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Introdução: Reservatórios gastroileais (GI) compostos podem apresentar vantagens em relação a segmentos intestinais isolados em cirurgias de reconstrução urinária em pacientes selecionados. Apresentamos aqui as técnicas laparoscópicas de gastroileocistoplastia (ampliação vesical) e de neobexiga gastroileal ortotópica (substituição vesical), realizadas de forma completamente intracorpórea em um modelo suíno experimental. Avalia-se sua viabilidade técnica e resultados funcionais. Métodos: Após padronização da técnica em estudo piloto (três animais), realizaram-se as cirurgias de gastroileocistoplastia (Grupo I; N = 5) e neobexiga GI ortotópica (Grupo II; N = 10), envolvendo os mesmos princípios de ressecção laparoscópica de cunha gástrica e íleo. No grupo II, a criação da neobexiga GI incluiu reimplante ureteral bilateral no segmento gástrico com técnica antirefluxo e anastomose uretro-ileal. Foram utilizados exclusivamente grampeadores e técnicas de sutura livre laparoscópica, de forma completamente intracorpórea. Análise pré e pós-operatória de dados laboratoriais, capacidade vesical, avaliação histológica e por imagem (uretrocistografia, urografia venosa) dos reservatórios resultantes foi concluída ao final do seguimento de 8 a 12 semanas (Grupo I) e quatro a oito semanas (Grupo II). Resultados: Os segmentos ileal e gástrico alcançaram a pelve do animal em todos os casos. Tempo cirúrgico foi de 5,2 h para o Grupo I e 7,4 h para o Grupo II. Não houve conversões ou óbitos intra-operatórios. Todos os reservatórios GI apresentavam-se viáveis por ocasião da eutanásia em ambos os grupos. No Grupo I, quatro dos cinco animais completaram sem intercorrências o seguimento de 8 (N = 2) e 12 (N = 2) semanas. Um animal apresentou deterioração clínica, sendo levado precocemente à eutanásia por pielonefrite e alcalose metabólica. Houve aumento da capacidade vesical (a uma pressão vesical de 20cmH2O) de 650ml para 1025ml (p < 0,05) após a cirurgia de ampliação vesical. No Grupo II, cinco dos 10 animais completaram o seguimento previsto em quatro (N = 3) e oito (N = 2) semanas, com mínima alteração da função renal (Cr pré e pós-operatório=1,4 e 2,2mg/dl, respectivamente; p = 0,09). Três animais tiveram a eutanásia antecipada devido a obstrução ureteral com pielonefrite (N = 2) e alcalose hipoclorêmica severa (N=1). Dois óbitos foram associados a obstrução ureteral bilateral e sepse. Capacidade vesical média das neobexigas foi de 400ml. Não houve casos de refluxo vesico-ureteral à cistografia. Porém, sete das 20 unidades renais (35%) apresentaram estenose uretero-gástrica. Obstrução intestinal (N = 1), fístula gástrica (N = 1) e urinoma (N = 1) foram outras complicações do Grupo II. Conclusões: A ressecção gástrica laparoscópica para ampliação e substituição vesicais é viável e reprodutível. A gastroileocistoplastia laparoscópica apresenta adequado resultado funcional após três meses no modelo suíno. A neobexiga GI laparoscópica é tecnicamente viável no modelo suíno, apesar de sua complexidade. A descrição inicial é apresentada. Aperfeiçoamento da técnica de reimplante ureteral anti-refluxo laparoscópico é necessário antes de sua aplicação clínica. / Introduction: Composite gastroileal (GI) urinary reservoirs may present advantages over the use of isolated intestinal segments for urinary reconstructive procedures in selected patients. Herein, we present the laparoscopic techniques of gastroileocystoplasty (bladder augmentation) and GI orthotopic neobladder (bladder substitution), performed completely intracorporeally in a porcine model. Technical feasibility and functional results of these procedures are evaluated. Methods: After a pilot study (three animals) to technically standardize the procedures, gastroileocystoplasty (Group I, N = 5) and GI orthotopic neobladder (Group II; N = 10) were performed applying the same principles of wedge gastric resection and ileal resection. In Group II, creation of the neobladder included bilateral ureteral reimplantation into the gastric segment with an anti-reflux technique and an urethro-ileoanastomosis. Staplers and free-hand laparoscopic suture techniques were utilized exclusively, in a completely intracorporeal manner. Preop and postoperative analysis of laboratory data, bladder capacity, image (cystourethrography, intravenous urography) and histological evaluation of the resulting GI reservoirs was concluded at the end of follow-up, at eight and 12 weeks (Group I) and four and eight weeks (Group II). Results: Ileal and gastric patches reached the animal pelvis in all cases. Operative times were 5.2h for Group I and 7.4h for Group II. No conversions or intraoperative deaths occurred. All GI reservoirs were viable by the time of euthanasia in both groups. In Group I, four of the five animals completed the scheduled follow-up of 8 (N = 2) and 12 (N = 2) weeks without complications. One animal received early euthanasia due to pyelonephritis and metabolic alkalosis. Bladder capacity (at a bladder pressure of 20cmH2O) increased from 650ml to 1025ml (p < 0.05) after the bladder augmentation procedure. In Group II, five of 10 animals completed the scheduled follow-up at four (N = 3) and eight (N = 2) weeks, with minimal alteration on renal function (pre and postoperative Cr = 1.4 and 2.2mg/dl, respectively; p = 0.09). Three animals had an early euthanasia due to ureteral obstruction and pyelonephritis (N=2) and severe hipochloremic alkalosis (N = 1). Two deaths were associated to bilateral ureteral obstruction and sepsis. Mean bladder capacity for the neobladders was 400ml. No cases of vesico-ureteral reflux were seen at cystourethrography. However, seven of 20 renal units (35%) presented with uretero-gastric stenosis. Bowel obstruction (N = 1), gastric fistula (N = 1) and urinoma (N = 1) were other complications in Group II. Conclusions: Laparoscopic gastric resection for bladder augmentation and substitution purposes is feasible and reproducible. Laparoscopic gastroileocystoplasty presents adequate functional results after three months in the porcine model. Laparoscopic GI neobladder is technically viable in the porcine model, despite its complexity. The initial report is presented. Refinements of laparoscopic anti-reflux ureteral reimplantation techniques are necessary before its clinical application.