Os mecanismos responsáveis pelas manifestações hemorrágicas durante a leptospirose severa ainda são pouco compreendidos. Este trabalho avaliou os efeitos diretos e indiretos das leptospiras sobre moléculas do sistema de coagulação. Foi verificado que leptospiras virulentas são eficientes em bloquear a atividade da enzima trombina por meio do sequestro de seu sítio de ligação ao substrato, gerando uma menor formação do coágulo de fibrina, acarretando em sangramento e consequente disseminação do patógeno para outros sítios de infecção. Foi mostrado também que a inflamação causada pela resposta imune contra as bactérias causa uma ativação da coagulação, muito provavelmente via expressão de Fator Tissular, o que ocasiona um consumo e consequente esgotamento dos fatores e inibidores de coagulação, culminando em hemorragia e formação de trombos, os quais podem levar à falência de órgãos. Estes resultados melhoram o entendimento da patogênese da leptospirose e podem favorecer o desenvolvimento de terapias para as manifestações hemorrágicas. / The mechanisms responsible for the hemorrhagic manifestations during severe leptospirosis are still poorly understood. This work evaluated the direct and indirect effects of leptospires upon molecules of the coagulation system. It has been shown that virulent leptospires are effective in blocking the activity of the enzyme thrombin by sequestration of its substrate binding site, generating less fibrin clot formation, leading to bleeding and consequent dissemination of the pathogen to other sites of infection. It has also been shown that the inflammation caused by the immune response against the bacteria causes an activation of the coagulation, most probably via expression of Tissue Factor, which causes a consumption and consequent depletion of coagulation factors and inhibitors, culminating in hemorrhage and thrombus formation, which can lead to organ failure. These results improve the understanding of the pathogenesis of leptospirosis and may favor the development of therapies for hemorrhagic manifestations.

O sequenciamento da L. interrogans sorovar Copenhageni e as análises bioinformáticas permitiram a identificação de candidatos vacinais e fatores de virulência. Foram selecionados dois genes, LIC11834 e LIC12253, que foram submetidos a ensaios de presença do DNA genômico e RNA mensageiro em diferentes sorovares de Leptospira. Observamos que o gene LIC12253 foi o mais presente entre os sorovares testados. Os genes foram clonados em vetor de expressão pAE e expressos em E. coli BL21 SI. As proteínas recombinantes foram purificadas e submetidas a ensaio de dicroísmo circular, o qual confirmou que ambas as proteínas estavam estruturadas. Por meio de testes de imunogenicidade em camundongos, ambas as proteínas mostraram-se imunogênicas, apresentando altos títulos de anticorpos, porém não foram capazes de promover resposta imune celular. Em ensaios de localização das proteínas nativas podemos observar a presença destas proteínas na membrana externa de Leptospira. Ensaios de reatividade com soros de pacientes diagnosticados com leptospirose mostraram que há reconhecimento das proteínas por anticorpos presentes nesses soros, sugerindo que as proteínas são expressas durante a infecção. Em ensaios de adesão a componentes de matriz extracelular e componentes do soro e plasma humano, rLIC11834 apresentou ligação à laminina, sendo nomeada de Lsa33, além de ligação ao plasminogênio, ao C4bp e ao fibrinogênio de forma dose-dependente; rLIC12253 apresentou ligação à laminina, sendo chamada de Lsa25, e ao C4bp de forma dose-dependente. Ensaios de desafio demonstraram que as proteínas não apresentam proteção contra infecção letal em hamsters. Assim, acreditamos que estas proteínas multifuncionais possam interagir com proteínas do hospedeiro e ter participação na patogênese da doença. / The genomic sequencing and the advances of bioinformatics analysis allowed the identification of new vaccine candidates and new virulence factors. Therefore, two genes from L. interrogans serovar Copenhageni, LIC11834 and LIC12253 were selected and subjected to assays for the presence of genomic DNA and mRNA in different serovars of Leptospira. These assays found that the gene LIC12253 was the most present among the tested serovars. The genes were then cloned in the expression vector pAE and expressed in E. coli BL21 SI. The recombinant proteins were purified and subjected to circular dichroism, which confirmed that both proteins presented secondary structures. Immunogenicity tests in mice showed that both proteins are immunogenic, with high antibodies titers, but don\'t induce cellular immune response. Localization assays of the native proteins on the leptospiras demonstrated the presence of the proteins on the surface of Leptospira. Reactivity assays with sera of patients diagnosed with leptospirosis showed that the recombinant proteins could be recognized by their antibodies, suggesting that they are expressed during infection. Adhesion assays to the extracellular matrix components, human serum and plasma components, showed that the protein rLIC11834 binds to laminin and was called Lsa33. In addition, Lsa33 interacts to plasminogen, to C4bp and to fibrinogen in a dose-dependent manner. The protein rLIC12253 showed binding to laminina, named Lsa25, and to C4bp in a dose-dependent manner. Challenge assays showed that both recombinant proteins don\'t afford protection against lethal infection in hamsters. Thus, we believe that these multifunctional proteins may interact with host proteins and may play a role in leptospiral pathogenesis.

