Made available in DSpace on 2011-05-04T12:36:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Considerando a carga e gravidade da Síndrome da Rubéola Congênita (SRC), uma campanha nacional de vacinação de mulheres com idade entre 12 e 39 anos foi realizada no Brasil em 2001-2002 com a meta de imunizar mais de 30 milhões de mulheres. A possibilidade de vacinar mulheres grávidas motivou a iniciativa de acompanhar gestantes vacinadas inadvertidamente (GVI) contra rubéola. Os objetivos do estudo foram descrever o estado imunológico das mulheres, detectar infecção congênita pelo vírus vacinal (ICR) e estimar o risco de SRC e ICR associado ao vírus vacinal. Realizou-se um estudo prospectivo não controlado no qual as taxas de SRC e ICR vacinais foram comparadas a dados históricos. O estudo foi conduzido em 7 Estados:Rio de Janeiro, São Paulo, Pernambuco, Minas Gerais, Bahia, Rio Grande do Sul e Goiás. Métodos laboratoriais incluíram teste sorológico rubéola-específico para IgM e IgG, PCR para detecção viral e seqüenciamento genômico para diferenciação viral. Uma GVI suscetível foi definida como aquela testada para rubéola até 30 dias após a vacinação e apresentou IgM positivo e IgG negativo. SRC associada à vacinação foi definida pela presença dos critérios da Organização Mundial da Saúde para a SRC em recém-nascidos de GVI suscetível, apresentando IgG+ e com vírus vacinal identificado. De um total de 16.435.776 mulheres vacinadas, 20.395 estavam grávidas no momento da vacinação. Destas, 2.330 (11,4 por cento) foram consideradas suscetíveis à rubéola. No acompanhamento de 1.797 recém-nascidos foram identificados 63 (3,5 por cento) IgM positivos configurando ICR. Os resultados das 2230 gestações em 5 Estados incluíram 80 (3,4 por cento) abortos e 11 (0,5 por cento) natimortos. Dados clínicos de 47 dos 63 casos de IRC mostraram 5 recém-nascidos com baixo peso, 4 prematuros, 1 comunicação inter-atrial e 1 sopro cardíaco aos 35 dias de vida, os quais não são compatíveis com SRC. A taxa de ICR foi de 3,5 por cento e nenhum caso de SRC foi detectado. Nossos dados reforçam as recomendações de (1) manter a contra-indicação de vacinação na gravidez e (2) não interromper a gravidez em caso de vacinação inadvertida. / Considering the burden and severity of Congenital Rubella Syndrome (CRS), a countrywide vaccination campaign was conducted in Brazil in 2001 and 2002 with the goal of immunizing over 30 million women aged 12 to 39 years. The possibility of vaccinating women unaware of their pregnancy prompted an initiative to identify and follow-up pregnant women inadvertently vaccinated (PWIV) against rubella. The objectives of this study were: to describe the immunological status of these women and ascertain vaccine virus infection in neonates born to women susceptible to rubella infection at the time of vaccination, and to estimate the risk of Congenital Rubella Infection (CRI) and CRS in neonates associated with the vaccine virus. This was a prospective uncontrolled study, in which rates of CRI and CRS due to the vaccine were compared with data from historic control group. The study was conducted in seven states of the country: Rio de Janeiro, São Paulo, Pernambuco, Minas Gerais, Bahia, Rio Grande do Sul, and Goiás. Laboratory methods included serum enzyme immune assay (EIA) for rubella IgM and IgG detection, PCR for viral detection and genomic sequencing for viral differentiation. A susceptible PWIV was defined as one tested for rubella within 30 days after vaccination and presented positive IgM and negative IgG. CRI associated with vaccination was defined as a newborn to a susceptible PWIV presenting with positive rubella IgM and having the vaccine virus identified but without CRS syndrome. CRS associated with vaccination was defined as a newborn to a susceptible PWIV who fulfilled the WHO criteria for CRS syndrome, presenting with positive rubella IgM and having the vaccine virus identified. From a total of 16,435,776 women, 20,395 were pregnant at the time of vaccination. Among these, 2,330 (11.4%) were considered susceptible at vaccination. The follow-up of 1,797 (77.1%) newborns disclosed 63 (3.5%) IgM positive, which was considered vaccine-associated CRI. Outcomes of 2,230 pregnancies in 5 states include 80 abortions (3.4%), and 11 stillborns (0.5%). Clinical data from 47 of the 63 CRI cases (75%) disclosed: 5 low birth weight, 4 preterm, 1 inter-atrium communication, and 1 cardiac murmur at 35 days of life, which are not compatible with CRS definitions. The rate of CRI was 3.5% and no CRS cases were detected. Our data support the recommendation (1) that pregnancy should remain a contraindication to vaccination and precautions should be taken to avoid vaccination within 28 days of vaccination; and (2) that in case vaccination occurs within 28 days of pregnancy, interruption of pregnancy should not be conducted.