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paulo Vinicius Svidnicki.pdf: 2816065 bytes, checksum: 084b306674252355ae49539418bbb41e (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Metabolic syndrome is characterized by the presence of some risk factors that occur simultaneously in obese subjects, such as Type 2 diabetes mellitus, dyslipidemia and hypertension. GLP-1 is an important incretin that stimulates insulin secretion. Adipose tissue is considered an active complex and endocrine tissue, which secretes factors, termed adipokines, which by means of a dynamic signaling pathways involved in important biological energy balance, nutrient metabolism and immune system. Studies indicate that regular physical activity is related to the prevention and treatment of obesity. This study evaluated the effects of exercise training on the expression of adipokines collected following visceral adipose tissue: adiponectin, TNF alpha, PPAR gamma and PPAR alpha. In addition, we evaluated the expression of GLP-1 in the distal ileum and the insulinotropic action of this incretin in the pancreatic islets. The animal model used in this study were obese mice treated with monosodium glutamate (MSG) during the neonatal period, causing the animals to develop obesity in adulthood. The animals were divided into four groups: sedentary MSG, MSG exercised, sedentary controls, and controls exercised. Animals of exercise groups were submitted to swimming. At 90 days, the animals were sacrificed, biometric and biochemical parameters were analyzed pancreatic islets were isolated and sections of mesenteric fat and distal ileum assays were stored for qRT-PCR (Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction) and immunohistochemistry. Our data show that regular physical activity and early improves obesity-related pathologies presented by MSG-obese mice. Exercised animals showed a decrease in adipocyte hypertrophy, leading to a change in the expression of adiponectin and PPAR alpha, which may have contributed to an improvement in energy homeostasis in these animals, however it has been shown that exercise does not correct completely the inflammatory profile in this obesity model. For the first time, demonstrated that exercise showed no direct action on the potentiation of insulin by GLP-1 stimulated by pre-prandial glucose, and no increase in the expression of incretin in exercised animals. Physical training reduced these parameters in animals only in mice CON-EXE. Regardless of the condition (fasting or glucose) and activity (exercised or sedentary) MSG treatment had no effect on expression of GLP-1 in the ileum. The swimming induced a reduction in the accumulation of adipose tissue and preserved glucose homeostasis in obese MSG rats, most likely by directly modulating the insulinotropic action of GLP-1 or its response in the pancreatic islets. Physical training inhibited the action of GLP-1 in the presence of low concentrations of glucose. However, physical training was able to restore the insulinotropic action of GLP-1 in the presence of high glucose concentration in MSG obese mice. / A síndrome metabólica é caracterizada pela presença de alguns fatores de risco que ocorrem simultaneamente em indivíduos obesos, tais como Diabetes mellitus tipo 2, dislipidemias e hipertensão arterial. O GLP-1 é uma importante incretina que que pode melhorar o rendimento das células beta pancreáticas. O tecido adiposo é considerado um tecido endócrino complexo e ativo, o qual secreta fatores, denominados adipocinas, que por meio de um sistema dinâmico de sinalização participam de vias biológicas importantes no balanço energético, metabolismo de nutrientes e sistema imune. Estudos indicam que a prática regular de atividade física tem relação com a prevenção e tratamento da obesidade. Assim, este trabalho avaliou os efeitos do treinamento físico na expressão das seguintes adipocinas coletadas de tecido adiposo visceral: adiponectina, TNF alfa, PPAR gama e PPAR alfa. Além disso, foi avaliada a expressão de GLP-1 de íleo distal, bem como a ação insulinotrópica desta incretina nas ilhotas pancreáticas. O modelo animal de obesidade utilizado neste trabalho foram ratos tratados com glutamato monossódico (MSG) durante o período neonatal, levando os animais a desenvolver obesidade na vida adulta. Os animais foram divididos em quatro grupos: MSG sedentários, MSG exercitados, controles sedentários e, controles exercitados. Animais dos grupos exercitados foram submetidos à natação. Aos 90 dias, os animais foram sacrificados, parâmetros bioquímicos e biométricos foram analisados, as ilhotas pancreáticas foram isoladas e secções da gordura mesentérica e do íleo distal foram armazenadas para ensaios de qRT-PCR (Quantitative Real-Time polímerase Chain reaction) e imunohistoquímica. Nossos dados mostram que a prática regular e precoce de atividade física melhora os quadros patológicos relacionados à obesidade apresentada pelos ratos MSG obesos. Os animais exercitados apresentaram uma diminuição da hipertrofia dos adipócitos, levando a uma alteração da expressão de adiponectina e do PPAR alfa, o que pode ter contribuído para uma melhora da homeostase energética nestes animais, entretanto foi demonstrado que o exercício não corrige completamente o perfil inflamatório neste modelo de obesidade. Pela primeira vez, foi demonstrado que o exercício não apresentou ação direta na potencialização da insulina pelo GLP-1, estimulada por níveis pré-prandiais de glicose, bem como não houve aumento na expressão desta incretina nos animais exercitados. O treinamento físico reduziu estes parâmetros apenas nos animais nos ratos CON-EXE. Independentemente da condição (jejum ou glicose) e atividade (exercitados ou sedentários), o tratamento com MSG não teve efeito na expressão de GLP-1 no íleo. A natação induziu uma redução no acúmulo de tecido adiposo e preservou a homeostase glicêmica em ratos MSG obesos, mais provavelmente por modular diretamente a ação insulinotrópica do GLP-1 ou sua resposta nas ilhotas pancreáticas. O treinamento físico inibiu a ação do GLP-1 na presença de menor concentração de glicose. Porém, o treinamento físico foi capaz de restaurar a ação insulinotrópica do GLP-1 na presença de alta concentração de glicose nos ratos MSG obesos.

