Submitted by LETÍCIA RODRIGUES ALVES null (leticiarodalves@yahoo.com.br) on 2016-08-23T15:29:42Z No. of bitstreams: 1 AlvesLR_DISSERTAÇÃO+CERTIFICADO.pdf: 2471666 bytes, checksum: bbe3b90a7ad821bca3d2ff9e298beb5f (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: A folha de aprovação deve constar após a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-08-24T16:10:04Z (GMT) / Submitted by LETÍCIA RODRIGUES ALVES null (leticiarodalves@yahoo.com.br) on 2016-09-05T16:31:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_LR Alves - atualizada2.pdf: 1845174 bytes, checksum: 6d6d5923f6f594ad941d882c5beadab0 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-09-06T12:52:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alves_l_me_jabo.pdf: 1845174 bytes, checksum: 6d6d5923f6f594ad941d882c5beadab0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-06T12:52:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alves_l_me_jabo.pdf: 1845174 bytes, checksum: 6d6d5923f6f594ad941d882c5beadab0 (MD5) Previous issue date: 2016-06-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A contaminação por metais pesados é um problema mundial e é uma das causas mais severas de estresse abiótico nas plantas, desencadeando perdas na produtividade e risco de contaminação para a saúde humana. A concentração de cádmio aumentou consideravelmente no meio ambiente devido a fatores antropogênicos. As plantas podem absorver o cádmio, levando a alta produção de espécies reativas de oxigênio, o que desencadeia cascatas de oxidação descontroladas, resultando em danos a planta. Com o objetivo de adicionar novas informações nesta área, foi realizada uma discussão sobre a contaminação dos solos agrícolas por metais pesados, os danos causados na homeostase celular, o sistema antioxidante de defesa e o impacto para os consumidores. Além disso, foi feito um estudo sobre a comunicação da raiz para a parte aérea durante uma condição de estresse, interconectando a resposta especifica das espécies reativas de oxigênio e a ação dos hormônios nesta comunicação. Pare este propósito, foi utilizado como ferramenta a enxertia e os mutantes hormonais para investigar a modulação da resposta antioxidante de defesa entre os órgãos. / Heavy metal contamination is a worldwide concern and one of the most severe causes of abiotic stress in plants, triggering losses in crop production and contamination risks to human health. Cadmium concentration have been increased in environment due to several anthropogenic factors. Plants can uptake cadmium, which lead to a high production of reactive oxygen species and trigger an uncontrolled oxidation cascade in cells, resulting in damages to plant. In order to gain new information about this subject, we carried out a deep discussion about heavy metal contamination in agricultural soils, damages in cell homeostasis, antioxidant defense system and the impact to food consumers. Moreover, we studied root-to-shoot communication during stress condition and the specific responses of reactive oxygen species and hormones in this communication. For this propose, we used grafted hormonal mutants as a tool to investigate the modulation of antioxidant stress responses between organs. / FAPESP: 2013/27080-4

