Orientador: Helio Langoni / Resumo: A mastite bovina é responsável por grandes perdas econômicas na bovinocultura de leite, além de aspectos de saúde pública que devem também ser considerados. Animais com mastite clínica ou subclínica apresentam diversas alterações reprodutivas. No primeiro artigo da tese, os resultados obtidos demonstraram que a mastite causada por patógenos maiores (20,1%) ou por gram-negativos (15,4%) levaram a queda na taxa de prenhez na primeira inseminação comparado com o grupo controle (32,6%). Foi observado maior taxa de perda gestacional para os grupos de patógenos maiores (22,2%) e gram-negativos (30,1%) comparados com o controle (12,8%). Foi observado diferença entre todos os grupos para o número de dias em aberto. O grupo controle apresentou o menor intervalo (126,5 dias) seguido pelo grupo patógenos menores (162,0 dias) e pelo grupo de patógenos maiores (175,1 dias). Comportamento similar observado para patógenos gram-positivo (172,7 dias) e patógenos gram-negativos (191,1 dias). Portanto, é importante controlar a mastite em rebanhos leiteiros e, para tanto, o diagnóstico é uma etapa importante. Diferentes proteínas de fase aguda foram descritas como bons biomarcadores para o diagnóstico da mastite. No segundo artigo da tese, foi observado que diferentes patógenos podem alterar a liberação de proteínas de fase aguda no leite. Bactérias que causam inflamações mais graves (E. coli e Klebsiella pneumoniae) levaram maior concentração das APP. Patógenos que causam infecções crônica (Str... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bovine mastitis is responsible for major economic losses in dairy cattle farming, as well as public health aspects that should also be considered. Animals with clinical or subclinical mastitis present several reproductive alterations. In the first article of this thesis, the results showed that mastitis caused by major pathogens (20.1%) or gram-negative (15.4%) led to a decrease in pregnancy rate in the first insemination compared to the control group (32.6%). Higher gestational loss rates were observed for the major (22.2%) and gram-negative (30.1%) pathogen groups compared with the control (12.8%). The difference was observed between all groups for the number of days open. The control group had the shortest interval (126.5 days) followed by the minor pathogens group (162.0 days) and the major pathogens group (175.1 days). Similar behavior observed for gram-positive pathogens (172.7 days) and gram-negative pathogens (191.1 days). Therefore, it is important to control mastitis in dairy herds and, so, diagnosis is a critical step. Different acute phase proteins have been described as good biomarkers for the diagnosis of mastitis. In the second article of this thesis, it was observed that different pathogens may alter the release of acute phase proteins in milk. Bacteria that cause more severe inflammation (E. coli and K. pneumoniae) led to a higher concentration of APP. Pathogens causing chronic infections (Environmental Streptococcus, S. aureus, Mycoplasma spp.) led to interm... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Lenice do Rosário de Souza / Banca: Gilberto Uemura / Banca: Alcioni Artioli Machado / Resumo: Apesar do controle da replicação viral, o uso crônico dos antirretrovirais leva a diversas alterações no portador de HIV, dentre elas, lipodistrofia e envelhecimento precoce. Os objetivos foram avaliar a densidade mamográfica de mulheres acima de 35 anos que vivem com HIV/aids, relacionando a densidade mamária à idade, tempo de exposição à terapia antirretroviral (cART), contagem de linfócitos T CD4+, carga viral do HIV e presença de lipodistrofia com incidência de lipossubstituição mamária (LM). Métodos: Coorte observacional de mulheres, dividida em dois grupos, G1 com 59 infectadas e G2 com 73 não infectadas pelo HIV, com idades de 35 a 72 anos. Foram estudados idades à entrevista, à menarca, à última gestação e à