As atividades intestinais são coordenadas pelo sistema nervoso entérico e, disfunções na motilidade intestinal são observadas em indivíduos obesos. O ATP é um co-transmissor e seus receptores estão distribuídos nos neurônios entéricos constituindo a família P2X e P2Y. O presente estudo tem como objetivo analisar a expressão do receptor P2X2 e o código químico nos neurônios mioentéricos na obesidade. Foram utilizados íleo de camundongos obesos machos (OBM) e fêmeas (OBF) (C57BL/6J ob/ob), e controles (CF; CM) (+/+), que foram submetidos à técnica imuno-histoquímica de duplas marcações em neurônios imunomarcados ao receptor P2X2 com NOS (inibitórios), ChAT (excitatórios) ou Calr (excitatórios e sensoriais). Resultados dos grupos CF e OBF: Foi verificado a imunomarcação ao receptor P2X2, NOS, ChAT e Calr no citoplasma e nas membranas celular e nuclear dos neurônios mioentéricos de ambos os grupos. As duplas marcações dos neurônios imunorreativos (-ir) ao receptor P2X2 com NOS, ChAT ou Calr em CF foram 24±4%, 24±2% e 24±4%, e em OBF foram 19±4%, 25±4% e 22±1%, respectivamente. As duplas marcações dos neurônios NOS-ir, ChAT-ir ou Calr-ir com os neurônios receptor P2X2-ir foram 100% nos dois grupos. A densidade dos neurônios P2X2-ir aumentou em 62%, enquanto que a dos neurônios NOS-ir e ChAT-ir reduziram em 49% e 57%. A morfometria demonstrou aumento na área dos neurônios NOS-ir (CF 234±63, OBF 312±67); ChAT-ir (CF 210±24, OBF 253±14) e Calr-ir (CF 203±41, OBF 315±47), no entanto, neurônios P2X2-ir não apresentaram alterações (CF 325±23, OBF 336±67). A histoquímica demonstrou não haver diferença estatística entre os grupos quanto á densidade e a morfometria dos neurônios NADH-diaforase positivos. Resultados dos grupos CM e OBM: A expressão do receptor P2X2 foi identificada somente em CM e a imunomarcação a NOS, ChAT e Calr nos dois grupos. Em CM as duplas marcações dos neurônios P2X2-ir com NOS-ir, ChAT-ir ou Calr-ir foram 23±3%, 34±5% e 32±6%, respectivamente, e nos neurônios NOS-ir, ChAT-ir e Calr-ir com o receptor P2X2 foram 100%. A densidade dos neurônios NOS-ir e Calr-ir reduziram em 31% e 16%, enquanto que a densidade da população ChAT-ir aumentou 31%. A morfometria demonstrou que neurônios NOS-ir (CM 390±49, OBM 350±22); ChAT-ir (289±18, OBM 312±44), Calr-ir (CM 375±49, OBM 360±38) e P2X2-ir (CM 437±190) não apresentaram diferenças entre os grupos. A expressão protéica pela técnica do Western Blotting mostrou que houve uma redução de 36,5% no grupo OBM. Concluímos que neste modelo experimental tanto a obesidade (C57BL/6J ob/ob) como os gêneros podem contribuir com alterações: na expressão do receptor P2X2, na densidade e na morfologia dos neurônios NOS-ir, ChAT-ir e Calr-ir, promovendo mudanças nas atividades intestinais. / The intestinal activities are coordinated by enteric nervous system, and dysfunctions in intestinal motility were observed in obese individuals. The enteric neurons have been demonstrated to express different purinergics receptors. This study aims to analyze the expression of P2X2 receptor and the chemical code in the myenteric neurons in obesity. Sample from ileum of obese male (OBM) and females (OBF) (C57BL/6J ob/ob) and controls mice (CF, CM) (+/+) were used. Immunohistochemistry for double labelling in neurons P2X2 receptor immunostained with NOS (inhibitory), ChAT (excitatory) or Calr (excitatory and sensory) was performed. Results of CF and OBF groups: immunostaining was verified for P2X2 receptor, NOS, ChAT and Calr in the cytoplasm and in cell and nuclear membranes of myenteric neurons of both groups. The double-labelling for P2X2 receptor/NOS, ChAT or Calr in CF were 24 ±4%, 24 ±2% and 24 ±4%, respectively, and in OBF were 19 ±4%, 25 ±4% and 22±1%. Inversely, NOS, ChAT or Calr/P2X2 receptor immunoreactives neurons were 100% in both groups. The density of P2X2 neurons showed an increase of 62%, whereas NOS and ChAT neurons decreased by 49% and 57%. In morphometric analysis showed an increase in NOS (CF 234 ± 63, 312 ± 67 OBF), ChAT (CF 210 ± 24, 253 ± 14 OBF) and Calr (CF 203 ± 41, 315 ± 47 OBF) neuronal area, however, P2X2 neurons no changed in this feature (FC 325 ± 23, 336 ± 67 OBF). The histochemistry for NADH-diaphorase showed no statistical difference to density and morphometry of neurons between the groups. Results of CM and OBM groups: The P2X2 receptor expression was identified only in CM. Immunostaining for NOS, ChAT and Calr were observed in both groups. The double-labelling observed in CM for P2X2 receptor and NOS, ChAT or Calr were 23±3%, 34 ±5% and 32 ±6%, and inversely, NOS, ChAT or Calr/P2X2 receptor immunoreactives neurons were 100%. The NOS and Calr neuronal density were reduced about 31% and 16%, while population ChAT neuronal density increased about 31%. The morphometry showed that NOS (CM 390 ± 49, 350 ± 22 OBM), ChAT (289 ± 18, 312 ± 44 OBM), Calr (CM 375 ± 49, 360 ± 38 OBM) and P2X2 (CM 437 ± 190) neurons no differ between groups. The P2X2 receptor protein expression by Western blotting showed that there was a reduction in 36.5% in OBM. We concluded that in this experimental model, both obesity (C57BL/6J ob/ob) and genders may contribute to changes in P2X2 receptor expression, density and morphology of neurons NOS, ChAT and Calr, promoting alterations in intestinal activities.

