PARENTE, T. M. L. Perfil de resistência a antibióticos e a terapia fotodinâmica antimicrobiana exibida por isolados ambientais, orais e extra-orais de Serratia marcescens. 2010. 90 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Curso de Medicina - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2010. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-04-18T15:28:12Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_tmlparente.pdf: 50723625 bytes, checksum: 536c8be1802258847a68d8c4bdad58aa (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-04-18T15:39:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_tmlparente.pdf: 50723625 bytes, checksum: 536c8be1802258847a68d8c4bdad58aa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T15:39:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_tmlparente.pdf: 50723625 bytes, checksum: 536c8be1802258847a68d8c4bdad58aa (MD5) Previous issue date: 2010 / Serratia marcescens is widely distributed in nature, but has emerged in the last years as important nosocomial pathogen with resistance of many antimicrobial drugs. This study aimed to verify the susceptibility of Serratia marcescens isolates from environment, from oral infections and from extra-oral infections to different antibiotics and evaluate the antimicrobial effect of photodynamic antimicrobial therapy as biotechnology tools reducing bacterial growth in planktonic cells and biofilm. E-test® were performed for fifty-five strains and the PACT for the thirty strains more resistant to antimicrobials tested. The antimicrobial effect of toluidine blue O, associated with 4,72 J cm-2 of a light-emitting diode , was evaluated. Before and after the treatments, bacterial inocula were analysed with regard to the number of colony- forming units. For antimicrobials, we observed that the 55 strains analyzed, 13 (23.63%) were resistant to doxycycline, but only one (1.81%) isolate showed resistance to ciprofloxacin, another to tobramycin and another to cefotaxime, 24 ( 43.63%) strains had intermediate sensitivity to doxycycline, all were sensitive to imipenem and most were sensitive to ciprofloxacin, tobramycin and cefotaxime Statistical analysis showed no significant differences in resistance of samples of different origins for drugs DX, CT, and IP. Considering the resistance to CI, the environmental samples were significantly more resistant than samples oral and extra-oral. For the drug TM, the oral samples were significantly more sensitive than the other samples. The irradiation of planktonic and biofilm cultures in the absence of TBO (L+S-), incubation with TBO alone (L-S+) and untreated control group (L-S-) had no significant effect on the viability of strains of S. marcescens studied (p <0.05). Significant decreases in bacterial viability was observed only when planktonic and biofilm culture of environmental strains, oral and extra-oral S. marcescens were exposed to toluidine blue O and LED light at the same time (L+S+). Significant reductions in bacterial counts were observed by antimicrobial photodynamic therapy ranging from 10-11 to 10-7.The association of TBO and light, with energy density 4,72 J cm-2, was effective in reducing the viability of bacterial strains in environmental, oral and extra-oral S. marcescens and can be a useful biotechnological tool in the control of bacterial resistance / Serratia marcescens se encontra largamente distribuída na natureza, mas tem emergido nos últimos anos como um importante patógeno nosocomial resistente a diversos antimicrobianos. Este estudo teve como objetivo verificar a susceptibilidade de isolados ambientais, orais e extra-orais de Serratia marcescens a diferentes antibióticos e avaliar a terapia fotodinâmica antimicrobiana na redução do crescimento bacteriano em culturas de células planctônicas e biofilme. O teste de susceptibilidade antimicrobiano E-test® foi realizado para as 55 cepas e o TFA para as 30 cepas mais resistentes aos antimicrobianos testados. O efeito antimicrobiano do azul de o-toluidina associado com 4,72 J cm-2 de luz emitida por um diodo (LED) foi avaliado. Antes e após os tratamentos, os inóculos bacterianos foram analisados com consideração do número de unidades formadoras de colônias. Considerando o perfil antimicrobiano observamos que das 55 cepas analisadas, 13 (23,63%) apresentaram resistência à doxiciclina, mas apenas um (1,81%) isolado apresentou resistência ao ciprofloxacino, outro à tobramicina e outro à cefotaxima; 24 (43,63%) cepas apresentaram sensibilidade intermediária à