Orientador: Francesco Langone / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T21:22:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rogerio_Fabio_D.pdf: 6070171 bytes, checksum: 09dbd001354ef5fc115682fa346982ee (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Morte neuronal pode ser induzida em ratos neonatos por axotomia periférica. A privação de fatores tróficos sintetizados por células alvo seria uma importante causa, pois favoreceria a ocorrência de estresse oxidativo. No presente estudo, ratos com dois dias de vida (P2) foram submetidos a secção unilateral do ciático, tratados diariamente com o antioxidante melatonina e sacrificados entre P2 e P7, período em que ocorre maior perda celular. Na intumescência lombar, foram avaliadas a expressão e distribuição tecidual das isoformas 1 e 2 da superóxido dismutase (SODI e 2), das isoformas neuronal (nNOS), endotelial (eNOS) e induzível (iNOS) da óxido nítrico sintase (NOS) e da Bax e Bcl-2 (indutora e supressora da morte celular, respectivamente). Também foram investigadas a atividade da NOS e fragmentação de DNA. Cinco dias depois da lesão, a axotomia determinou perda de 55% dos motoneurônios. Após o mesmo período, o tratamento com melatonina garantiu a sobrevivência de 75% dos neurônios acometidos. Um dia depois da axotomia, a expressão da SODI foi reduzida em 25% nos ratos lesados. Por outro lado, a administração de melatonina aumentou a síntese desta enzima em 25%. A axotomia elevou a atividade da nNOS e eNOS 1 e 6 horas após a lesão. A melatonina aumentou a atividade da nNOS e eNOS e diminuiu a da iNOS no terceiro dia. Os níveis de mRNA e de células positivas para Bax e a ocorrência de quebra de DNA aumentaram no primeiro dia. Esta última foi reduzida pelo tratamento com melatonina. A axotomia não alterou a expressão e imunomarcação para iNOS e para Bcl-2, nem aumentou a imunorreatividade para Bax em motoneurônios. O efeito neuroprotetor e antioxidante da melatonina no presente modelo experimental suporta sua investigação em alterações neurológicas associadas com estresse oxidativo / Abstract: Neuronal death may be induced in neonatal rats by peripheral axotomy. Deprivation of trophic factor produced by target cells would play a role, since it would favor oxidative stress. In the present study, rats at an age of two days postnatally (P2) were subjected to unilateral sciatic transection, daily treatment with the antioxidant melatonin and sacrificed at time points ranging from P2 to P7, when the majority of the axotomised cells is 10s1. Expression and immunohistochemical detection of superoxide dismutase isoforms 1 and 2 (SOD 1 and 2) were investigated in the lumbar enlargement. Neuronal (nNOS), endothelial (eNOS) and inducible (iNOS) isoforms of nitric oxide synthase (NOS) and Bax and Bcl-2 (cell death promoter and suppressor, respectively) were also evaluated. Finally, NOS activity and DNA fragmentation were assessed. Five days after lesion, 55% of the axotomised motoneurons died. Melatonin rescued 75% ofthe injured motoneurons. On the first day, SODl expression was reduced by 25% in axotomised rats, whereas melatonin administration yielded an increase of 25% in such expression. nNOS and eNOS activity rose at 1 and 6 hours after lesion. Melatonin increased nNOS and eNOS activity and reduced iNOS catalytic rate on the third day. Bax mRNA levels, number of Bax-positive cells and DNA fragmentation augmented on the first day. The latter was decreased by melatonin. Axotomy did not alter immunostaining for and expression of iNOS and Bcl-2. In addition, the injury did not induce Bax expression in motoneurons. The neuroprotective and antioxidant effect of melatonin in the present experimental model support the investigation of this neurohormone in neurological diseases associated with oxidative stress / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

O estudo da recuperação de lesões nervosas periféricas do isquiático, fibular e tibial, com base nos métodos (De Medinaceli; Freed; Wyatt, 1982), (De Medinaceli; Derenzo; Hunter, 1984), (Carlton; Goldberg, 1986) e (Bain; Mackinnon; Hunter, 1989), obtidos por meio da análise motora, é considerado um bom critério de avaliação para a quantificação do grau de avaliação nervosa. Elas podem ser estudadas através de uma ampla variedade de técnicas que incluem a eletrofisiologia muscular e a morfologia. Porém nem mesmo em condições experimentais controladas, uma correlação da regeneração dos nervos periféricos é completa, porque não provêem informações precisas do estado funcional do nervo. A avaliação da função sensorial é imprecisa e usualmente indireta devido a causas de enervações sobrepostas. Sendo assim, há explicação para os diferentes métodos de avaliação funcional propostos com os avanços tecnológicos, e o aprimoramento dos métodos de captação, armazenamento e processamento dos dados obtidos. O sistema de análise funcional dos nervos periféricos - AFNP, nome dado ao software devido a sua funcionalidade que é de análise funcional de nervos periféricos, apresenta uma interface de fácil interação, emprego e de apresentação das informações ao usuário, através de auxílio de informações de cada contexto do sistema de como utilizá-lo. Sua precisão e a uniformidade das avaliações proporcionaram resultados confiáveis. O uso de recursos gráficos e de relatórios pode disponibilizar os resultados obtidos, por meio de gráficos das médias e de desvios-padrão. A informatização deste processo, além de fornecer ao usuário uma maior agilidade na avaliação, permite ao pesquisador a utilização de um número maior de animais nos grupos experimentais, facilitando não só a captação, bem como o armazenamento e o processamento dos dados. A flexibilidade foi um resultado muito importante a ser ressaltado, pois mais de um usuário tem a possibilidade de interagir no sistema. / The study of the nervous recuperation of peripheral lesions of the sciatic, fibular and tibial, with base in the methods of (De Medinaceli; Freed; Wyatt, 1982), (De Medinaceli; Derenzo; Hunter, 1984), (Carlton; Goldberg, 1986) and (Bain; Mackinnon; Hunter, 1989), obtained through the motive analysis, is considered a good evaluation criterion for the quantification of the degree of nervous evaluation. They can be studied through a wide variety of techniques including the muscular electrophysiology and the morphology. However not even in controlled experimental conditions, a correlation of the regeneration of the peripheral nerves is complete, because they don\'t provide necessary information of the functional state of the nerve. The evaluation of the sensorial function is imprecise and usually indirect due to causes of overlap enervations. Being like this, the explanation for the different functional evaluation methods proposed with the technological progresses and the improvement of the reception methods, storage and processing of the obtained data. The system of functional analysis of the peripheral nerves - AFNP, name given to the software due to its functionality that is of functional analysis of outlying nerves, it presents an interface of easy interaction, work and of presentation of the information to the user, through help information of each context of the system of how to use it. Its precision and the uniformity of the evaluations provided reliable results. The use of graphic resources and reports they can make available the obtained results, through graphs of the averages and of deviations pattern. With the computerization of this process, besides supplying the user a larger agility in the evaluation, it provides the researcher the use of a larger number of animals in the experimental groups, facilitating not only the reception, as well as the storage and the processing of the data. The flexibility was a very important result to be stood out, therefore more than one user has the possibility to interact with the system.