Dor abdominal pode ser consequente a inúmeras causas, entre as várias possibilidades precisamos ficar atentos aos quadros de isquemia intestinal. No trato digestório a isquemia/reperfusão intestinal (I/R-i) acarreta alterações morfológicas nos neurônios entéricos. Este trabalho tem como objetivo analisar o comportamento das diferentes classes neuronais e do receptor P2X7 no plexo mioentérico do íleo de ratos Wistar submetidos à I/R-i. A isquemia intestinal foi obtida pela obstrução do fluxo sanguíneo das artérias ileais no período de 35 minutos, seguida pelos períodos de reperfusão de 6, 24, 72 horas e 1 semana. No grupo sham não houve a oclusão das artérias ileais. Os tecidos foram preparados por métodos imunohistoquímicos de duplas marcações do receptor P2X7 com a Óxido Nítrico Sintase neuronal (NOSn), calbindina (Calb), calretinina (Calr) e Acetilcolina Transferase (ChAT) e do receptor P2X7, da NOSn e da ChAT com o pan-neuronal anti-HuC/D. As análises qualitativas e quantitativas das contagens das duplas marcações, das densidades neuronais e da área dos perfis foram obtidas dos microscópios de fluorescência e de Confocal de Varredura à Laser. Os resultados qualitativos demonstraram diminuição da expressão do receptor P2X7 no grupo I/R-i de 24 horas e retorno da expressão nos grupos I/R-i de 72 horas e 1 semana. Os dados quantitativos demonstraram: a) os neurônios do plexo mioentérico foram imunorreativos ao receptor P2X7; b) não houve alterações significativas nas duplas marcações do receptor P2X7 com os neurônios NOSn-ir, Calr-ir, Calb-ir e ChAT-ir nos grupos sham e I/R-i; c) não houve alterações significativas nas duplas marcações do receptor P2X7, e dos neurônios NOSn-ir e ChAT-ir com o pan-neuronal anti-HuC/D nos grupos sham e I/R-i; d) houve diminuição nas densidades nos grupos I/R-i com 6, 24, 72 horas e 1 semana dos neurônios P2X7-ir, NOSn-ir, Calr-ir, Calb-ir, ChAT-ir e anti-HuC/D-ir quando comparados aos grupos sham; e) houve um aumento na área do perfil dos neurônios NOSn-ir nos grupos I/R-i de 6 e 24 horas, nos neurônios ChAT-ir houve um aumento no grupo I/R-i de 1 semana e nos neurônios Calr-ir houve uma diminuição no grupo I/R-i de 6 horas e um aumento no grupo I/R-i de 24 horas quando comparados aos grupos sham. O presente estudo demonstrou que a I/R-i está associada com a perda significativa de diferentes subpopulações de neurônios do plexo mioentérico acompanhada por diversas alterações morfológicas, o que pode acarretar problemas na motilidade intestinal. / Abdominal pain may be consequent to numerous causes, among the various possibilities need to be attentive to intestinal ischemia. In the digestive tract the intestinal ischemia-reperfusion (I/R-i) causes morphological changes in enteric neurons. The aim of the work was to analyze the behavior of different neurons and P2X7 receptor in the myenteric plexus of the ileum of rats subjected to I/R-i. Intestinal ischemia was obtained by the obstruction of blood flow in the ileal arteries period of 35 minutes followed by reperfusion periods of 6, 24, 72 hours and 1 week. In the sham group there was no occlusion of the ileal arteries. The tissues were prepared by immunohistochemical methods for double staining of P2X7 receptor with neuronal nitric oxide synthase (nNOS), calbindin, calretinin and acetylcholine transferase (ChAT) and P2X7 receptor, the nNOS and ChAT with pan-neuronal marker anti-HuC/D The qualitative and quantitative analysis of the counting of double staining, the neuronal density and the area of the cell body profile were obtained from fluorescence microscopy and confocal scanning laser. The qualitative results showed decreased expression of the P2X7 receptor in I/R-i for 24 hours group and return the expression in I/R-i for 72 hours and 1 week groups. The quantitative data showed: a) neurons in the myenteric plexus were immunoreactive for P2X7 receptor; b) no significant changes in the double staining of P2X7 receptor with nNOS, calretinin, calbindin and ChAT neurons in the sham and I/R-i groups; c) does not significant changes in the double staining of the P2X7 receptor, the nNOS and ChAT neurons with the pan-neuronal marker anti-HuC/D in sham and I/R-i groups; d) the densities of the P2X7 receptor, nNOS-IR, calretinin-IR, calbindin-IR, ChAT-IR and anti-HuC/D-IR neurons were decreased in I/R-i 6, 24, 72 hours and 1 week groups, when compared to sham group; e) the profile area was increased in nNOS-IR neurons in the I/R-i for 6 and 24 hours groups, ChAT-IR neurons in I/R-i 1 week group and in the calretinin-IR neurons there was a decrease in I/R-i 6 hours group and an increase in I/R-i for 24 hours group when compared to sham group. The present study demonstrated that I/R-i is associated with significant loss of different subpopulations of neurons in the myenteric plexus accompanied by several morphological changes, which can cause intestinal motility disorder.

Crohns sjukdom är en kronisk inflammatorisk tarmsjukdom av okänd orsak. Det tidigaste tecknet på Crohns sjukdom är mikroskopiska sår i det s.k. follikelassocierade epitelet (FAE) som täcker ansamlingar av immunceller i tarmen. FAE är specialiserat för att fånga innehåll från tarmen och transportera det till underliggande immunvävnad. Denna funktion är viktig för att inducera skyddande immunsvar, men den utgör också en ingångsväg för sjukdomsalstrande bakterier. Crohns sjukdom är associerat med ett kraftigt ökat immunsvar mot bakterier, och sjukdomsförloppet kan ändras av stress. Det övergripande syftet med avhandlingen var att studera effekterna av stress på FAE samt att undersöka rollen av FAE vid utvecklingen av tarminflammation, särskilt vid Crohns sjukdom. Inledningsvis studerades effekterna av psykologisk stress på FAE. Stressade råttor uppvisade ökad genomsläpplighet av bakterier efter stress, och passagen var högre i FAE än i vanligt epitel. Efterföljande experiment visade att stressförändringarna i slemhinnan regleras via kortikotropinfrisättande hormon och mastceller. Vidare visade det sig att vasoaktiv intestinal peptid kunde efterlikna stressens effekter på genomsläppligheten, och att detta kunde förhindras genom att blockera mastcellerna. Studier av tunntarmsslemhinna från patienter med icke-inflammatorisk tarmsjukdom och friska kontroller visade en högre passage av bakterier i FAE än i vanligt epitel. Hos patienter med Crohns sjukdom var bakteriepassagen genom FAE betydligt ökad jämfört med kontroller. Resultaten från detta avhandlingsarbete visar att stress kan förändra upptaget av bakterier från tarmen via FAE, med mekanismer som innefattar kortikotropinfrisättande hormon och mastceller. Detta har gett nya kunskaper kring regleringen av slemhinnebarriären. Vidare presenterar denna avhandling nya insikter i sjukdomsuppkomsten vid Crohns sjukdom genom att påvisa en tidigare okänd defekt i barriärfunktionen i FAE. / The earliest observable signs of Crohn’s disease are microscopic erosions in the follicle-associated epithelium (FAE) covering the Peyer’s patches. The FAE, which contains M cells, is specialised in sampling of luminal content and delivery to underlying immune cells. This sampling is crucial for induction of