Estudo de desenvolvimento metodológico de elaboração e validação de medidas de avaliação em saúde. Teve como objetivo geral contribuir para o desenvolvimento de Indicadores de Avaliação de Programas de Controle de Infecção Hospitalar (PCIH) e específicos construir e validar o conteúdo dos indicadores construídos. Os procedimentos teóricos para validação dos indicadores de PCIH foram: a-seleção e construção dos indicadores; b-fundamentação do conteúdo científica dos indicadores; c-validação dos indicadores construídos. Foram construídos cinco indicadores: 1- (PCET) Estrutura Técnico-operacional do PCIH; 2- (PCDO) Diretrizes Operacionais de Controle e Prevenção de IH; 3- (PCVE) Sistema de Vigilância Epidemiológica de IH; 4- (PCCP) Atividades de Controle e Prevenção de IH; 5- (PCAE) Atividades Educacionais e Capacitação Técnica em controle de IH. A validação de conteúdo dos indicadores foi realizada por oito profissionais especialistas na área de controle de IH, a partir de um instrumento previamente elaborado e referiu-se a: 1º - manual operacional; 2º - atributos do conjunto dos indicadores; 3º - atributos individuais dos componentes de cada indicador; 4º - valoração da relevância dos componentes de cada indicador. Com exceção do indicador 5- PCAE, os demais foram todos validados / This aim of this study is to create methodology for the development and validation of evaluation measurements in healthcare. The overall objective was to contribute to the development of Performance Indicators for Hospital Infection Control (HIC) programs and more specifically to create and validate the content of the indicators developed. The theoretical procedures for the validation of the indicators for HIC programs were: a-the selection and creation of the indicators; b-determination of the scientific basis for indicator content; c-validation of created indicators. In all, five indicators were created: 1- (PCET) Technical/operational structure of HIC program; 2- (PCDO) Operational Guidelines for the Control and Prevention of HI; 3- (PCVE) Epidemiological Surveillance System; 4- (PCCP) Activities for the Control and Prevention of HI; 5- (PCAE) Educational Activities and Technical Education in the control of HI. The validation of the content of the indicators was conducted by eight specialists in the area of HIC using a previously developed instrument and addressed: 1º - operational manual; 2º - indicator set attributes; 3º - individual attributes of the components of each indicator; 4º - assessment of the relevance of the components of each indicator. With the exception of indicator 5-PCAE, all of the indicators were validated

Introdução: as infecções de sítio cirúrgico (ISC) estão entre as infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS) de maior frequência. Autoridades governamentais devem estabelecer prioridades para a vigilância epidemiológica, reconhecida como um importante instrumento para a redução das taxas de ISC. Vários países em desenvolvimento não possuem condições de conduzir um Sistema de Vigilância das Infecções de Sítio Cirúrgico (SVISC) que inclua todos os tipos de cirurgia; portanto, critérios devem ser utilizados para selecionar os indicadores mais adequados a serem monitorados. Desde 2004, o SVISC do estado de São Paulo tem focado somente as taxas de ISC dos procedimentos classificados como limpos; entretanto, em 2011 reconheceu a necessidade de implementar alterações no sistema vigente até então. Objetivos: o principal objetivo deste estudo foi selecionar e implementar indicadores para o novo SVISC do estado de São Paulo. Métodos: o estudo foi conduzido de agosto de 2011 a julho de 2013; uma combinação de três métodos foi utilizada sequencialmente: 1) Estudo metodológico de revisão da literatura e consulta a especialistas objetivando identificar os critérios mais adequados para a seleção dos indicadores a serem monitorados em âmbito governamental; 2) Elaboração de ferramenta documental para apoiar a implementação do novo sistema de VE das ISC; 3) Estudo epidemiológico descritivo dos resultados dos indicadores de ISC após a implementação do sistema. As instituições de saúde notificantes do novo sistema (n=555) representaram 82,7% de todas as instituições consideradas com potencial para notificação. Resultados: os principais critérios identificados para a seleção dos indicadores de ISC foram a) magnitude da realização do procedimento cirúrgico pelo Sistema Único de Saúde brasileiro; b) severidade do dano em caso de ISC; c) potencial impacto de estratégias de prevenção; d) recomendação por norma federal; e) potencial para futuro benchmarking com pelo menos três outros SVISC. A seguir são apresentados os procedimentos cirúrgicos selecionados para a vigilância no novo sistema e suas respectivas taxas de ISC para o percentil 75 e número de procedimentos cirúrgicos notificados referentes ao ano de 2012: parto cesariano: 0,79% (n=304.198), revascularização do miocárdio: 9,0% (n=12.000); artroplastia