Thesis (Ph.D.) OGI School of Science & Engineering at OHSU, December 2006. / Abstract: leaves xvii-xviii. Includes bibliographical references (leaves 197-204).

INTRODUCTION: Skin cancer is the most common cancer in the United States and melanoma is the fifth most common kind of cancer. The incidence of melanoma has been increasing over the past thirty years. This type of cancer can be detected using a visual skin examination. Survival is related to the thinness and stage at the time of diagnosis. Clinicians find thinner, earlier stage melanomas compared to those found by patients and significant others. REVIEW OF THE LITERATURE: The average American visits their primary care provider twice annually and skin conditions are the number one reason Americans younger than sixty-five visit their primary care physician. However, the majority of residents in the United States are not comfortable with performing the full body skin examination required to screen for melanoma. Medical schools in the United States spend one percent of the curriculum on dermatologic conditions. In fact, the United States Preventative Services Task Force does not support regular skin cancer screening by primary care providers since there is limited evidence that primary care physicians perform adequate skin examinations. METHODS: This curriculum is aimed at teaching internal medicine and family medicine interns and primary care physician assistants and nurse practitioners the full body skin cancer screening examination as well as the ability to differentiate between benign and malignant skin lesions. A pre- and post-course examination of benign versus malignant lesions will be distributed and the scores will be analyzed using a paired T-test. A pre- and post-course Likert scale will be dispersed to evaluate how clinical practice changes based on this course. Mean and standard deviation for the overall Likert scale as well as individual parts of the scale will be calculated and a paired T-test will be used to analyze how the course changed clinical practice of the clinicians. Additionally, standardized patients will be provided for the participants to practice the full body skin examination. CONCLUSION: This study is unique in that it is teaching primary care medical interns as well as physician assistants and nurse practitioners the full body skin examination. Limitations include a small sample size, voluntary participation in the setting of a busy work schedule, and pushback from clinicians since performing full body skin exams are not recommended at this time.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T07:31:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 284824.pdf: 12189070 bytes, checksum: 169aa6b9841171e1477a5fc0de284e00 (MD5) / A quercetina (QU) é um polifenol pertencente à classe dos flavonóides, presente na dieta humana. Esta substância tem demonstrado inúmeras atividades farmacológicas incluindo antitumoral, antiinflamatória, antioxidante, entre outras. Entretanto, a biodisponibilidade oral desta substância é limitada, em decorrência do seu elevado metabolismo colônico e hepático e da sua baixa solubilidade aquosa. Desta forma, a incorporação da quercetina em sistemas de liberação de fármacos pode ser considerada uma alternativa promissora para administração oral deste composto. Neste trabalho, nanopartículas sólidas lipídicas (NLS), carreadores lipídicos nanoestruturados (NLC), nanoemulsões (NE) e microemulsões (ME) foram preparadas pela técnica de difusão do solvente a quente, variando apenas os componentes da formulação. As características físico-químicas, estruturais e morfológicas dos nanocarreadores foram estudadas e correlacionadas com a capacidade dos mesmos em encapsular e liberar a QU. Além disso, a estabilidade da ME em fluidos gastro-intestinais foi avaliada, assim como a sua atividade antiinflamatória, em modelo de asma alérgica, e antitumoral, em modelo de melanoma subcutâneo B16F10. O tamanho médio das partículas foi aproximadamente de 340, 220, 145 e 20 nm, para as SLNs, NLCs, NEs e MEs, respectivamente. As preparações apresentaram potencial zeta negativo ou carga próxima à zero, no caso da ME, em função da estabilização estérica provocada pelo polietilenoglicol (PEG) presente no surfactante utilizado neste caso. Elevados valores de eficiência de encapsulação foram obtidos para todas as formulações testadas. Entretanto, o teor de QU variou significativamente em função do tipo de nanocarreador e da quantidade de fármaco inicialmente adicionada às formulações. Em especial, a ME apresentou uma maior capacidade de incorporar a QU, aumentando a sua concentração cerca de 1.300 vezes em relação a sua solubilidade aquosa. Os perfis de liberação da QU exibiram uma cinética bifásica, consistindo de uma liberação rápida nas primeiras 8 horas, seguida de uma liberação sustentada durante 24 horas, mas o controle da liberação somente ocorreu em alguns casos. Na análise da avaliação estrutural e morfológica dos nanocarreadores diferentes técnicas foram empregadas, tais como, SAXS, WAXS, DSC, microscopia de luz polarizada, AFM, TEM, e cryo-TEM, dependendo do tipo de nanocarreador estudado. A SLN apresentou formato irregular e angular, na forma de um cristal lamelar. Por outro lado, NLC apresentou um aspecto mais arredondado, mas uma separação de fases entre o lipídio sólido e líquido foi constatada, indicando que o sistema não é homogêneo. Nestas partículas foi verificada a formação do polimorfo mais estável, -triestearina. Ambas NE e ME apresentaram formato esférico e foi verificado que a estrutura da partícula da ME é do tipo núcleo-casca. Estudos de avaliação da estabilidade da ME em fluídos gastro-intestinais verificaram que este sistema se mantém estável nos fluidos gástricos e que sua digestão ocorre nos fluidos intestinais quando a enzima lipase está presente. As avaliações da atividade antiinflamatória e antitumoral indicaram que a microemulsão contendo QU inibiu os principais mediadores da resposta inflamatória, assim como o crescimento tumoral, o que não foi observado quando a QU foi administrada na sua forma livre. Além disso, a análise do sangue de ratos tratados com QU livre e QU-ME por HPLC-EM, demonstrou que um íon relacionado a algum metabolito da QU foi detectado somente nas amostras extraídas dos animais tratados com QU-ME. Esses resultados indicam que a incorporação de quercetina nas microemulsões aumentou significantemente a biodisponibilidade oral deste composto e conseqüentemente seu efeito farmacológico pode ser alcançado.