doxiciclina, todas foram sensíveis ao imipenem e a maioria foi sensível ao ciprofloxacino, à tobramicina e à cefotaxima. A análise estatística demonstrou não haver diferenças significativas no perfil de resistência das amostras de diferentes origens em relação as drogas DX, CT e IP. Considerando a resistência a CI, as amostras ambientais foram significativamente mais resistentes do que as amostras orais e extra-orais. Para a droga TM, as amostras orais foram significantemente mais sensíveis do que as demais amostras. A irradiação das culturas planctônicas e biofilmes na ausência de TBO (L+C-), a incubação com TBO sozinho (L-C+) e o grupo controle não tratado (L-C-) não apresentou efeitos significativos na viabilidade das cepas de S. marcescens estudadas (p < 0,05). Decréscimos significativos na viabilidade bacteriana foram observados somente quando cultura planctônica e biofilme de cepas ambientais, orais e extra-orais de S. marcescens foram expostas ao azul de orto toluidina e luz LED ao mesmo tempo (L+C+). Reduções significativas nas contagens bacterianas foram observadas pela Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana com variação de 10-11 a 10-7. A associação de TBO e LED, com densidade de energia de 4,72 J cm-2 , foi efetivo na redução da viabilidade bacteriana em cepas ambientais, orais e extra-orais de S. marcescens podendo ser uma ferramenta biotecnológica útil no controle da resistência bacteriana

Introdução: A Laserterapia de Baixa Intensidade (LTBI) é uma terapia que tem se mostrado eficiente na reparação tecidual em trabalhos com cultura celular e experimentos animais, mas existe uma escassez de trabalhos com cicatrização de incisões pós-cirúrgicas em humanos utilizando laser infravermelho GaAlAs de 830nm. O objetivo desse trabalho foi investigar a eficácia do laser infravermelho GaAlAs de 830nm no processo de cicatrização de incisão póscirúrgica de hérnia inguinal Métodos: 28 pacientes submetidos à cirurgia de hérnia-inguinal foram divididos randomicamente em grupo experimental (G1) e grupo controle (G2). O G1 recebeu tratamento com laser, sendo a primeira aplicação 24hs após a cirurgia e as demais dia sim dia não até um total de 4 aplicações. Ambos os grupos foram reavaliados após 6 meses por meio da Escala de cicatriz de Vancouver (ECV) e Escala visual analógica (EVA) e da espessura da cicatriz. As incisões foram irradiadas com laser diodo, =830 nm, 40 mW de potência de saída, 0,08cm² de diâmetro da ponteira de emissão, 26 segundos, 1,04J de energia por ponto e fluência de 13J/cm². Resultados: O G1 apresentou melhora significativa nas médias (p<0,05) da soma total da VSS 11 G1 2,14(±1,51) e G2 4,85(±1,87), na espessura G1 (0,11) e G2 (0,19) e na elasticidade da cicatriz G1 (0,14) e G2 (1,07). Conclusão: De acordo com os resultados obtidos nesse trabalho o tratamento com laser (830nm), usado na cicatrização de cirurgias de hérnia inguinal conseguiu melhorar a aparência e a qualidade da cicatriz seis meses após a incisão. / Background: Low Level Laser Therapy (LLLT) has been shown to be beneficial in the tissue repair process as shown in work done with tissue culture and animal experiments. However, there is a scarcity of work done with regard to post-surgical scarring of incisions in humans using infrared, 830nm, GaAlAs laser. The purpose of this study was to investigate the efficacy of an infrared, GaAlAs laser with a wavelength of 830nm in the post surgical scarring process after Inguinal Hernia Surgery. Method: 28 patients who underwent surgery for Inguinal Hernias were randomly divided into an Experimental Group (G1) and a Control Group (G2). The G1 received low level laser treatment (LLLT) with the first application being made 24 hours after surgery and then every other day for a total of 4 applications. Both Groups were re-evaluated after 6 months using the Vancouver Scar Scale (VSS), the Visual Analog Scale (VAS), and a measurement of scar thickness. The incisions were irradiated with an 830 nm diode laser operating with a continuous output power of 40 mW, spot size aperture of 0.08cm ², 26 seconds, an energy per point of 1.04J and energy density of 13J/cm ². Results: The G1 showed significantly better results; in the VSS totals (2.14±1.51) versus G2 (4.85±1.87), in the thickness measurements G1 (0.11 cm) versus G2 (0.19 cm), and in the pliability G1 (0.14) versus G2 (1.07). Conclusion: According to the results of this work LLLT (830nm) of Inguinal Hernia Scars resulted in better appearance and scar quality six months after surgery.

