Orientador: Mirela Tinucci Costa / Coorientador: Jose Antonio Sanches / Banca: Silvia Regina Ricci Lucas / Banca: Marcela Marcondes Pinto Rodrigues / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Banca: Sabryna Gouveia Calazans / Resumo: O linfoma cutâneo (LC) em cães é uma doença que se caracteriza pela proliferação clonal de linfócitos atípicos na pele (MILLER et al., 2013). É um linfoma não-Hodgkin, formado por um grupo de doenças neoplásicas malignas de linfócitos T e B e células Natural Killer (NK), cuja primeira manifestação clínica é a presença de lesões cutâneas, sem existir lesão extra cutâneas no momento do diagnóstico (RUEDA; CORTES, 2008). A apresentação clínica é inespecífica e pode mimetizar muitas dermatites (FONTAINE et al., 2010). Nas fases inicias da doença torna-se difícil diferenciar a condição neoplásica de quadro inflamatório linfocítico cutâneo (MURPHY; OLIVRY 2000). Descrita pela primeira vez em 1972 (KELLY et al., 1972), e para muitos autores a doença rara e de etiologia desconhecida (FONTAINE et al., 2009; WITHROW et al., 2013). Diversos estudos mencionaram novas variedades e formas de apresentação do LC na espécie canina baseadas principalmente nos resultados de reações imuno-histoquímicas, comportamento clínico da neoplasia e nas frequentes mudanças da classificação desta doença na espécie humana, que tem levado na classificação em novas variantes de LC (WILLEMZE et al., 2005; DE BOSSCHERE; DECLERCQ, 2008; AFFOLTER et al., 2009; FONTAINE et al., 2009; MILLER et al., 2013; MOORE et al., 2012). Nas últimas três décadas, a classificação morfológica e imunofenotípica do LC em medicina veterinária baseou-se nos critérios de classificação utilizados em humanos (VALLI et al., 2011). O o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cutaneous lymphoma (LC) in dogs is a disease characterized by the clonal proliferation of atypical lymphocytes in the skin (Miller et al., 2013). It is a non-Hodgkin's lymphoma, consisting of a group of malignant neoplastic diseases of T and B lymphocytes and Natural Killer (NK) cells, whose first clinical manifestation is the presence of cutaneous lesions, with no extra-cutaneous lesion at the time of diagnosis (WHEEL . The clinical presentation is non-specific and may mimic many dermatitis (FONTAINE et al., 2010). In the early stages of the disease, it is difficult to differentiate the neoplastic condition of cutaneous lymphocytic inflammatory disease (MURPHY; OLIVRY 2000). It was first described in 1972 (KELLY et al., 1972), and for many authors, the rare disease of unknown etiology (FONTAINE et al., 2009, WITHROW et al., 2013). Several studies have mentioned new varieties and forms of LC presentation in the canine species based mainly on the results of immunohistochemical reactions, clinical behavior of the neoplasia and the frequent changes in the classification of this disease in the human species, which has led to classification in new variants of LC (Muller et al., 2009), and in the literature on the use of this method (Macker et al., 2009). In the last three decades, the morphological and immunophenotypic classification of CL in veterinary medicine was based on the classification criteria used in humans (VALLI et al., 2011). The objective of this review is to define the current variants, types and subtypes of LC in dogs and establish the main similarities and differences with the existing classification in the human species. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-03-19Bitstream added on 2014-06-13T18:45:08Z : No. of bitstreams: 1 suzano_smc_dr_botfmvz.pdf: 792535 bytes, checksum: 341e0556c5295f46fbb2bb9df3f5d9c3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O estudo dos linfomas caninos além de abordar a classificação morfológica e imunofenotípica necessita ser ampliado para que se tenha a avaliação da cinética celular. Esta verificação só pode ser feita com segurança quando são avaliados não só os parâmetros que indicam a taxa de proliferação celular, mas também aqueles relacionados a apoptose, bem como a expressão de proteínas responsáveis por este evento. No homem, muitas vezes a determinação da taxa de proliferação e os marcadores de apoptose têm influência preponderante no prognóstico e no tratamento destas neoplasias e o mesmo deve ocorrer nos linfomas caninos, uma vez que os linfomas nesta duas espécies possuem comportamento biológico muito semelhante. Nesta pesquisa, foram utilizados 40 casos de linfomas caninos. Estes foram classificados de acordo com as classificações de Kiel e Working Formulation (WF), e realizada a imunofenotipagem utilizando marcadores para linfócito T (CD3) e para linfócitos B (CD79a). A proliferação celular foi avaliada pelos métodos de contagem dos AgNORs e células imunopositivas para Ki-67 (MIB-1) e o índice apoptótico foi avaliado pela caspase-3. Foi verificada também a expressão do p-53 mutante. De acordo com as classificações de Kiel e WF os linfomas de alto grau foram os mais freqüentes, a imunofenotipagem mostrou a mesma freqüência de linfomas T e B. Quando avaliada a proliferação celular, houve diferença significativa entre os linfomas de alto e baixo grau tanto pelo método do AgNOR como pela expressão do KI-67 (MIB-1), mas sem significância em relação ao imunofenótipo. Entre as neoplasias de alto grau de malignidade a média de número de NORs por núcleo de célula neoplásica foi de 1,37 0,32, e nos casos de baixo grau de 0,98 0,36. De acordo com o KI-67 a média... / Lymphoma studies deals with morphological classification and immunophenotypic features, but they have to be amplified for cellular kinetics evaluation. This evaluation can only be safely made, when not only proliferative index are evaluated, but also