menopausa; uso de hormônios, dor mamária, histórias prévias de cirurgias de mama e familiar de câncer de mama ou de ovário. Resultados: Houve diferenças de LM entre os grupos, quando analisadas por faixas etárias, de 35 a 40 anos (p=0,002) e de 41 a 45 anos (p=0,041) com maior proporção em G1 e em G2, nas faixas de 51 a 55 anos (p=0,046) e 56 a 60 anos (p=0,005). A chance de lipodistrofia foi 9,3 vezes maior após 10 anos de uso de cART, ocorrendo em 29 (49,2%) mulheres de G1. Conclusões: mulheres portadoras de HIV/aids apresentam LM em idades mais precoces quando comparadas a mulheres não infectadas pelo vírus, não se encontrando relação com número de gestações, lipodistrofia, ter aids ou infecção assintomática e contagem de linfócitos T CD4+ / Abstract: Background: Despite viral replication control, the chronic use of antiretroviral drugs leads to several changes in HIV carriers, among which are lipodystrophy and premature aging. The objectives were to evaluate mammographic density in women older than 35 years living with HIV/AIDS and relate breast density to age, time of exposure to antiretroviral therapy (cART), CD4 + T lymphocyte count, HIV viral load and the presence of lipodystrophy with incidence of breast fatty replacement (BFR). Methods: Observational cohort of women divided into two groups: G1, comprising 59 HIV-infected individuals and G2, consisting of 73 uninfected women, all aged 35 to 72 years. The following variables were studied: age at the moment of the interview, at menarche, at the last pregnancy and at menopause; use of hormones; breast pain; previous history of breast surgery and family history of breast or ovarian cancer. Results: BFR differences were observed between the groups when they were analyzed by age ranges, from 35 to 40 years (p=0.002) and from 41 to 45 years (p=0.041), with a higher proportion in G1 and in G2 at the age ranges of 51 to 55 years (p=0.046) and 56 to 60 years (p=0.005). The chance of lipodystrophy was 9.3- fold greater after 10 years of cART use, and it occurred in 29 (49.2%) women in G1. Conclusions: women with HIV/AIDS showed BFR at earlier ages when compared to uninfected women, and no relation to the number of pregnancies, lipodystrophy, having AIDS or asymptomatic infection or CD4 + T lymphocyte count was found / Mestre

A neoplasia mamária é a doença mais entre as neoplasias em cadelas. As características clínicas dos tumores mamários caninos e sua relação com prognóstico foram discutidos, incluindo idade, raça, estagiamento clínico, diagnóstico histopatológico, hormônios e proliferação celular. Fatores clínicos prognósticos incluindo diâmetro do tumor e comprometimento linfonodal são discutidos em relação a graduação histopatológica e expressão de OCT4 (marcador para célula tronco tumoral). Avaliação imunohistoquímica dos marcadores (RE, RP, Ki-67 e OCT4) de neoplasias mamárias foi descritas. Foi observada marcação positiva para o OCT4, porém não se observou associação com fatores prognósticos clínicos. Assim como a marcação de RE, PR e Ki-67 foram observados. Houve uma forte associação entre graduação histopatológica de malignidade e tipo histológico. / Mammary neoplasms are the most common neoplasm in female dogs. The clinical features of canine mammary gland tumors and their relation to prognosis were discussed, including age, breed, staging, histopathological diagnosis, hormones, cell proliferation. Additional clinical prognostic factors including tumor size, and lymph node status are discussed in relation to graduation histopathological and OCT4 expression (cancer stem cell marker). Immunohistochemical evaluation of the markers (ER, PR, KI-67, OCT4) of the neoplastic canine mammary gland is described. We observed positive staining for OCT4, but was not associated with clinical prognostic factors. And the marking of ER, PR and Ki-67 was observed. There was a strong association between histopathological grade and histological type of malignancy.

