Butirato sódico (NaB), um potente inibidor da desacetilação de histonas, inibe o crescimento celular e induz apoptose em células neoplásicas. Investigou-se, in vitro, os efeitos na proliferação celular do tratamento combinado de NaB e fármacos comumente empregados no tratamento de leucemias. A linhagem de células T linfoblásticas, Jurkat, foi cultivada em meio RPMI suplementado com 10% de FBS. As células foram tratadas com bleomicina, citarabina, doxorubicina, etoposideo, metotrexato, vincristina e NaB. A proliferação e viabilidade celular foram avaliadas 48h após os tratamentos. Nossos resultados mostraram que NaB aumenta os efeitos citotóxicos de citarabina e etoposideo, mas não de bleomicina, doxorubicina, metotrexato ou vincristina. Estes dados sugerem que NaB é um promissor agente terapêutico adjuvante para o tratamento de leucemias linfoblásticas, e proporcionam uma base para futuras investigações neste campo.

DUTRA, Luana Leticia Alves. Avaliação dos genes AURKA e AURKB em pacientes pediátricos portadores de leucemia linfóide aguda. 2015. 71 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-11-19T13:04:41Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_lladutra.pdf: 2557352 bytes, checksum: e975042e7681efc6efceafbfb84d43f4 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-11-19T13:32:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_lladutra.pdf: 2557352 bytes, checksum: e975042e7681efc6efceafbfb84d43f4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T13:32:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_lladutra.pdf: 2557352 bytes, checksum: e975042e7681efc6efceafbfb84d43f4 (MD5) Previous issue date: 2015 / Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is the most common malignancy of childhood. It is a hematologic malignant neoplasm derived from undifferentiated young lymphoid lineage cells that accumulate and replace the normal population of blood cells. The Aurora kinase genes A, B and C are involved in cell cycle and encode proteins of great importance in the regulation of the mitosis process - separation of sister chromatids during metaphase / anaphase. The aim of this study was to evaluate the AURKA and AURKB genes in pediatric patients with ALL-B treated at Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS). This was a cross-sectional, observational and analytical study and 30 patients were enrolled. The sex, age, and laboratory data profile were obtained from medical records of patients diagnosed at HIAS. The analysis of mutations in AURKA and AURKB genes was performed by the fluorescence in situ hybridization technique (FISH) using probes specific for each gene. Statistical analysis was performed using GraphPad Prism 5 and used 5% significance level for all tests. Of all children 53.33% were male and 46.67% female, with age ranging from 1 to 16, and average of 7.1 years. Using the FAB classification, 86.67% of patients had ALL-L1 and 13.33% had ALL-L2. According to the EGIL classification, 33.33% were pre-B ALL and 66.67% were common ALL. The mean hemoglobin levels, hematocrit, white blood cells and platelet counts were, respectively, 7.50 g/dL, 22.80%, 69.494/mm3 and 56.439,64/mm3. 73.33% of the children studied had some type of numerical or structural karyotipic abnormality. Regarding the risk classification, 26.67% were favorable, 40% intermediate and 33.33% unfavorable risk. Patients with unfavorable karyotype had a higher white blood cell count (p = 0.0025), and the analysis of other parameters was not significant. Monosomy and polysomy of AURKA gene and polysomy of AURKB gene were observed. Some kind karyotypic change was observed in approximately 50% of cases, the more frequent change was in AURKB. Most patients with abnormal AURKB gene presented a favorable karyotype, and white blood cell and platelet counts less altered. The study of AURKA and AURKB genes showed that these genes may be markers of genomic instability and that AURKB seems more involved in the pathogenesis of childhood ALL, being also a good prognostic factor. / A leucemia linfóide aguda (LLA) é a neoplasia mais frequente na infância. É uma neoplasia hematológica maligna derivada de células linfocitárias indiferenciadas com acúmulo de células jovens e substituição da população normal de células sanguíneas. Os genes Aurora quinase A, B e C estão envolvidos no ciclo celular e codificam proteínas de grande importância na regulação do processo de mitose - separação das cromátides irmãs durante a metáfase/anáfase. O objetivo desse estudo foi avaliar os genes AURKA e AURKB em pacientes pediátricos portadores de LLA-B tratados no Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS). Tratou-se de um estudo transversal, observacional e