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Cristalização, estrutura tridimensional e atividade biológica de uma lectina de sementes de Canavalia maritima. / CRYSTALLIZATION, TRIDIMENSIONAL STRUCTURE AND BIOLOGICAL ACTIVITY OF Canavalia maritima SEEDS LECTIN

Gadelha, Carlos Alberto de Almeida January 2005 (has links)
GADELHA, C. A. A. Cristalização, estrutura tridimensional e atividade biológica de uma lectina de sementes de Canavalia maritima. 2005. 163 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2005. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-04T22:28:58Z No. of bitstreams: 1 2005_tese_caagadelha.pdf: 4773583 bytes, checksum: ca2a905592cf0eeb73e08a9881d93bee (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-11-07T23:21:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_tese_caagadelha.pdf: 4773583 bytes, checksum: ca2a905592cf0eeb73e08a9881d93bee (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T23:21:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_tese_caagadelha.pdf: 4773583 bytes, checksum: ca2a905592cf0eeb73e08a9881d93bee (MD5) Previous issue date: 2005 / Crystals of Canavalia maritima seeds lectin (ConM) were obtained using the vapor diffusion method in hanging drop by sparse matrix with reservatory solution containing 0,1 M HEPES, pH 8,43, 4% Polyethylene Glycol 400 and 2 M ammonium sulfate. The soaking technic was used to produce lectin crystals complexed with the carbohydrates maltose and trehalose. ConM native crystals diffracted to 1.56 Å resolution, belonging to the primitive orthorhombic space group P21212, with unit-cell parameters a=67.9, b=71.0, c=97.6 Å, consisting in a dimer in the asymmetric unit (VM = 2,4 A3 Da-1), with two metal binding sites per monomer, and loops involved in the molecular oligomerization. The structure was solved by standard molecular replacement techniques. The wrong amino acids residues previously suggested by manual sequencing by Perez et al. (1991) are now determinated as I17, I53, S129, S134, G144, S164, P165, S187, V190, S169, T196 and S202. These modifications confer 98% of similarity between ConM, ConA and ConBr. ConM structure presents a high level of tertiary protein folding, typically of legume lectins. Despite the specificity and the numbers of hydrogen bonds formed in the interaction with the disaccharides maltose and trehalose be the same, structurally changes occurs in the pattern of formation of the hydrogen bonds, especially in the distribution in the number of hydrogen bonds between the two glucose residues of the disaccharides. Our biological activity data show that the relaxant concentration-dependent effect of the seed lectin of Canavalia maritima on isolated aortic rings probably occurs via interaction with a specific lectin-binding site on the endothelium, resulting in a release of nitric oxide. / Cristais da lectina de sementes de Canavalia maritima (ConM) nativa foram obtidos pelo método da difusão de vapor em gota suspensa com solução do reservatório contendo tampão Hepes 0,1M pH 8.43 com 4% v/v de polietilenoglicol 400 e 2M de sulfato de amônio. Através de “soaking” dos cristais com ligantes glicídicos foram produzidos cristais da lectina complexada aos açucares maltose e trealose. Os cristais obtidos de ConM nativa difrataram a uma resolução máxima de 1,56 Å, pertencendo ao grupo primitivo ortorrômbico, P21212 com parâmetros de célula de a=67.9, b=71.0, c=97.6 Å e apresentando um dímero na unidade assimétrica (VM = 2,4 A3 Da-1). Com base nas densidades eletrônicas dos resíduos da estrutura tridimensional resolvida, constatou-se que a sequencia de Perez et al (1991) apresentava erros, que quando corrigidos e comparados com a seqüência de ConA, aumentaram para 98% o grau de similaridade entre as duas lectinas. A estrutura de ConM nativa exibe um alto grau de enovelamento terciário, típico das lectinas de leguminosas, com visível conservação do sítio de ligação a metais e loops envolvidos na oligomerização molecular. Embora a especificidade e o número de pontes de hidrogênio formadas na interação com os dissacarídeos maltose e trealose seja a mesma, estruturalmente ocorrem diferenças no padrão de formação de pontes de hidrogênio, principalmente na distribuição do número de pontes de hidrogênio entre os dois resíduos de glicose dos dissacarídeos. Os ensaios de atividade biológica mostraram que o efeito relaxante concentração-dependente da lectina de sementes de Canavalia maritima em anéis de aorta isolados ocorre provavelmente através da interação com um sítio de ligação lectina-específico presente no endotélio, resultando em liberação de óxido nítrico.
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Cristalização, análise preliminar de difração de raios X, determinação da massa molecular e seqüência protéica por espectrometria de massa de uma lectina de sementes de Dioclea virgata. / Crystallization, preliminary analysis of X-ray diffraction, determination of protein molecular weight and sequence by mass spectrometry of a lectin from Dioclea virgata.