A identificação e biópsia do primeiro linfonodo a receber a linfa de uma formação neoplásica, ou seja, do linfonodo sentinela, fornecem informações essenciais para o tratamento e prognóstico de pacientes humanos acometidos por neoplasia. Entretanto, em Medicina Veterinária existem poucos estudos sobre a drenagem linfática dos órgãos e o conceito de linfonodo sentinela ainda não é amplamente aplicado ao tratamento oncológico dos animais. Desta forma, nosso objetivo no presente estudo foi estabelecer um protocolo de aquisição cintilográfica linfática, ou linfocintilográfica, capaz de fornecer informações funcionais e topológicas da drenagem linfática mamária, pois, em cadelas, as glândulas mamárias ainda são uns dos principais órgãos acometidos por neoplasias. Neste estudo, a linfocintilografia foi utilizada para caracterização topológica e funcional in vivo da drenagem linfática de glândulas mamárias sadias de 30 fêmeas da espécie canina (Canis familiares), sem raça definida e peso aproximado de 10 Kg. O radiofármaco [99mTc]-dextran70 foi administrado por via intraparenquimatosa mamária em quatro pontos ao redor da papila (0,1 ml cada), na dose de 18,5 MBq. As imagens foram obtidas em duas seqüências de projeções laterais e ventrais, sendo uma logo após a administração do [99m</SUP Tc]-dextran70 e a outra após uma hora. O radiofármaco administrado nas glândulas mamárias torácicas craniais foi drenado pelos linfocentros torácico ventral e axilar, sendo que em duas destas 5 glândulas (40%) o radiofármaco também foi para o linfocentro cervical superficial. Este resultado foi semelhante para as glândulas torácicas caudais, entretanto, em nenhuma das linfocintilografias destas glândulas o linfocentro cervical superficial foi identificado. A drenagem das glândulas abdominais craniais foi realizada exclusivamente pelo linfocentro axilar. Os linfocentros inguinais superficial e profundo drenaram as glândulas abdominais caudais e inguinais, porém, uma das glândulas abdominais caudais foi drenada também pelo linfocentro cervical superficial e outra pelo linfocentro mediastínico. A técnica linfocintilográfica utilizada possibilitou a identificação de comunicações linfáticas entre os linfonodos axilares próprio e acessório, entre o axilar próprio e o cervical superficial e entre os linfonodos inguinais superficial e profundo. O número de linfocentros e linfonodos, a taxa de drenagem dos linfocentros e seu funcionamento variaram entre as glândulas mamárias e entre os animais. Em conclusão, o protocolo de aquisição linfocintilográfica adotado foi simples, rápido e eficaz para a caracterização da drenagem linfática mamária. As informações topológicas e funcionais obtidas neste estudo poderão ser aplicadas nos procedimentos investigativos como a ultra-sonografia e a biópsia dos linfonodos mamários em pacientes acometidos por neoplasias mamárias, uma vez que os vasos linfáticos representam vias de disseminação para células neoplásicas. / The knowledge of lymphatic drainage has prognostic and surgical value for oncological treatment. Once you know the lymph nodes that drain the organ, you can predict the possible neoplasic cell route and avoid or predict metastasis. The lymphoscintigraphy is not common in Veterinary Nuclear Centers, however this technique has high applicability in oncological studies. During this study, the lymphoscintigraphie was used to characterize topological and functional aspects of lymphatic health mammary drainage in 30 adult mongrel female dogs, 10Kg in weigh. Lymphoscintigraphies were performed immediately after 4 intramammary peripapilare injections (0, 1 ml each) of 18,5 MBq of [99mTc]-dextran70 and one hour later. Animals were imaged by lateral and ventral projections. Cranial thoracic glands were drained by ventral thoracic and axillary lymph centers, but we observed the simultaneous participation of superficial cervical lymph center in 40% of these (2 animals). This result was similar for caudal thoracic mammary glands, but not for cervical lymph center drainage, that was not observed in caudal thoracic glands lymphoscintigraphies. Cranial abdominal glands were drained exclusively by the axillary lymph center. Superficial and deep inguinal lymph centers drained caudal abdominal and inguinal mammary glands, but we observed one superficial cervical lymph center participation in a caudal abdominal mammary gland drainage. Our lymphoscintigraphic technique provided image of lymphatic communication between axillary lymph nodes and between superficial and deep inguinal lymph nodes. The number of lymph centers and lymph nodes, the lymph center drainage rate and functional behavior of each lymph nodes were variable. In conclusion, the lymphoscintigraphic protocol performed was simple, quickly and provided the lymphatic drainage characterization. Technique, topologic and functional information provided by the present study can be applied to understand neoplasic mammary cells dissemination routes, which has prognostic and treatment value for patients. Veterinary centers that have no Nuclear Medicine facilities can use these topologic and functional information of the present study in other diagnostic procedures such as the abdominal ultra-sound and lymph node biopsy of patients with mammary neoplasia.