analítico. A amostra utilizada no estudo foi de 30 pacientes. O perfil de sexo, idade e dados laboratoriais foi obtido em prontuários dos pacientes e no serviço de diagnóstico do HIAS. A análise de mutações nos genes AURKA e AURKB foi pela técnica de Fluorescência por Hibridização in Situ (FISH), com o uso de sondas específicas para cada gene. A análises estatística foi realizada no GraphPad Prism 5 e teve nível de significância de 5% para todos os testes. Do total de crianças 53,33% foram do sexo masculino e 46,67% do sexo feminino, com faixa de idade variando de 1 a 16 anos, e média de 7,1 anos. Quanto a classificação FAB, 86,67% dos pacientes eram portadores de LLA-L1 e 13,33% de LLA-L2. Na classificação EGIL, 33,33% eram LLA pré-B e 66,67% eram LLA-comum. Os valores médios de hemoglobina, hematócrito, leucócitos e plaquetas foram, respectivamente, 7,50 g/dL, 22,80%, 69.494/mm3 e 56.439,64/mm3. O cariótipo de 73,33% das crianças estudadas apresentou algum tipo de alteração numérica ou estrutural. Em relação à classificação de risco, 26,67% foram favoráveis, 40% intermediários e 33,33% desfavoráveis. Na relação entre parâmetros hematológicos e classificação de risco, pacientes com cariótipo desfavorável apresentaram leucometria mais elevada (p=0,0025), as análises com os outros parâmetros não foram significantes. No estudo de AURKA e AURKB foi possível observar monossomia e polissomia do gene AURKA e polissomia do gene AURKB. Dos pacientes com algum tipo de alteração no cariótipo, foi observada alteração em algum dos genes em aproximadamente 50% dos casos, sendo a alteração no AURKB mais frequente. A maioria dos pacientes com alteração no gene AURKB apresentou cariótipo favorável, assim como leucometria e contagem de plaquetas menos alteradas. O estudo dos genes AURKA e AURKB mostrou que esses genes podem ser iniciadores no processo de instabilidade genômica das células leucêmicas e que a AURKB parece estar mais envolvida na patogênese da LLA infantil, assim como fator de bom prognóstico.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Recentemente, a punção aspirativa por agulha fina (PAAF) vem sendo utilizada como método para a obtenção de material para estudos de expressão gênica em alguns tipos de linfoma, na tentativa de substituir o banco de tumores a partir de tecido fresco congelado. Objetivos: Avaliar a quantidade e a qualidade do RNA obtido a partir de punção aspirativa de linfonodos por PAAF em linfomas nãoHodgkin e desenvolver estratégias para suprir eventuais falhas do método proposto, melhorando a qualidade e/ou a quantidade do material obtido por PAAF. Material e Métodos: A casuística foi constituída pelos pacientes com diagnóstico de LNH admitidos no Hospital São Paulo entre março de 2006 e dezembro de 2007, e que apresentaram linfonodomegalia periférica passível de punção. O grupo controle foi constituído por amígdalas (tecido linfóide reacional) de crianças submetidas à amigdalectomia no Hospital São Paulo. As punções foram realizadas com citoaspirador (amostra A) e seringa e agulha (amostra B). O RNA foi transcrito com o kit Superscript (Invitrogen) e a qualidade foi verificada a partir da amplificação de fragmentos de 155pb do gene β-ACTINA e de 311 pb do gene NOTCH-2. Resultados: Foram analisados 26 casos de LNH (52 amostras) e 10 amígdalas (20 amostras). A quantidade de RNA nas amostras de amígdalas obtidas com citoaspirador (A) variou de <1,0 a 6,2 µg. Nas amostras obtidas com seringa e agulha (B), a quantidade de RNA variou de <1,0 a 4,7µg. A quantidade de RNA nas amostras de LNH obtidas com citoaspirador (A) variou de <1,0 a 6,5 µg. Nas amostras obtidas com seringa e agulha (B) a quantidade de RNA variou de <1,0 a 5,5 µg. Em 19 (95%) das amostras de amígdalas conseguimos amplificar o fragmento do gene NOTCH-2. Na única amostra de controle em que não foi possível amplificar o gene NOTCH-2, houve amplificação do fragmento do gene β- ACTINA (155 pb). Nas amostras de LNH, conseguimos amplificar o fragmento do gene NOTCH-2 em apenas em 24 (46%) espécimens, mas conseguimos amplificar o fragmento do gene β-ACTINA em 51 (98%) delas. Na tentativa de aumentar a quantidade de RNA disponível em cada amostra, padronizamos a técnica de poliA PCR, que consiste na amplificação global de cDNAs poliadenilados. Conseguimos evidenciar aumento de 10 vezes na quantidade de cDNA na maioria dos casos e controles. A eficiência da reação foi verificada através da amplificação do fragmento do gene β-ACTINA, onde 100% dos controles e dos casos foram amplificados, e também do fragmento de 298 pb do gene PGK, onde 100% dos controles e 77% dos casos foram amplificados. Quando utilizamos o produto da reação de poliA PCR comparados com amostras de cDNA (cDNA