Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-01-30Bitstream added on 2014-06-13T18:29:32Z : No. of bitstreams: 1 bortolossi_jc_me_jabo_prot.pdf: 1992127 bytes, checksum: 4589472b07077a15576f670c58a3f88c (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O cancro cítrico doença causada pela bactéria gram negativa Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), representa muitos prejuízos para citricultura brasileira e mundial. Em 2002, a Xac teve todo seu genoma seqüenciado. Uma biblioteca de mütantes foi constituída e os mutantes foram analisados por inoculação in planta, deste modo tres mutantes foram selecionados por apresentarem diferenças nos sintomas, quando comparados com a estirpe selvagem Xac. Os genes nocauteados nos mutantes codificam três proteínas diferentes: DGTP pirofosfato tiamina sintase, envolvida na biossíntese de vitamina B 1, a subunidade E da enzima PHA sintase, que atua na síntese de polihidroxialcanoatos. que acumulados na forma de grânulos intracelulares constituem substâncias de reserva da célula, e podem formar biopolímeros e, ainda o terceiro gene nocauteado, que codifica uma proteína hipotética. As curvas de crescimento revelaram que o mutante da DGTP pirofosfohidrolase tiamina sintase não se desenvolve na planta hospedeira. O mutante da PHA sintase cresce menos que a Xac selvagem nos dois primeiros dias de avaliação, já o mutante da proteína hipotética sofre uma fase de declínio a partir do oitavo dia de avaliação experimental. A subunidade E da PHA sintase da Xac, gene codificador desta proteína foi donado em vetor de expressão e a proteína recombinante foi produzida em E.coli na forma solúvel. / The citric canker disease caused for the bacterium gram negative Xantlzomonas axonopodis pv. citri (Xac), presents many damages for Brazilian and world-wide citriculture. In 2002, aiming to know the mechanisms of attack of the disease, the Xac had alI its sequenced genome. A library of mutants was constituted and the mutants had been analyzed by inoculation in plant, three mutants had been isolated for not to show differences in the symptoms when compared with the wild lineage Xac. The mutants codify three different proteins: DGTP pyrophosphate tiamine synthase involved in biosynthesis B 1 vitamin; enzyme PHA synthase subunit E that is involved in the synthesis of polyhydroxyalkanoate, in the intracellular granule f01111, they constitute substances of reserve of the cell an can still to form biopolymer; and hypothetical proteins. The profile of growth of the wild Xac and the mutated Xacs in the three cases of the mutants had been evaluated in order to compare the profile of growth of the bacterial wild and mutant during the infection in citric host. The growth curves showed that the mutant of the DGTP pyrophosphate tiamine synthase does not develop the disease in the host plant. The PHA synthase grows less than the wild Xac in the first days of evaluaction, however the mutant of the hypotetical, shown a decline period for eighth day of the experimental evaluaction. The subunit E the PHA synthase of the Xac, the code gene of this protein was cloned in expression vector and the recombinant protein was produced in E.coli in the soluble form.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-07Bitstream added on 2014-06-13T18:56:06Z : No. of bitstreams: 1 cordeiro_jx_me_jabo.pdf: 844386 bytes, checksum: ae05c2706130041d387b83b68d235663 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Bacillus thuringiensis é uma bactéria gram-positiva e possui habilidade de produzir proteínas denominadas Cry ou delta-endotoxinas, durante a fase de esporulação. Estas proteínas são utilizadas no controle biológico de várias ordens de insetos. No entanto, pouco se conhece a respeito das vias metabólicas envolvidas na produção dessas proteínas, por exemplo, na natureza, é possível encontrar isolados que produzem grande quantidade de proteínas Cry, como também é possível encontrar outros isolados que produzem poucas quantidades. Considerando que essa diferença é devida a uma regulação gênica diferenciada entre isolados, a identificação dessa regulação pode levar a um incremento na produção de proteínas. Neste trabalho, foram analisados 10 clones mutantes comparados com o isolado selvagem (Bt1) quanto à mortalidade de lagartas neonatas de Spodoptera frugiperda considerando também a quantidade de proteínas Cry