O câncer de próstata é o segundo câncer mais comum entre homens, uma vez que tanto a incidência como a mortalidade aumentam exponencialmente após a idade de 50 anos. As células Natural Killer (NK) fazem parte do sistema imune inato e reconhecem moléculas de HLA de classe I na célula alvo, através de seus receptores de membrana, chamados killer immunoglobulin-like-receptors (KIR). O objetivo desse estudo foi avaliar a associação entre os genes KIR e HLA em pacientes com câncer de próstata e grupo controle. Genotipamos 200 pacientes com diagnóstico de câncer de próstata e 185 pacientes saudáveis para os genes KIR e HLA classe I por PCR-SSP. Quando comparados os grupos, não foram encontradas diferenças significativas para HLA-C do grupo 1 e do grupo 2, HLA-Bw4, HLA-A3 e A11. Nenhuma diferença foi observada na frequência dos genes KIR nos pacientes com câncer de próstata e nos controles. Esses resultados sugerem que não há potencial papel para o sistema dos genes KIR no câncer de próstata. / Prostate cancer is the second most common cancer among men, since both incidence and mortality exponentially increases in men over fifty years of age. Natural killer cells (NK) are part of the innate immune system recognizing class I HLA molecules on target cells through their membrane receptors, called killer immunoglobulin-like receptors (KIR). The aim of our study was to evaluate the association between the KIR genes and HLA alleles in patients with prostate cancer and healthy controls. Two hundred prostate cancer patients and 185 healthy controls were typed for HLA class I and KIR genes by PCR-SSP. When both groups were compared, no significant differences were found for HLA-C group 1 and group 2, HLA-Bw4, HLA-A3 and A11. No difference was seen either in KIR frequency between patients with prostate cancer and controls. In conclusion, our data suggests no potential role for the KIR gene system in prostate cancer.

O objetivo desse trabalho foi avaliar a concentração de imunoglobulina G (IgG), a sobrevivência e o ganho de peso de leitões com baixo peso ao nascimento durante a lactação, de acordo com a quantidade de colostro ingerida com ou sem um suplemento proteico-energético (SPE). Leitões com peso ao nascimento variando de 800 a 1200 g (média de 1025,2 ± 8,15 g) foram submetidos, nas primeiras 24 h, a diferentes tratamentos: CM (n=30) e CMS (n=30) compostos por leitões que ficaram com suas mães biológicas em baias convencionais, sem e com SPE, respectivamente; D120 (n=30) e D120S (n=30) compostos por leitões que receberam 120 mL (30 mL a cada 6 horas) de colostro por sonda orogástrica em um deck de alimentação, sem e com SPE, respectivamente; D200 (n=29) e D200S (n=27) formados por leitões que receberam 200 mL (50 mL a cada 6 horas) de colostro por sonda orogástrica em um deck de alimentação, sem e com SPE, respectivamente. Os leitões dos tratamentos CMS, D120S e D200S receberam 4 mL do SPE nas primeiras 24 horas. Os leitões foram selecionados de fêmeas de ordem de parto (OP) 2 a 7 (média de 3,9 ± 0,11), e o intervalo médio entre o nascimento e a ingestão ou fornecimento de colostro foi 100,3 ± 3,6 minutos. Os leitões dos tratamentos D120, D120S, D200 e D200S foram alimentados com colostro procedente de um pool de colostro. Os leitões foram colocados para mamar em mães adotivas de ordem de parto (OP) 2 a 5 (média de 3,0 ± 0,08), em leitegadas contendo dois leitões de cada tratamento, perfazendo um total de 12 leitões. Os leitões foram pesados individualmente ao nascimento, 24h após e, também, aos 7, 14 e 20 dias de vida. A duração média da lactação foi de 20,4 ± 0,06 dias. A concentração de IgG no soro dos leitões D200 e D200S foi superior à dos leitões CM, D120 e D120S (P<0,05), enquanto que os leitões CMS e D200 tiveram concentração de IgG similar (P>0,05). O maior ganho de peso nas primeiras 24 h foi observado no tratamento CMS, ao passo que os tratamentos D120 e D120S tiveram perda de peso neste período (P<0,05). O ganho de peso diário durante o período de lactação e o peso aos 7, 14 e 20 dias foram semelhantes entre os tratamentos (P>0,05). Os leitões D120 apresentaram maior taxa de mortalidade durante a lactação do que os leitões CMS, D120S, D200 e D200S (P<0,05). O fornecimento de 200 mL de colostro ou de suplemento proteico-energético são alternativas que garantem maior concentração de IgG sérica, ganho de peso nas primeiras 24 h de vida e maior sobrevivência. / The aim of this study was to evaluate the concentration of immunoglobulin G (IgG), survival and weight gain of low birth weight piglets according to the amount of colostrum intake and the supplementation of an oral protein and energy supplement (OPES). Piglets with an range birth weight of 800 to 1200 g (average of 1025.2 ± 8.15 g) were submitted during the first 24 h to one different treatments: WS (n=30) and WSS (n=30) consisted of piglets suckling in their mothers in conventional farrowing crates, with or without OPES, respectively; D120 (n=30) and D120S (n=30) consisted of piglets fed 120 mL (30 mL every 6 hours) of colostrum by orogastric tube in a feeding deck, with