ROCHA, Flávio Barbosa Moreira da. Evolução e perfil dos anticorpos antiespermatozóides nos primeiros 180 dias em indivíduos vasectomizados. 2005. 115 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-21T12:05:10Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_fbmrocha.pdf: 1791042 bytes, checksum: 5ef01c9679a59e312c28d8e14a2a766b (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-01T16:12:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_fbmrocha.pdf: 1791042 bytes, checksum: 5ef01c9679a59e312c28d8e14a2a766b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-01T16:12:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_fbmrocha.pdf: 1791042 bytes, checksum: 5ef01c9679a59e312c28d8e14a2a766b (MD5) Previous issue date: 2005 / The contraceptive method of vasectomy can be reversed, in certain circumstances, through surgical procedures; but the incidence of autoimmune antisperm humoral responses in some vasectomized individuals may impede attempts to restore fertility. In this context, investigations on the incidence and evolution of autoimmune responses in vasectomized individuals may contribute for the understanding of autoimmune infertility associated with vasectomy, as also for the assessment of viability of restorative surgeries for fertility. Twenty individuals who have requested voluntary vasectomy for contraception, most referred by the Assis Chateaubriand School of Maternity of the Federal University of Ceará, were selected for the study. Surgical vasectomy was performed by the author, in the Ambulatory ward of the Faculty of Medicine. Blood and semen samples were collected from the individuals prior to, and 30, 90 and 180 days after vasectomy. Antisperm IgG and IgA were evaluated in the Center for Assisted Reproduction of Ceará (CONCEPTUS), by “Immunobead” technique (IBT), using the direct method for the detection of antibodies in pre-vasectomy seminal samples, and the indirect IBT for evaluation of antibodies in semen samples after vasectomy, and for sera. Antibody presence was measured as >0% (all positive results) and ≥ 20% of spermatozoa bound to antibodies. The parameters studied were: i) comparative evaluations of the incidences of IgG and/or IgA in serum and/or semen; ii) evolution of the titers of these antibodies with time; and iii) the sites of binding of the antibodies in the spermatozoa of volunteers. All the pre-vasectomy serum and semen samples were devoid of antisperm antibodies; however, IgG and/or IgA were present in post-vasectomy serum and semen samples in a majority of individuals, in increasing numbers from 30 to 180 days. The simultaneous presence of IgG and IgA was always predominant. At >0% positivity, 25% of the individuals were positive in 30 days, with IgG or IgA individually present in very few. In 90 days, 60% of the vasectomized were positive, rising to 85% in 180 days. No positive reactivity was detected for ≥ 20%. Evaluation of antibodies in serum individually showed that positive results at ≥ 20% increased from one (30 days) to three in 90days, and to four in 180 days. In semen, this positivity was not detected. The evaluation of antibody titers (% of spermatozoa bound to antibodies) revealed increase of IgG and IgA with time both in serum and semen, with the former always ahead of IgA, and reaching mean values at 180 days of 7,9% (median – 5%) and 6,35% (4,5%); respectively for IgG and IgA. The midpiece and the tail of spermatozoa were the principal binding sites, in that order, for both IgG and IgA. These results show that up to 85% of individuals develop antisperm antibodies in 180 days after vasectomy, with a steadily increasing level of positivity reaching ≥ 20% in some; which may potentially compromise efforts to restore fertility in them. / A vasectomia, como método de contracepção, poderá ser revertida em situações especiais, através dos procedimentos cirúrgicos; porém, o desenvolvimento de respostas humorais auto-imunes pós-vasectomia, em alguns, poderá ser um impeditivo para restaurar a fertilidade. Neste contexto, investigações sobre a incidência e evolução das respostas auto-imunes em vasectomizados poderão oferecer subsídios, tanto para a compreensão da infertilidade auto-imune associada à vasectomia, quanto para avaliação do sucesso nos esforços para restauração da fertilidade nestes indivíduos. Foram selecionados 20 voluntários com desejo manifesto de se submeterem à vasectomia; encaminhados, na sua maioria, pela Maternidade Escola Assis Chateaubriand. As vasectomias foram realizadas pelo autor da pesquisa, no Ambulatório de Cirurgia da Faculdade de Medicina. Amostras de sangue e sêmen foram colhidas antes e 30, 90 e 180 dias após a vasectomia, e a presença das IgG e IgA, avaliada no Centro de Reprodução Assistida do Ceará (CONCEPTUS), através do Imunobead Test (IBT), com o método direto para amostras pré-cirúrgicas de sêmen e o método indireto para as amostras seminais posteriores e as de soro. Os anticorpos foram detectados nos soro e/ou sêmen, nas positividades de >0% (todas as reações positivas) e ≥ 20% de espermatozóides ligados às imunoglobulinas. Foram estudadas: i) avaliações comparativas das incidências das IgG e/ou IgA , ii) evoluções dos títulos dos anticorpos em função do tempo, e iii) análises dos sítios de ligação dos anticorpos nos espermatozóides de voluntários. Nenhuma das amostras pré-vasectomia revelou presença de anticorpos antiespermatozóides; porém IgG e IGA estavam presentes no soro e sêmen simultaneamente nas amostras pós-vasectomia da maioria dos indivíduos, revelando crescimento progressivo de 30 até 180 dias. A presença conjunta dos anticorpos sempre se mostrou predominante. Na positividade de >0%, 25% dos vasectomizados eram positivos em 30 dias, com IgG ou IgA presentes, individualmente, em poucos. Em 90 dias, 60% dos vasectomizados revelou presença dos anticorpos, o que aumentou para 85% em 180 dias. A positividade de ≥ 20% não foi encontrada em nenhum dos indivíduos. Em exames de soro, isoladamente, a positividade de ≥ 20% aumentou de um indivíduo em 30 dias, para três em 90 dias, e para quatro (25%) em 180 dias. No sêmen, esta positividade não foi detectada em nenhum indivíduo. Avaliações dos títulos de anticorpos (% de espermatozóides ligados aos anticorpos), revelaram que as IgG e IgA aumentaram progressivamente com tempo, tanto no soro quanto no sêmen, com a IgG sempre na dianteira; atingindo, aos 180 dias, os valores médios de 7,90% (mediana – 5%) e 6,35% (mediana - 4,50%); respectivamente para IgG e IgA. A peça intermediária (PI) e cauda do espermatozóide, nesta ordem, foram os principais sítios de ligação das IgG e IgA. Esses resultados mostram que um número significativo de até 85% dos vasectomizados desenvolve as IgG e IgA antiespermatozóides nos primeiros 180 dias; com a positividade crescente que alcança ≥ 20% em alguns; o que poderá, em tese, comprometer as tentativas futuras de restauração da fertilidade nestes indivíduos.

