfológicas de grande interesse para esta população / Osteoarthritis (OA) of the knee is one of the most common articular disease worldwide, affecting 100,000 women in 2693 and 1770 in every 100,000 men. Although strength training (ST) is widely recommended for improving the physical weaknesses found in patients with OA, using loads between 70-85% of maximal dynamic strength (MDS) can be limited not only by pain, but also by the own etiology of the disease, representing a limitation of this practice. Strength training associated with vascular occlusion (STVO) is based on the execution of the ST at intensities between 20 and 50% of MDS, combined with the occlusion of blood flow through the use of tourniquets. Studies have shown that the magnitude of changes in strength and muscle mass after a period of training this technique is similar to those caused by high-intensity ST (MDS 70-85%) without the addition of the vascular occlusion. The objective of this study was to investigate the efficacy of the combination of vascular occlusion to the ST as non pharmacologic intervention model for improving pain, muscle strength, functionality and quality of life in patients diagnosed with knee OA. Thus, 48 women participants were randomly divided into three groups: strength training low intensity (STL), strength training, high intensity (STH) or low-intensity strength training associated with vascular occlusion (STVO) and trained two times per week for twelve weeks. At baseline and after the intervention, the patients underwent physical assessments (tests of functionality and strength), answered questionnaires on quality of life and pain (WOMAC index \"Western Ontario and McMaster Universities Osteoarthritis Index\" and SF-36 \"The Short form 36 Health Survey \") and the cross section area (CSA) of the quadriceps muscle was assessed using computed tomography. During the training period the STH group, four patients were excluded from the protocol due to knee pain. After the intervention, the WOMAC, only the STVO and STL groups showed significant decreases in pain (p=0.0358 and p=0.0044, respectively), in other domains, the only group that showed significant decreases in score was the STVO (stiffness: p= 0.0167 and p = 0.0358 functionality). In functionality testing, the STVO and STH groups showed significant increases in performance \"Timed-stands test\" (p=0.0251 and p=0.003), the \"Timed-up-and-go\" were not significant improvements found in groups. Regarding strength, only the STVO and STH groups significantly increased values in leg press (p<0.0001) and knee extension (p<0.0001). Similar behavior was found in increased AST and STH STVO groups showed significant increases (p<0.0001). The improvement of quality of life was significant in all three groups when analyzing the sum of the domains of WOMAC (STVO: p=0.0173; STH: p=0.0438; STL: p=0.0301), but the SF-36 was not able to find significant improvements in groups. Thus, we conclude that the STVO presents itself as a relevant and safe strategy of non-pharmacological intervention for women suffering from symptomatic knee OA, constituting a model of treatment capable of inducing functional and morphological adaptations of great interest to this population

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-09Bitstream added on 2014-06-13T18:40:34Z : No. of bitstreams: 1 dantas_bf_dr_botfca.pdf: 285129 bytes, checksum: 63cec0eda142ffb4303d4c3cd029e95a (MD5) / Foram realizadas análises de qualidade fisiológica, bem como ensaios enzimáticos de a-amilase e amilases totais em sementes de milho, cv. Saracura BRS4154 e CATI AL34, submetidas a diferentes períodos de deficiência de oxigênio (hipoxia), com a finalidade de avaliar a resposta das sementes a essa condição. Para tanto, as sementes das cultivares AL34 e Saracura foram submersas em 50mL de água destilada e incubadas em germinadores a 27oC, no escuro, durante 0, 1, 2, 3, 4 e 