Marinho, Emmanuel Silva de January 2010 (has links)
MARINHO, E. S. Cristalização, análise preliminar de difração de raios X, determinação da massa molecular e seqüência protéica por espectrometria de massa de uma lectina de sementes de Dioclea virgata. 2010. 64 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2015-01-19T19:17:02Z No. of bitstreams: 1 2010_tese_esmarinho.pdf: 1037591 bytes, checksum: 659d554dd8028c979ff303a1d60e3841 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-20T14:14:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_tese_esmarinho.pdf: 1037591 bytes, checksum: 659d554dd8028c979ff303a1d60e3841 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-20T14:14:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_tese_esmarinho.pdf: 1037591 bytes, checksum: 659d554dd8028c979ff303a1d60e3841 (MD5) Previous issue date: 2010 / The lectin from Dioclea virgata (Dvir) was purified and subjected to crystallization experiments, determination of protein molecular weight and sequence by mass spectrometry. The crystals of the protein complexes were obtained by X-man and using the vapor diffusion method at a constant temperature of 293 K and grew in a condition containing 0.5 M ammonium sulphate, 0.1 M sodium citrate tribasic dihydrate pH 5.6 and 1.0 M lithium sulphate monohydrate. A complete data set was collected at 1.8 Å resolution using a synchrotron radiation source. Dvir The crystal belongs to a centered orthorhombic space group I222, with unit cell parameters a = 647.5 Å, b = 86.6 Å, c = 90.2 Å and angles α = 90.0 ° β = 90 ° γ = 90.0 °. The best solution for the detection of molecular replacement had a correlation coefficient of 77.1% and 44.6% of rfactor. The lectin has a molecular mass of 25 412 Da ± 2 (α chain) at pH 6.5 or higher, is in a tetrameric arrangement and presents as a dimer in the asymmetric unit suggests a crystal packing similar to other lectin subtribe Diocleinae, D. guianensis, D. rostrata, regarding the carbohydrate-binding site and contacts dimeric. / A lectina de sementes de Dioclea virgata (Dvir) foi purificada e submetida a experimentos de cristalização, determinação da massa molecular e sequência protéica por espectrometria de massa Os cristais da proteína foram obtidos complexados com X-man e utilizando o método de difusão de vapor a uma temperatura constante de 293 K, e cresceu em uma condição contendo 0,5 M de sulfato de amônio, 0,1 M de citrato de sódio tribásico dihidratado pH 5,6 e 1,0 M de sulfato de lítio monohidratado. Um completo conjunto de dados foi coletado em 1,8 Å de resolução usando uma fonte de radiação síncrotron. O cristal de Dvir pertence a um grupo espacial I222 ortorrômbico centrado, com parâmetros de célula unitária a = 647.5 Å, b = 86.6 Å, c = 90.2 Å e os ângulos α = 90 0° β = 90° γ = 90.0°.A melhor solução para a pesquisa de substituição molecular teve um coeficiente de correlação de 77,1% e um Rfactor de 44,6%. A lectina possui massa molecular de 25412 Da ± 2 (cadeia α) em pH 6,5 ou superior, se encontra em um arranjo tetramérico e se apresenta como dímero na unidade assimétrica sugerindo um empacotamento cristalino similar a outra lectina da subtribo Diocleinae, D. guianensis, D. rostrata, a respeito do sítio de ligação a carboidrato e os contatos diméricos.
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Potencial biotecnológico de lectinas: indução de apoptose em células A549, efeito pró-cicatrizante em feridas experimentais e análise de toxicidade sobre Artemia sp. / Biotechnological potential of lectins: induction of apoptosis in A549 cells, pro-healing effects on experimental wounds and cell toxicity analysis on Artemia sp.

Arruda, Francisco Vassiliepe Sousa January 2011 (has links)
ARRUDA, F. V. S. Potencial biotecnológico de lectinas: indução de apoptose em células A549, efeito pró-cicatrizante em feridas experimentais e análise de toxicidade sobre Artemia sp. 2011. 191 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-26T19:52:50Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_fvsarruda.pdf: 10319003 bytes, checksum: 89a30bc2b3ba089940d9274f29a99945 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-03-07T13:48:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_fvsarruda.pdf: 10319003 bytes, checksum: 89a30bc2b3ba089940d9274f29a99945 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-07T13:48:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_fvsarruda.pdf: 10319003 bytes, checksum: 89a30bc2b3ba089940d9274f29a99945 (MD5) Previous issue date: 2011 / This work evaluated the biotechnological potential of lectins in the induction of apoptosis of neoplastic cells; the effect on wound healing in a murine model (in vivo) and established the level of toxicity on Artemia sp. Lectins are proteins or glycoproteins ubiquitously distributed in nature, being found from bacteria to humans. Since carbohydrates can act as mediators of biological information, the interaction with lectins can trigger some biologically important effect. To verify the role of lectins in the induction of apoptosis, A549 cells (lung carcinoma) were grown for 1 hour with lectins isolated from seeds of Canavalia ensiformis (ConA), C. brasiliensis (ConBr), C. boliviana (ConBol), C. grandiflora (Cgran) and C. gladiata (CGL) labeled with FITC. In addition, the relative gene expression of p53, Bax, Bcl-2 and caspase 9 was also evaluated when the cells were cultured with ConA, ConBr and ConBol. The data showed that all lectins interacted with A549 cells. Nevertheless, p53 and Bax had no significant change. Unlike, the expression of BCL-2 was down-regulated while caspase 9 was up-regulated by treatment with lectins. Concerning the pro-healing potential, the lectin isolated from the red alga Bryothamnion seafortii (BS) was tested by topical treatment of skin lesions. The data showed that BS improved the quality of healing, probably through the induction of fibroblast proliferation. Finally, the lethality test of Artemia sp. was carried out to determine the toxicity of some Diocleinae lectins. ConBr is the most toxic lectin against Artemia, while ConA is the least toxic, and ConBol, ConM, ConGr and CGL exhibit intermediate levels of toxicity. / Este trabalho avaliou o potencial biotecnológico de lectinas na indução da apoptose de células neoplásicas, o efeito sobre a cicatrização de feridas em modelo murino (in vivo) e estabeleceu o nível de toxicidade sobre Artemia sp. Lectinas são proteínas ou glicoproteínas distribuídas ubiquamente na natureza, sendo encontradas desde bactérias até seres humanos. Tais proteínas possuem a capacidade de ligar-se seletivamente a carboidratos. Considerando que carboidratos possam atuar como mediadores da informação biológica, a sua interação com lectinas pode desencadear algum efeito biológico importante. Para verificar o papel das lectinas sobre a indução da apoptose, células A549 (carcinoma de pulmão) foram cultivadas durante 1 hora juntamente com lectinas isoladas das sementes de Canavalia ensiformis (ConA), C. brasiliensis (ConBr), C. boliviana (ConBol), C. grandiflora (Cgran) e C. gladiata (CGL) marcadas com FITC. Em adição, a expressão gênica relativa de p53, Bax, BCL-2 e caspase 9 foi também avaliada quando as células foram cultivadas com ConA, ConBr e ConBol. Os dados mostraram que todas as lectinas intergiram com as células A549. Não obstante, p53 e Bax não tiveram nenhuma alteração significativa. Porém, BCL-2 teve sua expressão diminuída enquanto a da caspase 9 foi aumentada pelo tratamento com as lectinas. Com relação ao potencial pro-cicatrizante, a lectina isolada da alga vermelha Bryothamnion seafortii (BS) foi testada através do tratamento tópico de lesões cutâneas. Os dados mostraram que BS melhora a qualidade da cicatrização, muito possivelmente através da indução da proliferação de fibroblastos. Por fim, o teste de letalidade sobre Artemia sp. foi utilizado para verificar a toxicidade de algumas lectinas da subtribo Diocleinae. Os resultados mostraran que ConBr e ConA são as lectinas mais tóxica e menos tóxica, respectivamente. ConBol, ConM, Cgran e CGL exibiram níveis intermediários de toxicidade.