or without OPES, respectively; D200 (n=29) and D200S (n=27) consisted of piglets fed 200 mL (50 mL every 6 hours) of colostrum by orogastric tube in a feeding deck, with or without OPES, respectively. The piglets on WSS, D120S and D200S received 4 mL of OPES on the first 24 hours after birth. Piglets were selected from sows of parity 3.9 ± 0.11 (range of 2 to 7), and the average time lapse between birth and first colostrum intake or gavage was 100.3 ± 3.6 minutes. Piglets of treatments D120, D120S, D200 and D200S received colostrum from a colostrum pool. All animals were individually weighed at birth and after the first 24 h of life. They were cross-fostered for suckling in foster mothers parity order (OP) range of 2 to 5 (average OP 3.0 ± 0.08), and each litter remained with 12 piglets, two of each treatment. Piglets were weighed again at 7, 14 and 20 days of life, and lactation length was of 20.4 ± 0.06 days. Serum concentration of IgG in the piglets was greater in D200 and D200S than in CM, D120 and D120S treatments (P<0.05), whereas CMS and D200 piglets had similar (P>0.05) IgG concentration. The greatest weight gain during the first 24 h was observed in CMS piglets, whereas D120 and D120S piglets lost weight (P<0.05). The average daily gain during lactation, as well as body weight at 7, 14 and 20 days were similar (P>0.05) among treatments. Piglets from the D120 treatment showed higher mortality rate during lactation than CMS, D120S, D200 and D200S piglets (P<0.05). Hence, the supply of 200 mL of colostrum or an energy and protein supplement are options which assure greater IgG concentration, weight gain in the first 24 h of life, and higher survival.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-08-11T18:54:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Beatriz Coutinho - PPGIT - 2016.pdf: 2557511 bytes, checksum: cec4295c75245942ea5b334cef899eba (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-11T18:54:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Beatriz Coutinho - PPGIT - 2016.pdf: 2557511 bytes, checksum: cec4295c75245942ea5b334cef899eba (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Capes / O tratamento da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) apresenta limitações por ser tóxico, podendo causar efeitos adversos nos pacientes, e também, por não existir um critério de cura efetivo, que atualmente é realizado apenas clinicamente, visualizando a completa cicatrização da lesão. Além dos desafios socioeconômicos que agravam a doença, o seu diagnóstico apresenta dificuldades, pois além de haver a necessidade de realizar associações entre os aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais dos pacientes para se chegar a um resultado definitivo, os testes laboratoriais convencionais apresentam limitações. O objetivo do trabalho foi avaliar a aplicabilidade dos isotipos de imunoglobulinas (IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) por citometria de fluxo para o diagnóstico e critério de cura na leishmaniose tegumentar americana, e fazer um comparativo da citometria de fluxo em relação às técnicas convencionais: ELISA e Imunofluorescência Indireta. Foram utilizadas amostras de 14 pacientes, sobre as quais foram feitos os ensaios. Com relação aos resultados da comparação da citometria de fluxo, utilizando o anticorpo IgG, com a Imunofluorescência, foi visto que houve uma melhor acurácia do primeiro em relação ao segundo. Em comparação ao ELISA, a citometria também demonstrou ser um teste com melhor desempenho. Para a padronização dos isotipos IgG1, IgG2 e IgG3, foi observado que a melhor diluição do isotipo IgG1 para ser utilizada foi a diluição 1:400, para o isotipo IgG2, 1:100 e para o isotipo IgG3 1:200. Devido a baixa quantidade sérica circulante de IgG4 e pelo fato de ser mais encontrado em amostras de pacientes com a forma cutânea difusa (ausente em nosso Estado), não foi possível padronizar este isotipo. Na avaliação da aplicabilidade do isotipo IgG1, foi observado que antes do tratamento, 36,8% dos pacientes foram negativos; nos pacientes um ano após o tratamento, 82,3%; dois anos após o tratamento, 27,2% e nos pacientes cinco anos após tratamento, 87,5%. Portanto, a análise global dos resultados obtidos sugere que a citometria de fluxo aplica-se ao rastreamento da LTA e que a utilização do isotipo IgG1 tem grandes possibilidades para contribuir como um método de diagnóstico mais específico do que os convencionais. / The treatment for the American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) has limitations due to its toxicity, which can cause adverse effects on the patients; and also for not presenting an effective cure criterion, being currently performed by visualizing the complete healing of the lesion. Besides socio economical challenges which worsen the disease, the diagnosis shows difficulties because beyond the need to associate clinical, epidemiological and laboratorial aspects to achieve the definitive result, the conventional laboratorial tests are limited. Thereby, the objective of the study was to evaluate the applicability of immunoglobulin isotypes (IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4) by flow cytometry for the diagnosis and cure criterion of the American tegumentary leishmaniasis, comparing this tool with the conventional tests of ELISA and Indirect Immunofluorescence. 