Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Zoologia, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2015-11-05T12:49:35Z No. of bitstreams: 1 2015_DanieleCarvalhoCarmoFaria.pdf: 4093312 bytes, checksum: a1883e98aa6922a5596898bcd6f9a50e (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2015-11-16T12:02:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_DanieleCarvalhoCarmoFaria.pdf: 4093312 bytes, checksum: a1883e98aa6922a5596898bcd6f9a50e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T12:02:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_DanieleCarvalhoCarmoFaria.pdf: 4093312 bytes, checksum: a1883e98aa6922a5596898bcd6f9a50e (MD5) / A família Leptodactylidae compreende 199 espécies, sendo o gênero Leptodactylus o mais rico, com 76 espécies. Espécies deste gênero são divididas em cinco grupos fenéticos. O grupo Leptodactylus fuscus é o mais rico, sendo composto por espécies sem franjas nos dedos, machos sem projeções queratinosas nos polegares e no peito, pregas dorsolaterais geralmente presentes, ovos postos em ninhos de espuma, em câmaras subterrâneas, girino com lábio dividido em fileira de dentes anterior ao bico córneo. No presente trabalho, uma nova espécie de Leptodactylus do grupo L. fuscus é descrita com base na morfologia externa e osteológica do adulto, do girino e nas características do canto de anúncio. A nova espécie se reproduz em riachos temporários em áreas abertas em localidades do Cerrado brasileiro acima de 900 metros de altitude. É caracterizada pelo tamanho corporal moderado (CRC macho adulto 36.8–45.1 mm), padrão de coloração distinta (dorso e superfície dorsal dos membros anteriores e posteriores avermelhados sobre uma cor cinza de fundo) e vocalização diferenciada (canto trinado, sem assobios). O canto de anúncio apresenta padrão trinado, com uma sequência de notas bem definidas, contendo um ou mais pulsos. O corpo do girino é oval e alongado em vista dorsal e oval levemente deprimido em vista lateral. A osteologia é bem similar a dos outros membros do grupo L. fuscus apresentando diferenças sutis. Contudo ocorre um considerável depósito de cálcio entre os processos transversos das vértebras. ___________________________________________________________________________ ABSTRACT / The family Leptodactylidae comprises altogether 199 species, being the Leptodactylus genus richest, with 76 species. Species of this genus are divided in five phenetic groups. The Leptodactylus fuscus group is richest in species and is characterized by toes without webs or fringes, absence of thumb and chest spines in males, usually present dorsolateral folds, eggs laid in foam nests in underground chambers, tadpole with split lip row of tooth prior to the beak. In this work, a new species of Leptodactylus fuscus group is described based on adult external morphology and adult osteological, tadpole and the characteristic of the advertisement call. The new species breeds in temporary streams in open fields at high altitude areas in the Brazilian Cerrado localities above 900m. It is characterized by moderate body size (adult male SLV 36.8-45.1 mm), distinct color pattern (dorsum and dorsal surface of fore and hindlimbs reddish over a gray background color) and differentiated vocalization (trilled call, without whistles). The advertisement call have a trilled pattern, with a well-defined sequence of notes, having one or more pulses. The tadpole’s body is elongated oval in dorsal view and oval slightly depressed in lateral view. The osteology is very similar to the other L. fuscus group members, showing subtle differences. However, there is a considerable calcium deposits among the transverse processes of the vertebrae.

Orientador: Lúcia Helena O'Dwyer / Coorientador: Karina dos Santos Paduan / Banca: Lúcio André Viana Dias / Banca: Luciano Alves dos Anjos / Banca: Reinaldo José da Silva / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Resumo: Hepatozoon spp. são parasitas que comumente infectam anfíbios anuros e artrópodes hematófagos. Possuem como uma das características a grande variabilidade morfológica e morfométrica e, devido a estas variações, a denominação correta da espécie é prejudicada. Assim, a visualização do ciclo esporogônico no vetor é a principal forma de resolver este problema. Recentemente, a utilização da genética molecular tem ajudado na denominação de espécies. Neste trabalho coletamos 145 anuros (68 Leptodactylus chaquensis e 77 Leptodactylus podicipinus) em dois diferentes locais de coleta, onde foram encontrados 18 (26,5%) L. chaquensis e 24 (31,3%) L. podicipinus positivos para o parasita. Além de gamontes, também foram observadas formas esquizogônicas nos órgãos dos animais. A diferença de prevalência entre os locais de coleta nas diferentes espécies de anuros não se mostrou estatíscamente significativa. Comparando os gamontes encontrados em cada espécie de anuro, observamos diferenças na morfologia. Infelizmente, não foi possível a comparação a nível molecular para L. podicipinus devido à pequena quantidade de sangue obtido, apenas L. chaquensis teve o DNA de seus parasitas sequenciados. Diante disso, vimos que embora a morfologia e morfometria do parasita em cada local coletado mostrassem diferenças, quando realizamos o sequenciamento, as amostras obtidas foram idênticas, ao