produzidas por estes mutantes. Os resultados demonstram que dois clones identificados como B9 e E2, demonstraram um bom controle dessas lagartas, mesmo aquelas que permaneceram vivas, ocorreu um atraso em seu desenvolvimento. Quanto à produção de proteínas, os clones apresentaram perfil protéico entre ~45 kDa e ~120 kDa, perfil característico encontrado entre estirpes ativas contra Lepidópteros. No entanto, os clones que apresentaram bons níveis de mortalidade (B9 e E2) mostraram somente a banda de ~65 kDa similar ao isolado selvagem, que pode ser a responsável pela sua ação inseticida. Os resultados obtidos demonstram a possibilidade de efetuar melhoramento genético em B. thuringiensis por meio de mutagênese mediada por transposon e abre caminho para o estudo das vias metabólicas envolvidas na produção de proteínas Cry. / Bacillus is a gram-positive bacterium and produces internal crystal inclusions named crystal (Cry) proteins or d - endotoxins during the sporulation phase. These proteins as used to control several agriculture insect pests. However little is known concerning the metabolic pathways involved in the production of these proteins. For example, in nature, it is possible to find isolates that produce large quantities of the Cry proteins as well as it is possible to find ones that produce limited quantities. Since such difference might be related to gene regulation the identification of regulation factors found in these isolated should lead to an increment on the crystal protein production found in isolated naturally exhibiting lower production. In this work, ten mutant clones were analyzed compared to the wild type (Bt1) with respect to Spodoptera frugiperda neonatal larvae mortality considering also the amount of crystal protein produced by these mutants. The results have demonstrated that two mutant clones named B9 and E2 have produced strong control of these larvae; while at the same time eliciting a delay on the development of the ones that eventually did not dye at first. As for the Cry protein content, the cloned presented a protein profile ranging from ~45 kDa to ~120 kDa which is typical of Cry proteins acting on lepidopterans. The clones that have shown good mortality levels (B9 and E2) have exhibited only a protein band with ~65 kDa, similar to the one produced by the wild type strain, which might be related to its control activity. Finally, the results obtained seem to lead to the possibility of improving genetically B. thuringiensis using mutagenesis induced by transposon and at the same time might pave the way to the shed light on the study of metabolic pathways involved in the Cry proteins production.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-23Bitstream added on 2014-06-13T19:56:02Z : No. of bitstreams: 1 paiva_jb_me_jabo.pdf: 902974 bytes, checksum: d01d6993a37d78f84e978b7b9def9ecd (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Salmonella enterica sorotipo Typhimurium sintetiza cobalamina (Vitamina B12) apenas sobre condições anaeróbicas. Dois porcento do genoma da S. Typhimurium é dedicado a reações dependentes de vitamina B12 como cofator, sua síntese e absorção. Neste estudo nós preparamos mutantes de Salmonella sorotipos Enteritidis, Gallinarum e Pullorum duplo defectivos na biossintese de cobalamina, cepas ΔcobSΔcbiA. A virulência destes mutantes foi comparada com as respectivas cepas selvagens e, nenhuma deficiência na capacidade de causar doença foi observada para as cepas de S. Enteritidis ΔcobSΔcbiA e S. Pullorum ΔcobSΔcbiA. S. Gallinarum ΔcobSΔcbiA por sua vez, mostrou atenuação total. Posteriormente nós testamos a produção de B12 pelas cepas mutantes e selvagens já descritas, e incluímos neste estudo a cepa de S. Typhimurium ΔcobSΔcbiA, e sua respectiva cepa selvagem. Todas as cepas mutantes não tiveram produção de B12 detectada. As cepas selvagens mostraram produção de vitamina B12 em ambos os ensaios utilizados, com exceção da S. Gallinarum que não apresentou produção de cobalamina in vitro. Como conclusão, a produção de vitamina B12 in vitro diferiu entre os sorotipos de Salmonella testados, a deleção dos genes cbiA e cobS produziu alteração na relação parasita hospedeiro em diferentes níveis entre os sorotipos de Salmonella estudados, sendo que esta foi muito maior entre o sorotipo Gallinarum e as aves. / Salmonella enterica serovar Typhimurium only synthesizes cobalamin (Vitamin