Malária é uma doença causada por protozoários do gênero Plasmodium que causa um milhão de mortes anualmente. Quase 3 bilhões de pessoas vivem em áreas tropicais de risco de infecção com uma das 5 espécies evidenciando um problema mundial carente de solução imediata. Esse parasita apresenta um potencial para o rápido desenvolvimento de resistências contra os fármacos utilizados em seu tratamento, por isso uma das soluções preconizadas pela Organização Mundial de Saúde é o desenvolvimento de vacinas eficazes para seu controle.O objetivo desse trabalho foca-se no aperfeiçoamento de uma metodologia mais efetiva para a formulação de vacinas contra malária. Inicialmente no modelo roedor, foi utilizado o método de carregamento em nanopartículas lipossomais , com proteínas oriundas de merozoítos do gênero Plasmodium. Além da avaliação do potencial vacinal das nanopartículas (sobrevida/morbidade), avaliamos o efeito da vacina contra toxinas (por exemplo, domínios GPI). Concluímos de maneira concisa que proteolipossomos gerados com proteínas GPI ancoradas do gênero Plasmodium possuem efeitos notáveis em relação a controle de crescimento parasitológico, mostrando-se efetivo também em desafios de letalidade in vivo. No que diz respeito a aspectos que afetam humanos, os soros gerados contra proteínas do parasita são capazes de diminuir interleucinas relacionadas com sintomas graves e parecem ter grandes efeitos antiparasitários que se correlacionam diretamente com o perfil genético do hospedeiro imunizado em ensaios in vitro. / Malaria is a tropical disease caused by species of the protozoan Plasmodium and around one million people die of the disease each year, while 3 billion individuals live at risk to acquire infection with one of the five species known to infect humans. Due to the parasite\'s looming resistance against most of the antimalarial compounds used in therapy, the WHO preconizes the development of effective vaccine as an important goal. The purpose of this work was to evaluate the potential of a new method of vaccine formulation against malaria. Initially tested in the rodent model, we loaded liposomal nanostructures with merozoite-derived GPI-anchored proteins. We then monitored parameters such as survival and morbidity after challenge and measured the effect against parasite derived toxines. We observed significant effects in terms of control of parasitemy and in one model complete survival of mice. We also detected the generation of antiGPI antibodies which showed to be functional in decreasing TNF-<font face=\"Symbol\">a production in an in vitro model, however, we detected that this function was dependent on the genetic background of the antibody producing immunized animal.

Orientador: Ricardo Luiz Dantas Machado / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Karin Kirchgatter / Resumo: Plasmodium vivax é a espécie mais prevalente de malária no Brasil. O processo co-evolutivo parasita-hospedeiro pode ser visto como uma "ferramenta", na qual trocas genéticas adaptativas podem influenciar na diversidade da população. Objetivo: Investigar polimorfismos de genes envolvidos na resposta imune humoral visando identificar possíveis associações com a malária. Material e Métodos: a amostra foi constiuída por 103 pacientes com malária vivax não complicada e como grupo controle 97 indíviduos não-maláricos. A identificação dos SNPs -726T>C no gene CD40L, -1 C>T no gene CD40 e -871C>T no gene BLYS foram efetuadas pelo método de PCR-RFLP. As frequências genotípicas, alélicas e de indivíduos portadores de cada alelo foram estimadas por contagem direta. Também foram comparadas as frequências genotípicas observadas com as esperadas segundo o teorema de Hardy e Weinberg. Resultados: As freqüências genotípicas e alélicas para esses SNPs não diferiram estatisticamente entre pacientes e indivíduos do grupo controle. A combinação dos genótipos entre os genes CD40 e BLYS e entre CD40L e BLYS não revelou interação gênica na população estudada. Não foi observada associação entre resposta imune humoral e parasitemia nos indivíduos maláricos com os polimorfismos dos genes investigados. Ambos os genes se encontram em equilíbrio de Hardy e Weinberg. Conclusões: Os resultados deste estudo sugerem que as variantes genéticas analisadas nos genes CD40, CD40L e BLYS não afetam a funcionalidade das moléculas de modo que possa interferir na susceptibilidade a doença, mas estas variantes podem influenciar o curso clínico em vez de simplesmente aumentar ou diminuir a susceptibilidade / Abstract: Plasmodium vivax is the most prevalent malaria species in Brazil. The parasite-host coevolutionary process can be viewed as an 'arms race', in which adaptive genetic changes in one are eventually matched by alterations in the other. Objectives: following the candidate gene approach we analyzed the CD40, CD40L and BLYS genes that participate in B-cell co-stimulation, for associations with P. vivax malaria. Methods: the study sample included 97 patients and 103 controls. We extracted DNA using the extraction and purification commercial kit and identified the