As metaloproteinases da matriz (MMPs) foram relacionadas a diversas doenças inflamatórias como artrite e também ao câncer. O presente trabalho tem por objetivo estabelecer o papel da MMP-2, MMP-9 e MMP-8 no processo de inflamação pulpar. Foram adotadas as seguintes hipóteses nulas: (1) o padrão de expressão das MMP-2, MMP-9 e MMP-8 não sofre alteração nos diferentes estágios da polpa humana: normal, reversível, transição, irreversível ou necrose; (2) não há diferença de expressão das MMP-2, -9 e MMP-8, considerando-se um mesmo estágio de inflamação tecidual pulpar. Os métodos utilizados foram: (I) Obtenção dos espécimes, que foram divididos em grupos de acordo com critérios adotados de semiologia subjetiva e objetiva. Obtiveram-se os seguintes grupos: GI (Controle) dentes hígidos (n=7); GII (Pulpite Reversível n=4); GIII (Pulpite Transição n=4); GIV (Pulpite Irreversível/Necrose n=8). Logo após exodontia, os dentes obtidos foram cortados ligeiramente abaixo da junção amelodentinária e fixados em formol a 10% por 48h. Foram lavados em água corrente (24h) para então serem processados histologicamente. Foram obtidas secções de 4m, aderidas em lâminas silanizadas e submetidas à imunomarcação (Técnica da Peroxidase), utilizando os anticorpos anti MMP-2, MMP-9 e MMP-8 humanos. A presença de imunomarcação foi realizada através da análise semi-quantitativa por escores, sendo que a quantificação de marcação por corte seguiu o seguinte escore: 0= ausente; 1= leve; 2= moderada; 3= intensa. Realizou-se teste estatístico não paramétrico Kruskal-Wallis, p<0,05. As comparações intergrupos revelaram, para CO: (1)MMP-2 - GI=GII=GIII, GIII=GIV, GI>GIV (p<0,01) e GII>GIV (p<0,05); (2)MMP-9 GI=GII=GIV, GII=GIII e GIII>GI (p<0,01); (3)MMP-8 GI=GII=GIII=GIV. Na região central da polpa, obteve-se: (1)MMP-2 GI=GII=GIII, GIII=GIV, GI>GIV (p<0,001) e GII>GIV (p<0,01); (2)MMP-9 GI=GII=GIII, GIII=GIV, GIV>GI (p<0,001) e GIV>GII (p<0,01); (3)MMP-8 GI=GII, GIII=GIV, GIII>GI (p<0,05), GIV>GI (p<0,01), GIII>GII (p<0,05) e GIV>GII (p<0,05). Quanto às comparações intragrupos, na CO mostraram: (1)GI - MMP-2>MMP9 (p<0,001), MMP-2=MMP-8 e MMP-9=MMP-8; (2)GII MMP-2>MMP-9 (p<0,01); MMP-2=MMP-8 e MMP-9=MMP-8; (3)GIII e GIV MMP-2=MMP-9=MMP-8. Para a região mais central da polpa: (1)GI e GII MMP-2=MMP-9=MMP-8; (2)GIII MMP9>MMP-2 (p<0,05), MMP- 2=MMP-8 e MMP-9=MMP-8; (3)GIV MMP-9>MMP-2 (p<0,01), MMP-2=MMP-8 e MMP-9=MMP-8. Sendo assim, as duas hipóstese nulas foram rejeitadas. Conclui-se ainda que MMP-2, MMP-9 e MMP-8 atuam no processo de inflamação pulpar de maneira distinta na CO e polpa central; MMP-2 é mais expressa em polpa sadia; a maior expressão de MMP-9 relaciona-se à presença de inflamação pulpar; em polpas inflamadas, a expressão de MMP- 8 é maior quando comparadas a polpas normal, embora tal enzima seja também levemente expressada em tecido pulpar normal. / The matrix metalloproteinases (MMPs) have been related to various inflammatory diseases, such as arthritis, as well as to cancer. The aim of the present study was to establish the role of MMP-2, MMP-9 and MMP-8 in the process of dental pulp inflammation. The following null hypotheses were adopted: (1) the pattern of MMP-2, MMP-9 and MMP-8 expression does not undergo alteration in the following different stages of human pulp: normal, reversible, transition, irreversible or necrosis; (2) there is no difference in the expression of MMP-2, -9 and MMP-8, when considering the same stage of pulp tissue inflammation. The methods used were: (I) Obtainment of specimens, which were divided into groups according to the subjective and objective criteria of semiology adopted. The following groups were obtained: GI (Control) healthy teeth (n=7); GII (Reversible Pulpitis n=4); GIII (Transition Pulpitis n=4); GIV (Irreversible Pulpitis/Necrosis n=8). Soon after extraction the teeth obtained were cut slightly below the amelodentinal junction and fixed in 10% formol for 48h. They were washed under running water (24h) and were histologically processed afterwards. Sections of 4m were obtained, adhered to silanized slides, and submitted to immunomarking (Peroxidase Technique), using human anti MMP-2, MMP-9 and MMP- 8 antibodies. The presence of immunomarking was determined through semi-quantitative analysis by scores, and marking by cut was quantified using the following score: 0= absent; 1= slight; 2= moderate; 3= intense. The Kruskal-Wallis non-parametric statistical test was performed, p<0.05. Intergroup comparisons revealed the following: for CO: (1)MMP-2 - GI=GII=GIII, GIII=GIV, GI>GIV (p<0.01) and GII>GIV (p<0.05); (2)MMP-9 GI=GII=GIV, GII=GIII and GIII>GI (p<0,01); (3)MMP-8 GI=GII=GIII=GIV. In the central region of the pulp, the following results were obtained: (1)MMP-2 GI=GII=GIII, GIII=GIV, GI>GIV (p<0.001) and GII>GIV (p<0.01); (2)MMP-9 GI=GII=GIII, GIII=GIV, GIV>GI (p<0.001) and GIV>GII (p<0.01); (3)MMP-8 GI=GII, GIII=GIV, GIII>GI (p<0.05), GIV>GI (p<0.01), GIII>GII (p<0.05) and GIV>GII (p<0.05). With regard to intragroup comparisons, in CO the following were shown: (1)GI - MMP-2>MMP9 (p<0.001), MMP-2=MMP-8 and MMP-9=MMP-8; (2)GII MMP-2>MMP-9 (p<0.01); MMP-2=MMP-8 and MMP-9=MMP-8; (3)GIII and GIV MMP- 2=MMP-9=MMP-8. For the most central region of the pulp: (1)GI and GII MMP-2=MMP- 9=MMP-8; (2)GIII MMP9>MMP-2 (p<0.05), MMP-2=MMP-8 and MMP-9=MMP-8; (3)GIV MMP-9>MMP-2 (p<0.01), MMP-2=MMP-8 and MMP-9=MMP-8. Therefore, the two null hypotheses were rejected. Moreover, it was concluded that MMP-2, MMP-9 and MMP-8 act in the process of pulp inflammation in a distinct manner in CO and central pulp; more MMP-2 is expressed in healthy pulp; the highest expression of MMP-9 is related to the presence of pulp inflammation; in inflamed pulp, the expression of MMP-8 is higher when compared with that of normal pulp, although this enzyme is also slightly expressed in normal pulp tissue.

A aplicação de soluções de digluconato de clorexidina (CHX), em diferentes concentrações, tem demonstrado potencial em prevenir a progressão da erosão dentinária in situ e a diminuição, com o passar do tempo, dos valores de resistência de união (RU) de resinas compostas (RC) à dentina normal ou afetada por cárie. Entretanto, seu papel na adesão à dentina já erodida é desconhecido. Este estudo se propôs, portanto, a avaliar o efeito da aplicação de soluções de CHX em diferentes concentrações na RU de uma RC à dentina normal (parâmetro para comparações) e à dentina erodida, ao longo do tempo. Terceiros molares humanos hígidos extraídos (n=48) tiveram seu terço oclusal seccionado e as superfícies dentinárias expostas foram somente submetidas à ação de uma lixa de carbeto de silício de granulação 600/1 min (dentina normal-N, n=24), ou subsequentemente erodidas por um refrigerante a base de cola (imersões de 5 min, 3x/dia, 5 dias; dentina erodida-E, n=24). Foram, então, condicionadas (H3PO4 a 37%; 15 s), lavadas, secas e reidratadas com 1,5 L, respectivamente, de água deionizada (controle-NC, n=8 / EC, n=8), de CHX a 0,004% (N0,004%, n=8 / E0,004%, n=8) ou de CHX a 2% (N2%, n=8 / E2%, n=8). O sistema adesivo AdperTMSingle Bond 2® foi aplicado em todos os espécimes e a porção coronária foi incrementalmente reconstruída com a RC FiltekTMZ350®. Depois de armazenados em água deionizada (24 h, 37oC), os espécimes foram seccionados em palitos (secção transversal 0,81 mm2), que foram testados, sob força de tração (EMIC; célula de carga de 50 kgf; 0,5 mm/minuto), imediatamente ou depois de 6 meses ou 1 ano de envelhecimento. As falhas foram analisadas e classificadas em adesivas, mistas, coesivas em dentina ou em resina. Paralelamente, avaliou-se a qualidade da hibridização para cada grupo experimental, por meio da obtenção de imagens em microscopia confocal de varredura a laser de um espécime por grupo, hibridizado pelo mesmo adesivo, mas marcado pela adição de rodamina B, e seccionado apenas no sentido mésio-distal. Os dados obtidos da microtração foram analisados por meio dos testes de ANOVA a três critérios e de Tukey (p<0,05). Os valores médios de RU (MPa±dp; imediatamente / 6 meses / 1 ano) foram: NC (34,74±9,79 / 20,77±14,35 / 7,58±4,94); N0,004% (35,69±9,85 / 23,10±8,13 / 13,82±10,12); N2% (41,22±5,38 / 34,64±6,62 / 13,25±4,83); EC (20,94±5,37 / 7,87±8,81 / 5,43±4,99); E0,004% (22,12±7,44 / 3,47±6,25 / 4,97±3,11); E2% (15,97±5,17 / 22,23±9,12 / 5,41±5,47). Falhas adesivas e/ou mistas consistiram-se nas preponderantemente observadas. Os valores de RU da RC à dentina erodida foram sempre inferiores àqueles da RC à dentina normal. Tais valores, para ambas as condições de dentina, experimentaram redução significante com o passar do tempo, mas a aplicação da solução de CHX a 2% foi capaz de mantê-los estáveis até os 6 meses de envelhecimento dos espécimes. Portanto, a aplicação de soluções de CHX, a 2%, apresenta-se como uma estratégia promissora para conservar a RU de resinas compostas tanto à dentina normal quanto à dentina erodida. Com o tempo, no entanto, seu efeito pode tornar-se reduzido ou irrelevante. / The application of chlorhexidine digluconate (CHX) solutions, in different concentrations, has shown potential in preventing the progression of dentin erosion in situ and the decline, in the course of time, of the bond strength (BS) values of composite resins (CR) to normal or caries-affected dentin. However, its role on adhesion to already eroded dentin is unknown. This study aimed, therefore, to evaluate the effect of the application of CHX solutions in different