5 dias. Após esse período foram realizados testes de germinação e vigor (primeira contagem do teste de germinação, condutividade elétrica, crescimento de plântulas, emergência das plântulas em campo, índice de velocidade de emergência e tempo médio de emergência). Para a avaliação da atividade de a-amilase e de amilases totais, as sementes submetidas aos períodos de submersão foram divididas em quatro grupos. Um grupo foi prontamente congelado e os outros três foram semeados em gerbox e mantidas a 27oC durante 2, 4 e 7 dias. Para a extração das enzimas amilolíticas, retirou-se os tecidos de reserva das sementes, que foram macerados em tampão TRIS-HCl 0,1mol.L-1, pH 7, contendo NaCl 0,1mol.L-1e CaCl2 10mmol.L-1 e centrifugadas a 12.000g, 4oC durante 10 minutos. O sobrenadante foi congelado até a realização dos ensaios. A atividade de amilases totais e de a-amilase foi medida em um sistema de reação, contendo Acetato de sódio 50mmol.L-1, pH 5,2 e CaCl2 10mmol.L-1 e amido solúvel de batata 2,5% como substrato, incubado a 35oC durante 15minutos. Para inativar outras amilases, permanecendo apenas a a-amilase, o extrato cru foi mantido a 70oC, durante 15 minutos. A atividade amilolítica foi expressa em mmol de açúcares redutores produzidos pela degradação de amido, por mg de proteína, por minuto... / Maize seeds cultivars Saracura BRS-4154 and CATI AL34, subjected to several flooding periods, were accessed for physiological quality and total amylase and a- amylase activity aiming to evalute seeds response to this condition. The seeds were submerged in 50mL of distilled water and incubated at 27oC, in the dark during 0, 1, 2, 3, 4 and 5 days. After that, germination and vigor (first counting, electrical conductivity, seedlings growth, seedlings field emergence, germination index and germination speed) tests were carried out. For the amylolitic activity, the seeds subjected to hypoxia were divided in four portions. One portion was readily frozen and the other three were germinated during 2, 4 and 7 days. The enzymes were extracted by the seeds reserve tissues homogenization in buffer 0.1mol.L-1 TRIS-HCl, pH 7, with 0.1mol.L-1 NaCl and 10mmol.L-1 CaCl2. After that, the solution with the homogenized tissues was centrifuged at 12000g at 4oC during 10 minutes. The pellet was discarded. The amylolitic activity was measured in a reaction buffer containing, sodium acetate 50mmol.L-1, pH 5.2 and CaCl2 10mmol.L-1 along with soluble potato starch 2.5% as substrate incubated at 35oC during 15minutes. To inactivate other amylases, and purify a- amylase, the crude extract was incubated at 70oC, during 15 minutes. The amylase activity was expressed in reducing sugars mmol produced by starch degradation per protein mg, per minute. After the hypoxia periods the seeds were germinated in germitest paper imbibed in 100 mg.L-1 GA3, 0.375% CaCl2 and 100 mg.L-1 GA3 + 0.375% CaCl2 solutions and assessed for germination and vigor tests and amylolitic activity. The results indicate both cultivars are tolerant to hypoxia but had their reserve degradation and mobilization inhibited by oxygen deficiency. Calcium and GA individually have no effect on submerged seeds, but...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-20Bitstream added on 2014-06-13T20:21:08Z : No. of bitstreams: 1 munerato_ms_dr_jabo_parcial.pdf: 82830 bytes, checksum: b73ecfa849ddd4953cdd4f405866a546 (MD5) / Uma das principais complicações durante a contenção química de animais selvagens é a hipoxemia. O objetivo com este estudo foi avaliar o efeito da suplementação intranasal de oxigênio (SIO) durante a anestesia com tiletaminazolazepam/ xilazina (TZ/X) e cetamina/midazolam/xilazina (C/M/X) em veadoscampeiro (Ozotoceros bezoarticus) de vida livre. Quarenta animais adultos, 21 fêmeas (26,8 ± 3,2 kg (média ± DP) e 19 machos (27,8 ± 5,0 kg) foram capturados no Pantanal sul-mato-grossense, Brasil. Dois protocolos anestésicos, com