Orientador: Lireny A. G. Gonçalves / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-21T21:01:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Facioli_NaraLucia_M.pdf: 2028978 bytes, checksum: 42ef0768cab3e66fadf6104b5b648a08 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Os sistemas enzimaticos têm apresentado bons resultados sobre os processos químicos convencionais nas transformações de óleos e gorduras, onde são necessários normalmente um grande numero de reações. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: Enzymatic systems have been shown good results over conventional chemical processes for fats and oils modifications, where a great number of reactions are needed. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Glaucia Maria Pastore / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-23T12:37:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_PatriciadeOliveira_D.pdf: 12925195 bytes, checksum: e29bd5a54910d5259b80811b0f34342f (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O presente trabalho relata o estudo das reações de hidrólise e esterificação catalisadas por novas lipases microbianas isoladas no Laboratório de Bioquímica de Alimentos (FEA - UNICAMP), pertencentes ao gênero Rhizopus sp, Geotrichum sp, Aspergillus sp e Alcaligenes sp e a lipase comercial de Candida cylindracea visando o enriquecimento em ácidos graxos poliinsaturados (AGPI) o óleo de sardinha (Sardinella brasiliensis) e o óleo de fungo (Mucor sp). As lipases de Rhizopus sp (específica posicionalmente), Geotrichum sp (especificidade para ácidos graxos de cadeia longa com dupla ligação cis na posição 9) e Candida cylindracea (inespecífica posicionalmente), selecionadas para o estudo, promoveram aumento significativo nos níveis de ácido gama­linolênico (GLA) em óleo de Mucor sp e de ácido eicosapentaenóico (EP A) e docosahexaenóico (DHA) em óleo de sardinha. As frações de acilgliceróis e ácidos graxos livres resultantes da ação enzimática foram separados por cromatografia em camada delgada (CCD), quantificadas por cromatografia em camada delgada com detector de ionização de chama (CCD - DIC) e, analisadas quanto à composição em ácidos graxos por cromatografia à gas (CG). A lipase de Rhizopus sp nas condições ótimas de reação se mostrou a mais eficiente na reação de hidrólise entre as lipases testadas. Esta lipase hidrolisa mais eficientemente o substrato óleo de Mucor sp do que o óleo de sardinha. Após 8 horas de reação hidrolítica resultaram 18,5% de GLA em relação aos ácidos graxos totais da constituição do óleo de Mucor sp (óleo original contendo 11,4% de GLA). A lipase de Candida cylindracea demonstrou alta eficiência na catálise da hidrólise do óleo de sardinha. O nível de DHA foi duplicado após 16 horas de reação hidrolítica, enquanto que o nível de EP A mostrou um acréscimo de 35% em relação a quantidade presente nos acilgliceróis antes da hidrólise. A lipase de Geatrichum candidum demonstrou baixa atividade hidrolítica para os substratos analisados, entretanto alta capacidade da esterificação. A esterificação preferencial de ácidos graxos monoinsaturados (16:1 e 18:1) com n-butanol por esta enzima levou a um acréscimo de 3,4 vezes do conteúdo de GLA nos ácidos graxos não esterificados do óleo de Mucar sp em relação ao valor presente no tempo zero da esterificação. As lipases microbianas não apresentaram boa eficiência na reação de esterificação usando o álcool glicerol nas condições analisadas. Nos acilgliceróis formados (triacilglicerol, diacilglicerol e monoacilglicerol) separados por cromatografia em camada delgada e analisados por cromatografia à gás foram detectados quantidades insuficientes de AGPI para possibilitar o seu enriquecimento / Abstract: The present work reports the study of the hydrolysis and etherification reactions catalyzed by microorganism lipases, which were isolated at the "Laboratorio de Bioquímica de Alimentos - FEA - UNICAMP", belonging to Rhizopus sp, Geotrichum sp, Aspergillus sp and the commerciallipase Candida cylindracea. The aim was the enrichment of polyunsaturated fatty acids (PUF A) on sardine oil (Sardinella brasiliensis) and fungal oil from Mucor sp. The lipases of Rhizopus sp (1,3 - positional specificity), Geotrichum sp (specific for the long chain fatty acids with cis double link on position 9) and Candida cylindracea (unspecific positionally), chosen