Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4833_1.pdf: 997773 bytes, checksum: 75133d1de12ab012e9239769ff49c82e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Purificação de formas moleculares múltiplas da lectina de sementes de Capparis yco (CySeL) foi desenvolvida através de fracionamento com sulfato de amônio e cromatografia das frações (F) em CM-Celulose. O protocolo foi efetivo para obter, a partir das F20-40 e F40-80, CySeL1 (12 mg) e CySeL2 (9 mg), respectivamente; adicionalmente revelou diferenças nas propriedades de cargas das isoformas. Cromatografia em coluna de Hitrap SP, não foi eficiente na separação das isoformas. CySeL1 e CySeL2 foram inespecíficas para eritrócitos humanos e elevadas atividades hemaglutinantes específicas (AHE) foram detectadas com células de coelho. AH de CySeL1 foi inibida com monossacarídeos e glicoproteínas, enquanto CySeL2 reconheceu somente glicoproteínas. Cromatografia de afinidade em coluna de fetuína-agarose mostrou que a AH da F20-40 foi mais retida do que a AH da F40- 80. O valor de pH e a presença de íons interferiram diferentemente na AH das isoformas; somente CySeL2 permaneceu ativa em pH 10 e foi estimulada por 40 mM de Ca2+ e Mg2+. CySeL1 e CySeL2 apresentaram o mesmo padrão eletroforético. Em PAGE sob condições nativas, três bandas protéicas que foram extraídas do gel mostraram AH; SDS-PAGE na presença de β-mercaptoetanol revelou dois polipeptídeos de Mr 15 e 14 kDa. Coloração do gel para carboidratos mostrou a natureza glicoprotéica da subunidade de 14 kDa. Quantidades miligramas de isoformas da lectina de sementes de C. yco foram obtidas. As diferenças estruturais de CySeL1 e CySeL2 detectadas na cromatografia em CM-Celulose, inibição da AH com monossacarídeos e efeito do pH e ions na AH associado ao elevado rendimento da purificação das proteínas, indicam a potencial utilização de CySeL1 e CySeL2 em investigações estruturais e de aplicação biotecnológica.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4867_1.pdf: 2673938 bytes, checksum: 936cca7358e1df135e6731cdb5f8bd3c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / As lectinas são proteínas ubíquas na natureza que se ligam reversívelmente a mono, oligo, polissacarídeos e glicoconjugados. Não apresentam atividade catalítica e ao contrário dos anticorpos, não são produtos de uma resposta imunológica. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a extração e a reextração de uma lectina purificada por cromatografia de troca iônica (CrataBL) e do extrato bruto (EB) da entrecasca de Crataeva tapia utilizando o sistema de micelas invertidas, constituídas pelo surfactante dioctilsulfosuccinato de sódio (AOT) em isooctano. A entrecasca de Crataeva tapia foi coletada na região da cidade do Recife (Pernambuco, Brasil) e o extrato [10 % (p/v) em 150 mM NaCl] foi obtido por trituração e agitação durante 16 h a 4 oC, filtrado em gaze e centrifugado (4.000 x g durante 15 min). O sobrenadante obtido foi denominado de extrato bruto (EB). Os fatores que afetam a extração da proteína tais como: tempo de contato de agitação (5 - 20 min), força iônica, incluindo o tipo de sal (NaCl, KCl e CaCl2) e concentração (30 300 mM), pH da fase aquosa (pH 3,0 12,0) e concentração do surfactante (5 - 100 mM AOT), foram investigados. Os parâmetros avaliados para a reextração foram: pH da fase aquosa (pH 5,0 7,0) e força iônica (50 - 1000 mM de KCl) tendo sido adicionado ao sistema 5% Butanol. Os parâmetros velocidade de agitação (900 rpm), temperatura (25oC) e concentração de proteína (0,374 mg/ml), foram mantidos constantes em todos os experimentos. Os melhores resultados para extração foram obtidos com 5 min de tempo de contanto entre as duas fases, 30 mM de NaCl, tampão citrato/fostato pH 5,5 e 5 mM de AOT, onde foi possível obter extrações protéicas de 100 % e 70 % para CrataBL e EB, respectivamente. Para a reextração, as melhores condições foram, tampão citrato/fosfato 10 mM, pH 5,5 acrescido de 1000 mM de KCl, onde foi possível obter uma recuperação protéica de 45,25 % (CrataBL) e 80,65 % (EB) com 50 % da atividade hemaglutinante para ambas as amostras. As amostras obtidas com as melhores condições de extração e reextração aplicadas ao EB revelaram apenas uma banda na PAGE para proteínas básicas e duas bandas no SDSPAGE. A cromatografia de gel filtração (AKTA) indicou dois picos: um de 40 KDa e outro de 29 KDa. A natureza oligomérica da lectina foi detectada por cromatografia de filtração em gel e SDS-PAGE. A comparação dos perfis cromatográficos de filtração em gel do EB com o da lectina purificada, indicaram a eficiência do sistema de micelas invertidas na purificação da lectina

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4932_1.pdf: 233117 bytes, checksum: 8124bfc694279a24c5d1670b3e8bd8b0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2001 / A lectina de folha de Bauhinia monandra (BmoLL) e as isolectinas de sementes de Cratylia mollis (Cra Iso 1,2,3), isoladas no Laboratório de Glicoproteínas da UFPE, foram imobilizadas em álcool polivinílico-glutaraldeído (PVA-glutaraldeído) e Sepharose-4B, respectivamente. Os suportes Cra Iso 1,2,3-Sepharose, SpiL-Sepharose (lectina de semente de Swartzia pickellii imobilizada em Sepharose-4B) e BmoLL-PVA-glutaraldeído foram avaliados quanto à eficiência de ligação de ovoalbumina e isolamento de glicoproteínas de soro fetal bovino e de colostro humano. Os rendimentos das imobilizações para Cra Iso 1,2,3-Sepharose e BmoLL-PVA-glutaraldeído foram de 90% e 50%, respectivamente. Distintas condições