when apoptosis and some proteins involved in this processes are studied. In men the proliferative index and apoptosis markers have, most of the time, important influence in neoplasia prognosis and treatment, and the same thing should happen with canine lymphoma, once lymphoma in humans and dogs share similarities in biological behavior. In this work it was used 40 canine lymphomas were classified according to Kiel and Working Formulation (WF) methods and immunophenotype was achieved with T lymphocyte marker (CD3) and B lymphocyte marked (CD79a). Cellular proliferation was evaluated by AgNORs and Ki-67 (MIB-1) and apoptotic index by caspase-3. Mutant p-53 expression was also verified. According to Kiel and WF classification system, high grade lymphomas were more frequent and T and B lymphoma showed the same frequency. When cellular proliferation was evaluated, there was a significant difference between high grade and low grade lymphomas by AgNOR and Ki-67 (MIB-1) methods, but did not differ when comparing immunophenotype. Among high grade malignancy lymphomas the NORs medium number per cell nucleoli was 1.37 0.32 and in low grade was 0.98 0.36. Concerning Ki-67 the positive cellular percentual was 43.19% 19.01 e 14.09% 11.74 in high and low grade, respectively. Apoptotic index and p53 expression did not show differences between high and low grade lymphoma, neither when comparing immunophenotype.

Orientador: Julio Lopes Sequeira / Banca: Noeme Souza Rocha / Banca: Renée Laufer Amorim / Banca: Ana Paula F. Bracarense / Banca: Adriana Wanderley Pinho Pessoa / Resumo: O estudo dos linfomas caninos além de abordar a classificação morfológica e imunofenotípica necessita ser ampliado para que se tenha a avaliação da cinética celular. Esta verificação só pode ser feita com segurança quando são avaliados não só os parâmetros que indicam a taxa de proliferação celular, mas também aqueles relacionados a apoptose, bem como a expressão de proteínas responsáveis por este evento. No homem, muitas vezes a determinação da taxa de proliferação e os marcadores de apoptose têm influência preponderante no prognóstico e no tratamento destas neoplasias e o mesmo deve ocorrer nos linfomas caninos, uma vez que os linfomas nesta duas espécies possuem comportamento biológico muito semelhante. Nesta pesquisa, foram utilizados 40 casos de linfomas caninos. Estes foram classificados de acordo com as classificações de Kiel e Working Formulation (WF), e realizada a imunofenotipagem utilizando marcadores para linfócito T (CD3) e para linfócitos B (CD79a). A proliferação celular foi avaliada pelos métodos de contagem dos AgNORs e células imunopositivas para Ki-67 (MIB-1) e o índice apoptótico foi avaliado pela caspase-3. Foi verificada também a expressão do p-53 mutante. De acordo com as classificações de Kiel e WF os linfomas de alto grau foram os mais freqüentes, a imunofenotipagem mostrou a mesma freqüência de linfomas T e B. Quando avaliada a proliferação celular, houve diferença significativa entre os linfomas de alto e baixo grau tanto pelo método do AgNOR como pela expressão do KI-67 (MIB-1), mas sem significância em relação ao imunofenótipo. Entre as neoplasias de alto grau de malignidade a média de número de NORs por núcleo de célula neoplásica foi de 1,37 0,32, e nos casos de baixo grau de 0,98 0,36. De acordo com o KI-67 a média... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Lymphoma studies deals with morphological classification and immunophenotypic features, but they have to be amplified for cellular kinetics evaluation. This evaluation can only be safely made, when not only proliferative index are evaluated, but also when apoptosis and some proteins involved in this processes are studied. In men the proliferative index and apoptosis markers have, most of the time, important influence in neoplasia prognosis and treatment, and the same thing should happen with canine lymphoma, once lymphoma in humans and dogs share similarities in biological behavior. In this work it was used 40 canine lymphomas were classified according to Kiel and Working Formulation (WF) methods and immunophenotype was achieved with T lymphocyte marker (CD3) and B lymphocyte marked (CD79a). Cellular proliferation was evaluated by AgNORs and Ki-67 (MIB-1) and apoptotic index by caspase-3. Mutant p-53 expression was also verified. According to Kiel and WF classification system, high grade lymphomas were more frequent and T and B lymphoma showed the same frequency. When cellular proliferation was evaluated, there was a significant difference between high grade and low grade lymphomas by AgNOR and Ki-67 (MIB-1) methods, but did not differ when comparing immunophenotype. Among high grade malignancy lymphomas the NORs medium number per cell nucleoli was 1.37 0.32 and in low grade was 0.98 0.36. Concerning Ki-67 the positive cellular percentual was 43.19% 19.01 e 14.09% 11.74 in high and low grade, respectively. Apoptotic index and p53 expression did not show differences between high and low grade lymphoma, neither when comparing immunophenotype. / Doutor