concentrations on BS of a CR to normal (parameter for comparisons) and to eroded dentin over time. Extracted sound human third molars (n=48) had their occlusal thirds sectioned and exposed flat dentin was only submitted to a 600-grit SiC paper/1min (normal dentin- N, n=24), or subsequently eroded by a regular-cola soft-drink (5-min immersions, 3x/day, 5 days; eroded dentin-E, n=24). They were, then, acid-etched (37% H3PO4; 15 s), washed, vigorously dried, and rehydrated with 1.5 L, respectively, of deionized water (control-NC, n=8 / EC, n=8); of 0.004% CHX (N0.004%, n=8 / E0.004%, n=8); or of 2% CHX (N2%, n=8 / E2%, n=8). AdperTMSingle Bond 2® was applied in all specimens and composite core buildups were incrementally constructed with FiltekTMZ350®. After storage in deionized water (24 h, 37°C), specimens were sectioned in beams (cross-section 0.81 mm2), which were tested, under tensile (EMIC; 50 kgf load cell; 0.5 mm/minute), immediately or after 6 months or 1 year of aging. Failures were analyzed and classified in adhesive, mixed, cohesive in dentin or in resin. In parallel, the quality of the hybridization for each experimental group was evaluated, by means of the obtainment of laser scanning confocal microscopy images from one specimen per group, hybridized with the same adhesive, but marked by the addition of rhodamine B and sectioned only mesiodistally. Microtensile data were analyzed by three-way ANOVA and Tukey tests (<0.05). Mean TBS values (MPa±sd; immediately / 6 months / 1 year) were: NC (34,74±9,79 / 20,77±14,35 / 7,58±4,94); N0,004% (35,69±9,85 / 23,10±8,13 / 13,82±10,12); N2% (41,22±5,38 / 34,64±6,62 / 13,25±4,83); EC (20,94±5,37 / 7,87±8,81 / 5,43±4,99); E0,004% (22,12±7,44 / 3,47±6,25 / 4,97±3,11); E2% (15,97±5,17 / 22,23±9,12 / 5,41±5,47). Adhesive and/or mixed failures consisted in the mainly observed ones. BS values of the CR to the eroded dentin were always lower than that of the CR to the normal dentin. These values, to both dentin conditions, experienced a significant reduction in the course of time, but application of the 2% CHX solution was able to keep them stable until 6-months aging of the specimens. Therefore, the application of CHX solutions, at 2%, is presented as a promising strategy to conserve BS both to normal and to eroded dentin. Over time, however, its effect may become reduced or irrelevant.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O objetivo desse estudo in vitro foi avaliar o efeito do flavonÃide epigalocatequina-3-galato (EGCG) na resistÃncia de uniÃo à dentina nos perÃodos imediato e apÃs 6 meses de armazenamento. Trinta terceiros molares humanos recÃm-extraÃdos tiveram o esmalte oclusal removidos, obtendo-se uma superfÃcie plana de dentina. Os dentes foram divididos em 5 grupos (n=6) de acordo com a soluÃÃo de re-hidrataÃÃo da dentina. As superfÃcies expostas de dentina foram condicionadas com Ãcido fosfÃrico a 35% por 15s, lavadas por 30s, e secas com jatos de ar. Os dentes dos grupos G1, G2, G3, G4 e G5 foram re-hidratados, respectivamente, com Ãgua destilada, EGCG a 0,02%, 0,1%, 0,5% e clorexidina a 2%. Cada soluÃÃo de re-hidrataÃÃo foi mantida em contato coma superfÃcie dentinÃria por 60s. O sistema adesivo - Adper Single Bond 2 (3M ESPE) foi aplicado de acordo com a instruÃÃes do fabricante. Cinco incrementos de 1 mm de espessura de resina composta foram aplicados e fotoativados individualmente por 20 segundos. Os dentes foram armazenados em Ãgua destilada a 37ÂC por 24h. Em seguida, foram confeccionados cortes seriados perpendiculares entre si, atravÃs da interface de uniÃo, para obter espÃcimes em forma de palito com a Ãrea de secÃÃo transversal de aproximadamente 1 mm2. Metade dos espÃcimes foi testada imediatamente enquanto a outra metade foi armazenada em soluÃÃo de azida de sÃdio a 0,3 mMol/l a 37ÂC por seis meses. Cada espÃcime foi tracionado a velocidade de 0,5mm/minuto em uma mÃquina universal de ensaios. Os valores de resistÃncia de uniÃo foram estatisticamente avaliados por ANOVA a dois critÃrios e Student-Newman-Keuls, com nÃvel de significÃncia de 95%. A mÃdia (desvio padrÃo) dos valores de resistÃncia de uniÃo (em MPa) foram os seguintes: No perÃodo imediato - G1= 34,17 (7,75); G2= 31,39 (7,82); G3= 34,74 (9,14); G4= 27,11 (7,78); G5= 34,68 (7,30). No perÃodo de 6 meses - G1= 27,67 (6,98); G2= 31,75 (10,58); G3= 35,99 (10,91); G4= 31,18 (9,29); G5= 31,62 (5,78). O EGCG a 0,02 % e a 0,1% nÃo afetou a resistÃncia de uniÃo, no perÃodo imediato (p>0,05). ApÃs 6 meses de armazenamento, o EGCG em diferentes concentraÃÃes manteve a resistÃncia de uniÃo. EGCG pode ser usado como uma alternativa para melhorar a durabilidade das restauraÃÃes adesivas, pois preserva a resistÃncia de uniÃo das interfaces.