experimentais utilizando os suportes foram avaliadas (cromatografia em coluna e ensaio em batelada) as quais forneceram diferentes resultados. Proteínas de migração eletroforética similar à IgA secretória de colostro humano e à fetuína foram obtidas após cromatografia de colostro humano em coluna de BmoLL-PVA-glutaraldeído e de soro fetal bovino em coluna de Cra Iso 1,2,3-Sepharose, respectivamente. Ovoalbumina foi retida em Cra Iso 1,2,3-Sepharose nos ensaios em batelada. Os suportes foram estáveis nas condições cromatográficas utilizadas. Cra Iso 1,2,3-Sepharose e BmoLL-PVA-glutaraldeído podem ser incluídas no grupo de suportes para cromatografia de afinidade visando a obtenção de glicoconjugados. SpiL-Sepharose não foi eficiente, nas condições experimentais avaliadas, para a ligação de ovoalbumina e de glicoproteínas de soro fetal bovino

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-04T22:28:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Carlos Eduardo Sales da Silva.pdf: 1542819 bytes, checksum: 42bf6ad5f4c11b60a81acf59340103b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-04T22:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Carlos Eduardo Sales da Silva.pdf: 1542819 bytes, checksum: 42bf6ad5f4c11b60a81acf59340103b4 (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / CNPQ / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imunológica, que aglutinam células e precipitam carboidratos e seus derivados sem alterar suas estruturas covalentes. Neste trabalho foram extraídas 2 lectinas de Libidibia ferrea, planta com ampla distribuição no Brasil e conhecida vulgarmente como pau-ferro, uma lectina foi extraída da vargem de Libidibia ferrea var. ferrea (LifeFPL) e outra da entrecasca da Libidibia ferrea var. leiostachya Benth (LifeLBL), O processo de obtenção das lectinas puras incluem: a extração das farinhas (vagens ou entrecascas) em NaCl 0,15 M, fracionamento salino com sulfato de amônio, e cromatografia de afinidade em quitina. Para a LifeFPL, que já foi previamente purificada e caracterizada, foi determinada a presença de uma atividade coagulante de partículas em água. Quando incubada com o Caolin, LifeFPL apresentou atividade semelhante ao controle positivo, sulfato de alumínio, apresentando uma melhora significativa desta atividade quando o pH do meio encontra-se básico e diminuindo sua atividade coagulante na presença de íons. LifeLBL (lectina da entrecasca de Libidibia ferrea var. leiostachya) foi caracterizada parcialmente através de ensaios da inibição da atividade hemaglutinante, eletroforese (PAGE-SDS e 2D) e estudos de fluorescência, além disso, realizou-se o perfil fitoquímico de preparações da planta e determinou-se a atividade antioxidante dessas preparações e a afinidade a ácidos húmicos (AHu). Houve uma diminuição significativa da AH de LifeLBL na presença de ácido húmico. A LifeLBL continuou ativa após aquecimento à 100 ºC e apresentou duas bandas por SDS-PAGE e cromatografia em gel filtração em Superdex 75-30 revelou dois picos proteicos com 19 e 15 kDa. Na eletroforese 2D a massa molecular estimada foi de 20 e 15 kDa e o pI de 4,53 e 5,14. A AH de LifeLBL foi inibida parcialmente por N-acetil-Dglicosamina e totalmente por albumina bovina serica. Em relação aos AHu, a LifeLBL teve sua afinidade por ácido húmico aumentada quando alcalinizado o meio e reduzida na presença de íons metálicos, provavelmente por modificação estrutural do AHu. Os testes fitoquímicos revelaram que as amostras lectínicas da entrecasca de L. ferrea var. leiostachya Benth apresentaram: proantocianidinas condensadas, taninos hidrossolúveis e flavanóide, sendo que a amostra purificada por cromatografia de afinidade em quitina foi isenta de componentes do metabolismo secundário. Em conclusão, uma lectina, termoestável (LifeLBL) foi parcialmente inibida por N-acetil-D-glicosamina e ácido húmico, sendo obtida da entrecasca de L. ferrea por cromatografia de afinidade em quitina. LifeLPL foi capaz de coagular partículas de caolin em suspensão em água. Os resultados obtidos neste trabalho reforçam a importância de se caracterizar proteínas e ensaiar suas propriedades biológicas. / Lectins are proteins or glycoproteins of non-immunological origin, which bind cells and precipitate carbohydrates and their derivatives without changing their covalent structures. In this work two lectins were extracted from Libidibia ferrea, a plant widely distributed in Brazil and commonly known as ironwood, a lectin was extracted from the Libidibia ferrea var. Ferrea (LifeFPL) and another of the bark of Libidibia ferrea var. Leiostachya Benth (LifeLBL), The process of obtaining pure lectins includes: extraction of flours (pods or skim) in 0.15 M NaCl, saline fractionation with ammonium sulfate, and chitin affinity chromatography. For LifeFPL, which was previously purified and characterized, the presence of a coagulant activity of particles in water was determined. When incubated with Caolin, LifeFPL presented similar activity to the positive control, aluminum sulfate, showing a significant improvement of this activity when the pH of the medium is basic and decreasing its coagulant activity in the presence of ions. LifeLBL (Libidibia ferrea var. Leiostachya) lectern was partially characterized by inhibition of hemagglutinating activity, electrophoresis (PAGE-SDS and 2D) and fluorescence studies, and the phytochemical profile of plant preparations And the antioxidant activity of these preparations and the affinity to humic acids (HuA) were determined. There was a