Orientador : Carmino Antonio de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T17:51:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_RenataBaldissera_M.pdf: 16871013 bytes, checksum: 3ffd8ef2534e4a4cb6e6dae0d944d6a6 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Uma grande proporção dos pacientes com Doença de Hodgkin e Linfoma não-Hodgkin recidivarão ou não atingirão remissão completa com quünioterapia inicial. O manuseio destes pacientes é usualmente desapontador e a taxa de sobrevida a longo prazo, é inferior a 10%. Resultados de várias séries têm demonstrado que, terapia de alta dose seguida por transplante autólogo de medula óssea ou céluas progenitoras periféricas, pode conseguir melhores taxas de sobrevida livre de doença, a longo prazo, em uma proporção substancial de pacientes. Alta dose de CY, seguida por fatores de crescimento hematopoiéticos, é o regime mais amplamente utilizado para mobilização e coleta de células progenitoras periféricas. O principal objetivo deste estudo prospectivo, foi demonstrar o papel da alta dose de ciclofosfamida em reduzir o crescimento tumoral e promover eficiente mobilização de células CD34+. Além disso, determinar a efetividade da alta dose de CY + VP-16 (+/-MfX na DH), seguida por autotransplante, como terapia de salvamento em pacientes portadores de doença recidivada ou persistente. À partir de 1997 a 2000, 35 pacientes com mediana de idade de 33 anos, portadores de LNH (60%) ou DH (40%) recidivados ou refratários, submeteram-se à tratamento com terapia de escalonamento de dose (CY+ VP-16+/- MfX), seguido por transplante autólogo de células progenitoras periféricas. De acordo com a intenção de tratar, 35 pacientes, foram evoluídos. A mediana global de seguimento foi de 574 dias. 33 pacientes (94.2%) foram submetidos à megaterapia seqüencial e autotransplante com CPP. Estes, receberam uma mediana de 6.42xl08/kg de células CD34+. Os pacientes quimiossensíveis (n=25) e quimionesistentes (n=lO), apresentaram taxas de sobrevida global de 96% e 15%, respectivamente (P=O.0005), à ciclofosfamida. As taxas de SG, ao autotransplante, foram de 92% para os pacientes quimiossensíveis, e 0%, para os pacientes quimiorresistentes (P=O.OO05). Mortalidade relacionada à ciclofosfamida foi de 6.5%. A mortalidade relacionada ao autotransplante foi de 6.00,10. Os resultados são semelhantes e comparam-se favoravelmente à literatura. Alta dose de CY, seguida por megaterapia seqüencial e autotransplante, mostrou ser efetiva e segura, como terapêutica de salvamento em pacientes portadores de LNH a DH, agressivos, com aceitável mortalidade relacionada ao procedimento / Abstract: A substantial proportion of patients with Hodgkjn's Disease (HD) and Non-Hodgkin Lymphoma (NHL) will relapsed or fail to attain a complete remission with initiaI chemotherapy. The management of patients with refractory or relapsing HD or NID is usually disappoing and the long term survival rate is less than 10% .Results of several series demonstrated that High dose therapy followed by ABMT or PBSCT cam yield long term disease-free survival in a substantial proportion of patients, with low transplant-related mortality.High-Dose Cyclophosphamide (HDCY) followed by growth factors is the most widely used chemotherapy for the collection of PBPC. The aim this study, a CIinical Trial non-Randomised Prospective analysis, was to demonstrate the role of High-dose Cyclophospbamide (CY) in reducing tumour burden, promoting efficient mobilisation of CD34+ and also determining the effectiveness of HDCY followed by higb dose of VP-16 and MTX (HD) with PBPC autografting as salvage treatment for these patients. From 1997 to 2000, 35 patients with median age of 33 years (15-65), affected by aggressive NHL (60%) or by IHD (40%)persistent or relapsed disease, were enrolled and treated using high dose escalation (HDCY plus IHDVP-16 plus/minus HDMTX) followed by autologous Peripheral Blood Progenitor Cell Transplantation. According to "Intention to Treat" basis, 35 patients affected by malignant lymphomas were evaluated. The Overall median follow-up was 574 days. 33 patients (94.2%) underwent PBPC autografting and received a median of 6.42 xl08 /Kg (1.0729.3) of CD34+ cells. Chemosensitive patients (n=25) and chemoresistant patients (n=10) at HDCY presented Overall Survival of 96% and 15%, respectively (P=0,0005). Overall Survival was 92% for chemosensitive and 0% for still chemoresistant patients before Transplantation (P=0,0005). Mortality was 6.0% (two patients) related to HDCY and two (6.5%) transplant-related. These results are similar to those reported in the literature. IHDCY + VP-I6 and MTX (HD) followed by autologous PBPC showed to be effective and safe as salvage treatment in chemosensitive patients affected by aggressive NHL and HD, with acceptable mortality related-sequential treatment / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Sara Terezinha Olalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T16:34:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_MarcosDamiaoAlvesda_M.pdf: 4696529 bytes, checksum: 3703429ef804fa67a149fa26352e47ed (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Os Linfomas Não Hodgkin (LNH) são neoplasias originárias de linfócitos B e/ou T. A classificação histológica dessas doenças é complexa, sendo que há uma tendência em se agrupar os diferentes subtipos nas categorias de baixo, intermediário ou alto grau de malignidade segundo critérios clínicos. A proteína BCL-2 foi descoberta a partir de linfomas foliculares (baixo grau de malignidade) que apresentam a translocação t(14;I8) a qual aproxima seqüências promotoras do gene de cadeias pesadas de imunoglobulinas (1gH) ao gene de bcl-2 (B-Cell Lymphoma 2), tornando-a superexpressa nesses tumores. A proteína BCL-2 está envolvida na resistência a diversos agentes quimioterápicos e na regulação de apoptose. Sabe-se que células de vida longa em nosso organismo, como os linfócitos B de memória, neurônios, células que margeiam membranas basais, etc, apresentam bcl-2 superexpresso. Acredita-se que falhas no sistema de recombinação homóloga, no período em que a expressão de bcl-2 deve ser ativada em linfócitos de memória, sejam responsáveis tanto pela desregulação da apoptose e ciclo celular nos LNH, e ainda um passo inicial para a tumorigênese. Nós analisamos a expressão de algumas