A bronquite infecciosa é uma doença viral, aguda e altamente contagiosa que afeta as aves da espécie Gallus gallus, de todas as idades, causando grandes perdas econômicas devido à mortalidade, queda na produção e qualidade dos ovos. Variações na sequência de aminoácidos na região hipervariável da subunidadade S1 da proteína de espícula (S) levam à emergência de novos sorotipos do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV). Este estudo teve como objetivo seqüenciar parcialmente o gene S1 para determinar a relação filogenética entre amostras vacinais e de campo com o intuito de investigar os genótipos circulantes. Cento e sessenta amostras foram coletadas, na forma de pools, de plantéis sintomáticos durante 2009/2010. Cada pool continha tecidos de 3 a 5 aves e foram compostos por diferentes órgãos (traquéia, pulmões, rins, conteúdo entérico, trato reprodutivo e swabs traqueais). As amostras foram triadas para a presença de IBV utilizando-se uma nested RT-PCR, direcionada a região 3UTR. As amostras positivas, (n=89) foram submetidas a nova nested RT-PCR dirigida para o gene S, resultando em 10 amplicons de 390pb que foram então submetidos a seqüenciamento de DNA e análise filogenética. As amostras brasileiras segregaram-se em dois grupos filogenéticos: Massachusetts (Mass) e tipos marcadamente brasileiros. Seis amostras agruparam-se no grupo Mass, com vacinas vivas atenuadas utilizadas no Brasil. Quatro amostras agruparam com cepas de campo brasileiras previamente descritas (acesso no GeneBank: FJ791257 to FJ791273). A identidade de aminoácidos no grupo Mass variou de 98% a 100%, sugerindo a detecção de vírus vacinal. Enquanto que entre as amostras brasileiras e o grupo Mass, a variabilidade de aminoácidos foi de 79% a 81%. Esses resultados mostram uma variação importante em genótipos virais circulantes nos plantéis industriais avícolas brasileiros. Portanto, o presente estudo reforça a contínua emergência e disseminação de novas linhagens de IBV no Brasil e a importância de constantes pesquisas e monitoramento, para que se compreendam aos fenômenos de emergência de novas linhagens e suas consequências, bem como para otimizar as medidas de controle do vírus. / Infectious bronchitis is a viral disease, acute and highly contagious that affects birds of the Gallus gallus species, of all ages, causing huge economic losses due to mortality, drop in production and quality eggs. Differences between serotypes of IBV are due to variations in the amino acids sequence in S1 hypervariable region subunit of spike protein (S). This study aimed to partially sequence the S1 gene to determine the phylogenetic relationship between field and vaccine viral types, and to investigate circulating genotypes in Brazil. One hundred and sixty pool samples were collected from symptomatic flocks during 2009/2010. Each pool contained tissues from 3 to 5 birds and was composed by different organs (tracheas, lungs, kidneys, enteric contents, tract reproductive and tracheal swabs). Samples were screened for the presence of IBV using a nested RT-PCR targeted to the 3UTR. Positive samples (n=56) were submitted to a nested RT-PCR target to S gene resulting in 10 amplicons of 390pb that were then submitted to DNA sequencing and analysis. Brazilian IBV genotypes segregated in two phylogenetic groups: Massachusetts (Mass) and Brazilian types. Six samples clustered in the Mass group, with live attenuated vaccines used in Brazil. Four samples grouped with field Brazilian strains previously described (GeneBank accession: FJ791257 to FJ791273). In Mass cluster aminoacids identity range from 98% to 100%, suggesting vaccine virus detection, in this last case. Moreover, the verified identity between samples from this study and Mass group ranged 79% to 81%. Therefore the present study reinforces the emergence and circulation of news lineages of IBV in commercial Brazilian flocks, as well as the importance of consistent research and monitoring to better understand this phenomen and its consequences, aiming to improved control measures against the virus.