14 samples of patients were used for the assays. Regarding the results of the comparison between flow cytometry using anti-IgG antibodies with the indirect immunofluorescence, it was observed that the accuracy of the first test was higher than the second's. The same was observed when compared flow cytometry with ELISA. Regarding the standardization of the IgG isotypes 1, 2 and 3, it was seen that the best dilutions to work with were respectively 1:400, 1:100 and 1:200. Due to the low quantities of the IgG4 isotype in the sera and for the fact that it is found in samples of patients with the diffuse form (absent in the Northeastern Brazil), it was not possible to standardize. Evaluating the applicability of IgG1, we observed that before treatment 36,8% of the patients were negative, one year after treatment, 82,3%; two years after treatment, 27,2% and in patients five years after treatment, 87,5%. The global analysis of the obtained results suggests that flow cytometry can be used to screen ATL and that the use of IgG1 isotype has great chances of contributing as a more specific method than the conventional ones. More studies with IgG2 and IgG3 isotypes are necessary, raising the number of samples. However, this area still has good perspectives on the diagnosis and cure criterion of the disease.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-16T12:31:22Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fábio de Castro Bezerra - 2015.pdf: 1134192 bytes, checksum: 61d0dd74a6363dfdeccf24d48ee39e2d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-16T12:32:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fábio de Castro Bezerra - 2015.pdf: 1134192 bytes, checksum: 61d0dd74a6363dfdeccf24d48ee39e2d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T12:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fábio de Castro Bezerra - 2015.pdf: 1134192 bytes, checksum: 61d0dd74a6363dfdeccf24d48ee39e2d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-04-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / (Sem resumo em outra língua) / Este trabalho teve por objetivo estudar a interação entre moléculas orgânicas e anticorpos visando seu uso em sistemas de entrega de fármacos e diagnóstico fluorescente. Foram investigadas moléculas orgânicas de porfirinas e anticorpos reativos a Herpesvírus bovino, micro-organismo amplamente disseminado em rebanhos de corte e leite. Para o desenvolvimento deste projeto foram empregadas técnicas espectroscópicas de absorção UV/Vis, emissão fluorescente e espalhamento ressonante. Os resultados obtidos apresentaram indícios de que a ligação entre as porfirinas e os anticorpos ocorre. As constantes de ligação associadas à essa interação sugeriram alta afinidade das porfirinas pelos anticorpos. As investigações da conformação dos anticorpos indicaram que a sua estrutura enovelada não é significativamente afetada pelas porfirinas e os estudos de Transferência de Energia Ressonante de Förster sugeriram que esse mecanismo pode ser o principal responsável pela supressão da fluorescência dos anticorpos pelas porfirinas.

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T09:14:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mourao_CeciliaAlves_M.pdf: 2559584 bytes, checksum: efe6b17b9b7e5ceb16ade74a6ae30629 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: As imunoglobulinas G (IgG) e seus fragmentos Fab, F(ab)¿2 e Fv apresentam aplicações proeminentes nas áreas terapêuticas e de diagnósticos. Em determinadas situações em que a região Fc é dispensável e/ou deletéria, emprega-se preferencialmente fragmentos em relação à IgG não clivada. Tais aplicações requerem um elevado grau de pureza dessas biomoléculas. O elevado custo de obtenção de fragmentos pelas técnicas convencionais justifica a investigação de outras que possam proporcionar a obtenção dessas proteínas, combinando um menor custo com um elevado grau de pureza. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar e comparar a eficácia dos adsorventes agarose-CM-Asp-Ni(II), agarose-CM-Asp-Co(II), agarose-CM-Asp-Cu(II) e agarose-CM-Asp-Zn(II) na purificação dos fragmentos Fab de IgG humana policlonal, a partir de uma solução de IgG clivada pela enzima papaína. O efeito do sistema tamponante, do íon metálico e do cloreto de sódio foram avaliados. A seletividade das condições cromatográficas foi avaliada por eletroforese SDS-PAGE, Western Blotting e imunodifusão radial. Os resultados indicaram que nas cromatografias conduzidas com o quelato CM-Asp-Co(II) com Hepes e Tris-HCl, na ausência de sal, os fragmentos Fab foram obtidos separados do Fc nas frações de eluição. Nas cromatografias em CM-Asp-Ni(II) com Hepes e fosfato de sódio na presença de NaCl e em CM-Asp-Cu(II) com Tris-HCl e fosfato de sódio na presença de NaCl, a biomolécula alvo foi obtida