passo que quando comparadas à espécies depositadas no GenBank, nossas amostras foram bem diferentes / Abstract: Hepatozoon spp. are parasites that commonly infect frogs and arthropod vectors. This species has variability in morphological and morphometric characteristics. Due to these variations the name of the species is thus impaired and only by visualizing the sporogonic cycle in vector can be solved this problem. Recently the use of molecular genetics has helped the denomination of species. In this work we collected 145 frogs (68 Leptodactylus chaquensis and 77 Leptodactylus podicipinus) in different sampling sites, where they were found 18 (26.5%) L. chaquensis and 24 (31.3%) L. podicipinus positive for parasites. Besides of gamonts, schizogonic forms also were seen in organs of animals. The positivity difference between the sites for different frog species were not significant. Comparing gamonts found in each species of anuran, we observed differences in morphology. Unfortunately it was not possible in the molecular level comparation for L. podicipinus due to small amount of blood obtained, just L. chaquensis have had their DNA sequenced parasites.Therefore, we have seen that, although the morphology and morphometry of the parasite collected at each site showed differences, the sequencing of these samples revealed identical species of Hepatozoon, and different compared to those from GenBank. We also emphasize that the collection points did not influence the presence of this parasite, even located at a distance of approximately 76 km apart one of other / Doutor

Dissertação (mestrado)—Fundação Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biologias, Programa de Pós Graduação em Biologia Animal, 2014. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-20T15:20:30Z No. of bitstreams: 1 2014_AlinedaSilvaChagas.pdf: 1323645 bytes, checksum: 96f661143e6ce644d15ed547e942f4ce (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-21T17:04:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AlinedaSilvaChagas.pdf: 1323645 bytes, checksum: 96f661143e6ce644d15ed547e942f4ce (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-21T17:04:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AlinedaSilvaChagas.pdf: 1323645 bytes, checksum: 96f661143e6ce644d15ed547e942f4ce (MD5) / A secreção cutânea de anuros é reconhecida como uma rica fonte de compostos biologicamente ativos, incluindo aminas biogênicas, alcaloides, bufadienolídeos, peptídeos e proteínas. Os peptídeos antimicrobianos constituem um sistema de defesa imediato, atuando sobre um grande espectro de mircroorganismos. A busca por novas alternativas terapêuticas no tratamento de infecções e câncer tem impulsionado nos estudos voltados à prospecção de novos peptídeos antimicrobianos. No presente trabalho, as secreções cutâneas de Leptodactylus labyrinthicus e Phyllomedusa azurea foram utilizadas para avaliar seus efeitos antiproliferativos e citotóxicos sobre células tumorais. Também foram submetidas a fracionamento cromatográfico a fim de se isolar peptídeos com atividade inibitória sobre a proliferação do fungo patogênico Candida albicans. As frações bioativas foram analisadas por MALDI-TOF MS e submetidas à recromatografia por RP-HPLC. De acordo com a estratégia experimental empregada foi possível a obtenção de duas frações homogêneas a partir da secreção de P. azurea, denominadas PaF31-7(F12) e PaF36-10(F13) que foram empregadas na determinação dos MICs para C. albicans. Tais frações mostraram-se capazes de inibir parcialmente o crescimento da levedura C. albicans na maior concentração empregada (128 µM). Também foram avaliados os efeitos citotóxicos e antiproliferativos das secreções brutas de P. azurea e L. labyrinthicus sobre as linhagens celulares HeLa, B16F10 e NIH3T3. Observou-se que a secreção bruta de L. labyrinthicus apresenta atividade antiproliferativa acentuada sobre células tumorais empregadas, especialmente células Hela, com um IC50 de 4,216 µg/mL sem apresentar citotoxicidade relevante contra células normais da linhagem NIH3T3. Ensaios adicionais de citometria de fluxo revelaram que a secreção bruta de L. labyrinthicus não interfere de forma significativa nas etapas do ciclo celular, no entanto, observa-se um aumento importante na fragmentação do DNA de células HeLa quando expostas à secreção, sugerindo que a morte celular ocorra por meio de apoptose. Mais estudos precisam ser realizados a fim de se determinar o mecanismo pelo qual a secreção bruta de L. labyrinthicus promove a morte das células tumorais. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The anurans skin secretion is recognized as a rich source of active biological compounds, including alkaloids, peptides and proteins. The antimicrobial peptides constitute an immediate defense system, acting on a wide spectrum of microorganisms. The quest for new therapeutics alternatives for infections treatments and cancer have been driven studies focused on prospecting for new antimicrobial peptides. In this present work, the skin secretions by Leptodactylus labyrinthicus and Phillomedusa azurea were utilized for evaluating their antiproliferative and cytotoxic effects on tumor cells. Were also subjected the skin secretion to fractionation in order to isolate peptides with inhibitory activity on the proliferation of the pathogenic fungus Candida albicans. The bioactive fractions were analyzed by MALDI-TOF MS, and subjected to rechromatography by RP-HPLC. According to the experimental strategy used was possible to achieve two homogeneous fractions secretion from P. azurea, called PaF31 7 (F12) and PaF36 10 (F13). These fractions were capable of partially inhibiting the growth of the yeast C. albicans in greater concentration employed (128 μM). We also evaluated the cytotoxic and antiproliferative crude secretions of P. azurea and L. labyrinthicus on cell lines HeLa, NIH3T3 and B16F10 effects. It was found that the crude secretion of L. labyrinthicus shows marked antiproliferative activity on tumor cells employed, especially Hela cells with an IC50 of 4.216 μ g / ml without showing significant cytotoxicity against normal NIH3T3 cells lineage. Additional tests of flow cytometry showed that the crude secretion of L. labyrinthicus not significantly interfere with the stages of the cell cycle, however, there was a significant increase in DNA fragmentation in HeLa cells exposed to secretion, suggesting that cell death occurs by apoptosis. More studies need to be conducted to determine the mechanism by which the crude secretion of L. labyrinthicus promotes tumor cell death.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-06-19T14:24:49Z No. of bitstreams: 1 Marcio Frazao Chaves.pdf: 2647111 bytes, checksum: fed26b2964876dfb1a5fed1f18b11566 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-19T14:24:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcio Frazao Chaves.pdf: 2647111 bytes, checksum: fed26b2964876dfb1a5fed1f18b11566 (MD5) Previous issue date: 2016-12-09 / Aspects of animal breeding are highly diverse and complex. The existence of a number of reproductive strategies may have evolved in order to maximize the fitness avoid predation, competitors or are simply related to environmental conditions. In environments with semi-arid characteristics, the air temperature and relative humidity related to pluviometric index determine the reproductive pattern of amphibians. In this perspective anatomical and morphological characteristics of the reproductive system of Leptodactylus macrosternum correlated to climatic factors, enable the assessment of reproductive behavior of this species expanding the knowledge of the reproductive biology of neotropical frogs. Thus, this study aims to describe the annual reproductive cycle of the species L. macrosternum based on these parameters: morphology of the gonads and fatty bodies, histology and morphometry of the gonads and production of sex hormones and its relation to environmental conditions in the studded area. This work was carried out in the area of Horto Florestal Olho d'água da Bica (HFODB), caatinga area fragment in the municipality of Cuité, state of Paraiba. The animals were captured fortnightly through active collecting, between the months of January to December 2013. For the determination of the reproductive and dynamic energy of the species based on morphology of the gonads and fatty bodies, body weight values (WT), the weight of the gonad (WG), liver weight (WF) and weight of fatty bodies (WFB) were used for the calculation of gonadosomatic relation [RGS = WG (100) / WT],hepatosomatic [RWF = WH (100) / WT] and liposomal [RFB = WFB (100) / WT] and condition factor [K1 = W / lb]. The gonads were fixed in Bouin solution for 24 hours and then dehydrated in ascending series of alcohol proceeded embedded in paraffin and 5 μm cross-sections were obtained and subsequently stained with hematoxylin and eosin. The identification of oocyte cell types and quantification of oocyte and testicular cell types was preceded in conventional bench microscope, trinocular and coupled to a digital system of image acquisition. To assess possible changes in the histology of the ovaries, it was proceeded the quantification of the types of oocytes performed by the density method in a test area of 88mm2. The evaluation of possible changes in histology and morphometric of the testes was performed by stereological analysis for determining the density of primary spermatids, secondary and sperm volume calculated from the density of these cell types. To quantify the density profiles (QA, primary spermatids, secondary and sperm) were counted respectively 14, 5 and 6 fields in a test area (AT) with 0.044 mm2 for each animal in each study group. The final result (mm2) was acquired after the utilization of the mean value for each profile and applying the following formula: QA = Σprofile / AT. Hormone analysis was performed by quantifying the dosages of progesterone and estrogen levels in females by ELIZA method. The weather temperature monthly data (° C) and rainfall (mm) were acquired through the database of Center's of Agency Executives of State of Paraiba Water Management (EFSA). The results for RGS variables, RGH, RFB and K1 over the months of collection were subjected to seasonal comparison, by the application of non-parametric Kruskal-Wallis test (Zar, 1999).The correlation between these variables was also tested by applying the Spearman correlation coefficient. The values of the density of cells in the reproductive lineage, RGS, progesterone and estrogen levels were analyzed for the months by Kruskal-Wallis test. The