O eixo GH/IGF-I é um sistema de mediadores de crescimento, receptores e proteínas de ligação que controlam o crescimento somático e tecidual em muitas espécies e programas de exercícios estão relacionados a esta função anabólica por meio da ação deste eixo. Partindo deste pressuposto, o presente estudo tem como objetivo verificar o comportamento do eixo GH/IGF-I, da proteína de ligação do IGF e sua relação com a maturação ao longo de uma temporada competitiva de jogadores de futebol adolescentes e a sua relação com o desempenho dos atletas. 11 jogadores da categoria sub-15 do Botafogo Futebol Clube foram selecionados para o estudo. As concentrações de GH, IGF-I e IGFBP3 foram mensuradas por ensaios imunocolorimétricos específicos (Immulite) e as coletas ocorreram antes e após uma sessão de treino padrão (STP). A potência aeróbia e anaeróbia, velocidade, força rápida e agilidade foram avaliadas um dia antes da coleta de sangue através dos testes Léger, RAST, Velocidade de 30m, Salto Sêxtuplo e Teste T. A maturação foi controlada pelo Pico de Velocidade do Crescimento (PVC) uma ferramenta que apresenta a distância em anos que o indivíduo está de sua maturação. As coletas e testes ocorreram em 3 momentos (M1, M2 e M3) da competição. As concentrações hormonais foram analisadas pelo teste de Wilcoxon and Friedman e os resultados dos testes motores e PVC foram analisados por meio da ANOVA para medidas repetidas e post hoc de Bonferroni. Os níveis de IGF-I (ng/mL) apresentam uma redução após o STP na fase final da competição (461±95 vs. 429±87; p=0,04). Já a fase anabólica evidencia-se pelo aumento nos níveis de IGF-I após a STP no M2 (460±68 vs. 519±115; p=0,05). A variação nas concentrações de IGF-I após a STP foi significativamente maior no M2 em relação ao M3 (59±95 vs. -32±49 ng/ml; p=0,04). O IGFBP-3 (ng/mL) apresentou concentrações mais elevadas tanto antes quanto após a STP no M2 quando comparado ao M3(4,9±1,0 vs. 4,6±1,0 mg/l; p=0.03) (5,5±1,7 vs. 4,5±0,8 mg/l; p=0.04). O GH (ng/mL) não apresentou variação significante durante toda a competição. Os valores de potência (Watt) foram maiores no M2. O teste post hoc de Bonferroni mostrou que a Pot_Med nos momentos M1 (409,1±87,3) e M2 (458±100) apresentam diferença significante (p=0,007). O mesmo aconteceu para Pot_Pico M1 (507,6±26,7) M2 (562,8±34,7) (p=0,031) e também para Pot_Mín M1 (305,5±28,9) M2 (376,75±25,01) (p=0,007). A velocidade (s) também atingiu seu valor mais alto no M2, o teste post hoc de Bonferroni mostrou que os valores M2 (4,47±0,17) são significativamente maiores do que no M1 (4,29±0,14) (p=0,03). A agilidade acompanhou os demais resultados M2 (8,91 ± 0,33) e M3 (9,25 ± 0,30) (p=0,004). O IGF-I apresentou-se sensível aguda e cronicamente aos efeitos dos estímulos da competição. O IGFBP-3 foi sensível aos efeitos crônicos e os resultados de potência e velocidade acompanharam o comportamento do IGF-I e IGFBP-3. Ambos peptídeos se mostraram sensíveis marcadores de estado de treinamento de jovens futebolistas. A maturação não influenciou no processo visto que os atletas já estavam maturados no M1. / The GH/IGF-I axe is a mediator system of growing, receptors and binding proteins that control somatic and tissue growth in many species and physical exercises programs are related to this anabolic function through this system. From this point to view, the objective of this study is to verify possible changes in the GH/IGFs axe, IGF binding protein during a competion season in young soccer players and the relation of these variables with athletic performance and maturation. 11 male athletes under-15 to Botafogo Futebol Clube was selected for this study. GH, IGF-I, IGFBP3 were measured by specific immunocolorimetric assays (Immulite) and collections occurred before and after a standard training session (STP). The aerobic and anaerobic power, velocity, fast force and agility were evaluated one day before the blood collection through the Léger, RAST, 30m Velocity, Six Jump and T-tests. The maturation was controlled by the Peak of Growth Velocity) a tool that presents the distance in years that the individual is of its maturation. The collections and tests occurred in 3 moments (M1, M2 and M3) of the competition. Hormone concentrations were analyzed by the Wilcoxon and Friedman test and the results of the motor and PVC tests were analyzed by ANOVA for repeated and post hoc Bonferroni measurements. IGF-I levels (ng / mL) showed a reduction after PTS in the final phase of competition (461 ± 95 vs. 429 ± 87; p = 0,04). The anabolic phase is evidenced by the increase in IGF-I levels after PTS in M2 (460 ± 68 vs. 519 ± 115, p = 0,05). The variation in IGF-I concentrations after STP was significantly higher in M2 compared to M3 (59 ± 95 vs. -32 ± 49 ng / ml; p = 0,04). IGFBP-3 (ng / mL) had higher concentrations both before and after PTS in M2 when compared to M3 (4,9 ± 1,0 vs. 4,6 ± 1,0 mg / l; p = 0,03) (5,5 ± 1,7 vs. 4,5 ± 0,8 mg / l, p = 0,04). GH (ng / mL) did not show significant variation during the whole competition. The power values (Watt) were higher in M2. The post hoc Bonferroni test showed that Pot_Med at moments M1 (409,1 ± 87,3) and M2 (458 ± 100) presented a significant difference (p = 0.007). The same occurred for Pot_Pico M1 (507,6 ± 26,7) M2 (562,8 ± 34,7) (p = 0.031) and also for Pot_Mín M1 (305,5 ± 28,9) M2 (376,75 ± 25,01) (p = 0,007). The velocity (s) also reached its highest value in M2, the Bonferroni post hoc test showed that M2 values (4,47 ± 0,17) are significantly higher than in M1 (4,29 ± 0,14) (p = 0,03). Agility followed the other M2 (8,91 ± 0,33) and M3 (9,25 ± 0,30) (p = 0,004) results. IGF-I was acutely and chronically sensitive to the effects of competition stimuli. IGFBP-3 was sensitive to chronic effects and the results of potency and speed followed the behavior of IGF-I and IGFBP-3. Both peptides proved to be sensitive markers of training for young footballers. The maturation did not influence the process since the athletes were already matured in M1.

