Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-03Bitstream added on 2014-06-13T19:36:57Z : No. of bitstreams: 1 nunes_ga_me_botfmvz.pdf: 135711 bytes, checksum: ac2deca13d4ed213812621085cb2a3df (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O estresse compreende uma multiplicidade de eventos, envolvendo o sistema imune e ativação do sistema nervoso autônomo, bem como a ativação do eixo hipotálamo-pituitária-adrenal, com conseqüente aumento de catecolaminas e glicocorticóides, respectivamente. Além do papel imunomodulador dos leucotrienos na síntese de citocinas, este mediador contribui para a produção de óxido nítrico (NO), o qual é importante no controle da replicação de fungos, bactérias e vírus. Estudos sobre a participação de leucotrienos e intermediários reativos do oxigênio contribuem para uma melhor compreensão da resposta imune durante o estresse. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação de um inibidor de leucotrienos (MK 886), in vivo e in vitro, sobre o estado de ativação de macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c submetidos a estresse por imobilização, determinando a produção de intermediários reativos do oxigênio (H2O2) e do nitrogênio. Animais submetidos a estresse agudo ou crônico não apresentaram alterações significativas na produção de H2O2 e NO. Entretanto, macrófagos de animais submetidos a estresse agudo ou crônico e estimulados in vitro com MK 886 apresentaram inibição na geração de NO. Animais submetidos a estresse crônico e tratados com MK 886 apresentaram elevação na geração de H2O2 e inibição na produção de NO. Nossos resultados sugerem um importante papel dos leucotrienos quanto à síntese de NO, o qual é importante no controle da replicação de agentes infecciosos, principalmente em animais estressados e imunossuprimidos. / Stress comprises a great variety of events involving the immune system and the central nervous system, providing evidence for autonomic pathways and endocrine modulation of the immune response following stress exposure. Besides the immunomodulatory role of leukotrienes in cytokines synthesis, this mediator contributes for nitric oxide (NO) production, which is important to the control of fungi, bacteria and virus replication. Studies regarding the involvement of leukotrienes and oxygen (H2O2) and nitrogen intermediates contribute for a better comprehension of the immune response during stress. The objectives of this research were to evaluate peritoneal macrophages activation as well as to observe the effect of a leukotrienes inhibitor (MK 886) in mice submitted to immobilization stress. Mice submitted to acute or chronic stress showed no alterations in H2O2 and NO production. However, macrophages of acute or chronic stressed-mice and stimulated in vitro with MK 886 showed NO inhibition. Chronically stressed-mice treated with MK 886 showed an increase in H2O2 generation and inhibited NO production. Our data suggest an important role of leukotrienes with regards to NO synthesis, which is important to control several infectious agents replication, mainly in stressed and immunossupressed animals.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-01Bitstream added on 2014-06-13T19:49:39Z : No. of bitstreams: 1 000721465.pdf: 1538253 bytes, checksum: 19e309686a5c02fbf745f13b76123818 (MD5) / The aim of this study was to evaluate the transfer of passive immunity (TPI) in Holstein calves delivery from cows with subclinical and clinical mastitis. Four groups of studies were evaluated. Group I (GI) 10 healthy primiparous cows with SCC ≤ 300,000 cells/mL, Group II (GII) 10 healthy multiparous cows with SCC 301-600,000 cells/mL, Group III (GIII) 10 multiparous cows with mastitis records that calved with subclinical mastitis with SCC> 600,000 cells/mL with normality in udder and colostrum and Group IV (GIV) 10 multiparous cows with mastitis records that calved with clinical mastitis with SCC> 600 000 cells/mL with changes in the udder and/or colostrum. Blood samples and colostrum were collected immediately after birth, 24 and 48 hours after delivery/birth. The microbiological culture showed that Streptococcus sp. and Staphylococcus sp. were the most common bacteria isolated from cows with subclinical and clinical mastitis respectively. The SCC stipulated for the control group cannot be followed, since the secretions of healthy animals showed average values greater than 992,000 cells/mL of colostrum. CMT can be useful to confirm mastitis in post-partum period. The ultrasound was effective in determining parenchyma affected by infection. No differences were observed between the values of the protein constituents of colostrum and values of cytokines in multiparous and primiparous cows. Ingestion of colostrum derived from cows with clinical and subclinical mastitis is unlikely to be an important contributor to failure of passive transfer in calves