seletivamente nas frações não retidas (cromatografia negativa). Nas cromatografias em CM-Asp-Zn(II) não houve a recuperação seletiva dos fragmentos Fab. Os resultados das curvas de ruptura com os quelatos CM-Asp-Ni(II), CM-Asp-Co(II) e CM-Asp-Cu(II) revelaram a recuperação de 3,4 mg, 17,1 mg e 8,6 mg de Fab, respectivamente. Os fragmentos Fab foram obtidos com pureza superior a 90%, sendo que para o ligante CM-Asp-Cu(II), segundo o western blot, os fragmentos Fab foram separados da IgG não clivada. Os resultados obtidos nas condições cromatográficas estudadas evidenciam a potencialidade do emprego dos quelatos CM-Asp-Ni(II), CM-Asp-Co(II) e CM-Asp-Cu(II), imobilizados em agarose, para purificação de fragmentos Fab obtidos da clivagem enzimática da IgG humana policlonal / Abstract: Immunoglobulins G (IgG) and their fragments Fab, F(ab)¿2 and Fv are prominently applied as therapeutic and diagnostic tool. Fragments are preferably used rather than the uncleaved IgG, specially when the Fc portion is dispensable or prejudicial. For the mentioned applications, high purity preparations are required. The high costs associated with the conventional downstream processing of these biomolecules is the driving force to investigate purification techniques that can combine lower cost with high purification factor. Therefore, the goal of this work is to evaluate and compare the efficiency of CM-Asp-Ni(II), CM-Asp-Co(II), CM-Asp-Cu(II) and CM-Asp-Zn(II) adsorbents in the purification of Fab fragments from papain-digested human IgG. The effects of buffers, metal-ion and NaCl addition were also studied. The adsorbent/buffer selectivity towards the targeted molecule was evaluated by SDS-PAGE, Western Blotting and radial immunodiffusion assays. Chromatography with CM-Asp-Co(II) as chelated using Hepes and Tris-HCl buffers resulted in Fab recovery in the elution fractions. Whereas the chromatography with CM-Asp-Ni(II) and CM-Asp-Cu(II) both as chelated using Hepes sodium phosphate buffers with NaCl addition resulted in Fab selective recovery in non-retained fractions (negative chromatography). The adsorbent CM-Asp-Zn(II) did not show Fab selective recovery. Breakthrough curves experiments with CM-Asp-Ni(II), CM-Asp-Co(II) e CM-Asp-Cu(II) showed recovery of 3.4 mg, 17.1 mg and 8.6 mg of Fab, respectively. Fab fragments were recovered with purity higher than 90%. When chelated CM-Asp-Cu(II) was use as ligand, Fab fragments were recovery separated from intact IgG as shown in western blot. Results obtained in the chromatographic conditions studied showed the potential use of CM-Asp-Ni(II), CM-Asp-Co(II) and CM-Asp-Cu(II) immobilized in agarose for the purification of Fab fragments from cleaved human polyclonal IgG / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestra em Engenharia Química

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T22:13:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Olivier_CelsoEduardo_D.pdf: 3614236 bytes, checksum: 1ad74cf399538a32c71390e6b3dbd7bc (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A alergia ao leite de vaca é uma condição, até o momento, sem uma solução satisfatória. Dentre as proteínas do leite, a beta-lactoglobulina é uma das mais alergênicas pelo fato de não ser produzida pelo ser humano e sua pouca digestibilidade, mas pouco se sabe sobre a alergenicidade das proteínas bioprocessadas pela indústria de laticínios como a beta-lactoglobulina polimerizada. O objetivo deste trabalho é estudar imunorreatividade da beta-lactoglobulina polimerizada e compará-la com a beta-lactoglobulina nativa. Utilizou-se a polimerização induzida pela transglutaminase em presença de cisteína e a polimerização induzida pelo aquecimento. Cinco grupos de pacientes (dois grupos intolerantes e três grupos tolerantes) provenientes de duas clínicas de características distintas foram estudados segundo a apresentação dos sintomas e submetidos a testes cutâneo-alérgicos e a ensaios analíticos para pesquisa de IgE específica contra a beta-lactoglobulina, assim como avaliação da imunorreatividade mediada por células por testes de enfrentamento ex vivo, monitorados por testes de inibição da aderência leucocitária . Foram realizados testes cutâneos pareados com beta-lactoglobulina nativa e polimerizada em 56 adultos com hipersensibilidade problemática ao leite de vaca previamente diagnosticados como intolerantes à lactose. Realizou-se pesquisa de IgE específica contra a beta-lactoglobulina por ImmunoCAP e imunoblote. Um grupo de 20 indivíduos tolerantes ao leite de vaca e com ausência de IgE contra beta-lactoglobulina detectável por ImmunoCAP e testes cutâneo-alérgicos negativos foram selecionados como controle da técnica do imunoblote. Os resultados mostraram que a detecção analítica por imunoblote de anticorpos da classe IgE é significativamente mais sensível quando se utiliza a beta-lactoglobulina polimerizada no imunoensaio do que quando se utiliza o monômero de betalactoglobulina. Os resultados mostraram que a dosagem de IgE por imunoCAP abaixo dos limites de detecção, ou o teste cutâneo-alérgico não reagente, não descartam