following SNPs: -1C>T in the CD40 gene, -726T>C in the CD40L gene and the -871C>T in the BLyS gene using PCR-RFLP. We analyzed the genotype and allele frequencies by direct counting. We also compared the observed with the expected genotype frequencies using the Hardy-Weinberg Equilibrium. Results: The allele and genotype frequencies for these SNPs did not differ statistically between patient and control groups. Gene-gene interactions were not observed between the CD40 and BLYS and between the CD40L and BLYS genes. Overall, the genes were in Hardy-Weinberg Equilibrium. Significant differences were not observed among the frequencies of antibody responses against P. vivax sporozoite and erythrocytic antigens and the CD40 and BLYS genotypes Conclusions: the results of this study show that, although the investigated CD40, CD40L and BLYS alleles differ functionally, this variation does not alter the functionality of the molecules in a way that would interfere in susceptibility to the disease. Significance: The variants of these genes may influence the clinical course rather than simply increase or decrease susceptibility / Mestre

Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Rosely dos Santos Malafronte / Banca: Ana Patrícia Yatsuda Natsui / Banca: Tiago Wilson Patriarca Mineo / Resumo: A malária é a endemia de maior impacto na Saúde Pública de países tropicais, devido à alta morbidade e mortalidade. Considerando a malária como uma zoonose, nos quais primatas podem funcionar como reservatórios de espécies de Plasmodium que podem infectar seres humanos nos levam a realizar estudos de malária em primatas com inquestionável relevância. Sabendo-se que geralmente a distribuição da malária humana e de primatas segue a mesma distribuição dos anofelinos, mosquitos vetores, neste trabalho investigaram-se a presença de Plasmodium spp. em primatas neotropicais e em anofelinos na Ilha de São Luís, Estado do Maranhão, Brasil. Colheram-se amostras de sangue de primatas neotropicais do CETAS-São Luís (n=141) e de vida livre (n=20) da Reserva Particular Sítio Aguahy, município de São José de Ribamar. Mosquitos anofelinos foram capturados nesta mesma reserva (n=380) e no Sítio Mangalho (n=36), localizado na Área de Proteção Ambiental do Maracanã, município de São Luís, totalizando em 54 ―pools‖. As amostras de sangue de primatas foram submetidas a testes morfológicos, sorológicos (RIFI e ELISA-teste) e moleculares (qPCR e PCR convencional) para identificação de Plasmodium. Os ―pools‖ de mosquitos foram ensaiados por testes moleculares para identificação de Plasmodium. Cinco primatas tiveram lâminas positivas (3,10%) com observação de formas trofozoíticas. Na RIFI quatro amostras de soro de primatas sororreagiram frente ao antígeno de P. malariae. Amplificaram para Plasmodium sp. na qPCR 34,16% (55/161) das amostras de primatas. Na PCR convencional 30,43% (49/161) foram positivas, sendo 47 (47/49) para P. brasilianum/P. malariae e 2 (2/49) para P. simium/P. vivax. Foram sequenciadas quatro amostras de DNA de primatas, que apresentaram identidade com P. malariae (n=2),com Plasmodium ZOOBH (n=1) e com P. falciparum (n=1). Três ―pools‖ de anofelinos foram positivos para Plasmodium na... / Abstract: Malaria is a disease of greater impact on Public Health in tropical countries because of the high morbidity and mortality. Considering malaria as a zoonosis in which primates can act as reservoirs of species of Plasmodium that can infect humans lead us to conduct malaria studies in primates with unquestionable relevance. It is generally know that the distribution of human and primate malaria following the same distribution of Anopheles mosquitoes vectors, in this study we investigated the presence of Plasmodium spp. in neotropical primates and Anopheles in São Luís Island, Maranhão State, Brazil. Samples were blood neotropical primates CETAS-São Luís (n = 141) and wild life (n = 20) Private Reserve Sítio Aguahy, São José de Ribamar. Anopheles mosquitoes were captured in the same reserve (n = 380) and Mangalho site (n = 36), located in the Environmental Protection Area of the Maracanã, São Luís, totaling 54 pools. The primate blood samples were subjected to morphological, serological (IFA and ELISA-test) and molecular (qPCR and conventional PCR) to identify Plasmodium. The "pools" of mosquitoes were assayed by testing for molecular identification of Plasmodium. Five primates had positive slides (3.10%) with observation trofozoíticas forms. In IFA four primate serum samples sororreagiram against the antigen of P. malariae. Amplified Plasmodium sp. qPCR at 34.16% (55/161) of samples of primates. In conventional PCR 30.43% (49/161) were positive, 47 (47/49) for P. brasilianum/P. malariae and 2 (2/49) to P.simium/P. vivax. Were sequenced DNA samples from four primates which showed identity with P. malariae (n = 2), Plasmodium ZOOBH (n = 1) and P. falciparum (n = 1). Three pools of Anopheles were positive for Plasmodium in qPCR (3/54) and conventional PCR. The sequencing samples showed identity to P. falciparum (n = 1), P. vivax (n = 1) and Plasmodium ZOOBH (EF090276). Due to the continued and increasing encroachment to forests by ... / Doutor

