Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-06Bitstream added on 2015-04-09T12:47:47Z : No. of bitstreams: 1 000814334.pdf: 366656 bytes, checksum: 2e7a4dc11292190294b6fa3b7e78b66a (MD5) / Considerando a relevância do linfoma canino na rotina veterinária e o curto período de sobrevida alcançado com os protocolos quimioterápicos empregados, novas alternativas de tratamento estão sendo estudadas. Nas últimas décadas, diversos estudos foram realizados correlacionando o desenvolvimento e progressão de alguns tipos de neoplasias com a superprodução de prostaglandinas nas células tumorais e inflamatórias locais, em consequência à maior produção de COX-2, que leva à proliferação celular, à supressão da apoptose, à indução da angiogênese e da metástase, ações estas que contam para sua função oncogênica. Uma das estratégias para a redução das concentrações de PGE2 é a utilização de inibidores de COX-2 no tratamento antineoplásico. No presente estudo foram avaliados 20 cães com diagnóstico de linfoma multicêntrico, divididos em dois grupos. Os animais do grupo 1 foram tratados com o protocolo quimioterápico de Madson-Wisconsin convencional, e os do grupo 2, com o protocolo modificado pela substituição da prednisona por um inibidor seletivo de COX-2. Antes da primeira (T1) e da quinta (T2) sessão de quimioterapia, foram realizados hemograma e dosagem de PGE2 plasmática por ELISA. Observou-se um maior número de animais fêmeas, das raças Rottweiler e sem raça definida, de meia idade, que apresentaram com maior freqüência, o linfoma multicêntrico em estádio IVa, de origem celular B, e difuso de grandes células. No leucograma, notou-se em alguns animais, no momento do diagnóstico, a presença de leucocitose por neutrofilia ou por linfocitose, e após o primeiro ciclo de quimioterapia, sete casos de linfopenia. Os cães com remissão dos sinais clínicos após o primeiro ciclo de quimioterapia, apresentam menores concentrações de PGE2 plasmática quando comparados com aqueles sem remissão. A associação do tratamento quimioterápico com um inibidor de COX-2 foi capaz de reduzir ... / Considering the relevance of canine lymphoma in veterinary medicine and the short survival achieved with chemotherapy protocols employed, new treatment options are being studied. In the last decades, various studies have been conducted to correlate the development and progression of certain types of cancer with the overproduction of prostaglandins in tumor sites and inflammatory cells, due to increased production of COX-2, leading to cell proliferation, the suppression of apoptosis , the induction of angiogenesis and metastasis, these actions that count toward their oncogenic function. One strategy for reducing the levels of PGE2 is the use of COX-2 in anticancer treatment. In this study 20 dogs with diagnosis of multicentric lymphoma, divided in two groups were evaluated. Animals in group 1 were treated with the standard Madison-Wisconsin chemotherapy protocol, and group 2, with this protocol modified by the replacement of prednisone for a selective inhibitor of COX-2. Before the first (T1) and fifth (T2) chemo, blood samples and measurement of plasma PGE2 by ELISA were performed. We observed a higher number of female animals, Rottweiler breeds and mixed breed, middle age animals, who presented with greater frequency, multicentric lymphoma in stage IVa, B cell origin, and diffuse large cell. Leukocytosis with neutrophilia or lymphocytosis was observed for some animals at the moment of diagnosis, and after the first cycle of chemotherapy, seven cases of lymphopenia. Dogs with clinical signs of remission after the first cycle of chemotherapy show lower plasma PGE2 when compared with those without remission. The association of chemotherapy treatment with a COX-2 was able to reduce concentrations of PGE2 in 50% of patients, while only 10% of those in group 1 decreased. However, it was not possible to confirme the role of PGE2 as a marker of prognosis and survival time for dogs with lymphoma

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-05Bitstream added on 2015-04-09T12:47:45Z : No. of bitstreams: 1 000814294_20150610.pdf: 154779 bytes, checksum: 51dd92acc01e4cdcca6fb139c344baff (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-12T11:19:03Z: 000814294_20150610.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-12T11:19:38Z : No. of bitstreams: 1 000814294.pdf: 481135 bytes, checksum: 6396c52973d54e22945046da7a3983f0 (MD5) / Em Medicina Veterinária o linfoma é uma neoplasia caracterizada por proliferação clonal de linfócitos malignos, sendo uma das mais comuns em cães. Há evidências que as Tregs inibem a função efetora contra tumores, resultando em disfunção de células T em humanos e cães com câncer. O aumento da expressão da enzima ciclooxigenase-2 (COX-2) pelas células do tumor e células inflamatórias locais, estimula o desenvolvimento das Tregs. Deste modo, o tratamento com inibidores de COX-2, como os anti-inflamatórios não esteroidais é mais uma estratégia para a supressão das Tregs. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar quantitativamente, por intermédio da citometria de fluxo, as Tregs em cães com linfoma, submetidos ao protocolo quimioterápico CHOP, associado ou não a um inibidor de COX-2 (Firocoxib). Foram utilizados 12 cães controles (hígidos), 12 cães com linfoma tratados com o protocolo CHOP e 12 cães com linfoma, tratados com o CHOP+Firocoxib. As Tregs formam avaliadas por citometria de fluxo, no momento do diagnóstico, após a indução da quimioterapia (5ª semana) e ao término do protocolo (20ª semana). Os resultados mostraram que os cães com linfoma apresentaram porcentagens maiores de Tregs (17,08±1,62) quando comparados ao grupo controle (5,67±1,62) (p<0,0001). Além disso, no grupo linfoma teve uma diminuição das porcentagens de Tregs ao final do protocolo quimioterápico, nos grupos tratados com o protocolo CHOP tradicional (GT1) (8,648±1,736) e no grupo tratado com CHOP associado a um firocoxib (GT2) (5,903±1,126) (p<0,0001). E que entre os grupos, GT1 (20,66±2,487) e GT2 (12,79±0,7673), apenas no momento do diagnóstico (M0), foi estatisticamente diferente (p<0,0114). Conclui-se que cães com linfoma multicêntrico possui um aumento das Tregs, e durante o protocolo quimioterápico, associado ou não a um firocoxib, essas células diminuem significativamente / In Veterinary Medicine lymphoma is a neoplasm characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes, one of the most common in dogs. There is evidence that Treg inhibit the effector function against tumors, resulting in T cell dysfunction in humans and dogs with cancer. Increased expression of cyclooxygenase-2 enzyme (COX-2) by tumor cells and local inflammatory cells, stimulates the development of Treg. Thus, treatment with COX-2 inhibitors such as nonsteroidal anti-inflammatory is a further strategy for the removal of Tregs. In this context, this work aimed to evaluate quantitatively, through flow cytometry, Tregs in dogs with lymphoma undergoing chemotherapy protocol CHOP, with or without a COX-2 inhibitor (Firocoxib). 12 dogs were used controls (healthy), 12 dogs with lymphoma treated with CHOP protocol and 12 dogs with lymphoma treated with CHOP + Firocoxib. Tregs form assessed by flow cytometry at diagnosis after induction chemotherapy (Week 5) and the protocol termination (20 weeks). The results showed that dogs with lymphoma had higher percentages of Tregs (17.08 ± 1.62) compared with the control group (5.67 ± 1.62) (p <0.0001). Moreover, in the lymphoma group had a decrease of Treg percentages at the end of chemotherapy protocol, the groups treated with the traditional CHOP protocol (GT1) (8.648 ± 1.736) and in the CHOP arm associated with a firocoxib (GT2) (5,903 ± 1.126) (p <0.0001). And that between the groups, GT1 (20.66 ± 2.487), and GT2 (12.79 ± 0.7673) only at the time of diagnosis (M0), was statistically different (p <0.0114). It was concluded that dogs with multicentric lymphoma has increased Tregs, and during the chemotherapy protocol, with or without a firocoxib, these cells decrease significantly

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:52:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-30Bitstream added on 2015-05-14T16:59:37Z : No. of bitstreams: 1 000828993.pdf: 1270098 bytes, checksum: 0228b06980bd14e7ec7b4df8a44dc533 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os linfomas estão entre as neoplasias mais frequentes na espécie canina e apresentam diversas características em comum com o linfoma do homem, e por isso, as classificações utilizadas se baseiam naquelas propostas para os linfomas humanos. O aumento no número de casos de linfoma nos seres humanos durante as últimas décadas torna o estudo comparativo entre as duas espécies de extrema importância, já que ambas compartilham o mesmo ambiente, estando sujeitas às mesmas influências ambientais, o que torna o cão um sentinela biológico muito útil. Objetiva-se neste trabalho aplicar os critérios da World Health Organization (WHO) aos linfomas caninos comparando-os aos da classificação de Kiel atualizada, utilizando a avaliação imunoistoquímica para expressão de marcadores biológicos do câncer (Ki-67, Caspase-3 e p53) pelo método de Tissue microarray (TMA), comparando-o ao método convencional, além de avaliar a eficiência do PAX5 BSAP (B cell specific activator protein) como marcador de linfomas B em comparação ao CD79a. No presente trabalho, concluímos que os critérios estabelecidos pela Histological