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Suplementação com óleo de soja para eqüinos / Supplementation with soybean oil for equine

Pastori, Waleska Tobo 14 December 2007 (has links)
Em um delineamento em Quadrado Latino 4X4 balanceado, foram utilizados quatro potros, filhos do mesmo garanhão, com idade entre 10 e 12 meses e peso médio de 270 kg (dp ± 9,80 Kg). Foram analisados os efeitos, por regressão simples polinomial, da inclusão dos níveis de 5, 10, 15 e 20 % de óleo de soja, no concentrado, sobre aceitabilidade, coeficiente de digestibilidade aparente da matéria seca (CDAMS), matéria orgânica (CDAMO), proteína bruta (CDAPB), extrato etéreo (CDAEE), fibra insolúvel em detergente neutro (CDAFDN), em detergente ácido (CDAFDA) e sobre a concentração plasmática de colesterol total (COL) e suas frações nas lipoproteína de densidade muito baixa (VLDL-C), lipoproteína de densidade baixa (LDL-C), lipoproteína de densidade alta (HDL-C) e triglicérides totais (TRG). O aumento do nível de inclusão de óleo afetou (p<0,05) o CDAMO, CDAFDN e CDAFDA, apresentando uma resposta quadrática, com diminuição da digestibilidade após o valor esperado de 10,7%, 9,5% e 10,5% EE na dieta, respectivamente. Observou-se resposta linear (p<0,05) dos tratamentos sobre a concentração plasmática de colesterol e LDL-C, apresentando diminuição 0,65 mg/dL de colesterol e 0,58 mg/dL de LDL-C para cada 1% de aumento no EE no concentrado. A inclusão de óleo de soja afetou a digestibilidade da dieta, principalmente na fração parede celular e diminuiu a concentração plasmática de colesterol e HDL-C. / In a balanced 4x4 Latin Square design, 04 foals from the same stallion were used. They aged between 10 and 12 months and their average weight was 270±9.80 kg. The effects of soybean oil inclusion at the concentrated on acceptability, coefficient of apparent digestibility to dry matter (CADAMS), organic matter (CADOM), crude protein (CADCP), ethereal extract (CADEE), neutral detergent fiber (CADNDF), acid detergent (CADADF) and the plasma concentrations of total cholesterol (COL) and the fractions in Very Low Density Lipoprotein (VLDL - C), low-density lipoprotein (LDL-C), high-density lipoprotein (HDL-C) and total triglycerides (TRG), at the following levels of 5, 10, 15 and 20%, were analyzed by simple polynomial regression. Increase in the level of oil inclusion affected (P<0.05) CADOM, CADNDF and CADADF, showing a quadratic response. For those parameters, digestibility was decreased after inclusion of 10.7%, 9.5% and 10.5 of EE% in the diet, respectively. There was a linear response (P<0.05) to the treatments on the cholesterol plasma concentration and LDL-C; each 1% of increase in EE on the diet caused a decreased of 0.65 mg/dL on cholesterol and 0.58 mg / dL on LDL-C. The inclusion of soybean oil affected the digestibility of the diet, mainly on cell wall fraction, and decreased the concentration of plasma cholesterol and HDL-C.
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Treinamento físico aeróbio em camundongos selvagens e transgênicos para CETP não altera a remoção de colesterol celular e a expressão de genes envolvidos no fluxo de lípides em macrófagos e arco aórtico / Aerobic exercise training in wild type and CETP transgenic mice does not affect cellular cholesterol removal and expression of genes involved in lipid lipid flux in macrophages and aortic arch

Pinto, Paula Ramos 03 July 2015 (has links)
O exercício físico regular contribui para prevenção e redução da aterosclerose, em grande parte, por melhorar o perfil lipídico e o transporte reverso de colesterol (TRC). O TRC é um sistema antiaterogênico que promove a remoção do excesso de colesterol de macrófagos pelas apo A-I e HDL e seu transporte ao fígado, com eliminação de colesterol na bile e fezes. Em camundongos selvagens e transgênicos para proteína de transferência de colesterol esterificado (CETP-tg), o treinamento físico aumentou a transferência de colesterol radioativo de macrófagos para o plasma, fígado e fezes e o conteúdo dos receptores B-E e SR-BI no fígado. Em leucócitos, hepatócitos e enterócitos, o exercício físico aumentou a expressão do receptor de HDL, ABCA-1. Entretanto, não é claro se o exercício físico modula o fluxo de lípides em macrófagos, o que seria determinante para a primeira etapa do TRC. Assim sendo, avaliou-se, em camundongos selvagens e CETP-tg, o efeito do treinamento físico aeróbio sobre: 1) a expressão de genes envolvidos no fluxo de lípides, modulação da resposta inflamatória, vasodilatadora e antioxidante: Pparg (PPAR?), Nr1h3 (LXRalfa), Nr1h2 (LXRbeta), Abca1 (ABCA-1), Abcg1 (ABCG-1), Scarb1 (SR-BI), Cd36 (CD-36), Olr1 (LOX-1), Ccl2 (MCP-1), Tnf (TNFalfa), Il6 (IL-6), Il10 (IL10), Nos3 (eNOS) e Cat (Catalase) na parede arterial e em macrófagos peritoneais; 2) o efluxo de 14C-colesterol de macrófagos peritoneais para HDL2 e apo A-I e 3) a captação de 3H-colesteril oleoil éter-LDL (3H-COE-LDL) acetilada por macrófagos peritoneais. Camundongos machos com 12 semanas de idade, recebendo dieta padrão e água ad libitum, foram aleatoriamente divididos em grupo sedentário e treinado. O treinamento físico foi realizado em esteira, 15m/min, 30 min/dia, 5 vezes/semana, durante 6 semanas. Arco aórtico e macrófagos da cavidade peritoneal foram isolados dos animais sedentários e treinados, imediatamente (0 h) e após 48 h da última sessão de exercício. A expressão de genes foi avaliada por RT-PCR e o efluxo de colesterol, por meio da sobrecarga de macrófagos peritoneais com LDL acetilada e 14C-colesterol, seguindo-se incubação com apo A-I ou HDL2. A captação de LDL foi determinada pela incubação de macrófagos