significant decrease in LifeLBL AH in the presence of humic acid. LifeLBL continued active after heating to 100 ° C and presented two bands by SDS-PAGE and gel filtration chromatography on Superdex 75-30 revealed two 19 and 15 kDa protein peaks. In 2D electrophoresis the estimated molecular weight was 20 and 15 kDa and the pI was 4.53 and 5.14. LifeLBL AH was partially inhibited by N-acetyl-D-glucosamine and entirely by serine bovine albumin. In relation to HuA, LifeLBL had its affinity for increased humic acid when alkalized the medium and reduced in the presence of metallic ions, probably due to structural modification of HuA. The phytochemical tests revealed that the lectin samples from L. caste var. Leiostachya Benth presented: condensed proanthocyanidins, water soluble tannins and flavonoids, and the sample purified by chitin affinity chromatography was free of components of secondary metabolism. In conclusion, a thermostable lectin (LifeLBL) was partially inhibited by N-acetyl-Dglucosamine and humic acid, and was obtained from L. ferrea binders by chitin affinity chromatography. LifeLPL was able to coagulate kaolin particles in suspension in water. The results obtained in this work reinforce the importance of characterizing proteins and assaying their biological properties.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-17T22:49:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Livia Lais de Santana Silva.pdf: 1382903 bytes, checksum: e25b848c35a8e9115597040262fcf804 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-24T22:38:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Livia Lais de Santana Silva.pdf: 1382903 bytes, checksum: e25b848c35a8e9115597040262fcf804 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-24T22:38:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Livia Lais de Santana Silva.pdf: 1382903 bytes, checksum: e25b848c35a8e9115597040262fcf804 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CAPES / A WSMoL (do inglês water-soluble Moringa oleifera lectin) é uma lectina (proteína que reconhece carboidratos) proveniente das sementes da Moringa oleifera, as quais são utilizadas no tratamento de água. Algumas espécies de insetos podem atuar como vetores de doenças ou pragas agrícolas. O mosquito Aedes aegypti é o vetor da dengue e sabe-se que o extrato de sementes de M. oleifera e WSMoL são tóxicos para as larvas deste inseto. O extrato de sementes e WSMoL apresentaram uma concentração letal a 50% das larvas após 24 horas de exposição (CL₅₀) igual a 0,27 mg/mL e 0,197 mg/mL, respectivamente. Entretanto, para uma adequada utilização desse inseticida natural se faz necessário a realização de testes ecotoxicológicos a fim de avaliar os possíveis efeitos causados em organismos aquáticos não-alvo. Neste trabalho, foi avaliada a toxicidade de extrato de semente e WSMoL para larvas de Danio rerio, espécie de peixe muito utilizada na Ecotoxicologia devido à facilidade de observação de seu comportamento e desenvolvimento e serem sensíveis na fase larval. As larvas de D. rerio foram expostas a diferentes concentrações do extrato de sementes ou WSMoL por 168 horas (7 dias),tendo sido avaliados efeitos letais por meio da determinação da taxa de mortalidade. Além disso, efeitos sub-letais comportamentais e bioquímicos sobre a velocidade natatória das larvas e atividade da acetilcolinesterase, respectivamente,também foram avaliados. Foi observado um efeito dose dependente na taxa de mortalidade de D. rerio tanto para o extrato quanto para a lectina purificada. Após 24 horas, os valores de CL₅₀/₂₄h foram 0,365 e 0,21 mg/mL para extrato e WSMoL, respectivamente. Esses resultados mostram que a susceptibilidade das larvas de D. rerio a WSMoL foi similar a das larvas de A. aegypti (6% de diferença nos valores de LC₅₀/₂₄h) enquanto extrato é aproximadamente 34% mais potente para as larvas do mosquito. Após 96 horas, os valores de CL₅₀/₂₄h para extrato e WSMoL foram 0,031 e 0,135 mg/mL, respectivamente. Com relação à velocidade natatória dos indivíduos expostos ao extrato, houve um aumento significativo (p < 0,05) após incubação nas concentrações 0,03 e 0,27 mg/mL e uma diminuição para larvas incubadas com 0,81 mg/mL por esse mesmo período. Para incubação por 168 h, a velocidade foi maior que no grupo controle para os tratamentos a 0,27 e 0,81 mg/mL. Nos ensaios com WSMoL, a média da velocidade de natação de larvas expostas à lectina por 72 h foi significativamente (p < 0,05) menor que no controle nos tratamentos com 0,1 e 0,2 mg/mL. Para 168 h, a velocidade foi também menor que no controle no tratamento a 0,1 mg/mL enquanto para as concentrações de 0,02 e 0,05 mg/mL foi similar (p > 0,05) ao controle.Larvas expostas por 168 h ao extrato aquoso na concentração 0,81 mg/mL e a WSMoL na concentração de 0,1 mg/mL apresentaram uma redução significativa na atividade da acetilcolinesterase. Levando em consideração os resultados obtidos, esses inseticidas naturais devem ser usados cuidadosamente, uma vez que as concentrações necessárias para o controle de A. aegyptiforam podem também causar efeitos tóxicos letais e sub-letais para organismos não-alvo como o peixe D. rerio. Recomenda-se o uso em recipientes de armazenamento de água, e não em ecossistemas aquáticos como lagoas e lagos. / Some insect species can act as vectors of diseases or as agricultural pests. The WSMoL (water soluble Moringa oleifera lectin) is a lectin (protein that recognizes carbohydrate) derived from the seeds of Moringa oleifera, which are used in water treatment. The