Orientador: Paulo Milton Barbosa Landim / Banca: Ene Glória da Silveira / Banca: Luzia Aparecida Trinca / Banca: Roberto Wagner Lourenço / Banca: Antonio Carlos Simões Pião / Resumo: O município de Porto Velho teve sua ocupação marcada por um sério desordenamento urbano, que resultou, entre outros, em aglomerados populacionais de baixa renda, originados de migrações externas e internas que se assentaram em locais impróprios para a urbanização. Isso deu origem a conflitos sócio-ambientais e de saúde pública, ou seja, contribuiu para uma crescente insuficiência dos serviços de saneamento e para o incremento da pobreza. A deterioração das condições de vida no município criou ambientes favoráveis à proliferação de vetores transmissores de doenças parasitárias, contribuindo para a intensificação da transmissão no meio urbano e para o agravamento do problema de saúde pública, em especial pela malária. A maioria da população portovelhense habita áreas com elevado risco de transmissão, pois vive em locais com ambientes propícios à formação de criadouros dos mosquitos que transmitem a malária, tais como: nascentes, drenagens, áreas alagadas e florestas remanescentes. Há também, em algumas áreas, evidência de vegetação equatorial úmida, de maneira a tornar a cidade vulnerável à proliferação de mosquitos anofelinos, vetores de malária, especialmente em áreas com freqüência de migrantes. O município, hoje, detém pouco mais de 25% dos casos de malária do Estado de Rondônia, isso porque o crescimento populacional acelerado cria uma série de problemas urbanos de infra-estrututa em todos os aspectos. O modelo de políticas públicas atuais não é eficiente na erradicação da doença na área urbana. Em razão dos problemas expostos, esse estudo teve por objetivo mapear as possíveis áreas de maior prevalência do vetor transmissor da doença, associando-as aos problemas sócio-ambientais para que essas informações possam orientar o poder público e a sociedade, com o fim de interferir no controle da endemia eficientemente. / Abstract: Porto Velho municipal district had its occupation characterized by a serious disordering process, which has resulted in agglomerations of low income people, originated from external and internal migration which had been settled in improper areas, therefore this occupation originated social-environmental and public health conflicts, contributing to an increasing sewage inadequacy and poverty. The degradation process of life standards in the municipal district led to favorable conditions for the proliferation of vector transmitter parasitic diseases, contributing to the disease spreading in urban areas and the aggravation of public health problems, particularly malaria. The majority of Porto Velho's population inhabits areas where there are several transmission risks, due the high incidence of malaria transmitter mosquitoes that live in water nascent, drainage, flooded and forest remained areas. There is also, in some areas, equatorial humid vegetation, turning the place vulnerable to the proliferation of malaria mosquito transmitters, particularly in areas with high frequency of migrants. The municipal district has nowadays more than 25% of malaria cases in Rondonia, mainly because of disordered population increasing, which creates urban problems in all aspects. The public politics used nowadays aren't efficient on eradicating the disease in urban areas. Due to the exposed problems, this study aims to map the potential malaria prevalence areas, associating to the socio-environment problems in order to orientate government and society to control, properly, the endemic malaria. In order to accomplish this task, there was used specific statistical techniques of multiple correspondence analysis, applied to physical environment and adapted to the social area. / Doutor

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-06T19:23:03Z No. of bitstreams: 1 SARAH_RESENDE_MBCM_Final.pdf: 6553798 bytes, checksum: cb7ea34b3f0a947f3d81c20d5448938f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T19:23:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SARAH_RESENDE_MBCM_Final.pdf: 6553798 bytes, checksum: cb7ea34b3f0a947f3d81c20d5448938f (MD5) Previous issue date: 2013 / Cepas de Plasmodiumresistentes a diferentes drogas têm sido descritasao redor do mundo. Embora os mecanismos de desenvolvimento de resistência não sejam bem conhecidos, sabe-se que defeitos nos sistemas de reparo do DNA podem estar envolvidos. Esses defeitos estão relacionados principalmente a mutações nas enzimas do sistema de reparo de mal pareamento do DNA ou mismatch repair (MMR) e já foram descritos em populações naturais de diversos organismos. Devido ao conhecimento limitado sobre o sistema MMR de Plasmodium, faz-se necessário um amplo estudo sobre os genes que codificam as proteínas envolvidas nesse sistema. Neste trabalho, foi realizado um estudo sobre as enzimas envolvidas no sistema de reparo do mal pareamento do DNA em Plasmodium: variabilidade intra e interespecífica