A Doença Infecciosa da Bolsa de Fabrício (DIB) é uma doença viral altamente contagiosa que afeta as galinhas nas primeiras semanas de vida. Ela pode causar altas taxas de morbidade e mortalidade dependendo da cepa viral envolvida no surto. Como o vírus é muito resistente no ambiente, a vacinação é requerida em alta pressão de infecção. Devido às variações no grau de virulência das vacinas disponíveis para o controle da DIB, o presente estudo objetivou avaliar a patogenicidade e imunogenicidade de três vacinas comerciais: as vacinas recombinante, complexo-imune e intermediária. Quatro grupos com 55 aves specific pathogen free (SPF) cada foram imunizadas no primeiro dia e desafiadas aos 25 dias com a cepa muito virulenta G11 para verificar o grau de proteção conferido pelas vacinas. As aves foram examinadas, sangradas, eutanaziadas e necropsiadas aos 25, 30 e 35 dias de idade. As bolsas de Fabrício (BF) foram coletadas, pesadas, mensurados seus diâmetros e pesos relativos e submetidas ao exame histopatológico para verificar a presença de lesões. Amostras de soro foram submetidas ao teste de ELISA para quantificação dos anticorpos contra a DIB. Aos 23 dias de idade, as aves SPF foram submetidas à prova de hipersensibilidade cutânea à fitohemaglutinina para avaliar o efeito das vacinas sobre a imunidade celular. Os resultados mostraram que a vacina complexo-imune induziu a maior redução no peso relativo e diâmetro e o maior grau de lesões nas BF. A vacina recombinante foi a que apresentou os melhores resultados, preservando a integridade tecidual e celular das BF. A vacina intermediária apenas induziu um discreto grau de atrofia nas BF. As análises sorológicas, antes do desafio, revelaram que as três vacinas testadas induziram com a mesma intensidade a imunidade humoral das aves SPF, apresentando semelhantes títulos de anticorpos. A avaliação da imunidade celular mostrou que a resposta à fitohemaglutinina das aves SPF imunizadas com as vacinas recombinante e complexo-imune foi menor do que as aves do grupo não vacinado. Nas condições em que o experimento foi conduzido verificou-se que a vacina complexo-imune é a mais patogênica, causando lesões em maior número e severidade nas BF. Todas as vacinas, quando administradas no primeiro dia, são eficazes em proteger as aves SPF contra o desafio com a cepa muito virulenta G11. / Infectious Bursal Disease (IBD) is a highly contagious viral disease that affects chickens in their first weeks of life. It may cause high morbidity and mortality depending on the strain involved in the outbreak. As the virus is very resistant to the environment, vaccination is required under high pressure of infection. Hence, due to variations in the degree of the virulence of vaccines available to control DIB, this study aimed to evaluate the pathogenicity and immunogenicity of three vaccines against Infectious Bursal Disease (IBD): recombinant, immune-complex and intermediate vaccines. Four experimental groups, with fifty-five specific pathogen free (SPF) chickens each, were vaccinated on the first day and challenged on the twenty-fifth day with the very virulent G11 strain in order to verify the protection conferred by the vaccines. The Chickens were examined, bled, euthanized and necropsied on the twenty-fifth, thirtieth and thirty-fifth days of age, and the Bursas of Fabricius (BF) were collected, weighed, having their diameter and relative weight measured, were subjected to histological examination to verify the presence of lesions, Serum samples were subjected to ELISA for the quantification of antibodies against IBD. On the twenty-third day of age, the chickens were submitted to cutaneous basophil hypersensitivity test at phytohemagglutinin to evaluate the immunosuppressive effect of the vaccines on the cell-mediated immunity. The results indicated that the immune-complex vaccine induced not only the greatest reduction in relative weight and diameter, but also the greatest lesion degree on the BF. The recombinant vaccine showed the best results, preserving the tissue and cellular integrity of the BF. The intermediate vaccine induced only a slight degree of atrophy on the BF. The intermediate vaccine induced only a slight degree of atrophy on the BF. The serological analyses, before the challenge, revealed that the three tested vaccines induced humoral immunity of SPF chickens with the same intensity, presenting similar antibody titers. In addition, the evaluation of the cellmediated immunity demonstrated that the cellular reaction to phytohemagglutinin of the immunized SPF chickens with the recombinant and immune-complex vaccines was smaller than the unvaccinated group. Thus, these results have indicated that, under the conditions of the experiment, the immune-complex vaccine is the most pathogenic, causing the highest atrophy degrees on the BF. Therefore, all vaccines, when administered on the first day, are considered effective to protect SPF chickens against the challenge with the very virulent G11 strain.