dependence between climate variables (rainfall and temperature), density of oocytes III and IVwas verified by the simple linear regression test. The values of the density of primary spermatids, secondary and sperm and testosterone levels were analyzed between the months by Kruskal-Wallis test. The dependence between climate variables (rainfall and temperature), the population density of spermatids primary, secondary and sperm were assessed using the simple linear regression test. Only in the months from May to August and November to December records and therefore catches were made. The variation in values of the gonadosomatic (RGS), hepatosomatic (RWF), liposomal (WFB) ratioand Condition Factor (K1) over the months of collection. The population density of the types of oocytes and the demonstrated dependence values to the variation in rainfall and temperature of the region, also determining for the species a short breeding season, concentrated between the months of May and June 2013.The monthly values of the densities of the primary spermatids, secondary spermatids and sperm showed significant variations over the months of collection demonstrating also dependence on the variation in rainfall and temperature of the region. By observing the gamete maturation process as well as the observation of changes in K1 values, RGS, RWL, RFB and the average values of estrogen and progesterone in animals collected, as well as their relationship with climatic variables area demonstrate to L. macrosternum a short reproductive activity, probably concentrated in the months of June, July and December 2013, being consistent to contend that the species has a typical reproductive cycle of seasonal tropical environments such as "potentially continuous". / Aspectos sobre a reprodução animal são altamente diversos e complexos. A existência de uma série de estratégias reprodutiva podem ter evoluído com a finalidade de maximizar o fitness, evitar a predação, concorrência ou simplesmente estão relacionadas às condições ambientais. Em ambientes com características de semi-árido, a temperatura do ar e a umidade relativa relacionadas ao índice pluviométrico determinam o padrão reprodutivo dos anfíbios anuros. Nesta perspectiva características anatômicas e morfológicas do sistema reprodutor de Leptodactylus macrosternum correlacionadas a fatores climáticos, permitem avaliar o aspecto reprodutivo desta espécie ampliando o conhecimento da biologia reprodutiva dos anuros neotropicais. Desta forma, este trabalho objetiva descrever o ciclo reprodutivo anual da espécie L. macrosternum com base nos parâmetros, morfológicos das gônadas e corpos gordurosos, histológicos e morfométricos das gônadas e produção de hormônios sexuais e suas relações com as circunstâncias ambientais na área de estudo. Este trabalho foi realizado na área do Horto Florestal Olho d´água da Bica (HFODB), fragmento de área de caatinga situado no município de Cuité, estado da Paraíba. Os animais foram capturados quinzenalmente, através de coleta ativa, entre os meses de janeiro a dezembro de 2013. Para a determinação da dinâmica reprodutiva e energética da espécie baseado na morfologia das gônadas e corpos gordurosos, os valores de peso corporal (WT), peso das gônadas (WG), peso do fígado (WF) e peso dos corpos gordurosos (WFB) foram utilizados para os cálculos da relação gonadossomática [RGS= WG(100)/WT], hepatossomática [RWF=WH(100)/WT] e lipossomatica [RFB= WFB(100)/WT] e Fator de Condição [K1=W/Lb]. As gônadas foram estes foram fixados em solução Bouin por 24 horas e depois desidratados em série crescente de álcool com inclusão procedida em parafina e secções transversais de 5 μm e corados a posteriori com Hematoxilina e Eosina. A identificação dos tipos celulares ovocitários e quantificação dos tipos celulares ovocitários e testiculares foi procedida em microscópio convencional, trinocular e de bancada, acoplado a um sistema digital de aquisição de imagem. Para a avaliação das possíveis alterações nos aspectos histológicos dos ovários, foi procedida a quantificação dos tipos de ovócitos realizada através do método de densidade populacional numa área teste de 88mm2. A avaliação das possíveis alterações nos aspectos histológicos e morfométricos dos testículos foram realizadas através da análise estereológica para a determinação da densidade das espermátides primária, secundária e espermatozóides calculada através da densidade de volume destes tipos celulares. Para a quantificação da densidade de perfis (QA, espermátides primárias, secundárias e espermatozoides) foram contados respectivamente 14, 5 e 6 campos em uma Área Teste (AT) com 0,044 mm2 para cada animal de cada grupo de estudo. O resultado final (mm2) foi adquirido após utilização da média para cada perfil e aplicação da seguinte fórmula: QA = Σperfis/AT. A análise hormonal foi realizada através da quantificação das dosagens dos níveis de progesterona e estrogênio para as fêmeas através do método ELIZA. Os dados meteorológicos mensais de temperatura (ºC), e pluviosidade (mm) foram adquiridos através do banco de dados do Centro de Agência Executivos de Gestão de Águas do Estado da Paraíba (AESA). Os resultados obtidos para as variáveis RGS, RGH, RFB e K1 ao longo dos meses de coleta foram submetidos à comparação sazonal, pela aplicação do teste