mosquito Aedes aegypti is the vector of dengue and it is known that M. oleifera seed extract and WSMoL are toxic to larvae of this insect. The seed extract and WSMoL showed a lethal concentration to 50% of the larvae after 24 hours of exposure (LC₅₀) equal to 0.27 mg/mL and 0.197 mg/mL, respectively. However, for proper use of these natural insecticides, it is necessary to carry out ecotoxicological tests in order to assess the possible effects on non-target aquatic organisms. In this work, the toxicity of seed extract and WSMoL to zebrafish (Danio rerio) larvae was evaluated. Danio rerio is a fish species very used in Ecotoxicology due to the ease of observation of its behavior and development and for being sensitive in the larval stage. D. rerio larvae were exposed to different concentrations of the seed extract or WSMoL for 168 h (7 days) and the lethal effects were assessed by determining the mortality rate. Additionally, behavioral and biochemical sublethal effects on larval swimming velocity and acetylcholinesterase activity, respectively, were also evaluated. It was observed a dose dependence effect on D. rerio mortality rate for both the extract and the purified lectin. After 24 h, the values of LC₅₀/₂₄h were 0.365 and 0.21 mg/mL to extract and WSMoL, respectively. These results show that the D. rerio larvae susceptibility to the WSMoL was similar to A. aegypti larvae (6% difference in LC₅₀/₂₄h values) while extract was about 34% more potent against mosquito larvae. After 96 h, the values of LC₅₀/₂₄h for extract and WSMoL were 0.031 and 0.135 mg/mL, respectively. Concerning the swimming velocity of individuals exposed to the extract there was a significant increase (p <0.05) after incubation for 72 h at 0.03 and 0.27 mg/mL and a decrease for larvae incubated at 0.81 mg/mL for this same period. For 168 h incubation, the velocity was higher than control group for treatments at 0.27 and 0.81 mg/mL. In tests with WSMoL, the average swimming velocity of larvae exposed to the lectin for 72 h was significantly (p <0.05) lower than the control on treatments with 0.1 and 0.2 mg/mL. For 168 h, the velocity was also lower than the control on treatment with 0.1 mg/mL, and with concentrations of 0.02 and 0.05 mg/mL the values were similar (p>0.05) to the control. Larvae exposed for 168 h to the aqueous extract at a concentration of 0.81 mg/mL and WSMoL at 0.1 mg/mL showed a significant reduction in the activity of acetylcholinesterase. Considering the results, these natural insecticides must be used carefully used since the concentrations necessary for the control of A. aegypti also can cause lethal toxic effects and sub-lethal to non-target organisms such as D. rerio fish. It is not recommended to use these natural insecticides in aquatic ecosystems such as ponds and lakes, but in water storage containers.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-31T22:28:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Sandro do Nascimento Silva.pdf: 1571649 bytes, checksum: 6af5597f0802b07298537ce02399f8c4 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-12T19:15:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Sandro do Nascimento Silva.pdf: 1571649 bytes, checksum: 6af5597f0802b07298537ce02399f8c4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-12T19:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Sandro do Nascimento Silva.pdf: 1571649 bytes, checksum: 6af5597f0802b07298537ce02399f8c4 (MD5) Previous issue date: 2013-09-30 / Lectinas são proteínas de origem não imunológica que se ligam de forma específica e reversível a carboidratos. Alpinia zerumbet é uma planta ornamental utilizada na medicina popular de modo muito abrangente para tratamento de enfermidades como inflamações, febre e gripe. Neste trabalho lectinas foram extraídas e purificadas a partir de folhas (AzeLL, do inglês A. zerumbet leaf lectin) e flores (AzeFL, do inglês A. zerumbet flower lectin) de A. zerumbet e avaliadas quanto à atividade antibacteriana contra Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae e Shigella sonnei através da determinação de concentrações mínima inibitória (CMI) e mínima bactericida (CMB), bem como a atividade termiticida contra operários e soldados da espécie Nasutitermes corniger. Extratos em solução salina e tampões com diferentes valores de pH foram preparados. Os extratos em citrato-fosfato 0,1 M pH 7,0 mostraram maior atividade hemaglutinante específica e foram chamados então de extrato de folha (LE, do inglês leaf extract) e extrato de flor (FE, do inglês flower extract). As atividades hemaglutinantes de LE e FE foram inibidas por N-acetilglicosamina. Fracionamento salino utilizando sulfato de amônio não resultou em preparações enriquecidas em lectina. Sendo assim, LE e FE foram cromatografados em colunas de quitina. Os picos proteicos adsorvidos e eluídos com ácido acético 1,0 M foram dialisados e denominados AzeLL e AzeFL, que apresentaram atividade hemaglutinante específica de 640 e 984,6, respectivamente. FE e AzeFL perderam completamente a atividade hemaglutinante após aquecimento a 70 °C por 30 min, enquanto o LE perdeu a sua atividade apenas após aquecimento a 100 °C e AzeLL após aquecimento a 80 °C. LE inibiu o crescimento de E. coli, P. aeruginosa e S. sonnei (CMI de 1235 μg/ml de proteínas para todas as bactérias) e FE inibiu P. aeruginosa e S. sonnei (CMI de 1135 μg/ml de proteínas para ambas). AzeLL só foi capaz de inibir o crescimento de K. pneumoniae (CMI: 970 μg/mL), enquanto AzeFL inibiu apenas S. sonnei (CMI: 820 μg/mL). Os