Evidências clínicas e experimentais mostram que a isquemia e reperfusão intestinal (I/R-intestinal) induz lesão pulmonar aguda (LPA) que, em casos mais graves, pode evoluir para a síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA). A LPA se caracteriza pela liberação de amplo espectro de mediadores inflamatórios, infiltração de neutrófilos e aumento de permeabilidade vascular. Sabe-se que mediadores inflamatórios gerados no local da I/R-intestinal são transportados pelo sistema linfático mesentérico e, ao atingirem o pulmão, contribuem para a LPA. A enzima heme oxigenase 1 (HO-1), exerce importante função na homeostasia celular, devido à sua ação catabólica sobre o grupo heme das hemoproteínas, gerando como subprodutos ferro, biliverdina e monóxido de carbono. Esses subprodutos possuem ação antiinflamatória, antioxidante e antiapoptótica. Todavia, o papel da HO-1 no controle da LPA causada pela I/R-intestinal ainda não está totalmente esclarecido. No presente estudo investigamos a expressão da HO-1 e o efeito de sua indução sobre as repercussões pulmonares decorrentes da I/R-intestinal. Para tanto, ratos machos Wistar (220-250 g) foram submetidos a 45 min de isquemia intestinal pela obstrução da artéria mesentérica superior e a 2 h de reperfusão. O grupo controle consistiu de animais falsamente operados (Sham). Ainda, a indução da HO-1 foi realizada pelo tratamento dos animais com o composto Hemin (10 mg/kg) 48 e 24 h antes da indução da I/R-intestinal. A I/R-intestinal aumentou a atividade pulmonar da mieloperoxidase (MPO) e o extravasamento do corante azul de Evans (AE) no pulmão. Os níveis de IL-1<font face=\"Symbol\">b elevaram no explante pulmonar (24 h) enquanto os de IL-10 foram reduzidos após a I/R-intestinal. Ainda, a I/R-intestinal diminui a expressão pulmonar da SOD-1 e promoveu aumento da expressão da iNOS. Os resultados obtidos revelam que a I/R-intestinal por si só não induziu a expressão gênica da enzima HO-1, porém o tratamento dos animais com Hemin elevou a sua expressão, a qual foi acompanhada pela redução da atividade pulmonar de MPO e do extravasamento do corante AE. Os elevados níveis pulmonares de IL-1<font face=\"Symbol\">b foram reduzidos pelo tratamento dos animais com o Hemin e houve elevação da IL-10 e VEGF no mesmo tecidos. A indução da HO-1 preveniu o aumento dos níveis de IL-1<font face=\"Symbol\">b e IL-10 e promoveu aumento dos níveis de VEGF na linfa dos animais. Com respeito ao sistema antioxidante, nossos dados indicaram que a indução da HO-1, parece estar relacionada com a elevação da expressão de SOD-1, SOD-2 e redução da expressão de iNOS. Concluindo, os dados obtidos permitem sugerir que a indução prévia da expressão de HO-1 controla a magnitude da lesão pulmonar causada pela I/R-intestinal por mecanismos envolvendo o aumento da atividade de parcela do sistema antioxidante e regulação do balanço entre a geração de citocinas antiinflamatórias e pró-inflamatórias no pulmão. / Clinical and experimental evidences have reported that intestinal ischemia and reperfusion (I/R-intestinal) induces acute lung injury (ALI), which in severe cases can progress to acute respiratory distress syndrome (ARDS). The ALI is characterized by the release of a broad spectrum of inflammatory mediators, neutrophil infiltration and increased vascular permeability. It is known that inflammatory mediators generated at the site of I/R-intestinal are transported by the mesenteric lymphatic system and, on reaching the lung, contribute to the ALI. The enzyme heme oxygenase 1 (HO-1) plays an important role in cellular homeostasis, due to its catabolic action on heme group of hemoproteins, forming as by-products such as iron, biliverdin and carbon monoxide. It is known that these by-products have anti-inflammatory, antioxidant and antiapoptotic actions. However, the role of HO-1 in the control of ALI caused by I/R-intestinal is not yet fully understood. In the present study we investigated the expression of HO-1 and the effects of its induction on pulmonary complications resulting from I/R-intestinal. So, male Wistar rats (220-250 g) were subjected to 45 min of intestinal ischemia by occlusion of the superior mesenteric artery and 2 h of reperfusion. The control group consisted of animals falsely operated (Sham). Still, the induction of HO-1 was performed by treating animals with the compound Hemin (10 mg/kg) 48 and 24 h before the induction of I/R-intestinal. The I/R-intestinal increased the pulmonary activity of the myeloperoxidase (MPO) and the extravasation of Evans blue dye (EB) in the lung. Levels of IL-1<font face=\"Symbol\">b increased in lung explant (24 h) while the IL-10 were reduced after I/R-intestinal. Further, the I/R-intestinal reduces pulmonary expression of SOD-1 and promoted the increase of iNOS expression. The results indicate that the I/R-intestinal alone did not induce gene expression of HO-1 enzyme, but the treatment of animals with Hemin increased its expression which was accompanied by reduction of pulmonary activity of MPO and