do joelho: 2,2% (n=10.225), artroplastia do quadril: 3,9% (n=9.984), craniotomia: 6,8% (n=8.514), mastectomia: 0,0% (n=9.515) e os seguintes procedimentos realizados por laparoscopia: colecistectomia: 0,0% (n=54.960), herniorrafia: 0,0% (n=21.627), histerectomia: 0,0% (n=9.071), apendicectomia: 0,0% (n=8.122) e colectomia 0,0% (n=1.963). Conclusões: o desenvolvimento de critérios suporta a seleção racional de indicadores de ISC para o monitoramento no âmbito governamental. Apesar da adesão satisfatória das instituições, os dados obtidos sugerem que algumas taxas podem ser subnotificadas. Esforços devem focar a melhoria da qualidade dos dados / Introduction: the surgical site infections (SSI) are among the most frequently healthcare associated infection (HAI). Governmental authorities should establish priorities for the epidemiologic surveillance which is recognized as an important strategy to reduce the SSI rates. Many developing countries cannot afford to manage Surgical Site Infection Surveillance System (SSISS) that includes all types of surgeries; therefore a criterion should be used to select the most appropriate indicators to be monitored. Since 2004, the SSISS in São Paulo have been focused on only crude rates of SSI in clean surgeries; however, in 2011 it was recognized that was necessary to implement changes in the ongoing system. Objective: the present study aimed to select and to implement indicators for the new SSISS in the São Paulo State. Methods: this study was carried out from August 2011 to July 2013; three methods were used sequentially 1) Methodological study carried out by means of literature review and consulting to HAI experts aiming to identify the best criteria for selection of SSI indicators to be monitored at the governmental level; 2) Development of a written tool to support the implementation of the new SSISS; 3) Epidemiological descriptive study on SSI indicators results after implementation. The participating healthcare institutions (n=555) represented 82.7% of total acute care hospitals in the State which were considered to be potential participants. Results: the main criteria identified to select the SSI indicators were: a) magnitude of the surgery in the Brazilian Universal Health System; b) severity of harm in case of SSI; c) potential impact of prevention strategies; d) recommendation by federal normative; d) potential for benchmarking against at least other three SSISS worldwide. The surgical procedures selected, the SSI rates identified (3rd quartiles) and the number of surgeries monitored in 2012 were respectively: cesarean section: 0.79% (n=304,198); coronary artery bypass graft: 9.0% (n=12,000); knee arthroplasty: 2.2% (n=10,225), hip arthroplasty: 3.9% (n=9,984), craniotomy: 6.8% (n=8,514), mastectomy: 0.0% (n=9,515) and the following laparoscopic procedures: cholecystectomy: 0.0% (n=54,960), herniorrhaphy: 0.0% (n=21,627), histerectomy: 0.0% (n=9,071), apendicectomy: 0.0% (n=8,122) and colectomia 0.0% (n=1,963). Conclusion: The development of criteria supported the rational selection of indicators for governmental monitoring of SSI. Despite good adherence to the project, data suggest that SSI may be underestimated. Efforts should be focused on the improvement of data quality for SSISS

. / In mammals, both sterile wounding and infection induce inflammation and activate the innate immune system, and combining both challenges can lead to severe health defects, revealing that the balance between the intensity and resolution of the inflammatory response is central for the organism's fitness. The underlying mechanisms remain however elusive. Using Drosophila as a model, we show that a sterile wounding induces a reduced resistance to a bacterial challenge and is accompanied by an increased host mortality upon infection. We further investigate the underlying molecular mechanisms of flies susceptibility to bacterial infection by comparing the transcriptome landscape of SH flies (Simple Hit: infection only), DH flies (Double Hit: trauma + infection) and control flies (sterile trauma alone) during the early steps. We observed that genes with increased expression in DH flies compared to SH ones are significantly enriched for stress related annotations, including members of the JNK pathway and demonstrate that the JNK pathway plays a central role in the DH phenotype. In addition, the CrebA/Creb3-like transcription factor and its targets are up regulated in SH flies and we show that CrebA is required for mounting the innate immune response. We also investigated the potential role of the TNF receptor grnd in SH and DH flies. Our results reveal its function in innate immune response since flies with reduced grnd function display reduced viability upon infection. Drosophila thus appears as a relevant model to investigate the complex interactions between inflammation and infection and allows to unravel key pathways involved in the acquisition of a hyper-inflammatory state.