Introdução. A colonização pelo Pneumocystis jirovecii foi demonstrada em diversos grupos, como pacientes imunossuprimidos pela infecção do Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), pacientes com doenças pulmonares crônicas e gestantes. Alguns estudos têm sugerido que os profissionais de saúde podem tornar-se colonizados após contato com pacientes com a pneumonia por Pneumocystis (PcP). Objetivos. Identificar a colonização pelo P. jirovecii, através de técnicas moleculares, em profissionais de saúde que apresentam contato ocupacional com pacientes com PcP no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Verificar a duração desta colonização. Analisar as variáveis clínico-demográficas dos pacientes com PcP que podem estar relacionadas à transmissão do P. jirovecii ao profissional de saúde. Métodos. Foi realizada uma nested-PCR para a detecção do P. jirovecii no lavado de orofaringe de 27 profissionais expostos a pacientes com PcP (médico; enfermeiro; técnico/auxiliar de enfermagem) e de 36 profissionais administrativos, no período de janeiro a agosto de 2008. As amostras de lavado da orofaringe foram obtidas na primeira, segunda e oitava semana após o contato com um paciente para avaliar o início e a duração da colonização pelo P. jirovecii. A nested-PCR utilizou os primers pAZ-102-A e pAZ-H no primeiro round e pAZ 102-X e pAZ 102-Y no segundo, para a amplificação da grande subunidade do RNA ribossômico mitocondrial (mtLSUrRNA) do microorganismo. Foram coletados os dados clínicos e demográficos dos pacientes com PcP através da revisão dos prontuários médicos. Resultados. A colonização pelo P. jirovecii foi observada em 33,3% (9/27) dos profissionais expostos, com uma duração que variou entre uma a duas semanas após o contato inicial com o paciente. Entre os profissionais não-expostos, foram identificados somente dois colonizados entre 36 indivíduos (p <0,05). Não foi identificada associação entre as características clínicas e demográficas dos pacientes com PcP e a colonização dos profissionais de saúde. Conclusões: Os profissionais de saúde em contato com os pacientes com PcP apresentaram uma taxa de colonização superior aos indivíduos não expostos. Este achado é sugestivo de uma transmissão nosocomial do microorganismo. Os profissionais de saúde podem constituir importante reservatório e fonte de infecção do fungo a outros pacientes.

Atualmente, o Brasil é o segundo maior produtor e exportador mundial de frango. Doenças respiratórias compreendem o principal problema sanitário e levam à condenação de um grande número de carcaças, além de perdas na produtividade. Dentre estes problemas, o vírus da laringotraqueíte infecciosa (VLTI) tem adquirido grande importância nos últimos anos, devido a surtos da doença clínica, como em Bastos (SP) em 2002. Mais recentemente, VLTI vem sendo isolado de galinhas e perus das regiões Sudeste-Sul do Brasil. Dando continuidade aos trabalhos desenvolvidos no laboratório, um isolado de peru foi inoculado experimentalmente em galinhas e perus susceptíveis reproduzindo a doença de forma branda em ambas as espécies. Também foram testados diferentes cultivos celulares de linhagem CER, CEC-32, HD11, Vero e um primário de embrião de galinha para a efetiva replicação do ILTV, com o propósito de aumentar o título viral e a qualidade do DNA viral extraído. O cultivo primário de fibroblasto de embrião de galinha foi o cultivo mais eficiente na replicação do ILTV dentre todos os estudados. Isolados de perus e galinhas foram seqüenciados a partir das regiões genômicas da timidina kinase e glicoproteína C, e alinhados com uma cepa vacinal e amostras de referência, obtidas no GenBank, demonstrando alta similaridade entre as amostras, sugerindo uma origem comum recente. Com o propósito de desenvolvimento de um recombinante com deleção da glicoproteína E, com o objetivo de atenuar a virulência do ILTV, foi concluído um cassete de clonagem contendo as regiões flanqueadoras da glicoproteína E e um gene marcador EGFP. / Actually, Brazil is the second major poultry producer and exporting country. Respiratory diseases comprising the most important sanitary problems that leads to condemnation of many poultry carcass and productivity losses. Between these problems, the laryngotracheitis virus (ILTV) is displaying great importance following by outbreaks of the disease, such as that occured in Bastos (SP), 2002, Brazil. Epidemiological studies showed the presence of antibodies from avian flocks and the existence of carrier birds without clear clinical signs. More recently, the ILTV has been isolated from chicken and turkeys of the southest-south of Brazil. Continuing the works at laboratory, a turkey isolate was inoculated experimentally in susceptible chicken and turkeys and the reproducible of a mild disease was displayed in both species. Also, different line cell cultures CER, CEC-32, HD11, Vero and a primary fibroblast cell culture were tested for the effective propagation of ILTV with the propose to get greatest titers and the quality of viral DNA extracted. The primary fibroblast cell culture was the most efficient to replicate ILTV. Turkey and chicken isolates was sequenced from de regions of thymidine kinase and glycoprotein C and were alignment with a vaccine strain and reference strains (GenBank) displaying high homology between them, suggesting a common origin. A cloning cassette containing the regions flanking glycoprotein E and a marker gene EGFP was constructed with the purpose to develop a recombinant with deletion of the glycoprotein E.