extravasation of the dye EB. The high pulmonary levels of IL-1 were reduced by treatment of animals with Hemin and there was an increase of IL-10 and VEGF in the same tissue. The Induction of HO-1 prevented the increased levels of IL-<font face=\"Symbol\">b 1 and IL-10 and promoted increasing of the VEGF levels in the animals lymph. With respect to the antioxidant system, our data indicate that induction of HO-1, seems to be related to the elevation of expression of SOD-1, SOD-2 and reduction of iNOS expression. In conclusion, our data may suggest that prior induction of HO-1 expression controls the magnitude of lung injury caused by I/R-intestinal by mechanisms involving increased activity of a portion of the antioxidant system and regulation of the balance between generation anti-inflammatory cytokines and pro-inflammatory in the lung.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo – FAPESP / Desde a década de 70 até o presente momento, o conhecimento sobre células-tronco (CTs) vêm crescendo exponencialmente. Dentre as CTs, interesse crescimento se dá no campo das células-tronco adultas, com especial atenção para as CTs da medula óssea, as células-tronco mesenquimais (CTMs). Muito têm se descoberto sobre o potencial terapêutico das CTMs para diversas patologias, devido a seu grande potencial em reparar tecidos e diminuir a inflamação local. Na área da nefrologia, muitos avanços foram feitos em doenças renais agudas e crônicas, entretanto as taxas de morbi-mortalidade mantêm-se elevadas. Devido ao caráter devastador das doenças renais, estudar uma forma alternativa de tratá-la está na terapia por CTMs. Nesse estudo, buscamos compreender o papel das CTMs em modelos renais agudo e crônico. Para tanto, em um modelo agudo de lesão de isquemia e reperfusão, CTMs foram administradas após 6h de reperfusão e analisadas em 24h e 48h. Os níveis de creatinina e uréia séricos apresentaram-se bem menores em 24h e 48h após reperfusão nos animais tratados com CTMs. Histologicamente, esses dados refletem em menor NTA e maior regeneração. Sabendo do potencial imunomodulador das CTMs, analisamos o perfil de citocinas no tecido renal. Observamos uma diminuição de citocinas inflamatórias (Th1) e aumento de citocinas anti-inflamatórias (Th2). Uma vez que realizamos o modelo experimental em ratos Wistar fêmeas e injetamos CTMs de machos, procuramos a CTM no tecido renal por PCR através da expressão do gene SRY (sex determing region Y). Em 24h, não encontramos as CTMs no tecido renal. Sistemicamente, a administração de CTMs exógenas não altera o perfil de citocinas Th1, porém leva ao aumento de citocinas Th2. Como os resultados foram animadores no modelo agudo, partimos para analisar o papel das CTMs no modelo renal crônico de nefrectomia 5/6. Com um tratamento contínuo de CTMs (a cada 2 semanas), após 8 semanas, observamos melhora nos níveis de creatinina e uréia sérica, bem como diminuição nos níveis de proteinúria. Apesar de uma tendência a melhorar o clearance de inulina nos animais tratados com CTMs, não houve diferença estatística com o grupo não tratado. Ao analisar a fibrose característica do modelo de 5/6, observamos menores índices de áreas fibróticas e glomerulosclerose no tecido dos animais tratados com CTMs, bem como redução em diversas moléculas fibróticas tais como Vimentina, Colágeno 1, TGF -β, FSP-1, Smad 3, MCP-1 e razão TIMP-1/MMP9. Já nesse modelo, as CTMs encontravam-se no tecido renal, e podemos correlacionar sua presença com o aumento de moléculas anti-fibróticas, tais como HO-1 e HGF. Em relação as citocinas expressas no tecido renal, novamente observamos uma polarização para citocinas Th2, o que por sua vez pode levar a inibição do processo de transição epitélio-mesenquimal (TEM). Surpreendentemente, a administração de CTMs levou a uma menor expressão de diversas citocinas séricas. Nos dois modelos utilizados, percebemos que administração de CTMs leva a melhora funcional renal, sendo o provável mecanismo envolvido nessa melhora a imunomodulação decorrente do tratamento, tanto no tecido renal quanto sistêmica, além da secreção de outras moléculas tais como HO-1 e HGF que medeiam processos anti-fibróticos, remodelando o tecido renal. / FAPESP: 06/0620-5 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-10-05T19:59:50Z No. of bitstreams: 1 Cesar Augusto M e Silva - tese de doutorado.pdf: 12677167 bytes, checksum: fbc5893a3b0a2783f94b0033256bf3d1 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-11-24T13:24:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Cesar Augusto M e Silva - tese de doutorado.pdf: 12677167 bytes, checksum: fbc5893a3b0a2783f94b0033256bf3d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-24T13:24:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cesar Augusto M e Silva - tese de doutorado.pdf: 12677167 bytes, checksum: fbc5893a3b0a2783f94b0033256bf3d1 (MD5) Previous issue date: 2006 / Introdução: Os fatores mecânicos pulmonares relacionados às vias aéreas e à microvasculatura desempenham papel fundamental no contexto