Made available in DSpace on 2015-04-14T13:33:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 451963.pdf: 1054634 bytes, checksum: 22a1a79881824872b314b26c9cf9ec20 (MD5) Previous issue date: 2013-03-04 / Introduction: Asthma is a disease with predominant presence of CD4 Th2 cells that affects children. The disease main characteristics is inflammation and airway hyperreactivity. Asthma has two main phenotypes depending on the presence of atopy. It was not yet fully described in asthmatic children of school age the presence of different profiles of Th1, Th2, Th17 and Treg cells in peripheral blood, which may be related to the pathogenesis of the disease. Aims: To analyze the phenotypic of CD4 T cells in asthmatics children in Porto Alegre/RS. Methods: This was a croos-sectional study when it was recruited children between 9 to 15 years old, asthmatics and controls. The PBMCs were isolated using Ficoll and the cells were cultured with anti-CD3/CD28antibodies, Derp1 or left unstimulated. After 24hs the cells were stained with antibodies specifics for transcription factors in order to analyze Th1, Th2, Treg and Th17 cells by flow cytometry and the supernatant was collected for cytokine analysis by CBA assay. Plasma was used to perform analysis of specific IgE. Results: It was analyzed 104 patients, 12 controls and 92 asthmatics. Atopic asthmatic patients presented higher frequency of Th2 cells compared with non-atopic and atopic controls. When we analyzed cells expressing more than one transcription factor it was observed that atopic asthmatics patients have a higher frequency of CD4+GATA3+FOXP3+, CD4+RORγT+GATA3+ and CD4+GATA3+Tbet+ compared with non-atopic patients and controls atopic. Analyzing the asthma severity it was seen a higher frequency of CD4+RORγT+GATA3+ in patients with moderate asthma compared with patients with mild asthma. Stimulating the cells from atopic asthma patients with anti-CD3 and anti-CD28 induced more Th1 profile while stimulating with DerP1 protein changed the profile of the cells mainly to Th17 and Treg cells. Conclusion: This is the first study in children that analyzes Th1, Th2, Treg and Th17 cells using the tag transcription factor by flow cytometry in asthmatic or atopic and non-atopic controls. We found a Th2 profile in atopic asthmatic children according to the literature. Interestingly non-atopic children showed no predominant profile. Children with moderate asthma have a profile that expresses both the transcription factor GATA3 and RORγT. Depending on the stimulus used it was induced different phenotypes in the cells of this group of patients with asthma. / Introdu??o: A asma ? uma doen?a com predomin?ncia da presen?a das c?lulas T CD4 do tipo Th2, que afeta das crian?as e tem como principais caracter?sticas a inflama??o e hiperreatividade das vias a?reas. A asma apresenta dois fen?tipos principais dependendo da presen?a de atopia. Ainda n?o foi totalmente descrito em crian?as asm?ticas com idade escolar a presen?a dos diferentes perfis de c?lulas Th1, Th2, Th17 e Treg no sangue perif?rico, que podem estar relacionados com a patog?nese da doen?a. Objetivo: Avaliar o perfil fenot?pico de c?lulas T CD4 em pacientes asm?ticos escolares do munic?pio de Porto Alegre/RS. M?todos: Este foi um estudo transversal realizado com o recrutamento de crian?as com 09 a 15 anos de idade, asm?ticas e controles. O sangue perif?rico foi coletado e as c?lulas mononucleares foram separadas utilizando Ficoll e colocadas em cultura com anticorpos anti-CD3/CD28. Ap?s 24hs as c?lulas foram marcadas com anticorpos espec?ficos para fatores de transcri??o para an?lise do perfil Th1, Th2, Th17 e Treg por citometria de fluxo e o sobrenadante foi recolhido para analise de citocinas por CBA. No plasma foi realizada a an?lise de IgE espec?ficas. Resultados: Foram analisados 104 pacientes, sendo 12 controles e 92 asm?ticos. Os pacientes asm?ticos at?picos apresentaram um perfil Th2 mais acentuado, comparado com os n?o-at?picos e controles at?picos. Quando analisamos as c?lulas que expressam mais de um fator de transcri??o foi observado que os pacientes asm?ticos at?picos apresentam maior frequ?ncia de c?lulas T CD4 positivas GATA3+FOXP3+, RORγT+GATA3+, GATA3+Tbet+ comparada com pacientes n?o-at?picos e controles at?picos. Analisando a severidade foi observado uma frequencia maior de c?lulas T CD4+ RORγT+ GATA3+ em pacientes com asma moderada comparado com pacientes com asma leve. O est?mulo com anti-CD3 e anti-CD28 nas c?lulas dos pacientes asm?ticos at?picos induziu mais um perfil Th1 enquanto que est?mulo com DerP1 mudou o perfil de algumas c?lulas principalmente de c?lulas Tregs e Th17. Conclus?o: Este ? o primeiro estudo em crian?as que analisa o perfil Th1, Th2, Th17 e Treg utilizando a marca??o de fatores de transcri??o por citometria de fluxo em crian?as asm?ticas at?picas ou n?o-at?picas e controles. Encontramos um perfil mais Th2 em crian?as asm?ticas at?picas de acordo com a literatura. Interessantemente as crian?as n?o-at?picas n?o apresentaram nenhum perfil predominante. As crian?as com asma moderadas apresentam um perfil que expressa ao mesmo tempo o fator de transcri??o RORgT e GATA3. Dependendo do estimulo s?o induzidas diferentes fen?tipos nas c?lulas deste grupo de pacientes com asma.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-06-17T19:39:46Z No. of bitstreams: 1 TES_ALINE_DEFAVERI_DO_PRADO_COMPLETO.pdf: 1737423 bytes, checksum: 77ee581083f58c46dd10a545b62097a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-17T19:39:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_ALINE_DEFAVERI_DO_PRADO_COMPLETO.pdf: 1737423 bytes, checksum: 77ee581083f58c46dd10a545b62097a5 (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / Introduction: Rheumatoid Arthritis (RA) is an autoimmune, inflammatory and chronic disease. Muskuloskeletal ultrasound (MSUS) has been increasingly used for diagnostic evaluation and monitoring of patients. Regulatory T cells (Tregs) and lymphocytes producers of IL 17 (Th17) imbalance and disfuntion, as well as pro inflammatory cytokines, have been implicated in the pathogenesis of RA. There are few studies on the association of circulating lymphocites subtypes and cytokines with MSUS findings in RA. Methods: One hundred and one RA patients (1987 American College of Rheumatology