nÃo hà / No ano de 1997 Pedro Costa realizador portuguÃs finaliza seu filme Ossos, que foi rodado em Fontainhas, bairro lisbonense de subproletariados e toxicodependentes provenientes sobretudo de Cabo Verde. Estes fatos interessam à Costa como fios condutores de um realismo e experiÃncias perdidas no mundo de realidades roteirizadas (COMOLLI, 2008). Ele constrÃi sua obra com a mÃquina-cinema: uma equipe numerosa, numa grande linha de produÃÃo, dominada pelos aparatos tÃcnicos e infraestrutura que, como propÃe VilÃm Flusser (2011a), està totalmente absorvida pelas programaÃÃes de uma superestrutura hegemÃnica. Afetado pela sua experiÃncia em Fontainhas, que nÃo se concretiza plenamente na mise-en-scÃne de Ossos, Costa tenta nova estratÃgia: no filme No Quarto da Vanda (2000) ele reduz sua mÃquina-cinema a uma cÃmera de vÃdeo, um tÃcnico de som e um montador, saindo do regime do industrial, tornando-se artesÃo, e passa praticamente a morar durante nove anos no bairro. Dessa maneira, apostamos na hipÃtese de que ele comeÃa a decompor a mÃquina-cinema para criar uma nova escrita. No ano de 1997, Pedro Costa, realizador portuguÃs, finaliza seu filme Ossos, que foi rodado em Fontainhas, bairro lisbonense de subproletariados e toxicodependentes provenientes sobretudo de Cabo Verde. Estes fatos interessam à Costa como fios condutores de um realismo e experiÃncias perdidas no mundo de realidades roteirizadas (COMOLLI, 2008). Ele constrÃi sua obra com a mÃquina-cinema: uma equipe numerosa, numa grande linha de produÃÃo, dominada pelos aparatos tÃcnicos e infraestrutura que, como propÃe VilÃm Flusser (2011a), està totalmente absorvida pelas programaÃÃes de uma superestrutura hegemÃnica. Afetado pela sua experiÃncia em Fontainhas, que nÃo se concretiza plenamente na mise-en-scÃne de Ossos, Costa tenta nova estratÃgia: no filme No Quarto da Vanda (2000) ele reduz sua mÃquina-cinema a uma cÃmera de vÃdeo, um tÃcnico de som e um montador, saindo do regime do industrial, tornando-se artesÃo, e passa praticamente a morar durante nove anos no bairro. Dessa maneira, apostamos na hipÃtese de que ele comeÃa a decompor a mÃquina-cinema para criar uma nova escrita. Em Juventude em Marcha (2006), obra na qual este estudo se detÃm e que finaliza a Trilogia de Vanda, Costa, que estabeleceu vÃnculos com os excluÃdos de Fontainhas, foi atravessado pelas realidades de barbÃries em pleno mundo civilizado. Suas personagens, dotadas de experiÃncias Ãnicas, num mundo de pobreza de experiÃncias, como assevera Benjamim (1996), tornam-se matÃria-prima para o cineasta-artesÃo, que dà corpo e voz a personagens que efetuam com ele uma sÃcio-mise-en-scÃne e acabam por realizar, em seu hibridismo, um filme mutante (COMOLLI, 2008). Dessa forma, acreditamos que o diretor passa a perceber o projeto de reificaÃÃo intrÃnseca à cultura ocidental, na qual a mÃquina-cinema à uma infraestrutura e cuja programaÃÃo produz resÃduos; nesse caso especÃfico, resÃduos imagÃticos que Costa tenta reconstituir, burlando o programa da ontologia biopolÃtica ocidental e confrontando-a existencial, poÃtica e signicamente. Que potÃncias possui o regime de filme mutante perante as realidades roteirizadas do mundo contemporÃneo? Como à formada a mise-en-scÃne compartilhada na negociaÃÃo entre o narrador (Ventura) e o artesÃo (Pedro Costa) e como isto os afeta? Como o realizador artesÃo reconstitui o residual do mundo capitalista ocidental, captando sua linguagem e quais forÃas tencionam esse processo?

Atividades de teste no desenvolvimento de sistemas Reativos são de grande relevância, bem como a disponibilidade de ferramentas que apóiem essas atividades, pois falhas nesses sistemas podem causar graves conseqüências econômicas e/ou sociais. A Análise de Mutantes tem sido explorada no teste de especificações do aspecto comportamental de Sistemas Reativos baseadas em Máquinas de Estados Finitos, Statecharts e Redes de Petri. Este trabalho tem como objetivo a implementação da Proteum-RS/ST, que apóia o teste de especificações Statecharts baseada na Análise de Mutantes. Dessa forma, fornecem-se subsídios para se investigar a adequação de critérios tradicionalmente usados no teste de programas, como a Análise de Mutantes, no teste de especificações de Sistemas Reativos, em particular no contexto de especificações baseadas em Statecharts.