da lesão de isquemia e reperfusão (I/R). O objetivo deste trabalho foi estudar o impacto do flush vascular pulmonar (FVP), da isquemia fria e o efeito de estratégias de recrutamento alveolar sobre as propriedades mecânicas e morfométricas e correlacionálas à função pulmonar durante a reperfusão ex-vivo. Material e Métodos: 128 ratos da raça Wistar foram divididos em 4 grupos (i) controle: pulmões isolados submetidos a 15 minutos de isquemia à temperatura ambiente; (ii) Flush: pulmões isolados submetidos ao flush vascular pulmonar (FVP) com solução de Euro-Collins (EC) e preservados a 4 0C por 10 horas (isquemia fria); (iii) CPT: pulmões isolados submetidos ao FVP com EC e à isquemia fria e que foram recrutados à CPT por 2 minutos antes do início da reperfusão; (iv) VC: pulmões isolados submetidos ao FVP com EC e ventilados com volume corrente (VC) por 10 minutos antes do início da reperfusão. Todos os pulmões foram reperfundidos durante 60 minutos, tempo no qual foram estudadas as trocas gasosas, as propriedades mecânica e hemodinâmica. Ao final da reperfusão, o peso líquido/peso seco foi calculado e a análise morfométrica realizada. Em outra etapa, 40 ratos da raça Wistar foram divididos em 5 grupos: (i) controle: pulmões com sangue; (ii) Flush: pulmões submetidos ao FVP com EC; (iii) Isquemia: pulmões submetidos ao FVP com EC e submetidos à isquemia fria; (iv) CPT: pulmões submetidos ao FVP com EC, submetidos à isquemia fria e recrutados à CPT por 2 minutos; (v) VC: pulmões submetidos ao FVP com EC, submetidos à isquemia fria e ventilados com volume corrente por 10 minutos. A análise das propriedades mecânicas e o estudo morfométrico foram realizados em todos os pulmões dos 5 grupos. Resultados: o FVP e a isquemia fria aumentaram (i) a percentagem de área alveolar colapsada, (ii) a dissipação de energia nos componentes viscoelásticos pulmonares e (iii) a eslastância estática pulmonar. Estes pulmões desenvolveram edema fulminante durante os primeiros 15 minutos de reperfusão. O recrutamento à CPT e a ventilação com VC atenuaram as alterações mecânicas e morfométricas provocadas pela preservação e evitaram a lesão I/R. Durante a reperfusão, as trocas gasosas, as propriedades mecânica e hemodinâmica dos pulmões recrutados foi similar a dos controle. Conclusões: as alterações mecânicas e morfométricas causadas pela preservação pulmonar aumentam a impedância dos pulmões tornando-os mais susceptíveis à lesão I/R, e as manobras de recrutamento alveolar empregadas imediatamente antes do início da reperfusão atenuam as inomogeneidades pulmonares causadas pela preservação e previnem a lesão I/R. ___________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Rationale: mechanical factors related to the airways and to the pulmonary microvasculature play a fundamental role in the context of ischemic-reperfusion injury (I/R). The goal of this study is to investigate the impact of pulmonary vascular flush (PVF), cold ischemia and alveolar recruitment on the mechanical and morphometrical properties and to correlate these findings and pulmonary hemodynamics and gas exchange during the reperfusion. Methods: 128Wistar rats were randomically divided into 4 groups: (i) Control: fresh lungs; (ii) Flush: lungs flushed with Euro-Collins solution (EC), preserved at 4 0C for 10 hours (cold ischemia); (iii) TLC: flushed lungs, preserved at 4 0C for 10 hours, inflated to TLC for 2 minutes prior to rapid reperfusion; (iv) VT: flushed lungs preserved at preserved at 4 0C for 10 hours, ventilated with tidal volume during 10 minutes prior to rapid reperfusion. All lungs were subjected to an ex-vivo reperfusion during 60 minutes. In this period, the gas exchange, the mechanical and hemodynamical properties were evaluated and, at the end, the wet-to-dry ratio was calculated and the morphometrical analysis performed. In other phase, 40 Wistar rats were randomically divided in 5 groups: (i) Control: fresh lungs; (ii) Flush: lungs flushed with EC; (iii) Ischemia: flushed lungs, preserved at 4 0C for 10 hours; (iv) TLC: flushed lungs, preserved at 4 0C for 10 hours, inflated to TLC for 2 minutes; (v) VT: flushed lungs preserved at 4 0C for 10 hours, ventilated with tidal volume during 10 minutes. The end-inflation occlusion method was used to evaluate mechanical properties of the lungs. The morphometrcial analysis was also performed. Results: PVF and cold ischemia increased (i) the percentage of alveolar colapsed area; (ii) the energy dissipation on the lung viscoelastic components and (iii) the pulmonary lung elastance. These lungs (ischemic not subjected to alveolar recruitment prior to reperfusion) presented severe pulmonary edema, whereas the function of the recruited lungs were similar to that of fresh lungs. Conclusions: cold preservation increases pulmonary impedance and the huffiness to the I/R injury, and the alveolar recruitment manoeuvres performed before the reperfusion reverts, or at least, decreases the pulmonary inhomogeneities caused by the preservation and warns the I/R injury.