A distribuição angular de fótons espalhados (perfil de espalhamento) pode fornecer informações sobre as estruturas que compõe um tecido biológico, permitindo, a partir da análise desta, identificar a presença de anormalidades no tecido. A proposta deste trabalho foi desenvolver um procedimento experimental de medidas do perfil de espalhamento de tecidos mamários normais e alterados e, posteriormente, correlacionar as informações contidas neste com informações histopatológicas do tecido. Os perfis de espalhamento foram medidos no intervalo de momento transferido entre 0,2<= ? <=6,2 nm-1, utilizando um difractômetro Siemens D-5005, com ânodo de cobre e operando no modo reflexão. As amostras de tecidos mamários, foram previamente classificadas como tecidos normais, fibroadenomas e carcinomas. As intensidades medidas foram corrigidas por atenuação, efeitos geométricos e pela variação angular do feixe incidente. A eficácia do procedimento experimental foi validada através do uso de dados de referência para amostras de água. Os resultados mostraram que o perfil de espalhamento é uma característica única de cada tipo de tecido, sendo sua forma relacionada à morfologia microscópica do tecido. Na região em que x<=0,35 nm-1, verificou-se estatisticamente que as informações contidas nos perfis de espalhamento permitem a diferenciação entre tecidos normais e alterados. / Angular distribution of photons scattered by tissues (scattering profile) gives detailed information of structures within them and provides an alternative mean of distinguishing pathologies. The proposal of this work was to develop an experimental procedure to determine scattering profiles from breast tissues (normal and neoplastic) and to correlate the information contained in these profiles with histopathological information. The scattering profiles were measured in the interval of momentum transfer 0,2 ? ? ? 6,2 nm-1, using a powder diffractomer apparatus (Siemens D-5005), with copper anode and operation in reflection mode. The breast samples were previously histopathologically classified as normal tissues, fibroadenomes and carcinomas. The measured angular distribution was corrected by attenuation, geometric effect and the angular variation of the incident beam. The effectiveness of the experimental procedure was validated through the use of water reference data. The results shown that, scattering profile is unique impression of each type of tissue, being correlated with the microscopic morphological features. In the region where ? ? 0,35 nm-1, were statistically verified that the information contained in the scattering profiles allow the differentiation between normal and neoplastic breast tissues.