A evolução in vitro é um método laboratorial criado para a evolução de moléculas, principalmente de proteínas. Por meio de mutações, o método busca novas propriedades de moléculas, objetivando criar novas proteínas e, com isso, intensificar o estudo e a cura de doenças, pelo desenvolvimento de novos fármacos. O grande desafio na evolução in vitro é criar o maior número possível de moléculas de proteínas que atinjam propriedades desejadas, uma vez que apenas uma fração infinitesimal das diversidades geradas utilizando-se seqüências de DNA é aproveitada. Para se obter moléculas com funcionalidade adequada por meio dessa técnica, é requerido muito tempo e aporte financeiro. Com o objetivo de avaliar computacionalmente a funcionalidade de proteínas variantes a partir das seqüências de aminoácidos buscando reduzir o custo e o tempo desprendido em laboratório, este trabalho propõe o uso de técnicas de computação inteligentes (evolução in silicio), baseadas em aprendizado de máquina e computação evolutiva. Para o emprego de técnicas de AM, bancos de dados com elevado número de informações são fundamentais. Neste sentido, escolheu-se investigar as moléculas mutantes de hemoglobina, uma vez que a quantidade de informações disponíveis sobre a mesma é bastante extensa na literatura. Os resultados obtidos mostram que é possível desenvolver algoritmos eficientes para determinar a funcionalidade de variantes de hemoglobina. Com esses resultados, busca-se contribuir no desenvolvimento de técnicas de evolução dirigida com suporte computacional / In vitro evolution is a laboratorial method developed to molecule evolution mainly proteins. By producing mutations, this method looks for new molecule properties, aiming achieve new proteins for the development of drugs for diseases. The great challenge of in vitro evolution is the development of the highest possible number of molecules that reaches desired properties. This objective is a great challenge to be transposed, since only one infinitesimal fraction of generated proteins using DNA sequencies is usefull to obtain molecules with the desired function. Besides high financial support and time are required to apply this technique. With the objective of evaluating computacionaly and functionality of proteins mutants starting from aminoacids sequences looking for to reduce the cost and the time loosened at laboratory, this work proposes the use of intelligent computation techniques based on learning of it conspires and evolutionary computation. On the other hand, when machine learning techniques are used, it is fundamental to access data mining with high number of information. In order to reduce these difficulties, this work proposes a machine learning (ML) based on approach to evaluate computationaly hemoglobin variants. ML techniques require, in general, large data base. In order to supply this requirement, hemoglobin variants were used because there is a large number of hemoglobin variants available in the literature. The obtained results shown that is possible to develop efficient algorithms to determine hemoglobin variant function. These results can contribute for development of molecule evolution techniques

Com o objetivo de auxiliar a definição e evolução de estratégias de testes, estudos experimentais vêm sendo realizados comparando diferentes técnicas e critérios de teste em relação ao custo, eficácia e dificuldade de satisfação (strength). Entretanto poucos estudos buscam avaliar os critérios em diferentes paradigmas. Esta avaliação é importante pois o paradigma de implementação influência significativamente no programa gerado e as características entre programas implementados em diferentes paradigmas pode influenciar em diversos aspectos da atividade de teste. Este estudo é complementar a um outro trabalho do grupo do laboratório de engenharia de software do ICMC em que foram comparados o custo da aplicação dos critérios da técnica Estrutural em relação aos paradigmas Procedimental e Orientado a Objetos. Este trabalho apresenta um estudo experimental comparando o custo e o strength do critério Análise de Mutantes nos dois paradigmas. Além da avaliação do critério Análise de Mutantes, o material gerado para este estudo será construído de forma que possa ser utilizado para o ensino e treinamento das principais técnicas e critérios de teste e espera-se que este possa contribuir de alguma forma para que o ensino de teste de software possa ser aplicado em paralelo com o ensino de algoritmos e estrutura de dados. Para a condução deste estudo, foi utilizado um conjunto de 32 programas do domínio de estrutura de dados com versões implementadas em C e em Java. O critério Análise de