Citocinas geradas durante a I/R-i promovem lesão pulmonar aguda e podem causar imunossupressão. Investigamos se a inflamação pulmonar após dias de reperfusão intestinal está relacionada com alterações no sistema imune. Ratos machos Wistar foram submetidos a oclusão da artéria mesentérica superior por 45 min e a 2 h, 3, 5 ou 20 dias de reperfusão. Observamos que após 5 dias de reperfusão intestinal enterobactérias estão presentes nos linfonodos mesentéricos e que os neutrófilos circulantes estão mais ativos no combate a patógenos, enquanto leucócitos da cavidade peritoneal não. Notamos aumento de IL-1b, TNF-a, IL-17, IL-4 e diminuição de IL-10 no explante pulmonar e aumento de IL-1b, IFN-g e LDH no soro. Já os níveis de nitritos, corticosterona, HMGB-1, ácido úrico, AMPc e a mecânica respiratória não se alteraram. Os resultados apontam para a I/R-i como promotora de modificação temporais no organismo. Alterações nos mecanismos regulatórios da inflamação e do sistema imune contribuem para a inflamação pulmonar e sistêmica, sem alterar a função mecânica pulmonar / Cytokines generated during intestinal I/ R promote acute lung injury and may cause immunosuppression. We investigate if the pulmonary inflammation observed after several days of reperfusion is related to changes in the immune system. Male Wistar rats were subjected to occlusion of the superior mesenteric artery for 45 min and reperfused for 2 h , 3, 5 or 20 days. We observed that after 5 days of reperfusion enterobacteraceae are present in mesenteric lymph nodes and that circulating neutrophils are more effective against pathogens, whereas leukocytes from the peritoneal cavity are not. We noted increase of IL-1b, TNF-a, IL-17, IL -4 and decrease of IL-10 in lung explant and increase of IL-1b, IFN-g and LDH in serum. Furthermore, the levels of nitrites, corticosterone, HMGB -1, uric acid, cAMP, as well as respiratory function, did not change. Based on the foregoing, we observed that alterations in regulatory mechanisms of inflammation and immune system after contribute to pulmonary and systemic inflammation, but do not alter pulmonary mechanical function.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2018-01-30T16:51:18Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Patricia de Almeida Machado Gonçalves - 2017.pdf: 2160802 bytes, checksum: 939d23474b7308d62b12f4b66224829d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-31T14:31:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Patricia de Almeida Machado Gonçalves - 2017.pdf: 2160802 bytes, checksum: 939d23474b7308d62b12f4b66224829d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-31T14:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Patricia de Almeida Machado Gonçalves - 2017.pdf: 2160802 bytes, checksum: 939d23474b7308d62b12f4b66224829d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-12-18 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Oxidative stress is the overproduction of reactive oxygen species that cause cell damage and even the death. It is a mechanism related to ischemia and reperfusion, a process that affects several organs and is involved in neurodegenerative diseases, cardiac and/or renal insufficiencies, hepatic dysfunction, among others. The discovery of new antioxidant substances derived from natural sources, is important for the prevention and treatment of these diseases. Beta lapachone is a substance with antioxidant action obtained from sawdust of Ipe wood, a symbolic tree from the Brazilian cerrado. This study aimed to analyze the cytotoxic and antioxidant action of beta lapachone in endothelial cells, in vitro. EA.hy 926 lineage cells were subcultured, treated with different concentrations of beta lapachone and subjected to ischemia and reperfusion. Cytotoxicity and antioxidant action were assessed through the cellular viability analysis by the tetrazolium reduction method. The averages were verified by the Tukey test (5% of significance) and by variance analysis. There was a dose-dependent progression of cytotoxicity in the non-ischemia/reperfusion (control) group and cell viability increase in the ischemia/reperfusion group. However, there was no statistical difference between the concentrations and between groups. Considering the settings of this experiment, Beta lapachone did not present cytotoxic or antioxidant action on endothelial cells. / O estresse oxidativo é o excesso de produção de espécies reativas de oxigênio que causam danos e até a morte das células. É um mecanismo que pode se originar da isquemia e reperfusão, um processo que acomete diversos órgãos e que está envolvido em doenças neurodegenerativas, cardíacas, insuficiências renais, disfunção hepática, entre outras. A necessidade da descoberta de novas substâncias antioxidantes, derivadas de fontes naturais, é importante para a prevenção e tratamento dessas doenças. A beta lapachona é uma substância com ação antioxidante, obtida da serragem da madeira do ipê, vegetação símbolo do cerrado brasileiro. Neste estudo objetivou-se analisar a ação citotóxica e antioxidante da beta lapachona em células endoteliais, in vitro. Células da linhagem EA.hy 926 foram subcultivadas, tratadas com a β lapachona em diferentes concentrações e submetidas à isquemia e reperfusão. A citotoxidade e a ação antioxidante foram obtidas por meio da análise da viabilidade celular pelo método de redução do tetrazólio. As médias foram averiguadas pelo teste de Tukey (5% de significância) e pela análise de variância. Houve progressão dose dependente da citotoxidade no grupo sem isquemia/reperfusão e da viabilidade celular no grupo com isquemia/reperfusão. No entanto, não houve diferença estatística entre as concentrações e entre os grupos. A beta lapachona, nas condições desse experimento, não apresentou ação citotóxica ou antioxidante nas células endoteliais.

