Made available in DSpace on 2012-05-07T15:26:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000001.pdf: 2146845 bytes, checksum: be41c6f640ad1e8648af9fc24c2b3ad0 (MD5) Previous issue date: 2006 / A busca de marcadores de doença ativa e a validação de critérios de cura pós-terapêutica têm sido amplamente investigados na LV. Entretanto, o estabelecimento de um critério de cura sorológico ainda permanece inconclusivo. Os critérios adotados atualmente para estabelecer uma eficácia terapêutica dependem da avaliação clínica 12 meses pós-tratamento. O objetivo desse trabalho, foi avaliar a aplicabilidade da citometria de fluxo na pesquisa de anticorpos anti-promastigotas fixadas de L. (L.) chagasi (AAPF) na avaliação 12 meses após o tratamento e encontrar um indicador laboratorial de cura 2 meses e 6 meses pós-tratamento. Foi estabelecida uma relação entre os níveis de anticorpos anti L. (L.) chagasi e a eficácia do tratamento na LV, através da AAPF. Neste estudo foram avaliados soros de 21 pacientes com diagnóstico parasitológico positivo para LV, coletados antes e após o tratamento. As amostras de soro diluídas (1:1.000 a 1:128.000) foram incubadas com promastigotas fixadas, posteriormente incubadas com anti-IgG humana marcadas com FITC e IgG subclasses marcadas com SAPE na diluição de 1.000 a 128.000 para a pesquisa de IgG1 e 1:40 a 1:5.120 na pesquisa de IgG2, IgG3 e IgG4 e analisadas no citômetro de fluxo. Os resultados foram expressos como o percentual de parasitas fluorescentes positivos (PPFP) para cada amostra individual, estabelecendo 50 porcento como ponto de pacientes avaliados 12 meses após o tratamento (71,4 porcento). Entretanto, 2 meses após o tratamento foi encontrado valores de PPFP < 50 porcento em menos de 50 porcento dos pacientes. Em relação a subclasses de IgG foi encontrado valores reagentes em IgG1 e IgG3. Na pesquisa da AAPF para IgG1 pacientes apresentou melhor desempenho na monitoração terapêutica. Observamos 90,5 porcento de queda nos níveis de PPFP 6 meses e 71,4 porcento 2 meses pós-tratamento. Nossos resultados mostraram a aplicabilidade da citometria de fluxo para detecção de anticorpos anti-L. (L.) chagasi e na monitoração de cura na LV

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-25T21:03:51Z No. of bitstreams: 1 Cristiane Santos Nascimento Uso de método de biologia molecular....pdf: 1323686 bytes, checksum: caf3acf13d85858d02cc05e45a821e9c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-25T21:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristiane Santos Nascimento Uso de método de biologia molecular....pdf: 1323686 bytes, checksum: caf3acf13d85858d02cc05e45a821e9c (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral humana (LVH) é uma importante causa de morbidade e mortalidade no Brasil. Apesar dos avanços no conhecimento da epidemiologia da LVH, ainda existem lacunas importantes nas informações sobre os principais reservatórios desta zoonose. A técnica validada para avaliação da infectividade de reservatórios, xenodiagnóstico, é um método laborioso, demorado e difícil de executar, portanto, inapropriado para a triagem de grande número de animais. A padronização de método capaz de quantificar a carga parasitária presente em diferentes tecidos pode oferecer respostas importantes sobre a epidemiologia e a prevenção da LVH. OBJETIVO: Avaliar a carga parasitária em diferentes amostras biológicas de cães naturalmente infectados por Leishmania chagasi, utilizando método de biologia molecular quantitativo, PCR real-time (qPCR). MÉTODOS:Entre nov/2004 e abr/2007, foram realizados seis inquéritos soro-epidemiológicos em duas áreas endêmicas para LVH. Os cães soropositivos foram eutanasiados e submetidos a: exame de cultura, parasitológico direto e exame histológico para confirmação da infecção. Amostras de sangue periférico e fragmento de pele foram coletadas em todos os animais para determinação da carga parasitária. Adicionalmente, coletou-se também swab da conjuntiva, aspirado de medula óssea e linfonodo para realização do teste de qPCR nos cães incluídos no último inquérito (abr/2007). A técnica de qPCR foi padronizada utilizando um par de primers LEIF e LEIR e sonda LEIP selecionados no gene SSu rRNA. A seleção dos primers e sonda foi realizada utilizando o programa Primer Express (Perkin-Elmer-Applied Biosystems). A sonda fluorogênica foi sintetizada utilizando uma molécula FAM ligada na extremidade 5‟ e TAMRA ligada à extremidade 3‟(Perkin-Elmer -Applied Biosystems). Para determinar a carga parasitária foi realizada curva padrão com o DNA obtido da cultura de L. chagasi em concentrações variando de 101 a 107 parasitas/ml. Cada ponto da curva foi testado em triplicata. RESULTADOS: Dos 98 cães soropositivos identificados, foi detectado DNA de Leishmania em 57% das amostras de sangue total, em 56% das amostras de pele e em 100% das amostras de medula óssea, linfonodos e swab da conjuntiva. A carga parasitária em sangue periférico e swab da conjuntiva não ultrapassou 103 parasitas/ml sendo mais comumente detectado 1 a 10 parasitas/ml. Por outro lado, em pele, medula óssea e linfonodos a carga parasitária passou de 104 parasitas/ml, além disso, as quantidades de DNA detectadas se distribuíram com maior freqüência na categoria acima de 104 parasitas/ml, notadamente em amostras de linfonodos. CONCLUSÕES: O qPCR apresentou alta sensibilidade