Classification of Hematopoietic Tumors of Domestic Animals (WHO) permitem a correlação com os tipos de linfoma descritos pela classificação de Kiel. O método de TMA permite a avaliação de marcadores de proliferação e apoptose nos linfomas caninos independentemente do diâmetro dos cores. Para os linfomas B caninos o anticorpo anti-PAX-5 mostrou-se mais eficiente como marcador do que o anticorpo anti-CD79a, devendo ser associado ao painel de imunofenotipagem / Lymphomas are among the most common neoplasms in dogs and have several features in common with lymphoma of human, and therefore, the classifications used are based on those proposed for human lymphomas. The increase in the number of cases of lymphoma in humans during the last decades makes the comparison between the two kinds of extreme importance, since both share the same environment and are subject to the same environmental influences, which makes the dog a biological sentinel very useful. Objective of this work is to apply the criteria of the World Health Organization (WHO) for canine lymphoma comparing them to the updated Kiel classification, using the immunohistochemical evaluation for biological markers of cancer (Ki-67, p53 and Caspase-3) by the method of Tissue microarray (TMA), compared to the conventional method, and to evaluate the efficiency of PAX5 BSAP (B cell specific activator protein) as a marker of B-cell lymphomas compared to CD79a. In the present study, we conclude that the criteria established by Histological Classification of Hematopoietic Tumors of Domestic Animals (WHO) allow correlation with the types of lymphoma described by the Kiel classification. The method allows the evaluation of MRI markers of proliferation and apoptosis in canine lymphoma regardless of the diameter of colors. For B-cell lymphomas canine anti-Pax-5 antibody was more efficient than the marker anti-CD79a antibody should be associated with immunophenotyping panel

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-11Bitstream added on 2014-08-13T18:00:29Z : No. of bitstreams: 1 000758886.pdf: 1623359 bytes, checksum: 421c293d525c9437f7bb8843242c9b4e (MD5) / O linfoma cutâneo canino é uma dermatopatia neoplásica incomum em cães, que apresenta baixa expectativa de vida, pouca responsividade à quimioterapia e prognóstico ruim. O objetivo deste estudo foi a avaliação clínica e laboratorial de cães com linfoma cutâneo mediante ao tratamento com lomustina, estabelecer o imunofenótipo, grau de proliferação celular e apoptose do linfoma cutâneo; determinar o nível de expressão gênica do MDR-1 e avaliar a correlação de todas as variáveis com os índices de resposta terapêutica e sobrevivência. Foram avaliados 15 cães com diagnóstico histopatológico de linfoma cutâneo. Todos foram tratados com lomustina na dose de 90 mg/m2 a cada 21 dias. A taxa de resposta clínica à quimioterapia foi de 53,3 %, oito dos quinze animais apresentaram remissão parcial e sete cães (46,6%) não responderam ao tratamento testado. O tempo médio de sobrevivência nos animais tratados foi considerado baixo, 59,3 dias. As principais alterações hematológicas e bioquímicas encontradas durante a terapia foram: leucopenia (73,3%) trombocitopenia (60%) e anemia (46,1%). Toxicidade renal e hepática foi vista em 40% e 73,3% dos animais respectivamente. Em 93,3 % das amostras observou-se alto índice de proliferação celular e em 100% baixo índice apoptótico. Cerca de 93,3 % dos animais expressaram o gene MDR-1 nas células tumorais no momento do diagnóstico, com diferentes níveis de expressão. Os resultados obtidos demostram que o tratamento com lomustina deve ser extensivamente monitorado, devido a sua baixa eficácia e comprovada ação deletéria em cães. A avaliação imunohistoquímica e da expressão gênica confirmaram o comportamento biológico agressivo e a baixa expectativa de vida, no entanto, não houve correlação entre as variáveis avaliadas e a sobrevivência dos animais / The cutaneous lymphoma is an uncommon neoplastic skin disease in dogs, with decreased survival length, poor response to chemotherapy and poor prognosis. This study aimed to: 1) evaluate clinical and laboratory animals treated with lomustine; 2) establish the immunophenotype and the degree of cell proliferation and apoptosis in cutaneous lymphoma; 3) determine the level of gene expression of MDR – 1; 4) Correlate those variables to the rates of clinical response to therapy and survival. Fifteen dogs with histopathological diagnosis of cutaneous lymphoma were evaluated and treated with lomustine at a dose of 90 mg/m2 every 21 days. After chemotherapy, 53.3 % (8/15) of the animals showed partial remission and 7 dogs (46.6 %) did not respond to the treatment. The average survival time was considered short (59.3 days). The