Foram avaliadas as concentrações plasmáticas de leptina e IGF-I do 8° ao 16° mês de idade de 36 novilhas Nelore e comparadas com a idade à primeira ovulação e precocidade sexual. Para a quantificação da leptina, foi validado um radioimunoensaio (RIA) utilizando anticorpo produzido contra leptina recombinante eqüina após inoculação em coelho. A especificidade, estabilidade, taxa de recuperação e efeito matriz indicaram que o ensaio foi adequado para a quantificação de leptina plasmática bovina. O IGF-I foi quantificado por Kit comercial (DSL). As amostras de sangue foram colhidas em intervalos de 4 dias e avaliadas nos 60 dias retrospectivos à primeira ovulação e de amostras mensais do 8° ao 16° mês de idade. A maioria das novilhas (83,3%) ovulou até o final do experimento e foram divididas em prenhes até os 16 meses de idade (33,3%), formando o grupo precoce (P), e não prenhes (50%), formando o grupo Não Precoce (NP) 16,7% das novilhas não ovularam (chamadas de NO) até o final do experimento. Não houve diferença (P > 0,05) na idade à primeira ovulação entre os grupos P (439±27,9 dias) e NP (445±36,8 dias). O peso aumentou (P < 0,01) nos 3 grupos, não diferiu (P > 0,05) entre as novilhas P e NP durante o experimento, mas as NO apresentaram peso inferior aos outros grupos a partir do 12°mês (P < 0,01). Nos 60 dias que antecederam a primeira ovulação, a concentração de leptina plasmática aumentou (P < 0,01) no grupo P, mas não nos grupos NP e NO (P > 0,5), porém não houve diferença entre os grupos (P > 0,5). Houve correlação entre a concentração de leptina plasmática e o peso corporal nos grupos P (r=0,36; P < 0,01) e NP (r=0,4313; P < 0,01), mas não no grupo NO (r=0,095; P > 0,5). A concentração plasmática de IGF-I aumentou (P < 0,01) nos 3 grupos do 8° ao 16° mês de idade, mas foi maior no grupo P (P < 0,01) do que nos NP e NO, que não diferiram entre si. Antes da primeira ovulação, não foi verificado aumento (P > 0,1) na concentração de IGF-I em nenhum dos grupos, porém a concentração foi maior no grupo P (P < 0,05). Pode-se concluir que a concentração de leptina, junto com o peso corporal foram importantes na primeira ovulação, enquanto o IGF-I, na determinação da precocidade sexual. / Plasmatic leptin and IGF-I were quantified from 36 Nelore heifers, and compared to age at first ovulation and sexual precocity. For leptin quantification, a radioimmunoassay, using antibody against recombinant equine leptin inoculated in rabbit was validated. The specificity, stability, recuperation tax and matrix effect showed that the assay was able to quantify for plasmatic bovine leptin quantification. The IGF-I was quantified with a commercial Kit (DSL). Blood samples were taken every 4 days and analyzed retrospectively 60 days before first ovulation and from mensal samples from 8th to 16th month of age. Most of the heifers ovulated (83.3%) until the end of experiment, those were divided in heifers that became pregnant until the 16° month of age (33.3%), named Precocious group (P), 50% that did not became pregnant were the non precocious group (NP) 16% of the heifers did not ovulated and were named NO. There was no difference (P > 0.05) in the first ovulation age between P (439±27.9 days) and NP (445±36.8 days) groups. The weight of the 3 groups increased (P < 0.01), but did not differ (P > 0.05) between P and NP heifers but NO showed lower weight (P < 0.01) after the 12th month (P < 0.01). Sixty days before first ovulation, plasmatic leptin concentration increased (P < 0.01) in P group, but did not in NP or NO (P > 0.5), and there were no difference between groups. (P > 0.5). There was correlation between plasmatic leptin and body weight in P (r=0.36; P < 0.01) and NP (r=0.4313; P < 0.01), but did not in NO group (r=0.095; P > 0.5). Plasmatic IGF-I concentration increased (P < 0.01) in the 3 groups, from 8th to 16th month of age, but was higher in P (P < 0.01) than NP and NO, that did not differ among themselves. Before first ovulation there was, no increase (P > 0.1) in IGF-I in none of groups, but concentration was higher in P (P < 0.05) group. It could be concluded that leptin concentration as well as body weight were important in first ovulation, while IGF-I, in the sexual precocity determination.