Introdução: A Laserterapia de Baixa Intensidade (LTBI) é uma terapia que tem se mostrado eficiente na reparação tecidual em trabalhos com cultura celular e experimentos animais, mas existe uma escassez de trabalhos com cicatrização de incisões pós-cirúrgicas em humanos utilizando laser infravermelho GaAlAs de 830nm. O objetivo desse trabalho foi investigar a eficácia do laser infravermelho GaAlAs de 830nm no processo de cicatrização de incisão póscirúrgica de hérnia inguinal Métodos: 28 pacientes submetidos à cirurgia de hérnia-inguinal foram divididos randomicamente em grupo experimental (G1) e grupo controle (G2). O G1 recebeu tratamento com laser, sendo a primeira aplicação 24hs após a cirurgia e as demais dia sim dia não até um total de 4 aplicações. Ambos os grupos foram reavaliados após 6 meses por meio da Escala de cicatriz de Vancouver (ECV) e Escala visual analógica (EVA) e da espessura da cicatriz. As incisões foram irradiadas com laser diodo, =830 nm, 40 mW de potência de saída, 0,08cm² de diâmetro da ponteira de emissão, 26 segundos, 1,04J de energia por ponto e fluência de 13J/cm². Resultados: O G1 apresentou melhora significativa nas médias (p<0,05) da soma total da VSS 11 G1 2,14(±1,51) e G2 4,85(±1,87), na espessura G1 (0,11) e G2 (0,19) e na elasticidade da cicatriz G1 (0,14) e G2 (1,07). Conclusão: De acordo com os resultados obtidos nesse trabalho o tratamento com laser (830nm), usado na cicatrização de cirurgias de hérnia inguinal conseguiu melhorar a aparência e a qualidade da cicatriz seis meses após a incisão. / Background: Low Level Laser Therapy (LLLT) has been shown to be beneficial in the tissue repair process as shown in work done with tissue culture and animal experiments. However, there is a scarcity of work done with regard to post-surgical scarring of incisions in humans using infrared, 830nm, GaAlAs laser. The purpose of this study was to investigate the efficacy of an infrared, GaAlAs laser with a wavelength of 830nm in the post surgical scarring process after Inguinal Hernia Surgery. Method: 28 patients who underwent surgery for Inguinal Hernias were randomly divided into an Experimental Group (G1) and a Control Group (G2). The G1 received low level laser treatment (LLLT) with the first application being made 24 hours after surgery and then every other day for a total of 4 applications. Both Groups were re-evaluated after 6 months using the Vancouver Scar Scale (VSS), the Visual Analog Scale (VAS), and a measurement of scar thickness. The incisions were irradiated with an 830 nm diode laser operating with a continuous output power of 40 mW, spot size aperture of 0.08cm ², 26 seconds, an energy per point of 1.04J and energy density of 13J/cm ². Results: The G1 showed significantly better results; in the VSS totals (2.14±1.51) versus G2 (4.85±1.87), in the thickness measurements G1 (0.11 cm) versus G2 (0.19 cm), and in the pliability G1 (0.14) versus G2 (1.07). Conclusion: According to the results of this work LLLT (830nm) of Inguinal Hernia Scars resulted in better appearance and scar quality six months after surgery.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-29 / Objetivo: Comparar a fotocoagulação focal e em grade de acordo com o protocolo do Early Treatment Diabetic Retinopathy Study modificado (mETDRS) utilizando fotocoagulação com laser diodo 810nm sublimiar em micropulsos e densidade normal (FSM-DN) ou aumentada (FSM-DA) no tratamento do edema macular diabético (EMD). Métodos: Foi conduzido um estudo randomizado, controlado, prospectivo, duplo mascarado com pacientes não tratados com EMD e melhor acuidade visual corrigida (MAVC), pior que 20/40 e melhor que 20/400. Pacientes foram aleatorizados para receber fotocoagulação de acordo com o protocolo mETDRS (42 pacientes), FSM-DN (39 pacientes) ou FSM-DA (42 pacientes). Imediatamente antes do tratamento, 3, 6, bem como 12 meses após ele, todos