proteínas da família BCL-2, pró (BAX e BAK) ou anti-apoptóticas (BCL-2 e MCL-I) por imunohistoquímica em lâminas de tecido tumoral obtidas de uma série histórica de 128 casos de LNH atendidos no Hospital de Clínicas da UNICAMP com graus de malignidade baixo, intermediário e alto. Nossos resultados mostraram expressão da proteína BCL-2 em cerca de 55% dos casos nos LNH de alto grau, 85% nos LNH de grau intermediário e 90% nos LNH de baixo grau de malignidade. Houve uma maior percentagem de células positivas para a proteína BAX, sendo 94% para os casos de LNH de alto grau, 100% nos LNH de grau intermediário e 74% nos casos de LNH de baixo grau de malignidade. Para a proteína BA.K, observamos 88% de positividade para os casos de LNH de alto grau, 75% de positividade para os casos de LNH de grau intermediário e 95% nos LNH de baixo grau. A proteína MCL-1 apresentou os mais altos níveis de detecção, sendo que de todos os casos estudados, somente 3 casos de LNH de alto grau de malignidade foram negativos. Neste trabalho observamos a correlação entre os níveis de expressão das proteínas MCL-l e BAX (p=0,0028) e uma tendência de correlação entre BAX e BAK (p=0,063) nos LNH de alto grau de malignidade. A expressão de BCL-2 foi significativamente maior nos LNH de graus baixo e intermediário quando comparados aos LNH de alto grau de malignidade (x2=16,294 e p=0,001). A proteína BAX apresentou níveis de expressão semelhantes nos LNH de graus intermediário e alto, mas significativamente menor nos LNH de baixo grau de malignidade (p=0,02). Os dados inéditos deste trabalho, como a expressão aumentada de BAK e MCL-l em LNH, associados a dados já descritos na literatura como o aumento de expressão de BCL-2 e BAX, sugerem que a expressão aumentada de proteínas reguladoras do apoptose devem estar implicadas na etiopatogenia e fisiopatologia dessas neoplasias. Estudos de regulação gênica dessas proteínas poderão indicar diferenças entre elementos responsivos desses homólogos, relacionados ao controle da apoptose / Abstract: Non Hodgkin's Lymphomas (NHL) are neoplasm originated from B and/or T lymphocytes. These lymphomas can be classified into categories named low, intermediate or high malignant risk, according to clinical criteria. The BCL-2 protein was described in follicular lymphomas (low grade of malignancy) that harbor the t(14;18) translocation. This translocation brings the promoter sequences from immunoglobulin Heavy (IgH) chains gene near to bcl-2 (B-Cell Lymphoma 2) gene, tuning it over expressed in these tumours. The BCL-2 protein is important in the resistance to many chemotherapeutic agents and regulation of apoptotic mechanism. It has been observed that long lived cells as memory B cells, neurons, stem-cells at the edge of basement membranes, etc, over express bcl-2. Non Hodgkin's Lymphomas present alterations on apoptosis and cell cycle, probably due to defects in the homologous recombination system, by the time bcl-2 is expressed in memory cells. This could be an initial step to tumor genesis. The aim of our study was to analise by immunohistochemical techniques the distribution of pro (BAX and BAK) and anti (BCL-2 and MCL-1) apoptotic proteins of the BCL-2's family on tissue slides obtained from 128 cases of NHL seen at Hospital de Clínicas UNICAMP. We found BCL-2 protein expression in 55% of the NHL high grade, 85% of the NHL intermediate grade and 90% of the NHL low grade. BAX protein was highly expressed in alI categories: 94% at high grade NHL, 100% of the intermediate grade and 74% of the low grade NHL. BAK protein showed expression in 88% of the NHL high grade, 75% in NHL intermediate grade and 95% in NHL low grade. MCL-1 protein had the highest levels of expression, being positive in alI cases studied, except three cases of NHL high grade. In this study, we found correlation between MCL-1 and BAX expression levels (p=0,0028) and a tendency of correlation between BAX and BAK (p=0,063) in high-grade NHL tumours. BCL-2 expression was significant1y higher in low and intermediate grade malignancy tumours compared to expression levels of this protein in NHL of high-grade malignancy (x2=16,294 and p=0,001). BAX protein expression levels were similar in NHL of intermediate and high-grade tumours but significant1y lower in low grade malignancy tumours (p=0,02). The inedited data of this study as high BAR. and MCL-I expression in NHL, associated to the already published high expression of BAX in high and intermediate grade NHL and BCL-2 in low and intermediate grades NHL, in agreement with the literature, suggest that apoptotic regulating proteins may be implicated in etiopathogeny and psychopathology in these diseases. Studies on genetic regulation of these proteins may indicate differences between homologous responsive elements altering apoptosis control / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Jose Vasallo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T18:25:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lira_MarianaMontenegrodeMelo_D.pdf: 3297423 bytes, checksum: 565895365a98b6df746479d5e2d8074c (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A micose fungóide (MF) corresponde a cerca de 50% de todos os linfomas primários da pele. Trata-se de uma neoplasia epidermotrópica constituída por linfócitos atípicos, com fenótipo predominantemente de linfócito T CD4+. O diagnóstico da MF é freqüentemente muito difícil, tanto pela sobreposição com dermatoses benignas, como pela discordância entre achados clínicos e histopatológicos. Embora a certeza de malignidade repouse na observação do comportamento clínico, parâmetros histopatológicos, morfométricos e imunofenotípicos têm sido utilizados para indicar malignidade. Em