O diagnóstico da tromboembolia pulmonar aguda (EPA) e a avaliação da gravidade desta condição é desafiador. Enquanto as concentrações de troponina I cardíaca (TI) já estão bem estabelecidas quanto ao risco de estratificação, não há estudos prévios que tenham examinado se há alguma relação linear entre as concentrações de TI cardíaca e a gravidade da EPA. Além disso, as metaloproteinases (MMPs) da matriz extracelular estão envolvidas na fisiopatologia da EPA. Entretanto, é desconhecido se o aumento da atividade gelatinolítica das MMPs após a EPA reflete a gravidade desta condição. Nós examinamos se as concentrações circulantes destes biomarcadores aumentam em proporção à gravidade da EPA experimental induzida em cães anestesiados. A EPA foi induzida com coágulos de sangue autólogo (salina, 1, 3 ou 5 mL/Kg) injetados no átrio direito. As avaliações hemodinâmicas foram realizadas no momento basal e 120 minutos após a EPA. Da mesma forma, foram realizadas as quantificações de troponina I no soro e a zimografia das MMPs 2 e 9 no plasma. Nossos resultados sugerem não haver aumento significativo da atividade gelatinolítica da pró-MMP-2 no plasma após a EPA, enquanto que a atividade da pró-MMP-9 aumenta em 80% apenas no grupo que recebeu 5 mL/Kg de coágulos. A TI cardíaca no soro e a atividade da pró-MMP-9 no plasma tiveram uma correlação positiva com o índice de resistência vascular pulmonar (p=0,007 e rs=0,833 para a TI, e p=0,034 e rs=0,684 para a pró-MMP-9) e com a pressão média na artéria pulmonar (p=0,005 e rs=0,610 para a TI, e p=0,022 e rs=0,720 para a pró-MMP-9). Concluímos que a TI cardíaca e a pró-MMP-9 circulantes aumentam em proporção à gravidade da EPA, embora o aumento da pró-MMP-9 não seja muito evidente em graus menos severos da EPA. Estes achados podem ser relevantes para a clínica da EPA. / Making the diagnosis of acute pulmonary thromboembolism (APT) and assessing its severity is very challenging. While cardiac troponin I (CTI) levels are promising in risk stratification, no previous study has examined whether there is a linear relation between CTI levels and the severity of APT. Moreover, matrix metalloproteinases (MMPs) are involved in the pathophysiology of APT. However, it is unknown whether the increases in MMP levels after APT reflect the severity of this condition. We examined whether the circulating levels of these biomarkers increase in proportion to the severity of experimental APT induced in anesthetized dogs. APT was induced with autologous blood clots (saline, 1, 3, or 5 mL/kg) injected into the right atrium. Hemodynamic evaluations were carried out for 120 min. Gelatin zymography of MMP-2 and MMP-9 from plasma samples were performed and serum CTI levels were determined at baseline and 120 min after APT. Our results sugest that while no significant increases in pro-MMP-2 levels were found after APT, pro-MMP-9 levels increased by 80% only after 5 mL/kg of clot embolization. Serum CTI and plasma pro-MMP-9 levels correlated positively with pulmonary vascular resistance (p=0.007 and rs=0.833 for troponin I, and p=0.034 and rs=0.684 for pro-MMP-9) and with pulmonary artery pressure (p=0.005 and rs=0.610 for troponin I, and p=0.022 and rs=0.720 for pro-MMP-9). We conclude that circulating CTI and pro-MMP-9 increase in proportion to the severity of APT, although the increases in plasma pro-MMP-9 are less clear with less severe APT. These findings may be relevant for clinical APT.