com 3H-COE-LDL acetilada. Não foram observadas alterações sistemáticas na expressão de genes envolvidos no fluxo de lípides em macrófagos e na aorta comparando-se animais sedentários e treinados, selvagens ou CETP-tg. De modo semelhante, não houve diferença no efluxo de colesterol celular e na captação de LDL. Em conclusão, não foram evidenciadas alterações em macrófagos peritoneais e na parede arterial frente ao treinamento físico aeróbio que possam contribuir para o TRC em modelo experimental de camundongos não dislipidêmicos, sem intervenção farmacológica ou alimentar. Sendo assim, o efeito do treinamento físico na melhora do transporte reverso de colesterol, observado em estudos anteriores, deve ser consequente à sua ação sistêmica sobre mediadores deste transporte e expressão de receptores no fígado e intestino / Regular physical exercise prevents and reduces atherosclerosis mainly by improving lipid profile and reverse cholesterol transport (RCT). RCT is an antiatherogenic system that promotes excess cholesterol removal from macrophages by apo A-I and HDL and its transport to the liver. Then, cholesterol can be secreted into bile and excreted in feces. In wild type and cholesteryl ester transfer protein transgenic (CETP-tg) mice exercise training increased the transfer of 14C-cholesterol from macrophages to plasma, liver and feces and elevated SR-BI and B-E receptor content in the liver. In leucocytes, hepatocytes and enterocytes, physical exercise increased mRNA of HDL receptor, ABCA-1. Nonetheless, it is not clear if exercise can modulate lipid flux in macrophages that can be important for the first phase of the RCT. It was analyzed in wild type and CETP-tg mice the effect of aerobic exercise training in: 1) the expression of genes involved in lipid flux, inflammation, oxidation and vasodilation: Pparg (PPAR?), Nr1h3 (LXRalfa), Nr1h2 (LXRbeta), Abca1 (ABCA-1), Abcg1 (ABCG-1), Scarb1 (SR-BI), Cd36 (CD-36), Olr1 (LOX-1), Ccl2 (MCP-1), Tnf (TNFalfa), Il6 (IL-6), Il10 (IL10), Nos3 (eNOS) and Cat (Catalase) in arterial wall and peritoneal macrophages; 2) the apo A-I and HDL2-mediated cholesterol efflux from macrophages and 3) the uptake of 3H-cholesteryl oleoyl ether- acetylated LDL (3H-COE-LDL) by macrophages. Twelve week old male mice fed a chow diet and water ad libitum were randomly assigned to sedentary and trained groups. Exercise training was performed in a treadmill (15m/min, 30 min/day, 5 times/week, during 6 weeks). Aortic arch and peritoneal macrophages were isolated from sedentary and trained animals immediately (time 0) and 48 h after the last exercise session. Gene expression was analyzed by RT-PCR and cholesterol efflux mediated by apo A-I or HDL2 after macrophage overloading with acetylated LDL and 14C-cholesterol. LDL uptake by macrophages was determined by incubation with 3H-COE-acetylated LDL. There were no systematic changes in the expression of macrophages and aortic genes comparing sedentary and trained wild type or CETP-tg mice. Similarly, there were no changes in cholesterol efflux and LDL uptake by macrophages. In conclusion, it was not found alteration in gene expression and cholesterol flux in macrophages and arterial wall that can contribute to the RCT in experimental model of non-dyslipidemic mice without pharmacological or dietary interventions. Therefore, the benefits of aerobic training in improving RCT, observed in previews studies, should be consequent to its systemic action on mediators of this transport and on the expression of hepatic and intestinal receptors
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Captação celular de uma nanoemulsão semelhante a LDL (LDE): efeito da variação na composição química e expressão de receptores de lipoproteínas / Low density lipoprotein like (LDE) nanoemulsion cell uptake: chemical composition and lipoprotein receptor expression

Almeida, Cristina Pio de 11 August 2010 (has links)
A nanoemulsão LDE tem composição lipídica semelhante à da LDL natural e é utilizada para estudos do metabolismo da LDL. Estudos anteriores mostraram que a LDE é captada pelas células pelo LDL-r, porém outros receptores podem estar envolvidos nesta captação, como LRP-1, CD36 e CD68. Os objetivos deste estudo foram: investigar a captação da LDE por células endoteliais, fibroblastos, monócitos, macrófagos e H292, identificar os receptores envolvidos na captação da LDE pelas mesmas células e avaliar os efeitos da modificação química da LDE sobre a estabilidade, captação celular, lipoperoxidação celular e citotoxicidade. A LDE marcada com [3H]-colesterol livre e [14C]-éster de colesterol foi incubada por 4 horas com as linhagens celulares. Após a incubação, foram realizados os testes de captação da LDE e competição da LDE com a LDL natural. A expressão dos receptores LDL-r, LRP, CD36 e CD68 foi avaliada pelos métodos de imunocitoquímica, citometria de fluxo e PCR real time. Para investigar os efeitos da modificação da LDE (LDE-CO), o éster de colesterololeato de colesterol (monoinsaturado), foi substituído por linoleato de colesterol (LDE-CL) (poliinsaturado) e por estearato de colesterol (LDE-CE) (saturado). Estas nanoemulsões foram submetidas a testes de estabilidade (tamanho, polidispersão, pH e peroxidação), captação celular, peroxidação lipídica celular e citotoxicidade. Nos resultados, foi observado que todas as células estudadas internalizaram o colesterol livre e éster de colesterol proporcionalmente às concentrações de LDE-CO incubadas com diferença de saturação entre elas, sendo o colesterol livre mais captado que o éster de colesterol da LDE-CO por todas as células estudadas. Além disso, os monócitos (THP-1) demonstraram