O termo hemoplasma refere-se ao grupo de micoplasmas que parasitam os eritrócitos do hospedeiro e podem causar anemia. O uso das técnicas baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) tem sido utilizadas para a melhor compreensão da doença. No Brasil os hemoplasmas Mycoplasma. haemofelis e ‘Candidatus Mycoplasma. haemonminutum já foram identificados, porém dados de prevalência e fatores de risco não foram avaliados até o momento. A espécie ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ já foi descrita em diferentes países, porém a técnica de diagnóstico utilizando PCR em tempo real limita seu estudo no Brasil devido ao custo e necessidade de pessoal especializado. O presente trabalho desenvolveu uma técnica por PCR convencional para a detecção da espécie ‘Candidatus M. turicensis’ e descreve pela primeira vez sua presença infectando gatos domésticos no Brasil e a prevalência, fatores de risco e achados hematológicos da infecção por hemoplasmas foi avaliada. No total de 371 gatos, 79 (21.3%) foram positivos para pelo menos uma espécie de hemoplasma. A infecção por ‘Candidatus M. haemominutum’ foi detectada em 50 (13,48%) dos animais, ‘Candidatus M. turicensis’ e M. haemofelis foram detectados em 10/371 (2.69%) e 8/371 (2.16%) dos animais respectivamente. Coinfecção com M. haemofelis- ‘Candidatus-M. haemominutum’ foi detectada em 4/371 (1.08%), ‘Candidatus M. haemominutum’-‘Candidatus M. turicensis’ em 5/371 (1.35%) e infecção tripla em 2/371 (0.54%). Gatos machos, jovens e com acesso a rua são mais susceptíveis a infecção por hemoplasmas. Anemia é associada à infecção por M. haemofelis e ‘Candidatus M. haemominutum’. O presente trabalho também descreve a infecção por micoplasma hemotrófico similar ao M. haemofelis em um paciente humano HIV positivo e alerta para seu potencial zoonótico. Em conclusão, espécies de hemoplasmas são comuns e importantes agentes de infecções em gatos domésticos no sul do Brasil. Estudos futuros devem ser conduzidos para melhor entender seu impacto em animais de companhia e determinar o seu papel como agentes zoonóticos, particularmente em pessoas imunocomprometidas. / The term haemoplasma refers to the mycoplasmas that parasitize the red blood cells of the host and can cause anemia. Molecular approaches based on the polymerase chain reaction (PCR) have been used to better understand the disease. In Brazil, The species Mycoplasma haemofelis and ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ were identified, whereas prevalence and risk factor were not evaluated to date. The specie ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ was described in many countries, however the use of real time-PCR for the diagnostic of the infection had limited its use in Brazil and other countries since it is expensive and requires specialized technicians. The current study developed a conventional PCR assay to the diagnosis of ‘Candidatus M. turicensis’ and report for the first time the infection in domestic cats in Brazil. We also evaluated the prevalence, risk factors and hematological findings for the hemoplasma infections. In a total of 371 cat samples, 79 (21.3%) were PCR-positive for at least one species of haemoplasma. ‘Candidatus M. haemominutum’ infection was found in 50 out of 371 (13.48%) positive cats, ‘Candidatus M. turicensis’ and M. haemofelis DNA were found in 10/371 (2.69%) and 8/371 (2.16%) of the cats respectively. Coinfection with M. haemofelis-‘Candidatus M. haemominutum’ was found in 4/371 (1.08%), ‘Candidatus M. haemominutum’-‘Candidatus M. turicensis’ in 5/371 (1.35%) and infection with all 3 haemoplasmas in 2/371 (0.54%). Male cats, younger age and outdoor access were risk factors for haemoplasma infection. Anemia was associated with M. haemofelis and ‘Candidatus M. haemominutum’ infection. The present study also reports a case of a Mycoplasma haemofelis-like organism infection in a HIV positive patient and warns the zoonotic potential of the haemoplasmas. In conclusion, the haemoplasmas are common infectious agent in domestic cats in southern Brazil. Further studies are needed to better understand their impact on companion animals, as well as their role as zoonotic agents, particularly in immunocompromised people.