protective immune responses, but it also provides a route of entry for microorganisms into the mucosa. Crohn’s disease is associated with an increased immune response to bacteria, and the disease course can be altered by stress. The overall aim of this thesis was to study the effects of stress on the FAE and elucidate the role of FAE in the development of intestinal inflammation, specifically Crohn’s disease. Initially, rats were submitted to acute and chronic water avoidance stress to study the effects of psychological stress on the FAE. Stressed rats showed enhanced antigen and bacterial passage, and the passage was higher in FAE than in regular villus epithelium (VE). Further, stress gave rise to ultrastructural changes. Subsequent experiments revealed the stress-induced increase in permeability to be regulated by corticotropin-releasing hormone and mast cells. Furthermore, vasoactive intestinal peptide (VIP) mimicked the stress effects on permeability, and the VIP effects were inhibited by a mast cell stabiliser. Human studies of ileal mucosa from patients with non-inflammatory disease and healthy controls showed a higher antigen and bacterial passage in FAE than in VE. In patients with Crohn’s disease, the bacterial passage across the FAE was significantly increased compared to non-inflammatory and inflammatory controls (ulcerative colitis). Furthermore, there was an enhanced uptake of bacteria into dendritic cells, and augmented TNF-α release in Crohn’s disease mucosa. Taken together this thesis shows that stress can modulate the uptake of luminal antigens and bacteria via the FAE, through mechanisms involving CRH and mast cells. It further shows that human ileal FAE is functionally distinct from VE, and that Crohn’s disease patients exhibit enhanced FAE permeability compared to inflammatory and non-inflammatory controls. This thesis presents novel insights into regulation of the FAE barrier, as well as into the pathophysiology of Crohn’s disease by demonstrating a previously unrecognised defect of the FAE barrier function in ileal Crohn’s disease.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2110214 bytes, checksum: 4a28fa47726ea0c494b4de5c87f4f054 (MD5) Previous issue date: 2009-11-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Solanum agrarium Sendtner known popularly as babá , gogóia , and melancia da praia . In folk medicine, the decoction of its roots is used as abortive (AGRA, 1991). In a preliminary study, Santos et al. (2003) demonstrated that crude ethanolic extract of aerial parts from S. agrarium (SA-EtOH) showed non-selective spasmolytic activity on guinea-pig ileum and rat uterus. The aim of the study was evaluate on the cytotoxic potential of SA-EtOH in rats erythrocytes and to investigate the spasmolytic action mechanism on guinea-pig ileum and rat uterus. SA-EtOH extract showed moderate hemolytic activity only at concentration of 243 and 500 μg/mL (Emax = 21.2 ± 3.2%). On guinea-pig ileum, SA-EtOH extract inhibited the cumulative concentration-response curves to carbachol (CCh) and histamine, and these were shifted to the right, in a non-parallel manner, with depression of the maximal effect (Emax), suggesting a noncompetitive antagonism. SA-EtOH extract relaxed in a significant and concentration dependent manner the ileum pre-contracted with 40 mM KCl (EC50 = 17.4 ± 3.5 μg/mL), 10-6 M CCh (EC50 = 119.4 ± 24.3 μg/mL) or 10-6 M histamine (EC50 = 18.7 ± 4.6 μg/mL), suggesting that SA-EtOH extract could be acting on voltage-gated Ca2+ channels (Cav). This assumption was confirmed by observation that SA-EtOH extract antagonized the CaCl2 induced contractions in the depolarizing medium without Ca2+. The finding that SA-EtOH extract relaxed (EC50 = 187.2 ± 27.3 μg/mL) the guinea-pig ileum pre-contracted with S-(-)-BAY K8644 suggests that the Ca2+ channel subtype involved is the CaV1. As the SA-EtOH extract was more potent in relaxing the body pre-contracted with KCl than by S-(-)-Bay K8644, it is suggestive of indirect blockade of the Cav1. We decided to investigate the participation of K+ channels in the spasmolytic action of SA-EtOH extract. The relaxation curve induced by SA-EtOH extract was rightward displacement only in the presence of tetraethylammonium (TEA+) 1 mM, this concentration is a selective blocker of the large conductance clacium-activated K+ channels (BKca) (EC50 = 37.7 ± 4.9 μg/mL) and 4-aminopyridine, selective blocker of the voltage activated K+ channels (Kv) (EC50 = 48.9 ± 6.2 μg/mL). On rat uterus, SA-EtOH extract inhibited the cumulative concentration-response curves to oxytocin, and these were shifted to the right, in a non-parallel manner, with depression of the maximal effect (Emax) suggesting a noncompetitive antagonism. SA-EtOH extract did not effective at relax the uterus pre-contracted with 60 mM KCl (Emax = 10.5 ± 5.0%), however relaxed in a significant and concentration dependent manner the rat uterus pre-contracted with 10-2 UI/mL (EC50 = 56.3 ± 8.2 μg/mL). Therefore, suggesting that SA-EtOH extract could be promoting its spasmolytic effect of indirect blockade influx Ca2+ by Cav, as observed in guinea-pig ileum. However, the relaxation curve induced by SA-EtOH extract was rightward displacement only in the presence of glibenclamide (EC50 = 124.8 ± 21.0 μg/mL), selective blocker of the ATP-sensitive K+ channels (KATP), different from that observed in guinea-pig ileum. These results suggest that SA-EtOH extract is not promoting the membrane injury on rat erythrocytes and that the spasmolytic action mechanism of SA-EtOH extract involves modulation/activation of BKCa and KV on guinea-pig ileum, and of KATP on rat uterus. / Solanum agrarium Sendtner é conhecida popularmente por babá , gogóia e melancia da praia . O decocto da raiz é empregado popularmente como abortivo (AGRA, 1991). Em estudos anteriores, Santos et al., (2003) demonstraram que o extrato etanólico bruto obtido das partes aéreas de S. agrarium (SA-EtOH) apresentou atividade espasmolítica não seletiva em íleo de cobaia e útero de rata. O objetivo desse estudo foi avaliar o potencial citotóxico do extrato SA-EtOH em eritrócitos de rato e investigar o mecanismo de ação espasmolítica em íleo de cobaia e útero de rata. O extrato SA-EtOH apresentou uma atividade hemolítica moderada apenas nas concentrações de 243 e 500 μg/mL (Emax = 21,2 ± 3,2%). Em íleo de cobaia, o extrato SA-EtOH inibiu as curvas cumulativas ao carbacol (CCh) e à histamina e estas foram desviadas para a direita de maneira não paralela com redução do Emax, sugerindo um antagonismo não competitivo. O extrato SA-EtOH relaxou de maneira dependente de concentração e significante o íleo de cobaia pré-contraído com 40 mM de KCl (CE50 = 17,4 ± 3,5 μg/mL), ou com 10 6 M de CCh (CE50 = 119,4 ± 24,3 μg/mL) ou de histamina (CE50 = 18,7 ± 4,6 μg/mL), sugerindo que o extrato SA-EtOH deve estar agindo bloqueando os canais de Ca2+ dependentes de voltagem (CaV). A confirmação desta hipótese veio com a observação de que o extrato SA-EtOH antagonizou as contrações induzidas por CaCl2 em meio despolarizante nominalmente sem Ca2+. O fato do extrato SA-EtOH ter relaxado (CE50 = 187,2 ± 27,3 μg/mL) o íleo pré-contraído