criteria) treated with disease-modifying antirheumatic drugs (DMARDs) were included in this cross sectional study. A blood sample was taken just before clinical and ultrasonographic evaluation, which were all performed on the same day, consecutively and in a blinded fashion. Lymphocytes were isolated and immunophenotyped by flow cytometry to investigate regulatory FoxP3+ T cells and IL-17+ cells. Plasma Th1-Th2-Th17 cytokines (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, TNF e IFN-?) and VEGF were searched using a Cytometric Bead Array (CBA; BD biosciences) kit by flow cytometry. Disease acitivity and disability were measured using Disease Activity Score in 28 joints (DAS28) and Health Assessment Questionnaire (HAQ). MSUS (MyLab 60, Esaote, Genova, Italy, 18 MHz linear probe) was performed consecutively by two ultrassound-trained rheumatologists on the wrists, 2th and 3th metacarpophalangeal and 2th and 3th proximal interphalangeal joints of both hands. Gray-scale synovial hypertrophy (PS) and power Doppler signal (pD) were searched using a semi-quantitative scale (0-3). Erosions were classified as present or absent. The sum of the individual joint scores for PS and pD (10-joint PS and pD scores) was calculated and used to correlate with clinical and laboratory data. Mann-Whitney test, Kruskal-Wallis test and Spearman correlation coefficient (rS) were used for statistical analysis, as well as liner multivariate regression. Interater agreement was tested using kappa statistics and intraclass correlation. Results: Among 101 patients, we were able to measure Treg/Th-17 in 90 individuals. Plasma cytokines were searched in 64 patients. Clinical and demographic features were: mean age, 55.8 ? 11 years; female gender, 80%; Caucasians, 85%; median (interquartile range) disease duration 6 (2-13) years; mean ? SD DAS28, 4.28 ? 1.64; mean ? SD HAQ score, 1.11 ? 0.85. Interobserver agreement (kappa) for US features varied from 0.53 to 1.0. Intraclass correlation for 10-joint PS score was 0.964 (95% CI 0.899-0.986, P <0.000) and for 10-joint pD score was 0,859 (95% CI 0.646-0.941, P <0.001). There was no significant correlation of 10-joint PS and pD scores with DAS28 and HAQ score. The presence of bone erosions was associated with 10-joint PS and pD scores (p=0.002), but not with DAS 28 (p=0.079) or HAQ (0.057). Swollen joint count, but not tender joint count, was correlated with 10-joint PS and pD scores (rS=0.54, P<0.001 and rS=0.39, P<0.001; respectively), as well as associated with bone erosions (P<0.001). There was no significant correlation of with 10-joint PS and pD scores with peripheral Tregs (rS=0.122, P=0.254 and rS=0,056, P=0.602) and Th17 cells (rS=-0.083, P=0.438 and rS=-0.060, P=0,575). Tregs and Th17 cells were not associated with erosions (p= 0,831 and p=0,632, respectively). Among all tested cytokines, IL-6 was correlated with DAS28 (rs 0.31 IC95% 0.07 to 0.52), eritrocyte sedimentation rate (rs 0.43 IC95% 0.19 to 0.62) and swollen joint count (rs 0.39 95%CI 0.15 a 0.59). IL-6 was also correlated with 10-joint pD score (rs 0.33 IC95% 0.07 to 0.56), right and left wrists pD (rs 0.34 IC95% 0.11 to 0.54 and rs 0.45 IC95% 0.21 to 0.64), and right and left PS (rs 0.40 IC95% 0.20 to 0.59 and rs 0.35 IC95% 0.08 to 0.57). Using multivariate linear regression model, 10-joint pD score was positively associated with IL-6 independently of DAS28 (P=0.025). There was no association of any of the tested cytokines with bone erosions (P? 0.17 for all tests). Conclusions: In established RA patients, treated with non biological DMARDs, we observed the following: lack of correlation of 10-joint PS and pD scores and DAS28 and HAQ; positive association of 10-joint PS and pD scores with bone erosions; positive association of swollen joint count, but not tender joint count, with MSUS synovitis and erosions; lack of correlation of MSUS features and circulating Treg and Th-17 cells; positive correlation of plasma IL-6 and MSUS synovitis. The association of IL-6 with 10-joint pD score was independent of DAS28. / Introdu??o. A artrite reumatoide (AR) ? uma doen?a autoimune inflamat?ria cr?nica com envolvimento articular proeminente. O ultrassom de alta resolu??o (US) tem sido empregado de maneira crescente na avalia??o diagn?stica e monitoriza??o da doen?a. O desequil?brio entre as fun??es de linf?citos T regulat?rios (Treg) e Th-17, bem como o papel de citocinas pr? inflamat?rias s?o centrais em sua patog?nese. H? escassez de estudos sobre a associa??o entre os achados ultrassonogr?ficos de atividade da AR e dano estrutural com subtipos linfocit?rios e citocinas no sangue perif?rico. M?todos: Neste estudo transversal, foram inclu?dos 101 pacientes com AR de acordo com os crit?rios de 1987 em tratamento com drogas remissivas n?o-biol?gicas. Uma amostra de sangue foi coletada imediatamente antes das avalia??es cl?nica e ultrassonogr?fica, que foram feitas todas no mesmo dia, em sequ?ncia. Os linf?citos foram isolados e imunofenotipados por citometria de fluxo para identificar c?lulas T reg FoxP3+ e linf?citos produtores de IL-17. Citocinas do perfil Th1-Th2-Th17 (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, TNF e IFN-?) e VEGF foram quantificadas no plasma por citometria de fluxo utilizando-se o kit Cytometric Bead Array (CBA; BD biosciences). Atividade da doen?a foi quantificada por DAS28 e capacidade funcional, pelo HAQ, ambos realizados por reumatologista treinado, cegado em rela??o aos achados de US. Dois reumatologistas (cegados em rela??o aos dados cl?nicos) com treinamento em ultrassonografia realizaram avalia??o de sinovite e presen?a de eros?es em punhos, 2? e 3? articula??es metacarpofalangeanas e 2? e 3? interfalangeanas proximais bilateralmente utilizando aparelho de alta resolu??o (MyLab 60, Esaote, It?lia, transdutor linear de 18 mHz). Prolifera??o sinovial na escala de cinzas (PS) e capta??o de power Doppler (pD) foram avaliadas utilizando uma escala semi-quantitativa com varia??o de 0 a 3. Eros?es foram classificadas como presentes ou ausentes. A soma dos escores individuais de PS e pD foi calculada (escore 10 PS e escore 10 pD) e utilizada para correlacionar com dados cl?nicos e de laborat?rio. Teste de Mann-Whitney, Kruskal-Wallis e coeficiente de correla??o de Spearman foram usados na an?lise estat?stica, bem