CORREIA NETO, Cornevile. Produção e purificação parcial de IgY anti-lectina de sementes de Canavalia brasiliensis (ConBr) (Leguminosae) em galinhas poedeiras. 2015. 72 f. Dissertação (mestrado em biotecnologia de recursos naturais)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-03-31T18:35:56Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccorreianeto.pdf: 1670684 bytes, checksum: 825c0b40271bc72b068773e82944d3c8 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-18T20:14:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccorreianeto.pdf: 1670684 bytes, checksum: 825c0b40271bc72b068773e82944d3c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-18T20:14:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccorreianeto.pdf: 1670684 bytes, checksum: 825c0b40271bc72b068773e82944d3c8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Lectins are a group of proteins present in various living organisms, particularly in plants and especially in Leguminosae seeds. Among this family, a species that stands out for having large amount of lectin in the seed is the Canavalia brasiliensis. One approach for the investigation of lectins on biological systems is the detection there of by techniques involving antibody. Such techniques may include from classical immunochemical assays (immunodiffusion, immunoelectrophoresis and rocketimunoeletroforese) to ELISA experiments and advanced microscopy techniques. In this sense, antibodies become biotechnological tools invaluable since they are capable of specifically recognizing epitopes of the target molecules. Immunoglobulins (Igs) are proteins present in high concentration in the blood plasma of mammals. They are vectors of humoral immunity, with the primary function to join the foreign antigens to the individual so as to neutralize them. In the case of poultry the main immunoglobulin class (IgYs) can be found not only in blood, but also in egg yolk. This fact enables fast and efficient purification of these molecules facilitating its use as biotechnological inputs. Thus, this study aimed to produce antibodies against the lectin extracted from Canavalia brasiliensis seed (ConBr) (Fabaceae) in laying hens, implementing production methodology of new biotechnological inputs for the study of lectins. For this laying hens were immunized with 200 or 400μg of lectin Canavalia brasiliensis (ConBr) for 15 weeks at 10-day intervals. Collected eggs from vaccinated birds had their isolated and precipitated yolk in 0-30% fraction with ammonium sulfate for partial purificaçãoo of IgYs. Confirmation of the presence of antibodies was made by immunodiffusion assays agarose gel. The fraction showed 0-30%, from the first week after the immunization, capable of recognizing ConBr IgYs. This profile appeared in all groups over the 15-week experiment. The production of specific IgYs against the lectin from Canavalia brasiliensis (ConBr) proved feasible and remained throughout the experiment, possibly in reasonable quantities. In this sense, IgYs produced in this work provide a powerful biotechnological tool to be made available for future studies. / As lectinas constituem um grupo de proteínas presentes em diversos organismos vivos, sobretudo em vegetais e especialmente em sementes de Leguminosae. Dentre essa família, uma espécie que se destaca por possuir grande quantidade de lectina na semente é a Canavalia brasiliensis. Uma das possíveis abordagens para a investigação de lectinas em sistemas biológicos é a detecção das mesmas através de técnicas que envolvam anticorpos. Tais técnicas podem incluir desde ensaios clássicos de imunoquímica (imunodifusão, imunoeletroforese e rocketimunoeletroforese), até experimentos de ELISA e técnicas avançadas de microscopia. Neste sentido, os anticopos tornam-se ferramentas biotecnológicas de grande valia uma vez que são capazes de reconhecer especificamente epítopos das moléculas alvo. As imunoglobulinas (Igs) são proteínas presentes em grande concentração no plasma sanguíneo de mamíferos. São os vetores da imunidade humoral, tendo como função principal unir-se aos antígenos estranhos ao indivíduo, de modo a neutralizá-los. No caso das aves a principal classe de imunoglobulinas (IgYs) pode ser encontrada não somente no sangue mas também nas gemas dos ovos. Esse fato permite purificação rápida e eficiente dessas moléculas facilitando seu uso como insumos biotecnológicos. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo produzir anticorpos contra a lectina extraída da semente de Canavalia brasiliensis (ConBr) (Leguminosae) em galinhas poedeiras, implementando metodologia de produção de novos insumos biotecnológicos para o estudo de lectinas. Para tanto galinhas poedeiras foram imunizadas com 200 ou 400μg da lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) por 15 semanas em intervalos de 10 dias. Ovos coletados das aves imunizadas tiveram suas gemas isoladas e precipitadas na fração 0-30% com sulfato de amônio para a purificação parcial das IgYs. A confirmação da presença dos anticorpos foi feita por ensaios de imunodifusão em gel de agarose. A fração 0-30% apresentou, a partir da primeira semana após a imunização, as IgYs capazes de reconhecer ConBr. Esse perfil se apresentou em todos os grupos ao longo das 15 semanas de experimento. A produção das IgYs específicas contra a lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) se mostrou viável e permaneceu durante todo experimento, possivelmente em quantidades razoáveis. Neste sentido, as IgYs produzidas nesse trabalho constituem uma potente ferramenta biotecnológica a ser disponibilizada para estudos futuros.