maior captação de LDE-CO que as demais células. No estudo de competição com a LDL natural ocorreu uma diminuição da captação (r2-0,73), sugerindo que as duas partículas competem pelo mesmo receptor. A LDE-CO foi capaz de inibir a expressão protéica dos receptores LDL em HUVEC (3,98 vezes), monócito (6,25 vezes) e fibroblasto (3,70 vezes) e a expressão gênica em monócito e HUVEC. Por citometria de fluxo, a expressão protéica do LDL-r em H292 e fibroblasto diminuiu. Em HUVEC a LDE-CO aumentou a expressão protéica em 3,57 vezes, já em monócito, a LDE-CO diminuiu a expressão gênica e protéica (3,15 vezes) do LRP-1. Em macrófago e em H292, a LDE-CO aumentou a expressão gênica do LRP-1. A LDE-CO foi capaz de aumentar a expressão gênica e protéica (3,1 vezes) do CD36 em HUVEC, diminuir a expressão protéica (4,34 vezes) em macrófago e diminuir a expressão gênica e protéica (2,94 vezes) em H292. A LDE foi capaz de aumentar a expressão protéica (2,09 vezes) do CD68 em H292, e aumentar a expressão gênica em monócito e macrófago. A linhagem celular que apresentou maior taxa de sobrevivência na presença da LDE-CO foi o fibroblasto. Nas análises dos efeitos da modificação química da LDE, a LDE-oleato apresentou o tamanho e a lipoperoxidação menores que a LDE-linoleato e LDE-estearato. Nenhuma das LDEs apresentou modificação da estabilidade antes de 30 dias. As células apresentaram maior lipoperoxidação na presença de LDECL quando comparada à presença de LDE-CO e LDE-CE. A captação de [3H]-colesterol livre foi maior que de éster de colesterol das três LDEs por todas as células estudadas. A composição da LDE com oleato de colesterol foi a que apresentou características mais favoráveis em termos de tamanho de partículas e susceptibilidade à peroxidação. A captação celular do colesterol livre foi maior do que a do éster de colesterol em todas as linhagens estudadas das três LDEs, sugerindo que o colesterol livre possa dissociar-se da LDE e ser captado pelas células por vias não específicas. Os dados obtidos neste trabalho ajudam na compreensão dos mecanismos de captação e da influência da composição na estabilidade e adequação do sistema LDE e outros similares às suas potenciais aplicações terapêuticas ou diagnósticas. / With fat composition similar to natural LDL, the LDE nanoemulsion can be used to study the metabolism of LDL. Other studies have shown that LDE is uptaken by cells by LDL-r receptors. Other receptors such as LRP-1, CD36 and CD38 may also be involved in the uptake. The objectives of this study were to investigate the uptake of LDE by endothelial and tumor cells, fibroblasts, monocytes and macrophages, to identify those receptors involved in this process and to evaluate the effects on LDE uptake by changing its chemical composition. A labeled LDE with [3H]-cholesterol and [14C]- cholesteryl ester was incubated for 4 hours with cells, after which LDE uptake and competition tests were evaluated. LDL-r, LRP, CD36 and CD38 were evaluated by using immunocytochemistry methods, cytometric flow and real time PCR. To investigate the effects of LDE chemical composition modifications, cholesteryl oleate (LDE-CO) was replaced with cholesteryl linoleate (LDE-CL) and cholesterol stearate (LDE-CE). These were then tested for stability, cellular uptake, lipoperoxidation and citotoxitity. Results showed that all cells internalized [3H]-cholesterol and [14C]-cholesteryl ester proportionally to incubated LDE-CO concentrations albeit with some saturation differences. LDE-CO lipid uptake had a higher cholesterol uptake than the cholesteryl ester uptake. Furthermore, monocytes (THP-1) had a higher LDE-CO uptake than other cells. LDE-CO uptake decreased (r2 -0.73) in the presence of natural LDL, suggesting that these two particles may be competing for the same receptors. LDE-CO appeared to inhibit LDL protein receptor expression in HUVEC (3.98 times), in monocytes (6.25 times) and in fibroblasts (3.70 times), as well as the gene expression in monocytes and HUVEC. A decrease in LDL-r expression in both H292 and fibroblasts was also observed. LDE-CO increased the protein expression in HUVEC 3.75 times while in monocytes, it was able to decrease gene and protein expression of LRP-1, 3.15 times. In macrophages and H292, there was an increase in genetic expression of LRP-1. LDE-CO increased the CD36 in HUVEC gene and protein expressions 3.1 times, decreased the macrophage protein expression 4.34 times and decreased the H292 gene and protein expression 2.94 times. LDE increased protein expression 2.09 times in CD68 in H292 and increase gene expression in both monocytes and macrophages. Fibroblasts presented the highest survival rate in the presence of LDE-CO of all cells studied. The LDE chemical modification effect studies, presented smaller sized LDE-CO and less lipoperoxidation than LDE-CL and LDE-CE presented no stability modifications in less than 30 days. Cells presented higher lipoperoxidation in the presence of LDE-CL when compared to the presence of LDE-CO and LDE-CE. [3H]-cholesterol was greater than cholesteryl ester for all three LDE types in all the studied cells. LDE-CO presented favorable characteristics in terms of particle size and susceptibility to peroxidation. Cholesterol cell uptake was higher than that of cholesteryl ester for all LDEs of all the studied cells which suggests that that cholesterol may be capable of disassociating itself from LDE and being uptaken by cells through non-specific pathways. The results of this study can help to better understand the mechanisms of uptake by cells, the effects of stability and LDE system adequation for therapeutic and diagnostic applications.