As metaloproteinases da matriz (MMPs) são uma família de endopeptidades cálcio e zinco dependentes que participam da degradação de praticamente todos os componentes da matriz extracelular. Com o pressuposto de que estas enzimas podem estar relacionadas à progressão da erosão dental e que os agentes ácidos causadores da erosão podem influenciar na ativação das MMPs, o objetivo desse estudo in vitro foi avaliar a influência do pH sobre a atividade funcional das MMP-2 e -9 presentes na dentina coronária e radicular humana. O pó das dentinas coronária e radicular, provenientes de terceiros molares inclusos recém extraídos foi obtido separadamente e submetido ao protocolo de extração das proteínas, com ácido fosfórico a 1%. Após, o extrato contendo as proteínas e o pó de dentina parcialmente desmineralizado foram incubados em uma das respectivas soluções: solução 2 mM de APMA (acetato de 4-aminofenilmercúrio / grupo controle) ou em uma das soluções tampão (fosfato de potássio 0.1 M) com diferentes pHs (2.5, 4.5, 5.0, 6.0 e 7.0). Após a incubação, as proteínas foram separadas por eletroforese, em um gel de poliacrilamida copolimerizado com gelatina, para a avaliação da atividade gelatinolítica das MMPs, por zimografia. Esta análise foi realizada em triplicada e os zimogramas obtidos ao final foram avaliados por densitometria. A quantificação das bandas observadas nos zimogramas foi realizada pelo programa de imagens ImageJ e os dados avaliados de maneira descritiva e qualitativa. Para a avaliação do conteúdo de colágeno solubilizado, o pó de dentina parcialmente desmineralizado e incubado nos respectivos pHs (n = 8) foi mantido em um tampão de incubação durante 24h, e o conteúdo de hidroxiprolina (HYP) liberado neste meio foi mensurado em espectrofotômetro. Os dados obtidos foram avaliados estatisticamente por ANOVA 1 fator, seguido do teste de Tukey, com 5% de significância. A análise por zimografia mostrou bandas evidentes correspondente a MMP-2 na sua forma ativa (66kDa) e bandas menos expressivas relacionadas a sua forma latente (72kDa), tanto para a dentina coronária quanto para a radicular, em todos os grupos experimentais. Não foram identificadas bandas correspondentes a MMP-9, para nenhum dos substratos avaliados. As soluções com os menores pHs (2.5, 4.5 e 5.0) resultaram na maior atividade funcional da MMP-2, em comparação as soluções com os maiores pHs (6.0 e 7.0), em ambos os substratos. Para a análise de HYP, os grupos pH 2.5 e pH 4.5 mostraram valores de absorbância abaixo do limite de detecção do aparelho. Para os demais grupos experimentais, tanto para a dentina coronária quanto para a radicular, foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre eles (p < 0,05). O conteúdo de HYP liberada foi maior para o pH 7.0, comparado aos demais grupos (p < 0,05), exceto para o pH 6.0. Não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os grupos pH 6.0, pH 5.0 e controle (p > 0,05). Conclui-se que a atividade funcional da MMP-2 é dependente do pH. Os menores pHs promoveram um aumento na ativação da MMP-2 da dentina coronária e radicular humana. Nota-se em pHs próximos ao neutro, uma maior degradação da matriz orgânica dentinária desmineralizada por essas enzimas endógenas. / Matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of endopeptidades calcium and zinc dependent that participate in the degradation of pratically all components of the extracellular matrix. With the assumption that these enzymes may be related to the progression of dental erosion and acidic agents that cause erosion can influence the activation of MMPs, the aim of this in vitro study was to evaluate the pH-influence on the functional activity of MMP-2 and -9 present in human coronal and root dentin. The powder of root and coronal dentine, from freshly extracted third molars was separately obtained and subjected to protein extraction protocol, with 1% phosphoric acid. After, the extract containing proteins and the partially demineralized powder were incubated in one of the following solutions: 2 mM APMA (4-aminophenylmercuric acetate / control) or one of the buffer solutions (0.1 M potassium phosphate) with different pHs (2.5, 4.5, 5.0, 6.0 and 7.0). After incubation, the proteins were separated by electrophoresis in a polyacrylamide gel copolymerized with gelatin, to evaluate the gelatinolytic activity of MMPs by means of zymography. This analysis was performed in triplicate and the zymograms obtained were evaluated by densitometry. Quantification of the bands observed in zymograms was performed by ImageJ software and the data were evaluated descriptively and qualitatively. To assess the solubilized dentin collagen, the partially demineralized dentin powder treated with different pHs (n=8) was incubated in an artificial saliva for 24 h, and the amount of hydroxyproline (HYP) released in media was measured by spectrophotometer. Data were statistically analyzed by ANOVA one factor, followed by the Tukey\'s test, with 5% significance. Zymography showed evident bands corresponding to active MMP-2 (66kDa) and less expressed bands related to its latent form (72kDa), for both coronal and root dentin, in all experimental groups. No bands corresponding to MMP-9 were identified, for both substrates. The lowest pH solutions (2.5, 4.5 and 5.0) yielded the higher functional activity than did the highest pH solutions (6.0 and 7.0), for both substrates. For HYP analysis, the groups pH 2.5 and pH 4.5 showed absorbance values below the detection limit of the equipment. For the other groups, for both coronal and root dentin, statistically significant diferences were found between them (p<0.05). The amount of HYP was higher for pH 7.0 than all other groups (p<0.05), except for pH 6.0. No statistical difference was found between pH 6.0, pH 5.0 and control (p>0.05). It can be concluded that the functional activity of MMP-2 is pH-dependent. Low pH solutions are able to increase the activation of human coronal and root MMP-2. It is noted in pHs close to neutral, a higher degradation of demineralized dentin organic matrix by these endogenous enzymes.