B12) during anaerobiosis. Two-percent of the S. Typhimurium genome is devoted to the synthesis and uptake of Vitamin B12 and to B12-dependent reactions. In order to understand the requirement from cobalamin synthesis better, we constructed Salmonella serovar Gallinarum, Salmonella serovar Enteritidis and Salmonella serovar Pullorum mutants that are double-defective in cobalamin biosynthesis (ΔcobSΔcbiA). We compared the virulence of these mutants to that of their respective wild type strains and found no impairment in S. Enteritidis ΔcobSΔcbiA and S. Pullorum ΔcobSΔcbiA ability to cause disease in chickens. S. Gallinarum ΔcobSΔcbiA mutant showed attenuated for chickens. We then assessed B12 production by these mutants and their respective wild type strains, as well as S. Typhimurium ΔcobSΔcbiA, and their respective wild type strain. All mutants were unable to produce detectable B12. B12 was detectable in wild type strains, but, S. Gallinarum demonstrated no in vitro cobalamin production. In conclusion, the production of vitamin B12 in vitro differed across the Salmonella serotypes that were tested. Furthermore, the deletion of the cbiA and cobS genes resulted in an alteration in the relationship between the serotype Gallinarum and the birds more stronger than did to the others serotypes.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01 - capa_abstract.pdf: 124558 bytes, checksum: bad84451063512c6789c09aabfdf0fd7 (MD5) Previous issue date: 2009-02-17 / Mutants of Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 were isolated after treatment with ultra violet light, acridine orange, or ethyl methane sulfonate. After the mutagenic treatments, ten colonies were picked randomly from each treatment and were the mutants characterized. Specific growth rate (µ) and survival to successive freeze-thaw cycles were assessed for each isolate along with milk acidification rate and survival to storage at – 20 ºC with different crioprotective agents. Among all 30 isolates, mutants MUV9, MAC6, and MEMS2 displayed higher µ values and better survival after repeated freezethaw cycles. Survival of the mutant strains after 15 days at – 20 ºC, both in the presence and the absence of cryoprotective, was better than survival of the wild type. Reconstituted non fat milk (10 %) proved to be a better cryoprotective agent than saccharose and monosodium glutamate for storage at – 20 ºC. Survival rates were higher for mutants MAC6 and MEMS2, after 15 days at – 20 ºC. Cold shock, at 10 ºC for four-hours, and heat shock, 50 ºC for 30 minutes, enhanced survival of the mutant strains and also of the parental strain as measured after 70 days at – 20 ºC. Cold shock response allowed better survival to all the strains, mutant and parental, when compared to the heat shock. The results reported here show that strain development of L. delbrueckii UFV H2b20 for technological purposes can be achieved by a classical genetic mutation. / Mutantes de Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 foram isolados após procedimento de mutagênese com luz ultravioleta, acridina laranja e etil metano sulfonato. Após este procedimento, foram selecionadas, aleatoriamente, 10 colônias em cada tratamento para serem caracterizadas quanto à velocidade específica de crescimento (µ) e sobrevivência a três ciclos de congelamento e descongelamento. Dentre o total de 30 isolados selecionados os mutantes MUV9, MAC6e MEMS2, sendo estes os que apresentaram maior µ e tolerância a repetidos ciclos de congelamento e descongelamento. A sobrevivência das estirpes mutantes após 15 dias de estocagem a – 20 ºC na ausência e na presença de substâncias crioprotetoras foi maior do que a da estirpe selvagem. Dentre as substâncias crioprotetoras utilizadas, o leite desnatado reconstituído a 10 % foi o que conferiu melhor proteção durante a estocagem a – 20 ºC. Após 15 dias de estocagem a – 20 ºC, os mutantes MAC6 e MEMS2 foram os que apresentaram maior sobrevivência. O choque frio, 10 ºC por 4 horas e o choque térmico, 50 ºC por 30 minutos aumentaram a sobrevivência das estirpes mutantes e da estirpe parental à estocagem de 70 dias a -20 ºC, sendo que o choque frio permitiu maior sobrevivência ao congelamento as estirpes mutantes e parental do que o choque térmico. Os resultados aqui apresentados estimulam a continuidade do trabalho de melhoramento de L. delbrueckii UFV H2b20 para uso tecnológico.