Mutantes foi aplicado com auxílio das ferramentas Proteum e MuClipse. Para a avaliação do strength, o conjunto de casos de teste adequado a um programa foi executado contra os mutantes gerados na mesma versão do programa implementado no outro paradigma de interesse e o escore de mutação avaliado (cross scoring). Resultados indicam que tanto o custo quanto o strength do teste de mutação é maior em programas implementados no paradigma Procedimental do que no paradigma OO. Resultados estes certamente influenciados pelo conjunto de operadores implementado nas duas ferramentas. No paradigma procedimental, também foi avaliado o escore de mutação obtido por um subconjunto dos operadores da Proteum, construído com o objetivo de reduzir o custo da aplicação do critério. O escore obtido foi satisfatório e as reduções no custo significativas. Também foi avaliado strength das técnicas Funcional e Estrutural em relação ao critério AM nos dois paradigmas. Os resultados mostram que os conjuntos de casos de teste adequados aos critérios das técnicas Funcional e Estrutural no paradigma OO obtiveram, em geral, um escore de mutação maior do que no paradigma Procedimental / AIming at to assist the definition and evolution of testing strategies, empirical studies have been conducted comparing the test criteria in terms of cost effectiveness and strength. However few studies were conducted comparing the criteria in different paradigms. This assessment is important because program paradigm can cause a big influence in the result program and the characteristics of this programs can cause influences in testing activities. This study complements another work in this group that compared the cost of Structural test technique considering the Procedural and Object Oriented paradigms. This paper presents an experimental study comparing the cost and strength of Mutation Test in Procedural and OO paradigms. Besides the evaluation of mutation test, the results of this study can be used to help teaching and training many test criteria and it may somehow contribute to teach software testing n parallel with algorithms and data structures programs. It was used a set of 32 programs of data structure programs with versions in C and Java. For this study it were used Proteum and MuClipse to execute the mutation tests. It was also evaluated the strength of a set of test cases (TC) appropriate to a program in a paradigm in the same version of the program implemented in the other paradigm of interest (cross scoring). Results indicate that both cost and strength is higher in Procedural programs than in OO. This results are certainly influenced by the set of operators built in each tool studied. It was also measured the mutation score of a subset of Proteums operators built to reduce the cost of Mutation Testing in Procedural programs. The mutation score obtained was satisfactory and there was a significant reduction in cost. It was also evaluated the strength of Functional and Structural techniques in Mutation Test for both paradigms. The results show that the mutation score of the set of test cases adequate to Functional and Structural techniques were in general, higher in OO paradigm than in Procedural paradigm

Este trabalho propõe a extensão do critério Análise de Mutantes, originalmente desenvolvido para o teste de programas, para sua aplicação no teste de especificações do aspecto comportamental de Sistemas Reativos. Esses sistemas constituem hoje um componente fundamental em várias atividades humanas e, em geral, falhas nos mesmos podem envolver grandes riscos a vida ou ao patrimônio. Isso toma imprescindível um maior rigor no processo de desenvolvimento e, em particular, na atividade de teste, que é fundamentalmente baseada em simulação, não fornecendo critério que avalie essa atividade de forma quantitativa. A proposta aborda a aplicação da Análise de Mutantes na validação de especificações de Sistemas Reativos baseadas em três técnicas formais, que possuem apoio gráfico, mais utilizadas para este fim: Máquinas de Estados Finitos, Redes de Petri e Statecharts. Para a aplicação do critério nesse contexto, estabeleceu-se um paralelo entre os níveis de programa e de especificação, quanto as suas hipóteses básicas do programador competente e do efeito de acoplamento. Foram definidos os operadores de mutação para cada uma das três técnicas consideradas, além de critérios de mutação alternativa que visam a minimização no custo de aplicação do critério. Foram realizados, manualmente, dois experimentos com o objetivo de validar os mecanismos propostos. Um deles foi aplicado em Máquinas de Estados Finitos e o outro, em Redes de Petri. Os resultados mostram evidências