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência da aplicação de bevacizumab (Avastin®) sobre a angiogênese corneal. Para tanto ratos Wistar, machos, com idade entre 8 e 10 semanas, pesando 300 a 350g, foram submetidos a cauterização química com nitrato de prata por 10 segundos. Após realização da lesão, cada grupo de 5 animais foi tratado com injeções subconjuntivais de 0,02 ml de bevacizumab (Avastin ®) pela via subconjuntival no momento da lesão, no 3° e 5° dia e submetidos à eutanásia ao 7° dia após cauterização corneal. A rede vascular neoformada foi quantificada após preenchimento do leito vascular com Tinta da China e análise das imagens em sistema computadorizado (Image Pro-Plus®). Para a segunda etapa do experimento, avaliou-se a atividade das metaloproteinases MMP-2 e MMP-9 utilizando-se do mesmo modelo de angiogênese e dos mesmos tempos de tratamento. Transcorridos 7 dias de lesão corneal os animais foram eutanasiados e suas córneas submetidas a zimografia. Os resultados mostraram haver uma inibição da angiogênese quando se compara o grupo controle aos grupos tratados nos diferentes períodos de tempo. Quando a densidade vascular é comparada entre os tempos de aplicação, não se observa diferença estatisticamente significante. Estes resultados em conjunto indicam que o tempo de aplicação não influencia a inibição da angiogênese e que o bevacizumab foi eficiente na redução da formação de vasos quando se compara a densidade vascular do grupo controle. O modelo experimental produziu considerável aumento das metaloproteinases MMP-2 e MMP-9. Houve uma tendência a diminuição da atividade das MMPs quando bevacizumab foi aplicado no momento da lesão e quando foi aplicado ao 3° dia após cauterização. A atividade das MMPs mostrou-se aumentada quando o tratamento foi realizado no 5° dia. Desta forma pode-se concluir que o bevacizumab foi capaz de inibir a angiogênese corneal, independentemente do período de tratamento e ainda que houve uma tendência a redução da atividade das MMPs carecendo, por enquanto, de mais investigações que possam elucidar a interação deste fármaco com a inibição de sua atividade. / The purpose of this study was to evaluate the effects of the use of the subconjunctival injection of bevacizumab (Avastin®) on angiogenesis and metalloproteinases activities in the rat cornea after cauterization. Wistar male rats, aging 8 to 10 weeks, were used. The animals were divided in four groups: control group (GC) that received subconjunctivally 0,02 ml of 0,9% saline solution; group GO that received subconjunctivally 0,02 ml of bevacizumab just after the lesion; group G3 that received bevacizumab at day 3 after lesion and G5 that received bevacizumab at day 5 after lesion. The animals were euthanized at day 7 after lesion. The new formed vessels were quantified after the China Ink perfusion and photographs were obtained and analyzed in computadorized system (Image Pro-Plus®). The activities of metalloproteinases MMP-2 and MMP-9 were evaluated by zimography in a pool of corneas obtained from animals submitted to the same model and treatment schedule. The results showed an inhibition of angiogesenis when the control group were compared with all treated groups. There were no statistic differences when vascular density was compared between the treated groups. These results may indicate that bevacizumab was able to inhibit corneal angiogenesis and that there was no influence of the injection day. This angiogenesis model promoted an increase of matrix metalloproteinases MMP-2 and MMP-9 activity. Zymography also showed a slight reduction in matrix metalloproteinases activity when bevacizumab were administrated at the injury moment and most significant at day 3. At day 5 zymography showed an increase of the activity of these metalloproteinases. Together these results may indicate that the subconjunctival injection of bevacizumab may have a therapeutic potential as an antiangiogenic agent and that matrix metalloproteinases activity decreased, but not at significant levels, demanding more investigations regarding to the interaction of bevacizumab and activity of matrix metalloproteinases.

Orientadores: Mário Fernando de Góes, Alan Roger dos Santos Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-25T14:50:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_WagnerGomesda_M.pdf: 3135648 bytes, checksum: 61c724ad2dea362d9e0c9ac978529067 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A cárie relacionada à radioterapia (CRR), também conhecida como "cárie de radiação", é uma grave toxicidade bucal que acomete pacientes oncológicos submetidos à radioterapia (RDT) na região de cabeça e pescoço. Apesar de ser atribuída principalmente aos efeitos indiretos da RDT, como a hipossalivação, a CRR também é associada a efeitos diretos da radiação sobre o esmalte, a dentina e a polpa dental. Desta forma, o objetivo deste estudo foi testar a hipótese nula de que a RDT não é capaz de gerar danos diretos aos componentes micromorfológicos da matriz inorgânica e orgânica dos dentes de pacientes com câncer de cabeça e pescoço (CCP). Um total de 39 dentes, incluindo 22 que receberam RDT in vivo e 17 dentes não irradiados provenientes de pacientes com CCP, foram agrupados em dois eixos experimentais que avaliaram cortes histológicos preparados por desgaste (grupo experimental I) e por desmineralização (grupo experimental II). No grupo I, investigou-se a preservação da micromorfologia dos tecidos dentários; bem como a atividade gelatinolítica por meio da zimografia in situ. No grupo II, investigou-se a preservação da micromorfologia dos tecidos dentários; bem como a expressão imunoistoquímica de MMP-2, MMP-9 e MMP-20. Foi constatada preservação estrutural de todos os componentes micromorfológicos analisados, alta atividade gelatinolítica em dentina desmineralizada e intensa expressão de MMP-2, MMP-9 e MMP-20 em diferentes áreas de todos os espécimes avaliados. Contudo, não foi possível identificar diferenças significativas entre os espécimes irradiados e não irradiados