Avaliou-se a eventual atividade quimiopreventiva por parte da vitamina A (VA) quando administrada a ratas Sprague-Dawley durante a etapa de pós-iniciação da carcinogênese mamária induzida pelo 7-12 dimetilbenz(a)antraceno (DMBA). Com exceção de 10 animais que constituíram um grupo controle à parte de ratas consideradas normais [grupo normal (N)], e que não foram submetidas a qualquer procedimento experimental durante todo o estudo, 40 ratas com 50 dias de idade receberam o agente carcinogênico DMBA, por meio de entubação gástrica na dose de 60 mg/kg/peso corpóreo. Após 2 semanas, as ratas iniciadas receberam durante 12 semanas consecutivas, por entubação gástrica, 0,25 mL/100 g de peso corpóreo de óleo de milho (grupo OM; controle, n=20) e 2,5 mg/100 g de peso corpóreo de vitamina A (grupo VA, n=20), sendo, então, eutanasiadas. Não houve diferenças (p>0,05) entre os grupos OM e VA quanto à latência de aparecimento da primeira neoplasia mamária, incidência, multiplicidade e peso médio das neoplasias mamárias, todas classificadas como malignas. Em comparação ao grupo OM, o grupo VA apresentou maior concentração (p<0,05) de retinol no tecido mamário neoplásico e hepático, além de maiores concentrações hepáticas (p<0,05) de palmitato de retinila. Não se detectou palmitato de retinila em neoplasias mamárias de ambos os grupos. Não houve diferença (p>0,05) entre neoplasias mamárias do grupo OM e o tecido mamário do grupo N quanto à metilação global do DNA. Em comparação a neoplasias mamárias do grupo OM, neoplasias do grupo VA apresentaram menor (p<0,05) metilação global do DNA. Conclui-se que a VA não apresentou atividades quimiopreventivas e seu metabolismo encontra-se alterado em neoplasias mamárias. / The potential chemopreventive activity of vitamin A (VA) was evaluated when administered to Sprague-Dawley rats during the stage of post-initiation of mammary carcinogenesis induced by 7-12 dimethylbenz(a)anthracene (DMBA). Except for 10 animals that constituted a separate control group of normal rats [normal group (N)], that were not subjected to any experimental procedure throughout the study, 40 rats with 50 days of age received the carcinogen DMBA by gavage at the dose of 60 mg/kg/body weight. After 2 weeks, the rats received for 12 consecutive weeks, by gavage, 0.25 mL/100 g body weight of corn oil (OM group, control, n = 20) or 2.5 mg/100 g body weight of vitamin A (VA group, n = 20), being then euthanized. There were no differences (p> 0.05) between the OM and VA groups regarding the latency of onset of first breast neoplasm, incidence, multiplicity and average weight of breast tumors, all classified as malignant. Compared to the OM group, the VA group had a higher concentration (p <0.05) of retinol in neoplastic breast tissue and liver as well as higher concentrations (p <0.05) of retinyl palmitate in the liver. Retinyl palmitate was not detected in breast tumors of both groups. There was no difference (p> 0.05) between breast tumours of OM group and mammary tissue of N group regarding global DNA methylation. Compared to breast tumors of OM group, breast tumors of VA group had lower (p <0.05) global DNA methylation. VA did not show chemopreventive activity when administered to rats during the stage of post-initiation of mammary carcinogenesis. Furthermore, the metabolism of VA is altered in breast tumors.

INTRODUÇÃO: O duplex-Doppler e a ultrassonografia com contraste são métodos pouco estudados em lesões mamárias. No entanto, em outros órgãos, têm se mostrado úteis na distinção entre lesões benignas e malignas. O objetivo deste trabalho é caracterizar os achados ao Doppler colorido pré e pós-contraste nos nódulos sólidos de mama, correlacionando-os com os resultados anatomopatológicos. MATERIAL E MÉTODOS: Setenta nódulos sólidos da mama foram avaliados por meio de ultrassonografia convencional e duplex-Doppler colorido antes e após a injeção do meio de contraste (ultrassonografia contrastada), no período compreendido entre março de 2007 e janeiro de 2008, e seus resultados foram comparados à análise histológica (padrão-ouro). Todas as pacientes assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, aprovado pelo Comitê de Ética da FMUSP. O estudo ultrassonográfico modo B avaliou a morfologia do nódulo e o classificou conforme o léxico BI-RADS. Ao duplex-Doppler colorido observou-se a vascularização nodular, descrevendo-se o número de vasos presentes (0 = avascularizado; 1 ou 2 = hipovascularizado, 3 = hipervascularizado), sua morfologia (regular ou tortuoso) e sua distribuição (periférica ou central). Os índices de resistividade e a presença de vaso penetrante também foram avaliados. A partir de dados da literatura criou-se um critério de classificação que permitiu estratificá-los entre provavelmente benigno (nódulos avasculares ou hipovasculares, com vasos regulares e distribuição periférica), provavelmente maligno (nódulos