Made available in DSpace on 2016-08-17T17:11:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_ARIEL DE ALMEIDA COELHO.pdf: 1092576 bytes, checksum: 5f74aa9cceb65b68fc6d8633937e2c89 (MD5) Previous issue date: 2014-03-20 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / This study aimed to verify the effect of bovine somatotrophin (bST) on sexual development, semen and endocrine traits in peripubertal buffalo. A total of 20 male Murrah buffaloes (Bubalus bubalis) (14 months of age) were randomly distributed into two treatments (bST vs control). The body weight, body condition score, testicular measurements, semen traits and IGF-I levels were evaluated once a month for a year. The ejaculate was collected by electroejaculation and physical and morphological analyzes were proceeded. Data analysis was performed using the Statistical Analysis System for Windows, SAS®. There was no difference (P>0.05) between bST and Control treatments on body weight or body condition score. Testicular measurements also showed no differences (P>0.05) between treatments, but increases significantly in a similar trend. There was no positive effect of bST treatment on age at first appearance of spermatozoa in the ejaculate (P> 0.05), but the bST group showed a significant tendency to increase the number of animals exhibiting puberty at each breeding soundness evaluation (P = 0.054). Sperm motility, vigor and percentage of abnormalities showed no difference (P>0.05). There was no difference (P>0.05) between bST and Control treatments on IGF-I serum concentrations. In conclusion, the use of bST did not result in positive effects on sexual development, semen traits and endocrine profile of male buffaloes in peripubertal period. / Objetivou-se com este estudo verificar o efeito da somatotropina bovina (bST) sobre o desenvolvimento sexual, características seminais e hormonais em bubalinos no período peripuberal. Um total de 20 búfalos machos, não castrados, da raça Murrah (Bubalus bubalis) (12 meses de idade) foram distribuídos em dois tratamentos (bST vs controle) em um delineamento de blocos ao acaso com dez repetições. O peso corporal, escore de condição corporal, biometria testicular, características seminais e os níveis de IGF-I foram avaliados uma vez por mês durante oito meses. O ejaculado foi coletado por eletroejaculação e submetido a análise física e morfológica. A análise dos dados foi realizada utilizando o Statistical Analysis System for Windows, SAS®. Não houve diferença (P> 0,05) entre os tratamentos bST e Controle no peso e no escore de condição corporal. As mensurações testiculares também não apresentaram diferenças (P> 0,05) entre os tratamentos, mas aumentaram com a idade significativamente em uma tendência similar. Não houve efeito positivo do tratamento com bST sobre a idade ao aparecimento dos primeiros espermatozóides no ejaculado (P>0,05). O bST apresentou uma tendência significativa em antecipar a puberdade (P = 0,054). A motilidade, vigor e percentual de anormalidades espermáticas não apresentou diferença (P> 0,05) entre tratamentos. Não houve diferença (P> 0,05) entre os tratamentos bST e Controle nas concentrações séricas de IGF-I. Em conclusão, o uso de bST não resulta em efeitos positivos sobre o desenvolvimento ponderal e sexual em bubalinos machos no período peripuberal.

A subnutrição é uma doença causada pela ingestão inadequada e/ou insuficiente de energia ou de outras biomoléculas, que pode comprometer o crescimento e o desenvolvimento dos tecidos. Em conjunto, a cartilagem do processo condilar da mandíbula e a sincondrose basioccipital representam os dois centros efetivos do crescimento craniofacial, que depende, dentre outros, de fatores locais como a produção do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I) e seu receptor (IGF-IR). Alterações tanto no peptídeo quanto no receptor estão associadas a graves atrasos no crescimento e desenvolvimento ósseo. Dentre os nutrientes alternativos com a capacidade de promoção da recuperação nutricional, destaca-se o resveratrol, um polifenol contido na uva e derivados que pode promover a melhora do crescimento através de propriedades osteogênicas, além de atuar como condroprotetor. Assim, a presente pesquisa teve por objetivo avaliar os efeitos da subnutrição proteica na cartilagem do processo condilar da mandíbula (PC) e na sincondrose basioccipital (SBo) de ratos, bem como os processos de renutrição e suplementação com resveratrol nos períodos pré-púbere (21 dias) e púbere (60 dias). Os grupos nutrido (N) e subnutrido (S) foram formados por filhotes cujas mães receberam dieta normoproteica e hipoproteica, respectivamente, desde o período de acasalamento; ao completarem 21 dias de vida extrauterina, época determinada para o desmame, os filhotes foram eutanasiados. A partir do 22&deg; dia de vida, filhotes dos grupos N e S foram mantidos com as respectivas dietas até o 60&deg; dia de vida quando constituíram, respectivamente, os grupos NN e SS. Dois grupos considerados renutridos foram formados por animais do grupo S, que a partir do 22&deg; dia passaram a receber, o primeiro, a dieta normoproteica com 20% de caseína (grupo RN), e o segundo, a dieta normoproteica acrescida de resveratrol (RRv). A cartilagem do PC e a SBo foram processadas através das técnicas histológicas rotineiras e posteriormente submetidas às colorações da HE, Picrossíruis e Safranina-O, para a evidenciação dos componentes celular e colágeno e imunohistoquímica para a marcação de células reativas ao IGF-I e IGF-IR. Os aspectos ultraestruturais também foram analisados através da microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que a subnutrição foi capaz de alterar os componentes da matriz extracelular (MEC), acarretando em modificações na secreção das fibrilas colágenas e acúmulo de proteoglicanas nos tecidos; diminuição do número de células imunorreativas ao IGF-I e IGF-IR na cartilagem do PC e atraso no crescimento ósseo endocondral, comprovado através das avaliações quantitativas e morfométricas, em ambos os tecidos. A renutrição com dieta normal foi parcialmente eficaz na recuperação dos parâmetros avaliados, e pode ter provocado uma diminuição da capacidade de resposta celular ao IGF-I. Os efeitos condroprotetores do resveratrol foram fundamentados através da recuperação dos componentes da MEC e organelas dos