em nenhuma das análises estatísticas. A hipótese nula teste não foi rejeitada e os resultados deste estudo sugerem que a ação direta da RDT não é capaz de gerar destruição radiogênica da matriz inorgânica ou orgânica dos dentes de pacientes com CCP e que, possivelmente, os efeitos diretos da RDT sobre a estrutura dentária não são determinantes para o início ou progressão da CRR / Abstract: Radiation-Related Caries (RRC), also known as "radiation caries" is a severe oral toxicity that affects cancer patients who have undergone radiotherapy (RDT) in the head and neck area. Although mainly attributed to the indirect effects of RDT, such as hyposalivation, RRC is also associated with direct effects of radiation on the enamel, dentin and dental pulp. Therefore, the aim of this study was to test the null hypothesis that RDT is not able to generate direct damage to the micromorphological components of inorganic and organic matrix of teeth from patients with head and neck cancer (HNC). A total of 39 samples, including 22 teeth that received in vivo RDT and 17 teeth from non-irradiated patients with HNC were grouped into two experimental groups that evaluated ground sections (experimental group I) and histological sections prepared by demineralization (experimental group II). In group I, the preservation of the micromorphological components of dental tissues as well as the gelatinolytic activity by in situ zymography were investigated. In group II, the preservation of micromorphological components of dental tissues and the immunohistochemical expression of MMP-2, MMP-9 and MMP-20 were investigated. Structural preservation of all micromorphological components analyzed, a high gelatinolitic activity in demineralized dentin and intense expression of MMP-2, MMP-9 and MMP-20 were found in different areas of all specimens evaluated. However, it was not possible to identify significant differences between irradiated and non-irradiated specimens in any of the statistical analyses. The null hypothesis was not rejected and the results of this study suggest that direct effects of RDT are not able to generate morphological radiogenic destruction of inorganic or organic teeth matrix of HNC patients, and, possibly, the direct effects of RDT on the dental tissues are not decisive to the onset and progression of RRC / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia

Orientador: Oslei Paes de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-25T08:18:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DellaColetta_Ricardo_D.pdf: 6321143 bytes, checksum: fee6575189b6054e21beeaa54cc06f5a (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Fibromatose gengival hereditária (FGH) é uma condição rara caracterizada por um aumento gengival generalizado com crescimento lento e progressivo. Para elucidar algumas das características regulatórias que resultam nesta condição, quatro linhagens celulares de fibroblastos provenientes de indivíduos de uma mesma família com FGH foram isoladas e caracterizadas em relação ao comportamento prol proliferativo, produção, e expressão de colágeno e suas proteínas chaperones, expressão de MMPs e TIMPs e produção de citocinas. Fibroblastos de gengiva normal (GN) e FGH em condições de subconfluência celular apresentaram típicas características morfológicas, mas em condições de saturação da densidade, os fibroblastos de FGH apresentaram dimensões menores que as células controle. Cinco diferentes ensaios de proliferação celular mostraram que a relação de proliferação foi significantemente maior em fibroblastos de FGH. A produção e expressão de Hsp47 é também aumentada em fibroblastos de FGH em paralelo com o aumento na produção de colágeno. Em adição, a expressão de Hsp47 é regulada por estresse celular e pró-peptídeos correspondendo as regiões da porção N-terminal das cadeias 'alfa'1 (I). A produção de citocinas foi detectada por ELlSA utilizando anticorpos específicos para TGF-' beta '31, IL-6, IL-1 ' beta ' e TNF- 'alfa '. Em fibroblastos de FGH a produção de TGF-' beta ' 1 e IL-6 foi estatisticamente maior que em fibroblastos normais (p<0,013 e p< 0,0035 respectivamente), enquanto que IL-' beta ' 1 e TNF- 'alfa ' não foram detectadas em todos as linhagens celulares. A expressão e produção de MMP-1 e MMP-2, como revelada por RT -PCR e zimografia, foram significantemente menores em fibroblastos de FGH comparando com células de GN. Por outro lado, a expressão de TIMP-1 e TIMP-2 foi ligeiramente maior em fibroblastos de GN. A neutralização de TGF- ' beta ' 1 com anticorpos específicos elevou os níveis de expressão e produção de MMP-1 e dramaticamente reduziu os níveis de MMP-2, enquanto que os de níveis de TIMPs não foram alterados. Estes resultados sugerem que a pato gênese do aumento gengival de indivíduos com FGH é possivelmente resultado de uma associação de fatores incluindo alterado comportamento proliferativo, exacerbada síntese de colágeno e Hsp47, desregulação no balanço proteolítico e elevada produção de citocinas / Abstract: Characterization of cellular proliferation and expression of collagen and its molecular chaperones, cytokines and matrix metalloproteinases and its tissue inhibitors in gingival fibroblasts from pacients with hereditary gingival fibromatosis Hereditary gingival fibromatosis (HGF) is a rare oral condition characterized by a slow and progressive enlargement of the gingiva, involving both the maxillaand mandible. To further elucidate some of the regulatory features resulting in this condition, the culture characteristics of the four cell lines of gingival fibroblasts derived from patients of the some family with HGF were isolated and characterized on proliferation index, collagen and its molecular chaperones production and expression, MMPs and TIMPs expression, and cytokines production. HGF and normal gingiva (NG) fibroblasts in subcofluent culture densities showed typical morphologic characteristics, but in saturation density, HGF fibroblasts were shorter than NG cells. Five different cell proliferation assays showed that the cell proliferation