A subnutrição é um quadro caracterizado por escassez proteico-calórica e sua manifestação na República de Moçambique é responsável por um terço das mortes de crianças com idade inferior a 5 anos. É a responsável pela falha no crescimento nos primeiros anos de vida e no Brasil, até 2011, era considerada um problema grave de saúde pública. O objetivo deste trabalho foi investigar possíveis repercussões no tecido nervoso periférico de ratos Wistar subnutridos, comparando-os com aqueles que receberam a dieta padrão de Moçambique (baseada em proteína vegetal) e com aqueles que receberam nutrição balanceada. Para a realização deste estudo foram utilizados 15 ratos machos da linhagem Wistar e as técnicas utilizadas foram: Microscopia Eletrônica de Transmissão e Varredura, possibilitando a aquisição de dados quantitativos e qualitativos, utilizando ainda princípios estereológicos. Os resultados demonstraram alterações morfológicas nos grupos S e M, assim como diferenças quanto ao contorno das fibras nervosas e a disposição das camadas de mielina. Em relação ao peso e a ASTn, os três grupos são diferentes estatisticamente. Ao contrário, quanto à densidade de fibras nervosas mielínicas e ao número total estimado de fibras mielínicas, não houve diferença significante entre os grupos. Em relação à ASTax do nervo isquiático, houve significância entre os três grupos, já na análise da ASTbm e da ASTfm, houve diferença apenas entre os grupos S ≠ N, M ≠ N. Foi concluído, portanto que a subnutrição promoveu alterações morfológicas na estrutura do nervo isquiático e nas fibras nervosas mielínicas que podem ser irreparáveis, e numericamente gerou um mecanismo compensatório de aumento de densidade em relação a área do nervo, ou seja, um nervo de área menor, porém com fibras nervosas mais próximas, não havendo diferença na quantidade de fibras por nervo / Undernutrition is a condition characterized by protein-calorie shortage and its manifestation in the Republic of Mozambique is responsible for a third of deaths of children under the age of 5 years. It is responsible for growth failure early in life and in Brazil until 2011, was considered a serious public health problem. The objective of this study was to investigate possible effects on peripheral nerve tissue of Wistar rats undernourished, comparing them with those who received standard diet of Mozambique (based on vegetable protein) and those who received balanced nutrition. For this study were used 15 male rats of the Wistar and techniques used were: Transmission Electron Microscopy and Scanning, enabling acquisition of quantitative and qualitative data, using stereological principles. The results showed morphological changes in S and M groups as well as differences in the contour of nerve fibers and of the layers of myelin. In terms of weight and ASTn, the three groups are statistically different. Rather, density of myelinated nerve fibers and the estimated total number of myelinated fibers, not present significant difference between groups. Regarding ASTax sciatic nerve, there was significant difference between the three groups, and in the analysis of ASTms and ASTmf, there was difference only between the groups. It was concluded therefore that malnutrition promoted morphological changes in the sciatic nerve structure and myelin nerve fibers that may be irreparable, numerically generating a compensatory mechanism of density increase in relation to nerve area, in other words, a nerve smaller area but with next nerve fibers, with no difference in the number of nerve fibers by

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2017-12-01T13:24:56Z No. of bitstreams: 2 JULIANA _ANTUNES2016.pdf: 2044516 bytes, checksum: 8b8259c8bf77ca4b4a753df40515ef1f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-01T13:24:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 JULIANA _ANTUNES2016.pdf: 2044516 bytes, checksum: 8b8259c8bf77ca4b4a753df40515ef1f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The research is experimental, quantitative and random character, which aimed to analyze the effect of resistance exercise climb stairs, on the regeneration of the sciatic nerve of Wistar rats. The sample consisted of 24 animals were randomly separated into four groups: GC - control; GE - only exercised; GL - injured and untreated; and GLE - injured and treated. The compressive lesion of the right sciatic nerve was performed in anesthetized animals and was to conduct a nerve impingement in 30 seconds with hemostat. From the third day after surgery, the animals of GE and GLE were submitted to resistance exercise climb stairs, and made two sets of ten climbs the ladder with overhead 100 grams adapted to its tail, with an interval of one minute between one series and another 5 days a week for 3 weeks. In the course of this period, all animals were evaluated for the presence of edema and nociceptive threshold of the right hind limb. After treatment, the animals