nas amostras biológicas estudadas, particularmente em linfonodos , medula óssea e pele. Nossos resultados indicam que o qPCR pode ser utilizado numa variedade de amostras biológicas para a quantificação da carga parasitária de cães naturalmente infectados por Leishmania sp. Estudos de validação do qPCR para avaliar a capacidade de reservatórios da LV, em lugar do xenodiagnóstico, e para investigar o papel do qPCR na triagem de cães em programas de controle/prevenção da LV devem ser conduzidos. / INTRODUCTION: Human visceral leishmaniasis (LVH) is an important cause of morbidity and mortality in Brazil. Despite advances in knowledge of the epidemiology of LVH, there are still important gaps in information on the main reservoirs of this zoonotic disease. The validated technique for assessing the infectivity of reservoirs, xenodiagnosis, is laborious, time consuming and difficult to implement, therefore, inappropriate for screening large numbers of animals. A standardized method to quantify the parasite load present in different tissues may provide important answers on the epidemiology and prevention of LVH. OBJECTIVE: To assess the parasite load in different biological samples from dogs naturally infected by Leishmania chagasi using a molecular biology quantitative method, real-time PCR (qPCR). METHODS: From nov/2004 to apr/2007, six seroepidemiological surveys were conducted in two endemic areas for LVH. The seropositive dogs were euthanized and submitted to: culture, direct parasitological and histological examination to confirm infection. Blood samples and skin fragments were collected in all animals to determine the parasite load. Additionally, conjuntival swabs, bone marrow and lymph node aspirates were also collected to do qPCR in dogs included in the last survey (apr/2007). The qPCR technique was standardized using a pair of primers and probe and LEIF /LEIR and LEIP selected in the SSU rRNA gene. The selection of primers and probe was performed using the program Primer Express (Perkin-Elmer-Applied Biosystems). The fluorogenic probe was synthesized using a FAM molecule attached at the 5 'end and TAMRA linked to the 3' end (Perkin-Elmer-Applied Biosystems). In order to determine the parasite load a DNA standard curve was plotted with DNA obtained from L. chagasi culture in concentrations ranging from 101 to 107 parasites/ ml. Each point on the curve was tested in triplicate. RESULTS: Of the 98 seropositive dogs identified Leishmania DNA was detected in 57% of the whole blood samples, 56% of the skin samples and 100% of bone marrow, lymph nodes and conjuntival swabs samples. The parasite load in peripheral blood and conjuntival swab did not exceed 103 parasites/ml, and was more commonly in the range of 1-10 parasites /ml. On the other hand, skin, bone marrow and lymphnode parasite burden exceeded 104 parasites / ml, in addition, the quantities of DNA detected were distributed more frequently in the category above 104 parasites/ml, especially in lymphnodes samples. CONCLUSIONS: qPCR showed high sensitivity in biological samples studied, particularly in lymphnodes, bone marrow and skin. Our results indicate that qPCR could be used in a variety of biological samples to quantify the parasite load in dogs naturally infected by Leishmania sp. qPCR validation studies to assess potential reservoirs for VL (replacing xenodiagnosis), and to investigate the role of qPCR in dog screening programs for the control/prevention of LV should be conducted.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:11:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 889.pdf: 11030552 bytes, checksum: 5dc0c575c22ba65b615af1b315fa94bb (MD5) Previous issue date: 2006 / (...) O objetivo deste estudo foi descrever a situação epidemiológica da LV no município de Palmas e analisar sua distribuição espacial na cidade no período de 1995 a 2004. Foram analisados os casos notificados no SINAN, na FUNASA, no SIM e na Secretaria Municipal de Saúde de Palmas, considerando-se apenas pacientes residentes em Palmas, cujas fichas de investigação apresentavam campo da classificação final confirmado para a LV.(...) O primeiro registro de caso de LV em Palmas data de 1990, ano de implantação da cidade. De lá para cá a doença se disseminou por varias regiões da capital, e hoje é encontrada em grande parte das quadras/loteamentos. A LV em Palmas se caracteriza como uma doença de transmissão claramente urbana, pois quase a totalidade dos casos (98 por cento) procedia de ambiente urbano. (...) A transmissão da LV em Palmas apresentou um comportamento claramente cíclico, com picos em 1996, 1999, 2001 e 2003. Ademais, evidenciou-se um aumento crescente dos picos ao longo dos anos, acompanhando o crescimento populacional e a ocorrência de importantes modificações ambientais, como a formação do lago da UHE Lajeado. A permanência de fragmentos vegetais entremeados por quadras habitadas e consolidadas, as constantes migrações, os desmatamentos (conseqüente da formação do reservatório da UHE Lajeado, da expansão urbana e da constante roçagem de lotes baldios, logradouros e áreas verdes), além da carência de infra-estrutura básica na área de saneamento, em especial nas áreas periféricas, são condições que possivelmente contribui para a manutenção do ciclo de transmissão da doença em Palmas.