extratos, AzeLL e AzeFL agiram apenas como agentes bacteriostáticos. No ensaio termiticida, a morte de todos os operários mantidos em contato com LE, FE, AzeLL e AzeFL ocorreu em cerca de 3-6 dias, mais cedo que no controle (taxa de mortalidade de 100% após 9 dias). No entanto, não houve diferenças significativas (p> 0,05) entre as curvas de sobrevivência dos operários estabelecidas para o controle e as amostras em todas as concentrações testadas. Por outro lado, LE (0,5 e 1,0 mg/mL de proteínas) FE , AzeLL e AzeFL (0,0625–1,0 mg/mL) induziram significativamente (p<0,05) a morte dos soldados de N. corniger. Em conclusão, AzeLL e AzeFL foram purificadas a partir de cromatografia em coluna de quitina, apresentaram relativa termoestabilidade, foram eficientes em inibir o crescimento das bactérias K. pneumoniae e S. sonnei, respectivamente, e são agentes termiticidas contra soldados de N. corniger. / Lectins are proteins from non-immune origin that bind specifically and reversibly to carbohydrates. Alpinia zerumbet is an ornamental plant used in folk medicine in a very comprehensive manner for treatment of infirmities such as inflammation, fever and flu. In this work, lectins were extracted and purified from leaves (AzeLL, A. zerumbet leaf lectin) and flowers (AzeFL, A. zerumbet flower lectin) of A. zerumbet and evaluated for antibacterial activity against Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae and Shigella sonnei by determining the minimal inhibitory (MIC) and minimal bactericidal (MBC) concentrations as well as for termiticidal activity against Nasutitermes corniger workers and soldiers. Extracts in saline solution and buffers at different pH values were prepared. The extracts in 0.1 M citrate-phosphate pH 7.0 showed highest specific hemagglutinating activity and were called LE (leaf extract) and FE (flower extract). Hemagglutinating activities of LE and FE were inhibited by N-acetylglucosamine. Saline fractionation using ammonium sulphate did not result in preparations richer in lectin. Thus LE and FE were cromatographed on chitin columns. The adsorbed protein peaks eluted with 1.0 M acetic acid were dialysed and called AzeLL and AzeFL, which showed specific hemagglutinating activity of 640 and 984.6, respectively. FE and AzeFL completely lost the hemagglutinating activity after heating at 70 ºC for 30 min while LE lost its activity only after heating at 100 ºC and AzeLL after heating at 80 ºC. LE inhibited the growth of E. coli, P. aeruginosa and S. sonnei (MIC of 1235 μg/ml of protein for all bacteria) and FE inhibited P. aeruginosa and S. sonnei (MIC of 1135 μg/ml of protein for both). AzeLL was only able to inhibited the growth of K. pneumoniae (MIC: 970 μg/mL) while AzeFL only inhibited S. sonnei (MIC: 820 μg/mL). The extracts, AzeLL and AzeFL acted only as bacteriostatic drugs. In the termiticidal assay, the death of all workers maintained in contact with LE, FE, AzeLL and AzeFL occurred around 3-6 days, earlier than in control (100% of mortality rate after 9 days). However, there were no significant differences (p>0.05) between the survival curves established for control and the sampels at all tested concentrations. On the other hand, LE (0.5 and 1.0 mg/mL of protein), FE, AzeLL and AzeFL (0.0625–1.0 mg/mL) induced significantly (p<0.05) the death of N. corniger soldiers. In conclusion, AzeLL and AzeFL were purified by chitin chromatography, showed relative thermostability, were effective in inhibit growth of the bacteria K. pneumoniae and S. sonnei, respectively, and are both termiticidal agents against N. corniger soldiers.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A medicina natural e complementar, especialmente a fitoterapia, se torna cada vez mais utilizada no combate as necessidades de grande parte da populaÃÃo em saÃde bucal, particularmente nos paÃses em desenvolvimento. Dentre os fitoterÃpicos, as lectinas podem ter um valor como agentes antiplaca e antimicrobianos, uma vez que podem estar intimamente relacionadas com a interferÃncia da formaÃÃo do biofilme dos microrganismos, jà que se tratam de proteÃnas que reconhece carboidratos de forma especÃfica e reversÃvel. O objetivo deste estudo foi testar in vitro a capacidade de inibiÃÃo das lectinas isoladas das espÃcies de Canavalia ensiformis, Canavalia maritima, Cymbosema roseum, Acacia farnesiana e Hypnea cervicornis, na formaÃÃo de biofilmes bacterianos e atividade antimicrobiana contra microrganismos orais (Streptococcus sanguis ATCC10556 e S. mutans UA159). A atividade antimicrobiana das cinco lectinas testadas foi determinada pelo teste convencional da microdiluiÃÃo em placas de poliestireno, sendo testada as concentraÃÃes de 2mg/mL à 31,5&#956;g/mL contra os microrganismos em estudo. Para avaliaÃÃo de aderÃncia foi feito um ensaio semiquantitativo de aderÃncia em placas de microtitulaÃÃo de poliestireno (96 poÃos), onde foi adicionado 100 &#956;L de cada uma das lectinas, em seguida adicionada 100 &#956;L de suspensÃo bacteriana (108 UFC/mL) e incubado a 37ÂC em uma atmosfera de 10% de CO2. A aderÃncia foi revelada e quantificada por tintura com cristal violeta. A absorÃÃo do cristal violeta foi determinada atravÃs da leitura no espectrofotÃmetro (595nm). Somente a lectina de ConA apresentou a atividade bactericida ou bacteriostÃtica contra os microorganismos estudados. No teste de inibiÃÃo da formaÃÃo do biofilme, todas as lectinas testadas foram favorÃveis na inibiÃÃo, reduzindo significativamente a aderÃncia (p< 0,05). A lectina de ConA nÃo teve aÃÃo sobre