rate was significantly higher in HGF fibroblasts. The production and expression of Hsp47 were significantly higher in HGF fibroblasts than in NG fibroblasts, along with increased producto?n of collagen. In addition, Hsp47 is coordinately regulated by stress and by feedback mechanism mediated by N-terminal procollagen propeptides corresponding to residues of a1 (I)-chains. The cytokines production was detected by ELlSA using specific antibodies for TGF-' beta ' 1 , IL-6, IL-1 ' beta ' and TNF- 'alfa '. In HGF fibroblasts, the production of TGF-' beta ' 1 and IL-6 was higher than fibroblasts from normal tissues (p<0.013 and p<0.0035 respectively), whereas IL-1' beta ' and TNF-'alfa ' were not detected in ali cell lines. RT-PCR and enzymographic analysis clearly demonstrated that the expression and production of MMP-1 and MMP-2 were significantly lower in fibroblasts from HGF than from NG. Interestingly, TIMP-1 and TIMP-2 expression from NG cells was shown to be slightly higher than those from HGF. The use of neutralizing antibodies to TGF-' beta ' 1 caused a slight increase in MMP-1 and a decrease in MMP-2 expression, whereas that no change TIMPs levels. These results suggest that the pathogenesis of gingival outgrowth in HGF patients is possibly resulted of a association of factors such as increased proliferative potential, altered synthesis of collagen and Hsp47, dysregulated proteolytic balance and increased cytokines production / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Odontologia

Abstract Malignant tissue growth induces marked biochemical and structural changes in the extracellular matrix of the tumour and its surrounding tissues. In the present study, we evaluated the prognostic value of the serum concentration of the markers of synthesis of type I collagen (PICP, PINP) and type III collagen (PIIINP) as well as the marker of type I collagen degradation (ICTP) and compared them with the conventional indicators of prognosis (clinical stage, grade of differentiation, histological subtype, residual tumour load and the age of the patient). The prognostic value of peritoneal cytological findings at operation was an additional object in our studies. High preoperative serum ICTP (>5.6μg/L) and PIIINP (>3.2μg/L) concentrations and a low PICP:PINP ratio (>2) correlated with poor prognosis in ovarian carcinoma in univariate analysis and in multivariate analysis when each variable was analyzed separately with the conventional factors. However, ICTP concentration was the only prognostic variable in multivariate analysis including PIIINP, PINP, ICTP and CA125. When analyzed with conventional prognostic factors (clinical stage, grade, residual tumour, presence of ascites, histology), clinical stage and ICTP were independent indicators of prognosis. In addition, malignant cells in the peritoneal fluid aspirate at primary operation, grade and the age of the patient predicted poor prognosis in multivariate analysis. Postoperative serum ICTP concentration 9-months after the operation was the strongest prognostic factor as compared to the preoperative ICTP and CA125 values and clinical variables. These results indicate that serum collagen metabolites, especially ICTP, are indicators of prognosis in epithelial ovarian cancer. The present ICTP-test does not detect the degradation products of immature type I collagen, the dominating form in ovarian cancer tissue. Therefore, the excess ICTP in invasive ovarian cancer might originate through the degradation of trivalently matured collagens in non-malignant tissues surrounding the malignancy. ICTP may thus be an indicator of invasive properties of the tumor and its determination opens up new perspective to predict the clinical outcome of ovarian cancer.

Abstract The dentin-pulp complex comprises mineralized dentin and the vital soft tissues encased inside dentin, i.e. odontoblasts and pulp tissue. During caries progression, the dentinal minerals are dissolved and eventually the collagenous organic matrix is degraded. However, the exact mechanisms and enzymes responsible for the organic matrix breakdown remain unknown. Matrix metalloproteinases (MMPs), a family of endopeptidases capable of degrading in concert virtually all extracellular matrix components, are expressed during normal dentin-pulp complex formation and maintenance. MMP activity has also been suggested to contribute to the organic matrix degradation during dentin caries progression and to the repair and defense reactions elicited by caries in the dentin-pulp complex cells. The aim of the study was to further elucidate the role of host MMPs in dentin caries progression and the origin of MMPs in carious dentin as well as the possible changes in MMP expression in the cells of the dentin-pulp complex in response to caries. MMP inhibitors decreased the area of dentin caries lesions in vivo, suggesting the involvement of host MMPs in dentin caries pathogenesis. When the overall MMP gene expression was examined by cDNA microarray, pooled pulp samples demonstrated a high level of MMP-13 expression, but failed to show any unequivocal changes in MMP expression due to caries. MMP-13 expression is rare among normal human adult tissues. Real-time quantitative PCR of individual pulp and odontoblast samples demonstrated a rather large variation in relative MMP-13 mRNA expression between samples, especially pulp samples. Protein expression of MMP-13 was detected in pulp and odontoblasts without any major differences between the tissues of sound and carious teeth. This was also the case with the MMP-20 (enamelysin) protein, which was demonstrated in odontoblasts and the pulp tissue of fully developed human teeth. MMP-20, MMP-8, and gelatinases (especially MMP-2) were demonstrated in human dentin, and dentinal MMPs exhibited activity against native and denatured type I collagen when released. The study demonstrates the presence of MMPs in the soft and hard tissue compartments of the dentin-pulp complex. These enzymes may also contribute to dentin caries progression and response reactions to caries.