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Avaliação do efeito da lectina de Cratylia floribunda em feridas cutâneas experimentais / Evaluation of the effect from Cratylia floribunda lectin in experimental cutaneous wounds

Figueirêdo, Ingrid Samantha Tavares de January 2008 (has links)
FIGUEIREDO, Ingrid Samantha Tavares de. Avaliação do efeito da lectina de Cratylia floribunda Benth em feridas cutâneas experimentais. 2008. 112 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-04T13:48:22Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_istfiguerêdo.pdf: 6610819 bytes, checksum: 38c8d7362e86c4dee45b698edf239560 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-04-04T14:09:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_istfiguerêdo.pdf: 6610819 bytes, checksum: 38c8d7362e86c4dee45b698edf239560 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-04T14:09:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_istfiguerêdo.pdf: 6610819 bytes, checksum: 38c8d7362e86c4dee45b698edf239560 (MD5) Previous issue date: 2008 / The tissue injury evokes a physiological process of complex cellular and biochemical events that results in wound healing. This process can be divided into three phases: inflammation, proliferation and remodeling. Lectins are (glyco)proteins that can recognize and reversibly bind to carbohydrates or other substances derived from sugars. Cratylia floribunda is a leguminous species, found only in South America, from which was isolated Cratylia floribunda lectin (CFL). The aim of this work was to evaluate the topical treatment of cutaneous wounds using CFL at a cicatricial model. Surgical wounds (1cm2) were produced aseptically in the dorsal region of male Swiss mice (27-33g; n=23/group), which were randomized in two experimental groups according to the treatment set: C (150 mM NaCl) or CFL (100 µg/mL). Wounds were treated topically, daily, with 100 µL from each solution throughout all the post-operative period (PO). Clinical evaluation of the skin lesions was performed along 12 days and the parameters investigated were some macroscopic signals of inflammation and fibroplasia. Cutaneous biopsies have been carried out at 2nd, 7th and 12th PO to histopathological analysis. In parallel, the ability of the lectin to induce the in vitro macrophage release of TNF-α, a pro-inflammatory cytokine, was evaluated. CFL reduced the frequency, intensity and duration of some flogistics signals, such as edema and hiperemy. At 10th and 11th PO the wounds treated with CFL had significantly less crust (p <0.05) than the lesions of the C group. CFL anticipated the formation of granulation tissue, being displayed in a greater percentage of skin lesions. The CFL group injuries presented a higher percentage of area contraction at the firsts day of treatment and this effect remained until the 12th PO (p<0,05). The major differences of the area contraction between the groups occurred at 1st PO (22.5%) and 5th PO (20.5%). CFL group showed a statistically lower area under the curve (AUC) of the area measures than the C group (C-6,27±0,85; CFL- 4,00±1,28, p<0.05). Compared to control group, CFL group showed a significant (p <0.05) percentual of animals with healed wounds at 10th and 11th PO. Treatment with the lectin anticipated the appearance of the cicatricial tissue, being statistically significant (p <0.05) the frequence that it was observed at 6th and 8th day PO. The histopathological analyses revealed that the treatment with CFL diminished the inflammatory phase of the wound healing. Moreover, the proliferation phase was anticipated in CFL group, since there was a fibrous granulation tissue since 7th PO on the lesions treated with CFL, while, at the same period in the C group lesions, there was an initial formation of the granulation tissue. At 12th PO, it was observed a complete reepithelization of the lesions treated with CFL, while, in C group lesions, there was a few collagen fibers among the granulation tissue. CFL stimulated the in vitro release of TNF-α in peritoneal macrophages culture of mice. Those results show that Cratylia floribunda lectin modulates the inflammatory phase of the cicatricial process from cutaneous lesions in mice. We postulate that in in vivo the lectin stimulates resident cells (macrophages) for liberation of TNF-α. Together, those results reveal that CFL favors the repair of lesions. / O trauma tecidual é seguido por uma cascata de eventos celulares e bioquímicos que resulta na formação da ferida cicatrizada. Este processo pode ser dividido em três fases: inflamação, proliferação e remodelação. Lectinas são (glico) proteínas que podem reconhecer e se ligar reversivelmente a carboidratos ou a outras substâncias derivadas de açúcares. Cratylia floribunda é uma espécie de leguminosa, encontrada exclusivamente na América do sul da qual foi isolada a lectina de Cratylia floribunda (CFL). O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos do tratamento tópico diário com a CFL em um modelo de cicatrização de lesões cutâneas em camundongos. Feridas cirúrgicas (1cm2) foram produzidas sob condições assépticas na região dorsal de camundongos Swiss albinos (27-33g, n= 23/grupo), sendo estes posteriormente randomizados em dois grupo experimentais de acordo com o tipo de tratamento estabelecido: grupo C (solução salina) ou grupo CFL (100 µg/mL). As feridas foram tratadas diariamente com 100 μL de cada solução durante todo o período pós-operatório (PO). As lesões cutâneas foram submetidas à avaliações clínicas diárias durante 12 dias, onde investigou-se parâmetros macroscópicos relacionados à fase inflamatória e de fibroplasia. Os fragmentos de pele retirados nos dias de biópsia (2o, 7o e 12o dias PO) foram processados e analisados histopatologicamente. Paralelamente, verificou-se a capacidade da lectina em induzir a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α) por macrófagos in vitro. CFL reduziu a frequência, intensidade e a duração dos sinais flogísticos edema e hiperemia. No 10º e 11º dias PO a presença de crosta nas feridas do grupo tratado com a lectina foi significativamente menor (p<0,05) que no grupo controle. CFL antecipou a formação do tecido de granulação, sendo este visualizado em maior percentual das lesões cutâneas. O grupo CFL apresentou um maior percentual de contração das áreas das lesões desde os primeiros dias de tratamento e se manteve até o 12° dia PO (p<0,05). As maiores diferenças entre os percentuais de contração das lesões entre os grupos ocorreram no 1° dia PO (diferença de 22,5%) e no 5° dia PO (diferença de 20,5%). As áreas compreendidas pelas curvas (ASC) de evolução em ambos os grupos demonstrou diferença estatística entre os grupos (C - 6,27 ± 0,85; CFL - 4,00 ± 1,28, p<0.05). Em relação ao grupo C, CFL apresentou de forma significativa (p<0,05) um maior percentual de animais com feridas cicatrizadas no 10° e 11° dia de PO. O tratamento com a lectina antecipou o surgimento de tecido cicatricial, sendo estatisticamente significante (p<0,05) a frequência com que este foi observado no 6° e 8° dia PO. As análises histopatológicas mostraram que o tratamento com a CFL favoreceu a resolução da fase inflamatória. Além disso, a fase proliferativa foi antecipada no grupo CFL, sendo este aspecto evidenciado pela presença de um tecido de granulação fibroso desde o 7° dia de PO, enquanto que no mesmo período, as lesões do grupo C apresentavam uma formação inicial deste tecido. No 12° de PO foi observado uma completa reepitelização das lesões tratadas com CFL, enquanto que no grupo C um tecido de granulação sendo ainda invadido por fibras colágenas. CFL in vitro estimulou a liberação de TNF- α em cultura de macrófagos peritoneais de camundongos. Esses resultados mostram que a lectina de Cratylia floribunda modula a fase inflamatória do processo cicatricial de lesões cutâneas em camundongos. Hipotetizamos que in vivo a lectina estimula células residentes (macrófagos) a liberação de TNF-α. Em conjunto, esses resultados revelam que a CFL favorece o reparo de lesões.