for the study, provided an expressive increase in the concentration of gamma-linolenic acid (GLA) on the fungal oil from Mucor sp and in the concentration of eicosapentaenoic (EPA) and docosahexaenoic (DHA) acids on sardine oil. The fractions of glycerides and free fatty acids, obtained from an enzymatic action, were separated by thin-layer chromatography (TLC), quantified by thin layer chromatography - flame ionization detector (TLC-FID) and had the fatty acids composition analyzed by gas chromatography (CG). The lipase from Rhizopus sp, in optimum reaction conditions, was found to be the most efficient for the hydrolysis reaction among all the lipases tested. This lipase hydrolyzes the substrate oil from Mucor sp much more efficiently than the sardine oil. After 8 hours of hydrolytical reaction, 18.5% of GLA were obtained, in relation to all the fatty acids that compose the oil from Mucor sp (original oil contains 11.4% of GLA). Candida cylindracea's lipase showed high efficiency for the hydrolysis catalysis of sardine oil. DHA's concentration was doubled after 16 hours of hydrolytical reaction while EPA's concentration increased 35 % in relation to the situation before the hydrolysis. Geatrichum candidum's lipase showed a low hydrolytical activity for the analyzed substrates, but a high etherification capability. This enzyme esterificated chiefly monounsaturated fatty acids with buthanol and GLA's concentration in the unesterificated fatty acids of the oil from Mucar sp increased 3.4 times if compared to the situation before the reaction. Microorganisms lipases were found to be less effective in the esterification, when glycerol was used at the analyzed conditions. In the formed glycerides (triglyceride, diglyceride e monoglyceride), which were separated by thin-layer chromatography and analyzed by gas chromatography, not a sufficient quantity of polyunsaturated fatty acids was found to make the enrichment possible / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Glaucia Maria Pastore / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T12:00:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cruz_ViniciusD'Arcadia_M.pdf: 15405703 bytes, checksum: c813afa628cd4e9baa7d0516ea1f7eeb (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: As lipases são dotadas de ação hidrolítica sobre óleos e gorduras, produzindo ácidos graxos, glicerol, monoglicerídeos e/ou diglicerídeos. Além disso, lipases produzidas por Penicillium roqueforti, Penicillium camemberti e Geotrichum candidum contribuem para a produção de aroma e sabor característicos em queijos do tipo "Blue Cheese", os quais são desenvolvidos, principalmente, pela presença de metilcetonas. Nos últimos tempos, alguns autores vêm discutindo a possibilidade do emprego de algumas espécies de Aspergillus na produção de concentrados destes compostos, para utilização em produtos alimentícios com aroma de "Blue Cheese". Este trabalho teve como objetivo otimizar a produção de metilcetonas utilizando lipase extracelular de Aspergillus sp. pré selecionada. Para produção da lipase utilizou-se um meio de cultivo com farelo de trigo e as melhores condições para esta produção foram 60% de umidade após 120 horas de incubação a 35°C. Como substratos foram testados creme de leite de vaca, creme de leite de cabra e gordura de coco sendo que, apenas o úWmo foi considerado adequado devido ao seu conteúdo de ácido láurico (C-12:0) pelo qual a lipase utilizada mostrou afinidade. Neste substrato, a maior produção de metilcetonas totais foi 4,43 mg/g, obtida em pH 5,0 após 48 horas de incubação a 30°C. Nestas condições a metilcetona produzida em maior quantidade foi a 2-heptanona equivalendo a 3,98 mg/g de óleo de coco. Este pode ser considerado um bom resultado com potencialidade para aplicação industrial / Abstract: Lipases are able to hydrolyse oi! and fats, producing fat acids, glicerol, monoglicerides and/or diglicerides. Besides, lipases from Penicillium roqueforti, Penicillium camembertiand Geotrichumcandidum contribute to the aroma and characteristic flavor production of the "blue cheese" that are developed, mainly, by the methyl ketones presence. Lately some authors have been discussing the possibility of employementof some Aspergillus strains in the production of concentrated of these compounds for obtaining of nutritious products containing "blue