La malnutrition est une pathologie récurrente en Afrique, qui touche particulièrement les enfants et adolescents vivant avec le VIH. Le Sénégal a été l’un des premiers pays africains à mettre en œuvre un programme national d’accès aux antirétroviraux à partir de 1998. Néanmoins, comme dans la majorité des pays, la prise en charge pédiatrique a connu un retard par rapport à celle des adultes. La malnutrition et l’infection à VIH agissent en interaction et aggravent le risque de morbidité et de mortalité des enfants. Pour autant, les recommandations internationales se sont surtout intéressées à la prise en charge de la malnutrition chez les enfants de moins de cinq ans. Il existe peu de directives concernant les modalités de récupération nutritionnelle chez les enfants de plus de cinq ans et les adolescents infectés par le VIH.C’est dans ce contexte qu’a été mise en place l’étude Snac’s qui avait pour objectif d’évaluer l’efficacité et l’acceptabilité de la récupération nutritionnelle ambulatoire par l’administration d’Aliments prêts à l’emploi (APE) chez les enfants et adolescents infectés par le vih dans 12 sites de prise en charge à Dakar et dans les régions du Sénégal. Cette thèse a pour objectif d’évaluer, dans le cadre de cette étude 1/l’acceptabilité d’un dispositif innovant d’information des enfants et des parents pour la participation à la recherche 2/ l’acceptabilité de l’intervention de récupération nutritionnelle chez les enfants et adolescents et d’identifier les facteurs et obstacles à cette acceptabilité 3/ l’acceptabilité de l’intervention chez les soignants impliqués dans l’étude.Trois enquêtes ont été menées au cours du projet Snac’s, dans les deux sites de Dakar et les dix sites régionaux auprès des enfants, des parents/tuteurs et des professionnels de santé. Les entretiens avec les enfants en succès ou en échec de traitement de la malnutrition et avec les parents se sont déroulés par focus group. Ils ont concerné 112 enfants au moment de l’inclusion et 71 enfants au moment de la sortie de l’étude. Des entretiens individuels ont concerné 30 professionnels de santé.Le Dispositif standardisé d’information à la recherche (dsir) avait pour intérêt de standardiser et rendre facilement compréhensible l’information des participants. Il a été apprécié par les enfants/adolescents, et par les parents/tuteurs. 68 % des parents/tuteurs et 58 % des enfants/adolescents, ont répondu correctement à au moins 7/8 questions. La notion qui a été la moins bien comprise par les parents/tuteurs et les enfants/adolescents était le droit de quitter l’étude, avec des taux respectifs de réponses correctes de 54 % et 36 %. L’enquête sur l’acceptabilité à permis d’identifier trois déterminants qui peuvent représenter un obstacle à l’adhésion des enfants/adolescents à une prise en charge nutritionnelle ambulatoire à base d’ape : le dégoût des ape, les effets secondaires et la durée de l’attente avant la consultation. Les entretiens avec les équipes soignantes ont mis en évidence les difficultés rencontrées dans la prise en charge du VIH pédiatrique. Les analyses ont montré une bonne acceptabilité de l’intervention, mais une incertitude quant à la possibilité de la pérenniser à la fin du projet.Ce travail a permis d’expérimenter la mise en place du dsir, qui s’avère intéressant même s’il demande à être amélioré. Il a permis de décrire les difficultés et les enjeux de la prise en charge de l’infection à vih pédiatrique notamment en région, qui constituent l’environnement des interventions de récupération nutritionnelle. Les résultats de cette étude montrent que le dispositif de récupération nutritionnelle ambulatoire est acceptable par les principaux acteurs (enfants/adolescents, parents/tuteurs et équipes soignantes), mais que sa pérennisation n’est envisageable qu’avec l’appui et l’engagement des autorités sanitaires, la mise en place d’un approvisionnement régulier en ape et d’un accompagnement, notamment financier, adéquat. / Malnutrition is a recurrent disease in Africa, particularly affecting children and adolescents living with HIV. Senegal was one of the first African countries to implement a national program for access to antiretrovirals (ISAARV) from 1997. Nevertheless, as in most countries, pediatric in relation to that of adults. Malnutrition and HIV infection interact and increase the risk of child morbidity and mortality. However, international recommendations have focused on the management of malnutrition among children under five years of age. There are few guidelines for nutritional recovery in children over five years of age and adolescents infected with HIV.It was in this context that the Snac's study was set up to evaluate the effectiveness and acceptability of ambulatory nutrition recovery through the administration of Ready-to-Use Foods ) in HIV-infected children and adolescents in 12 treatment sites in Dakar and Senegal. The objective of this thesis is to evaluate, within the framework of this study 1 / the acceptability of an innovative information system for children and parents for participation in research 2 / the acceptability of the recovery intervention nutritional status in children and adolescents and to identify factors and barriers to acceptability 3 / the acceptability of the intervention among the caregivers involved in the study.Three surveys were conducted during the Snac's project at the two sites in Dakar and the ten regional sites for children, parents / caregivers and health professionals. Interviews with children on successful or unsuccessful treatment of malnutrition and with parents were conducted by focus group. They included 112 children at the time of inclusion and 71 children at the time of study exit. Individual interviews were held with 30 healthcare professionals. The quantitative data were processed with SAS and qualitative data using the Dedoose ™ software.Results: The Standardized Information System for Research (dsir) had the advantage of standardizing and making participants' information easily understandable. It was enjoyed by children / teenagers, and by parents / guardians. 68% of parents / guardians and 58% of children / adolescents, correctly answered at least 7/8 questions. The notion that was least well understood by parents / guardians and children / adolescents was the right to leave the study, with respective rates of correct answers of 54% and 36% respectively. The Acceptability Survey identified three determinants that may represent an obstacle to adherence of children / adolescents to ambulatory ape-based nutritional management: ape disgust, adverse effects, and the duration of the waiting period before the consultation. Interviews with healthcare teams highlighted the difficulties encountered in the management of pediatric HIV. The analyzes showed a good acceptability of the intervention, but an uncertainty as to the possibility of perpetuating it at the end of the project.This work allowed us to experiment with the implementation of the desire, which is interesting even if it needs to be improved. It made it possible to describe the difficulties and the stakes of the management of the pediatric hiv infection in particular in the region, which constitute the environment of the interventions of nutritional recovery. The results of this study show that the ambulatory nutritional recovery device is acceptable to the main actors (children / adolescents, parents / caregivers and healthcare teams), but that its sustainability is only possible with the support and commitment health authorities, the establishment of a regular supply in ape and adequate financial and financial support.