were anesthetized and euthanized to collect a fragment of two centimeters of the right sciatic nerve, which was subjected to routine histological processing, for morphological analysis and Western blotting technique for molecular analysis. Regarding edema evaluation results, there was only meant difference in comparing the evaluations (p <0.001), indicating reduced over time member of the volume, but there was no significant difference between groups. With regard to nociception results in the lesion site and planting region was observed difference between the ratings (p <0.001), and the nociceptive threshold increased over the study time, however between the groups, so there was difference between compared to GC and GE, GL and GLE, with the former had higher results. Regarding histological analysis, GC and G2 showed normal appearance around nerve tissue, as GL and GLE showed large amount of inflammatory infiltrate, degeneration and disruption of nerve fibers, but in GLE also met you merge nerve fibers. Regarding the morphometric analysis, no significant difference between the groups, as, fiber density, amount of axons and the quotient G; For the nerve fiber diameter and myelin sheath, GC and GE were significantly better results when compared to GL and GLE; and as the diameter of the axon GC obtained significantly higher results than the other groups. Finally, molecular analysis showed values higher brain-derived neurotrophic factor in injured groups. Therefore, it is concluded that the injury model in the present study was effective to cause significant changes in the sciatic nerve of the animal, but resisted exercise climb stairs, the proposed parameters was not significantly effective in reducing edema and pain of animals and could not accelerate morphological regeneration after sciatic nerve compression injury. / A pesquisa é de caráter experimental, quantitativa e randomizada, que teve como objetivo, analisar o efeito do exercício físico resistido de subida em escada, sobre a regeneração do nervo isquiático de ratos Wistar. A amostra foi composta por 24 animais, separados aleatoriamente em quatro grupos: GC – controle; GE – somente exercitado; GL – lesionado e não tratado; e GLE – lesionado e tratado. A lesão compressiva do nervo isquiático direito foi efetuada nos animais anestesiados e consistiu em realizar um pinçamento no nervo por 30 segundos com pinça hemostática. A partir do terceiro dia de pós-operatório, os animais de GE e GLE foram submetidos ao exercício físico resistido de subida em escada, sendo realizadas duas séries de dez subidas na escada, com sobrecarga de 100 gramas adaptada a sua cauda, com intervalo de um minuto entre uma série e outra, 5 dias por semana durante 3 semanas. Ao decorrer deste período, todos os animais foram avaliados, quanto a presença de edema e limiar nociceptivo do membro pélvico direito. Ao término do tratamento, os animais foram anestesiados e eutanasiados para a coleta de um fragmento de dois centímetros do nervo isquiático direito, o qual foi submetido a processamento histológico de rotina, para analise morfológica e à técnica de Western Blotting para análise molecular. Com relação aos resultados da avaliação do edema, observou-se diferença significava somente na comparação entre as avaliações (p<0,001), denotando redução do volume do membro ao longo do tempo, porém não houve diferença significativa entre os grupos. Quanto aos resultados da nocicepção no local da lesão e na região plantar, foi possível observar diferença entre as avaliações (p<0,001), sendo que o limiar nociceptivo aumentou com o passar do tempo de estudo, porém entre os grupos, so houve diferença entre GC e GE comparado a GL e GLE, sendo que os primeiros obtiveram resultados maiores. Referente a análise histológica, GC e GE apresentaram aspecto normal em todo tecido nervoso, já GL e GLE mostraram grande quantidade de infiltrado inflamatório, degeneração e desorganização das fibras nervosas, porém em GLE encontrou-se também fibras nervosas integras. Com relação a análise morfométrica, não ocorreu diferença significativa entre os grupos, quanto a, densidade de fibras, quantidade de axônios e ao quociente G; Para o diâmetro da fibra nervosa e da bainha de mielina, GC e GE apresentaram resultados significativamente maiores quando comparados ao GL e GLE; e quanto ao diâmetro do axônio GC obteve resultados significativamente maiores que os demais grupos. E por fim, a análise molecular, mostrou valores maiores do fator neurotrófico derivado encéfalo nos grupos lesionados. Portanto, conclui-se que o modelo de lesão realizado neste estudo foi efetivo, pois causou alterações significativas no nervo isquiático dos animais, porém o exercício físico resistido de subida em escada, nos parâmetros propostos, não foi significativamente eficiente na redução do edema e da dor dos animais, bem como não conseguiu acelerar a regeneração morfológica do nervo isquiático após lesão compressiva.