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Estudo da atividade antiinflamatória e antinociceptiva da lectina isolada de sementes de Lonchocarpus sericeus (Poir.) Kunth / Study of antiinflammatory and antinonociceptive activities of lectin from lonchocarpus sericeus seeds (poir.) kunth

Mota, Mário Rogério Lima January 2008 (has links)
MOTA, Mario Rogério Lima. Estudo da atividade antiinflamatória e antinociceptiva da lectina isolada de sementes de Lonchocarpus sericeus (Poir) Kunth. 2008. 152 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-04T16:12:17Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_mrlmota.pdf: 2870545 bytes, checksum: fdc0b69fc513d197b88d1acd95f9ad88 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-05T11:31:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_mrlmota.pdf: 2870545 bytes, checksum: fdc0b69fc513d197b88d1acd95f9ad88 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-05T11:31:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_mrlmota.pdf: 2870545 bytes, checksum: fdc0b69fc513d197b88d1acd95f9ad88 (MD5) Previous issue date: 2008 / Lectins are non-immune (glyco)proteins that can recognize and reversibly bind to carbohydrates or other substances derived from sugars. Lonchocarpus sericeus seeds (LSL) shows a molecular mass of 23555 ± 15 Da and a a-metyl glucopyranoside and N-acetyl-glucosamine binding specificity. The aim of this work was to evaluate the antinoceptive and antiinflammatory activity of lectin from Lonchocarpus sericeus seeds (LSL). To do so, we used swiss mice (25-35g). In the antiinflammatory activity studying, LSL (10 or 100 mg/kg; i.v.; 15 minutes) inhibited the migration (neutrophil rolling and adhesion) to the peritoneal cavities of animals stimulated with carrageenan (Cg), and the effect seems to be related to the cytokines (TNF-a and IL-1b) and chemokines (MIP-1a [CCL3], KC [CXCL1]) level reduction induced by this lectin. The LSL inhibitory effect on the neutrophil migration seems to be also related to the nitric oxide (NO) systemic levels increasing. LSL was effective on the NO increasing on animals’ serum. The pretreatment of mice using aminoguanidin (nitric oxide reduced synthase inhibitor) reversed the antiinflammatory effect of lectin on the neutrophil migration. Still referring to the anti-inflammatory activity, LSL was effective on inhibiting the neutrophil migration to the peritoneal cavities of animals immunized and stimulated with ovalbumin (OVA), but the lectin was unable to inhibit an in vitro neutrophil migration induced by MIP-2, showing an indirect action of LSL (cytokines and chemokines) on the migration inhibition. In the antinoceptive study, LSL (3 or 10 mg/kg; i.v.; 30 minutes) reduced abdominal contortion induced by acetic acid and only decreased the second phase of formalin test, showing an activity on the inflammatory pain. In the hot plate test LSL didn’t show any effects. To evaluate the anti-inflammatory pain, we did a study based on the anthihypernociceptive activity. Thus, LSL (10 or 100 mg/kg; i.v.; 15 minutes) inhibited the mechanical hypernociception induced by carrageenan and ovalbumin (immunized animals) intraplantarly administration, but not induced by prostaglandin E2. (PGE2). This effect was correlated to the block of neutrophil influx, suggested by the reduction of myeloperoxidase (MPO) levels on animal’s paws pretreated with LSL (3 or 10 mg/kg; i.v.; 15 minutes) and stimulated with carregeenan. This antihyperalgesic effect seems to be highly dependent of the cytokines (TNF-a and IL-1b) and chemokines (MIP-1a [CCL3], KC [CXCL1]) level decreasing, since LSL (10 or 100 mg/kg; i.v.; 15 minutes) reduced these mediators’ levels on animal’s paws pretreated with Cg (intraplantar). Corresponding to the possible central activity, LSL (10 mg/kg; i.v.) did not alter the motor activity and not provoked depression on animals. LSL acute toxicity was evaluated by treating the rats with LSL (10 mg/kg; i.v.) during seven days analyzing several parameters of the animals: kidney functions (wet weight, urea dosage), liver functions (wet weight, kinetic evaluation of aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase), heart (wet weight) stomach (wet weight and visual evaluation of possible lesions), variation in body weight of treated animals and leukogram. The obtained results didn’t show any alteration on the evaluated parameters suggesting that LSL doesn’t show any toxicity on animals. In conclusion, the antinoceptive and antihyperalgesic activity of LSL are associated to the inhibition of the neutrophil migration; it is probably a reflection of an inhibition on cytokines and chemokines free flowing and for the increasing of NO free flow. Additionally, this lectin doesn’t show acute toxicity and central effects. / Lectinas são (glico)proteínas de origem não imune e que podem reconhecer e se ligar reversivelmente a carboidratos ou a outras substâncias derivadas de açúcares. A lectina de sementes de Lonchocarpus sericeus (LSL) apresenta massa molecular aparente de 23555 ± 15 Da e especificidade de ligação a N-acetil-glicosamina e