e sem SIO, foram aleatoriamente administrados via intramuscular de acordo com os grupos: TZ/X - tiletamina-zolazepam (2,9 ± 0,8 mg/kg) / xilazina (1,2 ± 0,3 mg/kg), sem SIO; TZ/X-O2 - TZ/X (2,9 ± 0,8 mg/kg / 1,2 ± 0,3 mg/kg), com SIO em fluxo de 3L/min durante 60 minutos; C/M/X - cetamina (8,8 ± 2,0 mg/kg) / midazolam (0,7 ± 0,2 mg/kg) / xilazina (0,4 ± 0,1 mg/kg), sem SIO; e C/M/X-O2 - C/M/X (8,8 ± 2,0 mg/kg / 0,7 ± 0,2 mg/kg / 0,4 ± 0,1 mg/kg), com SIO conforme mencionado em TZ/XO2. Durante a anestesia, foi colhido sangue arterial a cada 20 min (T0, T20, T40 e T60) para hemogasometria. Os dados foram analisados pela ANOVA, seguido pelo teste de Tukey. Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. Todos os animais desenvolveram timpanismo ruminal durante a anestesia. A pressão parcial de oxigênio arterial (PaO2) foi maior que 60 mmHg no TZ/X e C/M/X, entretanto, ocorreu hipoxemia com valores de PaO2 < 60 mmHg em cinco animais do TZ/X e em oito do C/M/X. A SIO aumentou significativamente (P = 0,01) a PaO2 em T0, T20, T40 e T60 do TZ/X-O2... / A relevant complication of chemical restraint in wild animals is hypoxemia. The aim of this study was to evaluate the effects of intranasal oxygen supplementation (IOS) during anesthesia with tiletamine-zolazepam/xylazine (TZ/X) and ketamine/midazolam/xylazine (K/M/X) in free-ranging pampas deer (Ozotoceros bezoarticus). Forty adults deer, 21 females ((Mean ± SD) 26.8 ± 3.2 kg) and 19 males (27.8 ± 5.0 kg) were captured in the South Pantanal wetland, Brazil. Two anesthetic protocols, with and without IOS, were randomly administrated (i.m.): TZ/X – tiletamine-zolazepam (2.9 ± 0.8 mg/kg) / xylazine (1.2 ± 0.3 mg/kg), without IOS; TZ/X-O2 – TZ/X (2.9 ± 0.8 mg/kg / 1.2 ± 0.3 mg/kg), with IOS at a rate of 3 L/min during 60 minutes; K/M/X – ketamine (8.8 ± 2.0 mg/kg) / midazolam (0.7 ± 0.2 mg/kg) / xylazine (0.4 ± 0.1 mg/kg), without IOS; and K/M/X-O2 – K/M/X (8.8 ± 2.0 mg/kg / 0.7 ± 0.2 mg/kg / 0.4 ± 0.1 mg/kg), with IOS as TZ/X-O2. Arterial blood was collected each 20 minutes (T0, T20, T40 and T60) during anesthesia, for blood gas analysis. The data were analyzed by repeated measures ANOVA followed by Tukey test and P values < 0.05 were considered significant. All deer developed ruminal tympany during anesthesia. Oxygen arterial tension (PaO2) was higher than 60 mmHg on the TZ/X and K/M/X, however hypoxemia with values of PaO2 < 60 mmHg occurred in five deer of TZ/X and eight deer of K/M/X. The IOS significantly increases (P = 0,01) the PaO2 at T0, T20, T40 and T60 of TZ/X-O2 (286 ± 99; 234 ± 113; 234 ± 112 and 177 ± 70 mmHg) and K/M/X-O2 (194 ± 63; 171 ± 96; 143 ± 102 and 140 ± 83 mmHg) when compared, respectively, with the same times of TZ/X (64 ± 8; 66 ± 11; 68 ± 10 and 70 ± 12 mmHg) and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-07Bitstream added on 2015-04-09T12:48:25Z : No. of bitstreams: 1 000816830.pdf: 3606121 bytes, checksum: b72f959db176b160845ce86fd37d1575 (MD5) / Baixa pressão parcial de O2 durante o desenvolvimento embrionário e/ou fetal pode diminuir a taxa metabólica e a taxa de crescimento do embrião, podendo levar a alterações morfofisiológicas após o nascimento, além de atenuar a resposta ventilatória hipóxica no recém-eclodido de galinhas. No presente estudo, várias incubações foram realizadas para avaliar o efeito da hipóxia pre-natal sobre a taxa metabólica e a resposta à hipóxia aguda em diferentes linhagens e idades de Gallus gallus. Além disso, foi verificada a possibilidade de que a redução da taxa metabólica por si e não especificamente induzida por hipóxia prolongada durante desenvolvimento pré-natal seria um fator contribuinte sobre a diminuição da taxa metabólica em neonatos. Para isso embriões de galinha foram incubados a 35 ◦C (grupo de frio), que é conhecido por diminuir o consumo de oxigênio embrionário por ~30% ao longo de incubação, e aumenta o período de incubação em ~2 