a possibilidade de hipersensibilidade mediada por IgE como demonstrado pelo imunoblote. Foram realizados testes cutâneos pareados com beta-lactoglobulina nativa e polimerizada em 22 crianças sintomáticas, com diagnóstico de alergia à betalactoglobulina mediada por IgE, confirmado por ImmunoCAP. Um grupo controle pareado de 22 crianças assintomáticas com IgE específica para beta-lactoglobulina não detectável por ImmunoCAP foi estabelecido para comparação da técnica dos testes cutâneo-alérgicos. Os resultados mostraram nos dois grupos que as reações cutâneas para os testes realizados com a beta-lactoglobulina polimerizada foram significantemente menores que as reações dos testes realizados com a beta-lactoglobulina nativa. A imunorreatividade mediada por células contra a beta-lactoglobulina nativa e contra a beta-lactoglobulina polimerizada pela transglutaminase foi estudada em 49 indivíduos atópicos através de testes pareados de enfrentamento antigênico ex vivo monitorado pelo teste de inibição da aderência leucocitária. Os resultados mostraram que a imunorreatividade mediada por células contra a beta-lactoglobulina nativa não é significantemente diferente da observada contra a betalactoglobulina polimerizada pela transglutaminase quando o enfrentamento ex vivo é monitorado pelo teste de inibição da aderência leucocitária. A polimerização é um método promissor para a indução de imunotolerância às proteínas alimentares, uma vez que diminui a imunorreatividade in vivo e não destrói os epítopos alergênicos como demonstrado nos ensaios in vitro e ex vivo / Abstract: Cow's milk allergy is a debilitating condition of difficult diagnosis and, until the moment, without a definitive solution that can be presented to the patient by the medical attendant. Amongst the dozens of proteins of the cow's milk, the beta-lactoglobulin (Bos d 5) is one of most allergenic for the fact that it is not produced by the human being and because of its hard digestibility. The allergenicity of beta-lactoglobulin in human beings is a subject well studied but little is known about the allergenicity of bioprocessed proteins as the polymerized beta-lactoglobulin. The objective of the present work is to study the immunoreactivity of the polymerized beta-lactoglobulin and to compare it with the immunoreactivity of the native beta-lactoglobulin in patients with and without clinical diagnosis of hypersensitivity/intolerance to cow's milk. It was used thermically induced polymerization and polymerization induced by transglutaminase in presence of cystein. Five groups of patients (two intolerant groups and three tolerant groups) proceeding from two clinics of distinct characteristics had been studied according to presentation of the symptoms and submitted to allergic cutaneous tests and immunoassays for research of specific-IgE against beta-lactoglobulin, as well evaluation of cell-mediated immunoreactivity by challenge tests monitored by Leukocyte Adherence Inhibition Test. Side to side cutaneous tests with native and polymerized beta-lactoglobulin in 56 adults with problematic hypersensitivity to cow's milk previously diagnosed as intolerants to the lactose had been carried through, as well research of specific-IgE against betalactoglobulin by ImmunoCAP and immunoblot. A control group of 20 subjects tolerant to cow's milk people with absence of specific-IgE against beta-lactoglobulin (detectable by ImmunoCAP or by allergic skin tests) had been selected for control of the technique of immunoblot. The results had shown that the analytical detection by immunoblot of specific-IgE is significantly more sensible when the polymerized beta-lactoglobulin is used in the immunoassay instead of the beta-lactoglobulin monomer. The results had shown that the research of specific-IgE by ImmunoCAP below of the detection limits, or the absence of cutaneous reactivity does not discard the possibility of IgE-mediated hypersensitivity as demonstrated by immunoblot. Side to side cutaneous tests with native and polymerized beta-lactoglobulin had been carried through in 22 symptomatic children, with confirmed by ImmunoCAP diagnosis of IgE-mediated allergy to beta-lactoglobulin. A matched control group of 22 asymptomatic children with not detectable specific-IgE for beta-lactoglobulin by ImmunoCAP was established for comparison of the technique of the skin tests. The results had shown that the cutaneous reactions carried through with the polymerized beta-lactoglobulin had been significantly lesser that the reactions of the cutaneous reactions carried through with the native beta-lactoglobulin. The cell-mediated immunoreactivity was studied on 49 atopic subjects by paired ex vivo allergen challenges monitored by the leukocyte adherence inhibition test. The results did not shown significant difference between the immunoreactivity against native versus polymerized beta-lactoglobulin. The polymerization of proteic antigens is a promising study model to be further investigated as a potential tool for the therapeutic induction of immune tolerance to alimentary proteins, because it decreases