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-29Bitstream added on 2014-06-13T20:11:35Z : No. of bitstreams: 1 000735684.pdf: 2208916 bytes, checksum: fc893d8186bcdfad48c0cff2054427eb (MD5) / A relação entre o envelhecimento e os componentes da dieta, carboidratos e proteínas, microbiota e produtos de fermentação no intestino, histologia e imunidade intestinal e imunidade sistêmica, são pontos importantes para a nutrição de cães, mas muito pouco estudados. Neste estudo foram analisados os efeitos da idade e das fontes de proteína e carboidrato sobre a digestibilidade dos nutrientes, produtos de fermentação, pH, microbiota e IgA das fezes, parâmetros imunológicos sanguíneos e histologia da mucosa gastrointestinal de cães. O ensaio seguiu esquema fatorial 3 x 2, com três rações e duas idades, gerando seis tratamentos experimentais. Foram empregados três blocos de 12 cães cada, sendo seis cães adultos (2,6 ± 0,9 anos) e seis idosos (10,2 ± 1,0 anos) com duas repetições por tratamento em cada bloco, totalizando seis repetições (cães) por tratamento. As rações experimentais foram: dieta com fibra insolúvel não fermentável a base de cana-de-açúcar (FC) e farinha de vísceras de frango; dieta com 30% de farelo de soja (FS), em substituição a farinha de vísceras de frango; dieta com fibra fermentável e parcialmente solúvel a base de polpa de beterraba (PBe). Os dados obtidos foram avaliados por análise de variância pelo procedimento MIXED do SAS, considerando-se os efeitos de bloco, animal e ração e suas interações. Médias foram comparadas pelo teste de Tukey (P<0,05). Os resultados de histologia da mucosa do trato digestivo foram comparados pelo teste de Kruskal-Wallis e o pós-teste de Dunn (P<0,05). Na dieta PBe houve interação entre idade e os coeficientes de digestibilidade aparente (CDA), sendo estes menores para os idosos (P<0,05). As contagens de colônias de anaeróbios totais, aeróbios totais, Lactobacillus spp e Bifidobacterium apresentaram interação idade e dieta (P<0,05). Para estas bactérias cães adultos alimentados com... / A relação entre o envelhecimento e os componentes da dieta, carboidratos e proteínas, microbiota e produtos de fermentação no intestino, histologia e imunidade intestinal e imunidade sistêmica, são pontos importantes para a nutrição de cães, mas muito pouco estudados. Neste estudo foram analisados os efeitos da idade e das fontes de proteína e carboidrato sobre a digestibilidade dos nutrientes, produtos de fermentação, pH, microbiota e IgA das fezes, parâmetros imunológicos sanguíneos e histologia da mucosa gastrointestinal de cães. O ensaio seguiu esquema fatorial 3 x 2, com três rações e duas idades, gerando seis tratamentos experimentais. Foram empregados três blocos de 12 cães cada, sendo seis cães adultos (2,6 ± 0,9 anos) e seis idosos (10,2 ± 1,0 anos) com duas repetições por tratamento em cada bloco, totalizando seis repetições (cães) por tratamento. As rações experimentais foram: dieta com fibra insolúvel não fermentável a base de cana-de-açúcar (FC) e farinha de vísceras de frango; dieta com 30% de farelo de soja (FS), em substituição a farinha de vísceras de frango; dieta com fibra fermentável e parcialmente solúvel a base de polpa de beterraba (PBe). Os dados obtidos foram avaliados por análise de variância pelo procedimento MIXED do SAS, considerando-se os efeitos de bloco, animal e ração e suas interações. Médias foram comparadas pelo teste de Tukey (P<0,05). Os resultados de histologia da mucosa do trato digestivo foram comparados pelo teste de Kruskal-Wallis e o pós-teste de Dunn (P<0,05). Na dieta PBe houve interação entre idade e os coeficientes de digestibilidade aparente (CDA), sendo estes menores para os idosos (P<0,05). As contagens de colônias de anaeróbios totais, aeróbios totais, Lactobacillus spp e Bifidobacterium apresentaram interação idade e dieta (P<0,05). Para estas bactérias cães adultos alimentados ...