hipervasculares, com vasos tortuosos e distribuição central) ou suspeitos (qualquer outra associação desses fatores). No estudo contrastado foram realizadas análises cinética (avaliando-se os tempos de início da contrastação e do clareamento do nódulo, além da análise da intensidade da contrastação, de maneira subjetiva) e morfológica (utilizando-se os mesmos critérios da análise com Doppler). RESULTADOS: A análise histológica resultou em 25 lesões malignas e 45 lesões benignas. A classificação BI-RADS teve sensibilidade de 100%, especificidade de 66,6%, valor preditivo positivo (VPP) de 62,5% e valor preditivo negativo (VPN) de 100%. A análise com Doppler mostrou sensibilidade de 88%, especificidade de 57,7%, VPP de 53,6% e VPN de 89,9%. Após a injeção do meio de contraste, esses valores passaram para: 92%, 46,6%, 48% e 91%, respectivamente. Os índices de resistividade foram significativamente mais altos em lesões malignas na análise com Doppler colorido ( < 0,001). Houve relação estatística significante entre a presença de vaso penetrante e malignidade ( < 0,001). A associação entre os critérios de classificação BI-RADS e Doppler colorido mostrou sensibilidade de 100%, especificidade de 86,6%, VPP de 80,7% e VPN de 100%. A associação entre BI-RADS e ultrassonografia contrastada resultou em sensibilidade de 100%, especificidade de 80%, VPP de 73,5% e VPN de 100%. A análise cinética subjetiva não conseguiu diferenciar entre nódulo benigno e maligno (tempo do início da contrastação = 0,816, tempo de clareamento da lesão = 0,622 e realce da lesão = 0,020). CONCLUSÃO: Os critérios adotados para o duplex-Doppler colorido associados ao BI-RADS fornecem os melhores resultados na distinção entre lesões benignas e malignas da mama. O estudo contrastado não acrescentou informações adicionais às análises prévias. / OBJECTIVE: The duplex-Doppler ultrasound and contrast enhanced ultrasound (CEUS) are poorly studied in breast lesions. However, in the other organs they have been proved to be useful in mass differentiation. Our objective is to characterize the Doppler findings before and after contrast agent injection in solid breast lesions then correlate them with pathological findings in order to evaluate the applicability of these methods in the differentiation of benign and malignant lesions. MATERIALS AND METHODS: Seventy solid breast masses were evaluated by conventional ultrasonography and duplex-color Doppler before and after injection of contrast medium (ultrasound contrast) in the period between March 2007 and January 2008 and their results were compared to histology (gold standard). All patients signed a consent form approved by the Ethics Committee of FMUSP. At gray-scale US the lesions were described and classified according to the BI-RADS lexicon. At duplex-Doppler we observed the lesion vascularity: avascular, hypovascular (one or two arteries) or hypervascular (three or more arteries); distribution (central or peripheral) and shape (regular or tortuous). If there was a penetrating artery, it was reported. We also observed resistive index. Based on literature data criterion was set up for classification which allowed to stratify breast lesions among probably benign (avascular or hypovascular masses, with regular vessels and peripheral distribution); probably malignant (hypervascular masses with tortuous and central vessels) or suspicious (any other combination of those factors). Kinetic analysis (wash in and wash out times, besides mass enhancement, in a subjective manner) and morphological analysis (using the same criteria of analysis with Doppler) were described in contrast study. RESULTS: Percutaneous biopsy revealed 25 malignant and 45 benign lesions. Morphologic analysis using gray-scale sonography and classified according the BI-RADS lexico showed sensitivity of 100% and specificity of 66.6%, positive and negative predictive values of 62.5% and 100% respectively. Doppler sonography, sensitivity, specificity, positive and negative predictive values were 88%; 57.7%; 53.6% and 89.9%. After contrast agent injection sensitivity, specificity, positive and negative predictive values changed to 92%; 46.6%; 48% and 91% respectively. The association among morphological and CDUS analysis findings resulted in a sensitivity of 100%, specificity of 86.6%, PPV 80.7% and NPV 100%. When morphological findings and CEUS analysis were associated values became 100% sensitivity, 80% specificity, 73.5% PPV, and 100% NPV. Resistive index was significantly higher ( < 0,001) in malignant lesions before and after contrast injection. Wash in and wash out times were similar for benign and malignant lesions (wash-in = 0,816, wash-out = 0,622 and intensity = 0,020). CONCLUSION: Duplex-Doppler criteria associated to BI-RADS classification proved to be the best combination to distinguish malignant lesions of the breast. CEUS evaluation did not provide additional information.