L'infection chronique par le virus de l’hépatite B (HBV) est un problème de santé majeur dans le monde et peut conduire à la cirrhose et à l’hépatocarcinome. Des réponses défectives des cellules T ont été démontrées, mais les événements précis qui peuvent contribuer à l'insuffisance des réponses des cellules B restent à déterminer. L'expansion et la différenciation optimales des cellules B reposent sur l'activité du récepteur Toll Like Receptor 9 (TLR9) qui détecte l'ADNdb et est exprimée chez l'homme principalement par les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) et les cellules B. L'impact de HBV sur TLR9 dans les cellules B humaines reste à explorer. Dans cette étude, nous avons exploré les effets de HBV sur l’expression et les fonctions médiées par TLR9 dans les cellules B humaines en utilisant une lignée cellulaire de cellules B ainsi que des lymphocytes B primaires. De plus, on a corroboré nos résultats dans une cohorte de patients HBV chroniques. L'expression de TLR9 a été réduite chez les toutes les sous-populations de cellules B du sang périphérique, exposées au VHB. Les fonctions des cellules B médiées par TLR9 comme la prolifération et la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires ont été abrogées en présence de HBV. Nos résultats montrent que l’antigène de surface HBsAg inhibe la phosphorylation du facteur de transcription CREB qui ne peut plus se lier sur son site CRE situé sur le promoteur TLR9 ce qui affecte la transcription de ce dernier. Enfin, nous avons corroboré nos résultats in vitro dans une cohorte de porteurs chroniques du HBV et constaté que l'expression et la fonction de TLR9 étaient significativement diminuées. Nos résultats révèlent le mécanisme qui induit une réponse immunosuppressive par HBV sur la fonction TLR9 dans les cellules B humaines, ce qui peut contribuer à la persistance de ce virus chez l'hôte et la complication de la phase chronique de la maladie / Chronic HBV infection is a major health problem worldwide. Ineffective T cell and antibody responses have been demonstrated, yet the precise events that may contribute to insufficient B cell responses remain to be determined. Optimal B cell function, expansion and differentiation rely on Toll Like Receptor 9 (TLR9) activity which senses dsDNA and is expressed in human mainly by plasmacytoid dendritic ( pDC) and B cells. The impact of HBV on TLR9 in human B cell subsets remains to be explored.Here, we investigated the effects of HBV on TLR9 function in human B cells. Both primary and B cell lines were used to analyze the effect of HBV on TLR9 expression and function. These results were corroborated in a cohort of chronically infected HBV patients. TLR9 expression was reduced in all peripheral blood B cells subsets exposed to HBV. B cell function mediated by TLR9, such as proliferation and pro-inflammatory cytokines secretion were abrogated in the presence of HBV. Our results show that the viral surface antigen HBsAg inhibited the phosphorylation of the transcription factor CREB which could no longer bind the CRE site located on the TLR9 promoter. Finally, we corroborated our in vitro findings in a cohort of chronic HBV carriers (CHB) and found that TLR9 expression and function were significantly suppressed.Our findings reveal the mechanism that induces an immunosuppressive response by HBV on TLR9 function in human B cells, which may contribute to HBV persistence in the host

Salmonella Typhimurium est un pathogène intracellulaire dont la virulence repose sur l'expression de protéines effectrices qui sont transportées dans les cellules hôtes infectées. Dans la cellule cette bactérie réside dans un compartiment appelé SCV (Salmonella-containing vacuole). Au cours de l'infection, la protéine effectrice SifA est transportée du cytosol bactérien à celui de la cellule infectée. Après sa translocation SifA est retrouvée à la surface de la SCV et des tubules. Cette protéine est constituée de deux domaines distincts. Le domaine N-terminal interagit avec la protéine hôte SKIP. Le domaine C-terminal a une structure similaire à d'autres protéines bactériennes possédant une activité d'échange de nucléotide guanine (GEF). Cependant on ignore si le domaine C-terminal contribue aux fonctions de SifA dans la virulence de Salmonella et, si c'est le cas, si il exerce une activité GEF sur une protéine de l'hôte. Nous avons utilisé un modèle de souris invalidée pour SKIP pour montrer que SKIP est un médiateur du rôle de SifA dans la virulence de Salmonella et que SifA à également un rôle qui est indépendant de son interaction avec SKIP. Ce dernier