O sistema imune de mucosas representa uma importante ferramenta de defesa contra a colonização da cavidade oral, especialmente pela presença das imunoglobulinas salivares no início da vida. Além das imunoglobulinas, as citocinas salivares também possuem funções importantes, pois utilizam células linfoides para amplificar ou deprimir a resposta inflamatória e podem ser consideradas biomarcadores proteicos. No entanto, pouco se sabe sobre a ontogenia dos componentes do sistema imune de mucosas em recém-nascidos a termo (AT) e especialmente em pré-termo (PT, com gestação inferior a 37 semanas) que reconhecidamente apresentam imaturidade imunológica. O objetivo do presente estudo foi o de analisar os níveis de imunoglobulinas (Ig) A (IgA) e M (IgM), citocinas: interleucinas (IL) IL-6, IL-10, IL-12 e interferon (IFN) (IFN-?) e 20 tipos distintos de bactérias orais em amostras de salivas de crianças ao nascer (T0) e após 3 meses de vida (T3) em PT e AT. Para isto, 123 amostras de saliva (70 AT e 53 PT) foram coletadas e os níveis de IgA e IgM foram quantificadas por ensaios ELISA. Em um subgrupo de 50 amostras (25 AT e 25 PT) foram analisadas a presença de 20 tipos diferentes de espécies bacterianas através de Checkerboard e os níveis de citocinas através de ensaio Luminex®. Dados socioeconômicos e do nascimento foram avaliados através de questionários. Os resultados do Checkerboard mostraram que nenhuma criança apresentou níveis detectáveis das bactérias testadas. Houve diferenças estatisticamente significantes (p<0.05) nos níveis de IgA em T0, sendo que PT apresentaram níveis inferiores aos AT, o que não aconteceu em T3. Diferentemente, não houve diferenças nos níveis de IgM entre os grupos e visitas (p>0.05). A análise prospectiva mostrou que houve um aumento dos níveis de IgA de T0 para T3 em ambos os grupos. Quanto à citocinas, houve diferenças somente em T0 entre PT e AT, nos níveis de IL-6 e IL10 que foram significantemente superiores em PT (p<0.05). Desta maneira, os dados sugerem que a prematuridade pode levar a algumas diferenças no status da resposta imunológica de mucosas no nascimento o que não acontece após 3 meses. / The mucosal immune system through the secretion of salivary immunoglobulins represent an important line of defense against initial acquisition and bacteria colonization of the oral cavity especially early in life. Cytokines are protein signaling molecules that lymphoid cells use to amplify or down regulate the inflammatory response. Little is known about the ontogeny of the mucosal immune system and bacterial colonization in saliva from neonates at fullterm (FT) and especially preterm (PT, with less than 37 weeks gestation), known to have an immunological immaturity. The aim of this study was to analyze the levels of immunoglobulin A (IgA) and M (IgM), four cytokines: interleukin (IL) IL-6, IL-10, IL-12 and interferon gamma (IFN-?) and 20 types of bacteria in saliva samples at birth (T0) and after 3 months (T3) in PT and FT. For this, 123 saliva samples (70 FT and 53 PT) were collected and levels of IgA and IgM were quantified by ELISA assays. In a subgroup of 50 samples (25 FT and 25 PT) was analyzed for the presence of 20 different types of bacterial species using checkerboard and the levels of cytokines through Luminex® assay. Economic data and birth partners were assessed through questionnaires. The results the Checkerboard showed that no child had detectable levels of bacteria. There were statistically significant (p <0.05) in IgA levels at T0, and PT showed lower levels than FT, which has not happened in T3. In contrast no differences in levels of IgM and visits between the groups (p> 0.05). The prospective analysis showed that there was an increase of IgA levels from T0 to T3 in both groups. As for cytokines, there were only differences at T0 between PT and AT, in IL-6 and IL-10 that were significantly higher in PT (p <0.05). Thus, the data suggest that prematurity may lead to differences in the status of the mucosal immune response at birth but not at 3 months of age.