não paramétrico de Kruskal-Wallis (Zar, 1999). A correlação existente entre essas variáveis foi também testada pela aplicação do Coeficiente de Correlação de Spearman. Os valores da densidade das células da linhagem reprodutiva, RGS, níveis de progesterona e estrogênio foram analisados relativamente aos meses pelo teste de Kruskal- Wallis. A dependência entre as variáveis climáticas (pluviometria e temperatura), densidade dos ovócitos III e ovócitos IV foi verificada por meio do teste de regressão linear simples. Os valores da densidade das espermátides primária, secundária e espermatozóides foram analisados entre os meses pelo teste Kruskal- Wallis. A dependência entre as variáveis climáticas (pluviometria e temperatura), a densidade da população das espermátides primária, secundária e espermatozóides foram verificadas por meio do teste de Regressão Linear Simples. Apenas entre os meses de maio-agosto e novembro-dezembro foram realizados registros e conseqüentemente capturas. A variação dos valores da Relação Gonadossomática (RGS), Hepatossomática (RWF), Lipossomática (WFB) e Fator de Condição (K1) foi verificada ao longo dos meses de coleta. A densidade populacional dos tipos de ovócitos e os valores da demonstraram dependência com a variação do regime de chuvas e temperatura da região, também determinando para a espécie um curto período reprodutivo, concentrados entre os meses de maio e junho de 3013. Os valores mensais das densidades das espermátides primária, espermátides secundária e espermatozoides apresentaram variações significativas ao longo dos meses de coleta demonstrando também, dependência com a variação do regime de chuvas e temperatura da região. Através da observação do processo de maturação dos gametas, bem como a observação da variação dos valores de K1, RGS, RWL, RFB e dos valores médios de estrógeno e progesterona nos animais coletados, bem como as suas relações com as variáveis climáticas da área demonstram para L. macrosternum uma curta atividade reprodutiva, provavelmente concentrada nos meses de junho, julho e dezembro de 2013 sendo coerente afirmar que a espécie apresenta um ciclo reprodutivo típico de ambientes tropicais sazonais do tipo “potencialmente contínuo”.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:12:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Quimica Eliane S F Alves.pdf: 4161656 bytes, checksum: 36361e76b0e7ad73aea61043645102f1 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / Currently, the emergence of fungi, bacteria and viruses resistant to multiple drugs has stimulated interest in the development of antimicrobial peptides with increased therapeutic potential. They generally have properties of extreme importance as antimicrobial selective toxicity, rapid action, specific mechanisms of action and a broad spectrum of antimicrobial action. Many of these features can be found in peptides isolated from frog skin secretions. The main factor that differentiates antimicrobial peptides from other commonly antibiotics used in the conventional therapy is related to their mechanism of action. The driving force for much of the action of antimicrobial peptides is their ability to lysis cell membranes, rapidly killing a broad spectrum of microorganisms. Accordingly, the conformation of the peptide has a great importance in their interaction with the amphiphilic structure of biological membranes. The determination of the tridimensional structure by Nuclear Magnetic Resonance (NMR) technique allows the identification of the spatial position of each amino acid residue and highlighting those that are important for its action and, therefore, could be modified to increase the antimicrobial activity. The study of the three-dimensional structure of peptides in solution is an advantage of the NMR spectroscopy, since it can simulate the physiological environment, by means of surfactants. In this context, the tridimensional structures of two synthetic peptides: ocellatin-P1G16 (GLLDTLKGAAKNVVGGLASKVMEKL-NH2), isolated from the amphibians Leptodactylus labyrinthicus, and hylin a1 (IFGAILPLALGALKNLIK-NH2), isolated from Hypsiboas Albopunctatus, were proposed by NMR. The amphipathic caracter can be visualized by separation of the helix into two distinct sides, one hydrophobic (nonpolar) and the other hydrophilic (polar). The peptide hylin a1 in presence of SDS-d25 showed helical structure between residues Ile-5 to Ile-17 and the peptide ocellatin-P1G16 in SDS-d25 micelles showed a α-helical structure between residues Leu-3 to Lys-24, both are presented in amphipathic α-helix Finally, the molecular analyses of amphipathicity, electrostatic interaction, polarity and exchange hydrogen/deuterium, corroborate the proposed model, suggesting a model of parallel orientation to the peptide hylin a1 and the peptide ocellatin-P1G16 a parallel orientation, but with the cterminal portion immersed in the micelle SDS-d25 between residues Ser-19 to Leu-25, as observed by analyzing exchange hydrogen/deuterium. These structural characteristics make these peptides promising candidates for the development of a new antimicrobial drug. / Atualmente o surgimento de fungos, bactérias e vírus resistentes a múltiplos fármacos tem estimulado o interesse pelo desenvolvimento de peptídeos antimicrobianos com maior potencial