Introdução: O crescente aumento do número de casos de AIDS em mulheres evidencia um progressivo aumento da Transmissão Vertical (TV) do HIV, gerando assim a necessidade de focalizarmos esforços no intuito de impedir ou minimizar este tipo de transmissão. Objetivos: avaliar as condutas profiláticas adotadas para redução da TV do HIV em serviços de referência pertencentes à 7ª CRS. Metodologia: Os dados foram obtidos por meio de pesquisa de campo retrospectiva com análise quanti-qualitativa dos formulários de cadastro, fichas de notificação e investigação compulsória, além de prontuários das gestantes e puérperas soro positivas para o HIV, no período de 01 de janeiro de 2010 a 01 de janeiro de 2013 mediante aprovação ética. Resultados: A população estudada compreendeu um universo de 22 mulheres notificadas como Gestante HIV +, dentre as quais 72% foram notificadas na cidade de Bagé, e destas, 9% foram notificadas em 2010, 27,3% em 2011 e 63,7% em 2012. A faixa etária de maior prevalência é de 15 a 24 anos (59%), 50% das mulheres não teve a via de parto nem a evolução da gravidez informada e 60% não tem registro de profilaxia no período intra-parto. Em 50% das fichas, não foi informado o uso da medicação pela criança nas primeiras 24h e 59% das notificações foram feitos por profissional enfermeiro. Pôde-se caracterizar com os dados coletados os aspectos individual, escolar e sócio-demográfico da 7ª CRS. Indo ao encontro das informações publicadas por Brasil (2013), este estudo evidencia uma sub-enumeração de casos no SINAN, pois apenas 63% das mulheres foram notificadas/cadastradas nos sistemas de informação. Considerações: As práticas de saúde adotadas pelos serviços estão de acordo Protocolo Vigente, no que se trata da administração da TARV a partir da 14ª semana de gestação, da escolha, sempre que possível da via de parto, a administração de medicamentos intra-parto, a inibição da lactação, o uso do ARV no bebê e o fornecimento de fórmula láctea. As medidas educativas necessárias para qualificar o atendimento realizado na região de saúde estudada relacionam-se principalmente à qualidade das informações das ações de saúde (alimentação dos bancos de dados dos sistemas), além de estimular a população em geral para o conhecimento do prénatal e das testagens para HIV. Para que pudéssemos trabalhar acerca deste tema, discutimos os resultados do estudo em equipe no SAIS de Bagé, e pensamos em algumas estratégias que nos aproxime dos demais profissionais da rede. Criamos um perfil em uma rede social, onde estão sendo postadas diariamente informações acerca dos temas: HIV, AIDS, DSTs, Hepatites Virais, medidas de prevenção, meios de transmissão, atividades do serviço, dados importantes, dentre tantas outras informações, sendo imprescindível relatar que todos os componentes da equipe tem acesso a senha, para que possa sentir-se ator no processo de educação da comunidade. Logo, serão propostas oficinas e fóruns, com os temas em questão para discutir com a comunidade local, com o apoio da equipe da 7ª CRS/RS. / The increasing number of AIDS cases among women reveals a progressive increase of Vertical Transmission (VT) of HIV, thus generating the need of focusing efforts in order to prevent or minimize this type of transmission. The aim of the study was to evaluate the prophylactic measures adopted to reduce HIV in TV reference belonging to the 7th CRS services. Data were obtained from retrospective research field with quantitative and qualitative analysis of the registration forms, reporting forms and compulsory research, and medical records of pregnant and postpartum serum positive for HIV in the period from January 1, 2010 to January 1, 2013 by ethical approval. The study population comprised a universe of 22 women reported / registered as HIV + Pregnant Women, among which 72% were reported in the city of Bage, while 09% reported in 2010, 27.3% in 2011 and 63.7% in the year 2012 the most prevalent age group is 15-24 years (59%), 50% of women had no way of delivery, or pregnancy outcome informed and 60% have no record of prophylaxis in intra period partum. In 50% of the chips, was not informed use of medication by the child in the first 24h and 59% of registrations / notifications were made by professional nurses. Could be characterized with the data the individual, school and socio-demographic aspects of CRS 7th. Going against the information published by Brazil (2013), this study highlights an under-enumeration of cases in SINAN because only 75% of women were reported / registered in information systems. Practices adopted by health services meet the Effective Protocol, it is the administration of ART from the 14th week of gestation, the choice where possible the mode of delivery, medication administration intra-partum, the inhibition of lactation, the use of ARVs in providing baby and milk formula. Educational measures to improve service held at the health region studied relate primarily to information quality of health (nutrition database systems), in addition to encouraging the general population to the knowledge of prenatal and testings for HIV. So we could work on this subject, discuss the results of the study team at SAIS Bage, and think of some strategies that bring us closer to the other networking professionals. We created a profile on a social network, where they are being posted daily information on the topics: HIV, AIDS, STDs, Viral Hepatitis, prevention, transmission media, service activities, important data, among many other information, is indispensable report that all team members have access to the password, so you can feel an actor in the process of educating the community. Soon, workshops and forums will be proposed, with the issues in question to discuss with the local community, with the support of the 7th CRS / RS staff.

O herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1) está amplamente disseminado no rebanho bovino brasileiro. Visando aprofundar o conhecimento sobre a patogenicidade para o trato respiratório de amostras dos subtipos deste vírus mais freqüentemente encontrados no Brasil (BHV-1.1 e BHV-1.a), isolados autóctones oriundos de casos de doença respiratória foram inoculados em bovinos suscetíveis. As amostras de ambos os subtipos foram capazes de induzir doença respiratória após inoculação pela via intranasal, em intensidade que variou de moderada a grave, independentemente do subtipo de vírus inoculado. Foi ainda caracterizada a resposta imune humoral induzida por tais amostras quanto ao perfil de classes e subclasses de imunoglobulinas, sendo esta igualmente indistinguível com relação aos vírus inoculados. O perfil de classes de imunoglobulinas apresentadas pelos animais permitiu a determinação do status da infecção nos animais inoculados através da análise da resposta sorológica. Na segunda etapa deste trabalho foram testadas as propriedades vacinais de um vírus recombinante, do qual foi deletada a glicoproteína E (gE; 265gE-), gerado a partir de uma amostra brasileira de BHV-1.2a. Experimentos de inoculação do recombinante 265gE- em animais suscetíveis e o desafio destes animais com a amostra parental virulenta demonstraram a segurança e eficácia desta amostra na prevenção de sinais clínicos da infecção pelo BHV-1. Posteriormente, o recombinante 265gE- foi inoculado em vacas em diferentes estágios da gestação. Não foram observadas quaisquer anormalidades nestas gestações e as 22 vacas vacinadas deram à luz a animais saudáveis. Conclui-se que o recombinante é imunogênico e capaz de conferir significativa proteção frente ao desafio com a amostra parental virulenta do vírus. O recombinante também não causou enfermidade nas vacas inoculadas nem tampouco aos fetos quando inoculado em diferentes estágios da gestação.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-14T17:39:52Z No. of bitstreams: 1 Luciana Cavalcanti Arruda Coutinho.pdf: 1249795 bytes, checksum: d8c5b0923169bdb4b101bcf96c920d9f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T17:39:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciana Cavalcanti Arruda Coutinho.pdf: 1249795 bytes, checksum: d8c5b0923169bdb4b101bcf96c920d9f (MD5) Previous issue date: 2011-02-22 / Equine Infectious Anemia (EIA) is an important lentivirose in horses, characterized by a chronic and degenerative profile, causing many economic losses. It is considered that animals exposed to the virus and underwent serological evidence, when considered positive, remain so throughout life, which justifies the great concern and disease surveillance. The aim of this study was to use Pichia pastoris yeast cells for protein production of p26 gag region of Equine Infectious Anemia Virus (EIAV) for diagnostic purposes. The p26 gene of EIAV was optimized through the codon usage strategy to be expressed in cells of the Pichia pastoris yeast. The insert was cloned into pPICZαA expression vector after appropriate enzymatic digestion. P. pastoris transformed with the construction pPICZαAp26 were induced to express the p26 recombinant protein under the regulation of AOX1 promoter by adding methanol to the culture medium. The p26 recombinant protein was identified by RT-PCR and Dot blotting assay using anti-His antibody. Further studies are needed to optimize bioprocesses involved in this system in order to obtain a stable, purified and useful antigen for diagnostic purposes. / A Anemia Infecciosa Equina (AIE) é uma importante lentivirose em equídeos, caracterizada por causar um quadro crônico e degenerativo, trazendo muitos prejuízos econômicos. Considera-se que animais expostos aos vírus e submetidos à prova sorológica, quando considerados positivos, assim permanecerão por toda vida, fato que justifica a grande preocupação e vigilância da doença. Neste trabalho objetivou-se utilizar células da levedura Pichia pastoris para produção da proteína p26 da região gag do vírus da anemia infecciosa equina (VAIE) para fins de diagnóstico. O gene da proteína p26 do VAIE foi sintetizado e otimizado por meio da utilização de códons preferenciais para ser expresso em célula da levedura Pichia pastoris. O inserto foi subclonado em vetor de expressão pPICZαA após digestão enzimática apropriada. Células de P. pastoris transformadas com a construção pPICZαAp26 foram induzidas a expressarem a proteína recombinante p26 sob regulação do promotor AOX1 através da adição de metanol ao meio de cultura. A análise quanto à produção da proteína recombinante e sua identificação foram realizadas através de RT-PCR e Dot blotting utilizando anticorpo anti-His.