the in vivo immunoreactivity and does not destroy the allergenic epitopes as demonstrated by the in vitro and ex vivo assays / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Passive immunity acquired by the newborn foal through the colostrum is essential to prevent perinatal infections. The aim of this study was to establish the sensitivity and specificity of the zinc sulfate turbidity test (ZST) 12 hours after first suckling for the detection of immunoglobulins (IgG) to indicate or not the failure of passive immunity transfer. There was no difference in the ZST results obtained from blood collected at 12 (n=110) and 18 (n=38) hours, confirming that the test may be performed as early as 12 hours after the first colostrum intake. When compared to the single radial immunodiffusion test, the ZST test showed 76.50%, 95.65% and 94.68% sensitivity and 93.75%, 93.94% and 75.92% specificity, respectively, for a standard of 400, 600 and 800 mg dL-1 of immunoglobulins (IgG). The results of the ZST test, i.e. according to label instructions, performed 12 hours after the first suckling at 37oC is a reliable diagnostic tool for detecting IgG levels in newborn foals. / A imunidade passiva adquirida pelo potro neonato através da ingestão do colostro é essencial para a prevenção das infecções neonatais. O objetivo deste trabalho foi determinar a sensibilidade e a especificidade do teste da turvação pelo sulfato de zinco (TSZ) 12 horas após a primeira ingestão de colostro para detecção de imunoglobulinas G (IgG) para indicar ou não a deficiência de transferência da imunidade passiva. Não houve diferença nos resultados do teste TSZ com amostras séricas de potros PSC coletadas 12 (n=110) ou 18h (n=38) após a primeira ingestão do colostro, confirmando que o teste pode ser conduzido 12h após a ingestão de colostro. Quando comparado com a imunodifusão radial simples, o teste TSZ apresentou sensibilidade de 76,50%, 95,65% e de 94,68% e especificidade 93,75%, 93,94% e de 75,92%, para padrões de 400, 600 e 800mg dL-1 de IgG, respectivamente. Assim, o TSZ é um valioso teste para o diagnóstico no campo, desde que sejam seguidas estritamente as indicações do fabricante, especialmente quanto à temperatura. O teste pode e deve ser realizado 12 horas após a primeira mamada, pois apresenta bom índice de precisão.

Urofacial syndrome (UFS; MIM# 236730) is a rare autosomal recessive condition characterised by urinary bladder and bowel voiding dysfunction with a pathognomonic abnormality of facial movement with expression. UFS can be caused by biallelic putative loss-of-function mutations in HPSE2, which encodes heparanase 2. Failure to discover HPSE2 mutations in all cases of UFS suggests genetic heterogeneity. The urinary tract features of UFS overlap those seen in the spectrum of non-syndromic non-neurogenic voiding dysfunction and vesicoureteric reflux (VUR). This overlap suggests there may be some aspects of pathogenesis in common. The project aimed to define the genotypic and phenotypic spectrum associated with mutations in HPSE2 by Sanger sequencing and multiplex ligation-dependent probe amplification (MPLA) in newly referred cases of UFS and making comparison to a review of mutations and phenotypes seen in the literature. This work discovered five further families with HPSE2 associated UFS increasing known mutations whilst, reinforced that this is an under-recognised condition and emphasised the previously under-reported feature of facial weakness. The failure to discover HPSE2 mutations in all cases referred provided further evidence of genetic heterogeneity. The project also aimed to discover further genes associated with UFS. Autozygosity mapping and whole exome sequencing was carried out in cases of UFS without mutations in HPSE2. This led to the recognition that UFS is also caused by biallelic putative loss-of-function mutations in LRIG2 encoding the leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 2 (LRIG2) protein in three families. Failure to identify LRIG2 mutations in all HPSE2 negative families suggests further genetic heterogeneity. To address the question of whether the pathogenesis of UFS overlaps more common conditions with a similar spectrum of urinary tract abnormalities I aimed to examine whether pathogenic variants in HPSE2 and LRIG2 were seen in these phenotypes. Unexpectedly this led to the discovering of further families affected by UFS but failed to show an association of variants in UFS genes with non-syndromic urinary tract abnormalities. However, variants of potential interest were discovered. As part of work toward understanding the pathogenesis of UFS and designing a model to test the pathogenesis of sequence variants expression studies in a Xenopus tropicalis hpse2 knock-down model of UFS were carried out. The knock-down model provided valuable insight in to the likely pathogenesis of UFS with evidence pointing towards a congenital peripheral neuropathy with failure of correct nerve path finding. Understanding the pathogenesis of UFS has the potential to direct further research in to therapeutic intervention.