como regress?o linear m?ltipla. Correla??o intraclasse e estat?stica kappa foram usados para concord?ncia interobservador. Resultados: Dentre os 101 pacientes inclu?dos, obtivemos quantifica??o de c?lulas Treg e Th-17 em 90 pacientes e dosagem de citocinas em 64 indiv?duos. Em sua maioria, a amostra foi composta por mulheres (80%) da ra?a branca (85%), com m?dia de idade de 55,8 anos (?11.1anos), tempo de dura??o de doen?a de 6 (2-13) anos (mediana e IIQ). A m?dia do DAS 28 (VSG) foi de 4.28 (?1.64) e do HAQ 1.11 (?0.85). Valores de kappa para a concord?ncia interobservador para o exame ultrassonogr?fico variaram de 0.53 a 1; a correla??o intraclasse para o escore 10 PS foi de 0.964 (IC95% 0.899-0.986, P <0.001) e, para o escore 10 pD, 0.859 (IC95% 0.646-0.941, P <0.001). N?o houve correla??o entre escore 10 PS e escore 10 pD com DAS28 e HAQ. Eros?es ?sseas foram associadas ao escores 10 PS e pD (p=0.002), mas n?o com DAS 28 (P=0,079) e HAQ (P =0,057). Observamos correla??o entre contagem de articula??es edemaciadas com escore 10 PS e escore 10 pD (rS=0.54, P<0.001 e rS=0.39, P<0.001; respectivamente), bem como associa??o com a presen?a de eros?es (P<0.001). N?o observamos correla??o entre contagem de articula??es dolorosas com escore 10 GS (rS = -0.071 P = 0.524), escore 10 pD (rS = -0.196 P = 0.078) ou associa??o com presen?a de eros?es (P=0.248). N?o houve correla??o significativa de escore 10 PS e pD com Treg (rS=0.122, P=0.254 e rS=0,056, P=0.602, respectivamente) e Th-17 perif?ricas (rS=-0.083, P=0.438 e rS=-0.060, P=0,575, respectivamente). N?o se observou associa??o entre percentual de c?lulas Treg e Th-17 e presen?a de eros?es (P=0.831 e P=0.632, respectivamente). A concentra??o de IL-6, mas n?o de outras citocinas, se correlacionou ao DAS28 (rs 0.31 IC95% 0.07 a 0.52), VSG (rs 0.43 IC95% 0.19 a 0.62) e contagem de articula??es edemaciadas (rs 0.39 95%CI 0.15 a 0.59), bem como com escore 10 pD (rs 0.33 IC95% 0.07 a 0.56), capta??o de pD em punhos direito e esquerdo (rs 0.34 IC95% 0.11 a 0.54 e rs 0.45 IC95% 0.21 a 0.64, respectivamente) e PS em punhos direito e esquerdo (rs 0.40 IC95% 0.20 a 0.59 e rs 0.35 IC95% 0.08 a 0.57, respectivamente). Utilizando-se modelo de regress?o linear m?ltipla, observou-se que o escore 10 pD foi positivamente associado a IL-6 independente de DAS28 (P=0.025). N?o houve associa??o entre nenhuma das citocinas testadas e a presen?a de eros?es ?sseas (P? 0.17 para todos os testes). Conclus?es: Em pacientes com AR estabelecida sob uso de remissivos sint?ticos, observamos: aus?ncia de associa??o de escore 10 PS e pD com DAS28 e HAQ; associa??o entre escore 10 PS e pD e eros?es ?sseas; associa??o de contagem de articula??es edemaciadas, mas n?o de articula??es dolorosas, com sinovite e eros?es no US; aus?ncia de associa??o entre achados de US e linf?citos Treg e Th-17 no sangue perif?rico; associa??o entre IL-6 plasm?tica e achados de sinovite no US. A associa??o entre IL-6 e escore pD ocorreu independente do DAS28.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 450693.pdf: 903446 bytes, checksum: 6805922c966dfb108b00594643df2744 (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / The elderly population, characterized as people over 60 years old, has grown rapidly in recent years in Brazil, and with this increase in life expectancy, age-related changes appear, for example, immunosenescence. Some studies have shown that there are differences in the immunological profile of the elderly, often related to the numbers of T cells. The immune risk profile (IRP) has been defined as CD4/CD8 T-cell ratio <1 and positivity for serum anti-cytomegalovirus (CMV) antibodies. In this study, we investigated patterns of activation and differentiation of T lymphocytes by flow cytometry in an elderly population in IRP, compared with elderly people without risk profile (non-IRP), seeking to identify additional markers for this risk profile immune. For this study we recruited 60 elderly SUS patients in Porto Alegre, aged 60 years, 30 IRP and 30 non-IRP. Lymphocytes were isolated and stimulated in vitro to evaluate the production of cytokines and the expression of transcription factors. The subpopulations of T lymphocytes found were consistent with previous studies in which IRP patients had fewer naive and central memory T cells, as well as an increase was observed in the percentage of T cells CD8 + CD28-T cells and CD8 + PD-1 + in the IRP individuals. Furthermore, there was a reduction in mean fluorescence intensity (MFI) of transcription factors to canonical subtypes of T cell help (CD4 +) in IRP patients when compared to patients without IRP. The percentages of the different subtypes (TH1, TH2, TH17; Treg) of these cells were not different between the two groups. After stimulation with anti-CD3/anti-CD28 antibodies in culture for 24 hours, the concentration of cytokines in culture supernatants increased, but no significant differences between the two groups were found, except for IL-10, which was higher in IRP patients before stimulation. These results suggested that transcriptional mechanisms important in the differentiation of helper T cells are altered in IRP patients, which may affect the immune response of these individuals. / A popula??o de idosos, caracterizada como pessoas com mais de 60 anos, vem aumentando muito nos ?ltimos anos no Brasil, e com esse aumento da expectativa de vida surgem altera??es relacionadas com a idade, por exemplo, a imunossenesc?ncia. Alguns estudos t?m demonstrado que existem diferen?as no perfil imunol?gico dos idosos, frequentemente relacionadas ao n?mero de c?lulas T. O perfil de risco imune (IRP) tem sido definido como taxa de c?lulas T CD4/CD8<1 e soro positividade para citomegalov?rus (CMV). Neste estudo, n?s investigamos padr?es de ativa??o e diferencia??o de linf?citos T, por citometria de fluxo, em uma popula??o idosa IRP, comparando com a popula??o idosa sem perfil de risco (n?o-IRP), buscando identificar marcadores adicionais para esse perfil de risco imune. Foram recrutados para esse estudo 60 idosos da rede SUS (sistema ?nico de sa?de) de Porto Alegre, com idade superior a 60 anos, sendo 30 IRP e 30 n?o-IRP. Linf?citos foram isolados e estimulados in vitro para avaliar a produ??o de citocinas e a express?o de fatores de transcri??o. As subpopula??es de