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-07-09T12:49:02Z No. of bitstreams: 1 2013_RosaHarumiUenishi.pdf: 1120421 bytes, checksum: bb01b2e61c9b89235a156e499bb5184b (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-07-09T13:46:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_RosaHarumiUenishi.pdf: 1120421 bytes, checksum: bb01b2e61c9b89235a156e499bb5184b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-09T13:46:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_RosaHarumiUenishi.pdf: 1120421 bytes, checksum: bb01b2e61c9b89235a156e499bb5184b (MD5) / CONTEXTO: A doença celíaca (DC) é uma enteropatia imunomediada do intestino delgado desencadeada por intolerância permanente ao glúten em indivíduos geneticamente predispostos pelos alelos do Antígeno Leucocitário Humano (HLA) classe II HLA-DQ2 e/ou HLA-DQ8, sendo o marcador sorológico para anticorpos da classe IgA Antiendomísio (IgA-EMA) utilizado para detecção e auxiliar na confirmação de novos casos de DC por ter especificidade e sensibilidade próximo a 100%, considerado como valor preditivo positivo (VPP). OBJETIVO: Determinar a taxa de incidência (TI) pessoa-período de soroconversão dos anticorpos IgA-EMA numa coorte de pacientes com alelos HLA predisponente pertencentes aos grupos de risco alto para desenvolvê-la, atendidos no Ambulatório de Doença Celíaca do Hospital Universitário de Brasília (AmbDC/HUB) em até 14 anos de acompanhamento (1998 até 2012). MÉTODO: 456 frequentadores do AmbDC/HUB com alelos HLA predisponente para a DC, os quais atendiam aos critérios de inclusão e exclusão estabelecidos no estudo, compuseram a coorte (245 masculino e 310 feminino; idade entre 2 a 85 anos, média de idade: 28,9±16,7) identificados nos dados cadastrais do Laboratório de Pesquisas em Pediatria e Centro de Estudos da Doença Celíaca (LabDC/FMUnB) convidados a repetirem o exame sorológico para a DC por apresentarem risco elevado de desenvolvê-la por: ser parente de 1º grau, ser portador de síndromes genéticas, de doenças autoimunes, de sintomas atípicos ou por ter fortes suspeitas clínicas, laboratorial, histológica. O teste imunoenzimático (ELISA) de pesquisa do anticorpo da classe IgA Antitransglutaminase (IgA-tTG) foi inicialmente utilizada para triagem dos pacientes. Aqueles com resultado positivo foram testados para o teste IgA-EMA. A soroconversão foi considerada em indivíduos com resultados positivo para IgA-EMA, na sequência foi solicitado exame complementar, biópsia endoscópica duodenal, para confirmar a enfermidade. RESULTADO: 197 portadores de alelos HLA predisponente (95 masculino e 102 feminino, idade entre 4 a 75 anos, média de idade: 29,9±16,8) participaram da pesquisa e encontrou-se 11 casos de soroconversão para os anticorpos IgA-EMA. A TI pessoa-período de soroconversão de anticorpos IgA-EMA em até 14 anos de acompanhamento encontrada no presente estudo foi, com 95% de confiança, 1,1 ± 0,2 caso de soroconversão por 100 pessoas-ano acompanhadas num período de observação de 1 a 14 anos, média de 4±3,7anos. CONCLUSÃO: A TI pessoa-período de soroconversão dos anticorpos IgA-EMA de 1,1 casos por 100 pessoas-ano sugere repetição esporádica de exames sorológicos entre pacientes portadores de alelos HLA predisponente para a DC pertencentes ao grupo de risco de desenvolvê-la. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / BACKGROUND: Celiac disease (CD) is an immune-mediated enteropathy of the small intestine triggered by permanent intolerance to gluten in genetically predisposed individuals by the alleles of the human leukocyte antigen (HLA) class II HLA-DQ2 and / or HLA-DQ8, and the serological marker for IgA antibodies Anti-endomysium (IgA-EMA) used for detection and confirmation of new cases of CD to have sensitivity and specificity close to 100% considered positive predictive value. OBJECTIVE: To determine the incidence rate person-period of seroconversion of IgA-EMA antibodies in a cohort of patients with HLA alleles predisposing in groups with high risk to develop it in the Outpatient Celiac Disease, University Hospital of Brasília (AmbDC/HUB) by up to 14 years follow-up (1998 to 2012). METHOD: 456 subjects from AmbDC/HUB with HLA alleles predisposing to CD, who met the inclusion and exclusion criteria estabilished in the study, comprised the cohort (245 male and 310 female, aged 2-85 years, mean age: 28,9 ± 16,7) identified in the registration data Laboratory for Research in Pediatrics and Center for Studies of Celiac Disease (LabDC/FMUnB) were asked to repeat the serologic test for DC for presenting high risk of developing it to be a 1st degree relative, be a carrier of genetic syndromes, autoimmune diseases, atypical symptoms or have strong suspicions clinical, laboratory, histological. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) search antibody of IgA anti-transglutaminase (IgA-tTG) was initially used to screen patients. Those testing positive were tested for IgA-EMA test. Seroconversion was seen in subjects with positive results for IgA-EMA, following further examination was requested like endoscopic duodenal biopsy to confirm the disease. RESULTS: 197 patients with HLA alleles predisposing (95 male and 102 female, aged 4-75 years, mean age: 29,9 ± 16,8) participated in the study and was found 11 cases of seroconvertion for IgA-EMA. IT person-time of seroconversion of IgA-EMA within 14 years of follow-up was found in this study, with 95% confidence interval, 1.1 ± 0.2 cases of seroconversion per 100 person-years accompanied by an observation period of 1 to 14 years, average 4 ± 3.7 years. CONCLUSION: The incidence rate of seroconversion of IgA-EMA of 1.1 cases per 100 person-years suggests repetition of sporadic serological tests among patients with HLA alleles predisposing to DC belonging to the risk group of developing it.