Introdução: O transplante renal é amplamente reconhecido como a melhor forma de tratamento para os pacientes que necessitam de terapia de substituição renal. Frequentemente a equipe transplantadora se depara com a difícil questão de determinar se órgãos, provenientes de doadores falecidos e limítrofes ou em parada cardíaca, estão aptos para serem transplantados. É difícil quantificar a intensidade do dano provocado pela isquemia no enxerto a ser utilizado, especialmente se o doador apresentou quadro de instabilidade hemodinâmica com queda significativa da perfusão tecidual e aumento do risco de diminuir a função do enxerto e afetar adversamente sua sobrevida. Desta forma torna-se justificável a utilização da técnica de espectroscopia de fluorescência induzida pelo laser, na tentativa de se avaliar a correlação entre os seus achados e o grau de lesão histológica renal experimental, uma vez que se trata de um método objetivo, não invasivo, rápido e em tempo real que, futuramente, pode ser aplicada nos transplantes renais em humanos. Objetivos: Avaliar a correlação entre os dados da espectroscopia de fluorescência induzida pelo laser e alterações histológicas na isquemia e reperfusão renal em ratos, e se existe diferença significativa na leitura da espectroscopia entre os polos superior, inferior e o terço médio. Materiais e Métodos: Foram utilizados 33 ratos (Rattus norvegicus) machos adultos da linhagem Wistar que, depois de anestesiados, tiveram seus rins esquerdos abordados. Inicialmente os rins foram submetidos à detecção da espectroscopia de fluorescência dos pólos superiores, inferiores e terços médios. As excitações foram geradas por lasers com comprimentos de onda de 408, 442 e 532 nm. Em seguida os pedículos renais esquerdos foram dissecados, isolados e clampeados com auxílio de mini-pinça vascular. Então, os animais foram divididos aleatoriamente em três grupos isquêmicos de 30, 60 e 120 minutos de isquemia quente. Em cada um dos grupos, os rins foram novamente analisados pela espectroscopia de fluorescência, bem como após 5 minutos de reperfusão, utilizando novamente feixes excitatórios com os mesmos comprimentos de onda, nas mesmas regiões renais. Posteriormente os rins esquerdos foram coletados e enviados para estudo histológico. Resultados: O tempo de isquemia mostrou forte influência com a graduação histológica. Com 30 minutos de isquemia, nenhum comprimento de onda (408, 442 e 532 nm) apresentou correlação com a graduação histológica (p = 0,81; p = 0,11; p = 0,21, respectivamente). Com 60 minutos de isquemia, o laser de excitação de 532 nm (na fase de reperfusão) apresentou coeficiente de correlação negativa significativa (r = - 0,61) com a graduação histológica. Na isquemia de 120 minutos, o laser com 442 nm de comprimento de onda (na fase de reperfusão) mostrou o coeficiente de correlação negativa significativa (r = - 0,73) com a graduação histológica. O terço médio renal apresentou média estatística superior à dos polos (p < 0,001) na leitura da espectroscopia de fluorescência. Conclusões: Há correlação entre os dados da espectroscopia de fluorescência induzida pelo laser e as alterações histológicas na isquemia renal em ratos, sendo necessário, durante a investigação, analisar apenas o terço médio renal. / Introduction: Renal transplantation is widely recognized as the best form of treatment for patients who require renal replacement therapy. Often, the transplant team is faced with a difficult question, if organs from deceased marginal donors or non-heart beating donors are able to be transplanted. It is difficult to quantify the intensity of damage caused by ischemia in the graft to be used, especially if the donor had hemodynamic instability with a significant decrease of the tissue perfusion and an increased of the risk of diminishing the graft function which could affect adversely its survival. Thus it is justified to use the technique of laser-induced fluorescence spectroscopy, to assess the correlations between its results and the histological grade in experimental renal injury, since it is an objective, non-invasive, fast and in real-time analysis, which can be applied, in the future, in human kidney transplants. Objectives: To evaluate the correlation between the data of laser-induced fluorescence spectroscopy and histological changes in kidney ischemia and reperfusion in rats, and if there are significant differences of reading between the upper and lower poles and the middle area of such kidneys. Materials and Methods: We used 33 adults male rats (Rattus norvegicus) of Wistar strain, which after anesthetized, had their left kidney addressed. Initially such kidneys were submitted to detection of the fluorescence spectroscopy of the upper pole, lower pole and the middle area. Excitations were generated by lasers having wavelengths of 408, 442 and 532 nm. Then the left renal pedicles were dissected, isolated and clamped. Then the animals were randomized into three ischemic groups of 30, 60 and 120 minutes. In each group, the kidneys were analyzed by fluorescence spectroscopy for the second time, and again after 5 minutes of reperfusion, using excitatory beam with same wavelength, at the poles (upper and lower) and the middle area of the kidneys. Later, the left kidney were collected and sent for histological examination. Results: The ischemia time showed a strong influence on the histological grade. With 30 minutes of ischemia, no wavelength (408, 442 and 532 nm) was correlated with the histological lesions (p = 0.81, p = 0.11, p = 0.21, respectively). With 60 minutes of ischemia, the laser excitation of 532 nm (in the reperfusion phase) showed a significant negative correlation coefficient (r = - 0.61) with the histological grading. In 120 minutes of ischemia, laser with 442 nm wavelength (in the reperfusion phase) showed a significant negative correlation coefficient (r = - 0.73) with the histological grade. The middle area of the kidneys showed a higher average statistically (p< 0,001) than the poles in the reading of fluorescence spectroscopy. Conclusions: There is a strong correlation between the data of laser-induced fluorescence spectroscopy and the histological changes in rats renal ischemia, being necessary, during the investigation, to analyze only the middle area of the kidneys.