A indoleamina - 2,3 dioxigenase (IDO) é uma enzima expressa por diversas células do organismo e, dentre suas muitas funções, atua principalmente na regulação do sistema imune. Esta se baseia no catabolismo do triptofano, cuja depleção induz uma interrupção do ciclo celular em linfócitos T, tornando-os mais sensíveis a apoptose aliado à ação de metabólitos provenientes desta reação os derivados da quinurenina que potencializariam a atividade da IDO. A presença e ativação de IDO em alguns tipos tumorais representam um dos mecanismos pelo qual as células tumorais podem se evadir do sistema imune, facilitando a indução, crescimento e progressão tumoral. O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil epidemiológico e anatomopatológico de 21 animais portadores de neoplasias mamárias, além de verificar, pelas técnicas de imuno-histoquímica e citometria de fluxo, o número de células neoplásicas e inflamatórias que expressam IDO em cultivo celular na presença de fatores como seu substrato L- triptofano e seu inibidor competitivo 1-metil-DL-triptofano (1MT). As neoplasias malignas corresponderam a 86% dos casos e o principal diagnóstico histopatológico encontrado foi o carcinoma simples. No que concerne à idade, todos os animais apresentaram idade média igual a 10,3 ± 3,3 anos. Na análise imuno-histoquímica os resultados mostraram que todas as amostras apresentaram imunomarcação citoplasmática para IDO confinado principalmente nas células localizadas nos ductos mamários. Os resultados in vitro indicam que, após 24 horas, o grupo suplementado com L - triptofano apresentou aumento significativo da expressão de IDO nas células de carcinoma simples (49,5 ± 2,5 ) ( p &le; 0,01 ), enquanto o grupo tratado 1 metil DL- triptofano exibiu uma diminuição significativa na expressão de IDO ( 33,8 ± 4,0) ( p &le; 0,01). Os macrófagos e células dendríticas na área tumoral também expressaram IDO e foram susceptíveis ao efeito de 1MT. Atualmente, na medicina veterinária procura de novas estratégias e compostos para a modulação da resposta antitumoral em pequenos animais e o 1 - metil - DL - triptofano representaria um candidato potencial para uma abordagem complementar no tratamento de neoplasias mamárias / The indoleamine - 2, 3 - dioxygenase (IDO) is an enzyme expressed on many cells and among its functions acts mainly in regulation of the immune system. It relies on the tryptophan catabolism, whose depletion induces cell cycle arrest of T lymphocytes turning these cells more sensitive to apoptosis, in addition to some down-stream tryptophan-derived metabolites that would increase IDO activity. The presence and activation of IDO in some tumor types represents a mechanism by which tumor cells can evade the immune system, thus facilitating the induction and progression of tumor growth. Our aim was to evaluate 21 animals with mammary tumors and to verify, by immunohistochemistry and flow cytometry, whether these cells express IDO, and to quantify its in vitro expression on neoplastic cells under influence of IDO substrate tryptophan and IDO competitive inhibitor 1-methyl-DL-tryptophan. Malignant neoplasms accounted for 86% of the cases and the most common diagnosis was carcinoma simple. All animals were adult females, with mean age of 10.3 ±.3 years. Immunohistochemistry results showed that all samples presented cytoplasmic immunostaining for IDO confined mainly in cells located in the mammary ducts. In vitro results indicate that, after 24 hours, the group supplemented with L - tryptophan showed significant increased expression of IDO in carcinoma cells (49.5 ± 2.5) (p &le; 0.05), while the 1MT treated group displayed an significant decreased on IDO expression (33.8 ± 4.0) (p &le; 0.05). Macrophages and dendritic cells at the tumour site also expressed IDO and were susceptible to the effect of 1MT. Currently, veterinary medicine seeks new strategies and compounds for modulating the antitumor response in small animals and 1-methyl DLtryptophan would represent a potential candidate as a complementary approach for the treatment of mammary neoplasms