A imunodeficiência comum variável (ICV) é uma síndrome heterogênea caracterizada por hipogamaglobulinemia e infecções bacterianas de repetição. As doenças obstrutivas, como a asma, estão presentes em aproximadamente 50% dos pacientes. Os sintomas decorrentes de infecções respiratórias de repetição podem mascarar os sintomas de alergia respiratória. A asma tem alta prevalência no mundo e é observada em aproximadamente 10% da população brasileira. Embora muitos pacientes com ICV apresentem história clínica sugestiva de rinite e/ou asma alérgicas, a participação da atopia não está bem esclarecida e freqüentemente os níveis de IgE total e/ou IgE específica estão baixos. Muitos autores estudam a produção de IgE local e uma correlação entre a concentração de IgE nos fluidos corporais e no soro existe. Os objetivos deste estudo são avaliar a função pulmonar em pacientes com ICV através de: espirometria, provocação brônquica com histamina e com alérgeno; investigar o diagnóstico de asma em pacientes com ICV e realizar a investigação in vivo e in vitro da IgE em pacientes com ICV. Este estudo incluiu 62 pacientes que estavam em acompanhamento ambulatorial no Serviço de Imunologia Clínica e Alergia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. A função pulmonar foi avaliada pela espirometria e pela provocação brônquica com histamina antes e após uma provocação brônquica com Dermatophagoides pteronyssinus (Der p) e a investigação da IgE específica para aeroalérgenos através de teste epicutâneo e avaliação da IgE sérica específica usando ImmunoCAPTM. Vinte e nove (46,7%) tinham história clínica de sugestiva de asma e em relação à atopia, 27 (43,5%) tinham história sugestiva de atopia. Uma associação de asma e atopia no mesmo paciente foi encontrada em 18 pacientes (29%). Nós comparamos o grupo sugestivo de asma alérgica com os outros pacientes pacientes com rinite alérgica ou não-alérgica, asma não-alérgica e pacientes sem sintomas respiratórios. A maioria dos pacientes apresentou níveis séricos de IgE total indetectáveis. Somente dois pacientes apresentaram resultado positivo para IgE específica pelo teste epicutâneo e in vitro. Sessenta e um pacientes realizaram espirometria. Destes, 25 pacientes (41%) apresentaram resultado normal, 29 (47,5%) apresentaram distúrbio ventilatório obstrutivo e 7 (11,5%) apresentaram resultados sugestivos de distúrbio ventilatório restritivo. As provocações brônquicas foram realizadas em 15 pacientes. A provocação brônquica com histamina foi considerada positiva em 3 pacientes com história positiva para asma. Em relação à provocação brônquica com Der p, nenhum paciente apresentou resposta imediata positiva. Entretanto, quando a segunda provocação brônquica com histamina foi realizada (pós-Der p), quatro dos 5 pacientes com história sugestiva de asma alérgica apresentaram resultado positivo, com diminuição de PC20 em relação à primeira provocação vi brônquica com histamina. Uma diferença estatística foi observada nos resultados entre o grupo sugestivo de asma alérgica e os pacientes sem asma alérgica. Ao final do estudo, a asma foi confirmada em 9 pacientes com ICV (14,5%), a atopia foi confirmada em 6 pacientes com ICV (9,7%) e a asma alérgica foi confirmada em 4 pacientes com ICV (6,5%), que correspondeu a 22,2% dos 18 pacientes com suspeita de asma alérgica / Common variable immunodeficiency (CVID) is a heterogenous immunodeficiency syndrome characterized by hypogammaglobulinemia, and recurrent bacterial infections. Obstructive diseases as asthma are present in approximately 50 % of patients. Symptoms due to recurrent respiratory pyogenic infections may mask respiratory allergic symptoms. Asthma has high worldwide prevalence and is observed in approximately 10 % of Brazilian population. Although a number of patients with CVID report a clinical history suggestive of allergic symptoms, the role of atopy is not well established in these individuals; and frequently levels of total IgE and/or specific IgE are low. Local IgE production has been studied and a correlation between IgE concentration in body fluids and serum exists. The objectives of this study are evaluation of pulmonary function in patients with CVID through: spirometry, bronchial challenge with histamine, and with allergen; investigate asthma diagnosis in patients with CVID; perform in vivo and in vitro investigation of IgE in patients with CVID. This study included sixty-two patients, who were being followed at the Service of Clinical Immunology and Allergy of the Hospital das Clínicas of the University of São Paulo Medical School. Pulmonary function was assessed using spirometry and bronchial challenge with histamine before and after a bronchial challenge with Dermatophagoides pteronyssinus (Der p), and investigation of specific IgE for aeroallergens with skin prick test and serum specific IgE evaluation using ImmunoCAPTM. Twenty-nine (46.7 %) had clinical history suggestive of asthma, and in regards to atopy, twenty-seven patients (43.5%) reported atopy suggestive history. An association of asthma and atopy in the same patient was observed in eighteen (29 %) participants. We compared the group of allergic asthma with the other patients patients with allergic or non-allergic rhinitis, non-allergic asthma, and patients without respiratory. Most patients had undetectable levels of total IgE concentration in serum. Only two patients had positive results for specific IgE by prick test and in vitro investigation. All patients, except one, underwent spirometry test for lung function evaluation. Of the sixty-one patients, twenty-five (41 %) had normal spirometry results, twenty-nine (47.5 %) had Obstructive Ventilatory Defect, and seven (11.5 %) had results suggestive of Restrictive Ventilatory Defect. Bronchial challenges were performed in fifteen patients. Bronchial challenge