com S-(-)-BAY K 8644 sugere que o canal de Ca2+ envolvido é o tipo CaV1. Como a potência relaxante do extrato SA-EtOH foi maior quando o órgão foi pré-contraído com KCl do que pelo S-(-)-Bay K8644, isto é sugestivo de que há um bloqueio indireto dos Cav1. Decidiu-se investigar a participação dos canais de K+ na ação espasmolítica do SA-EtOH. A curva de relaxamento induzida pelo extrato SA-EtOH foi desviada para direita apenas na presença de tetraetilamônio (TEA+) 1 mM, nessa concentração um bloqueador dos canais de K+ ativados por Ca2+ de grande condutância (BKCa) (CE50 = 37,7 ± 4,9 μg/mL) e na de 4-aminopiridina, bloqueador dos canais de K+ operados por voltagem (KV) (CE50 = 48,9 ± 6,2 μg/mL). Em útero de rata, o extrato SA-EtOH inibiu as curvas cumulativas à ocitocina e esta foi desviada para a direita de maneira não paralela com redução do Emax, sugerindo um antagonismo não competitivo. O extrato SA-EtOH não foi eficaz em relaxar o útero pré-contraído com 60 mM de KCl (Emax = 10,5 ± 5,0%), entretanto relaxou de maneira dependente de concentração o útero pré-contraído com 10-2 UI/mL ocitocina (CE50 = 56,3 ± 8,2 μg/mL). Diante deste fato, pode-se sugerir que o extrato SA-EtOH pode estar promovendo seu efeito espasmolítico pelo bloqueio indireto do influxo de Ca2+ através dos CaV, assim como o observado em íleo de cobaia. Entretanto, a curva de relaxamento induzida pelo extrato SA-EtOH foi desviada para direita apenas na presença de glibenclamida (CE50 = 124,8 ± 21,0 μg/mL), bloqueador seletivo dos canais de K+ sensíveis ao ATP (KATP), diferente do observado em íleo de cobaia. Esses resultados são sugestivos de que o extrato SA-EtOH não esteja promovendo injúrias a membrana dos eritrócitos de ratos e que o mecanismo de ação espasmolítica do extrato SA-EtOH se dá pela modulação/ativação dos BKCa e KV em íleo de cobaia e pelos KATP em útero de rata.

As atividades intestinais são coordenadas pelo sistema nervoso entérico e, disfunções na motilidade intestinal são observadas em indivíduos obesos. O ATP é um co-transmissor e seus receptores estão distribuídos nos neurônios entéricos constituindo a família P2X e P2Y. O presente estudo tem como objetivo analisar a expressão do receptor P2X2 e o código químico nos neurônios mioentéricos na obesidade. Foram utilizados íleo de camundongos obesos machos (OBM) e fêmeas (OBF) (C57BL/6J ob/ob), e controles (CF; CM) (+/+), que foram submetidos à técnica imuno-histoquímica de duplas marcações em neurônios imunomarcados ao receptor P2X2 com NOS (inibitórios), ChAT (excitatórios) ou Calr (excitatórios e sensoriais). Resultados dos grupos CF e OBF: Foi verificado a imunomarcação ao receptor P2X2, NOS, ChAT e Calr no citoplasma e nas membranas celular e nuclear dos neurônios mioentéricos de ambos os grupos. As duplas marcações dos neurônios imunorreativos (-ir) ao receptor P2X2 com NOS, ChAT ou Calr em CF foram 24±4%, 24±2% e 24±4%, e em OBF foram 19±4%, 25±4% e 22±1%, respectivamente. As duplas marcações dos neurônios NOS-ir, ChAT-ir ou Calr-ir com os neurônios receptor P2X2-ir foram 100% nos dois grupos. A densidade dos neurônios P2X2-ir aumentou em 62%, enquanto que a dos neurônios NOS-ir e ChAT-ir reduziram em 49% e 57%. A morfometria demonstrou aumento na área dos neurônios NOS-ir (CF 234±63, OBF 312±67); ChAT-ir (CF 210±24, OBF 253±14) e Calr-ir (CF 203±41, OBF 315±47), no entanto, neurônios P2X2-ir não apresentaram alterações (CF 325±23, OBF 336±67). A histoquímica demonstrou não haver diferença estatística entre os grupos quanto á densidade e a morfometria dos neurônios NADH-diaforase positivos. Resultados dos grupos CM e OBM: A expressão do receptor P2X2 foi identificada somente em CM e a imunomarcação a NOS, ChAT e Calr nos dois grupos. Em CM as duplas marcações dos neurônios P2X2-ir com NOS-ir, ChAT-ir ou Calr-ir foram 23±3%, 34±5% e 32±6%, respectivamente, e nos neurônios NOS-ir, ChAT-ir e Calr-ir com o receptor P2X2 foram 100%. A densidade dos neurônios NOS-ir e Calr-ir reduziram em 31% e 16%, enquanto que a densidade da população ChAT-ir aumentou 31%. A morfometria demonstrou que neurônios NOS-ir (CM 390±49, OBM 350±22); ChAT-ir (289±18, OBM 312±44), Calr-ir (CM 375±49, OBM 360±38) e P2X2-ir (CM 437±190) não apresentaram diferenças entre os grupos. A expressão protéica pela técnica do Western Blotting mostrou que houve uma redução de 36,5% no grupo OBM. Concluímos que neste modelo experimental tanto a obesidade (C57BL/6J ob/ob) como os gêneros podem contribuir com alterações: na expressão do receptor P2X2, na densidade e na morfologia dos neurônios NOS-ir, ChAT-ir e Calr-ir, promovendo mudanças nas atividades intestinais. / The intestinal activities are coordinated by enteric nervous system, and dysfunctions in intestinal motility were observed in obese individuals. The enteric neurons have been demonstrated to express different purinergics receptors. This study aims to analyze the expression of P2X2 receptor and the chemical code in the myenteric neurons in obesity. Sample from ileum of obese male (OBM) and females (OBF) (C57BL/6J ob/ob) and controls mice (CF, CM) (+/+) were used. Immunohistochemistry for double labelling in neurons P2X2 receptor immunostained with NOS (inhibitory), ChAT (excitatory) or Calr (excitatory and sensory) was performed. Results of CF and OBF groups: immunostaining was verified for P2X2 receptor, NOS, ChAT and Calr in the cytoplasm and in cell and nuclear membranes of myenteric neurons of both groups. The double-labelling for P2X2 receptor/NOS, ChAT or Calr in CF were 24 ±4%, 24 ±2% and 24 ±4%, respectively, and in OBF were 19 ±4%, 25 ±4% and 22±1%. Inversely, NOS, ChAT or Calr/P2X2 receptor immunoreactives neurons were 100% in both groups. The density of P2X2 neurons showed an increase of 62%, whereas NOS and ChAT neurons decreased by 49% and 57%. In morphometric analysis showed an increase in NOS (CF 234 ± 63, 312 ± 67 OBF), ChAT (CF 210 ± 24, 253 ± 14 OBF) and Calr (CF 203 ± 41, 315 ± 47 OBF) neuronal area, however, P2X2 neurons no changed in this feature (FC 325 ± 23, 336 ± 67 OBF). The histochemistry for NADH-diaphorase showed no statistical difference to density and morphometry of neurons between the groups. Results of CM and OBM groups: The P2X2 receptor expression was identified only in CM. Immunostaining for NOS, ChAT and Calr were observed in both groups. The double-labelling observed in CM for P2X2 receptor and NOS, ChAT or Calr were 23±3%, 34 ±5% and 32 ±6%, and inversely, NOS, ChAT or Calr/P2X2 receptor immunoreactives neurons were 100%. The NOS and Calr neuronal density were reduced about 31% and 16%, while population ChAT neuronal density increased about 31%. The morphometry showed that NOS (CM 390 ± 49, 350 ± 22 OBM), ChAT (289 ± 18, 312 ± 44 OBM), Calr (CM 375 ± 49, 360 ± 38 OBM) and P2X2 (CM 437 ± 190) neurons no differ between groups. The P2X2 receptor protein expression by Western blotting showed that there was a reduction in 36.5% in OBM. We concluded that in this experimental model, both obesity (C57BL/6J ob/ob) and genders may contribute to changes in P2X2 receptor expression, density and morphology of neurons NOS, ChAT and Calr, promoting alterations in intestinal activities.