α -metil-glicopiranosídeo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiinflamatória e antinociceptiva da Lectina de sementes de Lonchocarpus sericeus (LSL). Para tal, utilizamos camundongos Swiss albinos (25-35g). No estudo da atividade antiinflamatória, LSL (3 ou 10 mg/kg; e.v.; 15 minutos) inibiu a migração (rolamento e adesão de neutrófilos) para a cavidade abdominal de animais estimulados com carragenina (Cg), e este efeito parece estar relacionado com a redução dos níveis de citocinas (TNF-α and IL-1β) e quimiocinas (MIP-1α [CCL3], KC [CXCL1]) por esta lectina. O efeito inibitório da LSL sobre a migração de neutrófilos, parece também envolver o aumento nos níveis sistêmicos de óxido nítrico (NO), pois LSL (10 mg/kg; e.v.) foi capaz de aumentar os níveis de NO no soro de animais, e o pré-tratamento de camundongos com aminoguanidina (inibidor da óxido nítrico sintase induzida) foi capaz de reverter o efeito aniinflamatório desta lectina sobre a migração de neutrófilos. Ainda em relação à atividade antiinflamatória, LSL foi capaz de inibir a migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal de animais imunizados e estimulados com ovoalbumina (OVA), porém, esta mesma lectina foi ineficaz em inibir a migração de neutrófilos in vitro estimulada por MIP-2, demonstrando então um papel indireto da LSL (redução de citocinas e quimiocinas) na inibição da migração. No estudo da atividade antinociceptiva, LSL (10 ou 100 mg/kg; e.v.; 15 minutos) reduziu as contorções abdominais induzidas por ácido acético e diminuiu somente a segunda fase do teste da formalina, demostrando uma atividade sobre a dor inflamatória. No teste da placa quente, LSL não apresentou efeito. Para avaliar a dor inflamatória realizaram-se estudos de atividade antihipernociceptiva. Assim, LSL (3 ou 10 mg/kg; e.v.; 15 minutos) inibiu a hipernocicepção mecânica induzida por administração intraplantar de carragenina e ovalbumina (animais imunizados) mas não a induzida por prostaglandina E2 (PGE2). Este efeito foi correlacionado ao bloqueio do influxo de neutrófilos, sugerido pela redução dos níveis de mieloperoxidase (MPO) nas patas de animais pré-tratados com LSL (3 ou 10 mg/kg; e.v.; 15 minutos) e estimulados com carragenina. Este efeito antihiperalgésico parece também depender da redução dos níveis de citocinas (TNF-α and IL-1β) e quimiocinas (MIP-1α [CCL3], KC [CXCL1]), uma vez que LSL (3 ou 10 mg/kg; e.v.; 15 minutos) reduziu os níveis destes mediadores no tecido da pata de animais estimulados com Cg (intraplantar). Em relação a uma possível atividade central, LSL (10 mg/kg; e.v.) não alterou a atividade motora e nem provocou depressão nos animais. A toxicidade aguda foi avaliada pelo tratamento de camundongos com LSL (10 mg/kg; e.v.), durante sete dias consecutivos, através de vários parâmetros: funções do rim (peso úmido, dosagem de uréia) e do fígado (peso úmido, avaliação da cinética da aspartato amino transaminase e alanina amino transaminase), coração (peso úmido), estômago (peso úmido e avaliação visual de possíveis lesões), variação de massa corporal dos animais tratados e leucograma. Os resultados obtidos não mostraram qualquer alteração dos parâmetros avaliados, demonstrando que a LSL não apresenta nenhuma toxicidade nos animais. Em conclusão, a atividade antiinflamatória e antinociceptiva da LSL está associada com a inibição da migração de neutrófilos, que provavelmete é reflexo da inibição da liberação de citocinas e quimiocinas e do aumento na liberação de NO. Adicionalmente, esta lectina não apresenta efeitos centrais nem toxicidade aguda.
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Efeitos renais de miotoxinas e lectinas purificadas dos venenos das serpentes Bothrops jararacussu e Bothrops moojeni : papel da ciclooxigenase e endotelina / Renal effects promoted by myotoxins and lectins isolated from the snake venoms of Bothrops jararacusu and Bothrops moojeni : the role of cyclooxigenase and endothelin

Barbosa, Paulo Sérgio Ferreira January 2006 (has links)
BARBOSA, Paulo Sérgio Ferreira. Efeitos renais de miotoxinas e lectinas purificadas dos venenos das serpentes Bothrops jararacussu e Bthrops moojeni : papel da ciclooxigenase e endotelina. 2006. 175 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2006. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-06T11:39:45Z No. of bitstreams: 1 2006_tese_psfbarbosa.pdf: 4134390 bytes, checksum: 386687118259e7d665fe77b7ce37b254 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-06T12:25:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_tese_psfbarbosa.pdf: 4134390 bytes, checksum: 386687118259e7d665fe77b7ce37b254 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-06T12:25:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_tese_psfbarbosa.pdf: 4134390 bytes, checksum: 386687118259e7d665fe77b7ce37b254 (MD5) Previous issue date: 2006 / Acute renal failure is one of the most common systemic complications after snakebite. However, its pathogenesis remains obscure. In this study, we evaluated the renal effects of Bothrops jararacussu myotoxins I and II (Bthtx-I Lys 49 and