Nas lesões onde há secção de nervos o cirurgião necessita restabelecer a continuidade entre dois cotos. Apesar de ser considerado como o método padrão, a sutura com fios de náilon pode ocasionar reação inflamatória prejudicando o processo de regeneração ou ser de difícil execução, nos casos de nervos de calibres reduzidos. O reparo com adesivo de fibrina é uma opção ao reparo com sutura convencional, mas a comparação entre esses dois métodos apresenta resultados conflitantes na literatura. O objetivo deste trabalho foi comparar os parâmetros usualmente empregados na avaliação da regeneração do nervo ciático do rato previamente seccionado com a utilização do reparo com a sutura convencional, com o adesivo de fibrina ou uma combinação das duas técnicas. Previamente à secção do nervo ciático do lado direito, cada animal foi submetido à mensuração do índice funcional ciático a partir de medidas obtidas da impressão das patas traseiras durante a marcha. Após a exposição cirúrgica procedeu-se à avaliação eletrofisiológica que consistia na mensuração da latência, amplitude e velocidade de condução do potencial de ação do nervo e do potencial de ação motor. Com técnica microcirúrgica, os nervos foram seccionados e reparados de forma imediata. Três grupos com 10 animais cada foram formados de acordo com o reparo utilizado. No grupo A, o reparo foi realizado com a sutura utilizando-se quatro pontos de fio de náilon 10-0; no grupo B a coaptação dos cotos do nervo foi realizada com a aplicação do adesivo de fibrina; no grupo C o reparo foi realizado com um ponto de náilon 10-0 associado com a aplicação do adesivo de fibrina. Após 12 semanas o índice funcional ciático foi avaliado nos três grupos e a avaliação funcional da regeneração foi obtida comparando-se os valores deste índice. Após 24 semanas os animais foram reoperados para avaliação eletrofisiológica com as medidas dos mesmos parâmetros que foram avaliados antes da secção do nervo. A avaliação eletrofisiológica da regeneração comparou os valores da amplitude, latência e velocidade de condução dos potencias de ação do nervo e motor, os valores da razão entre a velocidade de condução na reoperação e a velocidade de condução antes da secção do nervo para os dois potenciais e a razão entre a amplitude na reoperação e a amplitude antes da secção dos nervos dos dois potenciais. Após esta avaliação, os nervos foram fixados e retirados para a obtenção de segmentos proximais e distais à região do reparo com a finalidade de se proceder ao estudo histomorfométrico com contagem total dos axônios regenerados, mensuração dos diâmetros desses axônios nesses segmentos e quantificação do número de axônios regenerados em situação extrafascicular no segmento distal. A análise estatística foi realizada através de comparação dos parâmetros obtidos entre os grupos com a análise de variância ou com o teste de Kruskal-Wallis. Quando era identificada uma diferença significativa entre os grupos, para p < 0,05, foi utilizado um teste de comparações múltiplas através do método de Tukey ou Duncan. Após 12 semanas do reparo os resultados do índice funcional ciático no grupo B foram superiores aos do grupo A. Não houve diferença significativa na avaliação desse parâmetro entre os grupos B e C. Os animais do grupo B apresentaram melhores resultados na regeneração em comparação com o grupo A quando avaliados a latência, a velocidade de condução após o período de observação e a razão entre a velocidade de condução realizada na reoperação e o mesmo parâmetro obtido antes da secção do nervo durante a mensuração do potencial de ação motor. Os animais do grupo C apresentaram melhores resultados na regeneração em comparação com o grupo A quando avaliada a razão entre a velocidade de condução realizada na reoperação e o mesmo parâmetro obtido antes da secção do nervo na mensuração do potencial de ação motor. Não houve diferença na regeneração avaliada pelo estudo eletrofisiológico entre os grupos B e C. Não houve diferenças significativas na avaliação histomorfométrica entre os três grupos. Considerando os resultados conclui-se que o reparo com o adesivo de fibrina forneceu as melhores condições para a regeneração em comparação com a sutura / Injuries involving nerves section require the surgeon to reestablish the continuity between the two stumps. Although direct suturing of the nerve using Nylon is considered a standard procedure, it can cause inflammatory reaction impairing the regeneration, or the procedure can be difficult due to reduced nerve caliber. The repair with fibrin glue is an alternative to the conventional suture technique, but comparison between these two techniques have presented conflicting results in the literature. The objective of this study was to compare the parameters commonly applied in assesssing the regeneration of the sectioned rat sciatic nerve, using conventional suture, fibrin glue and a combination of both techniques. Before sectioning the right sciatic nerve, the sciatic functional index of each rat was determined by measuring the printing of the posterior limbs during gait. After the surgical exposure, the electrophysiologic evaluation was performed. It consisted of measuring the latency, magnitude and conduction velocity of the nerve and muscular action potentials. Using the microsurgical techniques, the nerves were sectioned at middle and repaired immediately. Thirty rats were divided evenly into three groups accordingly to the nerve repair technique. In group A, the nerve was repaired with four-stitch suture using Nylon 10-0; in group B the stumps were united using fibrin glue; in group C, the nerve was repaired with a single-stitch suture using Nylon 10-0 and fibrin glue. After 12 weeks, the sciatic functional index of the three groups was evaluated. The functional evaluation of the nerve regeneration was obtained by comparing the sciatic functional index of the three groups. After 24 weeks, the rats underwent reoperation for electrophysiologic assessment based on the same parameters used before the nerve section. The electrophysiologic evaluation of the nerve regeneration consisted of comparing the results of the same parameters evaluated in the first surgery, the