Orientador: Eliana Maria de Melo Souza / Banca: José Adriano Fenerick / Banca: José Roberto Zan / Resumo: Essa pesquisa, com base numa abordagem sócio-histórica da canção, examina a produção musical dos Mutantes, conjunto de pop rock formado em 1966 por Rita Lee, Arnaldo Baptista e Sérgio Dias. Em especial, o nosso objetivo é o de entender o significado histórico do experimentalismo na trajetória do grupo entre fins da década de 1960 e meados da década de 1970, a fim de perceber o motivo da mudança sonora ocorrida no conjunto a partir de 1971. Além disso, procuramos perceber como essas "experimentações" estavam vinculadas aos aspectos mais evidentes da sociedade no período, como, por exemplo, a (re) estruturação da Indústria Cultural Brasileira. Tomamos como referência maior o movimento da contracultura que engendrou, não só no exterior como também no Brasil, significativas transformações na sociedade nos âmbitos moral, comportamental, político, cultural e ideológico. Ainda que possa parecer contraditório, entendemos que foi justamente a reorganização da Indústria Cultural Brasileira que contribuiu para que os Mutantes pudessem realizar as suas várias experimentações sonoras. Contudo, dada a configuração social no campo da música popular brasileira no período posterior à decretação do AI-5, destacando-se nesse campo o fechamento do mercado fonográfico à inventividade sonora e o fim dos festivais da canção, os Mutantes enveredaram para a vertente do rock progressivo, perdendo, portanto, a sua notável peculiaridade musical. A padronização dos instrumentos musicais a partir dos anos 70 também contribuiu substantivamente para que as suas músicas se tornassem pastiche dos grupos de rock anglo-americanos, em detrimento do aspecto paródico que caracterizou os seus primeiros trabalhos. / Abstract: This research, which was based on a socio-historical approach of the popular song, examines the musical production of the Mutantes, a pop rock group created in 1966 by Rita Lee, Arnaldo Baptista and Sergio Dias. In particular, our goal is to comprehend the historical meaning of "experimentalism" in the trajectory of the group during the period between the end of the sixties and the mid-seventies, in order to identify the reasons for the resonant change which took place in the group from 1971 on. Furthermore, we try to understand how these "experimentations" were linked to the evident aspects of the society of the period, such as the reorganization of the Brazilian Culture Industry. We considered as reference the large countercultural movement, which not only abroad but also in Brazil led to important moral, behavioral, political, cultural and ideological transformations in society. Although it may seem contradictory, we believe that it was precisely the reorganization of the Brazilian Cultural Industry that contributed to the Mutantes' achievements in their various musical experimentations. However, given the social scenario in Brazilian popular music of the period after the AI-5 Bill, which led, among other things to the closing of the phonographic market in its inventiveness, and to the end of the "Song Festivals", the Mutantes head for progressive rock, thus losing their remarkable musical peculiarities. The standardization of the musical instruments as from the 70's resulted on the Mutantes' poor imitation of American-English rock, loosing their parody aspect which characterized their early records. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-21Bitstream added on 2014-06-13T20:39:28Z : No. of bitstreams: 1 santos_dv_me_arafcl.pdf: 1452544 bytes, checksum: 97fdb10f293cba39b260f1660f1da05a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Essa pesquisa, com base numa abordagem sócio-histórica da canção, examina a produção musical dos Mutantes, conjunto de pop rock formado em 1966 por Rita Lee, Arnaldo Baptista e Sérgio Dias. Em especial, o nosso objetivo é o de entender o significado histórico do experimentalismo na trajetória do grupo entre fins da década de 1960 e meados da década de 1970, a fim de perceber o motivo da mudança sonora ocorrida no conjunto a partir de 1971. Além disso, procuramos perceber como essas “experimentações” estavam vinculadas aos aspectos mais evidentes da sociedade no período, como, por exemplo, a (re) estruturação da Indústria Cultural Brasileira. Tomamos como referência maior o movimento da contracultura que engendrou, não só no exterior como também no Brasil, significativas transformações na sociedade nos âmbitos moral, comportamental, político, cultural e