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-09-11T14:49:08Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Carolina Cunha Monteiro.pdf: 2690341 bytes, checksum: c13f5fff0318498b18aff1d8e3e2f76e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-11T14:49:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Carolina Cunha Monteiro.pdf: 2690341 bytes, checksum: c13f5fff0318498b18aff1d8e3e2f76e (MD5) / FAPEMIG CNPq CAPES Fundação Oswaldo Cruz / As Leishmanioses são doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania e transmitidas pela picada dos flebotomíneos. A doença apresenta diferentes manifestações clínicas, como a leishmaniose visceral (LV). No Brasil a LV é causada pela subespécie Leishmania (L.) infantum chagasi e transmitida principalmente pelo vetor Lutzomyia longipalpis e nos últimos dez anos, a média anual de novos casos foi de 3.379. O flebotomíneo, durante o repasto sanguíneo, pode ingerir o parasito que é direcionado ao intestino médio do inseto, onde entra em contato com a microbiota. In vitro a ação dessa microbiota sobre o parasito foi avaliada demonstrando a lise na parede celular de Leishmania (L.)infantum chagasi e Leishmania (V.) braziliensis causada por Serratia marcescens, porém ainda não esta claro o seu papel no vetor. Neste trabalho foi feita a identificação por sequenciamento de DNA de isolados bacterianos do intestino médio de L. longipalpis de duas localidades brasileiras. Nas fêmeas de flebotomíeneos da Gruta da Lapinha foi encontrada pela primeira vez a bactéria da família Enterobactereaceae, Providencia sp. Nas fêmeas de Jacobina a bactéria encontrada foi a espécie Acinetobacter soli. As duas localidades apresentaram maior número de bactérias do tipo bacilos Gram negativos. Os machos de Jacobina não apresentaram crescimento bacteriano, diferentemente dos machos da Gruta da Lapinha. Para análise da influência das bactérias no desenvolvimento do parasito, Fêmeas de L. longipalpis foram infectadas com Leishmania (L.) infantum chagasi e tratadas com dois antibióticos de ação principal sobre bactérias Gram negativas, carbenicilina e gentamicina. Os parasitos do grupo tratado com carbenicilina, além de serem capazes de se estabelecer no flebotomíneos após a digestão, tiveram um aumento no seu número. O grupo tratado com gentamicina apresentou uma queda já no segundo dia pós-infecção, tendo um aumento no quinto dia. Ao incubar as bactérias identificadas no intestino médio com L. (L.) infantum chagasi in vitro, foi possível ver que as bactérias interferem no crescimento do parasito. Analisamos também a expressão de peptídeos antimicrobianos. Gambicina e defensina apresentaram diferença de expressão entre os grupos Não alimentados e Pós Digestão, sendo que a expressão foi maior em Não alimentados. No processo de interação, estabelecemos no laboratório a transmissão de L.(L.) infantum chagasi diretamente via picada do flebotomíneo a hamsters e camundongos. Os dois modelos apresentaram uma variação de 4 a 15 mil parasitos inoculados na orelha dos vertebrados. / Leishmaniasis are diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and they are transmitted by the bite of sandflies. The disease presents different clinical manifestations, such as visceral leishmaniasis (VL). In Brazil, VL is caused by Leishmania (L.) infantum chagasi and it is transmitted by the vector bite Lutzomyia longipalpis and during the last ten years the annual new cases average of VL was 3.379. The sandfly is able to ingest the parasite during the blood meal which is directed to the insect midgut where it gets in contacts with the microbiota. The microbiota activity over the parasite was evaluated in vitro demonstrating cell walls lysis of Leishmania (L.) infantum chagasi and L. braziliensis caused by Serratia marcescens but their role in the vector is not clear yet. This work identified bacterial isolates from the L. longipalpis midgut from two deferent places in Brazil by sequencing DNA. Lapinha Cave females showed for the first time in sandflies a bacteria from the Enterobactereaceae family, Providence sp. Jacobina females’ insects presented Acinetobacter soli as a midgut bacteria. The insects from both sites showed a majority of Gram negative rods. Males from Jacobina showed no bacterial growth, unlike the Lapinha Cave ones. In order to analyze the influence of bacteria on the development of the parasite, L. longipalpis females were infected with L. (L.) infantum chagasi and treated with two difenrets antibiotics for Gram negative bacterias, carbenicillin and gentamicin. Carbenicillin treated group parasites were able to establish infection in sand flies after digestion increasing the number of parasites. The gentamicin treated group featured a parasite drop since the second day postinfection, having an increasing on the fifth day. Incubating in vitro those bacterias identified in the midgut with L. (L.) infantum chagasi, could be seen that bacteria interfere on parasite growth. We also analyzed the antimicrobial peptides expression in the insects. Gambicina and defensin expression differ between groups; Not Fed and Post Digestion. The expression was higher in Not Fed one. In the interaction process, we established the laboratory transmission of L. (L.) infantum chagasi directly by the sandfly bite on hamsters and mice. Both models showed a range 4 to 15 million parasites inoculated into the vertebrates’ ear.