cheese" aroma.The aim of this work was to optimize the methyl ketones productionby a Aspergillussp strain, previouslyselected as extracellular lipase producer. For lipase roduction,wheat bran was utilized as culture medium and the best conditionswere found with 60% of humidity, after 120 h of incubation, at 35°C. For methyl ketone synthesis cow and goat cream milk and coconut fat were tested as substract and only the latter was considered appropriated due to its lauric acid (C-12:0) with which fhe used lipase showed affinity. In this substrate, the largest total methyl ketones productionwas 4,43 mg/g, obtained in pH 5,0, after 48 h of incubation, at 30°C. In that condition, 2-heptanonewas the principal methyl ketone produced rising to 3.98 mg/g of coconut oi!. This can be considered a good result with potentialityfor industrialapplication / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-03-20T15:18:41Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Michel N. . L. Chamy.pdf: 2430038 bytes, checksum: bc50e942903b21244ca7ac171c9bdf42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-03-20T15:18:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação_Michel N. . L. Chamy.pdf: 2430038 bytes, checksum: bc50e942903b21244ca7ac171c9bdf42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-20T15:18:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Michel N. . L. Chamy.pdf: 2430038 bytes, checksum: bc50e942903b21244ca7ac171c9bdf42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-07-28 / The mutualist relationship between the attines and microorganisms, although much studied, has not yet been fully elucidated. What is known is that the ants of the Attini tribe contain at least four associated microorganisms and several other parasites. Considering that microbial enzymes are currently the most used in industrial and biotechnological processes, the present work has the objective of identifying fungi associated with cutter ants Atta sexdens producing enzymes of biotechnological interest, aiming to evaluate the extracellular production of these biomolecules with catalytic activity. Cutting ants were collected in CAPMEDSOL / Coari-AM. Twenty - nine fungi were isolated and, after enzymatic screening, the most promising fungi submitted to morphological and molecular analyzes. The most expressive fungi were: Aspergillus zonatus - I = 4,4 (amylase), Aspergillus aculeatus - I = 4,8 (lipase), Rhizomucor variabilis - I = 5,33 (cellulase) and Penicillium citrinum - I = 5 , 46 (protease). After sorting, the best protease producer was subjected to quantification and enzymatic characterization using azocasein as the substrate. The crude enzymatic extract of the fungus Penicillium citrinum presented better enzymatic activity at neutral pH (7.0) with a temperature of 40 ° C, with catalytic activity equivalent to 326 U / mL. The microbial growth curve showed that the ideal fermentation time was 72 h. / A relação mutualista entre as attines e micro-organismos apesar de muito estudada ainda não está completamente elucidada. O que se sabe é que as formigas da tribo Attini contêm pelo menos quatro micro-organismos associados e vários outros parasitas. Tendo em vista que, atualmente as enzimas de origem microbiana são as mais utilizadas em processos industriais e biotecnológicos, o presente trabalho tem por objetivo identificar fungos associados as formigas cortadeiras Atta sexdens produtores de enzimas de interesse biotecnológico, visando avaliar a produção extracelular dessas biomoléculas com atividade catalítica. As formigas cortadeiras foram coletadas no CAPMEDSOL/Coari-AM. Foram isolados 29 fungos e após triagem enzimática, os fungos mais promissores submetidos a analises morfologias e moleculares. Os fungos com resultados mais expressivos foram: Aspergillus zonatus – I=4,4 (amilase), Aspergillus aculeatus – I=4,8 (lipase), Rhizomucor variabilis – I=5,33 (celulase) e Penicillium citrinum – I=5,46 (protease). Após a triagem, o melhor produtor de proteases foi submetido a quantificação e caracterização enzimática usando como substrato a azocaseína. O extrato enzimático bruto do fungo Penicillium citrinum apresentou melhor atividade enzimática em pH neutro (7,0) com temperatura de 40°C, com atividade catalítica equivalente a 326 U/mL. A curva de crescimento microbiana mostrou que o tempo ideal de fermentação foi 72 h.