A leptospirose é uma doença infecto-contagiosa que acomete os animais domésticos, silvestres e o homem, causada por bactérias do gênero Leptospira. No Brasil, a hemorragia pulmonar constitui o principal fator de risco para o óbito com taxas de letalidade para essa forma da doença superior a 50%. Desta maneira, o desenvolvimento de uma vacina preventiva e o melhor entendimento dos mecanismos de lesão envolvidos nos processos de desenvolvimento da leptospirose nos permitirá propor novas terapêuticas a fim de diminuir a alta letalidade associada à doença. Neste trabalho propusemos investigar doze genes de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni. A identificação de uma metaloprotease abre caminho para a investigação de uma possível protease envolvida nos processos hemorrágicos para essa importante zoonose. Esperamos, com os resultados apresentados neste trabalho, contribuir com a caracterização da biologia e patogenicidade da leptospirose. / Leptospirosis is an infectious disease that affects domestic animals, wildlife and humans, caused by bacteria of the genus Leptospira. In Brazil, pulmonary hemorrhage is the major risk factor to death with mortality rates for this form of the disease over than 50%. Thus, the development of a preventive vaccine and better understanding of injury mechanisms involved in leptospirosis would allow us to propose new therapies to reduce the high mortality associated with the disease. In the present study we proposed to investigate twelve genes of Leptospira interrogans serovar Copenhageni. The identification of one protease opens the way for the investigation of a possible protease involved in bleeding processes in this important zoonosis. With the results presented here, we expect to contribute to the biology and pathogenicity characterization of leptospirosis.

A leptospirose é uma doença sistêmica, causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. O desenvolvimento de novas estratégias para prevenir a doença é necessário. As pesquisas atuais têm interesse em identificar antígenos conservados que estão envolvidos nas interações patógeno-hospedeiro. Dois genes de L. interrogans foram selecionados, clonados, expressos e suas respectivas proteínas caracterizadas. Os genes foram amplificados por PCR e clonados no vetor de expressão PAE. As proteínas recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade ao metal. A proteína rLIC10821 foi capaz de se ligar a laminina, plasminogênio e fibrinogênio. Ambas as proteínas foram localizadas na membrana externa de acordo com as três metodologias utilizadas: imunofluorescência, proteinase K, leptospira intacta. A proteína rLIC10821 que interagiu com o PLG foi capaz de gerar plasmina. Após a interação da proteína rLIC10821 com o fibrinogênio, foi possível identificar uma diminuição de 60% no coágulo de fibrina. / Leptospirosis is a systemic disease caused by pathogenic bacteria of genus Leptospira. The development of new strategies to prevent the disease is needed. Currently research has focused to identify conserved antigens related to the host-pathogen interaction. Two genes of L. interrogans were selected, cloned, expressed and its proteins characterized. The genes were amplified by PCR and cloned into expression vetor pAE. The recombinant proteins were purified by chromatography of metal affinity. The protein rLIC10821 were able to bind to laminin, plasminogen and fibrinogen. Both proteins were localized in the outer membrane according three methodologies: immunofluorescence, proteinase K, intact leptospira. The protein rLIC10821 interacted with PLG was able to generate plasmin. After the interaction of the protein rLIC10821 with fibrinogen, we could identify a decrease of 60% in the fibrin clot.