A lesão de isquemia e reperfusão (IR) é um evento que pode elevar o risco de morte após o transplante pulmonar, por ativar o sistema imune inato a induzir a inflamação. Em situação de isquemia, a oferta de oxigênio se encontra abaixo das necessidades metabólicas, resultando na depleção das reservas celulares de ATP e no aumento da produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e nitrogênio (ERNs). Adicionalmente, a IR desencadeia um processo inflamatório intenso, caracterizado principalmente pela presença de neutrófilos e macrófagos ativados, os quais liberam inúmeros mediadores inflamatórios, perpetuando a inflamação. Nossa hipótese inicial era que a suplementação com creatina (Cr) poderia atenuar a lesão de IR pelo aumento dos níveis de fosfocreatina (PCr) nas células, o que facilitaria a formação de adenosina trifosfato (ATP), promovendo a manutenção dos níveis de Ca2+ intracelular, desestimulando assim a formação de EROs e, consequentemente, diminuindo o processo inflamatório. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar o papel da suplementação com creatina na atenuação da lesão de IR em ratos submetidos ao transplante pulmonar, segundo aspectos inflamatórios, estruturais e funcionais do tecido pulmonar. Foram utilizados 64 ratos machos da raça Sprague Dawley distribuídos em quatro grupos: A90, controle/água + 90 minutos de isquemia; Cr90, creatina + 90 minutos de isquemia; A180, controle/água + 180 minutos de isquemia; Cr180, creatina + 180 minutos de isquemia. Os animais doadores receberam creatina (0,5g/kg/dia) diariamente durante cinco dias antes do transplante pulmonar. Os animais do grupo controle receberam apenas o veículo. Após a extração, os pulmões permaneceram em isquemia fria por 90 ou 180 minutos sendo, a seguir, implantados e reperfundidos por 120 minutos. Ao final da reperfusão, foram coletados os dados de mecânica respiratória, além de amostras de ar exalado, sangue arterial e periférico, lavado broncoalveolar e tecido pulmonar. Os parâmetros avaliados foram: resistência das vias aéreas, resistência e elastância do tecido pulmonar, óxido nítrico exalado, pressão parcial de oxigênio e de dióxido de carbono, creatinina sérica, células inflamatórias, índice de edema, PCNA, Caspase-3, TLR 4 e 7, IL1-beta, IL6, TNF-alfa, IL10 e CINC1. Os animais tratados com creatina apresentaram melhora da mecânica pulmonar, dos níveis de creatinina sérica, da gasometria arterial, além da diminuição da fração exalada de óxido nítrico e da inflamação verificada no sangue periférico, no lavado broncoalveolar e no parênquima pulmonar. Estes animais também apresentaram diminuição da proliferação e da apoptose de células inflamatórias, de TLR4, dos níveis de IL6 e CINC1, além de aumento de IL10. Concluímos que o prétratamento com creatina tem efeito protetor na lesão de IR após transplante pulmonar unilateral em ratos / Ischemia and reperfusion injury (IRI) is an event that can increase the risk of death after lung transplantation (LTx) by activating the innate immune system to induce inflammation. In ischemia events, oxygen supply is below metabolic requirements, resulting in depletion of ATP cellular reserves and increased production of reactive oxygen (ROS) and nitrogen species (RNS). In addition, IRI triggers an intense inflammatory process characterized mainly by the presence of activated neutrophils and macrophages, which release innumerable inflammatory mediators, perpetuating the inflammation. Our initial hypothesis was that creatine supplementation (Cr) could attenuate IRI by increasing phosphocreatine (PCr) levels in cells, which would facilitate the formation of adenosine triphosphate (ATP), promoting the maintenance of intracellular Ca2+ levels, thus discouraging the formation of ROS and, consequently, decreasing the inflammatory process. Therefore, the objective of this study was to evaluate the role of Cr supplementation in the attenuation of IRI in rats underwent to LTx in according to inflammatory, structural and functional aspects of the lung tissue. Sixty Sprague Dawley male rats were distributed into four groups: A90, control / water + 90 minutes of ischemia; Cr90, creatine + 90 minutes of ischemia; A180, control / water + 180 minutes of ischemia; Cr180, creatine + 180 minutes of ischemia. Donor animals received creatine (0.5g/kg/day) daily for five days prior to LTx. Animals in the control group received only the vehicle. The donor`s lung remained in cold ischemia for 90 or 180 minutes and then, were implanted and reperfused during 120 minutes. After reperfusion, respiratory mechanics data were performed and collected samples of exhaled air, arterial and peripheral blood, bronchoalveolar lavage fluid and pulmonary tissue. The parameters evaluated were: airway resistance, resistance and elastance of the pulmonary tissue, exhaled nitric oxide, partial pressure of oxygen and carbon dioxide, serum creatinine, inflammatory cells, edema index, PCNA, Caspase-3, TLR 4 and 7, IL1-beta, IL6, TNF-alpha, IL10, and CINC1. The animals treated with Cr showed an improvement in pulmonary mechanics, serum creatinine levels, and arterial blood gases. In addition, there was a decrease in the exhaled fraction of nitric oxide and in the inflammation in the peripheral blood, BALF, and pulmonary parenchyma in creatine-treated animals. These rats also had a decrease in the proliferation and apoptosis of inflammatory cells, TLR4, IL6, and CINC1. Moreover, there was an increase in the IL10 levels after Cr treatment. We conclude that pre-treatment with Cr has a protective effect on IRI after LTx in rats