ideológico. Ainda que possa parecer contraditório, entendemos que foi justamente a reorganização da Indústria Cultural Brasileira que contribuiu para que os Mutantes pudessem realizar as suas várias experimentações sonoras. Contudo, dada a configuração social no campo da música popular brasileira no período posterior à decretação do AI-5, destacando-se nesse campo o fechamento do mercado fonográfico à inventividade sonora e o fim dos festivais da canção, os Mutantes enveredaram para a vertente do rock progressivo, perdendo, portanto, a sua notável peculiaridade musical. A padronização dos instrumentos musicais a partir dos anos 70 também contribuiu substantivamente para que as suas músicas se tornassem pastiche dos grupos de rock anglo-americanos, em detrimento do aspecto paródico que caracterizou os seus primeiros trabalhos. / This research, which was based on a socio-historical approach of the popular song, examines the musical production of the Mutantes, a pop rock group created in 1966 by Rita Lee, Arnaldo Baptista and Sergio Dias. In particular, our goal is to comprehend the historical meaning of “experimentalism” in the trajectory of the group during the period between the end of the sixties and the mid-seventies, in order to identify the reasons for the resonant change which took place in the group from 1971 on. Furthermore, we try to understand how these “experimentations” were linked to the evident aspects of the society of the period, such as the reorganization of the Brazilian Culture Industry. We considered as reference the large countercultural movement, which not only abroad but also in Brazil led to important moral, behavioral, political, cultural and ideological transformations in society. Although it may seem contradictory, we believe that it was precisely the reorganization of the Brazilian Cultural Industry that contributed to the Mutantes’ achievements in their various musical experimentations. However, given the social scenario in Brazilian popular music of the period after the AI-5 Bill, which led, among other things to the closing of the phonographic market in its inventiveness, and to the end of the “Song Festivals”, the Mutantes head for progressive rock, thus losing their remarkable musical peculiarities. The standardization of the musical instruments as from the 70’s resulted on the Mutantes’ poor imitation of American-English rock, loosing their parody aspect which characterized their early records.

Com o objetivo de auxiliar a definição e evolução de estratégias de testes, estudos experimentais vêm sendo realizados comparando diferentes técnicas e critérios de teste em relação ao custo, eficácia e dificuldade de satisfação (strength). Entretanto poucos estudos buscam avaliar os critérios em diferentes paradigmas. Esta avaliação é importante pois o paradigma de implementação influência significativamente no programa gerado e as características entre programas implementados em diferentes paradigmas pode influenciar em diversos aspectos da atividade de teste. Este estudo é complementar a um outro trabalho do grupo do laboratório de engenharia de software do ICMC em que foram comparados o custo da aplicação dos critérios da técnica Estrutural em relação aos paradigmas Procedimental e Orientado a Objetos. Este trabalho apresenta um estudo experimental comparando o custo e o strength do critério Análise de Mutantes nos dois paradigmas. Além da avaliação do critério Análise de Mutantes, o material gerado para este estudo será construído de forma que possa ser utilizado para o ensino e treinamento das principais técnicas e critérios de teste e espera-se que este possa contribuir de alguma forma para que o ensino de teste de software possa ser aplicado em paralelo com o ensino de algoritmos e estrutura de dados. Para a condução deste estudo, foi utilizado um conjunto de 32 programas do domínio de estrutura de dados com versões implementadas em C e em Java. O critério Análise de Mutantes foi aplicado com auxílio das ferramentas Proteum e MuClipse. Para a avaliação do strength, o conjunto de casos de teste adequado a um programa foi executado contra os mutantes gerados na mesma versão do programa implementado no outro paradigma de interesse e o escore de mutação avaliado (cross scoring). Resultados indicam que tanto o custo quanto o strength do teste de mutação é maior em programas implementados no paradigma Procedimental do que no paradigma OO. Resultados estes certamente influenciados pelo conjunto de operadores implementado nas duas ferramentas. No paradigma