condrócitos e uma possível diminuição da insensibilidade ao IGF-I; o atraso no crescimento ósseo endocondral foi minimizado através do seu potencial osteogênico (mais acentuado na SBo). Muito embora a recuperação dos tecidos não tenha ocorrido totalmente, diante dos dados apresentados, pode-se afirmar que a suplementação de resveratrol na dieta auxiliou de forma mais efetiva no restabelecimento dos parâmetros afetados pela subnutrição do que somente a recuperação proteica com dieta normal / Undernutrition is a disease caused by inadequate and / or insufficient intake of energy or other biomolecules, which can compromise growth and development of tissues. Together, the mandibular condylar cartilage and basioccipital synchondrosis represent the two effective centers of craniofacial growth, which depends of the factors such as the local production of insulin like growth factor I (IGF-I) and receptor (IGF-IR). Changes in both the peptide and receptor are associated with serious delays in growth and bone development. Among the alternative nutrients to the promotion capacity of nutritional recovery, there is resveratrol, a polyphenol contained in grapes and derivatives that can promote improved growth through osteogenic properties, besides acting as chondroprotective. Thus, the present study aimed to evaluate in rats the effects of protein undernutrition in the mandibular condylar cartilage and basioccipital synchondrosis, as well renutrition and supplementation with resveratrol in pre pubertal periods (21 days) and pubertal (60 days). The nourished groups (N) and undernourished (S) were formed by young whose mothers received normal protein and hypoproteic diet respectively since the breeding season; to complete 21 days of extra-uterine life, given time to weaning, puppies were euthanized. From the 22nd day of life, puppies from N and S groups were kept with their diets until the 60th day of life when constituted, respectively, NN and SS groups. Two groups considered re-nourished were formed by the S group, which from day 22 began receiving, the first, the normal protein diet with 20% casein (RN group), and the second, the normal protein diet plus of resveratrol (RRv). The cartilage of PC and SBo were processed through routine histological techniques, and then subjected to HE, Sirius red and Safranin-O staining for the disclosure of cellular components and collagen and immunohistochemistry for marking cells responsive to IGF-I and IGF-IR. The ultrastructural aspects were also analyzed by transmission electron microscopy. The results showed that undernutrition was able to change the components of the extracellular matrix (ECM) leading to changes in the secretion of collagen fibrils and proteoglycans accumulation in the tissues; decrease in the number of immunoreactive cells to IGF-I and IGF-IR in PC cartilage and delayed endochondral bone growth, confirmed by quantitative and morphometric analysis in both tissues. Renutrition with normal diet was partially effective in recovering the parameters evaluated, and may have caused a decrease in cell responsiveness to IGF-I. The chondroprotective effects of resveratrol were founded by recovering the ECM components and organelles of chondrocytes and a possible decrease in the insensitivity to IGF-I; the delay in endochondral bone growth was minimized by osteogenic potential (more pronounced in SBo). Although the tissue recovery has not fully occurred, the resveratrol supplementation in the diet helped more effectively in restoring the parameters affected by undernutrition than just protein recovery with normal diet

O Diabetes mellitus é um distúrbio metabólico de etiologia múltipla que leva a uma hiperglicemia, podendo ocasionar inúmeras disfunções e falências de alguns órgãos e também alterações em cavidade oral. Estudos demonstraram diminuição da glicemia de ratas diabéticas com o uso de laser de baixa potência (LBP) em glândulas salivares. Como o insulin-like growth factor 1 (IGF-1) tem uma estrutura semelhante a da insulina, podendo mimetizar algumas de suas funções, o objetivo do presente trabalho foi analisar o efeito da irradiação com LBP na concentração de IGF-1, nas glândulas parótidas (GP) e submandibulares (GSM), e o efeito na glicemia de ratas diabéticas induzidas por estreptozotocina. Ratas da raça Wistar foram utilizadas e receberam uma injeção intraperitoneal de estreptozotocina ou de tampão conforme o grupo ao qual pertenciam, C (controle) ou D (diabético). Posteriormente, as ratas foram divididas em 4 subgrupos (C0, D0, C5 e D5), de acordo com a dose de irradiação recebida (0 ou 5 J/cm²). O estado diabético dos animais foi confirmado através da glicemia e, após 29 dias, os animais foram submetidos à simulação ou irradiação. O LBP utilizado foi o Photon Lase III (DMC Equipamentos LTDA®). Vinte e quatro horas após o procedimento os animais foram sacrificados para coleta de sangue e das glândulas salivares para as análises da glicemia (método da glicose oxidase e do glicosímetro) e concentração de IGF-1, respectivamente. Os resultados foram analisados pelo teste estatístico de Análise de Variância (ANOVA) e teste de contraste de Tukey, admitindo-se significância de 5%. A glicemia do dia do sacrifício, dos animais diabéticos que receberam irradiação, estava diminuída quando comparada com a glicemia de sacrifício dos animais diabéticos que não receberam o laser (p0,05). Além disso, a glicemia de sacrifício dos animais diabéticos irradiados foi menor que a aferida no dia do diagnóstico, quando foi utilizado o método do glicosímetro (p0,05). A concentração de IGF-1, entretanto, não sofreu influência da doença e nem da irradiação, se mostrando alterada somente quando comparada a GP e GSM. Com base nestes resultados podemos concluir que o LBP pode alterar a glicemia dos animais diabéticos, no entanto, este efeito parece não estar relacionado com a concentração de IGF-1. / Diabetes mellitus is a metabolic disorder of multiple etiologies that leads to hyperglycemia and can cause numerous dysfunctions and failures of some organs and also changes in the oral cavity. Studies have shown a decrease on glucose blood concentration in diabetic rats when low-power laser was used upom salivary glands. As insulin-like growth factor 1 (IGF-1) has a structure similar to insulin, the aim of this study was to analyze the effect of low-power