Made available in DSpace on 2014-07-22T17:02:52Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 68700.pdf: 2578722 bytes, checksum: 8c5310d6fb306ce43d34892517750ffc (MD5) 68700.pdf.txt: 211841 bytes, checksum: cb3a25da2d45d4cf6b421b83c876f820 (MD5) 68700.pdf.jpg: 1263 bytes, checksum: 09883dde54f8c4065ee9c8c3e8f0cb35 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) é causada no Brasil pela Leishmania (Leishmania) infantum. A fase ativa da LV é caracterizada por uma imunossupressão parasito-específica acompanhada de baixos níveis de células T CD4+. Apesar disso, uma intensa ativação celular e resposta pró-inflamatória são observadas. Em outras doenças deficientes de célula T, tais como o HIV-1/AIDS, o lipopolissacarídeo (LPS), provavelmente oriundos da translocação microbiana são um componente crucial na ativação imune. Resultados recentes do nosso grupo mostraram que o LPS, juntamente com os antígenos parasitários, estão envolvidos na ativação das células T e na produção de citocinas pró-inflamatórias nos pacientes com LV. Nesse contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar os níveis plasmáticos de LPS na LV experimental, assim como a influência do tratamento específico anti-Leishmania e/ou o tratamento com antibiótico para bactérias Gram-negativas na evolução clínica desses animais e nos níveis do LPS plasmático. Além disso, avaliou-se a ocorrência da ativação celular e o desenvolvimento da resposta humoral ao longo do acompanhamento e dos diferentes tratamentos. Para isso, foram utilizados 117 golden hamsters (Mesocricetus auratus), que foram divididos em oito grupos: sem infecção (G1), infectado com L. infantum (G2), infectado e tratado com o antimonial pentavalente e/ou com o antibiótico amicacina (G3, G4 e G5, respectivamente). Três grupos sem infecção tratados com os fármacos propostos também foram incluídos (G6, G7 e G8) Na avaliação clínica realizou-se a pesagem dos animais, bem como do fígado e do baço. Os aspectos físicos dos animais infectados e as alterações macroscópicas do intestino delgado também foram avaliados. A carga parasitária esplênica também foi quantificada pelo imprint. Os níveis plasmáticos do LPS foram avaliados através de um kit comercial. As dosagens do anticorpo IgG total anti- Leishmania foram realizada no soro dos animais pela técnica de ELISA. A avaliação do grau de comprometimento do sistema imune dos hamsters foi feita através da quantificação do percentual de células T CD4+ e o grau de ativação celular pela molécula CD25, através da citometria de fluxo. Os hamsters com LV apresentaram parâmetros laboratoriais e imunológicos similares aos da LV humana, exceto pela ausência de sinais clínicos visíveis característicos dessa infecção. Os animais apresentaram um aumento de peso progressivo ao longo dos 101 dias pós-infecção (dpi), mas este foi condizente com seu crescimento e idade. Os tratamentos propostos não influenciaram no peso dos animais avaliados. O fígado e o baço dos hamsters apresentaram também um aumento de peso condizente com seu crescimento, entretanto foram observadas alterações macroscópicas em momentos tardios da infecção pelo parasito, que coincidiram com o aumento da carga parasitária esplênica desses animais. O intestino delgado dos animais infectados mostraram-se mais friáveis à manipulação e observou-se uma diminuição significativa do número de placas de Peyer em toda sua superfície quando comparados ao grupo não-infectado Elevados níveis de LPS plasmático foram observados nos animais infectados a partir de 15 dpi, como já foi descrito na LV humana. Uma intensa ativação celular foi observada nos animais infectados, tanto através da molécula CD25 nos linfócitos T CD4+ quanto pelos níveis de anticorpos IgG total anti-Leishmania, ambos aumentaram com o tempo de infecção. Os níveis de LPS se correlacionaram positivamente com a ativação das células T quando todos os animais infectados tratados ou não foram avaliados, sugerindo que o LPS pode contribuir para a ativação já descrita na LV humana. De modo geral, verificou-se nesse trabalho que o tratamento concomitante com o antimonial pentavalente e o antibiótico amicacina foram benéficos em diversos aspectos, como na recuperação do aspecto acroscópico dos órgãos, na diminuição da carga parasitária esplênica e imunológica (redução dos níveis de ativação) nos hamsters com LV, inferindo um possível sinergismo terapêutico entre esses fármacos. Esses resultados permitem sugerir a elegibilidade dessa estratégia terapêutica para o tratamento da LV humana / Visceral leishmaniasis (VL) is caused in Brazil by Leishmania (Leishmania) infantum. The active phase of VL is characterized by parasite-specific immunosuppression along with low levels of CD4+T cells. Despite this, an intense cellular activation and pro-inflammatory cytokine response is observed. In other T-cell deficient diseases such as HIV-1/AIDS, the