Leptospirose é uma zoonose mundial que acomete várias espécies de mamíferos, incluindo humanos, causada por espécies de bactérias patogênicas do gênero Leptospira. Possui um quadro de manifestação clínico muito variado, podendo apresentar desde sintomas comuns a outras doenças como febre, calafrios, cefaleia, dores musculares, enjoo, vômitos, diarreia e uma forma mais severa da infecção denominada síndrome de Weill. Seguindo a estratégia de genômica funcional, foram selecionados genes de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni, LIC10377, LIC11122, LIC11184 e LIC12287, tendo como critério a predição de localização das proteínas na membrana. Os fragmentos referentes aos genes LIC11122 e LIC12287 foram clonados no vetor pGEM-T Easy e subclonados no vetor de expressão pAE. As proteínas avaliadas interagem com laminina e plasminogênio, de forma dose-dependentes e saturáveis, sugerindo atuam nos processos de patogênese da bactéria. A presença de um fator sigma na superfície celular desempenhando um papel secundário, sugere que a rLIC11122 pode ser uma proteína moonlight. / Leptospirosis is a worldwide zoonosis that affects several species of mammals, including humans, caused by species of pathogenic bacteria of the genus Leptospira. It has a very varied clinical manifestation board and may have symptoms from common tropical diseases such as fever, chills, headache, muscle aches, nausea, vomiting, diarrhea and a severe syndrome of infection known as Weill syndrome. Following the functional genomics strategy, genes were selected from Leptospira interrogans serovar Copenhageni, LIC10377, LIC11122, LIC11184 and LIC12287, with the criterion of the prediction location of proteins in the membrane. The fragments related to genes LIC11122 and LIC12287 were cloned into pGEM-T Easy vector and subcloned into the expression vector pAE. The evaluated proteins interact with laminin and plasminogen, dose-dependent and saturable manner, suggesting participation in bacterial pathogenesis processes. The presence of a sigma factor on the cell surface plays a secondary role, suggests that performs a moonlight rLIC11122 protein.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The seroprevalence of leptospirosis in the goat flocks created in the Minas Gerais State is little studied. The objectives of this study were (i) to investigate the seroprevalence of leptospirosis in goats of Uberlândia city, MG and to verify predominant serovars; (ii) to identify to the risk factors associates to the infection in the studied properties; (iii) to carry through the isolation and the identification of Leptospira spp. in urine samples of seropositive animals and, (iv) to identify alterations in urinalysis. Were analyzed 230 samples of serum proceeding from 11 properties, using the microscopic agglutination test (MAT). An epidemiologist inquiry was elaborated which gave supplied for the analysis of the risk factors. It was used Stuart s medium base for the isolation of leptospiras. In urinalysis, the samples were submitted to the examinations physical, chemical and evaluation of the urinary sediment. The prevalence of leptospirosis was of 31,30%, with titers varying the 1:100 to 1:800. More found serovars were autumnalis (30,30%), tarassovi (19,20%), pyrogenes (13,13%) and icterohaemorrhagiae (11,11%). The age and the breed had met enter the estatistic significant factors of risk for the infection between the animals. In the properties, the intensive system of production, the use of wage-earning workmanship and the creation of other animal species had been related with the higher frequencies of leptospirosis. It was not possible to isolate leptospiras of the urine samples and had not been found alterations in urinalysis that they suggested infection for the bacterium. The results had shown that the inadequate behaviors of handling in the properties favor the occurrence of one high number of animals displayed to the infection for leptospiras in the goat flocks of Uberlândia. / A soroprevalência da leptospirose nos rebanhos caprinos criados no Estado de Minas Gerais é pouco estudada. Esta pesquisa teve por objetivos (i) investigar a soroprevalência de leptospirose em caprinos do município de Uberlândia, MG e verificar os sorovares predominantes; (ii) identificar os fatores de risco associados à infecção nas propriedades estudadas; (iii) realizar o isolamento e a