laser irradiation on IGF-1 concentration of the parotid and submandibular glands as well as on glycemia of diabetic rats induced by streptozotocin. Wistar rats were used and received an intraperitoneal injection of streptozotocin or buffer, depending on the group to which they belonged, being C (control) or D (diabetic). Subsequently, the rats were divided into 4 subgroups (C0, D0, C5 and D5) according to the irradiation dose received (0 or 5 J / cm ²). The diabetic state of the animals was confirmed by blood glucose concentration and, after 29 days, the animals were subjected to irradiation or simulation, depending on the group to which they belonged. The laser used was the Photon Lase III (DMC Equipamentos LTDA®). Twenty-four hours after the procedure, the animals were sacrificed and blood and the salivary glands were collected to analyse the glycemia and IGF-1 concentration, respectively. The results were analyzed by Analysis of Variance statistical test (ANOVA) and Tukey\'s contrast test, assuming a significance of 5%. The sacrifice day glycemia of diabetic animals that received irradiation was decreased in comparison with the sacrifice day glycemia of non-irradiated diabetic animals as well as was lower than that measured on the day of diagnosis of irradiated animals (p0,05). The concentration of IGF-1, however, was not affected by diabetes or irradiation. However, IGF-1 concentration was increased on parotid than submandibular glands. Based on these results of the present study, we conclude that LBP can decrease blood glucose concentration of diabetic animals, however, this effect does not appear to be related to the concentration of IGF-1.

As Distrofias Musculares Progressivas constituem um grupo de doenças genéticas caracterizadas por uma degeneração progressiva e irreversível da musculatura esquelética. As diferentes abordagens terapêuticas propostas para esse grupo de doenças têm como enfoque restaurar a proteína muscular deficiente por meio da terapia celular ou terapia gênica, ou o tratamento dos sinais e sintomas patológicos do músculo pela administração de fármacos e/ou fatores de crescimento. A combinação de diferentes estratégias pode aumentar a eficiência do reparo muscular. Deste modo, este trabalho tem como objetivo principal avaliar o potencial terapêutico das célulastronco mesenquimais (MSCs) associadas ao fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-1) para diferentes tipos de distrofias musculares. Inicialmente avaliamos o potencial miogênico de MSCs humanas de cordão umbilical in vitro. Nossos resultados demonstraram que os fatores solúveis liberados pelo músculo distrófico de camundongos mdx foram capazes de induzir a diferenciação miogênica terminal das células-tronco. Além disso, verificamos que o IGF-1, por si só, é capaz de promover a miogênese de MSCs, com mais eficiência que os protocolos de indução padrões. Ainda nos estudos in vitro, demonstramos que MSCs são capazes de interagir com células musculares de pacientes com Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) e restaurar a expressão de distrofina, quando cultivadas em meios suplementados com IGF-1. Frente a estes resultados, prosseguimos com os estudos em modelos animais, in vivo, e demonstramos que as MSCs humanas de cordão umbilical e IGF-1, quando administrados conjuntamente por via sistêmica, são capazes de modular a inflamação, reduzir a fibrose, aumentar o reparo muscular e, consequentemente, promover uma melhora clínica significativa do músculo de camundongos LAMA2dy/2j - modelo murino de Distrofia Muscular Congênita. Cabe ressaltar que as células humanas não foram rejeitadas após administração sistêmica em modelos animais não imunossuprimidos. Esses resultados suportam o potencial uso combinado de MSCs de cordão umbilical humano e IGF-1 no tratamento de distrofias musculares. Contudo, a confirmação destes dados em um modelo animal de grande porte, como os modelos caninos de distrofia muscular, é de extrema importância visando o entendimento dos mecanismos envolvidos no reparo muscular e avaliação de eventuais efeitos adversos, o que pode representar um passo importante para o início dos testes clínicos em pacientes / Progressive muscular dystrophies are a clinically and genetically heterogeneous group of disorders caused by the deficiency or abnormal muscle proteins, resulting in progressive degeneration and loss of skeletal muscle function. Strategies for the development of a muscular dystrophy therapy have focused on the possibility of restoring the defective muscle protein by cell therapy or on delivery of growth factors to treat or ameliorate muscular pathology symptoms. Combining both strategies could be a very useful approach to enhance the efficiency of muscle repair. The aim of this study is to evaluate the therapeutic potential of human mesenchymal stem cells (MSCs) from umbilical cord tissue combined with IGF-1 for muscle regeneration. Firstly, we verified the myogenic potential of these cells in vitro. Our results demonstrated that the soluble factors released from mdx dystrophic muscle were able to promote the myogenic differentiation of MSCs. Moreover, we showed that IGF-1 is capable of enhancing considerably the myogenesis of human MSCs from UC in vitro. More interestingly, we showed that IGF-1 enhances the interaction of MSCs and DMD muscle cells in coculture and the restoration of dystrophin expression. Subsequently, our in vivo studies revealed that the association of IGF-1 and MSCs markedly reduced muscle inflammation and fibrosis, and significantly improved muscle strength in LAMA2dy/2j mice, a murine model for congenital muscular dystrophy. It is important to point out that human cells are not rejected even in xenotransplants without immunosuppression. In summary, our results suggest that a combinatorial strategy of both IGF-1 and MSCs could enhance the efficiency of muscle repair and, therefore, should be further tested as a potential therapeutic approach in muscular dystrophies. However it is important to repeat the experiments on canine dystrophic model (GRMD; Golden Retriever Muscular Dystrophy) - in order to enhance our knowledge about the mechanism involved in muscle repair and monitor any eventual long-term side effects, which could represent an important point to start the clinical trial in patients