versus cDNA poliA) através da técnica de Real Time PCR, conseguimos demonstrar equivalência nas amplificações em 100% das 15 amostras avaliadas, utilizando dois genes alvo e um gene constitutivo. Conclusão: Nossos resultados demonstram que a PAAF, tanto com o citoaspirador quanto com seringa e agulha, é uma boa fonte de pequena quantidade de RNA, mas suficiente para amplificar fragmentos de genes de aproximadamente 150 pb em mais de 95% das amostras. Através da técnica de poliA PCR conseguimos aumentar significativamente a quantidade de material genômico, obtendo resultados equivalentes ao uso de cDNA não amplificado, para futuros estudos de expressão gênica. / Recently, fine needle aspiration (FNA) becomes an alternative method to obtain genomic material for studies of gene expression in some types of lymphoma, in the attempt to substitute fresh frozen tissue tumor banks. Objectives: To evaluate the amount and the quality of the RNA obtained from lymph nodes of non-Hodgkin lymphomas (NHL) patients using FNAs and to develop strategies to overcome eventual drawbacks of the method. Material and Methods: Twenty-six patients with NHL diagnosis, admitted in São Paulo Hospital, Brazil, between March 2006 and December 2007, presenting peripheral lymphonodemegaly suitable for aspiration were included in this study. The control group includes 10 tonsils from children submitted to tonsillectomy in the same period. The aspirates were performed using both citoaspirator (sample A) and syringe and needle (sample B). The RNA was extracted using Trizol reagent and transcribed with the Superscript kit (Invitrogen). The quality of RNA was verified through the amplification of 155pb fragment from β-ACTIN and 311pb from NOTCH-2. Results: 52 NHL samples and 20 tonsil samples were analyzed. The amount of RNA in tonsil samples varied from <1.0 a 6.2 µg with citoaspirator (A) and varied from <1.0 a 4.7µg with syringe and needle (B). The amount of RNA obtained from NHL varied from <1.0 a 6.5 µg with citoaspirator (A) and <1.0 a 5.5 µg with syringe and needle. In 19 (95%) of the tonsil samples we could amplify NOTCH-2 fragment. In the only sample of control where NOTCH-2 amplification was negative, we could easily obtain β-ACTIN (155pb) amplification. In NHL samples, NOTCH-2 was amplified in only 24 (46%) specimens, but we obtained β-ACTIN amplification in 51 (98%) of them. In an attempt to increase the availability of larger amounts of RNA in each sample, we standardize the polyA PCR technique that consists of the global amplification of polyadenylated cDNA. This technique increased in 10 times the amount of cDNA in both cases and controls. The efficiency of the reaction was verified through the amplification of β-ACTIN, where 100% of the controls and the cases were amplified, as well through the amplification of PGK (298pb), positive in 100% of controls and 77% of the cases. When polyA PCR cDNA and non-amplified cDNA samples where paired to be evaluated by Real Time PCR using GAPDH as constitutive gene and NFκB and IκB as target genes, we could demonstrate equivalence in the amplifications of 100% of the 15 evaluated samples. Conclusion: Our results demonstrate that FNA, whatever citoaspirator or syringe and needle was used, it is a good source of small amounts of RNA, and could amplify fragments of approximately 150pb in more than 95% of the samples. PolyA PCR technique increased significantly of the amount of genomic material and is suitable as a cDNA source for future gene expression studies. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

SOUSA, Daniel Willian Lustosa de. Expressão da L-selectina e do CD44 nas leucemias linfóides agudas em crianças e adolescentes. 2009. 118 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:41:12Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_dwlsousa.pdf: 2111442 bytes, checksum: 1ddc01feade951f9f82cbb760935f58d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:42:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_dwlsousa.pdf: 2111442 bytes, checksum: 1ddc01feade951f9f82cbb760935f58d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-03T12:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_dwlsousa.pdf: 2111442 bytes, checksum: 1ddc01feade951f9f82cbb760935f58d (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction – Altered expression or function of adhesion molecules on leukemic blasts may contribute to the evolution of acute leukemia and its biological behavior. The elevated expression of adhesion molecules in ALL might be correlated with the extramedullary dissemination of blast cells, CNS involvement and leukemia tumor burden. Purpose – To analyze the expression of L-selectin and CD44 in ALL in children