est porté par le domaine C-terminal de SifA. Nous avons montré que ce domaine de SifA se lie à la petite GTPase Arl8b, une protéine lysosomale. Le domaine C-terminal de SifA et Arl8b sont importants pour le recrutement de LAMP1 sur les SCVs et les tubules associés. L'utilisation d'une lignée cellulaire invalidée pour l'expression d'Arl8b a montré une prolifération réduite de Salmonella. Ces résultats nous permettent de proposer un modèle pour le rôle du domaine C-terminal de SifA dans la virulence de Salmonella. / The virulence of the intracellular pathogen Salmonella Typhimurium relies on the expression of bacterial effector proteins that are translocated into infected host cells. This bacterium resides and proliferates in a host-cell compartment named the Salmonel-la-containing vacuole (SCV). Following translocation in the infected host cells, the effector protein SifA localizes onto the SCV and SCV-associated membrane tubules. This protein is made of two distinct domains. The SifA N-terminal domain interacts with the host-cell protein SKIP. The SifA C-terminus has a fold similar to other bacterial effector proteins having a guanine nucleotide exchange factor (GEF) activity. Indeed, SifA binds preferentially a GDP-bound form of RhoA but does not stimulate GDP disso-ciation. Therefore it remains unknown whether the SifA C-terminus contributes to the functions of SifA in Salmonella virulence and, if it does, whether it has a GEF activity towards a host protein. We used a model of SKIP knockout mice to show that SKIP mediates susceptibility to Salmonellosis and to establish that SifA also contributes to Salmonella virulence independently of its interaction with SKIP. We next identified that the SifA C-terminal domain supports this contribution. We have further showed that the SifA C-terminus binds the small GTPase Arl8b and that both SifA C-terminus and activated Arl8b are important for the recruitment of LAMP1 on SCVs and associated tubules. Using an Arl8b knock down cell line, we observed that the absence of Arl8b results in a reduced proliferation of wild-type Salmonella. Finally, we proposed a model for the role of the SifA C-terminus in Salmonella virulence.

Les hépatites virales constituent un enjeu majeur de santé public dans le domaine des maladies infectieuses. L’enjeu pour les prochaines années sera de mettre en œuvre des stratégies de dépistage et de de prise en charge des hépatites virales et du VIH, en particulier chez les usagers de drogue par voie intraveineuse et dans les pays à ressources limitées. Dans ce travail de thèse nous avons évalué des outils et des stratégies nouvelles pour améliorer le diagnostic et la prise en charge des infections par le VIH et le VHC dans les pays du Sud. Notre première étude porte sur l’évaluation de la performance diagnostique de la primo-infection du VIH sur Dried serum spot (DSS) par rapport aux tests rapides. Cette étude a été rétrospectivement réalisée chez 39 cas diagnostiqué Primo-infection du VIH entre 2000 et 2012 au CHU de Montpellier. En comparant avec le résultat sur le DSS, nous avons réussi à avoir une sensibilité de 87.2% (34/39) avec PCR Ag/Ac combiné 4eGeneration (ElecsysCombi PT test reactive et Liaison XL test reactive) témoignant de la bonne performance de ce test. Nous avons réalisé par la suite une étude clinico-virologique chez 104 patients co-infectés par le VIH et le VHC à Haiphong, Vietnam (ANRS 12262). C’est pour la première fois qu’une telle étude descriptive (évaluation clinico-virologique, évaluation de la fibrose hépatique avec les marqueurs biologiques recommandés par l’OMS et également par le Fibroscan®) est réalisée dans cette population au Vietnam. L’évaluation clinique, l’analyse des tests biochimiques et virologique et celle de la fibrose par l’élastographie hépatique (Fibroscan®, Echosens) ont été réalisées Parmi 104 patients, 93 (89,4%) avaient des ARN du VHC détectable (médiane 6,19 (4,95 à 6,83 log10 UI / mL). La plupart des patients ont été infectés par les génotypes 1a/1b (69%) et les génotypes 6a/6e (26%). 