Fatores nutricionais e metabólicos são capazes de comprometer o desenvolvimento pleno dos tecidos dentários, especialmente quando impingidos em períodos críticos. Estudos revelam que condições derivadas da subnutrição precoce e também tardia, interferem na atividade da insulina e do sistema IGF, demonstrando possível envolvimento com algumas patologias e apontando, em sua maioria, caráter permanente em alto grau, se não imediato, prospectivo e comprometedor da performance morfológica e funcional dos tecidos. Desta maneira, o presente estudo teve o propósito de avaliar os efeitos da subnutrição proteica pré e pós-natal e da renutrição pós-natal sobre o desenvolvimento da polpa dentária e do epitélio juncional do periodonto de ratos wistar, visando encontrar possível correspondência entre as alterações metabólicas e morfofuncionais decorrentes da subnutrição proteica, previamente relacionadas em estudos relativos à ação desses hormônios. Para tanto, formou-se grupos de animais heterogênicos (n=3) que, de acordo com a ração oferecida, normoproteica ou hipoproteica, e as respectivas idades, foram divididos nos seguintes grupos experimentais: nutridos (N) e subnutridos (S) com 60 dias de vida (fase na qual o período púbere termina) e renutridos (R), recuperados a partir de 22 até alcançarem 60 dias de vida. Após a eutanásia, os espécimes foram submetidos às técnicas de microscopia de luz (coradas com Azo-Carmim, Hematoxilina-Eosina e Picro-Sirius, esta última para a avaliação do componente colágeno) e imunohistoquímica para a identificação da expressão do IGF-I, insulina e respectivos receptores. A polpa dentária apresentou-se debilitada sob subnutrição o que foi verificado através da desorganização da camada odontoblástica e da estagnação dos componentes colágenos nos animais subnutridos. A renutrição não foi capaz de promover a recuperação de nenhum dos dois parâmetros. O estudo morfométrico permitiu verificar que a porcentagem média do número de expressões ao IGF-I foi maior nos animais do grupo N e que houve diferenças estatísticas significantes entre estes e os animais dos grupos S e R. Da mesma forma, a maior expressão de seus receptores (IGF-IR) foi encontrada nos animais do grupo N com indicação de diferença estatística apenas entre este e o grupo de animais subnutridos. A maior porcentagem média das expressões de insulina ocorreu nos animais nutridos (N), mas estatisticamente não foi detectada diferença significativa entre os grupos. Já em relação ao receptor de insulina (IR), foram constatadas diferenças estatísticas significativas entre o grupo N em relação aos grupos S e R. No epitélio juncional, a subnutrição determinou modificações no padrão das células e camadas epiteliais nos animais subnutridos, além de uma maior quantidade de colágeno do tipo III no tecido conjuntivo que o sustenta, caracterizando um atraso no desenvolvimento desses tecidos. A renutrição não foi capaz de recuperar satisfatoriamente os seus componentes estruturais. Sobre as expressões imunohistoquímicas a todos os anticorpos utilizados (para IGF-I, IGF-IR, I e IR), a análise estatística demonstrou não haver diferenças significativas entre os valores encontrados nos diferentes grupos N, S e R no epitélio juncional. / Nutritional and metabolic factors can cause serious injury of the development of dental tissue, especially when occurred in critical periods. Several studies reveal that conditions derived from early and later under nutrition interfere in insulin and IGF system activities; in these studies has been demonstrated the possible involvement of some pathologies most of them pointing to permanent in high degree (if not immediate) prospective and \"possible dangerous\" morphological and functional performance of tissues. Thus, the present study aimed to evaluate the effects of the pre and post-natal protein under nutrition, and, post-natal refeeding on the development of the dental pulp and periodontal junctional ephitelium of wistar rats, in order to find possible correlation between the metabolic and morph-functional changes arising from protein under nutrition, previously associated with studies related to the effects of these hormones. For this purpose, heterogenic animal groups were formed (n=3) divided in accordance of their diets (protein or hypo protein) and their ages into the following experimental groups: nourished (N) under nourished (S) aged 60 days (final of pubescent l periods) and renourish (R), recovered from the 22nd to 60th day old. After euthanasia, the specimens were analyzed by light microscopy (stained with Azo-carmine, Hematoxylin-Eosin and Picro Sirius, the later for collagen component analysis) and immunohistochemistry examination for identification of IGF-I expression, Insulin and respective receptors. The dental pulp turned out to be impaired in the context of undernutrition. This phenomenom was seen through disorganization of the odontoblastic layer and the stagnation of collagen components in undernourished animals. The refeeding procedure was unable to promote the recovery from any of the two parameters. With the immunohistochemistry on the dental pulp, it was found that the number of IGF-I expression was higher in group N and that there were significant differences involving these animals and those from groups S and R. Similarly, the highest expression of their receptors (IGF-IR) was found in group N, demonstrating statistical difference between this one and the group of undernourished animals. The highest average percentage of the expressions of insulin occurred in nourished animals (N), but no statistically significant difference was detected among the groups. In regard to the insulin receptor (IR), statistically significant differences were found when the group N was compared to groups S and R. In the junctional ephitelium, the undernutrition determined changes in the pattern of epithelial cells in undernourished animals and the prevalence of type III collagen fibers in the connective tissue that supports it, featuring a delay in the development of these tissues. The refeeding was not able to satisfactorily recover their structural components. About immunohistochemical expressions of all antibodies used for IGF-I, IGF-IR, I e IR in the junctional ephitelium, the statistical analysis showed no significant differences among the values found in the groups N, S and R.