linf?citos T encontradas foram condizentes com estudos anteriores em que os pacientes IRP possu?am menos c?lulas T naive e de mem?ria central, assim como foi observado um aumento nas porcentagens das c?lulas T CD8+CD28- e das c?lulas T CD8+PD-1+. Al?m disso, foi observada uma redu??o na m?dia de intensidade de fluoresc?ncia (MFI) dos fatores de transcri??o can?nicos para subtipos de c?lulas T de ajuda (CD4+) em pacientes IRP quando comparados com pacientes n?o-IRP. As porcentagens dos diferentes subtipos (TH1; TH2; TH17; Treg) dessas c?lulas n?o foram diferentes entre os dois grupos. Ap?s estimula??o com anticorpos anti-CD3/anti-CD28 em cultura por 24h, a concentra??o de citocinas no sobrenadante das culturas aumentou, mas n?o houve diferen?a significativa entre os dois grupos em rela??o ? concentra??o das citocinas em geral, exceto na IL-10 antes da estimula??o, que foi maior em pacientes IRP. Esses resultados sugerem que mecanismos transcricionais importantes para a diferencia??o de c?lulas T de ajuda est?o alterados em pacientes IRP, o que pode afetar a resposta imune desses indiv?duos.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 392212.pdf: 1435232 bytes, checksum: c5e320809f8271743be3719e2d01aeda (MD5) Previous issue date: 2007-06-12 / Introdu??o e Objetivos: As infec??es por HTLV-I/II se caracterizam pelo tropismo viral por infectar c?lulas T humanas e promover um estado de prolifera??o espont?nea deste tipo celular. Leucemia e doen?as inflamat?rias graves, com destaque para as doen?as neurol?gicas, est?o fortemente associadas ?s infec??es por HTLV-I/II e o tratamento usual destas patologias envolve a administra??o de antiinflamat?rios da classe dos glicocortic?ides. Embora haja relatos de resist?ncia farmacol?gica ? terapia com glicocortic?ides, n?o se sabe ao certo se essa condi??o se deve ? infec??o viral ou ao hospedeiro. Neste estudo, avaliou-se a rela??o entre prolifera??o celular espont?nea e sensibilidade de linf?citos T aos efeitos dos glicocortic?ides (dexametasona - DEX). Materiais e M?todos: C?lulas mononucleares de sangue perif?rico foram isoladas de pacientes assintom?ticos e livres de tratamento, com infec??o por HTLV-I (n=18) e HTLV-II (n=10), e foram cultivadas na presen?a e na aus?ncia do mit?geno fitohemaglutinina (PHA 1%). C?lulas foram tamb?m cultivadas com PHA 1% e concentra??es variadas de DEX (10-9 a 10-4 M). Para fins comparativos, as mesmas avalia??es foram realizadas em sujeitos saud?veis (Controle, n=11). Resultados e Discuss?o: Os pacientes com HTLV-I/II apresentaram taxas similares de prolifera??o estimulada (PHA 1%) e n?o-estimulada (PHA 0%), bem como sensibilidade compar?vel ? DEX. N?o houve diferen?a na freq??ncia de indiv?duos resistentes versus sens?veis ? DEX entre os grupos HTLV-I e HTLV-II. Entretanto, linf?citos T de pacientes com prolifera??o espont?nea n?o responderam ao est?mulo mitog?nico por PHA e foram mais resistentes ? modula??o por DEX do que as c?lulas de pacientes com prolifera??o normal. Os resultados aqui apresentados sugerem que a baixa resposta cl?nica ? terapia com glicocortic?ides pode estar associada a um estado de prolifera??o celular espont?nea decorrente da infec??o por HTLV.

Submitted by PPG Gerontologia Biom?dica (geronbio@pucrs.br) on 2018-09-26T11:04:34Z No. of bitstreams: 1 Trintinaglia_Lauren_Dis.pdf: 3983976 bytes, checksum: 466d953c5edcd91085fcab766ad7abd9 (MD5) / Approved for entry into archive by Sheila Dias (sheila.dias@pucrs.br) on 2018-09-27T12:52:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Trintinaglia_Lauren_Dis.pdf: 3983976 bytes, checksum: 466d953c5edcd91085fcab766ad7abd9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-27T12:59:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Trintinaglia_Lauren_Dis.pdf: 3983976 bytes, checksum: 466d953c5edcd91085fcab766ad7abd9 (MD5) Previous issue date: 2018-03-07 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Introduction: Individuals who have experienced childhood maltreatment (CM) present a higher sensitive profile to stress. This profile have been associated with dysregulation of the immune system, characterized by reactivation of herpesvirus and increased cellular senescence markers. New traumatic or stressful experiences, such as breast cancer diagnosis, in those sensitized individuals can trigger an increase in stress levels possibly leading to important immunological changes. Here we investigate the presence of immunosenescence markers in women newly diagnosed with breast cancer with and without history of CM. Methods: Twenty-nine women newly diagnosed with breast cancer, without start the treatment, were recruited. Fifteen with history of CM (CM+) and fourteen without history of CM (CM-). Twenty-seven women without breast cancer and CM were selected as the control group. Peripheral blood was assessed by lymphocyte subsets by flow cytometry (B cells, CD4+, CD8+, NK cells, activated T cell, regulatory T cell, early and intermediated T cell, senescent and exhaustion T cells. CMV serology was determinate by ELISA method. Results: The groups CM+ and CM- present similar cancer stage and family history of breast cancer. In peripheral lymphocyte subpopulations we found significantly reduced Early-differentiated T cell (p <0.0001), while intermediate-differentiated T cell (p<0.0001), senescence T cell (p<0.0001) and exhaustion t cells (p<0.0001) were increased in CM+ and CM? patients. The mean fluorescent intensity (MFI) was analyzed and the CD27 expression on CD4 T cells was found lower in controls as compared to CM+ and CM? groups (p = 0.002).There was no difference of CMV IgG levels between CM + and CM? groups (p=0.24), but between controls and CM groups, this association becomes significant (p= 0.008) . Conclusion: Our findings suggest that the presence of CM is not directly related with immunosenescence in women newly diagnosed with breast cancer. However, when evaluated women with breast cancer and healthy controls, this senescent profile is evident. Future longitudinal studies are necessary to explore the role of senescent cells in the disease progression and treatment response. / Introdu??o: Indiv?duos que foram expostos a maus tratos na inf?ncia apresentam um perfil de sensibilidade ao estresse mais acentuado, quando comparado a aqueles que cresceram em um ambiente