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-30T15:15:38Z No. of bitstreams: 1 2009_LeonardoGuedes.pdf: 5624272 bytes, checksum: 75f7b4a1facc94065376aad00f058fb4 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T14:36:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_LeonardoGuedes.pdf: 5624272 bytes, checksum: 75f7b4a1facc94065376aad00f058fb4 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T14:36:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_LeonardoGuedes.pdf: 5624272 bytes, checksum: 75f7b4a1facc94065376aad00f058fb4 (MD5) Previous issue date: 2009 / As imunoglobulinas são moléculas com capacidade de ligação a uma grande diversidade de antígenos. Estudos de variabilidade mostram que três regiões em cada cadeia variável, leve (L) e pesada (H), apresentam um maior grau de variabilidade, sendo por isso denominadas Regiões Determinantes de Complementaridade (CDR). Dentre essas, a CDR3 de ambas cadeias (H e L) é a que apresenta maior variabilidade. O objetivo deste trabalho é estudar anticorpos com capacidade de reconhecimento de ácidos nucléicos. Análises em bancos de dados revelaram que dentre as diversas famílias de genes que codificam as cadeias variáveis pesadas de camundongos, a pequena família VH10 destaca-se por ter sido identificada principalmente em anticorpos anti-DNA. Essa observação nos levou a postular que determinantes estruturais codificados por segmentos da família VH10 poderiam estar envolvidos nesse reconhecimento. Assim, nesse trabalho, construíu-se bibliotecas de scFvs de camundongos apresentadas na superfície de fagos filamentosos, contendo CDRH3s variáveis, no contexto de segmentos gênicos germinais da família VH10 e da família VH4 (que não apresenta nenhum Ac descrito como ligante a ácidos nucléicos depositado em banco de dados). A abordagem experimental consistiu basicamente na comparação do grau de variabilidade das CDRH3s selecionadas pela capacidade de reconhecimento a DNA de fita simples utilizando-se o procedimento de seleção (biopanning) preconizado na técnica de Phage Display As bibliotecas apresentavam tamanhos na ordem de 107 diferentes scFvs. Elas eram selecionadas pela capacidade de ligação a oligodT - celulose e os títulos de entrada e de saída foram obtidos em três ciclos de seleção. Foram realizados imunoensaios com as partículas virais selecionadas dos ciclos 2 e 3, tanto para a detecção da expressão dos scFvs como também para a verificação da capacidade de reconhecimento ao antígeno (oligodT - biotinilado). Os resultados obtidos com a análise de clones aleatoriamente escolhidos do ciclo 2 e 3 revelaram 12 sequências de CDR3Hs associadas a ligação a ácidos nucléicos e dessas, 9 são provenientes da família VH10 e 3 da família VH4. As três sequências obtidas no contexto de VH4 também estão presentes no contexto VH10. Os resultados sugerem que scFvs no contexto da família VH10, podem apresentar uma maior variabilidade CDR3Hs para o reconhecimento de ácidos nucléicos do que aqueles que apresentam o segmento da famíliaVH4, corroborando a hipótese de que determinantes estruturais codificados pelo segmento gênico VH10 participam do processo de reconhecimento antigênico. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The immunoglobulins are molecules with the capacity to recognize a variety of antigens. Variability studies show that three regions in each variable chain, light (L) and heavy (H), have a greater degree of variability and is therefore called Complementarity Determinants Regions (CDR). Among these, the CDR3 of both chains (H and L) are the ones that show the greatest variabilities. The aim of this work is study the antibodies able to recognize nucleic acids. Analysis in databases revealed that among the different families that are gene that encode the murine variable heavy chains, the small VH10 family stands out in terms of such kind of antigen recognition. This observation led us to postulate that structural determinants encoded by the V segment of the VH10 family could be specially involved in this binding ability. Thus, we built two scFvs phage display libraries, containing variable CDRH3, in the context of germinal V gene from family VH10 and the family VH4 (which presents no antibody described as ligand to nucleic acid in databank). The experimental approach was basically the biopanning of phages from those two libraries, using oligo-dT celulose as ligand. After three selection rounds, phages from round 2 and 3 were analyzed in terms of CDR3H composition and the ability to bind to the antigen in immunoassays.The analysis of randomly selected clones revealed 12 sequences of CDR3Hs able to bind to nucleic acids. From these, 9 were from the VH10 family and 3 were VH4 phages. The three sequences obtained in the context of VH4 were also present in VH10 phages. The results suggested that VH10 scFvs may allow greater CDR3H variability than VH4 ones, corroborating the hypothesis that structural determinants encoded by the V gene segment from VH10 contributes significatively for the recognition of nucleic acids.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-07-21T18:42:43Z No. of bitstreams: 1 2009_MarlyDelNeroRocha.pdf: 1244527 bytes, checksum: 95338f7f38c1c6b9becccd665737ad73 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-07-24T02:25:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_MarlyDelNeroRocha.pdf: 1244527 bytes, checksum: 95338f7f38c1c6b9becccd665737ad73 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-24T02:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_MarlyDelNeroRocha.pdf: 1244527 bytes, checksum: 95338f7f38c1c6b9becccd665737ad73 (MD5) Previous issue date: 2009 / Dermatite atópica (DA) é uma doença inflamatória crônica, altamente pruriginosa, que comumente se apresenta durante a fase de lactente ou infância, podendo persistir ou iniciar-se na fase adulta. O prurido é o principal sintoma, sendo o ato de coçar responsável por grande parte das lesões da pele. Atualmente a atopia pode ser definida como uma predisposição geneticamente determinada a produzir imunoglobulina E (IgE) para alérgenos ambientais comuns. A IgE sérica total está elevada acima de 80% dos pacientes com DA, e os níveis de IgE geralmente correlacionam-se com a severidade da dermatite. O objetivo desta pesquisa foi correlacionar a gravidade do quadro clínico da DA e prurido com níveis séricos de IgE. O objetivo secundário foi correlacionar extensão do quadro clínico, intensidade do quadro clínico, perda de sono e eosinofilia