BthtxII, Asp 49), Bothrops moojeni myotoxin I and the lectins from Bothrops moojeni and Bothrops jararacussu. Attempting to investigate the mechanisms involved in the renal effects of the mentioned toxins, we tested indomethacin, an unespecific cyclooxigenase inhibitor. Additionally, tezosentan, an endothelin receptor blocker, was used to evaluate the role of endothelin in the renal effects of Bothrops moojeni myotoxin I. All myotoxins (5 µg/mL) and lectins (10µg /mL) were added to the perfusion system 30 min after the beginning of each perfusion. Indomethacin (10µg/mL) and tezosentan (10 µg /mL) were always added 30 minutes before the tested substances. The renal effects were compared against a control group, where kidneys were perfused only with the modified Krebs-Henseleit solution. Myotoxins from Bothrops jararacussu and the lectin from Bothrops moojeni increased the perfusion pressure (C120= 110.28 ± 3.09, Bthtx I120= 171.20 ± 6.3 * ,Bthtx II120= 175.50 ± 7.20 * and BmLec120= 152.50 ± 2.10 *), the renal vascular resistance (C120= 5.46 ± 0.54, Bthtx I120= 8.62 ± 0.37 *, Bthtx II120= 8.90 ± 0.36 * and BmLec120= 7.77 ± 0.30*), the urinary flow (C120= 0.143 ± 0.008, Bthtx I120= 0.326 ± 0.048*, and Bthtx II120= 0.373 ± 0.085* ), the glomerular filtration rate (C120= 0.678 ± 0.065, Bthtx I120= 0.855 ± 0.133 *, Bthtx II120= 1.224 ± 0.282* and BmLec120= 1.037 ± 0.055*) and the sodium, potassium and chloride excretion. On the other hand, the same substances decreased the percent of renal tubular transport of sodium (C120= 79.76 ± 0.56, Bthtx I120= 62.23 ± 4.12*, Bthtx II120= 70.96 ± 2.93* and BmLec60= 77.25 ± 1.36*), potassium (C60= 66.38 ± 3.31, Bthtx I60= 55.79 ± 5.57 *, Bthtx II60= 50.86 ± 6.16* and BmLec60= 59.78 ± 3.49*). Indomethacin inhibited the renal effects induced by Bothrops jararacussu myotoxin I and Bothrops moojeni lectin, but partially blocked the effects promoted by myotoxin II and the lectin of Bothrops jararacussu, and the effects of myotoxin I of Bothrops moojeni. Tezosentan inhibited the renal effects induced by B. moojeni myotoxin I. In conclusion, prostaglandins are involved in the renal alterations induced by myotoxins and lectins purified from the snake venoms of Bothrops jararacussu and Bothrops moojeni. In addition, endothelin is the main mediator of the renal alterations promoted by Bothrops moojeni myotoxin I / A insuficiência renal aguda é uma das complicações mais freqüentes nos envenenamentos ofídicos. Contudo, a sua patogênese permanece obscura. Em nossos estudos foram avaliados os efeitos renais causados pelas miotoxinas purificadas dos venenos das serpentes Bothrops jararacussu (Bthtx I, Lys 49 e Bthtx II, Asp 49) e Bothrops moojeni (BmTx I, Lys 49), assim como pelas lectinas dos venenos de Bothrops moojeni (BmLec) e Bothrops jararacussu (BJcuL). Tentando avaliar o mecanismo envolvido nos efeitos renais das substâncias acima mencionadas, foram testados os efeitos da indometacina, um bloqueador inespecífico de ciclooxigenase. Adicionalmente, foram avaliados os efeitos inibitórios do Tezosentan, um bloqueador de receptor de endotelina, nos efeitos renais causados pela miotoxina I da serpente Bothrops moojeni. Para tanto, as miotoxinas, na dosagem de 5µg/mL, ou as lectinas, na dosagem de 10µg/mL foram adicionadas 30 minutos depois do início dos experimentos. Contudo, a indometacina e o tezosentan foram adicionados no sistema de perfusão sempre no início de cada experimento na dosagem de 10µg/mL. Os efeitos renais foram comparados com um grupo controle, onde os rins foram perfundidos somente com a solução de Krebs-Henseleit modificada. Bthtx I, BthtxII e BmLec aumentaram a pressão de perfusão (C120= 110,28 ± 3,09, Bthtx I120 = 171,20 ± 6,3 *, Bthtx II120 = 175,50 ± 7,20 * e BmLec120 = 152,50 ± 2,10 *), a resistência vascular renal (C120= 5,46 ± 0,54, Bthtx I120= 8,62 ± 0,37 *, Bthtx II120= 8,90 ± 0,36 * e BmLec120= 7,77 ± 0,30*), o fluxo urinário (C120= 0,143 ± 0,008, Bthtx I120= 0,326 ± 0,048*, e Bthtx II120= 0,373 ± 0,085*, BmLec120= 0,085 ± 0,007* ), o ritmo de filtração glomerular (C120= 0,678 ± 0,065, Bthtx I120= 0,855 ± 0,133 *, Bthtx II120= 1,224 ± 0,282*, BmLec120=1,037 ± 0,055*) e a excreção de sódio potássio e cloreto (ENa+, EK+, ECl-). Porém, diminuíram os percentuais dos transportes tubulares de sódio (C120= 79,76 ± 0,56, Bthtx I120= 62,23 ± 4,12*, Bthtx II120= 70,96 ± 2,93* e BmLec60= 77,25 ± 1,36*) e potássio (C60= 66,38 ± 3,31, Bthtx I60= 55,79 ± 5,57 *, Bthtx II60= 50,86 ± 6,16* e BmLec60= 59,78 ± 3,49). A indometacina foi capaz de bloquear os efeitos causados pela miotoxina I da B. jararacussu e lectina da B. moojeni, mas reverteu parcialmente os efeitos causados pelas miotoxinas II e lectina da B. jararacussu e miotoxina I da B. moojeni. O tezosentan, por sua vez, bloqueou os efeitos causados pela miotoxina I da B. moojeni. Foi concluído que prostaglandinas estão envolvidas nas alterações renais promovidas pelas substâncias isoladas das serpentes B. jararacussu e B. moojeni, enquanto que endotelina seria o principal mediador nas alterações renais causadas pela miotoxina I da B. moojeni.