adequado. Esse perfil est? relacionado com a desregula??o do sistema imunol?gico, sendo caracterizado pela presen?a de um aumento de marcadores de senesc?ncia celular e reativa??es de infec??es virais latentes. O acontecimento de novas experi?ncias traum?ticas, como o diagn?stico do c?ncer de mama, pode acarretar em um aumento dos n?veis relacionados ao estresse, provocando altera??es imunol?gicas importantes. Nesse estudo n?s investigamos a presen?a de marcadores de imunossenesc?ncia em mulheres rec?m diagnosticadas com c?ncer de mama com ou sem hist?rico de c?ncer de mama. M?todos: Vinte e nove pacientes rec?m diagnosticadas com c?ncer de mama foram recrutadas para esse estudo, sendo que quinze mulheres reportaram presen?a de maus tratos na inf?ncia (CM+), enquanto quatorze n?o vivenciaram situa??es envolvendo abuso ou neglig?ncia nesse mesmo per?odo (CM-). Para compor o grupo controle, foram selecionadas vinte e sete mulheres sem c?ncer de mama e que negaram a presen?a de maus tratos. Os linf?citos foram isolados das c?lulas mononucleares do sangue perif?rico (PBMCs), e imunofenotipados por citometria de fluxo para investigar a presen?a dos seguintes subgrupos: c?lulas B, CD4+, CD8+, c?lulas NK, c?lulas T ativadas, c?lulas T reguladoras, c?lulas T rec?m diferenciadas, c?lulas T intermedi?rias, c?lulas T senescentes e com perfil de exaust?o. A sorologia IgG para citomegalov?rus (CMV) foi realizada atrav?s do m?todo ELISA. Resultados: Os grupos CM+ e CM- n?o apresentaram diferen?as significativas em rela??o ao estadiamento da doen?a ou hist?rico familiar. Nas subpopula??es de linf?citos encontramos uma redu??o significativa de c?lulas T rec?m diferenciadas (p <0.0001), nos grupos CM+ e CM-, enquanto c?lulas T intermedi?rias (p <0.0001), senescentes (p <0.0001) e de exaust?o (p <0.0001) apresentaram-se aumentadas nos mesmos grupos. Ao analisar a m?dia da intensidade de fluoresc?ncia (MFI) encontramos uma express?o diminu?da de CD27 em c?lulas T CD4 nos controles quando comparado as mulheres com c?ncer de mama expostas e n?o expostas a maus tratos (p = 0.002). N?o observamos diferen?as entre os grupos CM+ e CM- em rela??o a sorologia IgG para citomegalov?rus entre os grupos CM + e CM - (p=0.24), entretanto foi presenciado entre os controles e indiv?duos com maus tratos (p= 0.008). Conclus?o: nossos achados sugerem que a presen?a de maus tratos n?o est? diretamente associada com um perfil de imunossenesc?ncia em mulheres rec?m diagnosticada com c?ncer de mama. Entretanto, quando avaliamos mulheres com c?ncer de mama e indiv?duos saud?veis esse perfil senescente torna-se evidente. Logo, torna-se necess?rio a realiza??o de novos estudos para explorar o impacto da presen?a de marcadores de senesc?ncia no tratamento e progn?stico do c?ncer de mama.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 425543.pdf: 747447 bytes, checksum: 25a6005ed4d57ac7cb87a5a7d22ed8de (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / O envelhecimento est? associado com o decl?nio progressivo nas fun??es do sistema imunol?gico (imunosenesc?ncia), tanto na imunidade humoral quanto na imunidade mediada por c?lulas, resultando em maior suscetibilidade a infec??es e c?ncer, al?m da diminui??o na capacidade de responder a vacinas. As c?lulas dendr?ticas (DCs) s?o as mais poderosas e eficientes apresentadoras de ant?genos (APC), desempenhando um papel primordial na apresenta??o e conseq?ente resposta imune mediada por c?lulas T. Poucos estudos enfocam a atividade das c?lulas dendr?ticas no envelhecimento, sendo que a maioria dos dados s?o relativos ?s fun??es das c?lulas T. As intera??es entre as c?lulas dendr?ticas e as c?lulas T afetam o processamento e consequente apresenta??o de ant?genos, influenciando a efetividade das respostas imunes mediadas por c?lulas T. Este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade estimulat?ria de c?lulas dendr?ticas de camundongos velhos em uma resposta espec?fica T CD4+ comparada ? resposta imune de camundongos jovens. Para isso, c?lulas T de camundongos transg?nicos TEa, espec?ficas para o complexo Ea:IAb foram transferidas para camundongos normais C57Bl/6, c?lulas T de camundongos jovens para animais velhos e jovens, e c?lulas T de camundongos velhos para animais velhos e jovens. Os resultados demonstram que, ap?s imuniza??o com o ant?geno EaRFP, tanto as c?lulas T jovens quanto as c?lulas T velhas foram estimuladas de modo semelhante por c?lulas dendr?ticas jovens. Contudo, c?lulas dendr?ticas de animais velhos n?o foram capazes de estimular suficientemente as c?lulas T de animais velhos nem mesmo as c?lulas T de animais jovens. Enquanto ambas as c?lulas T, jovens e velhas, adquiriram o fen?tipo CD44+ quando transferidas para os animais jovens, c?lulas T jovens transferidas para animais velhos n?o adquiriram o mesmo fen?tipo. Esse fato sugeriu que c?lulas dendr?ticas de animais velhos possuem baixa capacidade de estimular c?lulas T, mesmo que essas c?lulas venham de um animal jovem. N?s hipotetizamos que esse resultado poderia estar ligado a um n?mero extremamente diminu?do de c?lulas dendr?ticas nos animais velhos, ou ainda em uma defici?ncia em um dos sinais fornecidos pelas c?lulas dendr?ticas no priming de linf?citos T (apresenta??o de ant?geno ou sinais coestimulat?rios). O n?mero total de c?lulas dendr?ticas foi significativamente menor em camundongos velhos comparado a camundongos jovens. Al?m disso, o n?mero de c?lulas apresentando ant?geno foi menor no linfonodo drenante de animais velhos, e a express?o de CD86 por c?lulas dendr?ticas de animais velhos n?o foi diferente da dos animais jovens. Os resultados sugerem que a diminui??o da capacidade de apresenta??o de ant?geno apresentada no envelhecimento ? cr?tica para a perda do potencial estimulat?rio de c?lulas T CD4+ por c?lulas dendr?ticas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 449724.pdf: 6148140 bytes, checksum: 12da4cf8a6d912387d56ee8f32c58f7b (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / The irritant contact dermatitis (ICD) is a non-allergic inflammatory reaction of the skin that occurs independently of the T cells participation. ICD is caused by exposure to low molecular weight chemicals and it is initiated by damage or activation of epidermal cells which trigger the activation of the innate immune system. The purine