O sistema imune de mucosas representa uma importante ferramenta de defesa contra a colonização da cavidade oral, especialmente pela presença das imunoglobulinas salivares no início da vida. Além das imunoglobulinas, as citocinas salivares também possuem funções importantes, pois utilizam células linfoides para amplificar ou deprimir a resposta inflamatória e podem ser consideradas biomarcadores proteicos. No entanto, pouco se sabe sobre a ontogenia dos componentes do sistema imune de mucosas em recém-nascidos a termo (AT) e especialmente em pré-termo (PT, com gestação inferior a 37 semanas) que reconhecidamente apresentam imaturidade imunológica. O objetivo do presente estudo foi o de analisar os níveis de imunoglobulinas (Ig) A (IgA) e M (IgM), citocinas: interleucinas (IL) IL-6, IL-10, IL-12 e interferon (IFN) (IFN-?) e 20 tipos distintos de bactérias orais em amostras de salivas de crianças ao nascer (T0) e após 3 meses de vida (T3) em PT e AT. Para isto, 123 amostras de saliva (70 AT e 53 PT) foram coletadas e os níveis de IgA e IgM foram quantificadas por ensaios ELISA. Em um subgrupo de 50 amostras (25 AT e 25 PT) foram analisadas a presença de 20 tipos diferentes de espécies bacterianas através de Checkerboard e os níveis de citocinas através de ensaio Luminex®. Dados socioeconômicos e do nascimento foram avaliados através de questionários. Os resultados do Checkerboard mostraram que nenhuma criança apresentou níveis detectáveis das bactérias testadas. Houve diferenças estatisticamente significantes (p<0.05) nos níveis de IgA em T0, sendo que PT apresentaram níveis inferiores aos AT, o que não aconteceu em T3. Diferentemente, não houve diferenças nos níveis de IgM entre os grupos e visitas (p>0.05). A análise prospectiva mostrou que houve um aumento dos níveis de IgA de T0 para T3 em ambos os grupos. Quanto à citocinas, houve diferenças somente em T0 entre PT e AT, nos níveis de IL-6 e IL10 que foram significantemente superiores em PT (p<0.05). Desta maneira, os dados sugerem que a prematuridade pode levar a algumas diferenças no status da resposta imunológica de mucosas no nascimento o que não acontece após 3 meses. / The mucosal immune system through the secretion of salivary immunoglobulins represent an important line of defense against initial acquisition and bacteria colonization of the oral cavity especially early in life. Cytokines are protein signaling molecules that lymphoid cells use to amplify or down regulate the inflammatory response. Little is known about the ontogeny of the mucosal immune system and bacterial colonization in saliva from neonates at fullterm (FT) and especially preterm (PT, with less than 37 weeks gestation), known to have an immunological immaturity. The aim of this study was to analyze the levels of immunoglobulin A (IgA) and M (IgM), four cytokines: interleukin (IL) IL-6, IL-10, IL-12 and interferon gamma (IFN-?) and 20 types of bacteria in saliva samples at birth (T0) and after 3 months (T3) in PT and FT. For this, 123 saliva samples (70 FT and 53 PT) were collected and levels of IgA and IgM were quantified by ELISA assays. In a subgroup of 50 samples (25 FT and 25 PT) was analyzed for the presence of 20 different types of bacterial species using checkerboard and the levels of cytokines through Luminex® assay. Economic data and birth partners were assessed through questionnaires. The results the Checkerboard showed that no child had detectable levels of bacteria. There were statistically significant (p <0.05) in IgA levels at T0, and PT showed lower levels than FT, which has not happened in T3. In contrast no differences in levels of IgM and visits between the groups (p> 0.05). The prospective analysis showed that there was an increase of IgA levels from T0 to T3 in both groups. As for cytokines, there were only differences at T0 between PT and AT, in IL-6 and IL-10 that were significantly higher in PT (p <0.05). Thus, the data suggest that prematurity may lead to differences in the status of the mucosal immune response at birth but not at 3 months of age.