em Plasmodium, principalmente nos domínios funcionais, e comparação entre níveis de expressão entre cepas/isolados de P. falciparum.Os parasitos foram também avaliados quanto ao número de cópias e expressão dos genes gch-1emdr1. Foram identificadas proteínas pertencentes às classes MSH2, MSH6, MLH1 e PMS1. As sequências de proteínas mostraram-se muito conservadas, tanto entre o gênero Plasmodium, quanto em relação a outros organismos distantes evolutivamente. Foi encontradaum proteína homóloga a MutS que possui os domínios I e V, mas ainda não identificada quanto à sua classificação. O gene codificador desta proteína teve sua expressão confirmada neste e em outros trabalhos. Alguns SNPs foram encontrados em cepas/isolados depositados no PlasmoDB, no entanto, o sequenciamento da região que compreende os principais domínios funcionais apontou apenas 1 SNP na proteína PMS1. Os genes estudados, em sua maioria, apresentaram-se mais expressos entre 10 e 30 horas após a sincronização. W2 e 3D7 apresentam 2 cópias do genes gch-1e mdr1. BHZ apresentou apenas 1 cópia do mdr1. Os resultados da análise de expressão desses genes ligados à resistência concordam com os resultados encontrados para o número de cópias gênicas. Este estudo fornece uma análise ampla das principais enzimas do MMR e será importante para estudos futuros do papel funcional destas enzimas e seu envolvimento no desenvolvimento de resistência às drogas. / Drug-resistant Plasmodiumstrains have been reported world wide. The mechanisms underlying resistance development are not well understood, but failure in DNA repair could be involved in this process. This failure is mainly related to mutations in the enzymes of the DNA mismatch repair (MMR). Because of the limited knowledge about the PlasmodiumMMR system, it is necessary a comprehensive study about the genes encoding proteins involved in this system. In this work, we studied the enzymes involved in the PlasmodiumMMR, considering the intraspecific and interspecific variability in Plasmodium, especially within the functional domains and comparing the expression levels between strains/isolates of P. falciparum.Parasites were also assessed for copy number and expression of the genes pfgch-1and pfmdr1. We identified proteins related to MSH2, MSH6, MLH1 and PMS1. The protein sequences were very conserved among the genus Plasmodium, as well in relation to other evolutionarily unrelated organisms. We found a putative protein homologous to MutS showing the domains I and V, butnot classified yet. The gene encoding this protein has its expression confirmed here and in other previous studies. SNPs were found in some strains/isolates deposited in PlasmoDB, however, the sequencing of the region comprising the main functional domains showed only one SNP in PMS1. The genes studied, mostly, were more expressed between 10 and 30 hours after synchronization. W2 and 3D7 showed 2 copies of the gene gch-1 and mdr1. In BHZ, only one copy of the mdr1 were founded. The results of expression of these genes related to the resistanceagree with the findings for the gene copy number. This study provides a comprehensive analysis of the major enzymes of the MMR and will be important to further functional studies of this enzymes and their role in drug resistance development.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T15:01:12Z No. of bitstreams: 1 Tese Paulo Totino 2012.pdf: 4009343 bytes, checksum: 0cf12e4e6c9631d541933a237d4cea87 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T15:01:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Paulo Totino 2012.pdf: 4009343 bytes, checksum: 0cf12e4e6c9631d541933a237d4cea87 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A anemia grave é sem dúvida uma das complicações mais comuns durante a infecção malárica e é uma das principais responsáveis pela elevada taxa de mortalidade de crianças e mulheres grávidas em regiões hiperendêmicas africanas. Embora os mecanismos que desencadeiam a anemia grave da malária ainda não tenham sido completamente elucidados, sabe-se que o aumento da destruição dos eritrócitos não parasitados tem importante contribuição na gênese dessa manifestação clínica. Frente a esse fato e tendo em vista a já descrita susceptibilidade dos eritrócitos ao processo de apoptose, que inclusive parece estar relacionado com a anemia de diversas patologias e pode ser induzida por diferentes tipos de drogas, decidimos estudar a apoptose eritrocitária e sua participação na anemia no decurso da infecção malárica. Primeiramente, avaliamos in vitro a capacidade da cloroquina, mefloquina, artemisinina e quinina em induzir apoptose em eritrócitos humanos. Nesta primeira investigação, observamos que os antimaláricos não tiveram efeito proapoptótico nestas células e, portanto, parecem não participar da anemia da malária através da indução de apoptose eritrocitária. Em seguida, estudando a infecção experimental de camundongos Balb/c pelo Plasmodium yoelii 17XL, constatamos um aumento nos níveis basais de apoptose de eritrócitos não parasitadas e sugerimos que este aumento poderia estar contribuindo