major hematological and biochemical changes observed during therapy were anemia (46.1%), leukopenia (73.3%) and thrombocytopenia (60 %). Kidney and liver toxicity was observed in 40% and 73.3 % of animals, respectively. Most of the samples (93.3 %) presented elevated rates of cell proliferation and 100% presented low apoptotic index. The majority of the animals (93.3 %) expressed MDR-1 gene in tumor cells at the moment of diagnosis, with levels of expression varying considerably. The results obtained in this work suggest that treatment with lomustine should be monitored, as its deleterious effects were demonstrated in dogs. The immunohistochemical evaluation and the gene expression confirm the aggressive biological behavior and low life expectancy, although there was no correlation between the assessed variables and the animals' survival length

Introdução e Objetivos: O sistema nervoso central (SNC) é o um sítio freqüente de recaída na criança com leucemia linfocítica aguda (LLA). Existe evidência de que a punção lombar traumática (PLT) pode representar um risco adicional de recaída no SNC quando ocorre inoculação de blastos no liqüido céfalorraquidiano (LCR). Este estudo tem por objetivo determinar se a ocorrência da PLT ao diagnóstico afeta o prognóstico de pacientes com essa patologia. Material e Métodos: Setenta e sete pacientes com diagnóstico de LLA, tratados entre 1992 a 2002, foram incluídos na análise. Quimioterapia intratecal (QIT) foi instilada imediatamente após a PL inicial (precoce), ou na segunda PL (tardia), realizada no período de 24 a 48 horas após a realização da PL inicial. Foi feita análise da influência da PLT e do momento (precoce x tardia) de administração da QIT em relação a recaída no SNC. Resultados: Entre os 19 pacientes que apresentaram PLT ao diagnóstico e receberam QIT tardia, seis tiveram recaída isolada no SNC e dois recaída combinada em SNC e medula óssea (MO). Entre os nove pacientes que tiveram PLT e receberam QIT precoce, somente um apresentou recaída combinada em SNC e MO (P=0,20); não houve, portanto, influência estatisticamente significativa da PLT na sobrevida livre de eventos (SLE) (55% para QIT precoce x 49% para QIT tardia) (P=0,37). Entretanto, em análise estratificada, de acordo com grupos de risco, observamos que para pacientes de baixo ou médio risco o OR foi de 0,8 quando recebiam QIT tardia (P=0,99) e 0,17 quando recebiam QIT precoce (P=0,47). Por outro lado, entre pacientes de alto risco o OR para recaída foi de 21,0 para aqueles que recebiam QIT tardia (P=0,09) e 1,5 para o grupo que recebia Q IT precoce (P=0,99). Conclusão: Os resultados do presente estudo são sugestivos de que a ocorrência da PLT tem uma influência adversa no prognóstico de pacientes com LLA de alto risco de recaída. Como estes resultados são decorrentes de um estudo retrospectivo, recomenda-se que sejam confirmados em estudos prospectivos randomizados. / Introduction and Objectives: The Central Nervous System (CNS) is a frequent site of relapse in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL). Traumatic lumbar puncture (TLP) is thought to increase the risk of relapse in the CNS. This study sought to determine if TLP at the time of diagnosis affected the outcome of patients. Matherial and Methods: Seventy-seven newly diagnosed patients treated from 1992 to 2002 were included in the analysis. Intrathecal therapy (IT) was instilled either immediately after the diagnostic LP (early) or at a second LP (delayed) 24 to 48 hours following the diagnostic LP procedure. The authors carried out an analysis of the influence of TLP and the timing (early versus late) of administration of IT therapy on CNS relapse. Results: Among the 19 patients who had a TLP at diagnosis and received late IT therapy, six had isolated CNS relapse and two had combined CNS and bone marrow (BM) relapse. Among the nine patients who had TLP and received early IT therapy, only one had a combined CNS and BM relapse (P=0.20); the influence of TLP was not statistically significant on the event-free survival (EFS) (55% for early IT versus 49% for delayed IT) ( P =0.37). However, when we carried out a stratified analysis according to risk categories we found that for low and standard risk patients the odds ratio (OR) for relapse was 0.8 for delayed IT therapy (P=0.99) and 0.17 for early IT (P=0.47). On the other hand, among high risk (HR) patients the OR for relapse was 21.0 for delayed IT therapy (P=0.09) and 1.5 for early IT (P=0.99). Conclusion: The occurrence of TLP impacts adversely on prognosis of HR ALL patients. As these results are based in a retrospective study with a low number of patients, the authors recommend future trials using prospective randomized studies to confirm these findings.