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Suplementação com óleo de arroz semi-refinado com alto teor de gama-orizanol na dieta de garanhões / Supplementation with rice bran oil semi-refined with high level of gamma-oryzanol in stallion´s diets

Gonzaga, Iaçanã Valente Ferreira 12 December 2008 (has links)
Durante 60 dias foram utilizados seis garanhões de raças variadas, com peso médio inicial de 472,67±90,48 kg, alimentados duas vezes ao dia com dietas compostas por feno de Tifton (Cynodon dactylon) e concentrado comercial, suplementadas com 300 mL de óleo vegetal (óleo de arroz ou óleo de soja), além de sal mineralizado e água ad libitum. Foi avaliado o efeito da suplementação com óleo de arroz semi-refinado com alto teor de gama-orizanol sobre a aceitabilidade da dieta, ganho de peso, escore corporal, lipídeos plasmáticos, digestibilidade aparente dos nutrientes da dieta (Matéria Seca MS, Matéria Orgânica MO, Proteína Bruta PB, Fibra em Detergente Neutro FDN e Fibra em Detergente Ácido FDA), além da qualidade espermática e testosterona plasmática. Para tal observação, foram colhidas amostras sangüíneas com 0, 15, 30, 45 e 60 dias após o início do tratamento para mensuração das concentrações plasmáticas de testosterona, triglicérides, colesterol total e suas frações, tais como lipoproteína de densidade muito baixa (VLDL-C), lipoproteína de densidade baixa (LDL-C) e lipoproteína de densidade alta (HDL-C). Para avaliação da digestibilidade aparente dos nutrientes da dieta, os animais passaram por três dias de colheita total de fezes. Para avaliação da qualidade espermática, os garanhões passaram por colheita seminal com 0, 15, 30, 45 e 60 dias do tratamento. O delineamento experimental foi inteiramente casualisado com medidas repetidas no tempo e as médias foram comparadas considerando-se o nível de 5% de significância. Os valores médios obtidos para a digestibilidade aparente da MS, MO, EE, FDN e FDA foram respectivamente 64,34; 68,03; 71,95; 83,37; 62,15 e 55,05% para o tratamento com óleo de soja, e 58,97; 62,61; 66,96; 81,94; 54,85 e 45,87% para o tratamento com óleo de arroz. Não houve diferença (p < 0,05) em relação à digestibilidade aparente dos nutrientes da dieta para os tratamentos propostos. Os valores médios para testosterona, colesterol total, HDL-C, LDL-C, VLDL-C e triglicérides foram respectivamente 75,93 ng/dL; 92,73; 61,47; 26,99 e 4,28 mg/dL para o tratamento com óleo de soja; e de 62,13 ng/dL; 110,20; 66,73; 38,44 e 5,02 mg/dL para o tratamento com óleo de arroz. Em relação à qualidade espermática, também não se observou (p < 0,05), e os valores médios para volume, motilidade, vigor, concentração, defeitos maiores, defeitos menores e defeitos totais, foram respectivamente, de 71,87 mL; 69 %; 2,63; 123 x 106 espermatozóides/mL; 17,73%; 4,60% e 22,33 % para o tratamento com óleo de soja, e de 78,67 mL; 70,67%; 2,93; 115,67 x 106 espermatozóides/mL; 17,96%; 6,03% e 22,63% para o tratamento com óleo de arroz. Podemos concluir que a suplementação da dieta com óleo de arroz semi-refinado, com alto teor de gama-orizanol, proporciona melhora do ganho de peso e do escore corporal, não afeta a qualidade espermática ou a concentração plasmática de testosterona, VLDL-C, HDL-C e triglicérides, porém, eleva as concentrações plasmáticas de colesterol total e de LDL-C. / Using up six stallions of various breeds during 60 days, with initial average weight of 472,67 ¬± 90,48 kg, fed twice a day with a diet consisting of Tifton hay (Cynodon dactylon) and commercial concentrate, supplemented with 300 mL. of a vegetable oil (rice bran or soybean), moreover mineralized salt and ad libitum water. The experiment evaluated the effect of the supplementation of diet with rice bran oil, with high level of gamma-oryzanol, about acceptability of the diets, weight gain, body score, levels of plasmatic lipids, apparent digestibility of nutrients of the diets (dry matter - DM, organic matter - OM, crude protein - CP, ether extract - EE, neutral detergent fiber - NDF and acid detergent fiber ADF), and spermatic quality and plasmatic testosterone. Blood samples were also held with 0, 15, 30, 45 and 60 days after starting treatment, for analysis of the values of testosterone, triglycerides, total cholesterol and its fractions (HDL-C, LDL-C and VLDL-C). To evaluation of the apparent digestibility of the nutrients of the diet, the animals had passed for three days of total fecal collection. To evaluation of the sperm quality, the sires had passed for seminal collection with 0, 15, 30, 45 and 60 days of the treatment. It was used completely randomized design for repeated measures design with repeated measures over time and the means were compared under 5 % significance level. The gotten average values for the apparent digestibility of the DM, OM, CP, EE, NDF and ADF were respectively 64,34; 68,03; 71,95; 83,37; 62,15 and 55.05 % for the treatment with soybean oil, and 58,97; 62,61; 66,96; 81,94; 54,85 and 45.87 % for the treatment with rice bran oil. There was no statistical difference (p < 0,05) from the apparent digestibility of nutrients of the diet. The average values for testosterone, total cholesterol, HDL-C, LDL-C, VLDL-C and triglycerides had been respectively 75,93 ng/dL; 92,73; 61,47; 26,99 and 4,28 mg/dL for the treatment with soy oil; and of 62,13 ng/dL; 110,20; 66,73; 38,44 and 5,02 mg/dL for the treatment with rice bran oil. In relation to the spermatic quality, also did not have difference (p < 0,05), and the average values for volume, motility, vigor, concentration, defects, lesser defects and total defects, had been respectively, of 71,87 mL; 69%; 2,63; 123 x 106 sptz/mL; 17.73%; 4.60% and 22.33% for the treatment with soybean oil, and 78,67 mL; 70.67%; 2,93; 115,67 x 106sptz/mL; 17.96%; 6.03% and 22,63% for the treatment with rice bran oil. The supplementation of diet with semi-refined rice bran oil, with high level of gamma-oryzanol, provided better weight gain and improves the body score, do not affect the sperm quality or plasmatic levels of testosterone, VLDL-C, HDL-C and triglycerides, however, it increase plasmatic levels of total cholesterol and LDL-C.