43 patients (41,3%) présentaient une fibrose significative (≥ F2), dont 24 patients (23,1%) avec une fibrose extensive (F3) et/ou une cirrhose hépatique (F4). L’évaluation de la fibrose hépatique par l’élastométrie (Fibroscan®) est utilisée comme l’examen de référence à comparer avec le test APRI (AST-to-platelet ratio index) recommandé par l’OMS dans la prise en charge des patients infectés par le VHC dans les pays à ressource limitée, en prenant le cut-off élevé supérieur ou égale à 2, nous avons réussi à classifier les fibroses sévères/cirrhose hépatique avec une sensibilité à 90% et une spécificité à 84% (Se: 90%, Sp: 84%, AUROC = 0,93, IC 95%: 0,86 à 0,99).Notre dernière étude a évalué la réponse des marqueurs immunologiques à l’association de Peginterféronα (PegIFNα) et ribavirine. Nous avons étudié la concentration des 25 cytokines chez 30 patients co-infectés par le VIH et le VHC. Les résultats ont été comparés entre les patients classés « RVS » (réponse virologique soutenue) (RVS, n = 19) et les non-répondeurs (NR, n = 11). Le changement en concentration des cytokines lié à la thérapie PegIFNα-ribavirine a été observé chez les patients RVS et NR. Le changement en concentration sérique de l'IL-8, MIP-1β; et MCP-1 pourrait être associé à l'efficacité de la bithérapie PegIFNα-ribavirine chez les patients co-infectés par le VIH et le VHC.L’amélioration du dépistage et du diagnostic est un élément primordial faisant partie du contrôle de ces infections virales. Notre étude a renforcé l’hypothèse de l’utilité de DBS. Le Fibroscan® et les marqueurs biologiques (APRI Test) sont des outils intéressants pour l’évaluation de la fibrose hépatique dans les pays à ressources limitées. Mot clés : Co-infection HIV-VHC, usagers de drogues par voie intraveineuse, dried blood Ssot, fibrose hépatique, fibroscan, APRI, interféron pégylé, Vietnam. / Chronic viral hepatitis is a major public health issue worldwide in the field of infectious dis and mostly affects resource-constrained countries. The challenge for the resource-limited countries is to implement the strategies for screening and management of viral hepatitis, particularly for hepatitis C among people who inject drugs.In this thesis we have evaluated new tests and strategies to improved diagnosis and therapeutic monitoring of HCV and HIV infection in low resource setting. The first study evaluated the performances of HIV testing using filter paper (DSS – Dried serum spot) compared with rapid tests during the early phase of HIV infections. A total of 39 serum samples form newly diagnosed HIV infected persons was included. Fourth generation immunoassays (ElecsysCombi PT test reactive and Liaison XL test reactive) identified 34 out of 39 HIV early infections using dried serum spot, whereas the Determine TM HIV-1/2 rapid test detected 24 out of 39 HIV positive serum (87.2% vs 61.5% respectively, p = 0.009). Fourth generation Ag/Ab immunoassays performed on DSS had good performance for HIV testing during the early phases of HIV infection. In the second study, we conducted a cross-sectional study aimed to assess the proportion of clinically significant fibrosis in HIV/HCV-co-infected patients followed in Viet Tiep Hospital in Haiphong, Northern Vietnam. From February to March 2014, 104 HIV-HCV coinfected patients receiving antiretroviral therapy (ART) were prospectively enrolled. 93 (89.4%) had detectable HCV RNA, median 6.19 (4.95-6.83 Log10 IU/mL). Patients were mainly infected with genotypes 1a/1b (69%) and genotypes 6a/6e (26%). 43 patients (41.3%) had fibrosis ≥ F2 including 24 patients (23.1%) with extensive fibrosis (F3) and/or cirrhosis (F4). Using Fibroscan® as a gold standard, the high threshold (2) of AST-to-platelet ratio index (APRI) had very good performances for the diagnosis of extensive fibrosis/cirrhosis (Se: 90%, Sp: 84%, AUROC=0.93, 95%CI: 0.86-0.99).In the last study, the impact of pegylated interferonα (PegINFα) and ribavirin therapy on T cell immune response was explored in HIV/HCV coinfected patients. Concentrations of 25 cytokines and CD8+ T cell activation were monitored in HCV/HIV co-infected patients. Results were compared between patients retrospectively classified as sustained virological responders (SVR, n=19) and non-responders (NR, n = 11). High pretreatment concentrations of IP-10 (CXCL-10) and MCP-1 (CCL-2) were associated with poor anti-HCV response. Highest rise in MIP-1β; and MCP-1 levels was observed four weeks after anti-HCV treatment initiation in SVR compared to NR, whereas a decrease of IL-8 concentration was associated with treatment failure (p= 0.052). Treatment based on drugs having immunomodulating activities may benefits from immunomonitoring using multiplex techniques. In conclusion, improving access to HIV and HCV diagnosis and monitoring are critical toward the control of these infections. Our work performed illustrate how dried blood spot, point of care testing, Fibroscan and simplified assays may contribute to HIV and HCV care in low resource setting. Key word : Co-infection HIV-HCV, IV drug user, dried blood Spot, liver fibrosis, fibroscan, APRI, Pegylated interferon, Vietnam.