Maspina é uma proteína supressora de tumor e metástase e sua localização subcelular está relacionada ao prognóstico do câncer de mama. Nosso grupo mostrou em MCF-10A que quando fosforilada maspina se acumula no citoplasma. Porém, esta correlação ainda não foi relatada in vivo. Aqui investigamos a expressão, fosforilação e localização subcelular de maspina ao longo do desenvolvimento da glândula mamária murina. Maspina foi detectada no estágio mais tardio da gestação, na lactação e na involução. Os níveis de fosforilação de maspina são maiores no período de lactação do que na involução. Interessantemente, a porcentagem de células que apresenta maspina no núcleo é maior na fase de involução do que na fase de lactação Estes dados mostram que a correlação entre níveis de fosforilação de maspina e localização subcelular também é observada in vivo e que esses processos são reguladas ao longo do desenvolvimento na glândula mamária murina. / Maspin is a protein with tumor and metastasis suppressing activity and its subcellular localization is related to breast cancer prognosis. Using MCF-10A cells as a model system, our group demonstrated a correlation between maspin phosphorylation and cytoplasmic accumulation. Here we investigated maspin expression, phosphorylation levels and subcellular localization in vivo during the murine mammary gland development. Maspin was detected in late pregnancy, during lactation and involution. Maspin phosphorylation levels is higher during lactation than during involution. Interestingly, the percentage of cells which present nuclear maspin is higher in the involution than in lactation. These data show that the correlation between maspin phosphorylation and subcellular localization is also observed in vivo and these processes are regulated during murine mammary gland development.

O projeto tem como objetivo a detecção e caracterização das células epiteliais circulantes de pacientes com carcinoma de mama no estádio III. Analisou-se a presença ou ausência destas células antes da realização de quimioterapia neoadjuvante. Para tanto, utilizou-se o sistema de enriquecimento de amostras de sangue periférico por meio da marcação intracelular imunomagnética direta, empregando-se microbeads conjugados com citoqueratina e posterior separação imunomagnética. A amostra final, com as células alvo detectadas, foi então quantificada por imunocitoquímica ou citometria de fluxo. Resultados: A reação de imunocitoquímica no sangue periférico foi negativa em todos os casos enquanto que na citometria de fluxo foi positiva em 22/23 casos analisados. Conclusão: A detecção e caracterização de células tumorais circulantes em pacientes com câncer de mama podem vir a se constituir em um novo fator prognóstico, porém, são ainda necessárias novas estratégias para melhor detectá-las. / The aim of this study was to detect and characterize carcinoma cells of patients with breast cancer with clinical stage III analyzing the presence or absence before chemotherapy by enrichment of peripheral blood with super paramagnetic microbeads, using direct Immunomagnetic labeling of intracellular 7/8 cytokeratin. For enrichment, magnetically labeled tumor cells are passed over a high-gradient magnetic positive selection column. Cytospin preparations are made after immunomagnetic enrichment and are examined immunocytochemically (ICC) using an anti-cytokeratin and quantified by flow cytometry (CMF). Results: No cytokeratin positive cells were detected in the 32 peripheral blood of patients of breast carcinoma by ICC and cytokeratin positive cells were detected in the 22 of 23 patients by CMF. Conclusion: These methods of detection and characterization breast carcinoma cells will become useful in the diagnosis and prognosis but is necessary optimization of existing methods.