relativa com níveis séricos de IgE; e eosinofilia relativa, prurido e perda de sono com gravidade do quadro clínico. Os pacientes portadores de dermatite atópica atendidos no Ambulatório de Dermatologia Pediátrica do Hospital Universitário de Brasília foram avaliados pelo SCORAD (Scoring of Atopic Dermatitis) para determinação da gravidade do quadro clínico. Foram realizados os exames laboratoriais de hemograma, dosagem de IgE sérica total e exame parasitológico de fezes. Os dados foram analisados no programa SPSS versão 15.0, e para testar a associação entre as variáveis utilizou-se o coeficiente de correlação de Spearman, o teste de Kruskal-Wallis e o teste U Mann-Whitney. Foi considerado significante um coeficiente de correlação de Spearman maior que 0,5. Foram avaliados setenta pacientes com DA, em um estudo de corte transversal. A média de idade foi de 6 anos, sendo 43 pacientes do sexo feminino (61,4%) e 27 do sexo masculino (38,6%). Pacientes do gênero masculino apresentaram médias dos níveis de IgE sérica mais elevadas do que os do gênero feminino (1310IU/ml e 893 IU/ml). A média de IgE sérica foi de 1054 IU/ml. A média de IgE sérica nos pacientes com dermatite atópica leve foi de 1051 IU/ml, DA moderada foi de 866 IU/ml e DA grave foi de 1608 IU/ml. Pacientes com quadros mais intensos de dermatite atópica apresentaram maior intensidade de prurido. Avaliando-se a gravidade do quadro clínico e os níveis séricos de IgE, não se encontrou correlação estatística significativa. Na avaliação do prurido com os níveis de IgE sérica também não se observou correlação estatística significativa. A extensão e a intensidade do quadro clínico, perda de sono e eosinofilia relativa não estavam correlacionados com níveis séricos de IgE. Prurido e perda de sono tem correlação estatisticamente significativa com a gravidade do quadro clínico da DA avaliada pelo SCORAD objetivo ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Atopic dermatitis (AD) is a chronically relapsing inflammatory disease. It is highly pruritic and usually occurs during in babies and early childhood and can continue or begin to occur in adulthood. The pruritus is the main symptom, and itching is responsible for most skin lesions. Atopic can be currently defined as a genetically determined predisposition to produce immunoglobulin E (IgE) to common environmental allergens. Total serum IgE is elevated above 80% in patients that have AD and IgE levels are generally correlated with the severity of the dermatitis. This research aimed to correlate the clinical severity of atopic dermatitis and pruritus with the serum IgE levels. Its secondary objective was to correlate the extension of clinical symptoms, their intensity, sleep loss, and relative eosinophilia with serum IgE levels and relative eosinophilia, pruritus and sleep loss with the severity of clinical symptoms. Atopic dermatitis patients seen in the Pediatric Dermatology Unit of the University of Brasília Hospital were assessed by SCORAD (Scoring of Atopic Dermatitis) in order for their clinical symptoms to be determined. Laboratory exams were realized hemogram, total serum IgE, and parasitological feces exam. Data obtained were analyzed on the SPSS Version 15.0 program. The Spearman’s Rank Correlation Coefficient, the Kruskal-Wallis test and the U Mann-Whitney test. A Spearman’s Rank Correlation Coefficient greater than 0.5 was considered to be significant. Seventy atopic dermatitis patients were assessed in a transversal cut study system. The average age was of 6 years, 43 (61.4%) of the patients were female and 27 (38.6%) were male. Male patients presented higher average levels of serum IgE than female patients (1310 IU/ml and 893 IU/ml). The average serum level of IgE was of 1054 IU/ml. In patients with low severity levels of atopic dermatitis was the average serum level of IgE of 1051 IU/ml, for patients with moderate severity levels the average was of 866 IU/ml and with high severity levels the average was of 1608 IU/ml. Patients with more intense symptoms of atopic dermatitis present a greater intensity of pruritus. Through the assessment of clinical symptoms and IgE serum levels, a significant statistic correlation was not found. A significant statistic correlation was also not found in the assessment of pruritus with IgE serum levels. There is a significant statistic correlation between pruritus and sleep loss with the severity of clinical symptoms of atopic dermatitis as per objective SCORAD scores.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-02-21T19:05:15Z No. of bitstreams: 1 2010_VictorEdgardTavaresSousa.pdf: 6750254 bytes, checksum: 6a576895b0bd5e79d81112167f62aa00 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-03-18T23:59:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_VictorEdgardTavaresSousa.pdf: 6750254 bytes, checksum: 6a576895b0bd5e79d81112167f62aa00 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-18T23:59:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_VictorEdgardTavaresSousa.pdf: 6750254 bytes, checksum: 6a576895b0bd5e79d81112167f62aa00 (MD5) / As imunoglobulinas são moléculas complexas de interesse biofarmacêutico que têm sido geralmente produzidas em células animais. Biorreatores alternativos, tais como leveduras também foram considerados, mas sua utilização é dificultada pelo dobramento ineficiente dos anticorpos e adição de cadeias de carboidratos. O objetivo deste trabalho foi produzir um vetor de expressão otimizado para produção de anticorpos completos e seus fragmentos bivalentes F(ab’)2 na levedura Pichia pastoris. Desenvolvemos um vetor de expressão de anticorpos em cadeia única que utiliza uma seqüência reconhecida pela protease KEX para o processamento das cadeias do anticorpo. Usamos este vetor de expressão para inserir um fragmento gênico de uma cadeia variável humanizada anti-CD3, desenhada de forma a otimizar o uso de códons e seu conteúdo GC. Os plasmídeos resultantes foram introduzidos na levedura metilotrófica Pichia pastoris, linhagem GS115, e cultivado em meio BMMY. A melhor indução foi obtida com metanol 2%. O fragmento de anticorpo mantém sua capacidade de reconhecimento ao antígeno recombinante CD3 produzido em E. coli. Análises por SDS-PAGE e Western Blot indicam degradação das construções recombinantes de anticorpos completos. Para verificar atividade biológica das imunoglobulinas recombinantes, também desenvolvemos um peptídeo recombinante CD3 de cadeia única, contendo cadeias gama e epsilon do antígeno CD3. O antígeno foi expresso na forma de corpúsculo de inclusão em Escherichia coli BL21 pLysE. A associação do antígeno-anticorpo foi verificada por meio de ELISA. Portanto, foi descrito um vetor de expressão em P. pastoris eficiente para a expressão de fragmentos F(ab’)2 com capacidade de ligação ao antígeno CD3. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Antibody is a complex biopharmaceutical that has been usually produced in animal cell. Alternative bioreactors such as yeasts have also been considered, but its use is hampered by the inefficient antibody folding and carbohydrate addition. The aim of this work is to produce an optimized expression vector for complete antibodies and its divalent Fab antibody fragment production. We developed a single-chain F(ab’)2 expression vector that codes for a KEX cleavage site, used to process antibody's chains. We used this expression vector to insert a humanized anti-CD3 variable region gene fragment, optimally designed for codon usage and GC content. The resulting plasmid was introduced in the methylotrophic yeast Pichia pastoris strain GS115 and it was grown in BMMY media. Improved induction was achieved using 2% methanol. The antibody fragment appears to maintain its affinity to the antigen site CD3. This suggests that it harbors correctly processed heavy and light chains. SDS-PAGE and Western Blot analyses showed a degradation of the antibody complete form when compared to its fragment F(ab’)2. To check F(ab’)2 biological activity, we also developed a recombinant CD3 peptide, containing gamma and epsilon chain of CD3 antigen produced as a single chain molecule. The antigen was expressed as inclusion bodies in E. coli BL21 pLysE. The antibody-antigen association was observed by ELISA. Therefore, we had described an efficient F(ab`)2 expression vector for P. pastoris, successfully used for the production of a biologically active anti-CD3 antibody F(ab`)2.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Débora Amorim Romcy Pereira (deboraromcy@bce.unb.br) on 2011-06-21T14:46:30Z No. of bitstreams: 1 2010_PauloHenriqueDeFrancoAlcantara.pdf: 1343956 bytes, checksum: b896748355ffd9fb18333e0a2c3b538f (MD5) / Approved for entry into archive by Eveline Gonçalves(eveline@bce.unb.br) on 2011-06-21T15:07:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_PauloHenriqueDeFrancoAlcantara.pdf: 1343956 bytes, checksum: b896748355ffd9fb18333e0a2c3b538f (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-21T15:07:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_PauloHenriqueDeFrancoAlcantara.pdf: 1343956 bytes, checksum: b896748355ffd9fb18333e0a2c3b538f (MD5) / Nos últimos anos o grupo de Imunologia Molecular da Universidade de Brasília tem humanizado anticorpos de interesse clínico visando a sua aplicação terapêutica. A produção de proteínas terapêuticas como essas é de grande interesse para a indústria biofarmacêutica. Com intuito de produzir glicoproteínas estáveis, têm-se utilizado células de mamíferos como sistema de expressão heteróloga, pois estas possuem uma maquinaria pós-transcricional necessária para estabilizar biomoléculas complexas. No entanto, a produção de tais moléculas é geralmente dificultada pela imprevisibilidade e instabilidade da expressão ao longo do tempo. Isso se deve à alta probabilidade de silenciamento dos transgenes ao serem integrados na cromatina das células de mamíferos. Uma das alternativas para contornar esse problema é o melhoramento de vetores de expressão com o emprego de pequenos elementos de DNA (menores que 2100 pares de bases) que atuam como anti-repressores. No presente trabalho foram isolados quatro elementos de DNA humanos semelhantes às sequências dos elementos anti-repressores 35 e 40 identificados por Kwaks e colaboradores em 2003. Um elemento semelhante ao anti-repressor 35 e outro semelhante ao anti-repressor 40 foram clonados no vetor de expressão em células de mamíferos pMIRES anti-CD3 FvFc humanizado (Silva et al., 2009). O elemento anti-repressor 35 apresentou vários alinhamentos no cromossomo 7 humano. Já o elemento 40 pôde ser alinhado com diversas regiões de vários cromossomos, destacando-se os alinhamentos nos cromossomos 14 e 22. Esses elementos de DNA são sequências repetitivas presentes ao longo do genoma humano. Além disso, substituiu-se o promotor de citomegalovírus (CMV) deste mesmo vetor por um promotor CMV otimizado contendo a sequência do intron A (IA). As novas construções de vetores foram transfectadas em células de ovário de hamster chinês (CHO) e clones estáveis foram isolados para posterior caracterização da produção de anticorpos. Devido a sua similaridade com sequências anti-repressoras e o seu predomínio em regiões subcentroméricas, sugere-se que os elementos de DNA isolados sejam importantes na modulação da cromatina exercendo atividade anti-repressora. Outra hipótese é que, devido ao fato de serem elementos repetitivos no genoma humano, tais elementos podem ter sua origem em regiões altamente transcritas de retrotransposons. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Recently, the Molecular Immunology group of Universidade de Brasília has humanized clinical antibodies aiming their therapeutic applications. These therapeutic proteins production is of great interest to the biopharmaceutical industry. In order to produce stable glycoproteins, mammalian cells have been used as heterologous expression system since they possess post-translational machinery to stabilize those complex biomolecules. However, the production of such molecules is often hampered down by the unpredictability and instability of expression over time. This is due to the high probability of silencing of transgenes integrated into the chromatin of mammalian cells. One way to overcome this problem is the use of small elements of DNA (less than 2100 base pairs) that act as anti-repressors. In this work we have isolated four DNA human elements similar to the anti-repressors 35 and 40 sequences identified by Kwaks and collaborators in 2003. An element similar to the anti-repressor 35 and other similar to the anti-repressor 40 were cloned into the expression vector for mammalian cells pMIRES humanized anti-CD3 FvFc (Silva et al., 2009). The anti-repressor element 35 presented several alignments on human chromosome 7. Moreover, the element 40 was aligned with different regions on several chromosomes, particularly on chromosomes 14 and 22. These DNA elements are repetitive sequences present throughout the human genome. Additionally, we substituted the vector cytomagalovirus (CMV) promoter by the optimized CMV promoter containing the intron A (IA) sequence. These new vectors constructions were transfected into Chinese hamster ovary cells (CHO) and stable clones were isolated to acccess the antibody production. Due to its similarity to anti-repressor sequences and its prevalence in sub centromeric regions, it is suggested that the isolated DNA elements are important in the chromatin modulation by exerting anti-repressor activity. Another hypothesis is that, due to the fact that they are repetitive elements in the human genome, these elements may have their origin in retrotransposon’s highly transcribed regions.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-01-13T11:52:09Z No. of bitstreams: 1 2013_HerdsonRenneydeSousa.pdf: 2689685 bytes, checksum: 872d1a2ad8abc84c2d12fe88886b1e2c (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-01-13T14:43:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_HerdsonRenneydeSousa.pdf: 2689685 bytes, checksum: 872d1a2ad8abc84c2d12fe88886b1e2c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-13T14:43:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_HerdsonRenneydeSousa.pdf: 2689685 bytes, checksum: 872d1a2ad8abc84c2d12fe88886b1e2c (MD5) / Introdução: o grupo de Imunologia Molecular/UnB já produziu anticorpos recombinantes e humanizados de interesse comercial como o anti-CD18, anti-CD3, ou acadêmico como o anti-Z22,assim como fatores plasmáticos humanos. Os vetores de expressão utilizados contêm o promotor de CMV-IA. O objetivo desse trabalho foi explorar regiões formadoras de Z-DNA, e testar diretamente o papel do anticorpo estabilizador de Z-DNA (antiZ22NLS - Z22) no efeito transcricional do promotor CMV modificado (zCMV-IA). Material e Métodos: O primeiro passo foi reconstruir o cassete de expressão dos vetores tradicionais utilizados nesse trabalho, pCO e pCO?600. Para isso, fusionamos o gene GFP ao anticorpo recombinante aCD3. Os passos seguintes foram a introdução de sequências formadoras de Z-DNA (Z1, Z3 e Z4) e controles não formadores de Z-DNA (Z2 e Z5) a montante do promotor CMV-IA. Resultados e Discussão: foram construídos 10 vetores de expressão: 5 construções pCO (pZ1, pZ2, pZ3, pZ4 e pZ5) e 5 construções pCO?600 (?Z1, ?Z2, ?Z3, ?Z4 e ?Z5); transfecção de células CHO-K1 com as construções utilizando Lipofectamina LTX na proporção 1:1 de DNA e reagente LTX; Por fim co-transfecção de células com cada vetor de expressão e vetor pMacZ22NLS e como controle de cada vetor de expressão também foi feita transfecção com vetor pMac vazio. Em comparação aos controles em todas as construções a presença do pMacZ22 NLS aumentou a eficiência de transfecção. Através de citometria de fluxo se verificou aumento da MFI no gate das células GFP+ em até 25 % quando foi co-transfectado vetor com anti-Z-DNA. Conclusão: foi mostrado o papel de anti Z22 como indutor e estabilizador de Z-DNA e seu efeito facilitador da transcrição. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: Recombinant antibodies are now a reality in therapeutics. But its production is still a challenging issue. We have been developing expression vectors for heterologous expression of recombinant antibodies based on the CMV promotor. We had previously shown that a Z-DNA forming region upstream the promotor/enhancer enhances luciferase expression in a repórter vector. The aim of this study was to explore Z-DNA forming regions, and directly test the role of a Z-DNA stabilizing antibody on a modified CMV promoter (zCMV). Material and Methods: Initially, the GFP gene was fused with a recombinant antibody anti-CD3 and the fusion cassette was introduced in both pCO and pCO?6OO. Then we introduced the Z-DNA forming sequences (Z1, Z3 and Z4) and control sequences (Z2 and Z5) upstream of the CMV promoter. CHO cells were transfected using Lipofectamine LTX 1:1, DNA and LTX reagent. To provide the trans acting anti-Z-DNA antibody, we cotransfect cells with the vector pMACZ22NLS, that produces a scFv of the anti-Z-DNA mAb Z22 fused to a nuclear localization signal (Intrabody). Flow cytometry was use to follow GFP expression. Results and Discussion: 10 expression vectors were constructed: 5 pCO constructs (pZ1, pZ2, pZ3, pZ4 and pZ5) and 5 pCO?600 constructs (AZ1, AZ2, AZ3, AZ4 and AZ5); The constructions with Z-DNA forming sequences showed an improvement of expression of the reporter gene when compared to the control sequences. Moreover the co-transfection with the anti-Z-DNA vector enhances the MFI of gated GFP+ cells by 25%. Conclusion: The Z-DNA forming sequences improve heterologous gene expression and the presence of anti-Z-DNA in trans was shown to enhance the Z-DNA effect probably due to a stabilization effect.