com a anemia neste modelo experimental de malária. Porém, quando posteriormente examinamos em paralelo os níveis de apoptose e o grau de anemia, não foi possível observar relação entre estes dois eventos, mas sim entre a carga parasitária e os níveis de apoptose detectados na fase tardia da infecção. A possível influência da parasitemia nos níveis de apoptose eritrocitária parece ter encontrado suporte quando estudamos pacientes infectados pelo P. vivax. De fato, nessa infecção, que cursa com baixa parasitemia, não detectamos alteração nos níveis de apoptose eritrocitária. Como a apoptose além de ter propriedades patogênicas, também está envolvida com a limitação da propagação de parasitas intracelulares, avaliamos então in vitro a capacidade do P. falciparum de infectar eritrócitos apoptóticos. Neste último estudo, verificamos que estas células apoptóticas são refratárias à infecção plasmodial e, portanto, poderiam participar no controle da parasitemia na malária. / Severe anaemia is a common complication associated to malaria and plays an important role on mortality, particularly in children and pregnant woman living in malaria hyperendemic African regions. It is well known that together to other mechanisms leading to severe malaria anaemia, premature elimination of non-parasitized red blood cells (nRBC) contributes to the genesis of this malarial complication. Thus, considering the susceptibility of RBC to apoptosis – process that has been related to the anaemia of several pathologies and that can be induced by different drugs – we decided to study erythrocytic apoptosis and its involvement in malaria-associated anaemia. Firstly, we evaluated the in vitro capacity of chloroquine, quinine, artemisinin and mefloquine to induce apoptosis in human RBC. In this first study, it was observed that antimalarial drugs were not able to induce apoptosis in RBC and, therefore, it seems that these drugs do not participate in malaria anameia through induction of erythrocytic apoptosis. Next, studying the experimental infection of P. yoelii 17XL in Balb/c mice, we noted increased levels of nRBC apoptosis that could be related to anaemia in this malaria model. However, when we analyzed, in parallel, apoptotic levels and anaemia degree, no relationship between these two parameters was observed, although an association between parasite load and apoptosis at the later stages of infection had been observed. The putative influence of parasitaemia on apoptotic levels seems to be supported by our studies with P. vivax malaria patients, since the low parasitaemia observed in this infection was not followed by an increase of erytrocytic apoptosis. Considering that besides to pathogenic proprieties, apoptosis also participates in the innate defense trough restriction of intracellular pathogens propagation, we also investigated if P. falciparum parasites were able to infect apoptotic RBC. In this last study, it was possible to observe that apoptotic RBC were refractory to in vitro plasmodial infection and, therefore, it could act protectively by controlling malaria parasite propagation.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-10-24T17:23:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_PedroAugustoCarvalhoCosta.pdf: 2613947 bytes, checksum: 08fad24a8075a76fe3f727816f49fdb0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-24T17:23:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_PedroAugustoCarvalhoCosta.pdf: 2613947 bytes, checksum: 08fad24a8075a76fe3f727816f49fdb0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou / No Brasil a malária ainda é considerada um grande problema de saúde pública. Embora o número de casos de malária esteja diminuindo, a incidência foi maior que 300.000 casos nos últimos dois anos. Destes casos, o Plasmodium vivaxfoi considerado o principal agente causador, com 90% de incidência. A resposta imune adaptativa, com o auxílio da imunidade inata, tem a função de superar as estratégias impostas pelos agentes infecciosos, levando ao controle da infecção. A ativação de células T envolve além da sinalização através do receptor de célula T (TCR), sinalização secundária desencadeada por moléculas reguladoras. A combinação das interações mediadas por estes regula a extensão, qualidade e duração da ativação de células T e, portanto, influenciam significativamente no curso das respostas imunes em questão. O objetivo desse trabalho é avaliar o fenótipo de células T de pacientes infectados pelo P. vivax com o foco na expressão de moléculas reguladoras como morte programada-1 (PD-1), co-estimulador induzível de células T (ICOS), antígeno 4 associado ao linfócito T citotóxico (CTLA-4), domínios de mucina e imunoglobulina de célula T (TIM-3) e gene 3 de ativação linfocitária (LAG-3). Células mononucleares do sangue periférico foram coletadas de pacientes infectados pelo P. vivax em Porto Velho, RO. Os linfócitos foram analisados por citometria de fluxo. Os resultados demonstram um aumento de citocinas inflamatórias e uma diminuição no número de linfócitos em pacientes infectados pelo P. vivax. Na literatura, a