Dor abdominal pode ser consequente a inúmeras causas, entre as várias possibilidades precisamos ficar atentos aos quadros de isquemia intestinal. No trato digestório a isquemia/reperfusão intestinal (I/R-i) acarreta alterações morfológicas nos neurônios entéricos. Este trabalho tem como objetivo analisar o comportamento das diferentes classes neuronais e do receptor P2X7 no plexo mioentérico do íleo de ratos Wistar submetidos à I/R-i. A isquemia intestinal foi obtida pela obstrução do fluxo sanguíneo das artérias ileais no período de 35 minutos, seguida pelos períodos de reperfusão de 6, 24, 72 horas e 1 semana. No grupo sham não houve a oclusão das artérias ileais. Os tecidos foram preparados por métodos imunohistoquímicos de duplas marcações do receptor P2X7 com a Óxido Nítrico Sintase neuronal (NOSn), calbindina (Calb), calretinina (Calr) e Acetilcolina Transferase (ChAT) e do receptor P2X7, da NOSn e da ChAT com o pan-neuronal anti-HuC/D. As análises qualitativas e quantitativas das contagens das duplas marcações, das densidades neuronais e da área dos perfis foram obtidas dos microscópios de fluorescência e de Confocal de Varredura à Laser. Os resultados qualitativos demonstraram diminuição da expressão do receptor P2X7 no grupo I/R-i de 24 horas e retorno da expressão nos grupos I/R-i de 72 horas e 1 semana. Os dados quantitativos demonstraram: a) os neurônios do plexo mioentérico foram imunorreativos ao receptor P2X7; b) não houve alterações significativas nas duplas marcações do receptor P2X7 com os neurônios NOSn-ir, Calr-ir, Calb-ir e ChAT-ir nos grupos sham e I/R-i; c) não houve alterações significativas nas duplas marcações do receptor P2X7, e dos neurônios NOSn-ir e ChAT-ir com o pan-neuronal anti-HuC/D nos grupos sham e I/R-i; d) houve diminuição nas densidades nos grupos I/R-i com 6, 24, 72 horas e 1 semana dos neurônios P2X7-ir, NOSn-ir, Calr-ir, Calb-ir, ChAT-ir e anti-HuC/D-ir quando comparados aos grupos sham; e) houve um aumento na área do perfil dos neurônios NOSn-ir nos grupos I/R-i de 6 e 24 horas, nos neurônios ChAT-ir houve um aumento no grupo I/R-i de 1 semana e nos neurônios Calr-ir houve uma diminuição no grupo I/R-i de 6 horas e um aumento no grupo I/R-i de 24 horas quando comparados aos grupos sham. O presente estudo demonstrou que a I/R-i está associada com a perda significativa de diferentes subpopulações de neurônios do plexo mioentérico acompanhada por diversas alterações morfológicas, o que pode acarretar problemas na motilidade intestinal. / Abdominal pain may be consequent to numerous causes, among the various possibilities need to be attentive to intestinal ischemia. In the digestive tract the intestinal ischemia-reperfusion (I/R-i) causes morphological changes in enteric neurons. The aim of the work was to analyze the behavior of different neurons and P2X7 receptor in the myenteric plexus of the ileum of rats subjected to I/R-i. Intestinal ischemia was obtained by the obstruction of blood flow in the ileal arteries period of 35 minutes followed by reperfusion periods of 6, 24, 72 hours and 1 week. In the sham group there was no occlusion of the ileal arteries. The tissues were prepared by immunohistochemical methods for double staining of P2X7 receptor with neuronal nitric oxide synthase (nNOS), calbindin, calretinin and acetylcholine transferase (ChAT) and P2X7 receptor, the nNOS and ChAT with pan-neuronal marker anti-HuC/D The qualitative and quantitative analysis of the counting of double staining, the neuronal density and the area of the cell body profile were obtained from fluorescence microscopy and confocal scanning laser. The qualitative results showed decreased expression of the P2X7 receptor in I/R-i for 24 hours group and return the expression in I/R-i for 72 hours and 1 week groups. The quantitative data showed: a) neurons in the myenteric plexus were immunoreactive for P2X7 receptor; b) no significant changes in the double staining of P2X7 receptor with nNOS, calretinin, calbindin and ChAT neurons in the sham and I/R-i groups; c) does not significant changes in the double staining of the P2X7 receptor, the nNOS and ChAT neurons with the pan-neuronal marker anti-HuC/D in sham and I/R-i groups; d) the densities of the P2X7 receptor, nNOS-IR, calretinin-IR, calbindin-IR, ChAT-IR and anti-HuC/D-IR neurons were decreased in I/R-i 6, 24, 72 hours and 1 week groups, when compared to sham group; e) the profile area was increased in nNOS-IR neurons in the I/R-i for 6 and 24 hours groups, ChAT-IR neurons in I/R-i 1 week group and in the calretinin-IR neurons there was a decrease in I/R-i 6 hours group and an increase in I/R-i for 24 hours group when compared to sham group. The present study demonstrated that I/R-i is associated with significant loss of different subpopulations of neurons in the myenteric plexus accompanied by several morphological changes, which can cause intestinal motility disorder.