ratio between the conduction velocity of the action potential at the reoperation and the same velocity before the division of the nerve and the ratio between the magnitude of the action potential at the reoperation and before the nerve section. After electrophysiologic evaluation, the nerves were fixed and removed to obtain the proximal and the distal stumps for histomorphometric study. The histomorphometric study consisted of total count of regenerated axons, measurement of the regenerated axons diameter in both stumps, and the determination of the number of the regenerated axons in extrafascicular location in the distal stump. Statistical analysis was performed by comparing the parameters obtained from the three groups using ANOVA or the Kruskal-Wallis test. Whenever a significant difference between the groups was identified, with p<0.05, a multiple comparison test (Tukey or Duncan) was applied. With regards to the sciatic functional index 12 weeks after the repair, the rats of group B presented better outcome than those of group A. There was no significant difference between groups B and C. When latency and the nerve conduction velocity assessed at the reoperation, and the ratio between the conduction velocity at the reoperation and before the nerve division in the motor action potential evaluation were measured, the rats of group B presented better results in regeneration than those of group A. As for regeneration, with the motor action potential evaluation, rats of group C presented better results than those of group A when the ratio between the nerve conduction velocity at the reoperation and before the nerve division was considered. No difference between groups B and C was found in regeneration evaluated by means of electrophysiologic study. There were no significant differences in regard to the histomorphometric evaluation between the three groups. Based on the results, we conclude that nerve repair using fibrin glue provided the best conditions for regeneration than the suture

Este trabalho teve como objetivo estudar as alterações microvasculares intraneurais agudas em nervo isquiático de rato submetido à esmagamento por diferentes cargas. Foram utilizados sessenta ratos machos da linhagem Wistar, distribuídos em dois grupos experimentais de acordo com o protocolo de injeção de vasos e subdivididos de acordo com a carga de esmagamento. Os nervos isquiáticos direitos de cada grupo experimental foram isolados e submetidos ao esmagamento com diferentes cargas (0,5 Kg, 1 Kg, 5 Kg, 10 kg e 15 kg) por 10 minutos e os nervos isquiáticos esquerdos foram utilizados como controle. Após o esmagamento, 30 animais foram submetidos ao Protocolo I, que constou de: cateterização da aorta abdominal, perfusão manual da solução composta de tinta da China e gelatina 5% em formol 10%, dissecação e retirada dos nervos direitos e esquerdos, desidratação e diafanização para análise longitudinal dos vasos intraneurais. Os outros trinta animais foram submetidos ao Protocolo II, que constou de: cateterização da aorta abdominal e perfundidos com solução composta de tinta da China e gelatina 5% em soro fisiológico e, após, mantidos em freezer -20°C por uma hora. Em seguida os nervos foram dissecados e retirados em toda a sua extensão, cortados em 3 fragmentos, congelados em isopentano em gelo seco e armazenados em freezer -70°C, seccionados em cortes transversais semi-seriados em criostato para análise e contagem dos vasos intraneurais. Os resultados mostraram regiões de hematoma endoneural e epineural nas diferentes cargas utilizadas indicando que as forças de esmagamento foram suficientes para lesar os vasos intraneurais do nervo isquiático, especialmente com cargas elevadas. A análise morfométrica mostrou um comportamento diferente nas três regiões estudadas, constatando menor número de vasos na região do esmagamento e não nas regiões acima e abaixo da mesma. Estes resultados sugerem lesão localizada dos vasos intraneurais que foi proporcional à carga de esmagamento, causando hematoma endoneural e epineural, o que criará um microambiente desfavorável para a regeneração das fibras nervosas que também foram lesadas nesse modelo. / The objective of this work was to study the acute intraneurial microvascular changes in the rat sciatic nerve submitted to a crush injury by different loads. Sixty Wistar male rats were used and distributed into two experimental groups according to vessel injection protocol and subdivided according to the crush load. The right sciatic nerves of each experimental group were isolated and submitted to crush by different loads (0,5 Kg, 1 Kg, 5 Kg, 10 kg and 15 kg) for ten minutes. The left sciatic nerves were used as controls. After the crush, thirty animals were submitted to Protocol I, which consisted of: abdominal aorta catheterization, manual perfusion withf a solution composed of China ink and gelatin 5% in formaldehyde 10%. After that the right and left nerves were collected, fixed in formaldehyde10%, dehydrated and diaphanized for longitudinal analysis of the intraneurial vessels. The other thirty animals were submitted to Protocol II, which consisted of: abdominal aorta catheterization, as described above and perfused with a solution of China ink and gelatin 5% in physiologic saline and then placed in a freezer at -20°C for one hour. After that the nerves were dissected and removed in their entire length, cut into three fragments, frozen in isopentane and dry ice and placed in a freezer at -70°C, cut in semi-serial histological transverse sections for analysis and intraneurial vessel quantification.The results showed endoneurial and epineurial haematoma areas in the different groups, indicating that the crush forces were enough to damage the intraneurial vessels, specially with high loads. The morphometrical analysis showed a different profile in the three fragments, with smaller number of vessels in the crush region then above and below, suggesting that the damage to intraneurial vessels was proportional to the crush load, causing endoneurial and epineurial haematoma, which creates an unfavorable microenvironment for the regeneration of the nerve fibers that were also damaged in that model.