dias. Quanto a aves precoces, nenhum estudo havia abordado a influência da hipóxia em diferentes fases de incubação no desenvolvimento morfométrico do intestino, importante não somente para os processos digestivos e de absorção, mas também para a proteção contra patógenos; por isto avaliamos as características morfométricas e a quantidade de células caliciformes por vilo das regiões do intestino delgado em pintainhos recémeclodidos de frango de corte / Low O2 partial pressure during embryonic and fetal development can decrease the growth and metabolic rate of the embryo, leading to morphophysiological changes after birth, and blunt the hypoxic ventilatory response in newly hatched chicken. In the present study, different conditions during incubation (cold and hypoxia) were performed to evaluate the effect of prenatal hypoxia on metabolic rate, and the response to acute hypoxia in different strains and ages of Gallus gallus. We also considered the possibility that prolonged metabolic depression per se, but not specifically induced by hypoxia, during incubation would be a contributing factor to decreased metabolic rate in neonate. Thus chicken embryos were incubated at 35◦C (cold group), which is known to decrease the embryonic oxygen consumption (VO2) by ~ 30% throughout the incubation period and increases the incubation time in ~2 days. Finally, in precocial birds, no study has approached the influence of hypoxia at different stages of incubation in the morphometric development of the intestine, not only important for the digestive processes and absorption, but also for protection against pathogens, so we evaluated the morphometric characteristics and quantity of goblet cells per villi of the small intestine regions in newly hatched broiler chicks

Orientador: Marlos Gonçalves Sousa / Coorientador: Aparecido Antônio Camacho / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Daniel Paulino Junior / Resumo: A síndrome braquicefálica (SB) é caracterizada pela combinação de anormalidades primárias e secundárias do trato respiratório superior em cães, podendo resultar em obstrução significativa das vias aéreas superiores. Pode desencadear dispneia inspiratória, culminando em edema de tecidos moles, obstrução das vias aéreas superiores, fluxo de turbulento ar, ruído inspiratório e até morte. Essas alterações levam ao aumento da resistência da passagem do ar, o que pode causar elevação da pressão pulmonar e manifestações clínicas atribuídas à hipertensão pulmonar. A consequência é o remodelamento cardíaco do lado direito (Cor Pulmonale) com possível progressão para insuficiência cardíaca congestiva direita. A fim de averiguar os efeitos da SB sobre o sistema cardiovascular, 28 animais foram recrutados para um estudo prospectivo e distribuídos em Grupo Braquicefálico (GB), composto por 22 Buldogues franceses com síndrome braquicefálica ou Grupo Controle (GC), composto por 6 cães Beagles saudáveis. Todos os animais foram submetidos a exame físico detalhado, bem como análises laboratoriais, eletrocardiografia, ecocardiografia, radiografias torácicas e mensuração indireta de pressão arterial sistêmica. Os achados mais relevantes foram relacionados ao GB (90,6 ± 12,9 mmHg) com menor PaO2 em relação ao GC (104,9 ± 5,2), (p≤0,05), possivelmente atribuível à hipoventilação, em decorrência das alterações anatômicas. / Abstract: Brachycephalic syndrome (BS) in dogs is characterized by the combination of primary and secondary upper respiratory tract abnormalities and may result in significant upper airway obstruction. It can trigger inspiratory dyspnea, culminating in soft tissue edema, upper airway obstruction, turbulent airflow, inspiratory noise, and even death. These changes lead to increased resistance of the air passages, which can cause elevation of pulmonary pressure and clinical manifestations attributable to pulmonary hypertension. The consequence is right-sided cardiac