lipopolisaccharide (LPS) probably from gut microbial translocation has a crucial role on immune activation. Our recent results showed that LPS along with parasite antigens are implicated in T-cell activation and pro-inflammatory cytokines in VL patients. In this context, our aim was to evaluate whether plasma LPS levels were increased in experimental VL and the influence of the specific treatment anti-Leishmania and/or the treatment with gram-negative antimicrobial in the clinical evolution of this animals and in the LPS levels. Also, we investigated the occurrence of the cellular activation and the development the humoral response during the follow up and under the different treatments. For this, 117 golden hamsters (Mesocricetus auratus) were divided into eight groups: without infection (G1), infected with L. infantum (G2), infected and treated with anti-leishmanial therapy (antimonial) and/or with antibiotic amikacin (G3, G4 and G5, respectively). Three groups without infection treated with the different drugs were also included (G6, G7 and G8). The clinical evaluation included animal weighting as well as spleen and the liver weight. The physical aspects of infected animals and the macroscopic alterations of the small intestine were also evaluated. Parasite load was quantified by the number of stained amastigotes in the spleen imprint. Plasma LPS levels were measured using a commercial kit. The quantification of serum anti-Leishmania IgG levels was performed by ELISA. The assessment of immune system impairment was done by quantifying the percentage of CD4 + T cells and the degree of cell activation by the CD25 molecule by flow cytometry. The infected hamsters presented laboratory and immunological parameters similar to those of a human VL, except for the absence of visible clinical signs characteristic of this infection. The animals also showed a progressive weight gain over the 101 days post-infection (dpi), but this was consistent with their growth and age. The proposed treatments did not affect the weight of the animals evaluated. The liver and spleen of hamsters also showed an increase in weight consistent with its growth, however anatomical changes were observed at late times of parasite infection, which coincided with the increased splenic parasite load in these animals. In addition, the small intestine of infected animals was more friable to handle and showed a significant decrease in the number of Peyer's patches across its surface compared to uninfected group. Elevated plasma levels of LPS were observed in infected animals from 15 dpi, as previously described in human VL. An intense cellular activation was observed in the infected hamsters using the CD25 molecule on CD4+ T lymphocytes and the total IgG anti-Leishmania levels, both of which increased with time of infection. LPS levels were positively correlated with the activation of T cells when all infected animals treated or not were evaluated, suggesting that LPS may contribute to the activation already described in VL patients. In general, this study showed that concomitant treatment with pentavalent antimony and the antibiotic amikacin were beneficial in many aspects, such as the recovery of macroscopic aspects of the organs, the decrease of splenic parasite load and reduced levels of immune activation in hamsters with VL, suggesting a possible therapeutic synergism between these drugs. These results suggest the eligibility of this therapeutic strategy for the treatment of human VL.

Made available in DSpace on 2015-11-18T13:13:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 18.pdf: 1870075 bytes, checksum: d5ea98b7af7284f04b5ff0aa3d2c7c71 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / A leishmaniose visceral canina (LVC) e uma doença parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, principalmente por Leishmania infantum. A epidemiologia da doença varia de região para região e o entendimento dos fatores associados à infecção em cães pode ajudar na elaboração de medidas de controle mais específicas. O diagnóstico sorológico da infecção sofreu mudanças importantes nos últimos anos com a introdução do TR-DPP® e do estabelecimento de novos critérios de diagnóstico (TR-DPP® + EIE-LVC) pelo Ministério da Saúde. Dentro desse contexto, no presente estudo objetivou-se estudar a epidemiologia da LVC no município de Goiana, estado de Pernambuco, nordeste do Brasil. Para tal, realizaram-se testes sorológicos (TR-DPP® e EIE-LVC) e análise clínico-epidemiológica em 360 cães semi e domiciliados, de ambos os sexos, raças e idades variadas, nos distritos de Atapuz, Tejucupapo e Pontas de Pedra no referido município. No TR-DPP®47 (13,1 por cento) animais foram reagentes, onde se observou associação significativa dos resultados com os seguintes sinais clínicos: alopecia, lesões na pele paresia e linfonodomegalia. Já no EIE-LVC 21 (5,8 por cento) animais foram reagentes, havendo associação significativa entre a classificação clínica dos animais, condição corporal, alopecia, lesões na pele, secreção ocular, paresia e linfonodomegalia. Já de acordo com o critério do Ministério da Saúde do Brasil, apenas 15 (4,2 por cento) animais foram classificados como positivos. De fato, verificou-se uma fraca concordância (Kappa = 0,39) entre os dois testes sorológicos. Conclui-se que a LVC encontra-se estabelecida em Goiana e que o uso do TR-DPP® como teste de triagem e do EIE-LVC como teste confirmatório pode levar a perda de cães infectados, uma vez que cães positivos do TR-DPP® são negativos no EIE-LVC e vice-versa