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / IntroduÃÃo e objetivo: Doadores de NO podem diminuir a lesÃo neuronal durante a isquemia e reperfusÃo cerebral (I/R) por aumento do fluxo sanguÃneo cerebral. O objetivo deste estudo à avaliar se um novo complexo de nitrosilo complexo de rutÃnio (Rut-bpy) capaz liberar NO direto na musculatura lisa vascular apresenta algum efeito durante I/R. MÃtodo: Foram utilizados 96 ratos machos, da linhagem Wistar, com peso mÃdio de 290.27 g, distribuÃdos em 2 fases com 8 grupos cada: Fase de isquemia 4 grupos sham (SF, Rut-bpy,L-NAME e L-NAME+Rut-bpy) e 4 grupos isquemia (SF, Rut-bpy,L-NAME e L-NAME+Rut-bpy); da mesma forma foi dividido a fase de reperfusÃo ( 4 grupos sham e 4 grupos isquemia/reperfusÃo) com as mesmas drogas teste da fase de isquemia. Foi utilizado um modelo de isquemia cerebral global incompleta, com oclusÃo da artÃria carÃtida comum bilateral e administraÃÃo do SF, Rut-bpy e L-NAME via intraperitoneal. No final do experimento os animais foram decapitados e o cÃrebro fatiado para ser avaliado à Ãrea de lesÃo por histoquÃmica. Durante todo o experimento a PAM dos animais foi monitorizada. Resultados: DiminuiÃÃo da relaÃÃo Ãrea de lesÃo/Ãrea de tecido cerebral tanto na fase de isquemia (0.526 + 0.012 com SF vs 0.216 + 0.07 com Rut-bpy,; p<0.05) como na fase de reperfusÃo (0.4201 + 0.04 com SF vs 0.114 + 0.03 com Rut-bpy; p<0.05). A variaÃÃo da PAM foi menor nos animais tratados com Rut-bpy (20.89 + 11.77 com SF vs 6.49 + 4.65 com Rut-bpy) ao final da isquemia e inicio da reperfusÃo. ConclusÃo: O Rut-bpy tem efeito protetor neuronal durante evento de I/R e que o mesmo consegue manter a PAM mais estÃvel durante o inicio da reperfusÃo. / Background and purpose - Nitric oxide (NO) donors are known to reduce neuronal damage during brain ischemia and reperfusion by increasing the blood flow. Rut-bpy is a novel nitrosyl-ruthenium complex releasing NO directly into the vascular smooth musculature. The objective of the study was to evaluate the effect of Rut-bpy on a rat model of brain ischemia and reperfusion. Methods - Ninety-six male Wistar rats weighing approximately 290g were randomly assigned to 16 groups. Four groups and their respective sham groups were submitted to ischemia (Stage 1), while four groups and their respective sham groups were submitted to ischemia + reperfusion (Stage 2). At each stage of the experiment the groups were treated pairwise with saline solution (SS), Rut-bpy, L-NAME and L-NAME+Rut-bpy, respectively. The study was based on an incomplete global brain ischemia model with occlusion of the common bilateral carotid arteries and intraperitoneal administration of the study drugs. Following the experiment the animals were decapitated and the brain was sectioned for histochemical evaluation of the area of damage. The mean arterial blood pressure (MABP) was monitored throughout the experiment. Results - In the groups receiving Rut-bpy the damaged area/total area ratio decreased significantly during both ischemia (SS: 0.526  0.012 vs. Rut-bpy: 0.216  0.07; p<0.05) and reperfusion (SS: 0.4201  0.04 vs. Rut-bpy: 0.114  0.03; p<0.05). MABP oscillated significantly less during the transition from ischemia to reperfusion in the groups treated with Rut-bpy (SS: 20.89 mmHg  11.77 vs. Rut-bpy: 6.49 mmHg  4.65; p<0.05). Conclusion - Rut-bpy was shown to protect rat brain cells during ischemia and reperfusion and helped maintain the blood pressure relatively stable during the transition from ischemia to reperfusion.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2017-12-18T19:17:24Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lúcio Kenny Morais - 2012.pdf: 9402569 bytes, checksum: 89e112868051e02f9a662b75b5fff235 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-12-19T12:09:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lúcio Kenny Morais - 2012.pdf: 9402569 bytes, checksum: 89e112868051e02f9a662b75b5fff235 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-19T12:09:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lúcio Kenny Morais - 2012.pdf: 9402569 bytes, checksum: 89e112868051e02f9a662b75b5fff235 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2012-04-27 / Introduction: Improved liver function from non-heart-beating donors seems to be related to short periods of warm ischemia; hence ischemia-reperfusion injury is a critical unsolved issue. Remote Ischemic preconditioning (PC) has been shown to protect the liver from ischemia-reperfusion injury. However little is known about the usefulness of ischemic precondition as a strategy to improve tolerance of non-heart-beating liver grafts to warm ischemia. Therefore we designed an experimental study aiming the effects of ischemic preconditioning on liver transplantation from non-heart-beating donors. Methods: Protocol was approved by Federal University of Goias Ethics Committee. Twentyfour Landrace pigs were assigned into 4 groups: I: after cardiac arrest livers were procured and transplanted; II: after PC and cardiac arrest livers were procured and transplanted; III: after PC and cardiac arrest, a 15 minutes period of warm ischemia was observed before livers were procured and transplanted; IV: after PC and cardiac arrest, a 30 minutes period of warm ischemia was observed before livers were procured and transplanted. Donors: cardiac arrest was obtained by ligation of coronary arteries and interruption of ventilation. PC (10` x 10`) and warm ischemia waiting time were observed accordingly. Livers were flushed with 4°C HTK solution cooled and procured. Recipients: standard technique was used. After one hour of reperfusion, blood and liver samples were collected and euthanasia was carried out. Non-parametrical statistical tests were applied. Results were expressed as medians. A value of p<0.05 was considered statistically significant. Results: AST, ALT, lactic acid and factor V levels were similar for the different studied groups by the end of one hour of reperfusion. A trend towards a deteriorated liver function was observed in group IV. When histological variables were addressed, vacuolization of hepatocytes and cell dropout scores were similar in all groups. Congestion score, vacuolization of hepatocytes and cell dropout scores tended to be higher in animals from group IV, but with no statistical significance. Conclusions: Remote ischemic preconditioning showed no benefits to liver grafts from nonheart- beating donors. Even though it did not result in benefits, no prejudice could be noticed in this research, as well. / Introdução: A melhora na função hepática em doadores de coração parado parece estar relacionada a curtos períodos de isquemia normotérmica, logo a lesão de isquemia e reperfusão é uma questão crucial não resolvida. O pré-condicionamento isquémico remoto (PC), promove proteção ao fígado da lesão de isquemia e reperfusão. No