Orientador: Helaine Maria Besteli Pires Milanez / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T07:08:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Delicio_AdrianeMaira.pdf: 1826833 bytes, checksum: bc3f2dce3447c00fccb97f45337d0f78 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Objetivo: avaliar a transmissão vertical (TV) do HIV e fatores associados em gestantes soropositivas acompanhadas em um serviço universitário brasileiro (CAISM/UNICAMP) entre 2000 e 2009. Sujeitos e Métodos: coorte histórica de 452 gestações e seus recém-nascidos. Os dados foram coletados dos prontuários e registrados em fichas específicas. Crianças sem seguimento foram convocadas para definição diagnóstica. Análise dos dados: análise descritiva através de distribuição percentual e de médias; teste de X², exato de Fisher, t de Student, Mann-Whitney e ANOVA, razão de risco e intervalo de confiança. Resultados: A TV foi de 3,6%. A idade média das gestantes foi 27 anos; principal categoria de exposição foi a sexual (86,5%); 55% já apresentava o diagnóstico prévio à gravidez. Sessenta e dois por cento não estavam em uso de TARV ao engravidar. CD4 médio inicial foi de 474 células/ml e 70.3% apresentaram carga viral indetectável no terceiro trimestre. Como TARV, 55% usaram esquemas com IP e 35% com nevirapina. Monoterapia com AZT foi utilizada em 5,5%. Idade gestacional média no parto foi de 37,2 semanas e em 92% a via foi cesárea; 97,2% receberam AZT endovenoso. Os fatores associados à TV foram: baixa contagem de CD4, elevada carga viral, tempo reduzido de TARV, presença de alterações gestacionais (anemia, RCF, oligoâmnio), coinfecções durante o pré-natal (CMV e toxoplasmose) e presença de trabalho de parto. Uso de TARV potente, parto por cesárea e uso do AZT pelo RN foram fatores protetores. Má adesão ao tratamento esteve presente em 13 dos 15 casos infectados; em sete houve presença de coinfecção neonatal (CMV e toxoplasmose). Conclusão: Fatores de risco para TV foram comprometimento do estado imunológico da gestante, menor tempo de terapia, coinfecções (CMV e toxoplasmose) e presença de trabalho de parto. O uso de TARV potente e a realização de cesárea foram fatores protetores para a TV do HIV. / Abstract: Objectives: to evaluate mother-to-child transmission (MTCT) rates and related factors in HIV-infected pregnant women from CAISM/UNICAMP between 2000 and 2009. Subjects and methods: cohort of 452 HIV-infected pregnant women and their newborns. Data was collected from recorded files and undiagnosed children were enrolled for investigation. Statistical analysis: qui-square test, Fisher exact test, Student t test, Mann-Whitney test, ANOVA, risk ratio and confidence intervals. Results: MTCT occurred in 3.6%. The study population displayed a mean age of 27 years; 86.5% were found to have acquired HIV through sexual contact; 55% were aware of the diagnosis prior to the pregnancy; 62% were not using HAART. Mean CD4 cell-count was 474 cells/ml and 70.3% had undetectable viral loads in the third trimester. HAART included nevirapine in 35% of cases and protease inhibitors in 55%; Zidovudine monotherapy was used in 5.5%. Mean gestational age at delivery was 37.2 weeks and in 92% by caesarian section; 97.2% received intravenous zidovudine. Implicated factors related to MTCT were: low CD4 cell counts, elevated viral loads, maternal aids, shorter periods receiving HAART, maternal concurring illnesses (anemia, IUGR, oligodydramnium), coinfections (CMV and toxoplasmosis) and the occurrence of labor. Use of HAART for longer periods, caesarian delivery and oral zidovudine for the newborns were associated with a decreased risk. Poor adhesion to treatment was present in 13 of the 15 cases of transmission; in 7, co-infections were diagnosed (CMV and toxoplasmosis). Conclusion: Use of HAART and caesarian delivery are protective factors in mother-to-child transmission of HIV. Maternal coinfecctions and maternal concurring illnesses were risk factors for MTCT. / Universidade Estadual de Campi / Ciencias Biomedicas / Mestre em Tocoginecologia

Dentre as diversas doenças que podem acometer os neonatos bovinos, as onfalopatias destacam-se como sendo uma das mais importantes devido a sua alta incidência e consequentes perdas econômicas. A porção do umbigo que permanece em contato com o meio ambiente contaminado aumenta a exposição do neonato aos microrganismos e as chances de ocorrer uma onfalopatia infecciosa, principalmente quando há falhas no manejo dos bezerros (fornecimento de colostro e cura do umbigo) e de higiene do ambiente em que eles vivem. Os componentes do umbigo representam uma importante porta de entrada para os microrganismos, podendo levar à infecção ascendente, com complicações secundárias, o que aumenta a geração de prejuízos econômicos. Com a finalidade de se evitar tais consequências, a realização da identificação dos microrganismos mais frequentemente encontrados nessa circunstância, assim como o conhecimento do perfil de sensibilidade dos mesmos, faz-se necessária, pois, com eles, é possível se direcionar a antibioticoterapia, minimizando o desenvolvimento de resistência bacteriana, além do tempo e custos do tratamento. Diante da importância dessa enfermidade, da escassez de informações sobre o assunto e da premissa de que o umbigo é uma importante porta de entrada a agentes infecciosos, podendo ocorrer bacteremia e outras complicações, o presente estudo realizou a identificação dos agentes bacterianos isolados a partir da secreção do umbigo e de amostras de sangue de bezerros de até 30 dias de vida com onfalopatia infecciosa. Além disso, verificou a sensibilidade dos microrganismos isolados frente a alguns