Made available in DSpace on 2016-02-16T12:33:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 andreia_alves_ipec_mest_2012.pdf: 385542 bytes, checksum: ce8d36278d30a403b5de05ef719424ae (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-05-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os testes sorológicos constituem um importante instrumento para o diagnóstico da leishmaniose visceral (LV), sendo os inquéritos sorológicos caninos uma das medidas recomendadas pelo Ministério da Saúde brasileiro, para o controle da doença humana. Trypanosoma caninum é um parasita recentemente descrito em cães domésticos em diferentes áreas de LV. Considerando a importância do cão no ciclo de transmissão de L. chagasi e a possibilidade desse novo parasita confundir o diagnóstico para leishmaniose, este estudo objetivou investigar o status sorológico de animais infectados por T. caninum e avaliar a reatividade cruzada com os testes sorológicos empregados na rotina de controle da LV no Brasil. Foram analisadas 117 amostras de soro de cães classificadas em 3 grupos: grupo Tc (animais infectados por T. caninum), grupo Lc (infectados por L. chagasi) e grupo Co (controles saudáveis) - com os kits disponibilizados para a rede pública - imunofluorescência indireta (IFI-LVC), ELISA (EIE-LVC) e teste imunocromatográfico (DPP) - e com testes in house empregando antígenos de T. caninum (IFI-Tc e ELISA-Tc) e de L. chagasi (IFILc e ELISA-Lc) Os cães infectados por T. caninum reagiram ao IFI-Tc e ELISA-Tc com sensibilidade de 64.1% e 94.9% e especificidade de 23.1% e 35.9%, respectivamente. Para os testes comerciais IFI-LVC, EIE-LVC e DPP, a sensibilidade foi de 100% e especificidade de 70.5%, 68% e 97.5% respectivamente. A especificidade destes testes tornou-se mais elevada quando o grupo Tc foi excluído das análises, com diferença significativa para IFI-LVC (x2=4.36, p=0.036) e não significativa para os demais testes (EIE-LVC - x2=2,87, p=0,089; DPP - x2=0,05, p=0,818). Concluímos que ferramentas sorológicas possam ter um valor limitado para o diagnóstico da infecção por T. caninum e que a presença de animais infectados por esse parasito em áreas endêmicas de LV possa ser um fator de confusão para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina / Serologic tests constitute an important tool for the diagnosis of visceral leishmaniasis (VL), being canine serol ogic inquiries one of the measures recommended by the Brazilian Health Minist ry, to control the human disease. Trypanosoma caninum is a parasite recently de scribed in domestic dogs in different endemic areas of LV. Consider ing the importance of the dog to the cycle of transmission of L. chagasi and the possibility of this new parasite to confuse the diagnosis for leishmaniasis, this study aimed to investigate the serological status of animals infected by T. caninum and to evaluate the cross- reactivity in serologic tests employed to t he routine control of the LV in Brazil. A set of 117 serum samples of dogs divi ded into 3 groups had been analyzed - Tc group (animals infected by T. caninum ), Lc group (animals infected by L. chagasi ) and Co group (healthy controls) - wit h kits available for the health public services - indirect imunofluoresc ence test (IFI-LVC), ELISA (EIE-LVC) and immunocromatographic test (DPP) - and with in house tests using T. caninum (IIF-Tc and ELISA-Tc) and L. chagasi (IIF-Lc and ELISA-Lc) antigens. Dogs infected by T. caninum had reacted to IIF-Tc and EL ISA-Tc with sensitivity of 64.1% and 94.9%, and s pecificity of 23.1% and 35.9%, respectively. For commercial tests IFI-LVC, EIE-LVC and DPP, sensitivity were of 100% and specificity of 70.5%, 68% and 97,5% respectively. The specificity of these tests had become higher when the Tc group was excluded from the analysis, with significant difference for IFI-LVC (x 2 =4.36, p=0.036) and not significant for the others tests (EIE-LVC - x 2 =2,87, p=0,089; DPP - x 2 =0,05, p=0,818). We conclude that serologic tools can have a limited value for the diagnosis of the infection for T. caninum and that the presence of animals infected by this parasite in endemic areas of LV visceral canine can be a factor of confusion for the diagnosis of leishmaniasis.