procedimental, também foi avaliado o escore de mutação obtido por um subconjunto dos operadores da Proteum, construído com o objetivo de reduzir o custo da aplicação do critério. O escore obtido foi satisfatório e as reduções no custo significativas. Também foi avaliado strength das técnicas Funcional e Estrutural em relação ao critério AM nos dois paradigmas. Os resultados mostram que os conjuntos de casos de teste adequados aos critérios das técnicas Funcional e Estrutural no paradigma OO obtiveram, em geral, um escore de mutação maior do que no paradigma Procedimental / AIming at to assist the definition and evolution of testing strategies, empirical studies have been conducted comparing the test criteria in terms of cost effectiveness and strength. However few studies were conducted comparing the criteria in different paradigms. This assessment is important because program paradigm can cause a big influence in the result program and the characteristics of this programs can cause influences in testing activities. This study complements another work in this group that compared the cost of Structural test technique considering the Procedural and Object Oriented paradigms. This paper presents an experimental study comparing the cost and strength of Mutation Test in Procedural and OO paradigms. Besides the evaluation of mutation test, the results of this study can be used to help teaching and training many test criteria and it may somehow contribute to teach software testing n parallel with algorithms and data structures programs. It was used a set of 32 programs of data structure programs with versions in C and Java. For this study it were used Proteum and MuClipse to execute the mutation tests. It was also evaluated the strength of a set of test cases (TC) appropriate to a program in a paradigm in the same version of the program implemented in the other paradigm of interest (cross scoring). Results indicate that both cost and strength is higher in Procedural programs than in OO. This results are certainly influenced by the set of operators built in each tool studied. It was also measured the mutation score of a subset of Proteums operators built to reduce the cost of Mutation Testing in Procedural programs. The mutation score obtained was satisfactory and there was a significant reduction in cost. It was also evaluated the strength of Functional and Structural techniques in Mutation Test for both paradigms. The results show that the mutation score of the set of test cases adequate to Functional and Structural techniques were in general, higher in OO paradigm than in Procedural paradigm

Este trabalho propõe a extensão do critério Análise de Mutantes, originalmente desenvolvido para o teste de programas, para sua aplicação no teste de especificações do aspecto comportamental de Sistemas Reativos. Esses sistemas constituem hoje um componente fundamental em várias atividades humanas e, em geral, falhas nos mesmos podem envolver grandes riscos a vida ou ao patrimônio. Isso toma imprescindível um maior rigor no processo de desenvolvimento e, em particular, na atividade de teste, que é fundamentalmente baseada em simulação, não fornecendo critério que avalie essa atividade de forma quantitativa. A proposta aborda a aplicação da Análise de Mutantes na validação de especificações de Sistemas Reativos baseadas em três técnicas formais, que possuem apoio gráfico, mais utilizadas para este fim: Máquinas de Estados Finitos, Redes de Petri e Statecharts. Para a aplicação do critério nesse contexto, estabeleceu-se um paralelo entre os níveis de programa e de especificação, quanto as suas hipóteses básicas do programador competente e do efeito de acoplamento. Foram definidos os operadores de mutação para cada uma das três técnicas consideradas, além de critérios de mutação alternativa que visam a minimização no custo de aplicação do critério. Foram realizados, manualmente, dois experimentos com o objetivo de validar os mecanismos propostos. Um deles foi aplicado em Máquinas de Estados Finitos e o outro, em Redes de Petri. Os resultados mostram evidências do aspecto complementar do critério Análise de Mutantes em relação as formas disponíveis de teste de especificações existentes na literatura. Apresenta-se também um protótipo da ferramenta Proteum-RSIFSM que apóia a aplicação da Análise de Mutantes em Máquinas de Estados Finitos e discute-se a instanciação dessa ferramenta para apoiar a aplicação do critério nos contextos de Statecharts e Redes de Petri / Reactive Systems are a fundamental component in severa1 