Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-08Bitstream added on 2014-06-13T21:03:46Z : No. of bitstreams: 1 alonso_dp_dr_botib.pdf: 2450212 bytes, checksum: 69bde7499141345fa0f0677e44f46b4f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose é uma doença parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, e transmitida através da picada de fêmeas de mosquitos da família Plebotomidae. As formas clínicas da leishmaniose são particularmente variadas tendo como forma mais grave a leishmaniose visceral (LV) ou calazar. No Brasil a LV é causada pelo protozoário L.infantum chagasi e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, os principais reservatórios que participam do ciclo zoonótico são canídeos selvagens e cães domésticos. O fato de as leishmanioses, de uma maneira geral, apresentarem um amplo espectro no que diz respeito à sintomatologia da doença, aliado a grande diversidade das espécies de hospedeiros infectados, sugere a presença de variantes genéticas do parasita. No caso da leishmaniose visceral, por exemplo, variantes genotípicas de L.infantum chagasi interagindo com diferentes espécies de hospedeiros podem ter papel fundamental na dinâmica de transmissão e virulência de possíveis epidemias. O presente estudo teve como meta identificar possíveis variantes genotípicas de L. infantum chagasi presentes na área endêmica de Teresina no Estado do Piauí, e comparar com os genótipos encontrados em Campo Grande no Estado de Mato Grosso do Sul e Bauru no Estado de São Paulo, visto que a história natural da doença nessas regiões é muito mais recente do que no Estado do Piauí. O estudo utilizou marcadores microssatélites já descritos na literatura, seqüenciamento de regiões gênicas codificantes e não-codificantes e também a técnica de PCR-RFLP do DNA do cinetoplasto (kDNA) do parasita, para a obtenção de perfis genéticos que possibilitem relacionar as diferenças genotípicas com as diferentes origens geográficas dos parasitas isolados como um primeiro passo para a eleição e aplicação de um marcador molecular robusto para o estudo populacional... / Leishmaniasis is a parasitary disease caused by Leishmania protozoans and transmitted by female Phebotomidae sandflies. Clinical manifestations are particularly diverse, being visceral leishmaniasis (VL) the most severe form. In Brazil VL is caused by Leishmania infantum chagasi and transmitted by Lutzomyia longipalpis sandfly; the main zoonotic reservoirs are dogs and wild canids. Due to a broad range of disease manifestations and great variety of host species infected, Leishmania parasites are thought to possess great genotypic variability. This is of major significance in epidemiological features and in disease transmission. The aim of this study is to identify different genotypic strains of L. infantum chagasi in endemic areas of Teresina, Piauí State; Campo Grande, Mato Grosso do Sul State and Bauru, São Paulo State, and after that, select an appropriate molecular marker in order to study population genetics of L. infantum chagasi in Brazil. Microsatellites markers, sequencing of DNA coding and non-coding regions and PCR-RFLP of kinetoplast DNA (kDNA) were used in order to compare genetic profiles in parasites from different geographical origins. Among all this techniques, kDNA PCRRFLP has shown greater performance, and was able to detect a clear distinction in Teresina isolates when compared to Campo Grande and Bauru isolates

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-18Bitstream added on 2015-03-03T12:06:35Z : No. of bitstreams: 1 000800629.pdf: 2931246 bytes, checksum: 78c9ca8aaa65224fa656c71bd3ff8606 (MD5) / A leishmaniose visceral, forma clínica mais severa das leishmanioses, pode ser fatal se não tratada. Cães infectados são reservatórios potenciais da doença, sendo um diagnóstico específico e cuidadoso requerido para a identificação dos animais infectados, com o objetivo de promover um melhor controle epidemiológico e, consequentemente, controlar a transmissão da doença para o homem. Diversos trabalhos na literatura descrevem vários testes utilizados atualmente para diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC), porém, apresentam variada especificidade e sensibilidade. Dessa forma, o desenvolvimento de um teste diagnóstico com maior sensibilidade e especificidade se torna importante para correta identificação de cães infectados. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar a proteína rLc36, codificada por um gene exclusivo de Leishmania infantum, quanto ao potencial antigênico para desenvolvimento de um teste diagnóstico mais sensível e específico para LVC baseado no ensaio ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Diferentes concentrações desta proteína foram testadas por ELISA usando soros de cães infectados com LV e soros de cães não infectados. A concentração de 1,0?g/mL de rLc36 foi capaz de diferenciar os soros positivos dos soros negativos e apresentou sensibilidade de 85% e especificidade de 71%, em um teste com 95% de confiança, mostrando que a proteína rLc36 é antigênica e apresenta potencial para ser aplicada no desenvolvimento de um kit diagnóstico. A proteína rLc36 foi testada em associação com a proteína A2, o qual já foi previamente avaliado como antígeno no diagnóstico sorológico da leishmaniose, e foi possível observar aumento na sensibilidade do teste (77%), mas não na especificidade (79%). Soros de outras parasitoses foram testados frente à proteína rLc36. Foi possível observar reatividade com os soros positivos para babesiose... / Visceral leishmaniasis, the most severe clinical form of the leishmaniasis, can be fatal if untreated. Infected dogs are potential reservoirs of the disease, being a specific and careful diagnosis required for identification of the infected animals, with the aim of promoting a better epidemiological control and consequently control the transmission of the disease to humans. Several works in the literature describe various tests used for diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL), however, they show varied specificity and sensitivity. In this way, the development of a diagnosis test with greater sensitivity and specificity becomes important for the correct identification of infected dogs. Thus, the development of a more sensitive and specific diagnosis test based on recombinant antigens may contribute in the correct identification of dogs truly infected and thus contribute to the more effective control of the transmission of the disease. The present work had as objective to characterize the protein rLc36, encoded by a gene unique to Leishmania infantum, for the antigenic potential for development of a more sensitive and specific test for CVL based on the ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Different protein concentrations were tested by ELISA using sera from dogs infected with LV and sera from non-infected dogs. The concentration of 1.0?g/mL of rLc36 protein was able to differentiate positive from negative sera and showed sensitivity of 85% and specificity of 71% on a test with 95% of confidence, showing that the protein rLc36 is antigenic and has potential for be applied in a new diagnosis test. The rLc36 protein was tested in association with the A2 protein, which was previously assessed as antigen in serological diagnosis of leishmaniasis, and it was possible to observe an increase in the sensitivity of the test (77%), but no increase was observed in the specificity (79%). Sera from...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. ____________________________________________________________________________________________________ / Em atenção aos artigos 11 e 96 da Lei nº 9.279/96 (Lei da Propriedade Industrial) e em consonância com a Resolução CAD 005/2008 da Universidade de Brasília, informamos que o presente trabalho somente foi publicado na data indicada neste informativo. A respectiva defesa, para obtenção do título pretendido, foi realizada na modalidade de sessão fechada, conforme a documentação anexada, de forma que o requisito da novidade, exigida nos referidos artigos da Lei, foi devidamente preservado. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-02T16:09:04Z No. of bitstreams: 1 2016_HerickSampaioMüller_Parcial.pdf: 2537971 bytes, checksum: 0e36706acc171881428e752f4348e1a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-04T20:37:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_HerickSampaioMüller_Parcial.pdf: 2537971 bytes, checksum: 0e36706acc171881428e752f4348e1a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-04T20:37:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_HerickSampaioMüller_Parcial.pdf: 2537971 bytes, checksum: 0e36706acc171881428e752f4348e1a4 (MD5) / A leishmaniose é uma antropozoonose que possui diferentes manifestações clinicas, sendo transmitida durante o repasto sanguíneo de flebotomíneos e causada por várias espécies de parasitos do gênero Leishmania. Esta doença causa grandes agravos na saúde humana em escala global, com altas taxas de mortalidade anualmente. Inúmeros fatores de risco impulsionam a transmissão do parasito para áreas anteriormente não endêmicas provocados tanto pelo ser humano quanto por variações naturais do ambiente. O controle da leishmaniose visceral (LV) no Brasil se faz por meio da detecção e eliminação dos reservatórios da doença, controle das populações de vetor, prevenção do contato com vetores infectados e tratamento dos casos humanos. No entanto, essas medidas são aplicadas frequentemente de forma isolada e tem-se mostrado limitadas. Como consequência, observase a manutenção ou mesmo expansão da LV para áreas onde sua ocorrência não era registrada. Nesse contexto, medidas que visem à redução da transmissão e suas aplicações de forma integrada são de fundamental importância, tais como o diagnóstico precoce e com alta sensibilidade dos humanos e dos cães infectados, tratamento eficaz e o emprego de vacinas. O diagnóstico tradicional da LV é baseado na presença de anticorpos anti-Leishmania e o padrão-ouro é a visualização de formas amastigotas do parasito em amostras biológicas. No entanto, a introdução da vacinação de cães nos últimos anos gera a necessidade de novos métodos sorológicos capazes de diferenciar entre animais vacinados e infectados. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a metalopeptidase mitocondrial zinco dependente, secretada de L. infantum como marcador para diagnóstico sorológico de LV. A análise in sílico revelou que a proteína teria 47,35% de resíduos de aminoácidos expondo sua superfície ao solvente e nestas áreas foram encontradas possíveis zonas para epitopos de células B, sítios de glicosilação e fosforilação. A expressão das proteínas em sistemas diferentes possibilitou avaliar a imunogenicidade das proteínas heterólogas com e sem modificações pós-traducionais contra soro de cães infectados e sadios. O resultado do ensaio de ELISA mostrou altos índices de anticorpos específicos contra as proteínas heterólogas e a comparação dos resultados indicou que a proteína heteróloga expressa em modelo procarioto identificou todos os animais infectados nas diluições 1:50 e 1:100 de soro. Os dados estatísticos do teste t mostraram p value < 0.01, dando credibilidade na hipótese de uso desta proteína em possível diagnóstico para LV. O estudo realizado apresenta informações relevantes sobre o uso da metalopeptidase estudada para que possa ser associada ao melhoramento do diagnóstico da LV. Testes para definição da sensibilidade e especifidade fazem-se necessários em futuros trabalhos. / Leishmaniasis is a anthropozoonosis with different clinical manifestations, being transmitted by sandfly during blood feeding and caused by several species of parasites of the genus Leishmania. This disease causes major health problems on a global scale, with high mortality rates annually. Several risk factors drive the transmission of the parasite to areas not previously endemic due to man activities and by natural environmental variations. Control of visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is made through the detection and elimination of disease reservoirs, control of vector populations, preventing contact with infected vectors and treatment of human cases. However, these measures are often applied in isolation and has shown limited 0efficacy. As a result, there is the maintenance or expansion of the VL to areas where their occurrence was not recorded. In this context, measures aimed to reduce transmission and its applications in an integrated manner are of fundamental importance, such as early diagnosis with high sensitivity of humans and infected dogs, effective treatment and the use of vaccines. Traditional diagnosis of VL is based on the presence of anti-Leishmania antibodies and the gold standard is the visualization of amastigote forms of the parasite in biological samples. However, the introduction of vaccination of dogs in recent years creates the need for new serological methods able to differentiate between vaccinated and infected animals. The objective of this study was to evaluate the metallopeptidase zinc dependent secreted from L. infantum, as a marker for serological diagnosis of VL. In silico analysis revealed that the protein had 47.35% of amino acid residues exposed to the solvent, exhibiting on your surface areas for possible B cell epitopes, glycosylation and phosphorylation sites. The expression of proteins in different systems allowed to assess the immunogenicity of the heterologous proteins, with and without post-translational modifications, against sera from infected and healthy dogs. The results of the ELISA assay showed high levels of specific antibodies against heterologous proteins and the comparison of the results shows that heterologous protein expressed in a prokaryotic model was able to differentiate all infected animals at dilutions 1:50 and 1: 100 serum. Statistical analysis emphasize the potential of this protein to be used in diagnosis for VL. The study presents relevant information on the use of metallo-peptidase studied so it can be associated with the improvement of the diagnosis of VL. Tests to define the sensitivity and specificity are made necessary in future work.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2017. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-03T18:25:59Z No. of bitstreams: 1 2017_ThaisOliveiraCoelho.pdf: 1524361 bytes, checksum: e3c8a123df6dcb4461fcfb6acd0597a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-09T19:00:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ThaisOliveiraCoelho.pdf: 1524361 bytes, checksum: e3c8a123df6dcb4461fcfb6acd0597a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-09T19:00:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_ThaisOliveiraCoelho.pdf: 1524361 bytes, checksum: e3c8a123df6dcb4461fcfb6acd0597a5 (MD5) Previous issue date: 2018-07-03 / Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF). / Introdução: Os insetos da subfamília Phebotominae são vetores de vários protozoários do gênero Leishmania que produzem doenças como a leishmaniose visceral (LV) e a leishmaniose tegumentar americana (LTA). A fauna de flebotomíneos do Distrito Federal ainda é pouco conhecida com apenas 35 espécies registradas e as pesquisas sobre infecção natural destes vetores ainda é escassa. A Região Administrativa (RA) da Fercal é uma área situada entre a Bacia do Rio Maranhão e às margens da Área de Proteção Ambiental – APA Cafuringa, com grande potencial eco-turístico que apresenta uma expansão urbana desordenada, sendo considerada área de transmissão intensa para leishmaniose visceral humana e com elevada positividade canina para Leishmania spp. Objetivo e Metodologia: O presente estudo teve como objetivo identificar as espécies de flebotomíneos, assim como sua relação com as variáveis climáticas e estimar a infecção natural do gênero Leishmania nas espécies capturadas. As capturas foram realizadas na RA da Fercal/DF em 15 Unidades Domiciliares (UD) por meio de armadilhas CDC instaladas no intradomicílio e peridomicílio e armadilha de Shannon na área de mata. A análises de infecção natural foram realizada nas espécies Lutzomyia longipalpis e Nyssomyia whitmani por meio de PCR. Resultados: Foram identificadas um total de 27 espécies com 8 registros novos para o DF, dentre 1883 espécimes capturadas e Ny. whitmani foi a espécie predominante. Verificou-se diferença significativa entre a ocorrência de flebotomíneos capturados em área de mata e área urbana, com maior ocorrência nos domicílios (p<0,0001). Com relação a pluviosidade, temperatura e umidade não foram observadas associação com a maior ou menor abundância de flebotomíneos e a avaliação da infecção natural de 194 pools de flebotomíneos não apresentou resultados positivos. Conclusões: Atualiza-se para 43 as espécies de flebotomíneos registradas no Distrito Federal. O período de maior coleta para flebotomíneos ocorreu em agosto a setembro de 2014 e as espécies Ny. whitmani e Lu. longipalpis foram mais abundantes no peridomicílio. A avaliação da infecção natural apresentou resultados negativos para Leishmania sp. Essas informações são de fundamental importância para as ações de vigilância e controle da LV e LTA, no DF. / Introduction: Insects of the subfamily Phebotominae are vectors of several protozoa of the genus Leishmania that produce diseases such as visceral leishmaniasis (LV) and American cutaneous leishmaniasis (ACL). The phlebotomine fauna of the Federal District is still little known with only 35 species registered and the research on natural infection of these vectors is still scarce. The Fercal Administrative Region (RA) is an area located between the Maranhão River Basin and the APA Cafuringa Environmental Protection Area, with great potential for eco-tourism that presents a disorderly urban expansion, being considered an intense transmission area for human visceral leishmaniasis and with high canine positivity for Leishmania spp. Objective and Methodology: The objective of this study was to identify sandfly species, as well as their relationship with climatic variables and to estimate the natural infection of the genus Leishmania in the captured species. The catches were taken at RA of Fercal / DF in 15 Domiciliary Units (UD) by means of CDC traps installed in the intradomicile and peridomicile and trap of Shannon in the forest area. The analyzes of natural infection were carried out in the species Lutzomyia longipalpis and Nyssomyia whitmani by means of PCR. Results: A total of 27 species with 8 new records were identified for DF, among 1883 specimens captured and Ny. whitmani was the predominant species. There was a significant difference between the occurrence of sand flies captured in forest and urban areas, with a higher occurrence in the households (p <0.0001). Regarding rainfall, temperature and humidity, no association was observed with greater or less abundance of sand flies, and the evaluation of the natural infection of 194 sand flies did not present positive results. Conclusions: Up to 43 species of sand flies are recorded in the Federal District. The period of greatest collection for sandflies occurred in August to September 2014 and the species Ny. whitmani and Lu. longipalpis were more abundant in the peridomicile. The evaluation of the natural infection presented negative results for Leishmania sp. This information is of fundamental importance for the actions of surveillance and control of LV and LTA in the DF.