terapêutico. Eles em geral possuem propriedades de extrema importância como um amplo espetro ação antimicrobiana, toxicidade seletiva, ação rápida e mecanismos de ação específicos. Muitas dessas características podem ser encontradas em peptídeos isolados da secreção cutânea de anuros. O principal fator que diferencia peptídeos antimicrobianos de antibióticos utilizados na terapia convencional está relacionado com o seu mecanismo de ação. A força motriz para a ação de grande parte de peptídeos antimicrobianos é sua habilidade em provocar lise em membranas celulares, matando rapidamente um amplo espectro de microorganismos. Nesse sentido, a conformação do peptídeo tem uma grande importância em sua interação com a estrutura anfifílica das membranas biológicas. Nesse contexto, a determinação da estrutura tridimensional por meio da espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) possibilita a identificação da posição espacial de cada resíduo de aminoácido na estrutura terciaria, destacando aqueles que são importantes para a sua ação e que, portanto, poderiam ser modificados para aumentar a atividade antimicrobiana. O estudo da estrutura 3D dos peptídeos em soluçao é uma vantagem da espectroscopia de RMN, pois se consegue simular o ambiente fisiológico por meio de sulfactantes. Nesse contexto, determinou-se através da RMN a estrutura tridimensional de dois peptídeos sintéticos: ocellatina-P1G16 (GLLDTLKGAAKNVVGGLASKVMEKL-NH2) isolado dos anfíbios Leptodactylus labyrinthicus, e o peptídeo hilina a1 (IFGAILPLALGALKNLIKNH2), isolado do anfíbio Hypsiboas albopunctatus. A anfipaticidade da estrutura pode ser observada pela separação da estrutura em duas faces distintas, uma hidrofobica (apolar) e outra hidrofilica (polar). O peptídeo hilina a1, em presença de SDS-d25, apresentou estrutura helicoidal entre os resíduos Ile-5 a Ile-17 e o peptídeo ocellatina-P1G16, em presença de SDS-d25, apresentou estrutura em α-hélice entre os resíduos Leu-3 a Lys-24, ambos em α-hélice anfipática. Por fim, as análises moleculares de anfipaticidade, interação eletrostática, polaridade e troca H2O/D2O, apontaram a mesma face de interação dos peptídeos com a membrana, propondo um modelo de orientação paralela para o peptídeo hilina a1 e para o peptídeo ocellatina- P1G16 uma orientação paralela, porém com a porção c-terminal mergulhada na micela de SDS-d25 entre os resíduos Ser-19 e Leu-25. Tais características estruturais tornam esses peptídeos candidatos promissores para o desenvolvimento de um novo fármaco antimicrobiano.

A variety of aquatic habitats with different levels of potential predators are available to larval amphibians in Central Amazon rainforest. The anuran community at Reserva Florestal Adolfo Ducke, 25 km east of Manaus, Amazonas, Brasil, was studied to determine which species have eggs and/or larvae in water and how those larvae are distributed in time and space. The temporal and spatial distribution of potential predators as well as abiotic characteristics of these waterbodies were determined simultaneously to test for correlations with the distribution of tadpoles. The distribution of tadpoles was strongly related to fish predation pressure. Several tadpole species were found only in waterbodies with high fish abundance and thus have the ability to survive with fish. Most of these tadpoles were found to be unpalatable in controlled experiments. Unpalatability is the major adaptation allowing the coexistence of tadpoles and fish and is thus a major factor affecting tadpole community composition in this system. Controlled experiments showed that fish do not eat anuran eggs while the tadpoles of Leptodacrylus knudseni and Osteocephalus taurinus ate all types of eggs offered. The percentage of anurans with aquatic oviposition was positively related to fish abundance and negatively related to the occurrence of species of tadpole that ate eggs in experiments. These findings suggest that the present patterns of anuran distribution represent an evolutionary response to predation on the eggs and larvae. Contrary to the models of Heyer et al. (1975) and Wilbur (1984), desiccation and predation-pressure were not the major factors affecting species richness within waterbodies of the RFAD rainforest. In support of the model of Heyer et al. (1975), anuran species richness was correlated with the size of the waterbody. This could be because the size of the waterbody is related to increased complexity and availability of microhabitats. The range of volumes of waterbodies was also found to directly affect species richness of the RFAD community. While predation appeared to have a limited effect on species richness of individual ponds, predation-pressure was found to have a major influence on species composition. Anuran eggs and larvae survived with specific predators by possessing particular survival-traits (e.g. unpalatability and oviposition strategies). However, survival-traits were not effective against all predators in all habitats. The distribution of different predators among ponds provides a patchy environment on a local scale (i.e. within ponds). When combined with the variety of survival-traits exhibited by the anuran species, this spatial patchiness in predation contributes towards species richness within the anuran community of the RFAD rainforest.