with histamine was considered positive in three patients with a positive history of asthma. Regarding to bronchial challenge with Der p, none presented immediate positive response. However, when the second nonspecific bronchial provocation with histamine was performed (post-Der p), four of the five patients with a history of allergic asthma had positive test results, with lower PC20 than in the first non-specific bronchial provocation with histamine. A statistical difference was noticed in the test results of the group suggestive for allergic asthma and the patients without allergic asthma. viii At the end of this study, asthma had been confirmed in 9 patients with CVID (14.5%), atopy had been confirmed in 6 patients with CVID (9.7%), and allergic asthma had been confirmed in 4 patients with CVID (6.5%), which corresponded to 22.2% of the 18 patients suspected of allergic asthma

Submitted by Luis Ricardo Andrade da Silva (lrasilva@uefs.br) on 2016-02-12T23:10:51Z No. of bitstreams: 1 M?rcia Maria Noya Rabelo - Disserta??o.pdf: 26908510 bytes, checksum: 90ce9ed15229c185d93e1b1379da4d1a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-12T23:10:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 M?rcia Maria Noya Rabelo - Disserta??o.pdf: 26908510 bytes, checksum: 90ce9ed15229c185d93e1b1379da4d1a (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / INTRODUCTION: Chagas disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, is one of the most important causes of heart failure in America. Alternative therapies have been investigated as potential therapeutic options for patients with this disease. This study evaluated the effects of therapy with human immunoglobulin in an experimental model of chronic chagasic cardiomyopathy. METHODS: C57BL/6 mice were infected with 1000 trypomastigotes of the Colombian strain of T. cruzi, and after eight months of infection were treated with intravenous human immunoglobulin or albumin (control). Before and after 2 months of treatment, infected animals and normal controls underwent cardiac evaluation including electrocardiogram, echocardiography and treadmill test. The immunoglobulin and albumin groups were treated, respectively, with 1 mg/kg/day of human immunoglobulin or albumin, intraperitoneally, for five consecutive days. All animals were sacrificed under anesthesia, after 2 months of treatment, for histopathological analysis of the heart. RESULTS: No improvement was observed in cardiovascular function in animals treated with immunoglobulin compared to animals treated with albumin. There was an increasing in the number of animals with complete atrioventricular block in the immunoglobulin group. However, sections of hearts in immunoglobulin group had a significantly reduced number of inflammatory cells (p <0,01) and area of fibrosis (p <0,001), compared to animals treated with albumin. In animals treated with immunoglobulin, there was evidence of arteritis marked with immune complex deposition in the intima of arterioles. The concentrations of serum cytokines were increased in the group treated with immunoglobulin in comparison to the other groups (uninfected and treated with albumin mice). When considering cytokines production in heart extract, there were no differences observed in production of IFN-?, TNF-? and IL-10 between the groups treated with immunoglobulin and albumin. CONCLUSION: Thus, we concluded that immunoglobulin therapy has neither not shown anti-inflammatory efficacy nor improvement in cardiovascular function in a murine model of chronic chagasic cardiomyopathy. / INTRODU??O: A doen?a de Chagas, causada pelo protozo?rio Trypanosoma cruzi, ? uma das mais importantes causas de insufici?ncia card?aca na Am?rica. Terapias alternativas v?m sendo investigadas como poss?veis op??es terap?uticas para pacientes portadores desta doen?a. Neste estudo foram avaliados os efeitos da terapia com imunoglobulina humana em um modelo experimental de cardiomiopatia chag?sica cr?nica. M?TODOS: Camundongos C57BL/6 foram infectados com 1000 tripomastigotas da cepa Colombiana de T. cruzi e, ap?s oito meses de infec??o, foram tratados com imunoglobulina ou com albumina humanas (controle). Antes e ap?s 2 meses do tratamento, os animais chag?sicos e controles normais foram submetidos ? avalia??o card?aca, incluindo eletrocardiograma, ecocardiograma e teste ergom?trico. Os grupos tratados com imunoglobulina e albumina receberam, respectivamente, 1 mg/Kg/dia de imunoglobulina humana ou albumina, via intraperitoneal, por cinco dias consecutivos. Todos os animais foram sacrificados sob anestesia ap?s 2 meses de tratamento, para an?lise histopatol?gica do cora??o. RESULTADOS: N?o foi observada uma melhora da fun??o cardiovascular no grupo tratado com imunoglobulina quando comparado ao grupo tratado com albumina. Houve um aumento do n?mero de animais com bloqueio atrioventricular total no grupo imunoglobulina. No entanto, sec??es de cora??es de camundongos do grupo imunoglobulina apresentaram uma redu??o significativa do n?mero de c?lulas inflamat?rias (p< 0,01) e da ?rea de fibrose (p< 0,001) em compara??o com animais chag?sicos tratados com albumina, sendo que nos animais tratados com imunoglobulina foi evidenciada a presen?a de arterite acentuada, com dep?sito de imunocomplexos na camada ?ntima arteriolar. As concentra??es de 12 citocinas s?ricas foram aumentadas no grupo tratado com imunoglobulina em rela??o aos demais grupos (n?o infectados e tratados com albumina). Quando avaliada a produ??o, em extrato de cora??o, de IFN-?, TNF-? e IL-10, n?o foram observadas diferen?as entre os grupos tratados com imunoglobulina e albumina. CONCLUS?O: Deste modo, conclu?mos que a terapia com imunoglobulina humana n?o demonstrou efic?cia anti-inflamat?ria nem induziu a melhora da fun??o card?aca no modelo murino de cardiomiopatia chag?sica cr?nica.