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-05Bitstream added on 2014-06-13T20:36:42Z : No. of bitstreams: 1 jacintho_app_me_jabo.pdf: 1171496 bytes, checksum: ca4de86d788a08d2a03efb6f93a4a52b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os cães infectados pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi podem ou não apresentar sinais clínicos dessa zoonose e são a principal fonte de infecção para o homem. A pele é o primeiro órgão infectado pelo parasito na LVC. As enzimas metaloproteinases da matriz (MMPs) atuam na degradação da matriz extracelular (MEC) e na modulação da resposta inflamatória, frente a vários tipos de injúrias. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de MMP-2 e MMP-9, por meio da técnica de imuno-histoquímica e zimografia na pele de cães naturalmente acometidos por LVC e comparar estes resultados com a imunodetecção das citocinas TNF- e TGF- e do protozoário Leishmania, com as possíveis alterações da matriz extracelular dermal. A alteração da composição de fibras colágenas da derme foi avaliada pela coloração PicroSirius. O método foi usado para diferenciar fibras colágenas dos tipos I e III, nas regiões do focinho, orelha e abdômen. A carga parasitária, intensidade de inflamação e a produção de MMP 2 e 9 foram maiores nas regiões cutâneas da orelha e focinho. Os macrófagos, linfócitos e plasmócitos predominaram no infiltrado inflamatório da derme superficial, formando granulomas, associados a degradação do colágeno maduro (tipo I) e a discreta deposição de colágeno jovem (tipo III), com maior intensidade nos cães com elevada carga parasitária cutânea. O TGF-β foi detectado nos três grupos de cães infectados (assintomático, oligossintomático e sintomático), sem diferenças significativas entre eles. O TNF-α não foi detectado na maioria dos animais infectados e no grupo controle. Conclui-se que quanto maior a carga parasitária e a intensidade de inflamação na pele, maior a degradação do colágeno maduro, produção de MMPs 2 e 9 e produção de TGF-β. A MMP-9 ativa poderia ser utilizada... / Dogs infected by Leishmania (Leishmania) chagasi may or may not show clinical signs of the zoonosis and they are the main source of infection for man. The skin is the first organ infected by the parasite in the LVC. The enzyme matrix metalloproteinases (MMPs) act on the degradation of extracellular matrix (ECM) and in the inflammatory response modulation against many kinds of injuries. The aim of this study was to evaluate the expression of MMP-2 and MMP-9 by immuno-histochemistry and zymography in the skin of dogs naturally affected by LVC and the immunodetection of TNF- and TGF- and of Leishmania and compare these results with the possible alterations of dermal extracellular matrix. The method was used to differentiate collagen fibers in the dermis was evaluated by Picrosirius red staining to differentiate collagen types I and III, in regions of the nose, ear and abdomen. The parasite load, intensity of inflammation, increased production of MMP 2 and 9 were higher in regions of the ear and muzzle. Macrophages, lymphocytes and plasma cells predominated in the inflammatory infiltrate of the superficial dermis, forming granulomas, associated with degradation of mature collagen (type I) and the discrete deposition of the young collagen (type III), with greater intensity in dogs with high parasite load skin. The TGF-β was detected in all groups of infected dogs (asymptomatic, oligosymptomatic and symptomatic), no significant differences among them. The TNF-α was not detected in most infected animals and the control group. It follows that the greater is the intensity of parasitic load and inflammation of the skin, the greater is the degradation of mature collagen, the production of MMPs and 2 and 9, production of TGF-β. Active MMP-9 could be used as a marker of inflammation in infected dogs. This profile of the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-16Bitstream added on 2014-06-13T20:10:40Z : No. of bitstreams: 1 rosa_fa_me_araca.pdf: 638635 bytes, checksum: 6da71a7df4b64d7dee14e747e3b9a7cd (MD5) / O acometimento cardíaco é raro em pacientes com leishmaniose visceral (LV). Porém, existem relatos demonstrando graus variáveis de comprometimento desse órgão em cães e seres humanos acometidos. O presente estudo teve por objetivos avaliar a ocorrência de alterações histopatológicas e a presença de Leishmania sp. no miocárdio (átrio direito, ventrículo direito, septo interventricular e ventrículo esquerdo) de 30 cães naturalmente infectados. As principais alterações macroscópicas observadas foram dilatação ventricular direita em 53,3% (16/30) dos animais e hipertrofia concêntrica do ventrículo esquerdo em 20% (6/30). Reação inflamatória caracterizada pela presença de infiltrado linfoplasmocitário em graus variados de intensidade foi observada em 90% (27/30) dos cães, necrose coagulativa de