Orientador: Reinaldo José da Silva / Abstract: Species differ in their environmental preferences, leading to processes in the community based in gradient variations that decrease as the distance increases. This process diminishes faster in heterogeneous landscapes, especially in solid areas of bands like South American open diagonally, that is characterized by horizontal stratification environments, presenting a landscape mosaic that extends from the Caatinga to the regions of Chaco, through the Pantanal. The Cerrado, Pantanal and Caatinga are characterized by great diversity of vertebrate anuran species, including the host Leptodactylus fuscus. These regions are inserted in the open diagonal South American. The composition and the relationship between parasite-host infra-populations of helminth species associated with L. fuscus specimens were described in three different regions of Brazil. Amphibians are found in a variety of habitats and exhibit different reproductive and behavioral patterns, considered good models to study parasitology. The study evaluated if there is a decay on the similarity between geographically distant communities and concluded that these two variables are positively associated. This study assessed 155 hosts and found a total of 16 taxa: Aplectana membranosa, Aplectana pintoi, Schankiana formosula, Cosmocerca podicipinus, Oswaldocruzia lopesi, Oxyascaris necopinus, Glypthelmins linguatula, Catadiscus cf. marinholutzi, Physaloptera sp., Physalopteroides sp., Rhabdias sp., metacercariae (Diplostomid... (Complete abstract click electronic access below) / Resumo: As espécies diferem em suas preferências ambientais, isto conduz a processos na comunidade baseados em variações de gradiente que decrescem com o aumento da distância, sobretudo em faixas de áreas contínuas como a diagonal aberta sul-americana, apresentando um mosaico paisagístico que se estende desde a Caatinga até as regiões do Chaco. O Cerrado, Pantanal e Caatinga são caracterizados pela grande diversidade de espécies de vertebrados anuros, incluindo o hospedeiro Leptodactylus fuscus, e estas regiões estão inseridas na diagonal aberta Sul Americana. Foi descrita a composição e a relação entre parasita-hospedeiro de infra-populações das espécies de helmintos associados com espécimes do Leptodactylus fuscus em três regiões diferentes do Brasil. Os anfíbios são encontrados em uma variedade de habitats e exibem diversos padrões reprodutivos e comportamentais, por isso são considerados bons modelos de estudo para a parasitologia. O trabalho avaliou se ha um decaimento na similaridade entre comunidades geograficamente distantes, e concluiu que estas duas variáveis se associam positivamente. Foram avaliados 155 espécimes de hospedeiros totalizando 16 taxas de helmintos, Aplectana membranosa, Aplectana pintoi, Schankiana formosula, Cosmocerca podicipinus, Oswaldocruzia lopesi, Oxyascaris necopinus, Glypthelmins linguatula, Catadiscus cf. marinholutzi, Physaloptera sp., Physalopteroides sp., Rhabdias sp., metacercárias da Família Diplostomidae, nematodas da Família Cosmocercidae, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Historical Ecology unifies concepts in ecology, behavior and phylogeny. To determine the evolutionary context of reproductive characters within the Leptodactylus pentadactylus species group and also to explore questions such as predation and habitat selection, I described the reproductive ecology of two key species, L. labyrinthicus and L. syphax) (Anura, Leptodactylidae). Field observations and experiments (2004 2008) were carried out in areas of Cerrado in southeastern and central Brazil. I characterized the oviposition sites of the two species by comparing the ecological conditions of the egglaying sites with those of nearby random points. Experiments with tadpoles were also conducted to describe their diel pattern of activity, hiding behaviour and level of susceptibility to predation by free-ranging birds. I determined whether L. syphax clutches have trophic eggs (tadpole food) by quantifying the proportion of eggs/embryos in recent nests. I also tested whether tadpoles of both species could prey on eggs of heterospecific foam nests. Leptodactylus labyrinthicus (140 mm SVL) breeds in temporary or permanent pools in swamps while L. syphax (70 mm) occurs in rocky and seasonal streams. Both species lay their eggs embedded in a white foam nest built by the amplectant pair; males beat the female cloacal fluids with both legs moving from side to side. Their foam nests were found beside the water, usually in basins excavated by the adults. Both species probably do not distribute their nests randomly across the environment, but actively choose micro-habitats with particular conditions (e.g., sheltered, close to water) that may provide relative protection for eggs/nestling tadpoles against the main risks present in their breeding sites (e.g., drying, maggot s infestation). Oviposition site selection including flexible strategies on the choice of micro-habitats in response to spatial and temporal variations has been reported for several frog species. In contrast to L. labyrinthicus, the clutches of L. syphax do not have trophic eggs, because most (90%) of the eggs develop into tadpoles. In the experiments, birds (leaf-scrapers) ate all exposed tadpoles of L. labyrinthicus, but no tadpole in the treatment where they could hide. Hence, the use of diurnal shelters and nocturnal habits may protect the tadpoles from such visual predators. Tadpoles of L. labyrinthicus can prey on eggs from heterospecific foam nests, but those of L. syphax do not. If the L. pentadactylus species cluster is monophyletic, excavated basins and foam-beating in lateral motions may be possible derived traits that arose in the common ancestor of the whole group. However, large adults, carnivorous tadpoles, and trophic eggs appear to be congruent synapomorphies of a less inclusive group. Based on this possible association of derived traits, the major reproductive features (e.g., trophic eggs, tadpole morphology and behaviour) of species of