Resumo:O objetivo do estudo foi avaliar a transferência de imunidade passiva (TIP) de vacas que pariram com mastite assintomática e clínica para os seus bezerros. Foram avaliados quatro grupos, a saber: Grupo I (GI) composto de 10 vacas primíparas sadias com contagem de células somáticas (CCS) ≤300 mil cél/mL, Grupo II (GII) composto de 10 vacas pluríparas sadias com CCS 301-600 mil cél/mL; Grupo III (GIII) composto de 10 vacas pluríparas com histórico de mastite que pariram com mastite assintomática com CCS>600 mil cél/mL sem alterações no úbere e colostro; e Grupo IV (GIV) composto por 10 vacas pluríparas com histórico de mastite que pariram com mastite clínica com CCS>600 mil cél/mL com alterações no úbere e/ou colostro. Foram coletadas amostras de sangue e colostro imediatamente após o parto, 24 e 48 horas após o parto/nascimento. O cultivo microbiológico mostrou ser Streptococcus sp. o principal agente isolado nos animais com mastite assintomática e o Staphylococcus sp. nos animais com mastite clínica. A CCS estipulada para os animais do grupo controle não pode ser seguida, uma vez que as secreções de animais sadios apresentaram valores médios superiores a 992 mil cél/mL de colostro. O CMT foi valioso no diagnóstico a mastite no pós-parto imediato. O exame ultrassonográfico mostrou-se eficaz na determinação de parênquimas acometidos por infecção. Não foram observadas diferenças entre os valores dos constituintes proteicos do colostro e dos valores de citocinas de vacas primíparas e pluríparas. A ingestão de colostro oriundo de vacas com mastite clínica e assintomática não causa falha na transferência de imunidade passiva nos respectivos conceptos / Abstract:The aim of this study was to evaluate the transfer of passive immunity (TPI) in Holstein calves delivery from cows with subclinical and clinical mastitis. Four groups of studies were evaluated. Group I (GI) 10 healthy primiparous cows with SCC ≤ 300,000 cells/mL, Group II (GII) 10 healthy multiparous cows with SCC 301-600,000 cells/mL, Group III (GIII) 10 multiparous cows with mastitis records that calved with subclinical mastitis with SCC> 600,000 cells/mL with normality in udder and colostrum and Group IV (GIV) 10 multiparous cows with mastitis records that calved with clinical mastitis with SCC> 600 000 cells/mL with changes in the udder and/or colostrum. Blood samples and colostrum were collected immediately after birth, 24 and 48 hours after delivery/birth. The microbiological culture showed that Streptococcus sp. and Staphylococcus sp. were the most common bacteria isolated from cows with subclinical and clinical mastitis respectively. The SCC stipulated for the control group cannot be followed, since the secretions of healthy animals showed average values greater than 992,000 cells/mL of colostrum. CMT can be useful to confirm mastitis in post-partum period. The ultrasound was effective in determining parenchyma affected by infection. No differences were observed between the values of the protein constituents of colostrum and values of cytokines in multiparous and primiparous cows. Ingestion of colostrum derived from cows with clinical and subclinical mastitis is unlikely to be an important contributor to failure of passive transfer in calves / Orientador:Francisco Leydson Formiga Feitosa / Banca:Marcia Marinho / Banca:Alice Maria Ville Paiva Della Libera / Mestre

Orientador: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Coorientador: Fábio Sabbadin Zanuzzo / Banca: Fabiana Garcia / Banca: João Batista Kochenborger Fernandes / Banca: Carla Patrícia Bejo Wolkers / Abstract: This study was performed through three experiments and is presented in six chapters. In the first, we present a general introduction on the subject of the thesis and in the last chapter we present the final considerations and thesis conclusions. The other four chapters were written as scientific papers to be submitted to specialized journals. In the first experiment, we tested the innate immune response of juvenile matrinxã Brycon amazonicus fed with two concentrations of β-glucan (β-G) derived from Saccharomyces cerevisiae (0.5% and 1.0%) during 10 days. After feeding, weexperimentally infected the fish with an intraperitoneal (IP) injection of Aeromonas hydrophila and sampled the animals prior to and 6 h post infection (hpi). The results showed that β-glucan (0.5%) improved the pre-infection cortisol and lysozyme serum levels and modulated some acute phase proteins on the acute phase response of fish. In addition, we observed that β-glucan (1.0%) led to the exhaustion of innate immune response and can be detrimental to health of fish. In the second experiment, we evaluated two generations of β-glucan, with different levels of purity: MacroGard (β-G 1° 71% pure) and a new generation "R&D β-glucan" (β-G 2° 62% pure). Two groups of fish were supplemented during 15 days with 0.1% of respective generations of β-glucan and at the end of trial fish were challenged with IP injection of A. hydrophila. Fis... (Complete abstract click electronic access below) / Resumo: Este estudo foi feito por meio de três experimentos e é apresentado em seis capítulos. No primeiro, apresentamos uma introdução geral sobre o tema da tese e no último as considerações finais. Os capítulos restantes foram escritos como artigos científicos. No primeiro experimento, foi avaliada a resposta imune inata de juvenis de matrinxã Brycon amazonicus alimentados com duas concentrações de β-glucano (β-G) derivado de S. cerevisiae (0,5% e 1,0%) durante 10 dias. Depois da alimentação, os peixes foram infectados experimentalmente com injeção intraperitoneal (IP) de A. hydrophila. Os peixes foram amostrados antes e 6 h após a infecção (hpi). Os resultados mostraram que o β-G (0,5%) aumentou os níveis de cortisol sérico e da lisozima antes da infecção e modulou algumas proteínas de fase aguda na resposta imune do matrinxã. Além disso, observamos que 1,0% de β-G na dieta provocou exaustão da resposta imune inata e pode ser prejudicial para a saúde de peixes. O segundo experimento avaliou a inclusão de duas gerações de β-G na dieta, com diferentes níveis de pureza: MacroGard (β-G 1° 71% puro) e uma nova geração do produto "R&D β-glucano" (β-G 2° 62% puro). Os peixes foram alimentados por 15 dias com 0,1% de cada tipo de β-G e depois desafiados com injeção IP de A. hydrophila. Os peixes foram amostrados antes, 6, 24, e 72 hpi. Com os dados deste experimento foram escritos os capítulos 3 e 4. Os resultados mostraram que o β-G 2 ° foi mais eficiente para estimular a resposta humora... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Sandra helena Penha de Oliveira / Resumo: Os cães são o principal hospedeiro-reservatório para a leishmaniose visceral (LV) zoonótica, uma doença vetorial causada por Leishmania infantum. O óxido nítrico (NO) é a principal molécula envolvida na morte do parasita Leishmania, porém não foi quantificada intracelularmente nos macrófagos, e o seu papel na indução da apoptose celular desencadeada na resposta imune contra Leishmania não está esclarecido. Nós quantificamos a frequência de células produtoras de NO e sua concentração no sangue periférico, e em macrófagos do baço de cães sintomáticos com LV. Também avaliamos se o óxido nítrico tem correlação com a carga parasitária e a apoptose no baço. Nos cães com LV foi observado maior porcentagem de células produzindo óxido nítrico no sangue e baço do que a observada nos cães do grupo controle. A porcentagem de células CD14+ e CD14/NO do sangue e baço foi maior nos cães infectados que nos controles saudáveis. As taxas de apoptose tardia também se encontraram aumentadas no sangue e baço dos cães infectados em relação aos controles saudáveis. A porcentagem de células produtoras de NO do baço apresentou uma correlação positiva com a carga parasitária. Não foi observada uma correlação com a produção de NO e a apoptose no sangue e baço dos cães infectados, sugerindo que outros mecanismos efetores devem estar atuando na apoptose. As taxas de apoptose elevadas das células produtoras de NO do sangue periférico e no baço estão afetando a sua produção, favorecendo o aumento da carga... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dogs are the main reservoir host for visceral leishmaniasis (VL) Zoonotic, a vector disease caused by Leishmania infantum. Nitric oxide (NO) is the main molecule involved in the death of the parasite Leishmania, however it was not quantified intracellularly in macrophages and their role in induction of apoptosis triggered the immune response against Leishmania is unclear. We quantified the frequency of cells producing NO and its levels in the peripheral blood, spleen and macrophages in symptomatic dogs with VL evaluate whether nitric oxide is correlated with the parasite load in spleen and apoptosis. In dogs with LV was higher percentage of cells observed producing nitric oxide in the blood and spleen than that observed in the control group dogs. The percentage of CD14 + and CD14/NO blood and spleen was higher in infected dogs than in healthy controls. The late apoptosis rates are also increased in the blood and spleens of infected dogs compared to healthy controls. The percentage of cells producing NO spleen showed a positive correlation with the parasite load. There is a correlation with the production of NO and apoptosis in the blood and spleens of infected dogs was observed, suggesting that other mechanisms may be acting effectors of apoptosis. The high rates of apoptosis in cells producing NO peripheral blood and spleen are affecting their production, favoring increased parasite load and development of infection. / Mestre

Orientador: Gervasio Henrique Bechara / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Jair Rodini Engracia Filho / Resumo: Resultados no Brasil demonstraram, ao contrário de laboratórios dos EUA e Japão, que o cão doméstico não desenvolve resistência ao carrapato Rhipicephalus sanguineus. Além disso, populações de R. sanguineus do Brasil e da Argentina apresentam diferenças biológicas, morfológicas e genéticas marcantes sendo a primeira mais próxima filogeneticamente do R. turanicus da África e a segunda do R. sanguineus da Europa, o que explicaria, em parte, as diferenças citadas acima. Objetivou-se investigar, de forma comparativa, possível aquisição de resistência em cães domésticos após três infestações sucessivas com R. sanguineus, linhagens Brasil e Argentina. Cães domésticos da raça Dachshund, machos e fêmeas, de três meses a um ano de idade, "naive", foram utilizados como hospedeiros. Os cães (n= 10) foram distribuídos em dois grupos (G1 e G2) com cinco animais cada e infestados três vezes com R. sanguineus: G1- linhagem brasileira, e G2- linhagem argentina. Avaliaram-se: parâmetros biológicos dos carrapatos, histopatologia dos sítios de fixação na 1a e 3a infestações e titulação de anticorpos séricos dos cães pelo teste ELISA. Resultados dos parâmetros biológicos indicaram melhor desempenho alimentar e reprodutivo das teleóginas após infestações sucessivas, em ambos os grupos. Biópsias do sitio de fixação dos carrapatos revelaram, em ambos os grupos, infiltrado inflamatório com predomínio de células mononucleares 24 horas pós- liberação dos carrapatos e predominantemente neutrofílico em todas as infestações na 48a, 72a e 144a horas pós-liberação. O teste ELISA revelou baixa produção de anticorpos séricos no G2, em infestações sucessivas, e maior produção pós-segunda e terceira infestações no G1. Também demonstrou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Contrarily to that observed in U.S.A and Japan, previous results from Brazil have shown that domestic dogs do not develop resistance to the dog tick Rhipicephalus sanguineus. In addition, populations of R. sanguineus from Brazil and Argentina have biological, morphological and genetic differences, being the first phylogenetically closest to R. turanicus from Africa and the second to R. sanguineus from Europe, what could explain, at least in part, the differences reported above. The aim now was to investigate, in a comparative way, the possible acquisition of resistance in domestic dogs after three successive infestations with R. sanguineus ticks, Brazil and Argentina strains. For