Le fer est un élément essentiel à de nombreux processus physiologiques fondamentaux. Lors d'une infection, une forte compétition entre l'hôte et l'agent pathogène a lieu ; alors que la bactérie a besoin d'acquérir le fer de l'hôte, pour son développement et sa virulence, l'hôte déploie de nombreux mécanismes pour protéger ses stocks de fer. Il sécrète notamment un peptide capable de moduler l'homéostasie du fer au niveau systémique, l'hepcidine, qui va causer une diminution de la quantité de fer sérique, une rétention intracellulaire du fer et donc une restriction du fer accessible aux pathogènes. Lors d'une inflammation, l'expression de l'hepcidine est décrite dans la littérature pour être principalement induite via l'activation de deux voies de signalisation : la voie STAT3 et la voie BMP/SMAD, l'altération de chacune de ces voies conduisant à un défaut d'induction d'hepcidine. Cependant, nos précédentes observations publiées ont infirmé le rôle de l'IL6, ligand de la voie STAT3, dans la régulation de l'hepcidine en réponse au LPS, et ont suggéré l'implication d'un peptide appartenant à la famille du TGFb, l'activine B, dans la régulation de l'hepcidine via l'activation de la voie BMP/SMAD in vivo. Dans cette étude, nous nous sommes intéressés au rôle de l'activine B dans la régulation de l'hepcidine in vivo, lors d'une infection. Grâce à l'utilisation de souris invalidées pour le gène codant l'activine B (Inhbb-/-), nous avons confirmé que l'activine B était un ligand endogène de la voie BMP/SMAD dans le foie, puisqu'elle induit la phosphorylation des effecteurs SMAD en réponse au LPS. Cependant, nous avons pu clairement démontrer que l'activine B, et donc l'augmentation de la phosphorylation des effecteurs SMAD, ne participaient pas à la régulation de l'hepcidine in vivo, en réponse à l'infection. Nous nous sommes alors intéressés à l'implication de l'IL6 dans la régulation de l'hepcidine. Alors que l'absence d'Il6 n'altère pas l'induction de l'hepcidine in vivo en réponse au LPS, cette cytokine semble jouer un rôle clé pour la réponse de l'hôte lors d'une infection par une bactérie. Dans ce contexte, la littérature décrit l'importance de l'IL6 pour une réponse immunitaire protectrice de l'hôte lors d'une infection. Lors d'une infection, nous proposons donc l'implication d'une nouvelle voie de signalisation dans l'expression de l'hepcidine. De plus, nous suggérons un rôle important de l'IL6, non pas dans la régulation transcriptionnelle de l'hepcidine, mais pour la protection de l'hôte lors d'une infection bactérienne. Enfin, nos résultats montrent qu'un niveau d'activation basal de la voie BMP/SMAD est requis pour une induction d'hepcidine lors d'inflammation, et que l'augmentation de la phosphorylation des effecteurs SMAD observée en réponse à l'inflammation ne participe pas à cette régulation. / Iron is essential for several fundamental metabolic processes. During infection, a strong competition between the host and the pathogen occurs; while the bacteria needs to acquire iron from the host, for its growth and virulence, hosts have developed several mechanisms to protect its iron stores. In particular, the host produces a peptide in order to modulate systemic iron homeostasis, hepcidin. Hepcidin decreases the amount of circulating iron, causes intracellular iron retention and thus a restriction of accessible iron to pathogens. During inflammation, hepcidin expression is described in the literature to be mainly mediated through activation of two signaling pathways: the STAT3 and the BMP/SMAD pathways. Impairment of one of these pathways leads to an impaired hepcidin induction. However, our previous published observations did not support the role of IL6, the major ligand of STAT3 pathway, in the regulation of hepcidin in response to LPS, but suggested the involvement of another protein, that belongs to the TGFb family, activin B, in the regulation of hepcidin via the activation of the BMP/SMAD pathway in vivo. In this study, we investigated the role of activin B in the regulation of hepcidin in vivo, during infection. By using knockout mice for the gene encoding activin B (Inhbb-/-), our results suggest that activin B is not involved in the regulation of hepcidin in vivo in response to infection. We then investigated the function of IL6 in the regulation of hepcidin. Although the absence of IL6 does not affect the induction of hepcidin in vivo in response to LPS, this cytokine appears to play a key role in the host response during bacterial infection. Indeed, the literature describes the importance of IL6 for a protective immune response of the host during infection. During infection, we hypothesize that another signaling pathway regulates hepcidin expression. In addition, we suggest an important role of IL6, not in the transcriptional regulation of hepcidin, but for the host protection during a bacterial infection. Finally, our results also show that basal level of BMP/SMAD pathway is required for an appropriate induction of hepcidin during inflammation.