estudos prévios realizados pelo nosso grupo, não confirmamos os achados de alguns autores, que enfatizam que níveis elevados da relação CD4:CD8 sugerem malignidade. Entretanto, tivemos a oportunidade de comprovar a utilidade da perda da expressão do marcador linfóide T, CD7, no diagnóstico das lesões linfomatosas. Neste último estudo, ficou-nos a impressão de que a ausência de expressão do CD7 era mais evidente em células linfóides mais volumosas e atípicas. Dando continuidade a esta linha de investigação, os objetivos do presente trabalho são os de determinar o papel da avaliação morfométrica em tecidos incluídos em parafina e submetidos à reação imunoistoquímica com CD3 na diferenciação das infiltrações linfocitárias cutâneas e determinar se existe correlação entre o aumento da área nuclear e o percentual de expressão do CD7 nestas lesões. Foram estudados 30 casos de MF e 11 casos de infiltrados linfóides cutâneos benignos. Imagens de 100 células positivas de cada caso foram capturadas e analisadas utilizando o sistema de análise de imagens Imagelab®, sendo mensurados perímetro (P), área (A) e diâmetros (D) nucleares e calculado o índice de contorno nuclear (ICN= P/?A). Houve diferença estatisticamente significante entre as médias de todas as variáveis (p< 0,05), sendo A a variável com maior poder de discriminação entre os grupos (r² = 80,82%). E observou-se uma tendência de correlação entre a perda de expressão de CD7 e o aumento da área nuclear. Ficou, assim, demonstrado que a avaliação de parâmetros nucleares de células previamente identificadas como linfócitos T através da imunocoloração para o CD3 permite a diferenciação morfométrica entre MF e infiltrações linfocitárias benignas. Este método adiciona critérios objetivos para auxiliar no diagnóstico da MF / Abstract: Mycosis fungoides (MF) represents the most common skin lymphoid neoplasm. In initial stages, differential diagnosis of MF with other benign dermal lymphoid infiltrates (BDLI) may be impossible on morphological basis alone. In previous studies conducted by our group, only loss of immunoexpression of CD7 in MF proved to be of diagnostic help, but not the ratio between immunoexpression of CD4 and CD8. In the present study, 30 cases of MF and 11 cases of BDLI were analyzed, in order to compare morphometric parameters, which could be of diagnostic aid. As CD7 is frequently deleted in MF, immunohistochemical detection of T-cells was made using an antibody to CD3. Images of 100 CD3-positive cells per case in both groups were captured and analyzed using a simple computer program (Imagelab®) for nuclear perimeter (P), area (A), diameters (D) and nuclear contour index (NCI). All parameters showed statistically significant higher values for MF. Area was the variable with the strongest discriminating power between the two groups of patients. There was a tendency to a correlation between the loss of expression of CD7 and increase in nuclear area. Even if morphologic evaluation is not accurate to distinguish benign versus malignant dermal lymphoid infiltrates, due to the variability of size and shape of these cells, a more sensitive method promptly shows this difference. Our results suggest that morphometry of CD3-positive lymphoid cells may add valuable information in the differential diagnosis of MF and benign dermatoses / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Sara T. O. Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gilli_SimoneCristinaOlenscki_D.pdf: 6959338 bytes, checksum: 59270968defefa0da38289624c7c16a1 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A infecção pelo vírus linfotrópico de células T tipo I (HTLV I) tem sido associada à leucemia/linfoma T do adulto (LLTA), à paraparesia espástica tropical! mielopatia associada ao HTLV I (PET/MAH), à uveíte e, recentemente, à Síndrome de Sjõgren e outras doenças do sistema conjuntivo. Os fatores que detenninam a evolução para essas doenças relacionadas à infecção são desconhecidos, mas podem estar ligados à predisposição genética e à resposta imune do hospedeiro. Camundongos com ausência do gene GATA3 demonstram várias e graves anormalidades morfológicas e fisiológicas no sistema nervoso central e periférico, além de comprometimento da hematopoese durante o desenvolvimento embrionário. Há, portanto, semelhanças entre os sistemas comprometidos na ausência do gene GATA3 e aqueles alterados secundariamente à infecção pelo HTLV I. Vários estudos sugerem que uma fosfoproteína viral presente no HTLVI, denominada Tax, ative a transcrição de vários genes envolvidos na produção de citocinas ou na resposta e na proliferação celular, como c-fos, c-myc, erg-I, IL-I, IL-2, GM-CSF. Entretanto, a crelação entre a infecção pelo vírus HTLV I e o fator de transcrição GATA3 ainda não havia sido determinada. Os objetivos do presente trabalho foram caracterizar a relação entre o fator de transcrição GATA3 e o vírus HTLV I, utilizando-se, para tanto, a técnica de RT-PCR semiquantitativo; analisar a relação entre o fator de transcrição GATA3 e o vírus HTLV I, por meio de estudos de interação DNA/proteína; e demonstrar, por estudos funcionais em modelos celulares in vitro, a resposta das regiões de controle transcricional do gene GATA3 à proteína Tax. Demonstramos, através do RT-PCR semi-quantitativo que ocorre uma evidente redução na expressão do gene GATA3 em portadores saudávies da infecção pelo HTLVI, e também de forma mais acentuada nos portadores de Leucemia Linfoma T do Adulto e Paraparesia Espástica Tropical/Mielopatia associada ao HTLVI. Estudos in vitro, que utilizaram construções com o gene reporter CAT direcionado pelo promotor e silenciador do gene GATA3 co-transfectados com vetores de expressão da proteína Tax e seu