os pacientes foram submetidos a exame oftalmológico, MAVC, retinografia colorida, angiografia fluorescente e tomografia de coerência óptica (OCT). Efeitos adversos nas diferentes técnicas de fotocoagulação foram observados durante o acompanhamento do estudo. Resultados: Durante o acompanhamento, todos os grupos apresentaram redução da espessura macular central, com diminuição no grupo FSM-DA de 93μm em três meses, 117μm em seis meses e 144μm em nove meses, comparado à redução de 67, 94 e 112μm em três, seis e nove meses respectivamente, no grupo mETDRS. Já o grupo FSM-DN apresentou redução de 20μm em três e seis meses e 34μm em nove meses, significativamente inferior aos grupos FSM-DA e mETDRS. Em relação à acuidade visual, houve melhora da MAVC gradual em três, seis e nove meses nos grupos FSM-DA e mETDRS sem diferenças estatisticamente significativas entre estes grupos, porém ambos superiores ao grupo FSM-DN, que não apresentou mudança na acuidade visual nesses períodos. Em doze meses, o grupo FSM-DA teve o melhor resultado em termos de MAVC (0,25 logMAR), seguido do grupo mETDRS (0,08 logMAR), enquanto o grupo FSM-DN não apresentou melhora significativa na MAVC (0,03 logMAR) (p<0,001). Todos os grupos apresentaram redução estatisticamente significativa da espessura macular central no OCT (p<0,001). O grupo FSM-DA demonstrou a maior redução (154μm), porém não foi estatisticamente significativa em relação ao grupo mETDRS (126μm; p=0,75). Não foram observados efeitos adversos graves nas diferentes formas de tratamento. Conclusão: Em um ano, a resposta clínica do grupo FSM-DA foi superior aos grupos mETDRS e FSM-DN, baseada na medida de espessura central da mácula e acuidade visual. Estes dados sugerem que a técnica de FSM-DA pode ser utilizada como conduta preferível para o tratamento de EMD, porém estudos clínicos multicêntricos são necessários para confirmar estes resultados. / Purpose: To compare modified Early Treatment Diabetic Retinopathy Study (ETDRS) focal/grid laser photocoagulation with normal-density (ND-SDM) or high-density (HD-SDM) subthreshold diode-laser micropulse photocoagulation for the treatment diabetic macular edema (DME). Methods: We conducted a prospective, randomized, controlled, double-masked clinical trial with patients with previously untreated DME and best corrected visual acuity (BCVA) worse than 20/40 and better than 20/400. Patients were randomized to receive either modified ETDRS focal / grid photocoagulation (42 patients), ND-SDM (39 patients) or HD-SDM (42 patients). Before treatment and 3, 6 and 12 months after treatment, all patients underwent ophthalmic examinations, BCVA, color fundus photography, fluorescein angiography and optical coherence tomography (OCT). Results: At 12 months, the HD-SDM group had the best improvement in BCVA (0.25 logMAR), followed by the modified ETDRS group (0.08 logMAR), while no improvements were seen in the ND-SDM group (0.03 logMAR). All groups showed statistically significant progressive reduction of CMT throughout the study (p<0.001). The HD-SDM group exhibited the greatest CMT reduction (154 μm), which was not significantly different from that of the modified ETDRS group (126 μm; p=0.75). Conclusions: At 1 year, the clinical performance of HD-SDM was superior to that of the modified ETDRS photocoagulation technique based on the anatomic and functional measures of improvement used in this investigation. A rationale for this treatment modality as a preferable approach is suggested, and the precise role of sub-threshold micropulse laser treatment may become more defined as experience grows, guided by optimized treatment guidelines and more comprehensive trials. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A terapia laser de baixa intensidade (LLLT) é capaz de modular a resposta inflamatória em vários modelos experimentais, reduzindo o infiltrado de células do sistema imune e a secreção de mediadores químicos. Estudos prévios sugerem sua utilidade também no tratamento da lesão pulmonar aguda (LPA), condição caracterizada por intensa reação inflamatória em vias aéreas distais. Assim, considerando os efeitos anti-inflamatórios do laser e a fisiopatologia da LPA, formulamos a hipótese de que a LLLT 660 nm, 10 J/cm2, poderia modular o processo inflamatório nessa patologia favorecendo a transição inflamação-reparo. Foram utilizados camundongos C57BL distribuídos aleatoriamente em 4 grupos: PBS- instilado com PBS intratraqueal; PBS+LLLT- irradiado com LLLT 6 horas após instilação intratraqueal de PBS; LPS- instilado com LPS (5 mg/kg); LPS+LLLT- irradiado com LLLT 6 horas após instilação intratraqueal de LPS. Observou-se que a instilação de LPS intratraqueal levou a um aumento do número de células inflamatórias tanto na região peribronquiolar quanto no lavado broncoalveolar (LBA), detectado na histologia pulmonar e pela expressão de F4/80. Houve também aumento da transcrição e secreção de citocinas (TNF-alfa, IL-1beta, IL-6, IL-10) e quimiocinas (MCP-1) (detectadas por PCR quantitativo e ELISA). A aplicação de LLLT 6 horas após a instilação de LPS causou uma significativa diminuição tanto no influxo de células inflamatórias quanto na secreção de mediadores. Em seguida, foram caracterizadas as populações de macrófagos presentes no tecido pulmonar e observou-se nos animais do grupo LPS+LLLT, comparados ao grupo LPS, uma diminuição na expressão de mRNA de HIF-1alfa e aumento para arginase 1, sugerindo um predomínio da população de macrófagos M2. Esse efeito da LLLT foi também testado em populações de macrófagos peritoneais estimulados com LPS em cultura, porém, embora houvesse diminuição da produção de citocinas e quimiocinas, não foram observadas diferenças nos marcadores de polarização dessas células / A low-level laser therapy (LLLT) is able to modulate the inflammatory response in several experimental models, reducing the infiltration of immune system cells and the secretion of chemical mediators. There are some previous studies suggesting also useful in the treatment of acute lung injury (ALI), a condition characterized by an intense inflammatory reaction in the distal airways. Considering the anti-inflammatory effects of laser and the pathophysiology of ALI, we hypothesized that LLLT 660 nm, 10 J/cm2, could modulate the inflammatory process in this disease favoring the transition between inflammation and repair. C57BL mice were divided into four groups: PBS - intratracheal instillation of PBS; PBS+LLLT - irradiated with LLLT 6 hours after intratracheal instillation of PBS; LPS - intratracheal instillation of LPS (5 mg/kg); LPS+LLLT - irradiated with LLLT 6 hours after intratracheal instillation of LPS. Animals were sacrificed 24 hours after injury. Intratracheal LPS inoculation induced a marked increase in the number of inflammatory cells in perivascular and alveolar spaces (detected by lung histology and in bronchoalveolar lavage), and F4/80 expression (macrophage marker). There was also an increase in the expression and secretion of cytokines (TNF-alfa, IL-1beta, IL-6, IL-10) and chemokine (MCP-1) detected by ELISA and quantitative PCR. The LLLT application 6 hours after LPS induced a significant decrease in both of the inflammatory cells influx and mediators secretion. Then, we characterized the macrophages populations in lung tissue and we observed that in the LPS+LLLT group the expression of HIF-1alfa mRNA was reduced while arginase 1 was increased, which suggested that the M2 macrophages were predominant. The LLLT effect was also tested on peritoneal macrophage population in culture stimulated with LPS and there was decreased of cytokines and chemokine production, however any difference in polarization markers was found