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Produção de anticorpos anti-lipoproteína de baixa densidade oxidada para uso em diagnóstico laboratorial de risco cardiovascular

GUIMARÃES, Talita Antunes 07 February 2012 (has links)
Diversos estudos têm evidenciado que as doenças inflamatórias estão fortemente ligadas à condição de estresse oxidativo. Dentre elas, uma das mais estudadas é a aterosclerose. A aterosclerose é uma doença de grande importância mundial, devido à alta mortalidade resultante de condições clínicas decorrentes da doença. Estudos demonstram que a modificação da LDL é um fator importante no desenvolvimento desta doença. Por isso, a determinação da LDLox plasmática é essencial, não apenas para investigar sua relevância para as doenças cardiovasculares, mas, também, como um auxiliar no diagnóstico destas doenças. A oxidação da lipoproteína de baixa densidade (LDLox) induz à formação de epítopos imunogênicos na molécula. Contudo, o papel desses anticorpos na fisiopatologia da aterosclerose e o seu significado clínico permanecem indefinidos. O objetivo deste estudo foi produzir anticorpos anti-LDLox para uso em diagnóstico laboratorial de risco cardiovascular e também avaliar a associação entre a LDLox e o complexo formado entre o LDLox e o anticorpos anti-LDL na resposta inflamatória de macrófagos pela ativação da NADPH oxidase associada a proteína dissulfeto isomerase (PDI). A ativação da NADPH oxidase de macrófagos requer o acoplamento das subunidades citosólicas aos componentes de grânulos e translocação do complexo à membrana do fagossoma. A PDI é uma chaperona envolvida no tráfego protéico celular, sendo encontrada na superfície de diversas células procarióticas e eucarióticas. Trabalhos prévios sugeriram que PDI pode ser um dos componentes responsáveis pela montagem de Nox2, facilitando o enovelamento correto das subunidades do complexo e/ou auxiliando o trânsito das subunidades até à membrana do fagossoma. Neste trabalho testou-se a atividade de Nox2 de macrófagos inflamatórios correlacionada à atividade redutase de PDI de membrana. Macrófagos dormentes apresentaram baixa atividade de PDI e não foi detectado consumo de oxigênio associado ao sistema Nox2. Sob estímulo de LDLox e do complexo LDLox/ anti-LDLox, os fagócitos consumiram quantidade significativa de oxigênio e apresentaram atividade de PDI, maior que as células dormentes. Testes com inibidores padrões de PDI (bacitracina e ácido ditionitrobenzóico- DTNB) confirmaram que a inibição de PDI determina decréscimo da atividade de Nox2, resultados obtidos através de ensaios espectrofotométricos (redução de citocromo c, 550 nm). Em conjunto, os resultados apontam que, simultaneamente à atividade de Nox2 em macrófagos estimulados, ocorre atividade redutase de PDI, confirmando que essa chaperona está diretamente associada à ativação e/ou manutenção da atividade da oxidase fagocitária. / Inflammatory disorders are strongly associated with the condition of oxidative stress, and atherosclerosis is one of the most studied condition. Atherosclerosis is a disease of great world-wide importance due to the high mortality of decurrently clinical conditions of the illness. Studies have demonstrated that the modification of the LDL is an important factor in the development of the illness. Therefore, the determination of the plasma LDL-ox is essential not only to investigate its relevance for the atherosclerotic diseases, but also to contribute in the diagnosis of these illnesses. The oxidation of low-density lipoprotein (oxLDL) induces the formation of immunogenic epitopes in molecules. However, the role of these antibodies in the pathophysiology of atherosclerosis and their clinical significance remain undefined. Objective this study was produce antibodies anti-LDLox in the diagnosis of atherosclerotic diseases and evaluate the association between LDLox and complex LDLox/anti-LDLox in activation the regulatory activity of PDI interconnected to Nox2 in inflammatory macrophages. Protein disulfide isomerase is an ubiquitously expressed enzyme that catalyses the rearrangement of disulfide bonds in target proteins. Previous studies suggest that PDI, which is a chaperone involved in protein trafficking and translocates to the cell surface, may regulate the phagocytic NADPH oxidase complex (Nox2). LDLox and complex LDLox/ anti-LDLox-triggered superoxide anion release was correlated with the PDI reductase activity detected in macrophages, as determined by oxygen consumption and cleavage of a fluorescent probe, respectively. Assays with the known PDI inhibitors bacitracin and dithionitrobenzoic acid were performed to confirm their ability to decrease the macrophages respiratory burst. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
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Estudo da interação de prováveis lipoproteínas de membrana externa de Leptospira com proteínas do hospedeiro. / Study of the interaction of probable outer membrane lipoprotein of Leptospira with host proteins.