Como a grande maioria dos tecidos e órgãos, a estrutura da mucosa lingual é influenciada por diversos fatores, dentre eles os nutricionais e os metabólicos. Dessa maneira, a subnutrição protéica pré-natal, associada a inúmeras patologias pós-natais, e a atividade da insulina e de IGF-I, representam importantes pontos a serem correlacionados na avaliação morfológica e funcional do tecido. Assim, avaliou-se no presente estudo, os efeitos da subnutrição protéica pré e pós-natal e da renutrição pós-natal, sobre a taxa de renovação do epitélio, relacionando-a à atividade da insulina e do IGF-I, no intuito de encontrar possível correspondência entre as alterações metabólicas e morfofuncionais, com a atividade desses importantes hormônios sobre o desenvolvimento do epitélio lingual, nas fases púbere e adulta. Para tanto, os grupos experimentais foram formados por animais heterogênicos (n=3) de acordo com a ração oferecida, protéica ou hipoprotéica, e com as respectivas idades, nos grupos N, D (nutridos e desnutridos aos 60 dias de vida, fase na qual o período púbere é finito), R (renutridos a partir de 21 até alcançarem 60 dias de vida), NN (nutridos até 100 dias de vida) e RR (renutridos desde o desmame até alcançarem 100 dias de vida). Após avaliação sob microscopia de luz com técnicas rotineiras de histologia e imunohistoquímicas para a identificação do IGF-I, Insulina e respectivos receptores, verificou-se que as camadas da mucosa lingual não apresentaram diferenças entre os grupos estudados. As papila filiformes, de forma triangular ao corte nos animais do grupo N, nem sempre foram detectadas nos grupos S e R, sendo que na fase adulta, (grupos NN e RR) apresentaram-se sob a forma de bastonete. Relativamente à tipificação das fibras colágenas, as do tipo I predominaram no grupo S, sendo verificada uma homogeneidade na distribuição entre as fibras dos tipos I e III nos demais grupos. As densidades de células imunorreativas à Insulina e seu receptor, (IR), bem como IGF-I e seu receptor (IGF-IR) apresentaram-se elevadas nos grupos S e R quando comparadas ao grupo N, e semelhantes nos grupos NN e RR. / Similarly to many tissue and organs, the structure of lingual mucosa is influenced by many factors, among nutritional and metabolic factors. This way, the pre-natal protein under nutrition associated to several post-natal pathologies and the activity of IGF-I and insulin, represents important points to be correlated in the morphological and functional tissue evaluation. Thus, the effects of pre and post-natal protein under nutrition and post-natal re-nutrition on the epithelial renewal taxes relating it to insulin and IGF-I activity, in order to find possible association between the morph functional changes with the activity of these important hormones on the development of the lingual epithelium in the puberal and adult phase. For this purpose, the experimental groups were formed by heterogenic animals (n=3) according to diet (protein and hypoprotein), and, with the respective ages in the groups N and S (nourished and under-nourished at 60 days old, when the puberal period is finite), R (re-nourished from 21 up to 60 days old), NN (nourished up to 100 days old) and RR (re-nourished from weaning up to 100 days of age). After observation under light microscopy with routine histological and immunehistochemical tecnhiques for identification of IGF-I, insulin and respective receptors, it has been verified that the layers of lingual mucosa do not present differences among studied groups. The filliform papillae of triangular shape in group N animals not always been detected in the S and R groups, being in the adult phase (NN and RR groups) presented under bastonete form. Related to tipification of collagen fibers, the type I was predominant in S group, being verified homogeneity in the distribution of type I and III fibers in the other groups. The density of immune reactive cells to insulin and its receptor (IR), as well as IGF-I and its receptor (IGF-IR) were higher in the S and R groups when compared to N group, and were similar in the groups NN and RR.