a formaÃÃo do biofilme de nenhumas das bactÃrias testadas. / Natural and complementary medicine, especially phytotherapy, is becoming more and more useful to fulfill the needs of great part of the population when it comes to oral health, particularly in the developing countries. Among the phytotherapics, lectins may be valuable as anti-plaque and antimicrobial agents, since they can be intimately related with inference in biofilm formation, given that these proteins recognize carbohydrates in a specific and reversible way. Within that context, this study aimed to test the ability of five lectins (extracted from Canavalia ensiformis, Canavalia maritima, Cymbosema roseum, Acacia farnesiana and Hypnea cervicornis) in inhibiting the formation of biofilm and killing oral microorganisms(Streptococcus sanguis ATCC10556 e S. mutans UA159). The antimicrobial activity of the five lectins tested was determined by the convetional test of microdilution in polystyrene plaques. The lectin concentrations assayed against the microorganisms varied from 2mg/mL to 31. 5&#956; g/mL. To evaluate the adherence, a semi -quantitative assay was perfomed within microtitulation plaques (96 wells), to where were added 100&#956;L of each lectin, and then 100&#956;L of bacterial suspension (108 CFU/mL). This material was incubated in 10% CO 2 atmosphere at 37ÂC. Adherence was revealed and quantified by violet crystal staining. Absorption of violet crystal was determined by spectophotometry (595nm). Only ConA presented bactericide or bacteriostatic activity against the strains tested. The assay of inhibition of biofilm formation revealed that almost all lectins had this kind of activity, reducing the adherence in a significant way (p<0.05). ConA had no effect on the formation of biofilm for any bacteria tested.

Orientador : Maria Ligia Rodrigues Macedo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T20:20:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coelho_MirelaBatista_M.pdf: 5168279 bytes, checksum: 50e08d17632dc403d52ad06800611f20 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As lectinas são (glico) proteínas de origem não imune que interagem especifica e reversivelmente com carboidratos. O atual interesse em lectinas deve-se a sua utilidade como ferramenta em pesquisas biológica e médica, assim como o seu envolvimento na defesa de plantas contra fungos e insetos. Neste trabalho, uma lectina foi purificada de sementes de Annona coriacea (Annonaceae), conhecida comumente por Marolo, usando gel filtração em coluna Sephadex G-75 e em coluna de fase reversa C18 _-Bondapack. Em SDS-PAGE, ACLEC (A. f.oriacea lectin) migrou como duas bandas com massa molecular aparente de 21,6 e 16,0 kDa em condições não reduzidas, e 16,0 e 11,4 kDa em presença de ditiotreitol 1 M. Portanto, a subunidade de 21,6 kDa formada por duas cadeias de 11,0 kDa ligadas covalentemente. A massa molecular relativa de 12 kDa foi estimada por gel de filtração em coluna Superdex 75, indicando que ACLEC comporta-se como um heterodimero. ACLEC aglutinou eritrócito humano (do tipo A, B, AB e O), eritrócitos de bovino, camundongo,carneiro, coelho, caprino, galinha e de rato. A lectina apresentou especificidade a D-manose e D-glicose. Por ensaios fisico-químicos constatamos que ACLEC não foi inibida por ampla faixa de pH, ou afetada por íons divalentes, ou enzimas proteolíticas como pronase. A oxidação com metaperiodato de sódio, ou redução com uréia e ditiotreitol também não afetaram a hemaglutinação. Porém, a hemaglutinação foi inibida por altas temperaturas e por exposição à tripsina e ácido trifluorometanosulfônico. A análise de aminoácidos mostrou uma alta quantidade de resíduos de Arg e Gly, presença de três resíduos de metionina e a ausência de resíduos de fenilalanina. O N-terminal de ACLEC apresentou aproximadamente 50% de homologia com outras lectinas de plantas. ACLEC não agregou plaquetas nem afetou a agregação plaquetária por colágeno ou ristocetina.ACLEC não inibiu o desenvolvimento de fungos e do inseto Callosobruchus maculatus, mas teve alto efeito detrimental sobre o desenvolvimento do inseto Anagasta kuehniella. Estas observações sugerem que esta lectina pode agir seletivamente como um inseticida contra algumas espécies de insetos / Abstract: Lectins are (glyco) proteins with non-immune origin that interact specifically and reversibly with carbohydrates. The current interest in plant lectins reflects their usefulness as tools in biological and medical research and their involvement in plant defense against fungi and insects. In this work, a lectin was purified from the seeds of Annona coriaceae (Annonaceae), commonly known as "Marolo", using gel filtration on Sephadex G-75 and reversed-phase HPLC on a j..l-Bondapack column. In SDS-P AGE, ACLEC (A. ç.oriacea lectin) migrated in two bands with apparent molecular masses of 21.6 kDa and 16.0 kDa in nonreducing conditions, and 16.0 kDa and 11.4 kDa in the presence of 1 M dithiothreitol. Nevertheless, the subunit of 21.6 kDa is formed by two bands covalent-binding of 11.0 kDa. Molecular mass of 12.0 kDa was estimated by gel filtration on Superdex 75, thus indicating that ACLEC exists as a heterodimer. ACLEC agglutinated human type A, B, AB and O erythrocytes, as well as mouse, sheep, rabbit, cow, goat, chicken and rat erythrocytes. The lectin had a higher affinity for D-mannose and D-glucose. The hemagglutinating activity of ACLEC was not inhibited over a wide pH range, or was it afIected by divalent cations or proteolytic enzymes such as