identificação de Leptospira spp. em amostras de urina dos animais soropositivos e, (iv) identificar alterações na urinálise. Foram analisadas 230 amostras de soro provenientes de 11 propriedades, utilizando o teste de soroaglutinação microscópica (SAM). Foi elaborado um inquérito epidemiológico que forneceu dados para análise dos fatores de risco. Utilizou-se meio de cultura Stuart para o isolamento de leptospiras. Na urinálise, as amostras foram submetidas a exames físico, químico e avaliação do sedimento urinário. A taxa de prevalência da leptospirose foi de 31,30%, com títulos variando de 1:100 a 1:800. Os sorovares mais encontrados foram autumnalis (30,30%), tarassovi (19,20%), pyrogenes (13,13%) e icterohaemorrhagiae (11,11%). A idade e a raça encontraram-se entre os fatores de risco estatisticamente significativos para a infecção nos animais. Nas propriedades, o sistema de produção intensivo, a utilização de mão de obra assalariada e a criação de outras espécies animais foram relacionados com as maiores freqüências da leptospirose. Não foi possível isolar leptospiras das amostras de urina e não foram encontradas alterações na urinálise que sugerissem infecção pela bactéria. Os resultados mostraram que as condutas inadequadas de manejo nas propriedades favorecem a ocorrência de um elevado número de animais expostos à infecção por leptospiras nos rebanhos caprinos de Uberlândia. / Mestre em Ciências Veterinárias

The aim of this study was to verify the occurrence of leptospirosis in dogs and the main risk factors related to disease in the city of Uberlandia, Minas Gerais, and analyze the humoral immune response of young dogs with and without defined race against Leptospira interrogans. All samples were subjected to this research Microscopic Agglutination Test (MAT). To determine the prevalence of anti-Leptospira spp. agglutinins were examined 268 samples of blood serum of apparently healthy dogs from different districts in the county. Was detected 28.36% (76/268) of dogs reagents to serovars Autumnalis (34.21%), Tarassovi (23.58%), Canicola (17.11%) and Grippotyphosa (14.47%). Males were more likely to leptospirosis compared to females. The district east had a greater number of dogs reagents. We also evaluated the relationship between the frequency of dogs reactive serum Leptospira spp. with climatic variables in the municipality, for this, 150 samples were examined, 75 were collected during the dry season (June to November) and 75 in the rainy season (December to May). It was determined a frequency of 38%, with the predominance of serovar Autumnalis (15.79%). We noticed a significant difference (p <0.05) in the occurrence of leptospirosis in dogs, more frequently positive from dogs in the rainy season. The humoral immune response against Leptospira interrogans was analyzed in 26 young dogs, and 17 mixed breed (Group A) and nine mixed breed (Group B) after three immunizations with a commercial vaccine against serovars Canicola, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae and Pomona. There was no statistical difference between the agglutinating titers between Groups A and B (p> 0.05), except the harvest II (p <0.05), in which the group B titers to serovar Autumnalis. To assess the efficiency of vaccine culture anti-Leptospira this research to warn the rich infection that dogs are vaccinated annually submitted. / Objetivou-se verificar a ocorrência da leptospirose em cães e os principais fatores de riscos relacionados à doença no município de Uberlândia, Minas Gerais, e analisar a cinética da resposta imune humoral de cães jovens com e sem raça definida contra Leptospira interrogans. Todas as amostras deste experimento foram submetidas ao exame de Soroglutinação Microscópica (SAM). Para identificação dos cães reagentes contra Leptospira spp. foram examinadas 268 amostras de soro sanguíneo de cães de diferentes distritos sanitários do município e detectada uma ocorrência de 28,36% (76/268) de cães reagentes aos sorovares Autumnalis (34,21%), Tarassovi (23,58%), Canicola (17,11%) e Grippotyphosa (14,47%). Os machos foram mais acometidos a Leptospirose quando comparados às fêmeas e o distrito sanitário Leste apresentou um maior número de cães reagentes. Avaliou-se também a relação da frequência de cães sororeagentes a Leptospira spp. com as variáveis climáticas do município, para isto, foram examinadas 150 amostras, sendo 75 coletadas no