Orientadores : Everson Alves Miranda, Gustavo Paim Valença / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-02T16:31:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HaberPerez_Victor_D.pdf: 3235735 bytes, checksum: c84db1347546f8cb4db20cc0b7e2df85 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A conversão enzimática de substratos gasosos constitui um avanço recente na engenharia de bioprocessos. Estes sistemas apresentam importantes vantagens quando comparados com os sistemas líquidos (aquosos ou em fase orgânica), as quais incluem condições de transferência de massa mais favoráveis, possibilidade de reciclo do biocatalisador e uma recuperação mais simples dos produtos, entre outras. Algumas das aplicações potencias da biocatálise em fase gasosa incluem a destoxificação de correntes gasosas, o desenvolvimento de biossensores e a síntese de diversos produtos orgânicos incluindo fármacos, fragrâncias e aromas para a indústria de cosméticos e de alimentos. Este trabalho apresenta, os resultados experimentais do estudo cinético da reação de esterificação e hidrólise de acetato de etila em fase gasosa catalisada por dois biocatalisadores: a) Lipase PS (Amano, Japão) imobilizada em suportes de óxidos puros e mistos de Si/Mg com tamanhos de poros controlados e b) Lipozyme IM (Novo Nordisk, Dinamarca). O sistema experimental, operando continuamente em regime diferencial, é constituído por três blocos: 1) bloco de preparação dos substratos, onde é usado He como gás de arraste que gera correntes gasosas em equilíbrio com as fases líquidas; 2) bloco de reação, formado por um reator tubular de vidro; e 3) bloco de aquisição de dados, constituído por um cromatógrafo a gás e um computador, conectados em linha. Variações na quantidade de biocatalisador não mostraram a existência de limitações por transferência de massa para as mesmas condições de reação. Desta forma, a cinética da reação foi estudada em função da concentração de acetato de etila e do teor de água no sistema, mantendose constante a temperatura de reação a 45°C, sendo que o teor de água no sistema mostrou ser um parâmetro importante no processo, conforme relatado na literatura. Foi proposto um mecanismo de reação, cuja equação da taxa avaliada em função da temperatura, para este sistema Bi-Bi, permitiu estimar a energia de ativação como sendo 24,8 kJ/kmol. A ordem de reação global caracterizada como de primeira ordem mostrou uma dependência de primeira ordem em relação às concentrações dos substratos. Finalmente, são discutidos os resultados do efeito do comprimento das cadeias do substrato sobre o desempenho da reação a partir da hidrólise do acetato de etila e butila / Abstract: Enzymes supported in a solid phase catalyzing reactions with substrates and products in gaseous phase constitute a recent progress in the biotechnology. It has technological applications that include: toxic gas remediation, biosensors and synthesis of pharmaceutical, fragrances and aromas for the food industry and cosmetics. This work presents, the experimental results of the kinetic study of the esterification and hydrolysis reactions of ethyl acetate in gaseous phase catalyzed by two biocatalysts: the) Lipase PS (Amano, Japan) immobilized in supports of pure and mixed oxides of Si/Mg with controlled pore and b) Lipozyme 1M (Novo Nordisk, Denmark). The experimental system is formed by three blocks: the first is responsible for the preparation of the substrates in gaseous phase, considering that a carrier gas, after bubbling in a substrate, is in equilibrium with the liquid phase, and so the partial pressure of the substrate in the gas leaving the saturation flask is equal to the vapor pressure corresponding to the bubble point pressure above the pure compound. The second is the reaction block and the last block is formed by the gas chromatography and acquisition of data systems on-line connected. Variations in the amount of biocatalyst did not show the existence of limitations for mass transfer for the same reaction conditions. This way, the reaction kinetics was studied as a function of the ethyl acetate and water concentration with a constant reaction temperature of the 45°C. The water showed to be an important