remodeling (Cor Pulmonale) with possible progression to right congestive heart failure. In order to investigate the effects of BS on the cardiovascular system, 28 animals were recruited for a prospective study and assigned to either the Brachycephalic Group (BG), composed of 22 French bulldogs with BS or the Control Group (CG), which was composed of 6 healthy Beagle dogs. All animals underwent a detailed physical examination, as well as laboratory analyses, electrocardiography, echocardiography, chest radiography and indirect measurement of systemic arterial blood pressure. The most relevant finding was a lower PaO2 (90.6 ± 12.9 mmHg) in BG as compared to CG (104.9 ± 5.2), (p≤0.05), possibly attributable to hypoventilation due to anatomical alterations. / Mestre

A hipóxia-isquemia (HI) encefálica é uma das causas mais frequentes de lesões graves com comprometimento crônico das capacidades neurológicas e também de óbito neonatal do mundo. A HI cerebral resulta em alterações hemodinâmicas, bioquímicas e neurofisiológicas como uma consequência direta da falta de oxigênio e glicose. Esses processos podem levar a um dano cerebral por meio da ativação de mecanismos citotóxicos e apoptóticos, que causam prejuízo e morte à célula. Recentemente, alguns estudos mostraram que os danos gerados pela HI neonatal apresentam dimorfismo sexual. Na presente tese, foram avaliados os efeitos da HI neonatal sobre parâmetros de estresse oxidativo e de dano celular após a lesão encefálica em machos e fêmeas a fim de se detectar a contribuição do dimorfismo sexual para a lesão. Foi observado que a HI aumentou a produção de radicais livres causando peroxidação lipídica, e também aumentou a atividade da enzima antioxidante superóxido dismutase (1h e 2h após a HI). Além disso, a HI inibiu a atividade da enzima Na+, K+-ATPase imediatamente após a lesão. Estes dados demonstram que a HI foi capaz de induzir o estresse oxidativo e levar à perda de homeostase celular através da alteração no controle da bomba de Na+ e K+ no encéfalo dos neonatos após a lesão. Tendo em vista que a mitocôndria é a principal fonte de espécies reativas de oxigênio (EROs) na célula nós investigamos os efeitos da HI sobre a função mitocondrial. Machos e fêmeas expostos à HI apresentaram diminuição na atividade do complexo II da cadeia respiratória em hipocampo, além de diminuição da massa e do potencial de membrana (Δψ) mitocondrial tanto no córtex quanto no hipocampo, 2h após o insulto. Por outro lado, em 18h, a atividade dos complexos (I-III, II e IV) da cadeia respiratória mostrou uma inibição severa que foi acompanhada de diminuição de massa e Δψ mitocondrial em ambos os sexos, exceto pelo fato dos machos não apresentarem diminuição na massa mitocondrial. Esses dados mostram que a formação de espécies reativas bem como a peroxidação lipídica ocorre provavelmente devido à inibição da atividade dos complexos da cadeia respiratória. Tão importante quanto a disfunção mitocondrial induzida pela HI, os resultados apontam a presença de dimorfismo sexual neste parâmetro avaliado, uma vez que as fêmeas, além de apresentarem uma atividade dos complexos da cadeia respiratória per se maior quando comparadas aos machos, elas mostraram-se mais vulneráveis ao dano da HI. Com a finalidade de identificar a possível contribuição da autofagia para as diferentes alterações mitocondriais encontradas em machos e fêmeas, a atividade autofágica foi mensurada nos neonatos 18h após a lesão. Nós constatamos que as alterações encontradas – estresse oxidativo e disfunção mitocondrial – foram capazes de induzir a atividade autofágica. Entretanto esta se manifestou de forma distinta em córtex e hipocampo e também de maneira diferente em machos e fêmeas. No córtex, as fêmeas submetidas à HI tiveram aumento no número de autofagossomos (ativação da autofagia), porém diminuição dos autolisossomos, demonstrando uma possível inibição de algum passo final do