período seco (Junho à Novembro) e 75 no período chuvoso do ano (Dezembro à Maio). Verificou-se uma frequência de 38%, com o predomínio do sorovar Autumnalis (15,79%). Notou-se uma diferença significativa (p<0,05) na ocorrência da leptospirose nos cães, com maior frequência de cães sororeagentes no período chuvoso. A resposta imune humoral contra Leptospira interrogans foi analisada em 26 cães jovens, sendo 17 de raça definida (Grupo A) e nove sem raça (Grupo B), após três imunizações com uma bacterina comercial contra os sorovares Canicola, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Pomona. Não houve diferença estatística entre os títulos de anticorpos aglutinantes entre os Grupos A e B (p>0,05), exceto na colheita II (p<0,05), na qual o grupo B apresentou títulos para o sorovar Autumnalis. Após avaliação da resposta vacinal dos cães frente uma bacterina comercial anti- Leptospira, a presente pesquisa alerta para os riscos de infecção que os cães vacinados anualmente estão submetidos. / Mestre em Ciências Veterinárias

Orientador: Helio Langoni / Resumo: O interesse pelo estudo das zoonoses, enfermidades comuns aos humanos e aos animais, aumentou acentuadamente nos últimos anos, sugerindo maior integração, conhecimento e relacionamento entre profissionais da área da saúde. Dentre estas zoonoses a brucelose, a toxoplasmose, a leptospirose e a doença de Chagas (DC) têm elevada importância veterinária e para a saúde pública, pela gravidade e potencial letalidade com que se apresentam em humanos. Atenção especial deve ser dada às pessoas vivendo com HIV/aids (PVHA), pois a imunossupressão à que estão sujeitas pode agravar ainda mais o seu quadro clínico, fato que gera necessidade de diagnósticos mais eficientes para essas infecções. Com o objetivo de determinar o perfil sorológico destas zoonoses em PVHA, atendidos no Serviço de Ambulatório Especializado de Infectologia “Domingos Alves Meira” (SAEI-DAM), entidade pertencente ao complexo de assistência da Faculdade de Medicina de Botucatu – UNESP, bem como relacionar aos hábitos, comportamentos e fatores de risco de exposição a essas doenças, além da obtenção de dados referentes ao grau de conhecimento em relação às zoonoses estudadas. Foram analisadas 236 amostras de soro desses pacientes para a presença de anticorpos anti- Brucella abortus, que mostraram-se negativas para todas as amostras. Para leptospirose quatro (1,69%) amostras foram positivas, para a toxoplasmose 154 (65%) amostras positivas, sendo 146 (94,8%) somente para anticorpos da classe IgG, dois (1,3%) somente para ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

A criação industrial de avestruzes no Brasil tem crescido nos últimos anos, mas avestruzes podem ser reservatórios de agentes com potencial zoonótico, como é o caso do vírus da influenza, rotavírus, vírus da encefalomielite eqüina do leste (EEEV) e do oeste (WEEV), salmonela, leptospira e micoplasma. O objetivo deste trabalho foi detectar rotavírus nas fezes de filhotes, anticorpos contra rotavírus, EEEV e WEEV, influenza A , leptospira, salmonela e micoplasma a partir do soro de reprodutores e efetuar o isolamento de Salmonella sp. a partir de de suabe cloacal. Para a detecção de rotavírus nas fezes utilizaram-se as técnicas de PAGE, isolamento viral e genotipagem pela RT-PCR. As técnicas de contraimunoeletroosmoforese, soroneutralização em cultura de células, inibição da hemaglutinação e aglutinação em placa foram utilizadas nos levantamentos sorológicos e a cultura bacteriológica foi utilizada para detecção de Salmonella spp. em suabes de cloaca. Rotavírus do grupo A com genotipos G[6], G[10], P[1] e P[7] foram detectados nas fezes de avestruzes e anticorpos anti-rotavírus em 10 amostras (10/182) de soros colhidos de avestruzes reprodutores. Foram detectados anticorpos para vários sorovares de Leptospira spp. (19/128), Salmonella pullorum (17/182), Mycoplasma gallisepticum (17/182) e Mycoplasma synoviae (47/182). Não foram detectados anticorpos anti-EEEV e WEEV e anti-vírus da Influenza A H3, bem como amostras de Salmonella spp. em suabes de cloaca. Estes resultados permitem sugerir o papel do avestruz na cadeia epidemiológica das rotaviroses e da leptospirose e dão bases para o aprimoramento sanitário do plantel brasileiro desta ave. / The industrial ostrich breeding in Brazil has grown in the last few years, but ostrich may be reservoirs of potentially