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Avaliação das potencialidades biotecnológicas de lectinas vegetais no diagnóstico e prevenção de cárie dentária / Biotechnological potential of the red marine alga Hypnea musciformis (HML) applied to Dentistry

Tajra, Fábio Solon January 2010 (has links)
TAJRA, F.S.Avaliação das potencialidades biotecnológicas de lectinas vegetais no diagnóstico e prevenção de cárie dentária. 2010. 91 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, 2010. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-04-04T14:15:19Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_fstajra.pdf: 1032248 bytes, checksum: c86b2654a67d23ae171e7d3e6ba7ef8c (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa(djeannecosta@gmail.com) on 2016-04-04T14:16:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_fstajra.pdf: 1032248 bytes, checksum: c86b2654a67d23ae171e7d3e6ba7ef8c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T14:16:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_fstajra.pdf: 1032248 bytes, checksum: c86b2654a67d23ae171e7d3e6ba7ef8c (MD5) Previous issue date: 2010 / Dental Caries is an infectious disease naturally multi-factorial that begins in the childhood, able to spread its intensity and prevalence according to the mouth ambient conditions of each host. The risk of the patients to develop, in some time of their lives, carious lesions can be measured through a complex analysis using health determinant factors and other specific factors of the health-disease process. Since the dental caries forward diagnostic as well as the review of the auxiliary determinant factors of the dental caries danger evaluation, the treatment becomes simpler, less invasive and costing lower. It has been quite broad-casted lately the use of lectins to diagnose and to prevent some diseases. When dealing with dental caries disease, through many years this strategy has been explored still inceptively. Looking through this perspective, the goal of this trial was to investigate the biotechnological potential of the red marine alga Hypnea musciformis (HML) applied to Dentistry. It is about an explanatory-experimental study of quantitative approach through the health questionnaire and data statistics analysis. The research makes reference to some comparative analysis of salivary tests and the cariogenic activity in twelve year-old students and it searches to evaluate the biotechnological potentialities of the lectin from the red marine alga Hypnea musciformis (HML) in the diagnose and prevention of the dental caries. The concentration area of this trial was the macromolecules/ lectin biotechnological application. In the present trial were compared obtained results through the application of the conventional clinical exams to dental caries and salivary tests of dental caries activity pointed by the CARIOGRAM® program in association with lab analysis using specific lectins. From this trial, it has been concluded that, about lectins as a biotechnological potential to prevention and diagnose of the dental caries, it has been noticed that there is recognition of resident glycoconjugate on pacifier saliva of high and low risk observed in immunofluorescence pattern. The results showed that the tested lectin has the capacity to intervene on the bacterial growth in a negative way, it is being distinguished statistically (p<0,01) in relation to control group of saline and BSA. However, inhibition studies of the microbial biofilms using the HML are being programmed to evaluate the using possibility of these protein as biotech input to be used for dental caries prevention. It could be said also that the obtained results by the use of HML in the antimicrobial activity were promising, showing that this lectin has presented antimicrobial activity even on very small amounts. As to the use of these protein in the biofilm formation and developing there was no characteristic pattern. / A cárie é uma doença infecciosa de natureza multifatorial que se inicia na infância, podendo aumentar de intensidade e prevalência de acordo com as condições do ambiente bucal de cada hospedeiro. O risco do paciente em desenvolver, em algum período de seu ciclo de vida, lesões cariosas pode ser medido através de uma análise complexa que utiliza os fatores determinantes da saúde e outros fatores específicos do processo saúde-doença. A partir do diagnóstico precoce da doença cárie, assim como análise dos fatores determinantes auxiliares da avaliação do risco de cárie, o tratamento torna-se mais simples, menos invasivo e de menor custo. Tem sido bastante difundida ultimamente a utilização de lectinas para diagnóstico e prevenção de algumas doenças. Em se tratando da doença cárie, ao longo de muitos anos, essa estratégia tem sido explorada ainda de forma incipiente. Nesta perspectiva, o objetivo deste trabalho foi investigar as potencialidades biotecnológicas da lectina de alga marinha da espécie de Hypnea musciformis (HML) aplicadas à odontologia. Trata-se de um estudo explicativo-experimental de abordagem quantitativa através de questionário de saúde e análises estatísticas de dados. A pesquisa faz referência à uma análise comparativa de testes salivares e atividade cariogênica em escolares de 12 anos de idade e a busca avaliar as potencialidades biotecnológicas da lectina de alga marinha da espécie de Hypnea musciformis (HML) no diagnóstico e prevenção de cárie dentária. A área de concentração deste estudo Macromolétulas / Aplicação Biotecnológica de Lectinas. No presente estudo, foram comparados os resultados obtidos através da aplicação de exame clínico convencional para cárie e testes salivares de atividade cariogênica apontados pelo programa CARIOGRAM® em associação com análises laboratoriais com a utilização de lectinas específicas. A partir deste estudo, concluiu-se que, em se tratando do uso de lectinas como potencial biotecnológico para a prevenção e diagnóstico de cárie dentária, percebeu-se que há reconhecimento de glicoconjugados presentes na saliva de pacientes de alto e baixo risco observados em padrão de fluorescência. Os resultados demonstram que a lectina testada tem a capacidade de interferir no crescimento bacteriano de forma negativa, sendo estatisticamente significante (p<0,01) em relação aos grupos controle de salina e BSA. Entretanto estudos de inibição da formação de biofilmes microbianos utilizando a HML estão sendo programados, para assim avaliar a possibilidade de utilização dessas proteínas como insumos biotecnológicos a ser utilizados para prevenção da cárie dentária. Pode-se ainda afirmar que os resultados obtidos pelo uso de HML na atividade antibacteriana foram promissores, mostrando que esta lectina apresentou atividade antibacteriana mesmo em quantidades muito pequenas. Quanto ao uso destas proteínas na formação e desenvolvimento de biofilmes, não houve padrão característico.
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Investigação histoquimiluminescente de neoplasias prostáticas mediante emprego de lectinas conjugadas a éster de acridina

SILVA, Lúcia Patrícia Bezerra Gomes da 28 February 2011 (has links)
Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-26T13:20:19Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Lúcia Patrícia.pdf: 1776098 bytes, checksum: 4c638b348b16c6b03bc5454b823bf15a (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-26T13:20:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Lúcia Patrícia.pdf: 1776098 bytes, checksum: 4c638b348b16c6b03bc5454b823bf15a (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / CNPq / A inespecificidade dos métodos atualmente adotados para diagnosticar e monitorar o câncer de próstata torna-os incapazes de fornecer um prognóstico preciso para direcionar com eficiência a conduta terapêutica. Por isso, faz-se necessário desenvolver metodologias que forneçam diagnósticos mais precisos e eficientes. Este trabalho teve por objetivo o desenvolvimento de um método quantitativo, empregando as lectinas Concanavalin A (Con A), Ulex europaeus agglutinin (UEA-I) e Peanut agglutinin (PNA) conjugadas a éster de acridina (Lectinas-EA) para avaliar a expressão de carboidratos em tecidos prostáticos: normal, hiperplasia prostática benigna (HPB) e adenocarcinoma prostático (AcP). Os conjugados lectinas-EA foram avaliados quanto a atividade hemaglutinante, conteúdo de proteínas e quimiluminescência expressado em unidades relativa de luz (RLU). Tecidos transformados apresentaram uma menor expressão de resíduos de α-D-glicose/α-D-manose (BPH: 226.931 ± 17.436; AcP: 239.520 ±12.398) e Gal-β(1-3)-GalNAc, (BPH: 28.754 ± 2.157; AcP: 16.728 ± 1.204) quando correlacionados as condições normais (367.566 ± 48.550 e 409.289 ± 22.336, respectivamente). No entanto, a maior expressão de α-L-fucose foi observado em AcP (251.118 ± 14.193) em relação ao tecido normal (200.979 ± 21.318) e HPB (169.758 ± 10.264), que exibem valores menores. A RLU diminuiu significativamente pela inibição da interação entre tecidos e lectinas usando seus açúcares específicos. Esses resultados indicam que o método usado é uma eficiente ferramenta para diferenciação quantitativa entre os tecidos prostáticos analisados.