activities and failures in these systems may cause risks to life or financia1 losses. Thus, the development process and particularly the test activity must be carried on with extreme care. This work proposes the use of Mutation Analysis - a technique originally proposed at program level testing - in the context of testing and validation of specifications of Reactive Systems; three graphical techniques are considered: Finite State Machines, Petri Nets and Statecharts. Currently, the test of such specifications is mainly based on simulation. The relevance of a test adequacy assessment criterion for such activity has been recognized by many researchers and practitioners and constitutes the objective of this work. The application of Mutation Analysis in this context is based in the assumption that the basic hypothesis valid to the program level - the hypothesis of the competent programmer and coupling effect also hold to the specification level. Mutation operators are defined for the three specification techniques. Also, alternative criteria were defined aiming at reducing the cost of application of Mutation Analysis in this context. Two experiments were manually conducted in order to validate the proposed ideas. The results show evidences of the complementary aspects among existent methods and Mutation Analysis for testing specifications of Reactive Systems. A prototype of Proteum-RSIFSM, a to01 to support Mutation Analysis for Finite State Machines is presented and its extensions to Statecharts and to Petri Nets are discussed

Dans cette thèse l’expression du récepteur CB1 dans l’hippocampe de souris mutantes ré-exprimant spécifiquement le gène spécifiquement dans certains types cellulaires du cerveau tels que : les neurones glutamatergiques du télencéphale dorsal, et les neurones GABAergiques a été analysé. De plus, dans le but de connaître la distribution anatomique exacte des récepteurs CB1 astrogliaux par rapport aux synapses excitatrices et inhibitrices, j’ai étudié l’expression des récepteurs CB1 dans les astrocytes de souris exprimant le récepteur CB1 seulement dans les astrocytes et une souris mutante ciblée pour exprimer la protéine cytoplasmique hrGFP diffusible dans les cellules astrogliales, ce qui permet une meilleure détection des prolongements astrocytaires. Les conclusions de ce travail de thèse sont les suivantes : la distance la plus commune entre le récepteur CB1 astroglial et la synapse la plus proche est de 400 à 800 nm. La majorité des synapses entourées par des astrocytes immunopositifs pour le récepteur CB1 dans l’hippocampe, est de nature excitatrice. Les souris mutantes ré-exprimant le récepteur CB1 caractérisées dans ce travail de thèse montrent : 1) l’expression du récepteur CB1 dans différents types cellulaires, 2) la réexpression est limitée à une population neuronale particulière ou aux astrocytes, 3) les niveaux endogènes de récepteurs CB1 sont maintenus dans les différents types cellulaires ré-exprimant le récepteur CB1. De façon générale, ces résultats nous montrent que les souris mutantes ré-exprimant le récepteur CB1 sont d’excellents outils pour l’étude fonctionnelle et translationnelle sur le rôle de ce récepteur dans le cerveau sain ou pathologique. / The Cannabinoid Type I receptor protein (CB1) expression in the hippocampus of rescue mice modified to express the gene exclusively in specific brain cell types: such as dorsal telencephalic glutamatergic neurons, or GABAergic neurons have been analyzed. Furthermore, aiming at knowing the exact anatomical distribution of the astroglial CB1 receptors with respect to the excitatory and inhibitory synapses, the CB1 receptor expression in astrocytes of mouse expressing CB1 receptor only in astrocytes and mutant mouse expressing the protein hrGFP into astrocytes (that allows for better detection of the astrocytic processes) have been also investigated. The results showed that the majority of the hippocampal synapses surrounded by CB1 receptor immunopositive astrocytes in the 400-800 nm range are of excitatory nature. Moreover, the CB1 receptor rescue mutant mice characterized in this Doctoral Thesis have proven 1) to express CB1 receptors in specific brain cell types; 2) the re-expression is limited to the particular brain cell populations; 3) the endogenous levels of CB1 receptors are maintained in the brain cell types re-expressing the receptor. Which makes this mutant mice excellent tools for functional and translational investigations on the role of the CB1 receptors in the normal and diseased brain.