As Distrofias Musculares Progressivas constituem um grupo de doenças genéticas caracterizadas por uma degeneração progressiva e irreversível da musculatura esquelética. As diferentes abordagens terapêuticas propostas para esse grupo de doenças têm como enfoque restaurar a proteína muscular deficiente por meio da terapia celular ou terapia gênica, ou o tratamento dos sinais e sintomas patológicos do músculo pela administração de fármacos e/ou fatores de crescimento. A combinação de diferentes estratégias pode aumentar a eficiência do reparo muscular. Deste modo, este trabalho tem como objetivo principal avaliar o potencial terapêutico das célulastronco mesenquimais (MSCs) associadas ao fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-1) para diferentes tipos de distrofias musculares. Inicialmente avaliamos o potencial miogênico de MSCs humanas de cordão umbilical in vitro. Nossos resultados demonstraram que os fatores solúveis liberados pelo músculo distrófico de camundongos mdx foram capazes de induzir a diferenciação miogênica terminal das células-tronco. Além disso, verificamos que o IGF-1, por si só, é capaz de promover a miogênese de MSCs, com mais eficiência que os protocolos de indução padrões. Ainda nos estudos in vitro, demonstramos que MSCs são capazes de interagir com células musculares de pacientes com Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) e restaurar a expressão de distrofina, quando cultivadas em meios suplementados com IGF-1. Frente a estes resultados, prosseguimos com os estudos em modelos animais, in vivo, e demonstramos que as MSCs humanas de cordão umbilical e IGF-1, quando administrados conjuntamente por via sistêmica, são capazes de modular a inflamação, reduzir a fibrose, aumentar o reparo muscular e, consequentemente, promover uma melhora clínica significativa do músculo de camundongos LAMA2dy/2j - modelo murino de Distrofia Muscular Congênita. Cabe ressaltar que as células humanas não foram rejeitadas após administração sistêmica em modelos animais não imunossuprimidos. Esses resultados suportam o potencial uso combinado de MSCs de cordão umbilical humano e IGF-1 no tratamento de distrofias musculares. Contudo, a confirmação destes dados em um modelo animal de grande porte, como os modelos caninos de distrofia muscular, é de extrema importância visando o entendimento dos mecanismos envolvidos no reparo muscular e avaliação de eventuais efeitos adversos, o que pode representar um passo importante para o início dos testes clínicos em pacientes / Progressive muscular dystrophies are a clinically and genetically heterogeneous group of disorders caused by the deficiency or abnormal muscle proteins, resulting in progressive degeneration and loss of skeletal muscle function. Strategies for the development of a muscular dystrophy therapy have focused on the possibility of restoring the defective muscle protein by cell therapy or on delivery of growth factors to treat or ameliorate muscular pathology symptoms. Combining both strategies could be a very useful approach to enhance the efficiency of muscle repair. The aim of this study is to evaluate the therapeutic potential of human mesenchymal stem cells (MSCs) from umbilical cord tissue combined with IGF-1 for muscle regeneration. Firstly, we verified the myogenic potential of these cells in vitro. Our results demonstrated that the soluble factors released from mdx dystrophic muscle were able to promote the myogenic differentiation of MSCs. Moreover, we showed that IGF-1 is capable of enhancing considerably the myogenesis of human MSCs from UC in vitro. More interestingly, we showed that IGF-1 enhances the interaction of MSCs and DMD muscle cells in coculture and the restoration of dystrophin expression. Subsequently, our in vivo studies revealed that the association of IGF-1 and MSCs markedly reduced muscle inflammation and fibrosis, and significantly improved muscle strength in LAMA2dy/2j mice, a murine model for congenital muscular dystrophy. It is important to point out that human cells are not rejected even in xenotransplants without immunosuppression. In summary, our results suggest that a combinatorial strategy of both IGF-1 and MSCs could enhance the efficiency of muscle repair and, therefore, should be further tested as a potential therapeutic approach in muscular dystrophies. However it is important to repeat the experiments on canine dystrophic model (GRMD; Golden Retriever Muscular Dystrophy) - in order to enhance our knowledge about the mechanism involved in muscle repair and monitor any eventual long-term side effects, which could represent an important point to start the clinical trial in patients

La protéine Klotho (KL) possède des propriétés anti-vieillissement et anti-cancer. Les données cliniques montrent que l’expression de KL est associée à une meilleure survie des patients atteints de liposarcome. De plus, elle est réduite par rapport au tissu sain dans les liposarcomes dédifférenciés (DDLPS), un type de tumeur maligne rare mais de mauvais pronostic. Nos résultats montrent que KL sensibilise les DDLPS aux chimiothérapies (gemcitabine, navitoclax). L’abondance de KL dans les tumeurs pourrait donc servir de biomarqueur pour prédire l’efficacité des chimiothérapies et mettre en place une médecine plus personnalisée. De plus, des médicaments utilisés pour d’autres pathologies et connus pour stimuler l’expression de KL (Cozaar) pourraient être testés en association avec la chimiothérapie. Enfin, inspirés par le mode d’action de KL, nous avons testé la combinaison de la gemcitabine avec le navitoclax, qui s’est révélée très efficace sur les DDLPS. / Klotho (KL) is both an anti-ageing and anti-cancer protein. Analysis of clinical data highlights that high expression of KL is associated with a better overall survival of liposarcoma patients. Moreover, its expression in downregulated in dedifferentiated liposarcomas (DDLPS), a rare type of tumor associated with a poor prognosis due to high chemoresistance. Our results show that KL sensitizes DDLPS cells to chemotherapeutic agents (gemcitabine, navitoclax). So, abundance of KL in tumoral tissues could serve as a biomarker for predicting gemcitabine efficacy and so, could help for establishing personalized therapy. Moreover, drugs increasing KL expression could be tested in combination with chemotherapy. Based on KL mechanism of action, we also highlight that the combination between gemcitabine and navitoclax is very effective for killing DDLPS cells.