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Trypanosomiasis is a disease of worldwide distribution which in Brazil is called "mal das cadeiras", owing the clinical signs shown by horses, which are the major species affected. The disease is caused by the protozoan Trypanosoma evansi, characterized by clinical signs such as weight loss, pale mucous membranes, swelling of the eyelid and vulva. Rabbits have been reported as a resistant species to T. evansi, however, is not yet known how immune aspects, such as innate immune and cholinergic system, behave in this species, not even as this inflammations pathways influence in rabbits's trypanotolerance. Thus, the aim of this study was to investigate the inflammatory response and cholinergic anti-inflammatory pathway and its relation to trypanotolerance in rabbits infected with T. evansi. For this, twelve female adult New Zealand rabbits, weighing 3.6 4.5 kg were used in this study. The animals were divided into two groups, a control group and an infected group, both with six animals. The rabbits belonging to the infected group received, intraperitoneally, 0.5 ml of rat blood containing 108 parasites per animal, while the control group received physiological solution by the same route. The experimental period reached 118 days. Blood was collected on days 0, 2, 7, 12, 27, 42, 57, 87, 102, and 118, for to determine the cholinesterases, and days 0, 5, 20, 35, 65, 95 and 118, for to evaluate blood count, total protein, serum proteinogram, immunoglobulins and acute phase proteins. There was an increase in the activity of butyrylcholinesterase (BChE), at 7th day PI, and in the activity of acetylcholinesterase (AChE), in 27th day PI. Furthermore, the infected group showed an increase in total protein and the fractions alpha, beta and gamma globulins along of experimental period. The reduction in albumin and hematocrit were observed in precise periods of experimental infection, as well as the increase in immunoglobulin G. Infection with T. evansi stimulated the production of acute phase proteins, such as C-reactive protein, haptoglobin, α-2 macroglobulin, being observed increase in immunoglobulin M (IgM) throughout the experimental period (118 days post-infection). From these results, it is concluded that the cholinergic pathway had influence the inflammatory response, through the action of AChE and BChE in the regulation of concentrations of acetylcholine, resulting in increased concentrations of cytokines and, consequently, in the production phase protein acute. The increase in IgM, associated with increased C-reactive protein and haptoglobin, suggests the involvement of these proteins in host defense against flagellated, with possible participation in trypanotolerance of rabbits infected with T. evansi. / A tripanossomose é uma enfermidade de distribuição mundial que, no Brasil, é denominada mal das cadeiras , em função dos sinais clínicos apresentados pelos equinos, principal espécie afetada. A doença é causada pelo protozoário Trypanosoma evansi, sendo caracterizada por sinais clínicos como perda de peso, mucosas pálidas, edema de pálpebra e vulva. Coelhos têm sido relatados como uma espécie resistente ao T. evansi, contudo, ainda não se sabe de que modo aspectos imunitários, como a imunidade inata e o sistema colinérgico, comportam-se nessa espécie, nem mesmo como essas vias da inflamação influenciam a tripanotolerância de coelhos. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a resposta inflamatória e a via anti-inflamatória colinérgica e sua relação na tripanotolerância em coelhos infectados experimentalmente pelo T. evansi. Para tanto, foram utilizados 12 coelhos adultos, fêmeas, da raça Nova Zelândia, com peso corporal entre 3,6 a 4,5 Kg, divididos em dois grupos, um grupo controle e um grupo infectado, ambos com seis animais. Os coelhos pertencentes ao grupo infectado receberam, pela via intraperitoneal, 0,5 mL de sangue de rato contendo 108 tripanossomas por animal, enquanto que o grupo controle recebeu, pela mesma via, solução fisiológica. O período experimental foi de 118 dias, sendo o sangue coletado nos dias 0, 2, 7, 12, 27, 42, 57, 87, 102, e 118, para determinar as colinesterases, e nos dias 0, 5, 20, 35, 65, 95 e 118, para avaliar hemograma, proteínas totais, proteinograma sérico, imunoglobulinas e proteínas de fase aguda. Foi observado aumento na atividade da butirilcolinesterase (BChE) no 7° dia PI e da atividade da acetilcolinesterase (AChE) no 27° dia PI. Além disso, o grupo infectado apresentou aumento nas proteínas totais, bem como nas frações alfa, beta e gama globulinas ao longo do período experimental. A redução na albumina e no hematócrito foram observados