cardiomiócitos ou em bandas de contração em 80% (24/30), aumento de colágeno intersticial em 73,3% (22/30), granuloma em 23,3% (7/30), infiltração gordurosa em 16,7% (5/30) e necrose fibrinóide em 10% (3/30) dos cães. A presença de formas amastigotas no tecido cardíaco foi identificada por imuno- histoquímica em 66,7% (20/30) dos animais. Apesar da elevada prevalência de alterações histopatológicas e da presença de formas amastigotas de Leishmania sp. no miocárdio, tais alterações foram discretas e insuficientes para produzir manifestações clínicas nos cães com LV. Como os animais do presente estudo foram submetidos a eutanásia, permanece incerto se o envolvimento cardíaco teria sido mais severo se a doença tivesse seguido seu curso natural / Cardiac involvement is rare in patients with visceral leishmaniasis, however some studies have shown several degrees of heart impairment in dogs as well as in human beings. The present study aimed to evaluate the occurrence of histopathological lesions and the presence of Leishmania sp. in the myocardium (right atrium, right ventricle, interventricular septum and left ventricle) of 30 naturally infected dogs. The most frequent macroscopic findings were right ventricular enlargment in 53.3% (16/30) and concentric left ventricular hypertrophy in 20% (6/30) of the dogs. Inflammatory reaction characterized by the presence of lymphocytic infiltrate in different degrees of intensity was observed in 90% (27/30), coagulative necrosis of cardiomyocytes or contraction bands necrosis in 80% (24/30), increased interstitial collagen in 73.3% (22/30), lepromatous granuloma in 23.3% (7/30), fat infiltration in 16.7% (5/30) and fibrinoid necrosis in 10% (3/30) of the dogs. The presence of amastigotes in the cardiac tissue was identified by immunohistochemistry in 66.7% (20/30) of the dogs. Despite the high prevalence of histopathological changes and the presence of amastigotes of Leishmania sp. in the myocardium, such changes were mild and insufficient to produce clinical signs in dogs with VL. Since the animals used in this study were euthanized, it remains unclear whether cardiac involvement would have been more severe if disease had followed its natural course

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-11Bitstream added on 2014-06-13T20:51:03Z : No. of bitstreams: 1 rossi_cn_me_jabo.pdf: 323193 bytes, checksum: 33919c622846b1fdf1e017e291939314 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Apesar de alguns relatos da ocorrência de leishmaniose visceral em felinos, a literatura é escassa no que diz respeito à sua pesquisa em populações de gatos de áreas endêmicas para a doença. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo pesquisar em uma área endêmica para leishmaniose visceral canina, a possibilidade de infecção em gatos, por meio de exame parasitológico direto e da pesquisa de anticorpos anti-Leishmania chagasi pelas técnicas de ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Para tanto, foram colhidas amostras de soro de 200 gatos, encaminhados ao Centro de Controle de Zoonoses do município de Araçatuba - São Paulo - Brasil, bem como realizadas punções biópsias aspirativas de linfonodo, medula óssea, baço e fígado, utilizados para a confecção de preparados citológicos para a pesquisa direta de formas amastigotas de Leishmania sp. A prevalência da doença nessa população de gatos foi de 6,5%. Dos 200 animais avaliados, oito (4,0%) apresentaram resultado parasitológico positivo, seis (3,0%) apresentaram títulos sorológicos acima do ponto de corte (0,332) pela técnica de ELlSA e um (0,5%) evidenciou título superior ao ponto de corte (1:40) pela RIFI, totalizando 13 gatos considerados positivos. / In spite of some reports of the occurrence of feline visceral leishmaniasis, the literature is scarce about its research on populations of cats in endemic areas for the disease. The present work aimed to study, in an endemic area for canine visceral leishmaniasis, the infection possibility in cats using the direct parasitological test, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescent antibody test (IFAT). For this purpose, a total of 200 cats directed to the Zoonosis Control Center of the municipal district of Araçatuba - São Paulo - Brazil were employed. Lymph node, bone marrow, spleen and liver aspiration biopsies were carried out and observed under optical microscope to search for amastigote forms of the parasite and serum samples were submitted to serological methods in order to detect anti-Leishmania chagasi circulating antibodies. The prevalence of the disease in this population of cats was 6.5%. Amastigote forms of the parasite were observed in eight (4.0%) cats; by ELISA method, six (3.0%) cats presented titer above the specie's cut off point (0,332) and one cat (0,5%) showed a titer above 1:40, a positive serological reaction, by IFAT, totalizing 13 positive cats.