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Andrigo Barboza de Nardi / Banca: Ana Paula Massae Nakage Canesin / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: O presente estudo teve como objetivos avaliar seqüencial e temporalmente o quadro leucocitário de dez cães portadores de linfoma em remissão, submetidos à alta dose de ciclofosfamida, durante o uso do estimulador de colônia de granulócitos (GCSF, filgrastine) seguido ou não do transplante autólogo de medula óssea (TMO), bem como quantificar células CD34+ no sangue periférico dos referidos cães. Para tal avaliação foram utilizados três grupos experimentais, sendo o grupo 1 (G1) formado por cinco animais em remissão de linfoma que passaram por alta dose de ciclofosfamida e TMO seguido do uso de G-CSF; o grupo 2 (G2) formado por cinco animais em remissão de linfoma que sofreram alta dose de ciclofosfamida seguida do uso de G-CSF e o grupo 3 (G3) formado por dez animais saudáveis que receberam apenas o G-CSF. O transplante consistiu na colheita de medula óssea, preparo e congelamento da bolsa que continha células medulares em suspensão, condicionamento do paciente com 500mg/m2 de ciclofosfamida, infusão das células hematopoéticas e aplicação do G-CSF. Para avaliar a recuperação hematopoética pós-transplante foi realizado leucograma e análise citométrica do sangue nos dias 7, 8, 9, 10 e 11 após condicionamento. O nadir médio dos neutrófilos segmentados (NS) no grupo com transplante de medula óssea (G1) foi 425 NS/mL, e no grupo sem TMO (G2) foi 637,4 NS/μL e ocorreu sete dias após alta-dose de quimioterápico em ambos os grupos. A duração média da neutropenia foi de três dias. Nenhum animal apresentou febre ou sepse após a alta dose de ciclofosfamida. A dose de 5μg/kg/dia durante quatro dias de filgrastine foi insuficiente na mobilização adequada de células CD34+ nos três grupos estudados, sendo necessários novos estudos para este propósito. Desta maneira, pode-se comprovar o fato de que o uso do G-CSF leva a reduções significativas na incidência... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aims of this research were to provide an analysis of several counts of leucocytes values in dogs with lymphoma in remission phase, undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, during treatment with granulocyte colonystimulating factor (G-CSF, filgrastine), followed or not by autologous bone marrow transplantation (BMT), as well to quantify CD34+ cells of peripheral blood from that dogs. For this purpose, three experimental groups were considered. Five dogs in clinical remission undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide and BMT, followed by G-CSF use were included in group 1 (G1), while group 2 (G2) was consisted by five dogs undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, followed by G-CSF. Group 3 (G3) was composed of ten healthy dogs undergone to GCSF only. Transplantation consisted of bone marrow harvest, managing and freezing bags containing lifted marrow cells, cyclophosphamide conditioning (500mg/m2), hematopoietic cells infusion and treatment with G-CSF. After transplantation, hematopoietic recovery was evaluated by means of leukograms and flow cytofluorimetrical analysis on days 7, 8, 9, 10 and 11 after conditioning. Mean nadir neutrophil (NS) counts in group undergone transplantation (G1) was 425 NS/mL versus 637,4 NS/μL in group without BMT (G2). Nadir was observed on the seventh day after high-dose chemotherapy in both groups and neutropenia mean time was three days. Fever or sepsis was not observed in any dog after high-dose cyclophosphamide. Four days of filgrastine treatment in dose of 5μg/Kg, daily, was not enough to mobilize CD34+ cells appropriately in three groups analyzed, requiring new studies for this purpose. Considering these results, it is possible to conclude that G-CSF significantly reduces the incidence, severity and duration of neutropenia / Doutor