nucleotide adenosine triphosphate (ATP) is the universal energy molecule and appears as is an important extracellular messenger. In healthy tissues, ATP is almost exclusively localized intracellularly, whereas in pathological conditions as inflammation, the tissue injury leads to the release of large amounts of ATP to the extracellular medium. In the extracellular medium, ATP can be hydrolyzed by nucleotidases to their breakdown products ADP and AMP. These nucleotidases control the availability of nucleotides for purinergic receptors. Currently, experimental observations indicate that extracellular ATP acting via purinergic receptors plays a relevant role on skin inflammation. Several models in vitro and in vivo had been used to study the mechanisms of ICD. However, this pathology is still poor understood. This study aimed to evaluate the involvement of the purinergic receptor P2X7 in ICD using in vivo and in vitro approaches. The croton oil (CrO) is a chemical irritant that has been shown to exert its effects independent of inflammatory T cells, therefore we used the mice model of irritant contact dermatitis induced by CrO to investigate the involvement of P2X7 receptor in the immunes mechanisms of ICD. We use several pharmacological approaches, in vitro and in vivo tests and mice with gene deletion to P2X7 receptor and showed evidences that the P2X7 receptor activation by ATP in macrophages and dendritic cells (DCs) is connected with neutrophil recruitment induced by CrO. Furthermore, we demonstrated that CrO decreased the hydrolysis of ATP and ADP in the serum of mice and caused necrosis of keratinocytes in culture, both effects related to activation of P2X7. Taken together, the data obtained in this study suggested that CrO exerts its toxic effects by promoting keratinocytes necrosis and decreasing the activity of ectonucleotidades leading to an increase of ATP extracellular levels. Then, extracellular ATP promotes the P2X7 receptor activation in DCs and macrophages causing the release of IL-1&#946;, which is partially responsible for the neutrophils recruitment observed in irritant contact dermatitis induced by croton oil. Noteworthy, the treatment with the selective P2X7 receptor antagonist A438079 decreased the edema and others proinflammatory effects induced by croton oil, pointing the P2X7 receptor as an important pharmacological target for the treatment of ICD. / A dermatite de contato irritante (ICD, irritant contact dermatitis) ? uma rea??o inflamat?ria local n?o al?rgica da pele que ocorre independentemente da participa??o de c?lulas T. ? ocasionada pela exposi??o a subst?ncias qu?micas de baixo peso molecular e acredita-se que seja iniciada por dano ou ativa??o de c?lulas epidermais que desencadeiam a ativa??o do sistema imune inato. O nucleot?deo ATP ? uma mol?cula energ?tica que desempenha importantes fun??es como mensageiro extracelular. Em tecidos saud?veis, o ATP est? localizado quase exclusivamente no meio intracelular, entretanto quando ocorre inj?ria tecidual, grandes quantidades de ATP s?o liberadas para o meio extracelular. No meio extracelular, o ATP pode ser hidrolisado por nucleotidases gerando ADP e AMP. As nucleotidases controlam a disponibilidade do ATP para os receptores purin?rgicos. Muitas observa??es experimentais t?m indicado que o ATP atuando via receptores purin?rgicos desempenha um papel preponderante em processos inflamat?rios na pele. V?rios modelos in vitro e in vivo t?m sido utilizados para o estudo da ICD, entretanto a fisiopatologia da doen?a ainda ? pouco conhecida. Este estudo teve como objetivo avaliar o envolvimento do receptor purin?rgico P2X7 (P2X7R) na ICD utilizando abordagens in vivo e in vitro. O ?leo de cr?ton (CrO) ? um irritante qu?mico que tem mostrado exercer seus efeitos inflamat?rios independente de c?lulas T, portanto n?s utilizamos o modelo de dermatite de contato irritante induzida por CrO em camundongos para investigar o envolvimento do receptor P2X7 nos mecanismos imunopatol?gicos da ICD. Atrav?s da utiliza??o de diversas abordagens farmacol?gicas in vitro e in vivo e do uso de camundongos com dele??o g?nica para o receptor P2X7, n?s primeiramente mostramos evid?ncias de que a ativa??o do P2X7R por ATP em macr?fagos e c?lulas dendr?ticas (DCs) est? relacionada com o recrutamento de neutr?filos induzido por CrO. Al?m disso, foi demonstrado que o CrO decresce a hidr?lise de ATP e ADP no soro de camundongos e provoca a necrose de queratin?citos em cultura, ambos os efeitos foram relacionados com a ativa??o do receptor P2X7. Portanto, a partir dos dados obtidos neste estudo, n?s sugerimos que o ?leo de croton exerce seus efeitos t?xicos promovendo a morte celular de queratin?citos, diminuindo a atividade de ectonucleotidades e aumentando os n?veis extracelulares de ATP. O ATP extracelular, via ativa??o de P2X7R em DCs e macr?fagos, provoca a libera??o de IL-1&#946; que ? parcialmente respons?vel pelo recrutamento de neutr?filos observado na dermatite de contato irritante induzida por ?leo de cr?ton. Digno de nota, o tratamento com o antagonista seletivo do receptor P2X7, A438079, diminuiu o edema e outros efeitos pr?-inflamat?rios induzidos pelo ?leo de cr?ton, apontando o receptor P2X7 como um alvo farmacol?gico importante para o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento da ICD.

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No. of bitstreams: 2 rosalina_tossige_gomes.pdf: 1360296 bytes, checksum: 20d9d22baa3b186a5cd4139e7af933da (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015 / O exerc?cio intervalado de alta intensidade (HIIE) ? caracterizado por breves e repetidas sess?es de exerc?cio intenso, intercaladas por per?odos de repouso ou exerc?cio de baixa intensidade. ? uma modalidade de exerc?cio que tem ganhado muito destaque nos ?ltimos anos por ser uma modalidade de treinamento de baixo volume, embora pouco se saiba a respeito dos seus efeitos na fun??o imune e no estado redox celular. Assim, este estudo avaliou o efeito de uma sess?o de HIIE sobre o estado redox e a fun??o de linf?citos em homens jovens sedent?rios. Esse trabalho foi dividido em dois estudos. No estudo 1 avaliou-se o efeito do HIIE sobre a prolifera??o e produ??o de citocinas e o estado redox de c?lulas mononucleares do sangue perif?rico (PBMC). No estudo 2 