A terapia laser de baixa intensidade (LLLT) é capaz de modular a resposta inflamatória em vários modelos experimentais, reduzindo o infiltrado de células do sistema imune e a secreção de mediadores químicos. Estudos prévios sugerem sua utilidade também no tratamento da lesão pulmonar aguda (LPA), condição caracterizada por intensa reação inflamatória em vias aéreas distais. Assim, considerando os efeitos anti-inflamatórios do laser e a fisiopatologia da LPA, formulamos a hipótese de que a LLLT 660 nm, 10 J/cm2, poderia modular o processo inflamatório nessa patologia favorecendo a transição inflamação-reparo. Foram utilizados camundongos C57BL distribuídos aleatoriamente em 4 grupos: PBS- instilado com PBS intratraqueal; PBS+LLLT- irradiado com LLLT 6 horas após instilação intratraqueal de PBS; LPS- instilado com LPS (5 mg/kg); LPS+LLLT- irradiado com LLLT 6 horas após instilação intratraqueal de LPS. Observou-se que a instilação de LPS intratraqueal levou a um aumento do número de células inflamatórias tanto na região peribronquiolar quanto no lavado broncoalveolar (LBA), detectado na histologia pulmonar e pela expressão de F4/80. Houve também aumento da transcrição e secreção de citocinas (TNF-alfa, IL-1beta, IL-6, IL-10) e quimiocinas (MCP-1) (detectadas por PCR quantitativo e ELISA). A aplicação de LLLT 6 horas após a instilação de LPS causou uma significativa diminuição tanto no influxo de células inflamatórias quanto na secreção de mediadores. Em seguida, foram caracterizadas as populações de macrófagos presentes no tecido pulmonar e observou-se nos animais do grupo LPS+LLLT, comparados ao grupo LPS, uma diminuição na expressão de mRNA de HIF-1alfa e aumento para arginase 1, sugerindo um predomínio da população de macrófagos M2. Esse efeito da LLLT foi também testado em populações de macrófagos peritoneais estimulados com LPS em cultura, porém, embora houvesse diminuição da produção de citocinas e quimiocinas, não foram observadas diferenças nos marcadores de polarização dessas células / A low-level laser therapy (LLLT) is able to modulate the inflammatory response in several experimental models, reducing the infiltration of immune system cells and the secretion of chemical mediators. There are some previous studies suggesting also useful in the treatment of acute lung injury (ALI), a condition characterized by an intense inflammatory reaction in the distal airways. Considering the anti-inflammatory effects of laser and the pathophysiology of ALI, we hypothesized that LLLT 660 nm, 10 J/cm2, could modulate the inflammatory process in this disease favoring the transition between inflammation and repair. C57BL mice were divided into four groups: PBS - intratracheal instillation of PBS; PBS+LLLT - irradiated with LLLT 6 hours after intratracheal instillation of PBS; LPS - intratracheal instillation of LPS (5 mg/kg); LPS+LLLT - irradiated with LLLT 6 hours after intratracheal instillation of LPS. Animals were sacrificed 24 hours after injury. Intratracheal LPS inoculation induced a marked increase in the number of inflammatory cells in perivascular and alveolar spaces (detected by lung histology and in bronchoalveolar lavage), and F4/80 expression (macrophage marker). There was also an increase in the expression and secretion of cytokines (TNF-alfa, IL-1beta, IL-6, IL-10) and chemokine (MCP-1) detected by ELISA and quantitative PCR. The LLLT application 6 hours after LPS induced a significant decrease in both of the inflammatory cells influx and mediators secretion. Then, we characterized the macrophages populations in lung tissue and we observed that in the LPS+LLLT group the expression of HIF-1alfa mRNA was reduced while arginase 1 was increased, which suggested that the M2 macrophages were predominant. The LLLT effect was also tested on peritoneal macrophage population in culture stimulated with LPS and there was decreased of cytokines and chemokine production, however any difference in polarization markers was found