pronase. Oxidation with sodium metaperiodate, or reduction with urea and dithiothreitol also did not afIect the hemagglutination. On the other hand, hemagglutination was inhibited at high temperature and by exposure to 1rypsin and trifluoromethanesulfonic acid. Amino acid analysis showed a high content of Arg and Gly, presence of three methionine and the absence of phenylalanine. The N-terminal sequence of ACLEC showed approximately 50% of homology with other plant lectins. ACLEC did not aggregate platelets or afIected platelet aggregation by collagen or ristocetin.ACLEC not inhibited the development of fungi and of the insect Callosobruchus maculatus but it had a high detrimental afIect on the development of the insect Anagasta keuhniella. This observation suggests that this lectin may act selectively as an insecticide against some insect species / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Jose Camillo Novello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T23:28:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_MariaBetaniadeOliveira_D.pdf: 5487305 bytes, checksum: de469730a17c2b1b7458c448fc40fba2 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As lectinas constituem um grupo de proteínas que possuem a capacidade de se ligarem, específica e reversivelmente, a determinados carboidratos. Identificadas em vegetais e animais, são também encontradas em venenos ofídicos. O objetivo deste trabalho é analisar a influência da lectina de Crotalaria paulina e lectina do veneno de serpente Bothrops jararacussu sobre a atividade proteolítica da microbiota cariogênica em placa bacteriana supragengival, em cárie de dentina e cárie de cemento, fazendo uso do teste BANA. Uma colher de dentina (1 mg) foi usada para coleta de 90 amostras: 30 - placa bacteriana supragengival, 30 - cárie de dentina ativa e 30 - cárie de cemento. Estas amostras foram colocadas em 2 mL de uma solução tampão (pH 7.2), sendo agitadas por 30 segundos em 250 mL foram adicionados: A) 250 mL de lectina vegetal de Crotalaria paulina 0,12% + 250 mL BANA 1.67 mmol/L + 250 mL de água destilada; B) 250 mL de lectina do veneno de Bothrops jararacussu 0,12% + 250 mL BANA 1.67 mmol/L + 250 mL de água destilada; C) 250 mL de lectina vegetal de Crotalaria paulina 0,12% + 250 ULL BANA 1.67 mmol/L + 250 mL de N-acetil D-galactosamina a 25mM; D) 250 mL de lectina do veneno da Bothrops jararacussu 0,12% + 250 mL BANA 1.67 mmol/L + 250 mL de lactose a 0,8 mM. As misturas foram incubadas por 18 horas a 37°C e a cor foi desenvolvida pela adição de 50 µL de Fast Gamet a 0,1%. A absorbância foi analisada espectrofotometricamente a 510 nm. Testes estatísticos (t-test) foram realizados para se determinar diferenças significativas entre as absorbâncias dos testes e controles. A absorbância média dos grupos de CrpL [0.375 (±0.028)] e BJcuL [0.442 (±0.057)] foi inferior a dos controles [0.860 (±0.056)] [0.753 (±0.058)] em placa bacteriana supragengival (p < 0.001). A absorbância média dos grupos de CrpL [0.471 (±0.044)] e BJcuL [0.563 (±0.035)] foi inferior do que os controles em dentina cariada (p < 0.001). A absorbância média dos grupos de CrpL [0.684 (±0.027)] e BJcuL [0.789 (±0.046)] foi similar aos controles em cemento cariado, não apresentando diferença significativa.Conclui-se que a CrpL e BJcuL pode inibir a atividade proteolítica presente em amostras humanas de placa bacteriana supragengival e cárie de dentina / Abstract: Lectins are polyvalent carbohydrate-binding proteins which agglutinate red blood cells. Identified in plants and animals, have also been found in snake venoms. The purpose of this study was to measure inhibition of proteolytic activity in supragingival plaque, coronal and root dentinal caries samples by CrpL e BJcuL. A standardized excavator ( 1 mg wet weight) was used to collect the samples (30 supragingival plaque; 30 - coronal caries; 30 - root caries) which were placed in 2 mL of a buffering solution (pH 7,2). The samples were vortexed for 30 seconds and 250 µL were added to: A) 250 µL CrpL 0,12% + 250 µL BANA 1.67 mmol/L + 250 µL distilled water; B)250 µL BJcuL 0,12% + 250 µL BANA 1.67 mmol/L + 250 µL distilled water; C) 250 µL CrpL 0,12% + 250 µL BANA 1.67 mmol/L + 250 µL N-acetil-D-galactosamine 25 mM; D) 250 µL BJcuL 0,12% + 250 µL BANA 1.67 mmol/L + 250 µL lactose 0.8 mM. The mixtures were incubated for 18 hours at 37°C and color was developed by the addition of 50 µL of 0,1% Fast Garnet. The absorbance at 510 nm was recorded spectrophotometrically. Independent t-tests were employed to determine differences between mean optical densities of the experimental groups and controls.The mean absorbance of CrpL group [0.375 (±0.028)] and BJcuL group [0.442 (±0.057)] was significantly different than 0.860 (±0.056) and 0.753 (±0.058) control groups (p < 0.001) in supragingival plaque samples. The mean absorbance of CrpL group [0.471 (±0.044)] and BJcuL group [0.563 (±0.035)] was significantly different than 0.860 (±0.056) and 0.753 (±0.058) control group (p < 0.001) in coronal caries. The mean optical density of CrpL group [0.684 (±0.027)] and BJcuL [0.789 (±0.046)] wasn't significantly different than 0.742 (±0.030) and 0.753 (±0.058) control groups. It is concluded that CrpL and BJcuL can inhibit proteolytic activity present in human supragingival plaque and coronal caries / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Com base na necessidade de obter novas formulaÃÃes mais eficientes e diante das propriedades apresentadas pelas molÃculas oriundas de algas marinhas, acredita-se