mutante, revelaram que Tax exerce atividade discreta no promotor de gene GATA3, mas reprime de modo marcante a atividade do promotor na presença de seu silenciador. Essa repressão provavelmente ocorre através da interação de tax com o fator de trans.crição ZEB, o silenciador do promotor do gene GATA3, uma vez que interação deste com a proteína Tax foi demonstrada no estudo de retardamento em gel. O estudo demonstrou, pela primeira vez, a regulação do gene GATA3 pelo vírus HTLVI. Essa regulação pode estar envolvida na fisiopatologia das doenças relacionadas à infecção pelo HTLVI / Abstract: The HTLV-I nonstructural protein Tax plays a crucial role in cellular transformation. It activates the transcription factors of various cellular genes and interacts with cellular proteins. Limited data are available on the interaction between specific T cell transcription factor GATA3 and Tax. hnplication for the significance ofGATA3 on T-cell development and function, (Th2) differentiation, and a role ofGATA3 during immune response has been reported. To determine the effect of the Tax protein on GATA3 gene expression, we investigated the interaction between this protein and the GATA3 promoter and repressor regions. The semi quantitative RT-PCR demonstrated a considerable decrease in the expression of the GATA 3 cDNA all subjects infected by HTLV I and no expression of GATA 3 mRNA was observed in one subject with ATLL and another with HAM/TSP. Results demonstrated an interaction between Tax and GATA3 gene and a role ofTax in the negative regulation of GATA3 expression, through its interaction with the repressor, ZEB. This interaction may be involved in the pathophysiology of adult T cell leukemiallymphoma and tropical spastic paraparesis/HTLV-I-associated myelophathy / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Jose Vassallo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:31:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sueiro_FelipeAugustoRuiz_D.pdf: 940117 bytes, checksum: b23b3f911da8d3c0c791eeba31e135eb (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi determinar o imunofenótipo dos linfomas caninos (LC) classificados de acordo com a nomenclatura da OMS para animais domésticos e correlacionar estes achados com a imunoexpressão da proteína p53. A imunofenotipagem dos linfomas foi feita utilizando-se anticorpos anti-CD79a, CD3 e proteína p53, em cortes de tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina. Dentre os 55 casos, 40 (72,7%) apresentaram imunofenótipo B, 12 (21,8%) imunofenótipo T e três (5,4%) foram linfomas não-B-não-T. Entre os linfomas de células B, 31 eram difusos de grandes células, 6 linfoplasmocíticos, um linfocítico, um folicular (grau II) e um inclassificado de baixo grau histológico. Um dos linfomas T-periféricos apresentou morfologia consistente com linfoma de grandes células anaplásicas. A imunomarcação para a proteína p53 foi positiva em 24 linfomas B e 7 linfomas T. Os linfomas com alto grau histológico apresentaram positividade para p53 significativamente mais alta (p= 0,01). A positividade para a p53 (mais que 10% de células positivas) tendeu a se correlacionar com o imunofenótipo T (p= 0,06). A idade média dos pacientes foi significativamente mais alta nos casos positivos para a p53 (p= 0,02). Estes dados são comparáveis com os resultados de linfomas humanos e corroboram a noção de que alguns LC compartilham similaridades na patogênese com os correspondentes humanos e, portanto, esquemas terapêuticos semelhantes poderiam ser efetivos / Abstract: The purpose of the present study was to determine the immunophenotype of canine lymphomas (CL) classified according to the WHO nomenclature for domestic animals and to correlate these findings with the immunoexpression of p53 protein. Immunophenotyping of lymphomas used antibodies to CD79a, CD3, and p53 protein, suitable for paraffin wax-embedded tissue sections. Among 55 cases, 40 (72.7%) were of the B-cell phenotype, 12 (21.8%) of a T-cell phenotype and three (5.4%) were non-B-non-T lymphoma. Among the B-cell lymphomas, 31 were large B-cell lymphomas, 6 lymphoplasmacytic, one lymphocytic, one follicular (grade II) and one unclassified low-grade. One of the peripheral T-cell lymphomas had morphology consistent with anaplastic large cell lymphoma. Immunolabelling for p53 occurred in 24 B-cell and 7 T-cell lymphomas. Lymphomas with high grade histology had significantly higher frequency of p53 positivity (p= 0.01). Positivity for p53 (more than 10% positive cells) tended to correlate with the T-cell phenotype (p= 0.06). Mean patient age was significantly higher in p53 positive cases (p= 0.02). These data are comparable to results in human lymphomas and corroborate the notion that some CL share many similarities in pathogenesis with man and therefore similar therapeutic regimes may be effective / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Orientadores: Andre Deeke Sasse, Carmen Silvia Passos Lima / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T04:20:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_LucasVieirados_M.pdf: 843952 bytes, checksum: bd8daf1913e68951fafe63ae91e9b070 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Introdução: O linfoma não-Hodgkin é o sexto grupo de neoplasias em mortalidade no mundo. Quando em estágio precoce, o linfoma não-Hodgkin pode ser curado com quimioterapia. A radioterapia tem sido utilizada para se reduzir a recorrência local, entretanto o seu impacto nos desfechos de sobrevivência é desconhecido. Vários estudos tentaram responder a esta questão, mas com resultados conflitantes. Frente a resultados controversos derivados de estudos randomizados, uma revisão sistemática da literatura faz-se