Fazolo, Demétria Luci 02 October 2014 (has links)
A leptospirose é uma zoonose mundial causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira, que colonizam os túbulos renais de animais domésticos e silvestres e são liberadas ao ambiente externo pela urina. Neste estudo avaliou-se a interação de seis prováveis lipoproteínas de membrana externa de leptospira com as proteínas do hospedeiro: colágeno I, colágeno IV, elastina, fibrinogênio, fibronectina celular e plasmática, laminina e plasminogênio. Os experimentos de adesão demonstraram que as proteínas recombinantes Lp21, Lp22 e Lsa30 apresentaram interação com os componentes do hospedeiro de maneira dose-dependente. Estas aderiram à fibronectina plasmática e laminina, além destes, a Lp21 e a Lp22 interagiram com plasminogênio, a Lp22 e a Lsa30 interagiram com colágeno IV. A Lp22 aderiu à elastina e ao fibrinogênio. No estudo de conservação gênica, os genes que codificam estas proteínas foram observados somente nas Leptospiras patogênicas. Portanto estas proteínas devem contribuir na adesão aos tecidos do hospedeiro na patogênese da Leptospira. / Leptospirosis is a worldwide zoonosis caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira that colonize the renal tubules of wild and domestic animals and are excreted in the environment by their urine. The aim of this work was to study the interaction of six leptospiral probable outer-membrane lipoproteins with host proteins: collagen I, collagen IV, elastin, fibrinogen, cellular fibronectin, plasma fibronectin, laminin, and plasminogen. The binding experiments demonstrated that the recombinant proteins showed interaction with host components in a dose-dependent manner were Lp21, Lsa30 and Lp22. These proteins adhered to plasma fibronectin and laminin, in addition to these components, Lp21 and Lp22 interacted with plasminogen, Lp22 and Lsa30 interacted with collagen IV. The Lp22 adhered to elastin and fibrinogen. The genes encoding the probable lipoproteins were found only in pathogenic Leptospira. These results demonstrated that these proteins may contribute in the adhesion to host tissues, in the pathogenesis of Leptospira.
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Modulação do fenótipo de resistência a múltiplas drogas por lipoproteínas em células de sarcoma uterino resistente à doxorrubicina / Modulation of phenotype of multidrug resistance for lipoprotein in uterine sarcoma cells resistant to doxorubicin

Celestino, Andrea Turbuck 24 February 2010 (has links)
O desenvolvimento de resistência a múltiplas drogas na terapêutica do câncer é um importante obstáculo para o tratamento efetivo. Os mecanismos de resistência a múltiplas drogas ocasionam a redução intracelular de agentes quimioterápicos e, por conseqüência, estão envolvidos no fracasso no tratamento do câncer. Os principais genes envolvidos neste fenômeno são: o gene MDR1(multiple drug resisctance), que codifica uma glicoproteína de alto peso molecular, a P-gp; o gene MRP1, que codifica uma glicoproteína de 190 Kda, denominada proteína associada à resistência a múltiplas drogas; e o gene da LRP (proteína relacionada à resistência de pulmão). Alguns estudos sugerem que o colesterol pode estar envolvido diretamente com o fenômeno de resistência a múltiplas drogas, e que os lipídeos podem influenciar várias e complexas funções no MDR, por afetarem o transporte de drogas através da membrana plasmática. Além disso, células tumorais tem maior necessidade de colesterol devido a uma taxa de multiplicação mais elevada que as células normais. Neste estudo analisou-se a expressão dos genes MDR1, MRP1 e LRP em células de sarcoma uterino resistentes à doxorrubicina, e a influência de lipoproteínas. Houve aumento da expressão dos genes MDR1, MRP1 e LRP nas células tratadas com a LDL, sendo mais expressivo o gene MDR1. A HDL diminuiu a expressão dos genes MRP1 e LRP. No entanto, o gene MDR1 teve sua expressão diminuída somente em concentrações maiores. As células cultivadas em meio sem soro fetal apresentaram um elevado aumento na expressão destes genes. Em conclusão, as lipoproteínas podem modular a expressão dos genes MDR1, MRP1 e LRP e, assim, atuar na resistência a múltiplas drogas. / The development of multidrug resistance in anticancer therapy is an obstacle in the efficiency of the treatment. The multidrug resistance mechanism causes reduction of intracellular chemotherapeutical drugs. Therefore, it leads to treatment failure. There are three main multidrug resistance genes: MDR1, which codifies the P-gp (a high weight glycoprotein); MRP1, which codifies a 190 Kda glycoprotein; and, the LRP (lung resistance related protein) gene. Several reports suggest that cholesterol may be directly involved with the multidrug resistance phenomenon and that lipids may affect many complex functions in this regard, as the activity of the drug transport across the plasmatic membrane. Moreover, tumor cells have great cholesterol necessity due to the high cell multiplication rate. Here we described the MDR, MRP, LRP gene expression of a doxorubicin-resistant uterine sarcoma cell line under the influence of lipoproteins. LDL increased the expression of all genes, mainly MDR1. Treatment with HDL led to reduction of MRP and LRP expression. However, the MDR gene expression decreased only by higher concentrations of HDL. Cells grown in serumdeprived medium led to an increased expression of all the studied genes. Therefore, lipoproteins may modulate the MDR, MRP, LRP gene expression and, consequently, the cell resistance to drugs.