the L. pentadactylus group could be inferred largely from the body size (SVL) of adults. / A Ecologia Histórica unifica conceitos em ecologia, comportamento e filogenia. Na presente tese, descrevi a ecologia reprodutiva de duas espécies-chave, L. labyrinthicus e L. syphax (Anura, Leptodactylidae), a fim de determinar o contexto evolutivo de caracteres reprodutivos no grupo de Leptodactylus pentadactylus e também explorar questões como a predação e seleção de hábitat. As observações de campo e experimentais (2004 2008) foram realizadas em áreas de Cerrado nas regiões central e sudeste do Brasil. As condições ecológicas dos sítios de oviposição foram caracterizadas em relação ao entorno (pontos aleatórios). Conduzi experimentos com girinos para descrever o horário de atividade, comportamento de refúgio e susceptibilidade à predação por aves. Para determinar se desovas de L. syphax possuem ovos tróficos (alimento para girinos), analisei a proporção de ovos/embriões em ninhos recentes. Testei se girinos de ambas as espécies conseguem predar ovos de ninhos de espuma heteroespecíficos. Leptodactylus labyrinthicus (140 mm tamanho) reproduz em poças temporárias ou permanentes em ambientes brejosos enquanto que L. syphax (70 mm) utiliza regatos rochosos e sazonais. Ambas as espécies depositam seus ovos em ninho de espuma formado pelo casal durante o amplexo; os machos batem a espuma com suas pernas/pés executando movimentos laterais na região cloacal da fêmea. Os ninhos foram encontrados próximos à água, geralmente em bacias escavadas pelos adultos. Essas espécies não distribuem seus ninhos aleatoriamente no ambiente e selecionam sítios de oviposição cujas condições particulares (e.g., em abrigos, próximos à água) provavelmente conferem proteção relativa contra os principais fatores de mortalidade de seus ovos/embriões (e.g., dessecação, predação por larvas de moscas). A seleção de micro-ambientes de desova envolvendo estratégias moduláveis em resposta a variações espaciais e temporais tem sido reportada para várias espécies de anuros em contextos ecológicos diversos. Em contraste a L. labyrinthicus, as desovas de L. syphax não possuem ovos tróficos, pois a maioria (90%) dos ovos se desenvolve. Nos experimentos, aves (sabiá-poca) predaram girinos expostos de L. labyrinthicus, mas nenhum girino foi consumido no tratamento em que eles podiam se esconder. Portanto, o hábito noturno e a utilização de refúgios diurnos devem proteger os girinos de tais predadores. Os girinos de L. labyrinthicus são capazes de predar ovos de ninhos de espuma heteroespecíficos, mas os de L. syphax não. Se o grupo de L. pentadactylus é monofilético, bacias escavadas e batimento da espuma em movimentos laterais podem ser possíveis derivações exclusivas do grupo. No entanto, adultos grandes, girinos carnívoros e desovas com ovos tróficos parecem representar sinapomorfias correlatas (evolução associada) de um subgrupo restrito. Com base nessa associação de caracteres, será possível predizer aspectos-chave da ecologia reprodutiva (e.g., ovos tróficos, girinos oófagos) das 19 espécies do grupo de L. pentadactylus com base no tamanho corporal (CRC) de adultos. / Doutor em Ecologia e Conservação de Recursos Naturais

The amphibian decline phenomenon now involves in excess of a third of the roughly 6000 species of amphibians on the planet. The problems that drive the declines are diverse with no end in sight. The Amphibian Conservation Action Plan (ACAP) aims to stem amphibian decline through four recommended actions by researchers and conservation biologists: (1) Expand scientific understanding of amphibian declines and extinctions; (2) continue to document amphibian diversity and ecology and how they are changing; (3) develop and implement long-term conservation programs; (4) prepare emergency response actions for eminent crises. This Dissertation focused on two of those recommendations: expanding scientific understanding of amphibian declines and extinctions and continuing to document amphibian diversity and ecology and how they are changing. The first chapter is a review of the amphibian decline phenomenon. The second, third, and fourth chapters focus on expanding scientific understanding of amphibian diversity and ecology with the description of a formerly unknown species (chapter 2), and ecological papers on two poorly known species (chapters 3 and 4). Chapter five focuses on the first ACAP recommendation in improving scientific understanding of the causes behind amphibian decline. The chapter is an experimental examination of two related species and their developmental reactions to common heavy metal contaminants. The goal of this Dissertation is to contribute toward the general amphibian knowledge base relative to the recommendations of ACAP.

This thesis is composed of two parts - research part, focused on field research of occurence and abundance of the Stone Crayfish and the Noble Crayfish in the basin of Zákolanský stream, and a pedagogical part, project Crayfish in the Czech Republic and their protection, aimed for grammar school students. The literature outline summarizes contemporary knowledge about all five species of crayfish in the Czech Republic. Our native species are the Stone Crayfish (Austropotamobius torrentium) and Noble Crayfish (Astacus astacus). The non-native are Narrow-clawed Crayfish (Astacus leptodactylus), Spiny-cheek Crayfish (Orconectes limosus) and Signal Crayfish (Pacifastacus leniusculus). Aside from the chapters concerning the particular species and their determination, the literature outline also contains general information about the life and endangerment of crayfish. I have conducted the field research from April to September 2009. I also noted and evaluated the environmental conditions of the crayfish habitats. Based on the adjusted AOPK ČR methodology, I selected eight 100-meter long brook-sections of the Europe-important locality of Zákolanský stream, with the previously confirmed occurrence of crayfish. From the eight sections, I found crayfish only in three. All the captured specimens were of the...