expressão desses receptores inibidores e moléculas co-estimulatórias é associada com a diminuição de função de células T. Nossos resultados demonstram um aumento da expressão das moléculas citadas acima em pacientes infectados pelo P. vivax. O aumento da expressão de algumas dessas moléculas correlacionam com o dano hepático e com plaquetopenia em pacientes infectados pelo P. vivax. Além disso, foi observado um aumento da expressão de um marcador específico da proliferação celular, o Ki67, em pacientes infectados pelo P. vivax. A caracterização fenotípica aqui realizada sugere disfuncionalidade das células T. Estudos adicionais devem ser realizados para avaliar a função destas moléculas durante a malária. / In Brazil, malaria is still considereda major public healthproblem. Although the number of malaria cases is declining, the incidence was greater than 300,000 cases in the past two years. Of these cases, Plasmodium vivax was considered the main causative agent, with 90% incidence. The adaptive immune response, along with innate immunity, has the function to overcome the strategy imposed by infectious agents, leading to infection control. The activation of T cells involves signaling through the T cell receptor (TCR) and regulatory receptors. The combination of these interactions regulates the extent and quality of the T cell activation and therefore influences significantly the course of immune responses in question. The aim of this study is to evaluate the phenotype of T cells from patients infected with P. vivaxfocusing on the expression of regulatory receptors such as programmed death-1 (PD-1), inducibleT cell stimulator (ICOS), cytotoxic T lymphocyte attenuator (CTLA-4), T-cell immunoglobulin and mucin domain domain 3 (TIM-3) and lymphocyte activation gene-3 (LAG-3). Peripheral blood mononuclear cells were collected from patients infected with P. vivax in Porto Velho, RO. Lymphocytes were analyzed by flow cytometry. Our data demonstrate an increase in inflammatory cytokines levels and a decrease in the number of lymphocytes during malaria. It has been described that the expression of these inhibitory receptors and costimulatory molecules is associated with decreased T cell function. Our results demonstrate that P. vivax infection triggers an increase in the expression of all molecules mentioned above. Increased expression of someof these molecules correlates with liver damage and thrombocytopenia. Moreover, we observed increased expression of a proliferation marker, the Ki67, in the same patients. The phenotype observed suggests a T cell dysfunction. Further studies have to be performed to evaluate the role of these molecules during malaria.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:46:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000015.pdf: 12430663 bytes, checksum: 67e3744dee25168d8c765fcc7b7a50c8 (MD5) Previous issue date: 2008 / Este trabalho analisa a história da saúde pública no governo de Juscelino Kubitschek (1956-­1961). A análise desse período inicia pela descrição e discussão do Programa de Saúde Pública do candidato Juscelino Kubitschek, documento político, no qual são divulgadas as metas e as promessas da campanha presidencial para a área da saúde. Como primeira ação no cumprimento do seu programa, Juscelino cria em 1956 o Departamento Nacional de Endemias Rurais (DNERu), instituição centralizadora dos serviços nacionais de saúde. Nessa empreitada, JK teve o apoio imprescindível do sanitarista e político Mario Pinotti. Principal personagem nacional da saúde pública na década de 1950, Pinotti cria um método de combate à malária. O sal c1oroquinado nomeado de "Método Pinotti" foi reconhecido internacionalmente como importante contribuição brasileira para erradicação mundial da malária. A doença, que estava controlada no início do governo JK, toma-se a mais importante endemia em 1958, quando o Brasil assumiu o compromisso com a Organização Mundial de Saúde (OMS) de converter seus programas de controle em programas de erradicação. Para isso foi instalado um Grupo de Controle e Erradicação da Malária sob a direção de Pinotti. A malária seria uma importante moeda de negociação no contexto da política de desenvolvimento de JK

Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-08-13T04:12:34Z No. of bitstreams: 1 bianca_e_gama_ioc_bp_0042_2011.pdf: 1968573 bytes, checksum: 439595e4d28df18cd5a083cc9b3673ad (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-13T04:12:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bianca_e_gama_ioc_bp_0042_2011.pdf: 1968573 bytes, checksum: 439595e4d28df18cd5a083cc9b3673ad (MD5) Previous issue date: 2011 / Instituto Nacional de Câncer. Centro de Transplantes de Medula Óssea. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A malária, doença infecciosa causada por parasitas do gênero Plasmodium, é um conhecido flagelo das populações humanas desde a antiguidade. Na falta de uma vacina, a política de controle baseia-se principalmente no diagnostico rápido e no tratamento dos casos. Devido ao impacto da quimiorresistência parasitária no controle, faz-se necessário o constante monitoramento da eficácia de drogas. Portanto, para contextualizar o Brasil no panorama mundial, nosso objetivo se constituiu em realizar um estudo descritivo sobre a ocorrência de mutações (SNPs) nos genes considerados marcadores moleculares associados à resistência como pfcrt, pfmdr1, pfdhfr, pfdhps e pvdhfr, assim como em genes potencialmente associados à quimiorresistência (pfatpase6 e pvmdr1) em isolados de P. falciparum e P. vivax coletados nas cidades Amazônicas de Porto Velho, Paragominas e Manaus. Para tal, utilizamos PCRs seguidas do sequenciamento de DNA. Ao investigarmos a ocorrência de mutações nos genes pfcrt, pfdhfr e pfdhps em amostras de P. falciparum provenientes de Porto Velho e Paragominas foi possível detectar 1 isolado apresentando um haplótipo ou perfil de sensibilidade CVMNK no gene pfcrt e ACNSVI no gene pfdhfr e, além disso, pudemos observar uma redução no numero de mutações no gene pfdhps, ao confrontarmos os nossos resultados com os de um estudo retrospectivo. Em relação ao P. vivax, a análise do gene pvdmr1 num conjunto de amostras provenientes de Paragominas revelou o predomínio de mutações no códon 976 do gene pvmdr1 (preliminarmente associado com a resistência à cloroquina) e a presença de haplótipos duplo-mutante FRTNI e triplo-mutante FRTNL para o gene pvdhfr. dando continuidade à caracterização de P. falciparum no Brasil, foi estabelecido um registro de base da ocorrência de mutações nos genes pfmdr1 e pfatpase6, em amostras procedentes de Porto Velho, Paragominas e Manaus. Tal análise permitiu a identificação de um haplótipo prevalente NEF/CDVY no pfmdr1, assim como identificação de mutantes em um único códon ou duplo-mutantes (630 e/ou 402) no caso do gene pfatpase6. também não foi encontrada a mutação 769N, associada com a diminuição da susceptibilidade ao arteméter. Concluímos que: (a) existem no Brasil popluações parasitárias de P. falcipoarum portando haplótipos sensíveis para o gene pfcrt e o pfdhfr; (b) a mutação no códon 976 no gene pfmdr1 pode não ser válida para o monitoramento da resistência à cloroquina em isolados brasileiros de P. vivax; (c) as populações de P. vivax avaliadas apresentaram mutações no gene pvdhfr, apesar de nunca ter sido instituído o tratamento com sulfadoxina-pirimetamina para malária vivax e; (d) as amostras de P. falciparum avaliadas não portavam todos os alelos do gene pfmdr1 associados a um potencial desenvolvimento de resistência à combinação arteméter-lumefantrina / Acknowledged as a febrile syndrome of human populat ions since ancient times, malaria is an infectious disease caused by parasites of the Plasmodium genus. In the absence of a reliable vaccine, the c ontrol policy is based mainly on diagnosis and case management. Since para site chemoresistance is a major factor hampering th e disease control, there is a need for drug efficacy surveillance. Therefore, to place Brazil into the w orld scenario, our goal was to conduct a descriptive study on the occurrence of mutations (SNPs) in genes acknowledge d as molecular markers to chemoresistance as pfcrt , pfmdr1 , pfdhfr , pfdhps and pvdhfr , as well as in genes potentially associated with chemoresistance ( pfatpase6 and pvmdr1 ) in isolates of P. falciparum and P. vivax collected in Porto Velho, Manaus and Paragominas ci ties in Brazilian Amazon. With this aim, we used PC R technique followed by DNA sequencing. The analysis of mutations in pfcrt , pfdhfr and pfdhps genes in P. falciparum samples from Porto Velho and Paragominas allowed us to detect a single isolate presenting a sensitivity profile CVMNK in the pfcrt gene and ACNCSVI in the pfdhfr gene. Additionally, we could observe a decrease in the mutations number for the pfdhps gene, when comparing our results with those from a retrospective study. Concerning P. vivax , the analysis from Paragominas samples revealed th e full predominance of mutations at codon 976 in the pvmdr1 gene (preliminarily associated with chloroquine resistance), and the presence of double-and triple- mutant haplotypes (FRTNI and FRTNL) for the pvdhfr gene. Lastly, to establish a genotypic baseline for pfmdr1 and pfatpase6 genes, P. falciparum isolates from Porto Velho, Manaus and Paragominas were also evaluated. This analysis allowed us to identify a major haplot ype NEF/CDVY in pfmdr1 gene, as well as to detect a single-mutant (in 630 or 402 codons) and double-mutant (in 630 and 402 codons) when pfatpase6 gene was surveyed. The 769N mutation, associated w ith decreased susceptibility to artemether, was not detected. We conclude that: (a) there exist P. falciparum populations presenting sensitive alleles for the gene pfcrt and pfdhfr in Brazil; (b) the 976 mutation in the pvmdr1 gene may not be valuable for monitoring chloroquine resistan ce in Brazilian P. vivax isolates; (c) P. vivax populations herein investigated presented mutations in the pvdhfr gene, although sulphadoxine-pyrimethamine therapy has never been preconized for malaria vivax and; (d ) the P. falciparum samples analyzed did not carry all alleles in the pfmdr1 gene that were associated with a potential develop ment of resistance to artemether- lumefantrine