Le système endocannabinoïde régule de nombreuses fonctions physiologiques. Dans le cerveau, cette régulation est exercée principalement par l’activation des récepteurs CB1. En effet, ces derniers jouent un rôle clef dans la régulation des neurotransmissions excitatrices et inhibitrices, y compris dans des régions cérébrales impliquées dans la gestion des processus émotionnels. Les données existantes indiquent que les récepteurs CB1 exercent un contrôle tonique sur certaines dimensions de l’émotion (e.g. anxiété, peur), mais le rôle joué par ces récepteurs dans les conséquences émotionnelles de l’exposition répétée à des stimuli attractifs ou aversifs n’a été que peu analysé. L’objectif de nos travaux a donc été d’examiner chez la souris le rôle des récepteurs CB1 (i) dans l’adhérence à un exercice physique volontaire répété, et dans les impacts émotionnels (ii) de l’exercice volontaire répété, et (iii) du stress par défaites sociales répété. Cet examen a été réalisé principalement à l’aide d’outils génétiques (mutants constitutifs et conditionnels du récepteur CB1) mais également à l’aide d’outils pharmacologiques (antagonistes sélectifs des récepteurs CB1). L’utilisation de ces outils nous a permis d’identifier un rôle spécifique des récepteurs CB1 des neurones GABAergiques de l’aire tegmentale ventrale dans le contrôle des performances d’exercice physique volontaire sur roue chez la souris. De plus, les données comportementales obtenues indiquent que les récepteurs CB1 portés par les neurones glutamatergiques corticaux jouent un rôlecrucial dans les profils d’anxiété et d’extinction de peur observés après un exercice physique volontaire répété. Enfin, une dernière série d’études a permis de distinguer les impacts respectifs del’enrichissement de l’hébergement d’une part, et de la pratique de l’exercice d’autre part, dans les conséquences de l’exercice volontaire sur les comportements émotionnels et la neurogenèse hippocampique.Un second volet de recherche a permis de définir les rôles respectifs des récepteurs CB1 portés pardifférentes populations neuronales dans l’impact psychoneuroendocrinien (comportement, métabolisme, réactivité corticotrope) du stress social par défaites répétées. En particulier, ce travail asouligné l’impact majeur des récepteurs CB1 des neurones sérotonergiques dans les modifications depoids corporel et d’appétence pour le sucre induites par le stress répété. De plus, les résultats obtenus chez des animaux contrôles et des animaux stressés ont mis en avant le rôle des récepteursCB1 des neurones glutamatergiques corticaux et des neurones exprimant le facteur Sim1 (i.e. majoritairement hypothalamiques) dans les processus d’extinction de la mémoire de peur conditionnée au son. / The endocannabinoid system regulates a plethora of physiological functions. In the central nervoussystem, such a regulation is mainly achieved through the stimulation of CB1 receptors. Thus, these receptors exert a key control over excitatory and inhibitory transmissions, including in brain areas ubserving emotional processes. The data gathered so far have provided evidence for a tonic controlof several dimensions of emotionality (e.g. anxiety, fear) by CB1 receptors, but the role played by these receptors in the emotional consequences of the repeated exposure to positive or to negative stimuli has been poorly addressed. Thus, the aims of this work were to examine the role of CB1 receptors (i) in voluntary exercise (wheel running) performance, and in several emotional effects of(ii) repeated voluntary exercise and (iii) repeated social stress in mice. This task was mainly achievedthrough the use of genetic (constitutive and conditional CB1 receptor mutants) and, albeit to a lowerextent, pharmacological (CB1 receptor antagonists) tools.The aforementioned tools allowed us to assign to CB1 receptors located on ventral tegmental area GABAergic neurons a tonic stimulatory influence on voluntary running performance. Moreover, behavioural experiments led us to conclude that CB1 receptors located on cortical glutamatergic neurons are involved in the anxiety and fear extinction patterns observed in animals given repeatedaccess to exercise. Lastly, a series of studies allowed us to distinguish between the respective impacts of housing enrichment and exercise in the consequences of wheel running on emotional behaviours and hippocampal neurogenesis.A second set of experiments defined the respective roles played by distinct neuronal CB1 receptor populations in the psychoneuroendocrine effects of repeated social stress. Thus, this work presentedevidence for a tonic role exerted by CB1 receptors located on central serotonergic neurones in stresselicited changes in body weight growth and hedonia for sucrose. Besides, CB1 receptors located on cortical glutamatergic neurons or on Sim1-expressing neurons (which are mainly present in the paraventricular hypothalamus) were found to exert major roles in the extinction of cued fear memory in unstressed and/or stressed animals.