do aspecto complementar do critério Análise de Mutantes em relação as formas disponíveis de teste de especificações existentes na literatura. Apresenta-se também um protótipo da ferramenta Proteum-RSIFSM que apóia a aplicação da Análise de Mutantes em Máquinas de Estados Finitos e discute-se a instanciação dessa ferramenta para apoiar a aplicação do critério nos contextos de Statecharts e Redes de Petri / Reactive Systems are a fundamental component in severa1 activities and failures in these systems may cause risks to life or financia1 losses. Thus, the development process and particularly the test activity must be carried on with extreme care. This work proposes the use of Mutation Analysis - a technique originally proposed at program level testing - in the context of testing and validation of specifications of Reactive Systems; three graphical techniques are considered: Finite State Machines, Petri Nets and Statecharts. Currently, the test of such specifications is mainly based on simulation. The relevance of a test adequacy assessment criterion for such activity has been recognized by many researchers and practitioners and constitutes the objective of this work. The application of Mutation Analysis in this context is based in the assumption that the basic hypothesis valid to the program level - the hypothesis of the competent programmer and coupling effect also hold to the specification level. Mutation operators are defined for the three specification techniques. Also, alternative criteria were defined aiming at reducing the cost of application of Mutation Analysis in this context. Two experiments were manually conducted in order to validate the proposed ideas. The results show evidences of the complementary aspects among existent methods and Mutation Analysis for testing specifications of Reactive Systems. A prototype of Proteum-RSIFSM, a to01 to support Mutation Analysis for Finite State Machines is presented and its extensions to Statecharts and to Petri Nets are discussed

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Estudos empíricos têm mostrado que a Análise de Mutantes – um dos critérios de teste baseado em erros – é bastante eficaz em revelar a presença de erros. Entretanto, seu alto custo, decorrente principalmente do grande número de mutantes gerados, tem motivado a proposição de diversas abordagens alternativas para a sua aplicação. Um estudo relevante nesse sentido resultou na determinação de um conjunto essencial de operadores de mutação para a linguagem Fortran, mostrando-se que é possível reduzir o custo de aplicação do critério, preservando um alto grau de adequação em relação à Análise de Mutantes. Alguns estudos também têm demonstrado que a redução da eficácia não é significativa. Este trabalho tem como objetivo investigar alternativas pragmáticas para a aplicação do critério Análise de Mutantes e, nesse contexto, é proposto um procedimento para a determinação de um conjunto essencial de operadores de mutação para a linguagem C, a partir dos operadores implementados na ferramenta Proteum. Procurando aplicar e validar o procedimento proposto, dois grupos distintos de programas são utilizados. Para ambos os grupos, o conjunto essencial obtido apresenta resultados bastante significativos quanto à redução de custo, com um decréscimo muito pequeno no grau de adequação em relação à Análise de Mutantes. Estratégias para evoluir e refinar um conjunto essencial para diferentes domínios de aplicação também são investigadas. / Mutation Analysis – one of the error based criteria – has been found to be effective on revealing faults. However, its high cost, due to the high number of mutants created, has motivated the proposition of many alternative approaches for its application. In this perspective, a relevant study resulted on the determination of a sufficient mutant operator set for Fortran, indicating that it is possible to have a large cost reduction of mutation testing, preserving a high mutation score. Some studies have also shown that the reduction on the effectiveness is not significant. This work aims to investigate pragmatic alternatives for mutation analysis application and, in this context, a procedure for the determination of a sufficient mutant operators set for C is proposed, using Proteum testing tool. Aiming to apply and validate the proposed procedure, two different groups of programs are used. For both of them, the sufficient mutant operator set presents very significant results in terms of cost reduction, with a very small reduction on the mutation score. Strategies to evolve and refine an essential mutant operator set to different application domains are also investigated.