and adolescents. As well as to evaluate the prognostic factors (age, gender, initial leukocyte count, immunophenotype, FAB and EGIL classification, DNA index and early response to treatment) and the extramedullary presentation of ALL, to finally correlate the prognostic factors with these adhesion molecules. Patients and Methods – From November 2007 to November 2008, 76 patients with newly diagnosed ALL started on Brazilian GBTLI-ALL Protocol. The diagnosis was based on cytological, immunophenotypic, and cytogenetic methods. The mean fluorescence intensity (MFI) and the percentage of the adhesion molecules blasts cells was measured by flow cytometry using triple staining with McAb directly conjugated. CD45-PerCP positive cells were gated for blasts analysis. Anti-CD44-PE (Clone HP2/9 - Immunostep®) and CD62L-FITC (Clone HI62L - Immunostep®) were used to mark the adhesion molecules. The Cell Quest program was used for data acquisition and analysis. Statistical analysis was done by SPSS 16.0 Software. The association of features, prognosis and response to treatment was assessed by Chi-square, Fisher exact and Mann-Whitney tests. Overall survival curves were constructed by the Kaplan-Meier method and the log-rank test. Multivariate Cox regression analysis showed independent prognostic factors. Results – The mean age at diagnosis was 6.3±0.5 years (range 9mo to 17yr) and 65% of them were boys. Clinical findings were hepatomegaly (63%), splenomegaly (58%), lymphadenopathy (44%). CNS involvement was detected in 6.6% of cases and mediastinal mass appeared in 11.8% of them. Patients were classified into low risk (54%) and high risk (46%). FAB classification identified 83% as L1 and 17% as L2. Immunophenotypically, 89.5% of patients were classified as B-lineage ALL and 10.5% as T-lineage ALL. The most frequent EGIL subtype was B common and pre-B-ALL (51.5% and 45.5%, respectively). DNA index greater than 1.16 was found in 19% of the patients and was associated with favorable prognosis. On the D8 evaluation, 95% of the patients had blast count lower than 1.000/mm3 and leukocyte count lower than 5.000/mm3. The remission induction rate was 95% and there was a rate of 2.6% of death during induction therapy. CD44 had greater expression to the rate of 87.5% in T-cell ALL (MFI=150.44±20.29) with no statistical correlation. A significant positive correlation was demonstrated between 84% of CD44 expression and Leukemia burden tumor cases (p=0.01; OR=4.8). There was statistical correlation between L-selectin expression (87.5%/MFI=272.33±52.72) and T-cell ALL (p=0,004). No significant correlation was detected between L-selectin and CD44 expression and other prognostic factors. Multivariate statistical analysis (adjusted for overall survival) indicated that initial leukocyte count, gender, T immunophenotype and L-selectin were independent factors. Conclusion – L-selectin and CD44 expressions were elevated in ALL studied, mainly in T-cell ALL. The research demonstrated that there is an association between CD44 expression and leukemia tumor burden, which might be involved in the dissemination of leukemic cells and the progression of the disease. / Introdução – Alterações na expressão ou função das moléculas de adesão (MA) nas células leucêmicas podem contribuir para a evolução e no comportamento biológico das leucemias agudas. A expressão aumentada nas LLAs parece relacionar-se aos mecanismos de disseminação extramedular dos linfoblastos, infiltração do SNC e formação de massas tumorais. Objetivos – Analisar a expressão da L-selectina e do CD44 nas LLAs em crianças e adolescentes. Avaliar os fatores prognósticos (idade, sexo, leucometria ao diagnóstico, imunofenótipo, classificação FAB, EGIL, índice de DNA e resposta ao tratamento de indução) e as apresentações extramedulares das LLAs e correlacioná-los com essas MA. Pacientes e Métodos – Foram avaliados 76 pacientes com LLA, tratados com o Protocolo GBTLI-LLA. O diagnóstico foi baseado em critérios FAB, imunofenotípicos (EGIL) e citogenéticos. A expressão das MA foi avaliada por citometria de fluxo, utilizando tripla marcação. O anticorpo monoclonal CD45-PerCP (Immunotech®) foi utlizado como marcador dos linfoblastos. O CD44-PE (Clone HP2/9 - Immunostep®) e o CD62L-FITC (Clone HI62L - Immunostep®) foram utilizados para a marcação das MA. Para a análise das amostras e o cálculo da intensidade média de fluorescência foi utilizado o programa Cell Quest. Na análise estatística utilizou-se o software SPSS 16.0. A associação entre as variáveis, os fatores prognósticos e resposta foi realizada com os testes de Qui-quadrado, exato de Fisher e Mann-Whitney. Sobrevida global foi determinada por curvas Kaplan-Meier e teste log-rank. Análise