antimicrobianos e a influência de alguns fatores sobre a presença da enfermidade e características dos isolamentos bacterianos. Foram avaliados 417 bezerros da raça Holandesa, machos ou fêmeas, oriundos de propriedades leiteiras localizadas no interior do Estado de São Paulo, desde a primeira semana até os 30 dias de vida, dos quais, 32 apresentaram onfalopatia infecciosa. Os resultados obtidos evidenciaram influência de alguns fatores do ambiente com a ocorrência de onfalopatias infecciosas e com o tipo de isolamento (único ou misto) encontrado nas amostras de secreção do umbigo; alterações do exame físico em função da coloração de Gram das bactérias encontradas nas amostras de sangue; e características das culturas obtidas em função do local de isolamento das bactérias (umbigo ou sangue) e em função do tipo de isolamento em amostras de secreção do umbigo. Durante o exame físico específico dos componentes umbilicais, foi observado que o exame ultrassonográfico é um recurso semiológico mais acurado na identificação das afecções umbilicais, principalmente as intra-abdominais, do que a palpação abdominal bimanual. Ainda, neste estudo, foi possível verificar que os microrganismos isolados a partir da secreção das estruturas umbilicais de bezerros com onfalopatia infecciosa foram, em sua maioria, Gram negativos, sendo mais frequentemente isolada Escherichia spp. (31,03%). Outras bactérias também foram isoladas, como Streptococcus spp. (13,8%), Klebsiella spp. (10,34%) e Proteus spp. (10,34%). No geral, as bactérias isoladas nas estruturas umbilicais foram resistentes a cefalexina, clindamicina, enrofloxacina, tetraciclina, benzilpenicilina, trimetoprim/sulfametoxazol, ampicilina e oxacilina. Observou-se, ainda, que a maioria dos microrganismos isolados a partir do sangue de bezerros com onfalopatia infecciosa foram Gram positivos, sendo Staphylococcus spp. (62,5%) o gênero mais frequentemente isolado. As bactérias isoladas no sangue foram, em geral, resistentes a ácido fusídico, benzilpenicilina, eritromicina, amoxicilina/ácido clavulânico, cefpodoxima, ceftiofur, cloranfenicol, nitrofurantoína e piperacilina. / Among the several diseases that can affect newborn calves, omphalopathies stand out as the most important due to their high incidence and consequent economic losses. The portion of the navel that remains in contact with the contaminated environment intensifies the neonate\'s exposure to the microorganisms and the chances of infectious omphalopathies occur; especially when there are errors in the management of the calves (colostrum supply and navel care) and in the sanitation of the environment in which they live. The components of the umbilicus represent an important entryway for microorganisms, which can lead to ascending infection with secondary complications, which increases the production of economic losses. In order to avoid such consequences, the identification of the most frequently found microorganisms in these circumstances, as well as the knowledge of their sensitivity profile, are required. Consequently, it is possible to target antibiotic therapy, minimizing both the development of bacterial resistance, and time and treatment costs. Given the importance of this disease, the scarcity of information on the subject, and the premise that the navel is an important entryway to infectious agents, leading to bacteremia and other complications, the present study isolated and identified the bacterial agents from the navel secretion and from blood samples of calves up to 30 days old with infectious omphalopathy; as well as verified the sensitivity of the microorganisms isolated against some antimicrobials, the influence of some factors on the presence of the disease, and characteristics of the bacterial isolates. We evaluated 417 male and female Holstein calves, raised in dairy farms placed in the State of Sao Paulo, from the first week up to 30 days of life. Thirty-two of the evaluated calves had infectious omphalopathy. Results evidenced the influence of some environmental factors on the occurrence of infectious omphalopathies and the type of isolation (single or mixed) found in the samples of navel secretion; the alterations found on physical examination along with the Gram staining of the bacteria found in the blood samples; and the characteristics of the cultures obtained along with the site of isolation of the bacteria (navel or blood) and the type of isolation in samples of navel secretion. During the specific examination of the umbilical components, it was observed that the ultrasonographic exam is a more accurate semiological resource in the identification of umbilical affections, mainly the intra-abdominal ones, than the bimanual abdominal palpation. Also, from this study it was possible to verify that microorganisms isolated from the umbilical structures of calves with infectious omphalopathy were Gram negative, and that Escherichia spp. was the most frequently isolated genus (31.03%). Other bacterial genus also isolated were: Streptococcus spp. (13.8%), Klebsiella spp. (10.34%), and Proteus spp. (10.34%). These isolated bacteria were, in general, resistant to cephalexin, clindamycin, enrofloxacin, benzylpenicillin, tetracycline, trimethoprim / sulfamethoxazole, ampicillin, and oxacillin. Most of the microorganisms isolated from the blood of calves with infectious omphalopathy were Gram positive, and Staphylococcus spp. was the most frequently isolated genus (62.5%). Bacteria isolated from blood were, in general, resistant to fusidic acid, benzylpenicillin, erythromycin, amoxicillin / clavulanic acid, cefpodoxime, ceftiofur, chloramphenicol, nitrofurantoin, and piperacillin.