necessária para determinar se a radioterapia, acrescentada ao tratamento sistêmico, traz ganhos reais para o paciente. Objetivos: Comparar os desfechos do paciente com linfoma não-Hodgkin agressivo e localizado tratado com quimioterapia seguido de radioterapia, com os da quimioterapia isoladamente. Métodos: Revisão sistemática da literatura com meta-análise. Estudos clínicos randomizados no tratamento do linfoma não-Hodgkin foram identificados, através de busca nas bases de dados Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL), MEDLINE, EMBASE, e LILACS. Referências de artigos encontrados, Resumos de apresentações em congressos e bases de dados de estudos em andamento também foram utilizados para localizar estudos pertinentes. Critérios de inclusão: estudos controlados randomizados que compararam radioterapia adicionada ao tratamento sistêmico com tratamento sistêmico isoladamente em pacientes com linfoma não-Hodgkin agressivo e localizado. Dois revisores extraíram independentemente os dados dos artigos utilizando formulários de extração de 10 dados. Quando possível, para cada desfecho clínico foi feita meta-análise com os dados extraídos, com o fim de calcular o efeito dos tratamentos entre os estudos. Os resultados da meta-análise são expressos como Risco Relativo (RR), e Hazard Ratio (HR), com o correspondente intervalo de confiança (IC) de 95%. Os desfechos clínicos avaliados foram sobrevida global, sobrevida livre de progressão, resposta radiológica e toxicidade. O modelo de efeito fixo foi usado para se calcular as variáveis de interesse. Resultados: De um total de 7020 estudos identificados por meio da estratégia de busca, cinco foram selecionados. Destes, um estudo foi excluído. Quatro estudos, compreendendo 1796 pacientes foram incluídos na meta-análise. A adição de radioterapia trouxe incremento na sobrevivência livre de progressão [HR 0,81; IC95% 0,67-0,98; p=0,03], sem, entretanto trazer impacto na taxa de resposta ou em sobrevivência global. As diferenças em como os dados foram reportados não permitiu que os dados de segurança fossem combinados. Conclusão: Até o presente momento, não há evidência de que a radioterapia traga ganhos em sobrevivência global em pacientes com linfoma não-Hodgkin agressivo e localizado. Investigações adicionais, com a incorporação dos agentes biológicos à quimioterapia, são necessárias / Abstract: Background: Non-Hodgkin lymphoma is the sixth group of neoplasms in mortality in the world. Aggressive and localized non-Hodgkin lymphoma can be cured by chemotherapy. Radiotherapy has been used to reduce local recurrence, however its impact on survival outcomes is unknown. Several studies have attempted to answer this question, but with conflicting results. Thus, a systematic literature review is needed to determine whether radiation therapy added to systemic treatment enhances the efficacy in non-Hodgkin lymphoma treatment. Objectives: To compare outcomes of patients with aggressive and localized non- Hodgkin lymphoma treated with chemotherapy followed by radiotherapy with chemotherapy alone. Methods: This is a systematic review with meta-analysis. Randomized clinical trials were identified the following databases: Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL), MEDLINE, EMBASE, and LILACS. Inclusion criteria: randomized controlled trials that compared the addition of radiotherapy to systemic therapy versus systemic therapy alone in patients with aggressive and localized lymphoma. Two reviewers independently extracted data from articles using data extraction forms. When possible, for each clinical outcome was performed meta-analysis of the extracted data in order to calculate the effect of treatments across studies. The results of the meta-analysis are expressed as relative risk (RR) and hazard ratio (HR) with corresponding confidence interval (CI) of 95%. The main outcomes were overall 12 survival, progression-free survival, radiologic response and toxicity. The fixed-effect model was used to estimate the effect size. Results: A total of 7,020 studies identified through the search strategy, five were selected. Of these, one study was excluded. Four studies comprising 1,796 patients were included in the meta-analysis. The addition of radiotherapy increased the progression-free survival [HR 0.81, 95% CI 0.67 to 0.98, p = 0.03]. There were no differences in response rate or overall survival. The differences in how data was reported did not allow us to combine toxicity data Conclusion: To date, there is no evidence that radiotherapy will increase overall survival in patients with aggressive and localized non-Hodgkin lymphoma. Further investigations, with the incorporation of biologic agents to chemotherapy, are needed / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

A Síndrome de Sézary (SS) é um dos tipos mais comuns de linfoma cutâneo de células T (CTCL). Esta síndrome é caracterizada por eritrodermia, linfadenopatia generalizada e presença de células tumorais na pele, linfonodos e sangue periférico. A imunidade do hospedeiro está comprometida nesta síndrome, contudo, estudos relacionados à imunidade inata, particularmente sobre as células Natural Killer (NK) são mais escassos. As células NK exercem um papel essencial na resposta imune antitumoral. A proposta deste estudo é caracterizar o perfil fenotípico associado à ativação e inibição das células NK e a capacidade de secreção de citocinas em resposta aos agonistas de receptores Toll-like (TLR), TLR4, TLR7/TLR8 e TLR9 em pacientes com SS. Foram selecionados 14 pacientes com SS (7 homens, 7 mulheres), com 48-85 anos de idade provenientes do Ambulatório de Linfomas Cutâneos do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP, e um