Made available in DSpace on 2016-03-15T14:15:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 370.pdf: 1919081 bytes, checksum: 9ff4a610675eba6aaa0e4a1f6c66b714 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / No presente estudo foi realizado um inquérito soroepidemiológico multimétodo e censitário para leishmaniose visceral na população canina da Ilha da Marambaia, município de Mangaratiba, Rio de Janeiro, Brasil. Embora a região seja considerada indene e silenciosa para a doença é endêmica para leishmaniose tegumentar americana.Neste contexto, a possibilidade de co-infecção de cães L. brasiliensis e L. infantum e a recente dispersão da leishmaniose visceral canina para áreas do Estado sem relato de casos humanos, reforça a necessidade de avaliar fatores de risco de transmissão que nortearão futuras medidas de controle à doença. No censo foram identificados 125 cães dos quais 121 realizaram exame sorológico pelos métodos de TR DPP Leishmaniose Visceral Canina Bio-Manguinhos, IFI Leishmaniose Visceral Canina Bio-Manguinhos e EIE Leishmaniose Visceral Canina Bio-Manguinhos. (...) Dos 22 cães positivos no ELISA, sete apresentaram cultivo positivo com isolamento de Leishmania infantum e em uma amostra evidenciou-se Trypanossoma spp. destacando a possibilidade de reações cruzadas na sorologia. Dos sete animais infectados porL.infantum cinco concentravam-se na Praia Suja e todos apresentavam manifestação clinica compatível com leishmaniose visceral, cinco eram criados de forma livre(considerados andarilhos) e dois presos a coleira junto a casa. Em todos os casos os proprietários residiam próximo a mata residual. O inquérito entomológico realizado mostrou várias espécies de flebotomíneos dentre as quais L. longipalpis em baixa densidade, L.intermédia e M. migonei, em elevada densidade sugerindo sobreposição dos ciclos de transmissão de LTA e LVA na Ilha de Marambaia. A evidência epidemiológica da circulação da L. infantum na Ilha de Marambaia indica a necessidade de execução de ações de controle preconizadas pelo Ministério da Saúde e a continuidade de estudos epidemiológicos que possam aferir as medidas empreendidas sobre a população canina da Ilha da Marambaia. / In this study, a multimethod and census seroepidemiological survey for visceral leishmaniasis in the canine population of Marambaia Island , the city of Mangaratiba, Rio de Janeiro, Brazil was performed. Although the region is considered harmless and silent for the disease is endemic for american cutaneous leishmaniasis . In this context the possibility of co-infection of dogs L. brasiliensis and L. infantum and the recentspread of canine visceral leishmaniasis in areas of the state reported no human cases reinforces the need to assess transmission risk factors that will guide future measures control the disease. In the census 125 dogs of which 121 underwent serological examination by DPP TR methods of Canine Visceral Leishmaniasis Bio - Manguinhos were identified , IFI Canine Visceral Leishmaniasis Bio - Manguinhos and EIE Canine Visceral Leishmaniasis Bio - Manguinhos. (...) Of the 22 ELISA positive dogs, seven had positive culture with isolation of Leishmania infantum and one sample revealed a Trypanosoma spp. highlighting the possibility of cross-reactions in serology. Of the seven animals infected with L.infantum five massed on the beach dirty and all had clinical manifestations compatible with visceral leishmaniasis, five were set free form (considered wanderers) and two prisoners on the leash by the house. In all cases the owners lived near residual forest .The entomological survey showed several sandfly species among which L. longipalpis atlow density , and L. intermedia, M. migonei in high density, suggesting overlap of the transmission cycles of ACL and AVL in Marambaia Island . Epidemiological evidenceof movement of L. infantum on the island of Marambaia indicates the need for enforcement of control measures recommended by the Ministry of Health and the continuity of epidemiological studies to assess the measures taken on the canine population of Marambaia Island. (AU)^ien

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:09:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 366.pdf: 2881883 bytes, checksum: 041f28bbe2387bf591f544758b2bca29 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Os métodos de diagnóstico sorológico são ainda as ferramentas mais realistas e aplicáveis para identificação de cães com leishmaniose visceral. A pesquisa por métodos sorológicos mais eficientes e de produção simplificada é importante para a identificação do reservatório canino, ação primordial para o controle da doença. Este estudo teve por objetivo o desenvolvimento e a avaliação do desempenho de um ELISA para leishmaniose visceral canina, utilizando como conjugado enzimático uma IgY anti-IgG canina. Para isto, galinhas poedeiras foram imunizadas com IgG canina purificada e a IgY anti-IgG foi isolada das gemas dos ovos por precipitação com polietilenoglicol e purificada por meio de adsorção tiofílica. A especificidade frente ao antígeno imunizante foi verificada por imunodifusão radial dupla, ELISA e western-blot. O ELISA foi desenvolvido utilizando IgY conjugada a enzima peroxidase, tendo seus parâmetros de acurácia avaliados e comparados com o ELISA utilizando IgG de mamíferos conjugada a peroxidase. A concentração total de IgY isolada nas gemas foi constante, sem diferença significativa nos meses analisados (...), com média de 97,55 mg de IgY/ gema. A IgY produzida reconheceu a IgG canina, demonstrando uma forte sensibilidade e especificidade no ELISA, porém na imunodifusão não foi detectada ligação da IgY produzida a IgG canina. Após a imunização, houve um aumento significante da produção de IgY específica do primeiro para o segundo mês (...) onde ocorreu um pico estável sem queda de produção até o final do período analisado (...). A IgY demonstrou ainda, forte reatividade no western-Blot frente a IgG canina purificada e a presente no soro de cão clinicamente saudável, não sendo capaz de reconhecer IgG de outras espécies animais. / A conjugação da IgY a enzima peroxidase ocorreu sem danos à sua estrutura, com discriminação entre as amostras positivas e negativas em todas as diluições do conjugado e concentrações do antígeno testadas. O ELISA utilizando IgY conjugada a peroxidase apresentou 100 por cento de sensibilidade e 100 por cento de especificidade. A comparação dos parâmetros de acurácia do ELISA utilizando IgY com o ELISA utilizando IgG de mamíferos demonstraram valores idênticos. A repetibilidade do ensaio de ELISA IgY foi superior a encontrada com o ELISA IgG, com coeficiente de correlação intraclasse (ICC) estatisticamente significante (...). Um maior agrupamento das amostras negativas e positivas, também verificada quando a correlação das duplicatas nas duas observações foram analisadas (...). Diante de todos esses resultados a IgY ligada à peroxidase demonstrou ser um conjugado enzimático de excelente qualidade, revelando um melhor desempenho quando comparado ao conjugado produzido por mamíferos.