zoonotic agents such as influenzavirus, rotavirus, eastern equine encephalitis virus (EEEV), western equine encephalitis virus (WEEV), Salmonella, Leptospira and Mycoplasma. The aim of the present study was to detect rotavirus in fecal samples of young ostriches, antibodies against rotavirus, EEEV and WEEV, influenza A , Leptospira, Sallmonela and Mycoplasma in sera from breeders and carry out Salmonella isolation in cloacal swabs. For the rotavirus detection, PAGE, viral isolation and genotyping by RT-PCR were used. Counterimmunoelectroosmophoresis, virus neutralisation assay in cell culture, hemagglutination inhibition and plate agglutination were used in the serological surveys and bacteriological culture was used to detetc Salmonella spp. in the cloacal swabs. Group A rotavirus with genotypes G[6], G[10], P[1] and P[7] was detected in the fecal samples and anti-rotavirus antibodies were detected in ten samples (10/182) from breeder ostriches. Antibodies to different serovars of Leptospira spp. (19/128), Salmonella pullorum (17/182), Mycoplasma gallisepticum (17/182) and Mycoplasma synoviae (47/182) were detected. Antibodies against EEEV, WEEV and influenzavirus A H3 were not detected, as well as Salmonella spp. in swab samples. These results allow one to suggest a role to ostriches in the epidemiological chain of rotavirus diseases and leptospirosis and give basis to the improvement of the sanitary condition of the Brazilian flocks.

A leptospirose é a zoonose mais comum, distribuída em todas as regiões do mundo e causada por bactérias virulentas do gênero Leptospira spp. A apresentação clínica da leptospirose varia de uma doença febril inespecífica a quadros graves com insuficiência renal aguda, icterícia, hemorragias graves, choque cardiovascular e falência de múltiplos órgãos. Pouco se sabe sobre a resposta imune do hospedeiro e os mecanismos patogênicos associados com a leptospirose grave com hemorragia pulmonar e choque cardiovascular. O baço tem sido estudado e considerado nos últimos anos como um órgão essencial na fisiopatologia da sepse/choque séptico, uma vez que nele ocorre perda de células da imunidade, secundária à apoptose. Objetivos: descrever os achados histológicos e a resposta imune in situ do baço de pacientes falecidos por leptospirose com hemorragia pulmonar e choque refratário, comparando-os com dois grupos controles, um formado por pacientes falecidos por choque séptico causado por bactérias Gram-positivas/-negativas e um segundo, formado por vítimas de trauma. Metodologia: retrospectivamente, 11 baços de pacientes com leptospirose grave e 10 baços de pacientes com choque séptico foram obtidos por necrópsia e comparados com 12 baços de vítimas de trauma abdominal fechado (controles normais), obtidos por esplenectomia. Os achados histológicos da polpa vermelha e da polpa branca esplênica foram analisados por meio de escore semi-quantitativo. A reação de imunohistoquímica (IH) foi empregada para a marcação de células NK, S100+, CD68+, TCD4+, TCD8+ e CD20+, bem como para células expressando caspase-3, TNF, IFN, IL-1, IL-2r, IL-6, IL-12, IL-10, IL-4 e TGF. A contagem de células marcadas foi realizada utilizando-se gratículo sobre 10 campos da polpa vermelha e 10 campos da polpa branca, escolhidos aleatoriamente. IH também foi realizada nos baços dos casos de leptospirose para a detecção de antígenos de Leptospira spp. Resultados: os baços de pacientes do grupo leptospirose e do grupo choque séptico demonstraram similaridades na análise histológica, divergindo do grupo trauma, com as seguintes alterações: congestão difusa da polpa vermelha com infiltração moderada a intensa de plasmócitos e polimorfonucleares e folículos da polpa branca com atrofia. A IH para antígenos de Leptospira foi positiva em oito (72,7%) amostras de baços do grupo leptospirose. Pela análise quantitativa das células marcadas pela IH, os seguintes resultados foram estatisticamente significantes: alta contagem de células S100+ no grupo leptospirose; alta densidade de células CD68+ no grupo choque séptico; baixa quantidade de células NK e TCD4+ nos grupos leptospirose e choque séptico; baixa quantidade de células TCD8+ nos casos de choque séptico e alta contagem de células CD20+ nos grupos leptospirose e choque séptico. Quanto às células expressando citocinas, encontrou-se alta quantidade de TNF nos pacientes do grupo leptospirose e grande número de células