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Avaliação da expressão e atividade de GNT-V durante a evolução de lesões em tecidos uterinos humanos

MOURA, Raphael Douglas da Silva 31 March 2015 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-01-27T17:58:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO E ATIVIDADE DE GNT-V DURANTE A EVOLUÇÃO DE LESÕES EM TECIDOS UTERINOS HUMA.pdf: 2696690 bytes, checksum: cb85eb0e45860779176c13e2803e7f08 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-27T17:58:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO E ATIVIDADE DE GNT-V DURANTE A EVOLUÇÃO DE LESÕES EM TECIDOS UTERINOS HUMA.pdf: 2696690 bytes, checksum: cb85eb0e45860779176c13e2803e7f08 (MD5) Previous issue date: 2015-03-31 / O câncer do colo do útero é o quarto tipo de câncer mais comum entre as mulheres. A superfície externa das células de mamíferos é composta de um glicocálix. Lectinas têm sido empregadas como sondas histoquímicas na avaliação da formação dessa estrutura de glicanos que é sintetizada por glicosiltransferases. Entre elas a N-acetil-glicosaminiltransferase V (GnT-V) atua na formação de uma ramificação de glicanos inserindo um resíduo de N-acetilglicosamina através de uma ligação β1,6 a uma manose, formando uma estrutura tetraantenária. Dessa forma este trabalho teve como objetivo avaliar a expressão da GnT-V durante a progressão de lesões do colo uterino (Neoplasia intraepitelial cervical (NIC) graus I, II e III e carcinoma de células escamosas (CCE)) utilizando imunohistoquímica contra MGAT5 e histoquímica com lectinas. Foram avaliadas 75 amostras (normal=15, NIC 1=15, NIC 2=15, NIC 3=15 e CCE=15). Os resultados mostraram que a GnT-V não apresentou diferenças significativas de expressão entre os diferentes diagnósticos, sendo majoritariamente classificada como de baixa expressão. L-PHA mostrou que 93,3% das amostras normais, 88,9% dos NICs e 60% dos CCE apresentaram alta expressão de ramificação do tipo β1,6. Foi observada uma maior expressão na região basal do epitélio escamoso normal, sendo a marcação de membrana e citoplasma. No carcinoma também observou-se uma marcação nuclear heterogênea e não significativa. DSA não mostrou diferenças significativas de marcação nos tecidos normais e transformados (NICs e CCE), porém tal diferença foi evidenciada pela PWM. Os resultados não demonstraram uma relação direta entre a expressão da GnT-V e as cadeias de polilactosamina (PoliLacNAc) nos tecidos do colo uterino humano, contudo eles revelaram uma significativa associação entre as PoliLacNAc e os diagnósticos das NICs e do CCE da cérvice. / Uterus colon cancer is the fourth type of cancer most common among women. Mamalian cell surface present a glycocalix. Lectins have been used as histochemistry probes to the evaluation of glycans structure which are synthesized by glycosyltransferases. One of them is the N-Acetyl-glucosaminyltransferase V (GnT-V) which catalyzes the formation of branching glycans adding residues of N-Acetyl-glucosamine via a β-1,6 bond with a mannose. This action results in a glycan with a tetraantenary structure. The present work aimed to evaluate the expression of GnT-V during the progression of uterus colon lesions (cervical intraepithelial neoplasias (CIN) grades I, II and III and squamous cell carcinoma, SCC) using immunohistochemistry agains MGAT5 and lectin histochemistry. Seventy five samples (normal=15, CIN 1=15, CIN 2=15, CIN 3=15 and SCC=15) were analyzed. GnT-V did not presented significative difference among all diagnosis being predominantly classified as of low expression. L-PHA lectin evidenced that 93.3% of normal samples, 88.9% of CINs and 60% of SCC presented a high expression of branching of β-1,6 bond. In normal squamous epithelium this expression was predominantly observed in the cytoplasm and membrane of its basal cell while in SCC it was observed in the nucleous with a heterogeneous pattern. DSA did not showed significtive differences in the staining of normal and transformed tissues (CIN and SCC), however this difference was evidenced by PWM. The results did not showed a relation between GnT-V expression and polilactosamine (PolyLacNAc) chains in human uterus colon tissues but they revealed a significant association between PolyLacNAc and transformed tissues of uterus colon (CIN and SCC).
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Avaliação da atividade agregante e antiagregante plaquetária de formas moleculares das lectinas de sementes de Cratylia mollis MART

Melquiades de Rezende Neto, José January 2003 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4620_1.pdf: 843243 bytes, checksum: 830242776b67230ecb5f38050ab9db2c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Plaquetas representam um importante elemento celular, regulando a reatividade célulasvasos, baseando-se na interação com glicoproteínas de membrana. Lectinas reconhecem seletivamente e reversívelmente carboidratos e glicoconjugados, constituindo instrumentos apropriados para estudar a composição e distribuição de glicoproteínas celulares, bem como, para avaliar e quantificar a função dessas glicoproteínas de plaquetas. O objetivo deste trabalho foi o de avaliar o efeito das isolectinas e isoformas (Iso) das lectinas de sementes de Cratylia mollis (Cra) sobre indução e inibição da agregação plaquetária. A ação de Cra Isso 1,4 (preparação lectínica contendo Cra Iso 1 e Cra Iso 4), Cra Iso 1 e Cra Iso 3 foram analisadas e comparadas com aglutinina de germe de trigo (WGA) e concanavalina A (Con A), duas lectinas que induzem agregação plaquetária. As lectinas foram testads em três concentrações (25, 50 e 100 &#956;g/ml). O melhor resultado foi obtido com 100 &#956;g/ml para todas as lectinas de C. mollis; Cra Iso 1 apresentou a maior agregação (16,65 ± 2,02 %) similar a Con A (20,02 ± 1,42 %). Inibição da agregação com epinefrina como agonista e as lectinas de C. mollis na concentração que não induziu agregação (percentual de agregação menor do que 10 %) foi negativa. Quando os específicos carboidratos inibidores das lectinas, manose e metil-&#945;-D-manosídeo (Cra Iso 1,4 e Cra Iso 1) e galactose (Cra Iso 3) foram usados nas concentrações de 50 e 100 mM nenhuma indução foi observada. Os resultados mostraram que Cra Iso 1,4, Cra Iso 1 e Cra Iso 3 induzem agregação plaquetária através de seus respectivos sítios de ligação a carboidratos

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