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T20:30:48Z : No. of bitstreams: 1 torresneto_r_me_bobtfmvz.pdf: 1205608 bytes, checksum: a043d02ed53f9963d975e5590d24439a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / A leishmaniose visceral canina é uma zoonose considerada endêmica em algumas regiões do estado de São Paulo e outras localidades do país. Apesar de ser uma enfermidade sistêmica, no cão, os principais sinais clínicos são dermatológicos. Foram avaliados trinta cães com diagnóstico de leishmaniose pelos exames parasitológico e sorológico, divididos em dois grupos: grupo A com descamação cutânea e grupo B com ulceração cutânea. Os padrões histopatológicos encontrados nos animais pertencentes ao grupo A foram de dermatite perianexial (33,3%), perivascular superficial (6,6%), nodular (6,6%), e as mistas (53,3%), sendo, intersticial/perianexial (12,5%), liquenóide/perivascular superficial e profunda (12,5%), perivascular superficial e profunda/perianexial (12,5%) e perivascular superficial/perianexial (62,5%). Os cães do grupo B apresentaram quadros histopatológicos compatíveis com dermatite perivascular superficial e profunda (33,3%), difusa (20%), perianexial (13,3%), nodular (6,6%), e as mistas (26,6%), representadas por intersticial/perivascular superficial e profunda (25%), nodular/perianexial (25%), fibrosante/perianexial (25%) e perivascular superficial e profunda/perianexial (25%). A presença de formas amastigotas foi observada em 8 (53%) cães com descamação e 7 (47%) com ulceração. A presença de linfócitos T CD3+ foi maior em relação aos linfócitos B CD79a +, tanto nas lesões descamativas como nas ulcerativas (69,5/8,8 e 66,1/14,5, respectivamente). Houve diferença estatística entre a população de células CD3+ e CD79a+ dentro do mesmo padrão dermatológico, o mesmo ocorreu quando se comparou a população de células CD79a+ entre os padrões descamativos e ulcerativos (p<0,05). / Canine leishmaniasis is an endemic zoonoses, in some São Paulo state regions and other Brazilian cities. Even though it is a systemic disease, in the dog, the main clinical sign is dermatological. Thirty dogs with positive results in serology and parasitological exam for leishmaniasis, were evaluated. They were divided in two groups, one with exfoliative lesions and other with cutaneous ulcers. Histopathological patterns in the first group were: periadnexial dermatitis (33.3%), superficial perivascular (6.6%), nodular (6.6%) and mixeds (53.3%), intersticial/periadnexial (12.5%), lichenoid/perivascular superficial and deep (12.5%), perivascular superficial and deep/periadnexial (12.5%) and superficial perivascular/periadnexial (62.5%). In the ulcerative pattern, the histopathological patterns were: perivascular superficial and deep dermatitis (33.3%), diffuse dermatitis (20%), periadnexial dermatitis (13.3%), nodular dermatitis (6.6%) and mixed dermatitis (26.6%), including intersticial/ perivascular superficial and deep (25%), nodular/periadnexial (25%), fibrosing/perianexial (25%) and perivascular superficial and deep/periadnexial. Parasites were found in 8 dogs (53%) with exfoliative pattern and 7 dogs (47%) with ulcerative pattern. CD3 positive cells (T lymphocytes) were predominant than CD79a positive cells (B lymphocytes), in both dermatological patterns of lesions (69,5/8,8 e 66,1/14,5, respectively). There was no statistical difference between CD3 positive and CD79a cell population concerning exfoliative and ulcerative patterns. There was statistical difference between CD3+ cells and CD79a+ cells, when the same dermatological pattern was considered. The same was observed when compared CD79a+ cells in exfoliative and ulcerative patterns (p<0,05).

Resumo: A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença endêmica em vários estados do Brasil. O agente etiológico é o protozoário Leishmania (L.) infantum chagasi e o principal vetor é o flebotomíneo da espécie Lutzomyia longipalpis. Estudos epidemiológicos têm utilizado a PCR convencional para mensurar a taxa de infecção de flebotomíneos, como estratégia para aumentar a sensibilidade diagnóstica. Entre as principais vantagens deste método destaca-se a sensibilidade e especificidade, independente do número, estágio e localização de Leishmania no trato digestivo do vetor. Nesse sentido, o presente trabalho objetivou comparar genes com diferentes números de cópias para detectar L. chagasi em área endêmica para LV da Amazônia oriental, no município de Barcarena, estado do Pará. Foram realizadas capturas de 280 fêmeas de flebotomíneos Lu. longipalpis utilizando armadilhas de luz tipo CDC, no período de novembro de 2003 a fevereiro de 2004. O DNA foi extraído a partir do inseto inteiro, sem dissecção prévia, utilizando SDS e KOAc e empregado em reações de PCR para os genes de Leishmania: mini-exon, DNA do cinetoplasto (kDNA) e subunidade