Orientador: Áureo evangelista Santana / Banca: Alessandra Kataoka / Banca: Maria Rita Pacheco / Resumo: O presente estudo teve como objetivos promover a avaliação seqüencial e temporal do quadro leucocitário de cães portadores de linfoma, em remissão, submetidos à alta dose de ciclofosfamida seguida do transplante autólogo de medula óssea, bem como quantificar células CD45+ na medula óssea e sangue periférico dos referidos cães. O transplante consistiu de colheita de MO, preparo e congelamento da bolsa que continha células medulares em suspensão, condicionamento do paciente com 500mg/m2 de ciclofosfamida, infusão das células hematopoéticas e aplicação de fator estimulador de colônia. Para avaliar a recuperação hematopoética pós-transplante, realizaram-se leucograma e análise citométrica do sangue e medula óssea, por 28 dias após o transplante. O nadir médio dos neutrófilos segmentados foi 513 células/mL, e ocorreu 3 a 7 dias pós- TMO. A duração média da neutropenia foi de 3,2 dias. As mais elevadas contagens de leucócitos, para animais do grupo tratado que receberam G-CSF, foram observadas no último dia de sua aplicação, exceto para um animal. Nenhum animal apresentou febre ou sepse após a alta dose de ciclofosfamida. Desta maneira, podese comprovar o fato de que o uso do filgrastim leva a reduções significativas na incidência, severidade e duração da neutropenia. O aumento na quantidade de células CD45+ na medula óssea de cães tratados deveu-se aos efeitos combinados do autotransplante de células hematopoéticas e à ação do G-CSF. / Abstract: The present study has the goal to promote sequential and timing evaluation of leucocytes of dogs bearers of lymphoma, in remission, submitted to the high dose of cyclophosphamide followed by the autologous bone marrow transplant, as well as to quantify CD45+ cells in the bone marrow and blood of the abovementioned dogs. The transplant consisted of MO collect, preparation and freezing of the bag that contained medullar cells, conditioning of the patient with 500mg/m2 of cyclophosphamide, infusion of the hematopoietics cells and application of colonystimulating factor. In order to evaluate post-transplant hematopoietic recovery, leucogram and cytometric analysis of the blood and bone marrow were carried out for 28 days after the transplantation. The medium nadir of the segmented neutrophils was 513 cells/mL, and it occurred / took place 3 to 7 days after TMO. The medium duration of the neutropenia was of 3,2 days. The highest counts of leucocytes, to animals of the treated group that received G-CSF, could be observed on the last day of its application, except for one animal. None of the animals presented either fever or sepse after the high dose of cyclophosphamide. Thus, it can be verified that the use of filgrastim leads to significant reductions on the incidence, severeness and duration of the neutropenia. The increase of CD45+ cells in the bone marrow of the treated dogs was due to combined effects of the autotransplant of hematopoietics cells and to the G-CSF action. / Mestre

Uma das causas mais freqüentes de insucesso terapêutico do câncer, está associada à Resistência a Múltiplas Drogas (MDR). A resistência a múltiplas drogas refere-se ao desenvolvimento de resistência simultânea a uma variedade de agentes citotóxicos que apresentam diferentes sítios de ação e estruturas químicas diversas. Os mecanismos MDR são representados por genes cujos produtos funcionam como bombas, reduzindo o acúmulo intracelular de drogas e a resposta ao tratamento. O linfoma é uma neoplasia comum na espécie, sendo muito responsiva à quimioterapia, embora a recidiva seja esperada e possa estar relacionada ao MDR. O presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão dos genes MDR-1, MRP e LRP e de seus produtos, em cães com linfoma. Foram colhidas amostras de linfonodos periféricos de 15 cães com linfoma multicêntrico ao diagnóstico e na recidiva (durante a quimioterapia). A expressão dos genes e proteínas MDR foram determinados por RT-PCR e \"Dot Blotting\", respectivamente. As freqüências de expressão ao diagnóstico dos genes MDR, MRP e LRP foram 93,3% igualmente e as freqüências de seus produtos foram 85,8%; 71,5% e 85,8% respectivamente. Na recidiva, as freqüências de expressão dos genes MDR, MRP e LRP elevaram-se para 100% igualmente e as freqüências de suas proteínas foram 92,9% para P-gp e MRP e de 100% para LRP. Portanto, obteve-se uma alta freqüência na expressão do MDR-1/P-gp, MRP e LRP, em quase todos os cães, não só na recidiva, como também ao diagnóstico. É necessário verificar se estes mecanismos podem induzir o fenótipo MDR no linfoma canino