Les poux humains (Pediculus humanus) sont des ectoparasites hématophages, ayant vécu avec leur hôte pendant des milliers d’années. Durant cette thèse, nous avons d’abord élaboré une large bibliographie nous permettant de rédiger une revue, puis d’apporter des réponses à certains nombres de questions restées en suspens à travers le traitement de certaines thématiques qui nous semblaient importantes. En effet, nous avons (i) démontré que les poux de tête et les poux de corps en Afrique peuvent être infectés par B. quintana quand les patients vivent dans des conditions économiques pauvres et sont aussi exposés aux poux de corps; identifié pour la première fois le clade mitochondrial des poux de tête du Mali, Kenya, Congo et Madagascar, et confirmé celui du Sénégal, Algérie, Ethiopie, Rwanda et Burundi, (ii) démontré que les poux de tête et les poux de corps chez les SDF doublement infestés appartiennent à la même population de poux de corps, et dans les conditions d’infestation massive, les poux de corps peuvent migrer et coloniser les cheveux et vice-versa, (iii) prouvé la nécessité de réaliser des enquêtes épidémiologiques nationales sur la pédiculose dans les régions du Mali, (iv) démontré par le modèle in vitro que la doxycycline a un effet direct sur la bactérie endosymbionte du pou Candidatus Riesia pediculicola via le mycetome. Ce dernier travail nous a permis de mettre en exergue l’efficacité synergique des antibiotiques + ivermectine permettant de lutter plus efficacement l’infestation des poux et éviter l’apparition de résistance. Ce travail a fait l’objet de dépôt d’un brevet. / Human lice (Pediculus humanus) are bloodsucking ectoparasites, having lived with their host for thousands of years. During this thesis, we first developed an extensive bibliography allowing us to write a review and provide answers to certain number of questions remained pending through treating some thematic that seemed us significant. Indeed, we have (i) demonstrated that head and body lice in Africa can be infected with B. quintana when patients live in poor economic conditions and are also exposed to body lice; identified for the first time the mitochondrial clade of lice Mali, Kenya, Congo and Madagascar, and confirmed that of Senegal, Algeria, Ethiopia, Rwanda and Burundi, (ii) demonstrated that head and body lice in SDF doubly infected belong to the same population of body lice, and under conditions of massive infestation, body lice can migrate and colonize the hair and vice versa, (iii) proved the need to make national epidemiological surveys on pediculosis in areas of Mali, (iv) demonstrated by in vitro model that doxycycline has a direct effect on endosymbiont bacteria of louse Candidatus Riesia pediculicola via mycetoma. This last work allowed us to highlight the synergistic efficacy of ivermectin + antibiotics to fight more effectively the infestation of lice and avoid the appearance of resistance. This work was subject of a patent.

Les sporozoïtes de Plasmodium sont injectés par un moustique Anophèle et infectent le foie où le parasite se développe avant l’initiation d'une phase symptomatique érythrocytaire. Le sporozoïte pénètre activement les hépatocytes en formant une vacuole parasitophore où il se multiplie. Des facteurs parasitaires et de l’hôte sont impliqués dans l’invasion des hépatocytes mais les mécanismes restent méconnus. Pour faciliter l’étude de l’infection, nous avons généré des parasites fluorescents grâce à une nouvelle stratégie GOMO. L’utilisation des parasites P. yoelii fluorescents et d’un modèle cellulaire de lignées permissives ou non à l’infection, nous a permis de caractériser les mécanismes moléculaires et les cinétiques d’invasion. Nous avons montré que l’invasion productive est précédée d’une phase de traversée cellulaire où le parasite forme des vacuoles transitoires, distinctes des vacuoles parasitophores. Le parasite se sert d’une perforine PLP1 pour sortir de cette vacuole transitoire et échapper à la dégradation par les lysosomes de la cellule. Nous avons étudié le rôle de différents facteurs de l’hôte lors de l’invasion productive, selon les espèces plasmodiales. Si CD81 est nécessaire pour l’infection par P. falciparum et P. yoelii, les parasites P. berghei et P. vivax peuvent infecter des cellules n’exprimant pas cette protéine. Nous avons identifié deux protéines de la superfamille CD36, SR-BI et CD36, qui jouent un rôle lors de l’invasion CD81-indépendante. Ces résultats contribuent à l’élucidation des mécanismes d’entrée du parasite dans le foie et orientent vers la découverte des ligands parasitaires impliqués qui pourront être des cibles vaccinales. / Plasmodium sporozoites are transmitted by Anopheles mosquitoes and first infect the liver where the parasite replicates as a pre-requisite to the development of the pathogenic blood stage infection. Sporozoites infect hepatocytes by forming a parasitophorous vacuole differentiating into liver stages. Invasion involves parasite and host proteins but the underlying mechanisms remain unknown. To facilitate monitoring of sporozoite invasion, we generated novel transgenic fluorescent parasites, using a new selection strategy termed GOMO (Gene Out Marker Out). Using fluorescent P. yoelii strains and a robust cellular system we further characterized the temporal and molecular mechanisms of sporozoite invasion. We document that sporozoite productive invasion is preceded by a phase of cell traversal, and show that during cell traversal sporozoites enter transient vacuoles, which are distinct from parasitophorous vacuoles. We also uncovered that the perforin-like protein mediates sporozoite egress from transient vacuoles and escape from degradation by the host cell lysosomes. We studied the role of host factors implicated during the productive invasion of rodent and human Plasmodium species. We knew that P. falciparum and P. yoelii sporozoites require CD81 for infection and that P. berghei and P. vivax can infect cells lacking CD81. We identified two members of CD36 superfamily, SR-BI and CD36, as host entry factors defining a CD81-independent entry route. These results pave the way toward the elucidation of the mechanisms of sporozoite invasion and the identification of parasite ligands that mediate host cell entry, which would constitute potential targets for a malaria vaccine.