multivariada por modelo proporcional de Cox foi utilizada para assegurar a independência dos fatores prognósticos. Resultados – A média de idade foi 6,3±0,5 anos (5m -17a) e predominou o sexo masculino (65%). Ao diagnóstico os achados clínicos foram: hepatomegalia (63%), esplenomegalia (58%) e linfadenomegalia (44%). A infiltração SNC ocorreu em 6,6% dos casos e o alargamento de mediastino em 11,8%. Quanto ao risco, 54% eram baixo risco e 46% alto risco. A classificação FAB determinou 83% como L1 e 17% L2. Diagnóstico de LLA-B foi mais frequente (89,5%) e o da LLA-T em 10,5% dos pacientes. O subtipo EGIL mais prevalente foi B II e B III, 51,5% e 45% respectivamente. O IDNA ≥ 1.16 foi encontrado em 19% dos pacientes e associou-se a bom prognóstico. Na avaliação do D8, 95% dos pacientes apresentaram contagem de blastos <1000/mm3 e leucócitos < 5.000/mm3. A taxa de remissão de indução foi de 95% e ocorreram 2,6% de óbitos na indução. Observou-se uma maior expressão do CD44 na LLA-T (87,5%/ IMF=150,44±20,29), porém sem significância estatística. LLAs com massa tumoral apresentaram 84% de expressão do CD44, quando comparada a 52% das LLAs sem massa tumoral (p=0.01; OR=4,8). Expressão aumentada da L-selectina na LLA-T (87,5%/IMF=272,33±52,72) foi estatisticamente significante (p=0,004), comparado a LLA-B (54,5%/ IMF= 115,90±12,75). Não houve correlação entre os outros fatores prognósticos e essas MA. Na análise multivariada as variáveis de maior impacto para a sobrevida foram: a leucometria ao diagnóstico, sexo, imunofenótipo T e a L-selectina. Conclusão – A expressão da L-selectina e do CD44 estão aumentadas nas LLAs estudadas, principalmente na LLA-T. O CD44 correlacionou-se com LLAs com massas tumorais e parece estar relacionado aos mecanismos de disseminação extramedular dos linfoblastos

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T05:21:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 212203.pdf: 1857975 bytes, checksum: a3895839711f7c016f347690f18a6490 (MD5) / A matriz extracelular (MEC) representa um complexo macromolecular que determina a histoarquitetura específica de cada tecido servindo como um arcabouço para a adesão celular e codificando informações que podem ser transmitidas para os domínios internos das células modulando, desta maneira, a atividade celular. Durante os processos neoplásicos ocorrem determinadas mudanças no estroma tecidual (componentes celulares e extracelulares) que conduzem as células tumorais a um padrão invasivo e metastático. Estas alterações teciduais decorrentes do estabelecimento tumoral podem variar de acordo com seu tecido de origem e os sítios de invasões secundárias. O linfoma histiocítico verdadeiro (LHV) representa uma das neoplasias mais raras e agressivas entre os linfomas Não-Hodgkin. Linhagens celulares de LHV, como a linhagem U-937, já foram isoladas e representam um modelo bastante útil para a investigação dos efeitos de variados agentes sobre a progressão deste tipo de tumor. Em consonância com o exposto o objetivo deste trabalho foi avaliar a deposição tecidual de proteínas da MEC em um caso de LHV e analisar a influência destas proteínas sobre o estabelecimento e a progressão tumoral. Para isso foram realizadas imunomarcações para as proteínas laminina (LN), fibronectina (FN) e colágeno tipo IV (COL IV) em linfonodos normal e comprometido por LHV. Foram realizados também testes de adesão e proliferação das células U-937 sobre substratos compostos por LN, FN ou COL IV. Por fim, as células foram tratadas com drogas (clorato de sódio ou b-xilosídeo) que alteram as propriedades dos proteoglicanos para se avaliar a participação destes durante os processos de adesão e proliferação celular. Os cortes histológicos avaliados apresentaram marcação, para todas as proteínas testadas, no córtex e na cápsula do linfonodo normal. No linfonodo comprometido por LHV foi verificada uma deposição diferencial das proteínas da MEC avaliadas, principalmente da FN que apresentou um grande aumento. Os estudos in vitro demonstraram que esta proteína proporcionou um maior potencial de adesão e proliferação das células U-937 quando comparada aos demais substratos. O tratamento destas células com clorato de sódio ou b-xilosídeo reduziu a taxa de proliferação celular, mas não foi capaz de modificar o padrão de adesão das células aos substratos de FN. Os resultados demonstraram que alterações no estroma linfonodal podem ocorrer durante a progressão do LHV e que estas alterações podem afetar diretamente a adesão e a proliferação das células tumorais, efeitos estes relacionados a receptores de superfície celular, que neste modelo evidenciam a importância dos proteoglicanos na proliferação celular sobre substratos de FN.