multicêntrico. O estudo dos mecanismos MDR trará novas perspectivas para o tratamento de tumores como o linfoma canino. A modulação desses mecanismos por meio de drogas específicas ou por terapia gênica, pode contribuir para o sucesso do tratamento de neoplasias caninas ou humanas. / One of the most frequent causes of treatment failure in cancer is associated to Multiple Drug Resistance (MDR). MDR refers to simultaneous resistance to a variety of cytotoxic agents that have different targets and diversal chemical structures. MDR mechanisms are represented by genes wich encodes proteins that work like pumps, reducing intracellular drug acumulation and the response to treatment. Lymphoma is a common neoplasia in dogs wich is very responsive to chemotherapy, although relapses are expected, including those related to MDR. The aim of this study was to evaluate the possible expression of MDR-1, MRP and LRP genes and their proteins, in dogs with lymphoma. Lymph node samples at diagnosis and at relapse (during chemotherapy) from 15 dogs with multicentric lymphoma were obtained. The expression of MDR genes and proteins were determined by RT-PCR and Dot Blotting. Expression of MDR, MRP and LRP gene were 93,3% at diagnosis and their products were 85,8%; 71,5% and 85,8% respectively. Expression of MDR, MRP and LRP gene increased to 100% at relapse and their proteins were 92,9% to P-gp and MRP and 100% to LRP. High frequency of MDR-1/P-gp, MRP and LRP expressions were found in almost all dogs, not only at relapse but also at diagnosis. It\'s necessary to analyse if these mechanisms can induce the MDR fenotype in canine multicentric lymphoma. The study of MDR mechanisms will conduct the treatment of tumors like canine lymphoma to new perspectives. The modulation of these mechanisms by certain drugs or gene therapy, may contribute to the success in treatment of canine or human neoplasias.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:51:08Z : No. of bitstreams: 1 semolin_lms_me_jabo.pdf: 459480 bytes, checksum: a04688b37ebdfeff1509f159e7641c20 (MD5) / O linfoma é uma doença linfoproliferativa caracterizada pela multiplicação clonal de linfócitos malignos no seio dos órgãos linfóides, afetando principalmente os linfonodos, ou outros órgãos viscerais sólidos, com prognóstico dependente de vários fatores, incluindo invasão tecidual. Enzimas proteolíticas MMP-2 e MMP-9 estão sendo estudadas quanto à importância neste processo de progressão tumoral por propiciarem a penetração e infiltração celular. Considerando a importância atual destas enzimas e o papel ainda não fundamentado nas neoplasias hematopoiéticas, avaliou-se a expressão de MMP-2 e MMP-9 em cães acometidos por linfoma multicêntrico e cães hígidos, através de técnica imuno-histoquimica de linfonodo e eletroforese zimográfica de linfonodo e soro, estabelecendo a relação entre a expressão destas enzimas e os fatores prognósticos como estadiamento, imunofenotipo e grau histopatológico da neoplasia e resposta ao tratamento. Observou-se maior expressão tecidual de MMP-9 nos animais com linfoma, através de técnica imuno-histoquimica, sem correlação exata com prognóstico. Eletroforese zimográfica do linfonodo demonstrou correlação da MMP-9 com imunofenótipo T e animais em doença progressiva, inferindo possível prognóstico negativo quanto à sobrevida. Valores de MMP-2 não apresentaram relação clara com o processo tumoral, assim como os valores séricos das duas enzimas. Desta forma, a MMP-9 demonstrou participação no processo neoplásico, porém sem determinação prognóstica exata / Lymphoma is a lymphoproliferative disease characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes within lymphoid organs, mainly affecting the lymph nodes, or other solid visceral organs, with prognosis depends on several factors, including tissue invasion. Proteolytic enzymes MMP-2 and MMP-9 have been studied as to the importance of tumor progression in this process by propitiate the penetration and cellular infiltration. Considering the current importance of these enzymes and the role not grounded in hematopoietic malignancies, we evaluated the expression of MMP-2 and MMP-9 in dogs affected by multicentric lymphoma and healthy dogs by immunohistochemistry technique of lymph node and zymography electrophoresis