em períodos pontuais da infecção experimental, bem como o aumento na imunoglobulina G. A infecção pelo T. evansi estimulou a produção de proteínas de fase aguda como a proteína C-reativa, haptoglobina, α-2 macroglobulina, sendo observado um aumento na imunoglobulina M (IgM) em todo o período experimental (118 dias pós-infecção). A partir desses resultados, conclui-se que a via colinérgica pode ter influência na resposta inflamatória, através da ação da BChE e AChE na regulação das concentrações de acetilcolina, acarretando em aumento nas concentrações de citocinas e, consequentemente, na produção de proteínas de fase aguda. A elevação na IgM, relacionada ao aumento da proteína C-reativa e haptoglobina, sugere o envolvimento dessas proteínas na defesa do hospedeiro contra o flagelado, e, possivelmente, na tripanotolerância de coelhos infectados com T. evansi.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CHAPTER I: Leprosy presents a clinical spectrum that spans from a strong cellular mediated immunity and bacili growth control of Mycobacterium leprae at the tuberculoid pole to a poor T cell immunity with extensive bacterial load at the lepromatous pole. The antigenic profile characterization in both clinical forms is a necessary step for discover and evaluation of recombinant peptides that are mimotopes of M. leprae antigens, which may present immunogenic potential, in order to obtain a beTer understanding of the disease evolution, and allowing the improvement of diagnosis, prognosis and therapeutics. Mimotopes of M. leprae antigens were selected from a random heptapeptide conformational library expressed in fusion with the pIII protein of the M13 phage, using as the ligand target the total purified IgM from leprosy patients of clinical forms, tuberculoid (TT) and lepromatous (LL), and a healthy control population. Recombinant peptides were selected by glycine elution (unspecific) and by mitsudin elution (specific). All clones, after bioinformatic analyses, were validated by immunoenzymatic and colony reduction assays. For the glycine selection, the TT pole presented 24 distinct fagotypes, while the LL pole presented only 14 fagotypes. For the mitsudin selection, only 4 fagotypes were obtained in the LL pole, and 8 fagotypes in the TT pole. The two most frequent mimotopes, in both TT and LL poles and in both elution protocols, were coincidents. The peptides LFPAMHQ and VERHPST were more frequent in the LL pole, and the peptides KNPTTGT and ETHPTTR were more frequent in the TT pole. The three cited first mimotopes had an accentuated plaque reduction with incubation of sera from LL patients; however, the mimotope ETHPTTR presented the highest reduction with sera from TT patients. The immunogenic potential of these mimotopes may be useful in the development of new diagnostic and therapeutic strategies for leprosy control in the future. CHAPTER II: The phenolic glycolipid 1 (PGL-1) is a membrane antigen highly specific of M. leprae, and it is not found in other mycobacteria. Serological tests with PGL-1 have been performed to detect circulating antibodies in multibacillary patients. Due to its importance in the clinical classification of leprosy patients, we have developed mimotopes of this non-proteic antigen through phage display in order to improve serological assays. In this investigation, a random heptapetide conformational library was selected to obtain specific ligands to the monoclonal antibody anti-PGL-1 CS-48. After three rounds of selection, 14 clones were sequenced and translated, generating six distinct peptides. The mimotope HWMLPED was the most frequent one (57%), suggesting an immunodominance. Serological tests with this mimotope were performed in comparison to the synthetic PGL-1 for 39 patients, classified according to their clinical form, together with their 44 household contacts, classified according to their index cases. Results were similar for T and LL patients. However, the intermediate forms were variable, differently from those results with PGL-1, which presented positivity only for multibacillary patients. The clinical form BT presented a seropositivity of 55.5% for the mimotope against 0% for the PGL-1, probably due the greater avidity of the mimotope to circulating antibodies, or due to the greater spepcificity of the peptide in detecting pure neural reaction, or yet a cross