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Avaliação de aspectos funcionais da lipoproteína de alta densidade (HDL) e suas subfrações em pacientes com doença arterial coronária / Evalution of functional aspects from high density lipoproteins (HDL) and their subfractions from coronary heart disease patients.

Leite Júnior, Antonio Carlos de Arruda 16 April 2015 (has links)
Estudos clínicos e epidemiológicos indicam que baixas concentrações plasmáticas da lipoproteína de alta densidade (HDL) estão forte e independentemente associadas a uma maior incidência de doença arterial coronária (DAC). Entretanto, o insucesso dos agentes que são capazes de aumentar a concentração de HDL-C sugere que a funcionalidade da HDL pode representar um alvo terapêutico mais apropriado. Para a avaliação de um dos aspectos funcionais da HDL, o presente trabalho descreve o desenvolvimento de um método de grande praticidade que permite uma visão integrada de uma etapa fundamental do metabolismo que é a transferência de lípides entre as diferentes classes de lipoproteínas. A avaliação deste fenômeno nas subfrações de HDL, aspecto ainda não explorado, poderá fornecer novas informações a respeito da fisiopatologia da DAC. O método descrito no presente trabalho permite a avaliação da transferência simultânea das quatro principais classes lipídicas doadas por uma nanoemulsão semelhante à LDL para a HDL3. Foi realizada análise dos possíveis interferentes neste método. Verificou-se que a elevação da temperatura de 0 a 40 °C resultou em aumento progressivo na transferência de todos os lipídeos para a HDL3. A variação de pH entre 6,5 e 8,5 e o aumento na concentração de albumina não alteraram os valores de transferência. O aumento no tempo de incubação acima de 60 minutos promoveu diminuição na transferência de colesterol esterificado para a HDL3 e aumento na transferência de fosfolipídeos. O método apresentou boa precisão intra e inter-ensaio, sendo o coeficiente de variação menor que 5% para todos os lipídeos. A porcentagem média de transferência de colesterol livre, fosfolipídeos, triacilglicerol e colesterol em 45 invíduos saudáveis foi de respectivamente de 1,1±0,06; 13,5±0,15; 2±0,05 e 0,84±0,04% e em 45 portadores de doença arterial coronária foi respectimente 1,0±0,04; 15,8±0,44; 1,77±0,04 e 1,0±0,06%. Não houve diferença nos valores de idade, IMC, colesterol total, HDL-C, LDL-C, triacilglicerol, apo A-1, apo B, CETP, PLTP e LCAT, mas os indivíduos portadores de doença arterial coronária apresentaram valores maiores de colesterol livre e colesterol total em relação aos indivíduos saudáveis. O método desenvolvido no presente estudo é prático, preciso e de potencial relevância como ferramenta no estudo dos distúrbios de função da HDL.. / Clinical and epidemiological studies show that low concentrations of high density lipoproteins (HDL) are strongly and independently associated to an increased incidence of coronary artery disease (CAD). However, the lack of success of some drugs developed to increase HDL cholesterol concentrations (HDL-C) suggests that the functional aspects of HDL may represent a more appropriate therapeutic target. To study one of the functional aspects of HDL, the present work describes the development of a practical method that provides an integrated view of a fundamental step of lipid metabolism, namely, the lipid transfer among different lipoprotein classes. This phenomenon in the HDL subfractions is yet unexplored, and could provide new insights on the pathophysiology of CAD. The method described here allows the measurement of the ability of HDL3 to receive the major lipid classes from a radioactively labeled nanoparticle that resemble LDL. The possible interfering factors at the lipid transfer to HDL3 were studied. The increase in the assay temperature from 0 to 40 °C results in a progressive increase in the net transfer of all lipids to HDL3. The increase in incubation time above 60 minutes resulted in a reduced transfer of cholesterol esters to HDL3 with a concomitant increase in the transfer of phospholipids to the latter. The method presented adequate intra and inter-assay precision, with a coefficient of variation smaller than 5% for all lipids. The average percentage of free cholesterol, phospholipids, triacilglycerol an cholesterol transfer to HDL3 was respectively of 1,1±0,06; 13,5±0,15; 2±0,05 e 0,84±0,04% in 45 healthy individuals and 1,0±0,04; 15,8±0,44; 1,77±0,04 e 1,0±0,06% in 45 CAD patients. There was no difference in the age, BMI, total cholesterol, HDL-C, LDL-C, triacilglycerol, apo A-1, apo B, CETP, PLTP and LCAT but the CAD patients had higher levels of total cholesterol and free cholesterol. The method described here is practical, precise and potentially relevant as a tool to study HDL function.