of lymph node and serum, establishing the relationship between the expression of these enzymes and prognostic factors such as tumor staging, immunophenotyping, histological grade and response to treatment. We observed increased expression of MMP-9 tissue in animals with lymphoma by immunohistochemistry technique, no exact correlation with prognosis. Zymography electrophoresis of lymph node demonstrated correlation of MMP-9 with T-cell phenotype and progressive disease, inferring possible negative prognosis regarding survival. Values of MMP-2 showed no clear relation with the tumoral process as well as serum levels of the two enzymes. Thus, MMP-9 demonstrated involvement in the neoplastic process, but without accurate prognostic determination

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-29Bitstream added on 2014-06-13T18:51:11Z : No. of bitstreams: 1 vieira_mc_me_jabo.pdf: 816589 bytes, checksum: 992bdbe14c30f516f59f33c1e0558c91 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O linfoma é o principal tumor hematopoiético no cão e é caracterizado pela proliferação de células originadas do tecido linfóide, histiócitos e seus precursores. Os animais com linfoma frequentemente apresentam alterações hematológicas e bioquímico-séricas, tais como anemia normocítica normocrômica não regenerativa, anemia hemolítica, hipercalcemia e gamopatia monoclonal. O objetivo desse estudo foi quantificar e qualificar as proteínas séricas totais e suas frações, em cães sadios e linfomatosos, sendo estes submetidos ao protocolo quimioterápico de Madison- Wisconsin. Após sinérese, centrifugação e obtenção das amostras de soro, de 10 cães sadios e 10 cães linfomatosos, as proteínas de fase aguda foram separadas por eletroforese em matriz de gel de poliacrilamida, e suas concentrações determinadas por densitometria computadorizada. Foram encontradas de 18 a 31 proteínas no fracionamento eletroforético, com pesos moleculares variando de 18 a 245 KD (kilodáltons). Os pesos moleculares obtidos foram: IgA, 170 KD; ceruloplasmina, 125 KD; transferrina, 85KD; albumina, 65 KD; 1-antitripsina, 60 KD; IgG (cadeia pesada), 50 KD; haptoglobina, 39 KD; 1-glicoproteína ácida, 37 KD; proteína nº 9, 33 KD; IgG (cadeia leve), 25 KD; e proteína nº 11, 23 KD. Os resultados mostraram que algumas proteínas de fase aguda se alteram no linfoma. A 1-antitripsina, 1-glicoproteína ácida, transferrina, IgG (cadeia pesada) e globulinas apresentaram diferenças significativas entre cães sadios e linfomatosos, no momento zero, antes da 1ª sessão de quimioterapia. Já nos cães linfomatosos, somente a concentração da proteína nº 9 (33KD) apresentou diferença significativa, durante o protocolo quimioterápico. / The lymphoma is the principal hematopoietic tumor in dogs and it is characterized by the proliferation of cells from lymphoid tissue, histiocytes and its precursors. Animals with lymphoma often showed changes in biochemical and hematological parameters of those animals such as non-regenerative normocromica normocytic anemia, hemolytic anemia, hypocalcemia and monoclonal gamopatia. The purpose of this study was quantify and qualify the serum total proteins and its fraction, in dogs healthy and with lymphoma, these under went the Madison-Wisconsin chemotherapy protocol. After centrifugation and fractioning of the serum samples, the acute phase proteins were separated by polyacrilamide gel electrophoresis, and their concentrations were determined by computer densitometry. Between eighteen and thirty proteins were separated by eletrophoresis, with molecular weights ranged from 18 to 245 KD (kilodaltons). The molecular weights of the proteins more found were: IgA, 170 KD; ceruloplasmin, 125 KD; transferrin, 85 KD; albumin, 65 KD; 1-antitripsin, 60 KD; IgG (weighty chain), 50 KD; haptoglobin, 39 KD; 1-acid glycoprotein, 37 KD; protein nº 9, 33 KD; IgG (light chain), 25 KD and protein nº 11, 23 KD. The results showed that some acute phase proteins changed in lymphoma. The 1-antitripsina, 1-acid glycoprotein, transferring, IgG (weighty chain) and globulins, showed significantly diferences between healthy and lymphoma dogs, in time zero, before 1ª chemotherapy session. In dogs with lymphoma, only protein nº 9 (33KD) showed significantly diference, during chemotherapy protocol.