Introdução: Reservatórios gastroileais (GI) compostos podem apresentar vantagens em relação a segmentos intestinais isolados em cirurgias de reconstrução urinária em pacientes selecionados. Apresentamos aqui as técnicas laparoscópicas de gastroileocistoplastia (ampliação vesical) e de neobexiga gastroileal ortotópica (substituição vesical), realizadas de forma completamente intracorpórea em um modelo suíno experimental. Avalia-se sua viabilidade técnica e resultados funcionais. Métodos: Após padronização da técnica em estudo piloto (três animais), realizaram-se as cirurgias de gastroileocistoplastia (Grupo I; N = 5) e neobexiga GI ortotópica (Grupo II; N = 10), envolvendo os mesmos princípios de ressecção laparoscópica de cunha gástrica e íleo. No grupo II, a criação da neobexiga GI incluiu reimplante ureteral bilateral no segmento gástrico com técnica antirefluxo e anastomose uretro-ileal. Foram utilizados exclusivamente grampeadores e técnicas de sutura livre laparoscópica, de forma completamente intracorpórea. Análise pré e pós-operatória de dados laboratoriais, capacidade vesical, avaliação histológica e por imagem (uretrocistografia, urografia venosa) dos reservatórios resultantes foi concluída ao final do seguimento de 8 a 12 semanas (Grupo I) e quatro a oito semanas (Grupo II). Resultados: Os segmentos ileal e gástrico alcançaram a pelve do animal em todos os casos. Tempo cirúrgico foi de 5,2 h para o Grupo I e 7,4 h para o Grupo II. Não houve conversões ou óbitos intra-operatórios. Todos os reservatórios GI apresentavam-se viáveis por ocasião da eutanásia em ambos os grupos. No Grupo I, quatro dos cinco animais completaram sem intercorrências o seguimento de 8 (N = 2) e 12 (N = 2) semanas. Um animal apresentou deterioração clínica, sendo levado precocemente à eutanásia por pielonefrite e alcalose metabólica. Houve aumento da capacidade vesical (a uma pressão vesical de 20cmH2O) de 650ml para 1025ml (p < 0,05) após a cirurgia de ampliação vesical. No Grupo II, cinco dos 10 animais completaram o seguimento previsto em quatro (N = 3) e oito (N = 2) semanas, com mínima alteração da função renal (Cr pré e pós-operatório=1,4 e 2,2mg/dl, respectivamente; p = 0,09). Três animais tiveram a eutanásia antecipada devido a obstrução ureteral com pielonefrite (N = 2) e alcalose hipoclorêmica severa (N=1). Dois óbitos foram associados a obstrução ureteral bilateral e sepse. Capacidade vesical média das neobexigas foi de 400ml. Não houve casos de refluxo vesico-ureteral à cistografia. Porém, sete das 20 unidades renais (35%) apresentaram estenose uretero-gástrica. Obstrução intestinal (N = 1), fístula gástrica (N = 1) e urinoma (N = 1) foram outras complicações do Grupo II. Conclusões: A ressecção gástrica laparoscópica para ampliação e substituição vesicais é viável e reprodutível. A gastroileocistoplastia laparoscópica apresenta adequado resultado funcional após três meses no modelo suíno. A neobexiga GI laparoscópica é tecnicamente viável no modelo suíno, apesar de sua complexidade. A descrição inicial é apresentada. Aperfeiçoamento da técnica de reimplante ureteral anti-refluxo laparoscópico é necessário antes de sua aplicação clínica. / Introduction: Composite gastroileal (GI) urinary reservoirs may present advantages over the use of isolated intestinal segments for urinary reconstructive procedures in selected patients. Herein, we present the laparoscopic techniques of gastroileocystoplasty (bladder augmentation) and GI orthotopic neobladder (bladder substitution), performed completely intracorporeally in a porcine model. Technical feasibility and functional results of these procedures are evaluated. Methods: After a pilot study (three animals) to technically standardize the procedures, gastroileocystoplasty (Group I, N = 5) and GI orthotopic neobladder (Group II; N = 10) were performed applying the same principles of wedge gastric resection and ileal resection. In Group II, creation of the neobladder included bilateral ureteral reimplantation into the gastric segment with an anti-reflux technique and an urethro-ileoanastomosis. Staplers and free-hand laparoscopic suture techniques were utilized exclusively, in a completely intracorporeal manner. Preop and postoperative analysis of laboratory data, bladder capacity, image (cystourethrography, intravenous urography) and histological evaluation of the resulting GI reservoirs was concluded at the end of follow-up, at eight and 12 weeks (Group I) and four and eight weeks (Group II). Results: Ileal and gastric patches reached the animal pelvis in all cases. Operative times were 5.2h for Group I and 7.4h for Group II. No conversions or intraoperative deaths occurred. All GI reservoirs were viable by the time of euthanasia in both groups. In Group I, four of the five animals completed the scheduled follow-up of 8 (N = 2) and 12 (N = 2) weeks without complications. One animal received early euthanasia due to pyelonephritis and metabolic alkalosis. Bladder capacity (at a bladder pressure of 20cmH2O) increased from 650ml to 1025ml (p < 0.05) after the bladder augmentation procedure. In Group II, five of 10 animals completed the scheduled follow-up at four (N = 3) and eight (N = 2) weeks, with minimal alteration on renal function (pre and postoperative Cr = 1.4 and 2.2mg/dl, respectively; p = 0.09). Three animals had an early euthanasia due to ureteral obstruction and pyelonephritis (N=2) and severe hipochloremic alkalosis (N = 1). Two deaths were associated to bilateral ureteral obstruction and sepsis. Mean bladder capacity for the neobladders was 400ml. No cases of vesico-ureteral reflux were seen at cystourethrography. However, seven of 20 renal units (35%) presented with uretero-gastric stenosis. Bowel obstruction (N = 1), gastric fistula (N = 1) and urinoma (N = 1) were other complications in Group II. Conclusions: Laparoscopic gastric resection for bladder augmentation and substitution purposes is feasible and reproducible. Laparoscopic gastroileocystoplasty presents adequate functional results after three months in the porcine model. Laparoscopic GI neobladder is technically viable in the porcine model, despite its complexity. The initial report is presented. Refinements of laparoscopic anti-reflux ureteral reimplantation techniques are necessary before its clinical application.