entanto, pouco se sabe sobre a utilidade do PC como uma estratégia para melhorar a tolerância de enxertos de doadores em parada cardíaca frente à isquemia normotérmica. Portanto, foi desenvolvido um estudo experimental visando os efeitos do pré-condicionamento isquêmico no transplante de fígado de doadores em parada cardíaca.Métodos: O protocolo do estudo foi aprovado na Universidade Federal de Goiás pelo Comitê de Ética em Pesquisa. Vinte e quatro suínos da raça Landrace foram divididos em 4 grupos: I: após parada cardíaca, o fígado foi captado e transplantado; II: após o PC, promoveu-se a parada cardíaca, seguida de captação e transplante hepático; III: após o PC, promoveu-se a parada cardíaca, seguida de um período de 15 minutos de isquemia normotérmica, com captação e transplante hepático em seguida; IV: após o PC, promoveu-se a parada cardíaca, seguida de um período de 30 minutos de isquemia normotérmica, com captação e transplante hepático em seguida. Nos doadores, a parada cardíaca foi obtida pela ligadura das artérias coronárias e interrupção do suporte ventilatório. O PC (10 'x 10') e o tempo de isquemia normotérmica foram observados em conformidade com a padronização. O fígado foi perfundido com solução HTK resfriada a 4 ° C e posteriormente captado. Para o receptor foi utilizada a técnica padrão. Após uma hora de reperfusão, amostras de sangue e de tecido hepático foram coletadas, seguida da realização da eutanásia. Foram aplicados testes estatísticos não-paramétricos. Os resultados foram expressos em medianas. O valor de p <0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Resultados: Os valores encontrados de AST, ALT, lactato e fator V foram semelhantes para os diferentes grupos estudados até o fim do experimento. No entanto, foi observado uma tendência para piora da função hepática no grupo IV. Em relação às variáveis histológicas, a vacuolização dos hepatócitos e a desestruturação celular foram semelhantes em todos os grupos; houve uma tendência de aumento da congestão no grupo IV, sem significância estatística. Conclusões: O pré-condicionamento isquêmico remoto não mostrou benefício para enxertos de fígado de parada cardíaca. Mesmo que o PC não tenha promovido benefícios nesta pesquisa, também não foram observados danos.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2018-02-07T12:20:16Z No. of bitstreams: 2 Tese - Fernanda Figueiredo Mendes - 2017.pdf: 3143804 bytes, checksum: f54c570c528aec9a899da580fdc4edd6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2018-02-07T12:54:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Fernanda Figueiredo Mendes - 2017.pdf: 3143804 bytes, checksum: f54c570c528aec9a899da580fdc4edd6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-07T12:54:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Fernanda Figueiredo Mendes - 2017.pdf: 3143804 bytes, checksum: f54c570c528aec9a899da580fdc4edd6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-17 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The aim was to determine the effect of ethanolic extract of pequi mesocarp on induced brain damage and ERK1/2 and AMPKα active forms in rats subjected to a hypercaloric diet. 48 rats were sorted into two groups of 24 according to the diet used, hypercaloric or commercial, provided daily for 60 days. The animals were separated into two subgroups of 12, treated or not with the extract, given daily for 30 days after diet start. Quantification of triglycerides, induction of global cerebral ischemia followed by reperfusion was performed. Later, euthanasia, brains harvest and visceral fat weighing were performed. Histopathological evaluation of brain lesions, quantification of the number of viable and non-viable cells in the cerebral cortex and hippocampus, and of cells marked by the anti-pKR-ERK1/2 and p-AMPKα antibodies in the cerebral cortex were performed. Hypertriglyceridemia and a significant increase in the amount of visceral fat were observed in the group that received hypercaloric diet (p <0.05). Histopathological evaluations showed that the group that received hypercaloric diet and was treated with the extract had fewer brain lesions of ischemia and reperfusion. The extract did not influence the number of viable and nonviable cells in the cerebral cortex and hippocampus, but significantly reduced p-ERK1 / 2 and p-AMPKα cell labelling in the hypercaloric diet group (p <0.05). In conclusion, ethanolic extract of pequi peel reduces induced brain lesions in rats fed a hypercaloric diet and has a modulatory effect on the expression of ERK1 / 2 and AMPKα in the cerebral cortex. / O objetivo com esse estudo foi determinar o efeito do extrato etanólico da casca de pequi sobre dano cerebral induzido em ratas submetidas a dieta hipercalórica e as expressões das formas ativas da ERK1/2 e AMPKα no córtex cerebral. Utilizaram-se 48 ratas alocadas em dois grupos de 24, de acordo com a dieta utilizada, hipercalórica ou comercial, fornecidas diariamente por 60 dias. Os animais foram distribuídos em dois subgrupos de 12, tratados ou não com o extrato, administrado diariamente 30 dias após o início das dietas. Foi realizada quantificação dos triglicerídeos e indução de isquemia cerebral global seguida de reperfusão. Seguido à eutanásia, colheram-se os encéfalos e pesou-se a gordura visceral. Foram feitas avaliação histopatológica das lesões no encéfalo, quantificação do número de células viáveis e inviáveis no córtex cerebral e hipocampo e células marcadas pelos anticorpos anti p-ERK1/2 e p-AMPKα no córtex cerebral. Havia hipertrigliceridemia e aumento significativo na quantidade de gordura visceral no grupo que recebeu dieta hipercalórica (p < 0,05). O grupo que recebeu dieta hipercalórica e foi tratado com o extrato apresentou menos lesões cerebrais de isquemia e reperfusão. O extrato não influenciou o número de células viáveis e inviáveis no córtex cerebral e hipocampo, porém, reduziu significativamente a marcação pela pERK1/2 e p-AMPKα no grupo da dieta hipercalórica (p < 0,05). Concluiu-se que o extrato etanólico da casca de pequi reduz lesões cerebrais induzidas em ratas alimentadas com dieta hipercalórica e apresenta efeito modulatório sobre a expressão da ERK1/2 e da AMPKα no córtex cerebral.