Sistemas Reativos caracterizam-se por reagir continuamente a estímulos externos e internos e controlar atividades humanas. A ocorrência de falhas nesses sistemas pode resultar em grandes prejuízos. Dessa forma, o uso de métodos e técnicas rigorosas para a especificação do comportamento desse tipo de sistema é essencial, buscando-se evitar inconsistências e ambigüidades no modelo. Redes de Petri é uma das técnicas que têm sido usadas para a especificação de sistemas reativos. Teste e validação são atividades essenciais na produção dessa classe de sistemas. Por isso, o critério Análise de Mutantes, um critério de teste baseado em erros normalmente aplicado ao teste de programas, tem sido explorado no contexto de teste de especificações de sistemas reativos. É necessário o desenvolvimento de ferramentas que apóiem sua utilização, visto que a aplicação manual do critério é impraticável. O objetivo deste trabalho é a implementação da ferramenta Proteum-RS/PN, que apóia a aplicação do critério Análise de Mutantes para validar especificações baseadas em Redes de Petri. / Reactive Systems are characterized by continuously reacting to external as well as internal stimuli and controlling human activities. In these systems, faults can result in large losses. The use of rigorous methods and techniques for the specification of their behavior is essential to avoid inconsistencies and ambiguities. Petri Nets have been used for reactive-system specification. The test and validation of the underlying model are essential activities for the production of such systems. Thus, the Mutant Analysis -- a fault-based criterion usually used for program testing -- has been explored in the context of specification testing. The development of tools to support its application is necessary, since its manual application is unrealistic. The objective of this work is the implementation of Proteum-RS/PN, a testing tool which supports the application of Mutant Analysis criterion to validate Petri-Nets based specifications.

Pseudomonas aeruginosa 47T2 i P. aeruginosa 42A2, van ser aïllats a partir sols i aigües, respectivament, contaminades amb residus oliosos. Ambdues soques van ser seleccionades per la seva capacitat per sintetitzar compostos hidrofòbics, com polihidroxialcanoats (PHAs), ramnolípids (Rhls), o estòlids. Els PHAs són polièsters biodegradables i biocompatibles de gran interès biotecnològic per ser una bona alternativa als plàstics petroquímics. A més de produir PHAs, P. aeruginosa 47T2 és capaç de produir Rhls, compostos glicolípids coneguts com surfactants microbians que presenten activitats antimicrobiona i/o antifúngica. En canvi, P. aeruginosa 42A2 no produeix Rhls, però si és capaç de convertir els olis residuals en mono-, di- o tri-hidroxi àcids grassos i més tard polimeritzar-los en estòlids. Els estòlids són biopoliesters són coneguts per ser bons emulsificadors amb interessants aplicacions industrials. Donades les diferències metabòliques a nivell lipídic detectades entre ambdues soques, s’ha estudiat el seu sistema lipolític comparant-lo amb la soca tipus Pseudomonas aeruginosa PA01. Assajos SDS-Page i zimogrames, tant dels extractes cel.lulars com dels sobrenedants de les soques, indiquen l’existència d’un sistema lipolític complex constituït per diversos enzims, però la seva caracterització bioquímica no denota diferències significatives a nivell de preferència de substrat, temperatura i pH entre les tres soques. Es decideix doncs no continuar estudiant la dotació enzimàtica, que no ha estat determinant per saber a què es deuen les diferències en el metabolisme lipídic, i s’opta per estudiar productes lipídics d’interès d’aquestes soques. Prenent els productes lipídics comuns i diferents, i tenint en compte que comparteixen intermediaris comuns a les seves rutes biosintètiques, s’ha decidit obtenir mutants negatius per la producció de PHA per tal d’estudiar el flux de carbonis i poder així dilucidar part de les rutes metabòliques que generen determinats productes. Aquests mutants es generen per ambdues soques P. aeruginosa 47T28AD i P. aeruginosa 42A28AD. Desprès d’haver provat diferents estratègies de mutagènesi aleatòria sense èxit (irradiació controlada amb llum UV i transposició), els mutants s’obtenen a través de mutagènesi dirigida amb la qual es força la recombinació i per tant la mutació dels gens que