Submitted by Angelo Silva (asilva@icict.fiocruz.br) on 2016-07-13T18:48:18Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 71844.pdf: 6374317 bytes, checksum: cbcb33e3210240d51e2f525530467e5c (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-08-24T19:30:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 71844.pdf: 6374317 bytes, checksum: cbcb33e3210240d51e2f525530467e5c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T19:30:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 71844.pdf: 6374317 bytes, checksum: cbcb33e3210240d51e2f525530467e5c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os achados clínicos da leishmaniose visceral canina (LVC), assim como os da leishmaniose visceral humana (LVH) são variáveis e inespecíficos. Apesar da LVC se apresentar como uma doença que pode ser fatal e crônica, existem poucos estudos descrevendo as alterações clínicas e histopatológicas destas infecções. Desta forma, evidenciando a necessidade de obtenção de dados que pudessem contribuir nesses estudos, o objetivo deste trabalho foi estudar as alterações clínicas e oculares presentes em 25 cães com leishmaniose visceral provenientes da localidade Cidade Operária, São Luís - Maranhão/Brasil através da realização de avaliação clínica, testes oftalmológicos (Schirmer e colírio fluoresceína) além de dosagens hematológicas e bioquímicas, isolamento e caracterização do parasito em amostras de medula óssea, baço e humor aquoso, além de PCR. Os resultados mostraram que linfoadenopatia foi o sintoma mais frequente, seguido de caquexia, alopecia, lesão de pele, onicogrifose e hepatoesplenomegalia. As manifestações clínicas oculares observadas com maior frequência foram: presença de algum tipo de secreção e conjuntivite, seguido de blefarite, uveíte e opacidade de córnea. Oito animais foram positivos no teste de Schirmer e sete no colírio de fluoresceína indicando a presença de ceratoconjuntivite seca e úlcera de cornea, respectivamente As alterações hematológicas mais frequentes foram anemia e trombocitopenia, aumento sérico de proteínas totais e globulina e a diminuição de albumina. A alteração mais frequente observada em todos os animais foi a presença de infiltrado inflamatório do tipo plasmocitário. A análise histopatológica dos olhos dos cães mostrou lesões nas pálpebras, esclera, glândulas e musculatura retrorbital. Tendo a presença do parasito sido evidenciada em 16% dos animais. Estes resultados mostram que as manifestações oftalmológicas estão presentes em animais com LVC e podem ocorrer concomitantemente com outros sinais sistêmicos da doença. É importante considerar a leishmaniose como uma doença sistêmica, a qual afeta diferentes órgãos e sistemas. Sugerimos assim, que em áreas endêmicas, este agravo deve ser incluído como diagnóstico diferencial de cães com lesões oculares ou de etiologia desconhecida / Abstract: Clinical findings of canine visceral leishmaniasis (CVL), as well as of human visceral leishmaniasis (HVL) are variable and nonspecific. Although VC present as a disease that can be fatal and chronic few studies describing the clinical and histopathological changes of these infections. Thus, highlighting the need to obtain data that could contribute to these studies, the objective of this work was to study the clinical and ocular abnormalities present in 25 dogs with visceral leishmaniasis from the locality City Workers, Sao Luis - Maranhao / Brazil by conducting clinical, ophthalmological test (fluorescein drops and Schirmer) and hematological and biochemical measurements, isolation and characterization of the parasite in samples of bone marrow, spleen, and aqueous humor, and PCR. The results showed that lymphadenopathy was the most common symptom, followed by cachexia, alopecia, skin lesion, onychogryphosis, and hepatosplenomegaly. Ocular clinical manifestations observed most frequently were the presence of some type of secretion and conjunctivitis, followed by blepharitis, uveitis and corneal opacity. Eight animals were positive in the Schirmer test and seven in drops of fluorescein indicating the presence of keratoconjunctivitis sicca and cornea ulcer, respectively The most common hematologic abnormalities were anemia and thrombocytopenia, increased serum total protein and globulin and decreased albumin. The most frequent alteration observed in all animals was the presence of inflammatory infiltrate of plasma cell type. Histopathological analysis dogs eyes showed lesions on the eyelids, sclera, glands and muscles retrorbital. Since the presence of the parasite was observed in 16% of animals. These results show that the ocular manifestations are present in animals with LVC and can occur concurrently with other signs of systemic illness. It is important to consider leishmaniasis as a systemic disease, which affects different organs and systems. We suggest therefore that in endemic areas, this grievance should be included in the differential diagnosis of dogs with eye injuries or of unknown etiology