reaction with other human antibodies. The serological tests of household contacts for this same phage clone presented an average positivity of 20.5% versus an average of 7.5 for the PGL-1 antigen. It is probable that there was cross reaction of the mimotope with other antibodies; once it presented partial identity with other M. leprae proteins. The mimotopes must be further investigated, once they may be putative targets for the PGL-1 action in the immune humoral response, and also they could be useful in diagnostics and therapeutic strategies. / CAPITULO I: A hanseníase apresenta um espectro clínico que varia de uma forte resposta imune mediada por células e controle do crescimento do bacilo Mycobacterium leprae no pólo tuberculóide (T), a uma anergia em resposta celular, com alta carga bacteriana, no pólo virchoviano (V). A caracterização do perfil antigênico do bacilo nas formas clínicas se faz necessária para que novos peptídeos recombinantes, mimotopos de antígenos de M. leprae, sejam avaliados quanto ao seu potencial imunogênico, para que se tenha um melhor entendimento dos mecanismos de evolução da doença, e para permitir o aprimoramento do diagnóstico, prognóstico e terapêutica. Mimotopos de antígenos de M. leprae foram selecionados a partir de uma biblioteca conformacional de heptapeptídeos randômicos expressos em fusão com proteína pIII de fagos M13, utilizando como alvo ligante IgM total purificada de pacientes portadores de hanseníase de ambos os pólos, tuberculóide e virchoviano, e de contatos intradomiciliares sadios. Os peptídeos recombinantes foram selecionados por eluição em tampão glicina (inespecífico) e por eluição com mitsudina (específico). Todos os clones, após análises de bioinformática, foram validados por ensaios imunoenzimáticos e alguns por ensaios de redução de colônias. Na eluição com glicina, o pólo tuberculóide apresentou 24 fagótopos distintos, enquanto que o virchoviano apresentou 14. Já na eluição com mitsudina, foram obtidos apenas 4 fagótopos para pólo virchoviano e 8 para o pólo tuberculóide. Os dois mimotopos mais freqüentes, em ambas as formas clínicas e para as duas eluições foram coincidentes, sendo que os peptídeos LFPAMHQ e VERHPST foram os mais freqüentes no pólo virchoviano e os peptídeos KNPTTGT e ETHPTTR os mais freqüentes no pólo tuberculóide. Os três primeiros peptídeos, dos quatro acima citados, tiveram redução de colônias mais acentuada com soro de pacientes V, e o mimotopo ETHPTTR foi o que apresentou a maior redução com soro de pacientes T. O potencial imunogênico destes mimotopos pode ser útil no desenvolvimento de novas estratégias diagnósticas e terapêuticas para o controle da hanseníase. CAPITULO II: O Glicolipídeo Fenólico-1 (PGL-1) é um antígeno de membrana altamente específico de M. leprae, não sendo encontrado em outras micobactérias. Os testes sorológicos com o PGL-1 têm sido implementados para a detecção de anticorpos circulantes nas formas clínicas multibacilares. Por ser um alvo importante na classificação clínica dos pacientes, procurou-se desenvolver peptídicos miméticos deste antígeno não-protéico por phage display, como forma de aprimorar o teste sorológico. Neste estudo uma biblioteca conformacional de heptapeptídeos randômicos foi selecionada para obtenção de ligantes específicos ao anticorpo monoclonal anti-PGL-1 CS-48. Após 3 ciclos de seleção, 13 clones foram seqüenciados e traduzidos, gerando seis mimotopos distintos. O mimotopo HWMLPED foi o mais freqüente (61,5%), indicando ser imundominante entre os peptídeos. Testes sorológicos com este mimotopo foram realizados em comparação com o PGL-1 sintético para 37 pacientes, classificados conforme a forma clínica, juntamente com seus 44 contatos, classificados conforme seus casos índice. Os resultados obtidos com o mimotopo e PGL-1 foram similares nos pacientes com as formas clínicas polares T e V. Contudo, as formas intermediárias dimorfas foram altamente variáveis e significantes, diferentemente do PGL-1, que apresentou positividade somente para as formas multibacilares. A forma clínica DT, apresentou 55,5% de positividade com a utilização do fagótopo, contra 0% para o PGL-1, podendo ser uma maior avidez do fagótopo ao anticorpo circulante, ou maior especificidade do fagótopo para lesão neural pura, como também reação cruzada com outros anticorpos. O teste sorológico em contatos intradomiciliares para o fagótopo selecionado, apresentou uma média de 20,5% de positividade contra uma média de 7,5% no teste sorológico para o PGL-1. É provável que tenha ocorrido reação cruzada do mimotopo por este apresentar identidade parcial com proteínas do M. leprae. Os mimotopos devem ser analisados mais profundamente, pois podem indicar provável alvo de ação do PGL-1 na resposta imune humoral e ainda podem ser usados em estratégias diagnósticas e terapêuticas. / Doutor em Genética e Bioquímica