avaliou-se o efeito do HIIE sobre a viabilidade e express?o de marcadores de ativa??o em linf?citos. As sess?es de HIIE foram realizadas em bicicleta ergom?trica, e consistiram em oito s?ries de 1 min a 90-100% de pot?ncia pico, com 75 segundos de recupera??o ativa, a 30W, entre as s?ries. O sangue venoso foi colhido antes, imediatamente ap?s e 30 minutos ap?s a sess?o de HIIE. Para avalia??o da prolifera??o celular, por citometria de fluxo, as PBMC foram coradas com Carboxifluoresce?na Succinimidil Ester (CFSE) (10 ?M) e estimuladas com o superant?geno SEB (100 ng/mL), durante 5 dias a 37? C, 5% de CO2. A produ??o de IL-2 e IFN-? em resposta a estimula??o por SEB durante 18 horas, foi avaliada por ELISA. O estado redox celular foi avaliado pela mensura??o da atividade das enzimas catalase (CAT) e super?xido dismutase (SOD), a concentra??o de subst?ncias que reagem ao ?cido tiobarbit?rico (TBARS) e conte?do de glutationa reduzida (GSH). Para avalia??o da viabilidade celular, por citometria de fluxo, as c?lulas foram marcadas com anticorpos anti-Anexina V FITC e iodeto de prop?deo. Para an?lise da ativa??o dos linf?citos, por citometria de fluxo, as PBMC foram estimuladas com SEB por 18 horas, e em seguida marcadas com anticorpos fluorescentes dirigidos contra CD4, CD8, CD19, CD25 e CD69. Os dados foram analisados utitlizando os testes one-way ou two-way ANOVA, considerando p ? 0,05. O HIIE promoveu redu??o na prolifera??o de linf?citos (p = 0,01), aumento na concentra??o de IL-2 (p = 0,02), e desequil?brio redox nas PBMC, marcado por aumento nas concentra??es de TBARS (p = 0,02) e diminui??o na atividade da CAT (p = 0,04). O HIIE n?o alterou a viabilidade das PBMC, mas a frequ?ncia de c?lulas CD4 e CD19, positivas para os marcadores CD25 e CD69, foi menor ap?s o exerc?cio. Contudo, como foi observada redu??o na frequ?ncia de c?lulas CD4+ e CD19+, a redu??o da frequ?ncia de express?o de marcadores de ativa??o refletiu a redu??o do n?mero de c?lulas, e n?o da resposta ao est?mulo superantig?nico. Nossos resultados mostram portanto, que apesar do HIIE promover desequil?brio redox nas PBMC a resposta dos linf?citos ao est?mulo superantig?nico n?o ? alterada. A redu??o da resposta proliferativa ?, provavelmente, reflexo da altera??o da distribui??o das subpopula??es linfocit?rias em decorr?ncia do HIIE. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa Multic?ntrico de P?s-gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2015. / ABSTRACT High-intensity interval exercise (HIIE) is characterized by brief and repeated intense exercise sessions, interspersed with periods of rest or low intensity exercise. This exercise modality has gained much attention in recent years, although little is known about its effects on immune function and cellular redox state. This study evaluated the effect of HIIE on the redox state and lymphocyte function in sedentary young males. This work was divided in two studies. The firsty study evaluated the effect of HIIE on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) proliferation, cytokine production and redox status. The second study evaluated the effect of HIIE on lymphocyte viability and activation markers expression. HIIE was performed on cycloergometer, and consisted of eight series of 1 min at 90-100% of peak power, with 75 seconds of active recovery, at 30W, between sets. Venous blood was collected before, immediately after and 30 minutes after HIIE. For cell proliferation evaluation by flow cytometry, PBMC were stained with Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester (CFSE) (10 mM) and stimulated with the superantigen SEB (100 ng/ml) for 5 days at 37? C, 5% CO2. IL-2 and IFN-? secretion in response to SEB stimulation for 18 hours was assessed by ELISA. The cellular redox status was assessed by measuring the activity of catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD), the concentration of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and reduced glutathione content (GSH). To assess cellular viability, using flow cytometry, cells were labeled with anti-Annexin V-FITC and propidium iodide. To analyze lymphocyte activation, by flow cytometry, PBMC were stimulated with SEB for 18 hours, and then stained with fluorescent antibodies directed against CD4, CD8, CD19, CD25 and CD69. One-way or two-way ANOVA was employed for statistical analyzis, with ? ? 0.05. Lymphocyte proliferation was reduced (p = 0.01) after HIIE, despite increased IL-2 concentration (p = 0.02), and HIIE also induced PBMC redox imbalance characterized by increased TBARS concentration (p = 0.02) and decreased CAT activity (p = 0.04). PBMC viability was not affected by HIIE, but the frequency of CD4+CD25+/CD69+ and CD19+CD25+/CD69+ cells in response to SEB stimulation was lower after exercise. However, as CD4+ and CD19+ frequencies were reduced, reduced activation markers expression was a consequence of cell number reduction. Our results therefore show that, although HIIE induced redox imbalance, lymphocyte response to superantigen stimulation was not affected. Reduced lymphocyte proliferative response after HIIE is probably due to modifications in lymphocyte subpopulations distribution.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThaisAOM_DISSERT.pdf: 2404087 bytes, checksum: de8e1e5267a7184559b5a6f8a0440fa3 (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The presence of inflammatory cells within the tumor microenvironment plays a dual role that may contribute both to the progression and for inhibition of tumor growth. Recent studies suggest that the quality, not the quantity, of the inflammatory infiltrate is the most important determinant for prognosis. Therefore, TCD8 cells and natural killer cells are the main effector cells in combating cancer. The aim of this study was to assess, through the immunohistochemical study, the expression of TCD8 lymphocytes and NK cells in epidermoid carcinoma (EC) of the lower lip. The sample consisted of 32 specimens of EC of the lower lip, of which 16 had regional lymph node metastasis, and the 16 remaining, free of metastases. The total number of positive cells at the front of invasion were evaluated quantitatively and the results were related to clinical TNM staging, histological grade of malignancy and prognostic factors. It was observed for