this, "naive" domestic dogs of the breed Dachshund, males and females, aged three months to one year were used. The hosts (n = 10) were divided into two groups with five animals each, infested thrice with R. sanguineus: G1- Brazil strain; G2- Argentina strain. It was evaluated: i. biological parameters of ticks in each infestation; ii. histopathology of their fixation sites in different times (24, 48, 72 and 144 hours) post-tick release in the 1st and 3rd infestations, including inflammatory cell counting; iii. titration of dog sera antibodies by ELISA. Results of the biological parameters indicated better engorged females feeding and reproductive performances after successive infestations in both groups. Biopsies of the ticks' attachment sites in the 1st and 3rd infestations revealed, in both groups, predominantly mononuclear inflammatory cells infiltrates 24 hours post-tick release and predominantly neutrophylic in all infestations at 48, 72 and 144 hours post-tick release. The ELISA revealed low antibody titers in G2, in successive infestations, and increased titers post second and third infestations, in G1. It also revealed cross-reactivity between the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Maurício Sforcin / Resumo: O estresse compreende uma multiplicidade de eventos, envolvendo o sistema imune e ativação do sistema nervoso autônomo, bem como a ativação do eixo hipotálamo-pituitária-adrenal, com conseqüente aumento de catecolaminas e glicocorticóides, respectivamente. Além do papel imunomodulador dos leucotrienos na síntese de citocinas, este mediador contribui para a produção de óxido nítrico (NO), o qual é importante no controle da replicação de fungos, bactérias e vírus. Estudos sobre a participação de leucotrienos e intermediários reativos do oxigênio contribuem para uma melhor compreensão da resposta imune durante o estresse. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação de um inibidor de leucotrienos (MK 886), in vivo e in vitro, sobre o estado de ativação de macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c submetidos a estresse por imobilização, determinando a produção de intermediários reativos do oxigênio (H2O2) e do nitrogênio. Animais submetidos a estresse agudo ou crônico não apresentaram alterações significativas na produção de H2O2 e NO. Entretanto, macrófagos de animais submetidos a estresse agudo ou crônico e estimulados in vitro com MK 886 apresentaram inibição na geração de NO. Animais submetidos a estresse crônico e tratados com MK 886 apresentaram elevação na geração de H2O2 e inibição na produção de NO. Nossos resultados sugerem um importante papel dos leucotrienos quanto à síntese de NO, o qual é importante no controle da replicação de agentes infecciosos, principalmente em animais estressados e imunossuprimidos. / Abstract: Stress comprises a great variety of events involving the immune system and the central nervous system, providing evidence for autonomic pathways and endocrine modulation of the immune response following stress exposure. Besides the immunomodulatory role of leukotrienes in cytokines synthesis, this mediator contributes for nitric oxide (NO) production, which is important to the control of fungi, bacteria and virus replication. Studies regarding the involvement of leukotrienes and oxygen (H2O2) and nitrogen intermediates contribute for a better comprehension of the immune response during stress. The objectives of this research were to evaluate peritoneal macrophages activation as well as to observe the effect of a leukotrienes inhibitor (MK 886) in mice submitted to immobilization stress. Mice submitted to acute or chronic stress showed no alterations in H2O2 and NO production. However, macrophages of acute or chronic stressed-mice and stimulated in vitro with MK 886 showed NO inhibition. Chronically stressed-mice treated with MK 886 showed an increase in H2O2 generation and inhibited NO production. Our data suggest an important role of leukotrienes with regards to NO synthesis, which is important to control several infectious agents replication, mainly in stressed and immunossupressed animals. / Mestre