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Avaliação comparativa da eficácia da terapia de reposição hormonal de baixa dose isolada ou associada à sinvastatina no perfil lipídico e lipoprotéico em mulheres sintomáticas e dislipidêmicas na pós-menopausa /

Steiner, Marcelo Luis. January 2011 (has links)
Orientador: César Eduardo Fernades / Banca: Eliana Petri Nahas / Banca: Paulo Traiman / Banca: Luciano de Melo Pompei / Banca: Paula Andrea de Albuquerque Salles Navarro / Resumo: Avaliar comparativamente a eficácia da terapêutica de reposição hormonal (TRH) de baixa dose isolada ou associada à sinvastatina no comportamento de marcadores de risco cardiovasculares e do perfil lipídico e lipoprotéico em mulheres sintomáticas e com dislipidemia na pós-menopausa. Duzentas e quarenta e duas mulheres na pós-menopausa, sintomáticas e com dislipidemia foram randomizadas em três grupos de tratamento: A) estradiol (E2) 1mg/acetato de noretisterona (NETA) 0,5mg [E2/NETA] + sinvastativa 20mg; B) E2/NETA + placebo; e C) sinvastatina 20mg + placebo. A eficácia de cada tratamento foi avaliada pela melhora do perfil lipídico e lipoprotéico e dos sintomas climatéricos ao final de 16 semanas de tratamento. O colesterol total, o LDL-C, o colesterol não-HDL e a Apo B diminuíram de forma significativa (p<0,0001) ao final de 16 semanas no grupo que utilizou E2/NETA + sinvastatina e naquele tratado com sinvastatina + placebo. A relação Apo B/Apo A1 também apresentou redução significativa nestes dois grupos (p<0,0001 e p=0,0026 respectivamente). A Apo A1 diminuiu apenas no grupo que recebeu E2/NETA + sinvastatina (p=0,0055). O grupo E2/NETA + placebo não apresentou alterações significativas no perfil lipídico e lipoprotéico entre as visitas basal e final. Aquele que utilizou E2/NETA + sinvastatina apresentou redução significativa do HDL-C e da Apo A1 quando comparado às usuárias de sinvastatina + placebo (p=0,0233 e p=0,0231 respectivamente). No alívio dos sintomas climatéricos, os grupos que utilizaram E2/NETA foram superiores a sinvastatina + placebo. Em mulheres na pós-menopausa com dislipidemia, a associação de E2/NETA em baixa dose com sinvastatina aliviou os sintomas climatéricos de forma semelhante à observada com a E2/NETA isolada e melhorou o perfil lipídico e lipoprotéico de modo semelhante ao uso isolado da sinvastatina. O uso de E2/NETA sem ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: To evaluate low-dose hormone therapy (HT) + simvastatin for vasomotor symptoms and cardiovascular risk markers. Symptomatic postmenopausal women (n=242) with dyslipidemia were randomized to one of three treatment groups: A) 1mg estradiol/0.5mg norethisterone acetate (E2/NETA) + 20mg simvastatin; B) E2/NETA + placebo; or C) 20mg simvastatin + placebo. Lipid and lipoprotein profiles and menopausal symptoms were evaluated after 16 weeks. Total cholesterol, LDL cholesterol, non-HDL cholesterol and Apo-B decreased (p<0.0001) in groups A and C, as did Apo-B/Apo-A1 (p<0.0001 and p=0.0026, respectively). Apo-A1 decreased only in group A (p=0.0055). HDL cholesterol and Apo-A1 were lower in A than C (p=0.0233 and p=0.0231, respectively). Relief of menopausal symptoms was better in A and B compared to C. HT + simvastatin were effective for the treatment of symptomatic postmenopausal women and improved the lipid profile similar to simvastatin alone. It also delivered an improvement in the simultaneous treatment of menopausal symptoms and dyslipidemia / Doutor
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Caracterização imunogênica e funcional de duas lipoproteínas preditas de Leptospira interrogans expressas em Escherichia coli. / Immunogenic and functional characterization of two probable lipoproteins of Leptospira interrogans expressed in Escherichia coli.

Pereira, Priscila Romero Mazzini 10 February 2017 (has links)
A leptospirose é a zoonose mais disseminada no mundo e uma das principais causas de perda econômica no agronegócio. O estudo de novos antígenos de superfície de Leptospira interrogans, é intrigante e pode fornecer conhecimento na interação inicial patógeno-hospedeiro. Os genes LIC13059 e LIC10879, escolhidos por bioinformática, com predição de localização na superfície celular, foram clonados e as proteínas recombinantes expressas em E. coli, para avaliar a interação com componentes do hospedeiro. Após purificação, as proteínas encontravam-se estruturadas e foram reconhecidas por soro de indivíduos infectados. As proteínas recombinantes interagem com plasminogênio, fibrinogênio e laminina. rLIC13059, nomeada Lsa25.6, quando ligada ao fibrinogênio é capaz de inibir a formação de coágulo de fibrina e rLIC10879, nomeada Lsa16, interage com e-caderina, sugerido envolvimento na cascata de coagulação e ligação com o hospedeiro, respectivamente. O plasminogênio ligado às proteínas é convertido em plasmina, o que poderia ajudar a penetração bacteriana no hospedeiro. / Leptospirosis is the most widespread zoonosis and also a major cause of economic loss in animal production worldwide. The study of new surface antigens of Leptospira interrogans is intriguing and may shed light into the initial pathogen-host interactions. We set out to study two novel coding sequences LIC13059 and LIC10879 predicted to be located at the cell surface. The genes were cloned and the recombinant proteins were expressed in E. coli. The purified recombinant proteins presented secondary structures, and interacted with plasminogen, fibrinogen and laminin human components. rLIC13059, named Lsa25.6, when bound to fibrinogen was capable of inhibiting the formation of fibrin clot, while rLIC10879, named Lsa16, interacted with e-cadherin, a mammalian cell receptor, suggesting participation in coagulation pathway and host-cell binding, respectively. The plasminogen captured by both recombinant proteins could be converted into plasmin, a mechanism that could help bacterial penetration in the host.

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