grupo controle com 22 indivíduos sadios (11 homens, 11 mulheres, idade de 48-75). Os resultados evidenciaram diminuição percentual de células NK CD56dim do sangue periférico dos pacientes SS, bem como baixa expressão de marcadores de ativação, NKG2D e NKG2C. A forma solúvel dos ligantes de NKG2D, MICB e MICA solúvel (sMICA/MICB), foi detectada em níveis séricos elevados para sMICB, e sMICA foi detectado em apenas 2 pacientes. Houve uma correlação negativa entre os níveis de sMICB e o percentual de células NK CD56brightCD16 NKG2D+. O perfil de secreção de citocinas das células NK, mostra, já na condição sem estímulo, um aumento percentual de TNF e CD107a em células NKCD56dim de pacientes com SS. Após o estímulo com os agonistas de TLR7/TLR8 houve um aumento na produção de CD107a e TNF nas células NKCD56bright e de TNF para as células NKCD56dim. Na produção de citocinas induzidas por agonistas de TLRs nos sobrenadantes de células mononucleares, foi observado que os agonistas TLR2 e TLR4 foram capazes de estimular a produção de IL-6, TNF e IL-10 enquanto o agonista de TLR7/8 mostrou um efeito adjuvante para a secreção de IFN-alfa, IFN-y e IL-10. Além disso, foi observado aumento de expressão de RNAm para TLR2 em células mononucleares avaliada por PCR em tempo real, como também para os fatores relacionados à resposta antiviral, como interferon tipo I (IFN- alfa), receptor de IFN-beta e interferon tipo III (IFN- ) em pacientes com SS. Quanto aos níveis séricos de citocinas, foi detectado aumento de IL-5 (citocina Th2), IL-6 (pró-inflamatória) e IL-10 (reguladora) nos SS, não diferindo quanto aos níveis de IL-1beta, IL-2, IL-17a, TNF e TGF-beta em relação ao grupo controle. Os resultados mostram que há uma diminuição percentual de células NK CD56dim, alteração da expressão dos receptores de ativação e elevação de ligantes solúveis que podem bloquear a ativação das células NK nos pacientes com SS. Além disto, as células NK exibem diminuição da produção de IFN-alfa, que contribuem na diminuição da resposta Th1. Há uma baixa responsividade das células NK aos ligantes de TLRs. Contudo, há um efeito adjuvante dos ligantes de TLRs em células mononucleares dos pacientes com SS, sendo que os agonistas de TLR2/4 e TLR7/8 foram capazes de restaurar parcialmente a produção de citocinas. Os resultados evidenciam que nos pacientes com SS, apesar da redução percentual das células NK, essas células são funcionais, mas que podem ser bloqueadas pelos ligantes solúveis de receptores de ativação. O uso de ligantes de TLRs pode ser uma estratégia para potencializar a produção de citocinas na Síndrome de Sézary / Sézary syndrome (SS) is one of the most common types of cutaneous T-cell lymphoma (CTCL). This syndrome is characterized by erythroderma, generalized lymphadenopathy and presence of tumor cells in the skin, lymph nodes and peripheral blood. Immunity of the host is compromised in syndrome, a study has related an innate immunity, particularly in Natural Killer (NK) cells are more scarce. NK cells play an essential role in the antitumor immune response. The aim of this study is to characterize the phenotypic profile associated with the activation and inhibition of NK cells and cytokine secretion capacity in response to the TLR4, TLR7 / TLR8 and TLR9 receptor agonists in SS patients. METHODS: We selected 14 patients with SS (7 men, 7 women, 48-85 years old) from the Cutaneous Lymphoma Outpatient Clinic of the Medical School of USP, and a control group with 22healthy individuals (11 men , 11 women, 48-75 years old). The results showed a decrease in CD56dim NK cells in the peripheral blood of SS patients, as well as low expression of activation markers, NKG2D and NKG2C. The soluble form of NKG2D, MICB and soluble MICA (sMICA/MICB) ligands was detected at high levels in serum for sMICB, and sMICA was detected in only 2 patients. There was a negative correlation between sMICB levels and the percentage of NK cells CD56brightCD16 NKG2D+. The cytokine secretion profile of NK cells, in the unstimulated condition, showed an increase of TNF and CD107a in NKCD56dim cells of SS patients. Upon stimulation of TLR7 / TLR8 agonists, CD107a and TNF production was higher in NKCD56bright cellsandforTNF in CD56dim cells.The agonists TLR2 and TLR4 in NK cells were able to stimulate the production of IL-6, TNF and IL-10,, while TLR7/8 agonist showed an adjuvant effect for secretion of IFN-alfa, IFN-y e IL-10. In addition, increased expression of TLR2 mRNA was observed in mononuclear cells evaluated by real-time PCR, simirlaly for factors related to antiviral response, such as interferon type I (IFN-alfa), IFN-Type III receptor (IFN - ) in patients with SS. Forserum levels of cytokines, IL- 5 (cytokine Th2), IL-6 (proinflammatory) and IL-10 (regulatory) were detectedhigher in SS, not differing in levels of IL-1beta, IL-2 , IL-17a, TNF and TGF-beta in relation to the control group. The results show that, there is a percentage decreased of CD56dim NK cells, alteration in activation receptor expression and elevation of soluble ligands that block theactivation of NK cells in SS patients. In addition, NK cells exhibit decreased IFN-? production, thatcontribute to the decrease in Th1 response. There is low responsiveness of NK cells to TLR ligands. However, there is an adjuvant effect of TLR ligands on mononuclear cells of SS patients, with TLR2/4 and TLR7 / 8 agonists is able to partially restore cytokine production. The results show that patients with SS, despite the percentage reduction of NK cells, these cells are functional, but can be blocked by soluble ligands of activation receptors. The use of TLR ligands may be a strategy to potentiate a production of cytokines in Sézary Syndrome