the group with metastasis, prevalence of stages III and IV (p<0.0001). Most patients with metastasis, had a high grade of malignancy (p=0.006). Most cases classified as high grade of malignancy had stages III and IV (p=0.032). Of the total sample, there were three cases of recurrence and five with death, however these variables were not statistically significant when associated with clinicopathological parameters. The immunostaining of CD8 and CD57, respectively, showed no statistically significant association with any of the clinicopathological parameters studied, metastasis (p=0.346, p=0.622), TNM classification (p=0.146, p=0.576), histological grade of malignancy (p=0.936, p=936), recurrence (p=0.075, p=0.075) and death (p=0.897, p=0.856). Believing in the function of the immunological system against malignant cells, it is concluded that the TD8 lymphocytes and NK cells, would be acting in the control of the progression of malignant neoplasms, but not in isolated manner / A presen?a de c?lulas inflamat?rias dentro do microambiente tumoral exerce um papel dual podendo contribuir tanto para a progress?o como para a inibi??o do crescimento do tumor. Estudos recentes sugerem que a qualidade, e n?o a quantidade, do infiltrado inflamat?rio ? o determinante mais importante para o progn?stico. Portanto, as c?lulas TCD8 e as c?lulas natural killer (NK), s?o as principais c?lulas efetoras no combate do c?ncer. O objetivo desse trabalho foi avaliar, atrav?s do estudo imunoistoqu?mico, a express?o dos linf?citos TCD8 e das c?lulas NK em carcinoma epiderm?ide (CE) de l?bio inferior e sua rela??o com a progress?o da les?o. A amostra foi composta por 32 esp?cimes de CE de l?bio inferior, dos quais 16 apresentavam met?stase linfonodal regional, e os 16 restantes, livres de met?stase. O total de c?lulas positivas no front de invas?o foram avaliados de forma quantitativa e os resultados obtidos foram relacionados com estadiamento cl?nico TNM, grada??o histopatol?gica de malignidade e fatores progn?sticos. Observou-se para o grupo com met?stases, preval?ncia dos est?gios III e IV (p<0,0001). A maioria dos casos com met?stase, apresentava alto grau de malignidade (p=0,006). A maioria dos casos classificados como de alto grau de malignidade apresentava est?gios III e IV (p=0,032). Do total da amostra, houve tr?s casos com recidiva e cinco com ?bito, no entanto essas vari?veis n?o apresentaram diferen?a estatisticamente significativa quando associadas a par?metros clinico-patol?gicos. A imunoexpress?o do CD8 e do CD57, respectivamente, n?o apresentaram associa??o estatisticamente significativa com nenhum dos par?metros cl?nico patol?gicos estudados, met?stases (p=0,346; p=0,622); estadiamento cl?nico TNM (p=0,146; p=0,576) grada??o histopatol?gica de malignidade (p=0,936; p=936); recidiva (p=0,075; p=0,075) e ?bito (p=0,897; p=0,856). Acreditando na fun??o que o sistema imunol?gico possui frente a c?lulas malignas, conclui-se que os linf?citos TCD8 e as c?lulas NK, estariam atuando no controle da progress?o de neoplasias malignas, mas n?o de forma isolada

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 419691.pdf: 1447789 bytes, checksum: 5ccd4a3822fedcf2320dfa685397b746 (MD5) Previous issue date: 2008-04-30 / A intera??o de uma c?lula B com uma c?lula T ativada na borda T-B leva a forma??o de um centro germinativo que tem como resultado o aumento da especificidade e afinidade da c?lula B pelo ant?geno. Ap?s a forma??o de uma c?lula B de alta especificidade e afinidade, alguns clones diferenciam-se em c?lulas produtoras de anticorpos. O anticorpo ? a mol?cula efetora da c?lula B e tem como principais finalidades a opsoniza??o, a neutraliza??o, a fixa??o de complemento e a imunomodula??o. Na maioria dos indiv?duos, a resposta imune mediada por anticorpo ? direcionada apenas contra ant?genos n?o-pr?prios, por?m, devido a fatores at? hoje n?o compreendidos, alguns indiv?duos montam respostas auto-imunes. Pouco se sabe quais os mecanismos que est?o por tr?s da forma??o e manuten??o das c?lulas auto-reativas. Em um dos modelos que prop?e como as c?lulas B s?o recrutadas em resposta auto-imunes, como no Lupus Eritematoso Sist?mico, as c?lulas B recebem aux?lio via apresenta??o de pept?deos derivados do receptor de c?lula B. Os linf?citos B podem aleatoriamente combinar diversos segmentos g?nicos para criar um ?nico receptor na superf?cie da c?lula. Devido ? baixa freq??ncia de uma c?lula B expressar um gene V em particular, originalmente foi proposto que as c?lulas T n?o eram tolerantes aos pept?deos derivados da imunoglobulina. Em virtude que a auto-imunidade n?o ? a regra, mecanismos que controlam a resposta de c?lulas T a pept?deos derivados da imunoglobulina se fazem necess?rios. Este trabalho tem como objetivo testar estas duas hip?teses. A primeira quest?o ? a de como as c?lulas T imunoglobulinas espec?ficas s?o tornadas tolerantes. A segunda quest?o ? a de que uma c?lula B auto-reativa pode ser conduzida a uma resposta auto-imune pela apresenta??o de pept?deos derivados da imunoglobulina. Neste modelo, apenas as seq??ncias da imunoglobulina que sofressem hipermuta??es som?ticas teriam o potencial de gerar um epitopo de c?lula T. No segundo cap?tulo, usando uma combina??o de dois animais transg?nicos e a t?cnica de transplante de medula ?ssea, um terceiro animal transg?nico foi gerado. Neste modelo, a freq??ncia de uma c?lula B expressando um gene V em particular (c?lulas B 3671-&#954;Tg) ? semelhante ? diversidade do repert?rio de c?lulas B, e as c?lulas T(CA30) s?o, na grande maioria, espec?ficas para um pept?deo derivado da cadeia &#954; das c?lulas B 3671-&#954;Tg. Os resultados demonstraram que as c?lulas T s?o, na grande maioria, eliminadas no timo destes animais, por?m algumas c?lulas s?o capazes de alcan?ar a periferia. As c?lulas que escapam o timo aparentemente expressam uma cadeia &#945; end?gena, s?o ant?genos experientes, por?m n?o respondem ? estimula??o in vitro com o pept?deo. O terceiro cap?tulo teve como objetivo testar a apresenta??o do receptor como via para as c?lulas B auto-reativas, usando um animal transg?nico parcial para o receptor de c?lula B. Apesar de a auto-imunidade ter sido induzida de forma espont?nea nesses animais, nenhuma c?lula B auto-reativa encontrada na periferia expressava o receptor transg?nico.