ribossomal 18S (SSU-rRNA). Foram empregados os seguintes iniciadores: D1 (5'-CCAGTTTCCCGCCCCG-3') e D2 (5'-GGGGTTGGTGTAAAATAG-3') que amplificam 780pb do gene kDNA; R221 (5'-GGTTCCTTTCCTGATTTACG-3') e R332 (5'-GGCCGGTAAAGGCCGAATAG-3') que amplificam 600pb do gene da subunidade menor do ribossomo (SSU-rRNA); S1629 (5'-GGGAATTCAATAWAGTACAGAAACTG-3') e S1630 (5'-GGGAAGCTTCTGTACTWTATTGGTA-3') que amplificam 400pb do gene mini-exon. A amplificação do gene da subunidade 28S rRNA (Lu1- 5'-TGAGCTTGACTCTAGTTTGGCAC3' e Lu2 5'-AGATGTACCGCCCCAGTCAAA-3') de Lu. longipalpis foi utilizado como controle para a extração do DNA do vetor, amplificando um fragmento de aproximadamente 370pb. Do total de 280 amostras de fêmeas Lutzomyia longipalpis, 24 (8,6%) apresentaram resultados positivos para o gene kDNA; 20 (7,1%), para o gene mini-exon; e 15 (5,3%) para o gene SSU-rRNA. Assumindo o resultado da taxa de infecção natural para o kDNA, a sensibilidade dos testes para os genes mini-exon e SSU-rRNA foi de 83,3% e 63%, respectivamente. A taxa de infecção foi considerada elevada e preocupante, visto que 62,5% dos vetores infectados foram coletados no intradomicílio; 37,5%, no peridomicílio. Os dados demonstram a importância da PCR como ferramenta para investigação da epidemiologia molecular da leishmaniose visceral para a estimativa de risco de transmissão da doença em área endêmica, com maior confiabilidade para o uso do DNA do cinetoplasto do parasita como marcador.

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Guilherme Loureiro Werneck / Banca: Elisa Cupolillo / Banca: Hiro Goto / Banca: Celso Luis Marino / Resumo: A leishmaniose é uma doença parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania, e transmitida através da picada de fêmeas de mosquitos da família Plebotomidae. As formas clínicas da leishmaniose são particularmente variadas tendo como forma mais grave a leishmaniose visceral (LV) ou calazar. No Brasil a LV é causada pelo protozoário L.infantum chagasi e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, os principais reservatórios que participam do ciclo zoonótico são canídeos selvagens e cães domésticos. O fato de as leishmanioses, de uma maneira geral, apresentarem um amplo espectro no que diz respeito à sintomatologia da doença, aliado a grande diversidade das espécies de hospedeiros infectados, sugere a presença de variantes genéticas do parasita. No caso da leishmaniose visceral, por exemplo, variantes genotípicas de L.infantum chagasi interagindo com diferentes espécies de hospedeiros podem ter papel fundamental na dinâmica de transmissão e virulência de possíveis epidemias. O presente estudo teve como meta identificar possíveis variantes genotípicas de L. infantum chagasi presentes na área endêmica de Teresina no Estado do Piauí, e comparar com os genótipos encontrados em Campo Grande no Estado de Mato Grosso do Sul e Bauru no Estado de São Paulo, visto que a história natural da doença nessas regiões é muito mais recente do que no Estado do Piauí. O estudo utilizou marcadores microssatélites já descritos na literatura, seqüenciamento de regiões gênicas codificantes e não-codificantes e também a técnica de PCR-RFLP do DNA do cinetoplasto (kDNA) do parasita, para a obtenção de perfis genéticos que possibilitem relacionar as diferenças genotípicas com as diferentes origens geográficas dos parasitas isolados como um primeiro passo para a eleição e aplicação de um marcador molecular robusto para o estudo populacional... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis is a parasitary disease caused by Leishmania protozoans and transmitted by female Phebotomidae sandflies. Clinical manifestations are particularly diverse, being visceral leishmaniasis (VL) the most severe form. In Brazil VL is caused by Leishmania infantum chagasi and transmitted by Lutzomyia longipalpis sandfly; the main zoonotic reservoirs are dogs and wild canids. Due to a broad range of disease manifestations and great variety of host species infected, Leishmania parasites are thought to possess great genotypic variability. This is of major significance in epidemiological features and in disease transmission. The aim of this study is to identify different genotypic strains of L. infantum chagasi in endemic areas of Teresina, Piauí State; Campo Grande, Mato Grosso do Sul State and Bauru, São Paulo State, and after that, select an appropriate molecular marker in order to study population genetics of L. infantum chagasi in Brazil. Microsatellites markers, sequencing of DNA coding and non-coding regions and PCR-RFLP of kinetoplast DNA (kDNA) were used in order to compare genetic profiles in parasites from different geographical origins. Among all this techniques, kDNA PCRRFLP has shown greater performance, and was able to detect a clear distinction in Teresina isolates when compared to Campo Grande and Bauru isolates / Doutor