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:32:39Z : No. of bitstreams: 1 000855647.pdf: 1653500 bytes, checksum: 8d21ecf643fe2c60ba5500eb209ac29a (MD5) / O Sarcoma Histiocítico (SH) é uma neoplasia maligna caracterizada pela proliferação de células grandes que possuem aspecto morfológico e imunofenotípico semelhantes ao histiócito maduro tecidual. É uma neoplasia rara, perfazendo menos que 1% dos Linfomas Não-Hodgkin. Tal raridade pode ser explicada pela dificuldade de sua caracterização diagnóstica e morfológica, confundindo-se com outras neoplasias malignas pleomórficas. Os objetivos do presente estudo são: avaliar alterações no padrão de ganhos e perdas genômicas pela técnica de Hibridação Genômica Comparativa (CGH-array), avaliação do perfil de MicroRNA (miRNA), apontar os principais critérios morfológicos e marcadores imunoistoquímicos (IMH) que venham a definir esta entidade e identificar quais entidades que erroneamente podem levar a subdiagnostico.Para tanto, foram revisados 7.600 laudos anatomopatológicos e, destes, foram selecionados 47 casos possíveis de SH, com apresentação nodal. Somando-se a estes, quatro casos sabidamente com diagnóstico de SH foram incluídos na análise. Foram avaliados 12 critérios morfológicos e 05 marcadores IMH. Dos 47 casos, foram localizados 07 SH, cujo diagnóstico inicial foi de neoplasia indiferenciada metastática (carcinoma indiferenciado) ou melanoma metastático. Os marcadores IMH que se mostraram mais eficientes para complementação diagnóstica foram CD163 e CD68. A avaliação do perfil de 377 miRNAs demonstrou clusterização de 51 miRNA, quando comparado ao controle, sendo 44 hipoexpresssos e 07 hiperexpressos, sendo os mais relevantes: miR-10b-5p, miR-455-5p e miR-19 (hiperexpressos); miR-486-5p, miR-92a, miR-15b-5p (hiporegulados). Tais miRNA estão envolvidos nas vias da apoptose, crescimento e proliferação celular. Os principais genes envolvidos na patogenia e candidatos a validação com futuros estudos são: ERBB2, TGFB1,TNF(ativados) e TP53 e PD98059 (inibidos).Tais genes podem corresponder a futuros... / Histiocytic sarcoma (HS) is a malignant neoplasm characterized by the proliferation of large cells that have morphological and immunophenotypic features similar to mature tissue histiocytes. It is a rare neoplasm, accounting for less than 1% of non-Hodgkin lymphomas. This rarity is partly explained by the difficulties in its diagnostic and morphological characterization, since it is confused with other pleomorphic malignant neoplasms. The objectives of this study were to evaluate changes in genomic gains and losses using the comparative genomic hybridization technique (CGH-array), microRNA profile (miRNA) evaluation, determine the principal morphological criteria and immunohistochemical markers (IMH) that could define this entity, and identify entities that can mistakenly lead to underdiagnosis. To achieve this, 7,600 pathology reports were reviewed and, of these, 47 possible cases of HS with nodal presentation were selected. Four cases with an established diagnosis of HS were also included in the analysis. Twelve morphological criteria and 5 IMH markers were evaluated. Among the 47 cases, 7 cases of HS were identified that had initially been diagnosed as undifferentiated metastatic neoplasm (undifferentiated carcinoma) or metastatic melanoma. The IMH markers that were most efficient for complementary diagnosis were CD163 and CD68. Evaluation of the profiles of 377 miRNAs showed clustering of 51 miRNA compared with the control; 44 were hypoexpressed and 7 were hyperexpressed and the most relevant were: miR-486-5p, miR-92a, miR-15b-5p (hyporegulated); and miR-10b-5p, miR-455-5p and miR-19 (hyperexpressed). These miRNA are involved in apoptosis, cell growth and proliferation pathways. The main genes involved in pathogenesis and candidates for validation in future studies are: ERBB2, TGFB1, TNF (activated); and TP53 and PD98059 (inhibited). These genes may represent future therapeutic targets. The CGH-array proved to be unfeasible in ...

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:28:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-30. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:33:46Z : No. of bitstreams: 1 000855700.pdf: 2083514 bytes, checksum: e1c6b87f23dfa4c1b8052fd3da6e9994 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundamentos: O equilíbrio homeostático do sistema imune é imprescindível para o controle e evolução do quadro clínico das neoplasias linfoides da pele e dos processos inflamatórios. Dentro desse equilíbrio imunológico, a função das células T reguladoras é controverso tanto nos casos de micose fungoide quanto nas dermatoses inflamatórias que são os principais diagnósticos diferenciais. O anti-FOXP3 é o imunomarcador mais específico para as células T reguladoras. Objetivo: Identificar e quantificar a presença de células T reguladoras através do marcador imunoistoquímico anti-FOXP3 em cortes histológicos de casos de micose fungoide em fases clínicas iniciais, e comparar com a presença ou não do mesmo marcador em casos de psoríase vulgar, dermatite eczematosa e líquen plano. Métodos: Foram estudadas 77 biópsias de 64 pacientes, sendo 30 casos de micose fungoide e 34 de dermatoses inflamatórias, consultados entre 1999 a 2014 no arquivo do serviço de Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu - Universidade Estadual Paulista. As