parameter in the process, as reported in the literature. A reaction mechanism Bi-Bi was proposed. The activation energy as being 24,8 kJ/kmol was calculated. The order of global reaction (determined as 1) showed a dependence of first order in relation to the substrate concentrations. Finally, the results of the effect of the length of the chains of the substrate in the hydrolysis reactions of the ethyl and butyl acetate are discussed. / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Orinetador: Lucia H. I. Mei, Heizer F. de Castro / Dissertação (mestrado) Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-24T19:55:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_PedroCarlosde_M.pdf: 3670019 bytes, checksum: 1750f840fd2ae5a5aca7f98597089d55 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Este trabalho teve como finalidade principal obter um derivado ativo estável da lípase de Cândida rugosa através de sua imobilização em um suporte de natureza polimérica. Foram testadas duas potenciais matrizes, o polimetllolacrilamida (PNMA) e o copolímero de divinilbenzeno-estireno (STYDVB), em função de suas características satisfatórias em termos de resistência ao impacto e à tração, aliadas ao seu grau de dureza e termoestabilidade. A enzima lípase foi imobilizada por adsorção nessas resinas, usando tampão fosfato de sódio (0,1M, pH 7,0) ou heptano com meio dispersante, sendo selecionado para estudos posteriores, o derivado delipase imobilizada em STYDVB obtido em presença de heptano. Tanto a lípase livre como a lípase imobilizada em STYDVB foram caracterizadas através da determinação do perfil de atividade em função do pH e temperatura, estabilidade térmica e, para o caso da lípase imobilizada, determinou-se q estabilidade operacional, em bateladas consecutivas, e à estocagem. Os resultados experimentais demonstraram que a lípase livre apresentou um pH ótimo de 8,0 e a imobilizada apresentou um pH ótimo de 7,5, ambas a temperatura de '37GRAUS¿C. A lípase imobilizada foi desativada somente em temperaturas superiores a '50GRAUS¿C, retendo praticamente 100% de sua atividade inicial na faixa de temperatura entre 37-'50GRAUS¿C por cerca de 60 minutos / Abstract: The objective of this work was to prepare an active and stable derivative of a microbial lipase (Candida rugosa), through its immobilization onto polymeric resins. Two potential matrixes were tested, polymetylolacrilamide (PNMA) and styrenedivinylbenzene copolymer (STYDVB), using different dispersion media (aqueous medium - buffer solution 0,1M of sodium phosphate pH 7,0 and organic medium - heptane). The immobitized Candida rugosa was more active when the coupling procedure was performed by physical adsorption on styrene-divinylbenze copolymer in the presence of heptane. Both free and immobilized lipase on STYDVB were characterized by determining: activity profile as a function of pH, temperature and thermal stability. For the immobilized lipase, operational and storing stabilities were also determined. Experiments results demonstrated that free lipase showed a pH optimum of 8.0 at temperature of 37¿GRAUS¿C, while the immobilized enzyme in the same temperature had 7.5 as the optimum pH. The immobilized lipase showed thermal inactivation only at temperature above 50°C, having retained practically 100% of its initial activity for temperature from 37-'50GRAUS¿C, for 60 minutes. The catalytic activity of the lipase immobilized on STYDVB was also verified in the synthesis of butylbutyrate by studying the influence of two variables: molar ratio between butanol and butyric acid and enzyme concentration on the butanol conversion rate. Under suitable reaction conditions, esterification yields as high as 90% were attained. / Mestrado / Mestre em Engenharia Química