processo. Já no hipocampo, os machos submetidos à HI tiveram indução da autofagia e as fêmeas apresentaram um aumento per se da atividade autofágica tanto nos animais controle quanto nos HI. É possível que o aumento das EROs pela cadeia respiratória e a perda de Δψ mitocondrial tenham induzido a autofagia após a lesão causada pela HI no encéfalo dos neonatos. Essas diferenças sexo-específicas são importantes não somente para entendermos o mecanismo de dano causado pelo insulto, mas também para direcionarmos os estudos sobre as estratégias terapêuticas de acordo com o sexo do indivíduo afetado. / Brain hypoxia-ischemia (HI) is one of the most common causes of severe chronic impairment of neurological abilities and also neonatal death in the world. Brain HI results in hemodynamic, biochemical and neurophysiological changes as a direct consequence of oxygen and glucose absence. These processes can lead to brain damage through activation of cytotoxic and apoptotic mechanisms, which cause injury and death to the cell. Recently, some studies have shown that the damage caused by neonatal HI presents sexual dimorphism. In this thesis, it was evaluated the effects of neonatal HI on oxidative stress parameters and cell damage after brain lesion in males and females to verify sexual dimorphism contribution to the lesion. It was observed that HI increased free radicals production leading to lipid peroxidation and also increased superoxide dismutase activity (1h and 2h after HI). Besides, HI inhibited Na+, K+-ATPase activity immediately after injury. These data demonstrated that HI was able to induce oxidative stress and lead to cell homeostase loss through modifications on Na+ and K+ pump control in neonatal brain after injury. Considering that mitochondria are the main source of reactive oxygen species (ROS) in cell we investigated the effects of HI on mitochondrial function. Males and females exposed to HI showed a decrease in complex II activity of hippocampal respiratory chain in addition to diminished mass and mitochondrial membrane potential (Δψ) in both cortex and hippocampus, 2h after insult. On the other hand, at 18h activity of respiratory chain complexes (I-III, II e IV) showed a severe inhibition that was accompanied by a decrease of mitochondrial mass and Δψ in both sexes, except that males do not show decrease in mitochondrial mass. These data demonstrated that reactive species formation and lipid peroxidation probably occur due to inhibition of respiratory chain complexes activities. Just as important as mitochondrial dysfunction induced by HI, results indicate the presence of sexual dimorphism on this parameter, since females, besides having a higher per se activity of respiratory chain complexes compared to males, they were more vulnerable to HI damage. In order to identify the possible contribution of autophagy to the distinct mitochondrial alterations found in males and females, autophagic activity was measured in neonates 18h after injury. We verify that changes found – namely oxidative stress and mitochondrial dysfunction - were able to induce autophagic activity. However, it manifested differently in cortex and hippocampus and also in males and females. In the cortex, females subjected to HI had an increase in autophagosomes (activation of autophagy), but decreased autolysosomes, showing a possible inhibition of a final step of the process. On hippocampus, males subjected to HI had autophagy induction and females showed a per se increase in autophagic activity in both control and HI animals. It is possible that ROS increased in respiratory chain and loss of mitochondrial Δψ had induced autophagy after lesion caused by HI in the neonatal brain. These sex-specific differences are important not only to understand the mechanism of damage caused by HI insult, but also to direct studies on the therapeutic strategies according to the sex of the affected subject.