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-24T17:47:03Z No. of bitstreams: 1 Tese_Fernanda Magalhaes Freire Campos.pdf: 4772318 bytes, checksum: 555a5b9ad51faf9705b69cd3e50f2676 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-24T17:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Fernanda Magalhaes Freire Campos.pdf: 4772318 bytes, checksum: 555a5b9ad51faf9705b69cd3e50f2676 (MD5) / FAPEMIG, CNPq, PAPES V, CPqRR / Os estudos sobre os mecanismos patogênicos que levam à malária grave foram durante muitos anos restritos basicamente ao Plasmodium falciparum. Entretanto, o número de casos de P. vivax vem aumentando em todo o mundo, incluindo aqueles de malária grave. Evidências recentes sugerem que a infecção pelo P. vivax induz uma resposta imune inflamatória mais intensa que aquela induzida pelo P. falciparum. Diante disso, os objetivos deste trabalho foram: (i) investigar mediadores plasmáticos relacionados à inflamação que poderiam ser utilizados como marcadores de morbidade da malária por P. vivax; (ii) identificar indivíduos geneticamente susceptíveis e/ou resistentes à malária clínica. Na busca de biomarcadores, a hipótese investigada foi a de que as micropartículas (MPs) – vesículas resultantes da ativação e/ou apoptose celular – e os ácidos nucléicos circulantes (CNAs) estariam associados à infecção pelo P. vivax. Em pacientes bem caracterizados clinicamente foi possível demonstrar que as MPs, de diferentes origens, estavam significativamente aumentadas na malária por P. vivax, sendo as MPs de origem plaquetária associadas à sintomatologia da doença. Os níveis de CNAs plasmáticos estavam aumentados nos pacientes infectados pelo P. vivax sendo estes níveis associados ao espectro clínico da doença. Um achado interessante no presente trabalho foi que os níveis de CNAs também correlacionaram- se com a trombocitopenia. Um resultado de grande importância foi que os níveis de MPs e CNAs no plasma retornaram aos valores basais após o tratamento antimalárico específico, o que sugere que ambos os fatores podem ser bons marcadores de morbidade por P. vivax. Na segunda parte do estudo, buscou- se a associação entre os polimorfismos genéticos de citocinas (MIF, TNF-α, IL-10 e TGF-β) e de glicoproteínas plaquetárias (GPIa/IIa e GPIIb/IIIa) com as complicações clínicas e hematológicas da infecção pelo P. vivax. Os resultados obtidos evidenciaram associações entre os polimorfismos dos genes GPIa/IIa, TNF-α, MIF e IL-10 e alterações clínicas e hematológicas na malária causada pelo P. vivax. Em resumo, os dados apresentados reforçam a influência de múltiplos genes do hospedeiro vertebrado na malária por P. vivax. Espera-se que os resultados observados no presente trabalho possam contribuir no esclarecimento dos mecanismos envolvidos na patogenia do P. vivax . / Study of the mechanisms involved in the pathogenesis of severe malaria has been widely concentrated in malaria caused by P. falciparum. However, the number of severe cases of P. vivax has been increasing, placing P. vivax infection in a higher status of global health concern. The few studies that had addressed the pathogenesis of vivax malaria had shown that P. vivax infection induces greater host inflammatory responses compared to P. falciparum malaria. Here, the main objectives of the study were: (i) to investigate plasma-derived mediators of inflammation that could be a potential marker of P. vivax clinical disease, (ii) to identify individuals who are genetically susceptible and/or resistant to vivax malaria. Searching for biomarkers, the hypothesis investigated was that cellular microparticles (MPs) – submicron membrane vesicles released upon cellular activation or apoptosis– and circulating nucleic acids (CNAs) are involved in P.vivax infection. In patients clinically well characterized, it was possible to demonstrate that MPs from different cellular origins were significantly increased in P. vivax infection, and those platelet-derived were associated with acute malaria symptoms. Also, the levels of CNAs were increased in plasma of P. vivax patients, with their levels associated with the clinical spectrum of vivax malaria. An interesting finding was that the levels of CNAs were correlated with thrombocytopenia. Of importance, the levels of MPs and CNAs in plasma returned to basal values after specific antimalarial treatment, which suggested they may have potential as biomarkers of vivax morbidity. Further, we sought to investigate the association between genetic polymorphisms in cytokines (MIF, TNF-α, IL-10 and TGF-β) and platelet surface glycoproteins (GPIa/IIa and GPIIb/IIIa) with clinical complications of P. vivax infection. The results showed associations between genetic polymorphisms of several genes – GPIa/IIa, TNF-α, MIF and IL-10 – with hematological and clinical parameters of P. vivax infection. Taken together, the results presented here may shed light on the mechanism involved in the pathogenesis of P.vivax, and it might contribute to the current studies on P. vivax malaria.