codifiquen per l’enzim PHA sintasa, mitjançant el plasmidi suïcida pEX100Tlink. S’analitzen els mutants obtinguts per microscòpia electrònica de transmissió (MET) i la producció de PHAs s’analitza per ressonància magnètica nuclear (RMN). Ambdós processos permeten determinar que els potencials mutants no produeixen PHAs i per tal de confirmar-ho s’extreu i quantifica el PHA observant que la producció de PHAs desapareix en els mutants. Una cop obtinguts els mutants cal veure si aquesta mutació afecta a la producció d’altres metabòlits. En la soca P. aeruginosa 47T2, s’estudien els Rhls produïts a partir d’olis residuals, tant a nivell de quantitat de producció com de qualitat del producte. Es quantifiquen per gravimetria i HPLC-MS i es caracteritzen a nivell fisicoquímic (determinació de CMCs, diagrames ternaris de fases, capacitat emulsionant). Si bé la producció de PHAs desapareix en els mutants seleccionats, sembla que la producció de Rhls augmenta lleugerament respecte a la soca parental, però no de manera proporcional a la desaparició de PHAs. Per altra banda la caracterització dels biotensioactius tampoc mostra diferències significatives entre els productes obtinguts a partir del mutant i de la soca parental, però si és interessant per les possibilitats a nivell d’aplicacions biotecnològiques dels Rhls. Pel que fa a la soca P. aeruginosa 42A2, els mutants serviran per fer el mateix estudi quantitatiu i qualitatiu d’un altre producte, els estòlids, però això forma part d’un altre estudi del grup. En la tesi el que s’ha quantificat són els derivats hidroxilats (mono- i di-hidroxilats) a partir dels quals es formen els estòlids, que també tenen propietats tensioactives i antimicrobianes i/o antifúngiques. / "Obtaining and characterization of PHA-negative mutants on Pseudomonas strains for the production of interesting industrial compounds" Pseudomonas aeruginosa 47T2 and P. aeruginosa 42A2 were isolated from oil wastes contaminated environment, soil and water respectively. Both strains were selected for their capacity to synthesize hydrophobic compounds such as polyhydroxyalkanoates (PHAs), rhamnolipids (Rhls), or estolides. PHAs are biodegradable and biocompatible polyesters with a high biotechnological interest for being a good alternative to the petrochemical plastics. In addition, P. aeruginosa 47T2 is able to produce rhamnolipids, glycolipid compounds well-known as microbial surfactants that present antimicrobial and/or antifungal activities. Although P. aeruginosa 42A2 is not producing Rhls, it is capable to convert waste oils into mono, di or –tri hydroxyfatty acids and later polymerize these compounds into estolides. Estolides are biopolyesters that are known for being good emulsifiers with interesting industrial applications. The aim of this thesis was to compare the differences in the lipid metabolism of the selected strain using P. aeruginosa PA01 as a type strain. SDS-page assays and zimmograms of cellular extracts and supernatants, revealed a complex lipolytic system constituted by different enzymes with no relevant differences regarding substrate affinity, temperature or pH. Therefore, the next step was the study of the different lipidic products. Considering that on PHAs, Rhls and estolides biosynthesis, the different involved metabolic pathways are competing for the same substrates, PHA-negative mutants for P. aeruginosa 42A2 and P. aeruginosa 47T2 were constructed by site-directed mutagenesis in order to elucidate the carbon flows. PHA accumulation, in both PHA-negative mutants, was evaluated by means of transmission electron microscopy (TEM) and nuclear magnetic resonance analysis (NMR), confirming thus the mutant strains were handicapped for PHA production. Consequently, rhamnolipids production in P. aeruginosa 47T2 and its PHA-negative mutant was gravimetrically quantified and showed a slightly increase of the Rhls production in the PHA-negative mutant (P. aeruginosa 47T2 4AD). Furthermore, the biopolymers were characterized by HPLC-MS and their physicochemical properties evaluated by determining the critical micelle concentration (CMC), the surfactant capacity and constructing the ternary phase diagrams. The biotransformation of oleic acid into hydroxyfatty acids was followed and quantified in P. aeruginosa 42A2 and its PHA-negative mutant (P. aeruginosa 42A2 4AD) by gas chromatography (GC).