Orientador: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Coorientador: Cleni Mara Marzocchi Machado / Banca: Jose Eurico Possebon Cyrino / Banca: Leonardo Susumu Takahashi / Banca: Rodney Alexandre Ferreira Rodrigues / Banca: Marco Antonio de Andrade Belo / Resumo: Não disponível / Abstract: Immunostimulants have been used as alternative to prevent disease outbreaks in fish farm. Products derived from Aloe vera are popular around the world due to their medicinal properties, including immunostimulatory, and represent potentially an inexpensive alternative for the control of fish diseases. The purpose was to evaluate A. vera effects in stress and innate immune responses of pacu (Piaractus mesopotamicus), fish of economic value in Brazilian farming. Fish were fed, for 10 days, with four diets: control diet, and diets with 5 g kg-1 (0.5%), 10 g kg-1 (1%) and 20 g kg-1 (2%) of A. vera. Thereafter, fish were transported for 4 hours (166 g L-1) (Experiment 1) and then experimentally infected with Aeromonas hydrophila or injected with PBS buffer (sham), by intraperitoneal via (IP) (Experiment 2). Fish were sampled at the initial condition (before transport, n=10), transport arrival (n=11), 12 and 24 hours after transport without IP (Recovery; n=8) and also at 12 and 24 hours after transports with IP (Challenge; A. hyd. or PBS, n=8). Transport increased the cortisol and glucose levels and reduced the leukocyte respiratory burst (LRB) and hemolytic activity of alternative complement pathway (ACH) of control fish, while A. vera prevented the LRB and ACH reduction at arrival. Serum lysozyme concentration (SLC) increased at 24 h after transport in A. vera infected fish. LRB, SLC and ACH of fish feeding A. vera (2%) were significantly higher, 24 h after the bacterial infection, than in control fish. A. vera enhanced the innate immune responses tested in pacu and reinforces the possibility for medicinal herbs added to fish food as an alternative method to prevent diseases in fish / Doutor

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-03-09T20:08:05Z No. of bitstreams: 1 PaulaIvaniMedeirosDosSantos_TESE.pdf: 2576570 bytes, checksum: ad723940125128ab00057ee1698f195a (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-03-13T20:16:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PaulaIvaniMedeirosDosSantos_TESE.pdf: 2576570 bytes, checksum: ad723940125128ab00057ee1698f195a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T20:16:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PaulaIvaniMedeirosDosSantos_TESE.pdf: 2576570 bytes, checksum: ad723940125128ab00057ee1698f195a (MD5) Previous issue date: 2015-07-10 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / As esponjas marinhas se apresentam como uma rica fonte de novos compostos bioativos de grande interesse biotecnol?gico, vimos, neste trabalho, relatar a purifica??o e caracteriza??o de uma lectina da esp?cie Aplysina fulva, denominada AFL com atividade imunomoduladora, bem como avaliar se a mesma possue efeito citot?xico sobre c?lulas em cultura (normais, tumorais e leishmanias). As prote?nas totais foram extra?das da esponja com tamp?o Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, e fracionadas por precipita??o com acetona. A fra??o obtida com 1 volume de acetona possu?a maior atividade hemaglutinante e foi submetida a uma cromatografia em matriz de goma guar com tamp?o tetraborato de s?dio 20 mM, pH 7,5. Em seguida foi aplicada em uma coluna de Superdex 75 (FPLC-AKTA) contendo tamp?o Tris- HCl 20 mM, pH 7,5. A pureza da lectina foi atestada em uma coluna HILIC (HPLC). A sequ?ncia de 15 res?duos de amino?cidos do N-terminal da lectina foi determinada por degrada??o de Edman e n?o apresentou similaridade com nenhuma outra prote?na dos bancos de dados mais conhecidos. A massa foi estabelecida em 62 kDa, por gel filtra??o em Superdex 75. An?lise ap?s tratamento com agentes redutores permitiu deduzir que AFL ? uma prote?na homotetram?rica. Sua atividade hemaglutinante foi reduzida quando