A verificação do trajeto do nervo isquiático por meio da dissecação da articulação coxofemoral de cadáveres da espécie canina, e a sintopia destas estruturas, tem relevância em ser pesquisada na medida em que tal relação neuroarticular pode estar envolvida nos casos de neuropraxia durante as intervenções cirúrgicas de artroplastia total do quadril de cães. O escopo do estudo foi o de apresentar uma contribuição aos cirurgiões em prendizado na implantação das próteses acetabular e femoral, para que possam compreender as relações anátomo-cirúrgicas entre a articulação coxofemoral e o nervo isquiático, e com a finalidade de potencializar positivamente o resultado do pós-operatório imediato dos cães. Foram utilizadas 20 articulações coxofemorais provenientes de 10 cadáveres de cães, com raças definidas ou SRD, machos ou fêmeas, com peso variável, sempre acima de 20 quilogramas, sem alterações macro-morfológicas nas referidas articulações, e dissecadas por técnica clássica. Realizou-se manobras de abdução articular para a obtenção de luxação articular, além da retração caudal do fêmur proximal, à semelhança do que ocorre no transcorrer da aplicação da técnica operatória de colocação da prótese total de quadril. A dissecação cirúrgica das estruturas estudadas revelou um aumento considerável de contato entre o nervo isquiático e a articulação coxofemoral durante as manobras de abdução articular em aproximadamente 90º, quando adicionada de retração caudal do femur proximal. Assim, conclui-se que a etapa ora referida, necessária pela técnica cirúrgica de artroplastia total de quadril em cães, pode levar a lesão do nervo isquiático, devendo o cirurgião estar atento na realização destas manobras. / The ischiatic nerve course verification using dissection of the hip joint from cadavers of the canine species, as well as the sintopy of these structures, have a relevant aspect to be investigated, because these neuro-articular relation can be involved in cases of neurapraxia during some surgical interventions of total hip arthroplasty in dogs. The main objective of the study was to present a contribution to the new surgeons during their learning phase of implantation of the acetabular and femoral prosthesis, so they can understand the anatomic and surgical relation between the hip joint and the ischiatic nerve, aiming to potentially make positive the immediate post surgical result of the treated dogs. 20 hip joints from 10 cadavers of dogs were utilized, with pure breeds or not, males or females, with variable weight, always over 20 kilos, without macro-morphological alterations in the hip joints, and dissected using the classical technique. Hip joint abduction manoeuvres were made to obtain the desired joint luxation, besides a caudal retraction of the proximal femur, like occurs during the application of the surgical technique utilized to perform the total hip replacement surgery. The surgical dissection involving the studied structures showed a significant increasing contact between the ischiatic nerve and the hip joint during the articular abduction manoeuvres, using approximately a 90 degree angle, and when added a caudal retraction of the proximal femur. Consequently, conclusion was that the above-mentioned stage, needed to perform the total hip arthroplasty procedure in dogs, can lead to a lesion of the ischiatic nerve. Thus, the surgeons shall be alert during the realization of these manoeuvres.

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1289_1.pdf: 6503896 bytes, checksum: 2024a3abccca22b725a7b6c451be0695 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O nervo isquiático (nervo espinal) é constituído por fibras mielínicas aferentes somáticas e eferentes somáticas e autonômicas. Distribui-se extensamente aos membros inferiores e é comumente afetado pelas neuropatias, principalmente a diabética. O nervo vestíbulo-coclear (VIII nervo craniano) é um nervo aferente puramente sensitivo, constituído por prolongamentos de neurônios bipolares localizados no gânglio espiral (de Corti). Muito tem sido descrito na literatura a respeito das alterações morfológicas e morfométricas nos nervos espinais, tanto em pacientes diabéticos quanto em modelos experimentais da doença. Entretanto, uma comparação entre essas alterações e as eventuais lesões observadas em nervos cranianos ainda não foi realizada. Mais ainda, é amplamente descrito na literatura que pacientes diabéticos apresentam distúrbios da audição. Apesar das alterações histológicas das estruturas da orelha interna de pacientes e em modelos experimentais, uma avaliação histológica do nervo vestíbulo-coclear ainda não foi descrita. No presente estudo, foram descritas alterações ultraestruturais na comparação entre um nervo espinal e um craniano, em ratos com diabete crônico induzido experimentalmente. Foram utilizados ratos machos da linhagem Wistar (n=12), mantidos com dieta padrão do biotério, ao longo do experimento. Animais com 42 dias de idade (n=6), em jejum por 24 horas, foram injetados 60 mg/kg de STZ em dose única, via i.p. Animais controles (n=6) receberam igual volume da solução tampão citrato, pH de 4.5. Após 10 semanas da inoculação da droga os animais adultos foram perfundidos sistemicamente com solução Karnowisky. Em seguida, os nervos isquiáticos e vestíbulo-cocleares de ambos os lados foram retirados, processados com técnicas histológicas de rotina para inclusão em resina epóxi e observados ao microscópio eletrônico de transmissão. Nossos resultados mostraram a presença de fibras mielínicas grandes com sinais de atrofia e degeneração axonal tanto no nervo isquiático quanto no nervo vestíbulo-coclear. Algumas fibras mielínicas de pequeno diâmetro dos nervos isquiáticos mostraram sinais de degeneração da bainha de mielina, caracterizando, para esse nervo, uma neuropatia tipo mista. Em ambos os nervos, células de Schwann com citoplasma edemaciado estavam presentes. Nossos achados sugerem que o diabete crônico induzido pela STZ em ratos, provocou alterações das fibras mielínicas e das células de Schwann, compatíveis com os sinais e sintomas clássicos da neuropatia diabética. As alterações observadas no nervo espinal são comparáveis às observadas no nervo craniano. Alterações morfológicas ultraestruturais do nervo vestíbulo-coclear no diabete experimental em ratos estão sendo descritas pela primeira vez na literatura e podem corroborar para o melhor entendimento das alterações da audição encontradas em pacientes diabéticos