positivas para IL-10 nos grupos leptospirose e choque séptico. A expressão de IL-6, IFN, IL-1 e IL-2r foi insignificante nos baços dos três grupos estudados. Células expressando IL-12 foram encontradas apenas na polpa vermelha de casos de leptospirose. Conclusões: Semelhantes clinicamente aos casos de choque séptico, pacientes com leptospirose grave com choque apresentam disfunção endotelial difusa no baço, esplenite aguda e sinais de comprometimento da imunidade inata e adaptativa in situ no baço, caracterizado por uma baixa densidade de células NK, de células TCD4+ e baixa expressão de IL-6, IL-1, IL-2r, IFN e IL-12, com alta expressão de IL-10. Estes resultados sugerem que um estado de imunossupressão pontua a resposta imune do hospedeiro no estágio terminal da leptospirose grave com hemorragia pulmonar e choque cardiovascular. A presença de antígenos de Leptospira nos baços de casos de leptospirose sugere que o agente etiológico contribui diretamente para a patogênese das lesões / Leptospirosis is the most common worldwide zoonosis caused by virulent bacteria from the genus Leptospira spp. The clinical presentation of leptospirosis ranges from unspecific febrile illness to severe forms with acute renal failure, jaundice, hemorrhages, shock and multi organ failure. Little is known about the hosts immune response and the pathogenic mechanisms involved in severe leptospirosis. In recent years the spleen has been considered a pivotal organ in the patophysiology of the sepsis/septic shock because immune cells are lost due to apoptosis in this organ Objectives: describe and compare the splenic histological features and the immune response in situ in patients who died of pulmonary hemorrhage and shock caused by leptospirosis, with spleens from patients who suffered from Grampositive/- negative septic shock and abdominal trauma. Methodology: in retrospect, 11 spleen tissue samples from patients with leptospirosis and 10 spleens from patients with septic shock were obtained by necropsy, and compared with 12 spleens obtained by splenectomy from patients with abdominal trauma. The histological features in the red pulp and white pulp were analyzed by a semi quantitative score. Immunohistochemistry (IH) methods for NK , S100+, CD68+, TCD4+, TCD8+, CD20+ cells, caspase-3, TNF, IFN, IL-1, IL-2r, IL-6, IL-12, IL- 10, IL-4 and TGF were carried out and the stained cells were counted using a grid scale in ten fields of red pulp and white pulp chosen randomly. Also, IH was performed for Leptospira antigens in the leptospirosis patients. Results: the trauma group was totally different from the leptospirosis and septic shock patients which demonstrated strong similarities in the histological analysis: diffuse congestion in the red pulp with a moderate to intense infiltration of plasma cells, and polymorph nuclear cells, and follicles with marked atrophy. The Leptospira antigen was positive in eight (72,7%) spleen tissue samples from the leptospirosis group. By the IH methods and quantitative analysis, the following results reached statistical significance: high account of S100+ cells in the leptospirosis group; high density of CD68+ cells in the septic group; low density of NK and TCD4+ cells in the leptospirosis and septic groups; low quantities of TCD8+ cells in the septic group; high density of CD20+ cells in the leptospirosis and septic groups; high expression of TNF in the leptospirosis group and a strong expression of IL-10 in the leptospirosis and sepsis groups. The expression of IL-6, IFN, IL-1 and IL-2r was insignificant in all groups. IL-12 was only expressed in the red pulp of leptospirosis cases. Conclusion: similar to patients with septic shock, cases of severe leptospirosis (with pulmonary hemorrhage and shock) are associated with a splenic diffuse endothelial dysfunction, splenitis and signs of splenic disturbance in the innate and adaptative immunity in situ, characterized by an low density of NK cells, TCD4+ cells and low expression of IL-6, IL-1, IL-2r, IFN and IL-12 with a high expression of IL-10. These results suggest that an immunosuppressive state develops in the hosts immune response at the terminal stage of severe leptospirosis with pulmonary hemorrhage and shock. Also, the presence of leptospiral antigens in the spleen of the leptospirosis patients suggests the ethyological agent contributes directly to the pathogenesis of the lesions