que estas possam ser eficazes no processo de cicatrizaÃÃo. A lectina da alga marinha vermelha Pterocladiella capillacea (PcL) e os polissacarÃdeos da alga vermelha Solieria filiformis (SfP) inicialmente foram analisados em ensaio de toxicidade. PcL foi aplicada no ensaio do edema de pata seguido da dosagem de mieloperoxidase (MPO). Avaliou-se o efeito da lectina da alga Pterocladiella capillacea (PcL) e os polissacarÃdeos das algas Solieria filiformis (SfP) na cicatrizaÃÃo de feridas induzidas em ratos. Ambas as molÃculas foram submetidas a ensaios microbiolÃgicos e analisadas quanto ao efeito no processo de cicatrizaÃÃo em feridas limpas induzidas no dorso de ratos. SfP foi utilizado como um possÃvel veÃculo para a administraÃÃo de PcL e comparado ao Carbopol 940 (C). Os gÃis (0,9%) foram submetidos a anÃlise reolÃgica e entÃo aplicados nas lesÃes durante um perÃodo de tratamento de 10 (dez) dias, utilizando kollagenase como controle. O processo de cicatrizaÃÃo foi avaliado quanto ao tamanho das feridas, dosagem de MPO e anÃlise histolÃgica. PcL e SfP nÃo demonstraram toxicidade quanto aos parÃmetros de peso corpÃreo, ÃrgÃos e dosagens bioquÃmicas. Entretanto a anÃlise histolÃgica mostrou pequenas alteraÃÃes no fÃgado e rim. PcL (1, 3 e 9 mg/kg, i.v.) reduziu o edema induzido por carragenana e quando administrada com seu inibidor mucina nÃo foi possÃvel verificar a reduÃÃo do edema o qual foi confirmado pela dosagem de MPO. As duas molÃculas foram aplicadas em ensaios microbiolÃgicos e nÃo inibiram o crescimento de nenhum micro-organismo testado, os quais tambÃm nÃo foram capazes de utilizar SfP como fonte de carbono. A anÃlise reolÃgica mostrou que os SfP utilizados na formulaÃÃo dos gÃis (PcL+SfP e SfP) apresentaram a caracterÃstica de um pseudoplÃstico. A anÃlise macroscÃpica das feridas mostrou uma reduÃÃo da Ãrea da lesÃo nos animais tratados com PcL+SfP e PcL+C (53,5 e 60%, respectivamente) no sexto dia de administraÃÃo. Na anÃlise histolÃgica, nÃo foi observado infiltrado inflamatÃrio acentuado nos tecidos obtidos atà o 4 dia da administraÃÃo dos gÃis (PcL+SfP e PcL+C) e Kollagenase (controle positivo). No 6 dia, os animais nÃo tratados e os tratados apenas com SfP mostraram infiltrado inflamatÃrio. A dosagem de MPO demonstrou reduÃÃo no processo inflamatÃrio nas amostras contendo PcL, cujo resultado corrobora com a anÃlise histolÃgica. Em conclusÃo, PcL auxiliou no reparo de feridas, sugerindo seu uso futuro como uma possÃvel ferramenta para o tratamento de lesÃes. O papel biolÃgico e farmacolÃgico das lectinas e polissacarÃdeos de algas marinhas faz parte de uma Ãrea de estudos ainda pouco explorada, onde muito conhecimento deverà ser investido visto que estas biomolÃculas podem ser promissoras para a indÃstria farmacÃutica. / Based on the need for new formulations that are more efficient and on the properties provided by molecules derived from seaweed, it is believed that these can be effective in healing process. The lectin from the red seaweed Pterocladiella capillacea (PcL) and the polysaccharides of red algae Solieria filiformis (SfP) were initially analyzed in toxicity testing. PcL was applied to the paw edema test followed by measurement of myeloperoxidase (MPO). We evaluated the effect of the seaweed Pterocladiella capillacea lectin (PcL) and algal polysaccharides Solieria filiformis (SfP) in healing wounds in rats induced. Both molecules were submitted to microbiological tests and assayed for the effect on wound healing in wounds clean induced on the back of rats. SfP was used as a possible vehicle for the administration of PcL and compared to Carbopol 940 (C). The gels (0.9%) were analyzed rheological and then applied to the lesions during a treatment period of 10 days, using kollagenase  as control. The healing process was evaluated on the size of the wounds, levels of MPO and histological analysis. The molecule SfP and PcL is not toxic for the parameters of body weight, organ and biochemical measurements. However, the histological analysis showed minor changes in liver and kidney. PcL (1, 3 and 9 mg / kg, i.v) reduced the edema induced by carrageenan and its inhibitor when administered with mucin was not possible to check the reduction of edema which was confirmed by measurement of MPO. The two molecules were used in microbiological assays and not inhibit growth of any microorganism tested and unable to use SfP as carbon source. The rheological analysis showed that the SfP used in the formulation of the gels (PcL+SfP and SfP) had the characteristic of a pseudoplastic. Macroscopic analysis of wounds showed a reduction in lesion area in the animals treated with PCL, PCL+SfP, PCL+C (53.5 and 60% respectively) on the sixth day of administration. In histological analysis, there was no severe inflammatory infiltrate in the tissues obtained until 4th day of administration of the gels (PcL and PcL+SfP, PcL+C) and Kollagenase (positive control). On day 6, the untreated animals and those treated only with SfP showed inflammatory infiltrate. The measurement of MPO showed a reduction in the inflammatory process in the samples containing PcL, whose results corroborate the histological analysis. In conclusion, PcL aid in wound repair, suggesting its use as a possible future tool for the treatment of lesions. The biological and pharmacological role of lectins and polysaccharides of seaweed is part of a study area little explored, where a lot of knowledge should be invested since these biomolecules can be promising for the pharmaceutical industry.