biópsias foram revistas e seus resultados imunoistoquímicos comparados de acordo com as categorias entre grupo de casos e grupo controle. Resultados: A classificação do escore epidérmico para o imunomarcador FOXP3 foi significativamente menor na micose fungoide que nas dermatoses inflamatórias (p<0,001). A principal discrepância ocorreu com o líquen plano, no qual 90% foram FOXP3+ em mais de 50% dos linfócitos intraepidérmicos, enquanto que apenas 10% dos casos de micose fungoide alcançaram esses níveis de positividade. Conclusões: Embora a maioria dos diagnósticos das lesões iniciais de micose fungoide dependam principalmente da correlação clínica-histopatológica, a diferença estatisticamente significante da proporção de FOXP3+ intraepidérmico comparando-se com as dermatoses inflamatórias permite a inclusão desse imunomarcador no painel imunoistoquímico para o... / Background: The homeostatic balance of the immune system is essential for clinical evolution and control of cutaneous lymphoid neoplasias and inflammatory diseases. Regarding immunological balance the role of regulatory T cells remain unclear either in mycosis fungoides or their clinical differential diagnosis like inflammatory dermatosis. Anti- FOXP3 antibody is the most specific marker of regulatory T cells. Objective: To determine and quantify regulatory T cells using anti-FOXP3 antibody in histopathological samples of early lesions of mycosis fungoides and compare it with psoriasis vulgaris, eczematous dermatitis and lichen planus by a scoring system for FOXP3 expression. Methods: Data from 77 biopsies from 64 patients, 30 cases corresponding to mycosis fungoides and 34 to inflammatory dermatosis, observed between 1999 and 2014 at the Department of Patholgy at Botucatu Medical School - Sao Paulo State University. Biopsies were reviewed and the FOXP3 labeled cells results compared according to cases or control group. Results: Intraepidermal FOXP3 positivity was significantly lower in mycosis fungoides than inflammatory dermatosis (p<0,001). Especially significant was that 90% of lichen planus cases resulted in 50% or more of epidermal lymphocytes scored FOXP3+ whereas only 10% of mycosis fungoides group have reached this level. Conclusions: Despite the majority of early lesions of mycosis fungoides diagnosis depend mainly on clinical and histopathological correlation, the statistical significance of intraepidermal FOXP3 positivity comparing with inflammatory dermatosis allow us to include this antibody to help defining the diagnosis or giving support to suspect cases morfologically dubious of mycosis fungoides

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-14Bitstream added on 2014-06-13T19:01:28Z : No. of bitstreams: 1 godoy_av_dr_jabo.pdf: 494650 bytes, checksum: d27d9898dce60f32a0eece2e8cdaf032 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo teve como objetivos avaliar seqüencial e temporalmente o quadro leucocitário de dez cães portadores de linfoma em remissão, submetidos à alta dose de ciclofosfamida, durante o uso do estimulador de colônia de granulócitos (GCSF, filgrastine) seguido ou não do transplante autólogo de medula óssea (TMO), bem como quantificar células CD34+ no sangue periférico dos referidos cães. Para tal avaliação foram utilizados três grupos experimentais, sendo o grupo 1 (G1) formado por cinco animais em remissão de linfoma que passaram por alta dose de ciclofosfamida e TMO seguido do uso de G-CSF; o grupo 2 (G2) formado por cinco animais em remissão de linfoma que sofreram alta dose de ciclofosfamida seguida do uso de G-CSF e o grupo 3 (G3) formado por dez animais saudáveis que receberam apenas o G-CSF. O transplante consistiu na colheita de medula óssea, preparo e congelamento da bolsa que continha células medulares em suspensão, condicionamento do paciente com 500mg/m2 de ciclofosfamida, infusão das células hematopoéticas e aplicação do G-CSF. Para avaliar a recuperação hematopoética pós-transplante foi realizado leucograma e análise citométrica do sangue nos dias 7, 8, 9, 10 e 11 após condicionamento. O nadir médio dos neutrófilos segmentados (NS) no grupo com transplante de medula óssea (G1) foi 425 NS/mL, e no grupo sem TMO (G2) foi 637,4 NS/μL e ocorreu sete dias após alta-dose de quimioterápico em ambos os grupos. A duração média da neutropenia foi de três dias. Nenhum animal apresentou febre ou sepse após a alta dose de ciclofosfamida. A dose de 5μg/kg/dia durante quatro dias de filgrastine foi insuficiente na mobilização adequada de células CD34+ nos três grupos estudados, sendo necessários novos estudos para este propósito. Desta maneira, pode-se comprovar o fato de que o uso do G-CSF leva a reduções significativas na incidência... / The aims of this research were to provide an analysis of several counts of leucocytes values in dogs with lymphoma in remission phase, undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, during treatment with granulocyte colonystimulating factor (G-CSF, filgrastine), followed or not by autologous bone marrow transplantation (BMT), as well to quantify CD34+ cells of peripheral blood from that dogs. For this purpose, three experimental groups were considered. Five dogs in clinical remission undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide and BMT, followed by G-CSF use were included in group 1 (G1), while group 2 (G2) was consisted by five dogs undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, followed