Submitted by Nathália Neves (nathalia.neves@ufpe.br) on 2015-03-05T18:28:51Z No. of bitstreams: 2 Dissertação de Mestrado FINAL 2_2.pdf: 931387 bytes, checksum: 8c678d9ee4559050331bdc307a7e62f9 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T18:28:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação de Mestrado FINAL 2_2.pdf: 931387 bytes, checksum: 8c678d9ee4559050331bdc307a7e62f9 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-09 / CAPES / Devido a grande necessidade de reduzir danos ambientais, pelo descarte de resíduos da indústria alimentícia, objetivou-se tratar biologicamente o efluente sólido do efluente de uma indústria de sorvetes, localizada na região metropolitana do Recife, PE, Brasil, utilizando os gêneros Mortierella, Cunninghamella e Mucor, pertencentes à classe Zygomycetes, ordem Mucorales, por possuírem grande capacidade de resistência aos altos índices de contaminação, de acordo com a literatura, produzindo enzimas biocatalíticas. As 19 linhagens pertencem a Coleção de Cultura URM do Departamento de Micologia da Universidade Federal de Pernambuco foram submetidas aos ensaios de capacidade de crescimento nas concentrações 5, 10 e 15% do resíduo; diminuição da Demanda Química de Oxigênio (DQO) e Demanda Bioquímica de Oxigênio (DBO), consumo de nitrogênio, potássio e fósforo e produção de lipases. Inicialmente as linhagens foram selecionadas pela capacidade de crescerem em placas de Petri, contendo meio ágar água destilada, acrescido de 15% (m/v) do resíduo de sorvete. Depois foram realizados os ensaios em caldo resíduo de sorvete (15% m/v), com 17 dias de cultivo, para avaliação da biodegradabilidade e um controle abiótico. As linhagens Cunninghamella elegans URM6017 e URM5780 mostraram-se mais eficientes com a diminuição de 98,98% e 98,09 de DQO e 98,59% e 97,08 de DBO, respectivamente. Enquanto que no controle abiótico ocorreu uma diminuição de 92,49% de DQO e 92,57% de DBO e o nitrogênio de 20,83% e potássio de 98,02%. A linhagem URM 6017 apresentou um consumo de 66,07% de nitrogênio total e 99,85% de potássio. Durante o experimento os valores de pH variaram de 4,97 para o controle abiótico a 7,51 para URM6017 e de 6,92 para URM5780, ao final do processo. A atividade lipolítica das linhagens URM6017 foi de 2,01 U/mL utilizando como substrato o resíduo de sorvete e de 4,61 U/mL com o resíduo de sorvete adicionado de azeite de oliva e para a URM5780 foi de 2,73 U/mL e 3,84 U/mL, respectivamente. Das 19 linhagens estudadas, duas linhagens de Cunninghamella elegans URM6017 e URM5780 mostraram-se eficientes na redução da matéria orgânica contida no resíduo de sorvete.

>Magister Scientiae - MSc / There has been a decline in the global fossil fuel reserves, due to an increasing demand for petroleum. Biofuels can be used as an alternative source of energy whereby biomass is converted to liquid fuels such as bioethanol. There is considerable interest in lipolytic enzymes because of their broad substrate range and for this purpose these enzymes have potential in a variety of biotechnological application. Lipolytic enzymes include esterases (E.C 3.1.1.1) and lipases (E.C3.1.1.3). Esterases preferentially hydrolyse short chain (<C10) ester-containing molecules that are partly soluble in water, while lipases hydrolyse a broad range of substrates preferably water-insoluble fatty acyl molecules (>C10). The aim of this study was to express, purify and characterise the lipolytic enzyme present on afosmid, Try 11, previously isolated from a metagenomic library of a Malawian hotspring, which conferred activity on tributyrin and ethyl ferulate. Bioinformatic analysisof the fosmid insert sequence predicted an open reading frame consisting of 951 bp,designated RHgene34, encoding a 317 amino acid protein with 41 % similarity to theα/β hydrolase fold-3 domain protein of Burkholderia sp. The RHgene34 protein contains conserved motifs of esterases/lipases, such as HGGG (residues 95-98),GxSxG (residues 167 - 171) and the putative catalytic triad composed of Ser157,Asp255 and His285. The gene was cloned and expressed in pET21a(+), and transformed into Escherichia coli Rosetta. p-Nitrophenol (p-Np) fatty acyl esters of different carbon chain lengths were used for kinetic characterisation of RHgene34. Kinetic analysis revealed that RHgene34 had a broad range activity on the p-Npesters, from C2 - C14. RHgene34 operates optimally at 45 ºC, pH 9.0 and has a half life of 30 mins at 45 ºC. This study demonstrates that functional screening combined with the sequence analysis is a useful approach for isolating novel enzymes from ametagenome.

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