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-07T21:00:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Renata Mendes Batista de Oliveira.pdf: 13269360 bytes, checksum: f4d6a704989eec28f454bbe580dc3903 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-15T21:20:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Renata Mendes Batista de Oliveira.pdf: 13269360 bytes, checksum: f4d6a704989eec28f454bbe580dc3903 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:20:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Renata Mendes Batista de Oliveira.pdf: 13269360 bytes, checksum: f4d6a704989eec28f454bbe580dc3903 (MD5) Previous issue date: 2012-05-02 / CNPq / A dengue é a mais importante arbovirose que afeta o homem, constituindo um sério problema de saúde pública. O vírus causador pertence à família Flaviviridae, e são conhecidos quatro sorotipos (DENV 1-4), não oferecendo proteção cruzada entre si. As manifestações clínicas decorrentes da infecção por qualquer um dos sorotipos virais vão desde um quadro assintomático a um quadro mais grave da doença, denominado febre hemorrágica da dengue (FHD). Atualmente, quase metade da população mundial vive em áreas de risco da doença e, apesar de sua extensão e gravidade, vacinas ou tratamentos específicos ainda não estão disponíveis. A neutralização do vírus da dengue por um anticorpo específico consiste em uma importante ferramenta terapêutica. No presente trabalho, descrevemos, pela primeira vez, a produção de uma solução de imunoglobulina específica para o vírus da dengue (IgG anti-DENV), produzida a partir do plasma de doadores brasileiros. Esta preparação foi bioquimicamente caracterizada e os sorotipos de DENV quantificados por testes de neutralização. Também foram realizados ensaios pré-clínico, frente a animais infectados com o sorotipo DENV-3. Os resultados iniciais revelaram exacerbação da resposta à infecção, aumento da letalidade e aumento da carga viral, nos animais tratados com IGIV específica. Entretanto estes são resultados preliminares os quais serão investigados a hipótese de sua ocorrência, e a realização de novos testes com outros parâmetros terapêuticos, utilizando IgG anti- DENV em outras concentrações. / Dengue is the most importante arbovirus que infects human beings, and represents an important health problem. Dengue belongs to the Flaviviridae family, having four virus serotypes are known (DENV 1-4), which there is no crossed protection to each other virus serotype. Clinical signs of Dengue infection due to any of these virus serotypes can result to asymptomatic disease until the most severe infection, which is Dengue hemorrhagic fever (DHF). Despite the importance of Dengue infection to the health care, nowadays there no vaccines or specific nowadays. Virus neutralization by specific human antibody constitutes a reliable therapy. In light of this, we described here, for the first time, the production of human immunoglobulins specifics in neutralizing Dengue virus (IgG anti-DENV), purified from Brazilian blood-donations. These IgG were biochemically and biophysically characterized and the overall ratio of IgG serotypes (DENV) were estimated using a neutralizing virus screening in vitro. Once these IgG were characterized, we tested this material in mice infected by DENV-3 serotype. Although preliminary, the administration of IgG anti-DENV impaired mouse immune response, resulting in high virus titles and decreasing animal survive. However these are preliminary results which will investigate the possibility of its occurrence, and further testing with other therapeutic parameters, using anti-DENV IgG in other concentrations.

Orientador: Mary Luci Souza Queiroz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T22:52:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silveira_JosianePerin_M.pdf: 2900540 bytes, checksum: 55f0f2037f67a65e1cc1726ba61582d8 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Este trabalho faz parte de um projeto maior intitulado "Projeto Integrado de Estudo da Hemotoxidade do Benzeno e Pesticidas", um estudo multidisciplinar que visa uma avaliação sistêmica de funcionários e ex-funcionários das Empresas Químicas e Siderúrgicas de Cubatão, São Paulo, Brasil. Estudamos um grupo de trabalhadores expostos aos compostos organoclorados. Avaliamos a imunidade inespecífica através da atividade fagocitária e lítica de neutrófilos e a imunidade humoral através dos níveis séricos das imunoglobulinas. A função hepática e a dosagem dos níveis sangüíneos de hexaclorobenzeno (HCB) foram realizadas por um outro grupo dentro deste projeto. Todos os indivíduos avaliados apresentaram níveis detectáveis de HCB no sangue, sendo que este foi utilizado como o indicador biológico de exposição. Nossos resultados demonstraram redução significativa na atividade lítica de neutrófilos frente aos antígenos Candida albicans e Candida pseudotropicalis. Este fato pode estar relacionado a um desequilíbrio nos mecanismos anti-oxidantes da célula provocada pelos compostos organoclorados, levando a uma condição tóxica e conseqüente redução na atividade funcional da mesma. Observamos também, um aumento nos níveis séricos de IgG e IgM que foi associada com a alteração hepática destes trabalhadores. Estes resultados indicaram que o estudo da função lítica de neutrófilos e os níveis séricos das imunoglobulinas, constituem indicadores sensíveis de efeitos tóxicos dos compostos organoclorados na população exposta / Abstract: This work is part of a larger project intitled "Integrated Project for the Study of the Hematotoxicity of Benzene and Pesticides", which is a multidisciplinary study for the systemic evaluation of workers and ex-workers of the Empresa Química de Cubatão, São Paulo, Brazil. We have studied in a group of workers exposed to chlorinated compounds the inespecific immune response, as measured by the evaluation of the engulfment and killing capabilities of the neutrophils, and humoral immune response, as measured by the levels of immunoglobulins in serumo Hepatic function and the blood levels of hexachlorobenzene (HCB), which was chosen as a biological indicator of exposure, were determinated by other scientists in the group. Ali the workers studied had detectable levels of HCB in the blood. Our results demonstrated a significant reduction in the litic activity of the neutrophils in the presence of both antigens, Candida albicaons and Candida pseudotropicalis. These findings might be related to a derangement in the qntioxidant mechanisms of the cell caused by the chlorinated compounds. This would lead to a toxic condition with consequent reduction. in the functional activity of the cell. The have also observed an increase in the levels of IgG and IgM in the serum, which was associated with the changes in hepatic function observed in these workers. The results indicate that the study of the litic function of the cell and the serum levels of immunoglobulins provide a sensitive functional indicator of the toxic effects of chlorinated compounds in exposed populations / Mestrado / Mestre em Farmacologia