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T08:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perez_Matheus_M.pdf: 2859331 bytes, checksum: 541101c0093208622bf70dc9b70cf007 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O sistema nervoso é muito sensível à lesões e sua capacidade regenerativa é limitada. Assim, na maioria dos casos, o reparo tecidual não ocorre ou ocorre de forma incompleta, causando danos irreversíveis. Embora o sistema nervoso do neonato apresente maior capacidade regenerativa do que o adulto, a regeneração também é um processo complexo e limitado. Para melhor compreensão dos mecanismos e limitações da regeneração do SNC, tanto na fase neonatal como na fase adulta, diversos modelos de lesão têm sido propostos por vários autores, inclusive transecção de nervo periférico. Através desses estudos experimentais, diferentes modalidades terapêuticas foram sugeridas, com intuito de evitar as alterações que levam à morte neuronal, seja na fase neonatal ou adulta. Para isso, muitas substâncias, com propriedades neuroprotetoras, têm sido testadas no processo de regeneração, plasticidade sináptica e para evitar a morte neuronal após lesão do sistema nervoso. Dentre a grande variedade de substâncias com potencial neuroprotetor, estão alguns derivados da planta Cannabis sativa. Um deles, o canabidiol (CBD), é o principal componente não-psicotrópico produzido nas glândulas encontradas na superfície das folhas da planta. O presente trabalho teve como objetivo investigar o potencial neuroprotetor do canabidiol e, para isso, foram utilizados ratos neonatos da linhagem Wistar, divididos nos seguintes grupos experimentais: grupo submetido à axotomia do nervo isquiático e tratamento com o canabidiol (grupo CBD), grupo submetido à axotomia e tratamento veículo (grupo PB) e grupo controle, com axotomia sem tratamento (grupo sem tratamento). Assim, cortes histológicos utilizando coloração de Nissl mostraram que os grupos tratados com canabidiol (15 e 30mg/kg) mostraram maior sobrevivência (21%; p<0.0001) de motoneurônios medulares, quando comparados aos grupos que não foram tratados com canabidiol ou tratados com canabidiol (5mg/kg). A análise imunohitoquímica, empregando o anticorpo anti-sinaptofisina revelou, no grupo tratado com canabidiol, preservação de imunoreatividade, refletindo preservação de circuitos sinápticos medulares. Tal manutenção de terminais foi 30% superior nos grupos tratados com canabidiol, comparativamente aos grupos controle (p=0,0003). A imunoistoquímica para os anticorpos anti-GFAP (astrócito) e anti-IBA 1(migroglia) revelou uma menor imunomarcação para o grupo tratado com canabidiol, quando comparado aos grupos não tratados. Tal fato demonstra que o canabidiol reduz astrogliose (anti-GFAP) em 30% (p=0,0149) e reação microglial em 27% (p=0,0086). A análise para detecção de células apoptóticas, através reação de TUNEL (teminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) dUTP nick end labeling), mostrou que o tratamento com canabidiol foi neuroprotetor, quando comparado ao grupo axotomia sem tratamento (p=0,0063). Em conjunto, os presentes resultados mostram que o canabidiol apresenta promissora propriedade neuroprotetora, devendo ser melhor investigado, com vistas ao seu emprego clínico futuro / Abstract: The CNS is very sensitive to injury and their regenerative capacity is limited, so in most cases the tissue repair does not occur or occurs incompletely, leading to irreversible damage. Although the nervous system of neonatal rats presents a greater regenerative capacity than adults, the regenerative process is still complex and limited. To better understand the mechanisms and limitations of CNS regeneration, both in the neonatal and adulthood, various injury models have been proposed by several authors, including peripheral nerve transaction. Through these experimental studies several therapeutic modalities have been proposed, in order to prevent the neuronal death caused by injuries and pathological processes. For this reason, many substances with neuroprotective properties have been tested in the regeneration process, synaptic plasticity and to prevent neuronal death after nervous system injury. Among the wide variety of substances with potential neuroprotective action, some are derived from the Cannabis sativa. One, cannabidiol (CBD) is the major non-psychotropic component produced by the glands found on the surface of plant leaves. The present study aimed to investigate the neuroprotective potential of CBD. We used Wistar neonatal rats that were divided into the following experimental groups: sciatic nerve axotomy and CBD treatment (CBD group), axotomy and veículo treatment (PB group) and a control group, without treatment (no-treatment group). Thus, Nissl stainning in spinal cord cross sections showed that the CBD groups (15 e 30mg/kg) had a higher neuronal survival (21%, p <0,0001) when compared to the CBD 5mg/kg group, PLB and no treatment groups. Immunohistochemical analysis, done by ipsi/contralateral ratio of integrated density of pixels quantification, of anti-synaptophysin labeling showed that CBD groups had a greater immunostaining pattern when compared to the other experimental groups (30%, p<0,0003) reflecting a higher preservation of synapses after CBD treatment. Imunolabeling Anti-GFAP and anti-Iba 1 revealed a lower immunostaining in CBD group, showing that CBD treatment decreases the astrocytosis process in 30% (p = 0,0149) and reduce reactive microgliosis in 27% (p=0,0086), when compared to the others experimental groups. Aimed to detect apoptotic cells, we used TUNEL reaction. Quantitative analysis showed that the CBD treatment reduced the apoptotic nuclei detectable, when compared to other experimental groups. These results show that CBD presents promising neuroprotective property and should be better investigated aiming its future clinical use / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