by G-CSF. Group 3 (G3) was composed of ten healthy dogs undergone to GCSF only. Transplantation consisted of bone marrow harvest, managing and freezing bags containing lifted marrow cells, cyclophosphamide conditioning (500mg/m2), hematopoietic cells infusion and treatment with G-CSF. After transplantation, hematopoietic recovery was evaluated by means of leukograms and flow cytofluorimetrical analysis on days 7, 8, 9, 10 and 11 after conditioning. Mean nadir neutrophil (NS) counts in group undergone transplantation (G1) was 425 NS/mL versus 637,4 NS/μL in group without BMT (G2). Nadir was observed on the seventh day after high-dose chemotherapy in both groups and neutropenia mean time was three days. Fever or sepsis was not observed in any dog after high-dose cyclophosphamide. Four days of filgrastine treatment in dose of 5μg/Kg, daily, was not enough to mobilize CD34+ cells appropriately in three groups analyzed, requiring new studies for this purpose. Considering these results, it is possible to conclude that G-CSF significantly reduces the incidence, severity and duration of neutropenia

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-01Bitstream added on 2014-06-13T18:41:54Z : No. of bitstreams: 1 munhoz_td_dr_jabo.pdf: 1806915 bytes, checksum: 10b016880b9017b3102afefa3e695dde (MD5) / O linfoma é a neoplasia hematopoiética mais comum nos cães e uma das mais frequentes, dentre todas as neoplasias, nesta espécie. Apresenta-se em diversas localizações anatômicas e pode apresentar classificações histológicas e imunofenotipos distintos. Dependendo da resposta imune do paciente frente à instalação de um tumor, algumas informações sobre o prognóstico podem ser obtidas. Atualmente, as células T reguladoras (Tregs) vêm sendo estudadas em algumas neoplasias caninas, por seu comprovado potencial imunossupressor, principalmente por inibir a resposta antitumoral. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos quantificar, por citometria de fluxo, as células Tregs em sangue periférico de cães com linfoma multicêntrico de imunofenótipos B e T, respectivamente 14 e 8 cães, no momento do diagnóstico e após o primeiro ciclo de quimioterapia antineoplásica com o protocolo Madison-Wisconsin (MW) de 19 semanas adaptado, e comparar com cães saudáveis (n=10), buscando quantificá-las em cães com linfoma de diferentes imunofenótipos antes e após a 5ª semana do protocolo MW. Os resultados mostraram que cães com linfoma apresentaram uma porcentagem significativamente maior de Tregs (18,84±2,56) quando comparada aos cães sem neoplasia (4,70±0,50) (p<0,01). Além disso, após a 5ª semana de tratamento houve uma significante redução da população de Tregs (7,54±1,08), atingindo valores semelhantes a dos cães controle (4,70±0,50) (p>0,05). Não houve diferença nas Tregs em relação aos imunofenotipos B (17,45±2,77) e T (21,27±5,27) (p>0,05). Concluiu-se que o linfoma em cães leva a um aumento de células Tregs e que o tratamento com o protocolo quimioterápico MW reduz significativamente as células Tregs em sangue periférico, atingindo valores próximos aos dos cães saudáveis / Lymphoma is the most common hematopoietic malignancy in dogs and one of the most frequent among all neoplastic diseases in this species. It can occur in several anatomical locations with distinct histological and immunophenotypes. Depending on the host immune response towards the tumor, prognosis information could be collected. Because its well established immunosuppressant, antitumor activity, the function of regulatory T cells (Tregs) in canine neoplasias has been investigated. In this study, we sought to quantify, using flow cytometry, the Tregs subpopulation in peripheral blood of healthy dogs (10) and in those diagnosed with type-B (14) and type-T (8) multicentric lymphoma before (at diagnosis) and after the first cycle (5-week) of 19-week Madison- Wisconsin (MW) protocol of chemotherapy. Our results indicated that dogs with lymphoma showed higher percentage of Tregs (18,84±2,56) when compared to healthy dogs (4,70±0,50) (p<0,01). In addition, 5-week chemotherapy treatment reduced the Tregs subpopulation (7,54±1,08) to levels similar to control (4,70±0,50) (p>0,05). There was no difference in Tregs percentage between B-type (17,45±2,77) and T-type (21,27±5,27) lymphoma (p>0,05). With this, we conclude that canine lymphoma increases Tregs in the peripheral blood and the MW protocol of chemotherapy reduces this cell subpopulation to control values

Butirato sódico (NaB), um potente inibidor da desacetilação de histonas, inibe o crescimento celular e induz apoptose em células neoplásicas. Investigou-se, in vitro, os efeitos na proliferação celular do tratamento combinado de NaB e fármacos comumente empregados no tratamento de leucemias. A linhagem de células T linfoblásticas, Jurkat, foi cultivada em meio RPMI suplementado com 10% de FBS. As células foram tratadas com bleomicina, citarabina, doxorubicina, etoposideo, metotrexato, vincristina e NaB. A proliferação e viabilidade celular foram avaliadas 48h após os tratamentos. Nossos resultados mostraram que NaB aumenta os efeitos citotóxicos de citarabina e etoposideo, mas não de bleomicina, doxorubicina, metotrexato ou vincristina. Estes dados sugerem que NaB é um promissor agente terapêutico adjuvante para o tratamento de leucemias linfoblásticas, e proporcionam uma base para futuras investigações neste campo.