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Loanda Carvalho S Limongi.pdf: 1004813 bytes, checksum: 09f423fef50cc45223e734df788a0c39 (MD5) Previous issue date: 2009-12-18 / Pleural tuberculosis (TBP) has often spontaneous resolution, even without treatment. However, the lack of proper diagnosis and treatment can lead to the occurrence of pulmonary and/or extra-pulmonary tuberculosis in 65% of the cases, in the five years subsequent. The objective of this study was to evaluate the effectiveness of the recombinant Hsp-X antigen (rHsp-X) in an enzyme immunoassay for determining the presence of TBP in patients with pleural effusion. For this study we used 132 samples of serum and pleural fluid (PF) from patients with pleural effusion. Of these, 97 samples were from TBP patients and 35 patients with diseases other than tuberculosis (NTBP) (28 patients with metastatic cancer, 1 patient with congestive heart failure, 2 patients whit liver failure, 1 patient with systemic lupus erythematosus and 3 patients with parapneumonic effusion). The IgM levels of PF were higher in patients with PTB than NTBP, the sensitivity and specificity of the ELISA for the PF was 42% and 83%, respectively. Testing for IgG from the serum and the PF against the recombinant antigen Hsp-X were not effective in discriminating TB patients from other diseases, the sensitivity was found to be 13% and 16% using serum and LP, respectively, with the same specificity of 83%. TBP patients presented higher levels of IgA specific for the rHSP-X than NTBP, the IgA ELISA using PF presented better sensitivity (65%) than using serum (39%), while the IgA ELISA for both types of samples presented the same specificity (83%). In conclusion, the recognition of Mycobacterium tuberculosis rHsp-X by IgA antibodies from the PF of patients with TBP reveals its possible role in the development of a diagnostic test for additional cases of TBP. Further studies must be conducted to confirm this hypothesis. / A tuberculose pleural (TBP) frequentemente tem resolução espontânea, mesmo sem tratamento. No entanto, a ausência de diagnóstico e tratamento pode levar, nos cinco anos subseqüentes, à ocorrência de tuberculose pulmonar e/ ou extrapulmonar em 65% dos casos. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da utilização do antígeno Hsp-X em um ensaio imunoenzimático para determinação da presença de TBP em indivíduos com derrame pleural. Para o estudo foram utilizadas 132 amostras de soro e líquido pleural (LP) de pacientes com derrame pleural. Destas, 97 amostras eram de pacientes TBP e 35 de pacientes com outras doenças não tuberculosas (NTBP) (28 pacientes por câncer metastático, 1 pacientes por insuficiência cardíaca congestiva, 2 paciente por insuficiência hepática, 1 paciente por lúpus eritematoso sistêmico e 3 pacientes por derrames parapneumônicos). Os níveis de IgM do LP foram mais elevados nos pacientes com TBP do que os NTBP, a sensibilidade do ELISA para do LP de 42%, para a especificidade de 83%. Os ensaios para pesquisa de IgG, do soro e do LP, contra o antígeno Hsp-X não foram eficazes em discriminar pacientes com TBP de outras doenças, a sensibilidade encontrada foi de 13% e 16%, utilizando o soro e o LP, respectivamente, para a mesma especificidade de 83%. A densidade óptica dos ensaios para pesquisa de IgA, específicos para o antígeno rHsp-X, foi mais elevada nos pacientes TBP do que os NTBP, o ELISA com a IgA do LP foi melhor que o ELISA do soro, a sensibilidade foi de 65% e 39%, respectivamente, para a mesma especificidade de 83%. Concluímos que o reconhecimento de Hsp-X recombinante de Mycobacterium tuberculosis pelos anticorpos IgA do LP de pacientes com TBP indicam que esse antígeno poderá ser utilizado para o desenvolvimento de um teste de diagnóstico complementar para casos de TBP. Estudos adicionais precisam ser realizados para confirmar tal hipótese.