INTRODUÇÃO: O tratamento padrão para lesões de nervo periférico que não podem ser suturados primariamente é a enxertia de nervo autólogo. Esse método, porém, carece de resultados satisfatórios e impõe algumas limitações técnicas e complicações. Várias opções já foram estudadas como alternativas ao enxerto de nervo, porém ainda não há conduto biológico ou sintético disponível para uso clínico que tenha a mesma capacidade regenerativa do enxerto de nervo autólogo. Os avanços em cultura celular e o maior entendimento dos mecanismos moleculares e celulares da regeneração nervosa levaram ao uso de células promotoras de regeneração associado aos condutos na tentativa de melhorar os resultados da reconstrução nervosa. Vários estudos demonstraram que o uso de célulastronco derivadas de tecido adiposo (ADSC) em condutos aloplásticos potencializa a regeneração neural. No entanto, nenhum estudo até hoje comparou a adição de ADSC indiferenciadas em conduto aloplástico ao tratamento padrão com autoenxerto. Esse estudo tem como objetivo avaliar a influência da adição de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo em conduto de fibrina na regeneração de nervo periférico e comparar com enxertia de nervo autógeno em modelo experimental de ratos. MÉTODO: Em um modelo de lesão de nervo ciático (defeito de 10 mm) foram avaliados 30 ratos Wistar divididos em 3 grupos. O defeito de nervo foi reconstruído usando conduto de fibrina (Grupo Conduto, n=10), conduto de fibrina acrescido de ADSC (Grupo ADSC, n=10) e autoenxerto do nervo (Grupo Autoenxerto, n=10). A avaliação funcional dos ratos foi realizada com o teste de marcha (walking track analysis) com 4, 8 e 12 semanas e o índice de função ciática (IFC) foi determinado. Após 12 semanas, o peso do músculo tríceps sural foi avaliado. Segmentos dos nervos regenerados também foram coletados para análises histológicas como densidade axonal e diâmetro médio das fibras. RESULTADOS: O grupo Conduto mostrou recuperação funcional no teste da marcha após a reconstrução do nervo, porém com resultados inferiores aos outros dois grupos. O grupo ADSC mostrou recuperação intermediária e o grupo Autoenxerto obteve os melhores resultados (IFC com 12 semanas de -53,3±.3 vs -44,7±3 vs - 35,6±2, respectivamente, p < 0,001). A relação de peso do músculo tríceps sural no grupo Conduto foi de 41,1±3%, no grupo ADSC de 53,3±4% e no grupo Autoenxerto de 71,0 ± 4% (p < 0,001). Na avaliação histológica, o grupo Conduto mostrou densidade axonal de 39,8±3 axônios/10.995?m2 e diâmetro médio das fibras de 3,9 ± 0?m2, o grupo ADSC densidade axonal de 58,8 ± 3 axônios/10.995um2 e diâmetro médio das fibras de 4,9 ± 1um2 e o grupo Autoenxerto densidade axonal de 67,1±2 axônios/10.995?m2 e diâmetro médio das fibras de 8,9±1um2 (p < 0,001). CONCLUSÃO: A adição de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (ADSC) em conduto de fibrina na regeneração de nervo periférico, em modelo experimental de ratos, mostrou recuperação funcional e regeneração histológica estatisticamente mais significativa comparada à reconstrução somente com conduto de fibrina, porém ainda aquém dos resultados obtidos com enxertia de nervo autógeno / Introduction: The standard treatment for peripheral nerve injuries that cannot be primarily sutured is nerve autograft. But this method lacks satisfactory results and imposes some technical limitations and complications. Several options have been studied as alternatives to nerve autografting, but there is no biological or synthetic conduit available for clinical use that provides the same regenerative capacity of nerve autograft. Advances in cell culture and understanding of nerve regeneration mechanisms led to the use of regeneration-inducing cells in association with conduits, in an attempt to improve the reconstruction results. Several studies have shown that the use of adipose derived stem cells (ADSC) into conduits enhances neural regeneration. However, there is no study that compared the addition of undifferentiated ADSC in alloplastic conduit to standard treatment with autograft. This study evaluated the influence of the addition of adipose derived stem cell in fibrin conduit for peripheral nerve regeneration in comparison to the nerve autograft, in a rat model. Method: A sciatic nerve injury model (10-mm defect) was performed in 30 Wistar rats, which were divided into 3 groups. Nerve defect was reconstructed using fibrin conduit (Conduit group, n=10), fibrin conduit filled with ADSC (ADSC group, n = 10) and nerve autograft, (Autograft group, n=10). The walking behavior was measured by footprint analysis at 4, 8, and 12 weeks and sciatic function index (SFI) was determined. After 12 weeks, the triceps surae muscle weight was evaluated and histological analysis was performed to evaluate the regenerated nerve and measured axonal density and fibers diameter average. Results: The Conduit group showed less improvement in walking behavior compared to ADSC group and Autograft group (SFI at 12 weeks, - 53.3 ± .3 vs -44.7 ± 3 vs -35.6 ± 2 respectively, p< 0.001). The triceps surae muscle weight ratio of the fibrin conduit group was 41.1± 3%, ADSC group was 53.3 ± 4%, and Autograft group 71.0 ± 4% (p < 0.001). In histological evaluation, the Conduit group showed axonal density of 39.8±3 axons/10995um2 and fiber diameter average of 3.9±0 ?m2, the ADSC group had axonal density of 58.8 ± 3 axons/10995 um2 and fiber diameter average of 4.9±1?m2 and axon density of Autograft group was 67.1±2 axons/10995 um2 and fiber diameter average was 8.9±1?m2 (p < 0.001). Conclusion: The addition of adipose derived stem cells (ADSC) into fibrin conduit used for nerve reconstruction following peripheral nerve injury in the rat model, showed better functional recovery and better histological regeneration compared to reconstruction with fibrin conduit without ADSC. However, the functional recovery in the ADSC group was worse than that in nerve Autograft group and the nerve repair with the ADSC-fibrin conduit has less myelinated fibers when compared to the repair with nerve autograf