a lectina foi exposta em meio ?cido (pH < 4) ou quando submetida a temperaturas acima de 60 ?C. AFL apresentou especificidade para lactose e parcial para D-glicose e D-galactose. A lectina purificada AFL n?o apresentou efeito citot?xico para as linhagens de c?lulas cancer?genas (PANC, HeLa, HT-29, Bf16F10, A549) e de fibroblastos (MRC5). AFL foi capaz de aglutinar formas promastigotas vivas de Leishmania amazonensis e Leishmania. braziliensis,e teve sua atividade revertida pela adi??o de lactose ao ensaio. AFL n?o diminuiu de forma significante a viabilidade de Leishmania amazonensis. A lectina AFL apresentou atividade mitog?nica em concentra??es a partir de 40 ?g/mL para c?lula mononucleares do sangue perif?rico (mon?citos e linf?citos). A lectina AFL foi capaz de induzir na linhagem de macr?fagos (RAW264.7) de murinos a libera??o de TNF- ?, mas n?o de IL-6, na concentra??o de 10,0 ?g/mL. Quando AFL foi incubada com c?lulas espl?nicas de camundongos BALB/c, foi capaz de estimular a produ??o de IFN-? e promover a diferencia??o de c?lulas T para uma resposta imune celular do tipo Th1. A capacidade de modular a resposta imune do tipo Th1 jamais foi relatada em lectinas de esponjas marinhas. Todos os resultados corroboram com o alto potencial que a lectina AFL apresenta como uma nova mol?cula capaz de modular o sistema imune, podendo ser utilizada como adjuvante de vacinas contra microrganismos, dentre eles, os do g?nero leishmania. / Marine sponges are presented as a rich source of new bioactive compounds of great biotechnological interest. Here in this research we report the purification and characterization of a lectin from Aplysina fulva species, called AFL, that presents immunomodulatory activity, and it was also evaluated whether it possesses cytotoxic effects on cultured cells (normal, tumor and Leishmania). Total proteins were extracted from the sponge with Tris-HCl buffer 20 mM, pH 7.5, and fractionated by precipitation with acetone. The fraction obtained with 1 volume of acetone had greater hemagglutinating activity and was subjected to a column chromatography on guar gum matrix with 20 mM sodium tetraborate buffer, pH 7.5. It was then applied to a Superdex 75 column (AKTA-FPLC) containing 20 mM Tris-HCl buffer, pH 7.5. The purity of the lectin was attested in a HILIC (HPLC) column. The sequence of 15 residues of N-terminal amino acid of the lectin was determined by Edman degradation and showed no similarity to any other protein of the known databases. The molecular mass was set at 62 kDa by gel filtration on Superdex 75. Analysis after treatment with reducing agents enabled to deduce that the AFL is a homotetrameryc protein. Their hemagglutinating activity was reduced when the lectin was exposed in an acidic medium (pH <4) or when subjected to temperatures above 60 ? C. AFL showed specificity for partial lactose and D-glucose and D-galactose. The purified lectin LFA showed no cytotoxic effect on cancer cell lines (PANC, HeLa, HT-29, Bf16F10, A549) and fibroblast (MRC5). AFL was able to agglutinate living promastigotes of Leishmania amazonensis and Leishmania braziliensis, and had their activity reversed by the addition of lactose to the test. AFL did not decrease significantly the viability of Leishmania amazonensis. The AFL lectin showed mitogenic activity at concentrations from 40 ug / ml for mononuclear peripheral blood cells (lymphocytes and monocytes). The AFL lectin was able of induce the macrophage murine lineage (RAW264.7) release of TNF-?, but not IL-6 at a concentration of 10.0 mg / mL. When LPA was incubated with spleen cells from BALB / c mice was able to stimulate the production of IFN-? and to promote the differentiation of T cells to a cellular Th1 immune response. The ability to modulate the immune response of the Th1-type lectins has never been reported in marine sponges. All results confirm the high potential that the lectin AFL, that appears as a new molecule capable of modulating the immune system and can be used as an adjuvant for vaccines against microorganisms, including the gender Leishmania.