Diversos fatores de risco ambientais, fenotípicos e genéticos estão associados ao desenvolvimento do melanoma cutâneo. CDKN2A é considerado o principal gene de susceptibilidade para esta neoplasia. O polimorfismo p.A148T do gene CDKN2A parece ser um indicador de risco para o melanoma em determinadas populações. No presente estudo, a frequência de p.A148T foi estudada em 127 casos de melanoma e 128 controles por PCR-RFLP. Nos casos, a sua frequência foi significativamente superior do que em controles (0,126 x 0,039, p=0,009), demonstrando que esta variante deve ser considerada associada ao desenvolvimento do melanoma cutâneo no nosso meio como fator de risco genético para a doença. Além de identificar indivíduos geneticamente mais predispostos ao melanoma, grandes esforços têm sido empregados para o melhor entendimento dos eventos moleculares envolvidos na sua gênese. Recentemente, a teoria de que uma subpopulação de células seria responsável pela manutenção e proliferação dos tumores tem sido estudada. A presença em subgrupos de células de melanoma de uma série de marcadores, que existem em células multipotentes neurais no período embrionário e que são perdidos durante a diferenciação, seria um indício do retorno desta multipotencialidade. Reconhecer este subgrupo de células fenotipicamente distinto e estudar a sua via de ativação seria de extrema importância para o desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas para casos avançados. A expressão imunoistoquímica da nestina, uma proteína freqüente na embriogênese neural, e de fatores de transcrição da família POU e SOX, envolvidos na sua ativação, foi estudada. Expressões aumentadas das proteínas foram encontradas nos tecidos de melanoma em relação a nevos. Além disso, observou-se coexpressão de nestina com SOX9 e SOX10, mostrando seu papel principal na ativação. A associação da nestina com ulceração e de SOX9 com tumores mais avançados pode indicar que o perfil de expressão destas proteínas seja um biomarcador de valor prognóstico.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:48:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Aneuploidia e instabilidade cromossômica são características da maioria dos tumores sólidos. Estas alterações podem resultar da segregação inapropriada dos cromossomos durante a divisões celulares, que pode ocorrer por diversos mecanismos incluindo defeitos teloméricos, amplificação centrossômica, centrômeros não funcionais e/ou defeitos no controle dos checkpoints do processo de divisão. Neste trabalho, foi utilizado um modelo in vitro de melanoma murino, cujo fator transformante foi o bloqueio de adesão celular ao substrato, para caracterizar alterações teloméricas e centroméricas que acompanham a transformação maligna dos melanócitos. Para estudar o tempo de ocorrência do encurtamento telomérico durante a transformação maligna, o perfil do comprimento telomérico foi analisado por Q-FISH e observamos que o tamanho dos telômeros diminui gradativamente ao longo da transformação maligna. Paralelamente, foi também encontrado um aumento no número de cromossomos sem telômeros e na complexidade do cariótipo, o que incluiu o aparecimento de fusões Robertsonianas em 100% das metáfases analisadas nas células metastáticas. Estes achados estão em concordância com estudos que mostram que anormalidades no comprimento dos telômeros parecem ser uma das alterações genéticas mais precocemente adquiridas no processo de transformação maligna e que anormalidades teloméricas resultam em agregação telomérica, ciclos de quebra, ponte e fusão e instabilidade cromossômica. Outra característica importante do modelo é a grande instabilidade centromérica manifestada pela presença abundante de fragmentos centroméricos e fusões de centrômeros. Juntos, estes resultados ilustram, para este modelo de melanoma, instabilidade cromossômica com uma assinatura estrutural de quebras centroméricas e perda telomérica. / Aneuploidy and chromosomal instability are hallmarks of most solid tumors. These alterations may result from inaccurate chromosomal segregation during mitosis, which can occur through several mechanisms including defective telomere metabolism, centrosome amplification, dysfunctional centromeres and/or defective spindle checkpoint control. In this work, we used an in vitro murine melanoma model that utilizes the cell adhesion blockade as a transforming factor to characterize telomeric and centromeric alterations that accompany melanocyte malignant transformation. To study the timing of the occurrence of telomere shortening during the transformation model, we analyzed the profile of telomere length by Q-FISH and found that telomere length significantly decreased as additional rounds of cell adhesion blockages were performed. Together with it, increase in telomere free ends and karyotype complexity were also found, which includes Robertsonian fusions in 100% of metaphases of the metastatic melanoma cells. These findings are in agreement with the idea that telomere length abnormalities appear to be one of the earliest genetic alterations acquired in the multistep process of malignant transformation and that telomere abnormalities result in telomere aggregation, breakagebridge-fusion cycles and chromosomal instability. Another remarkable feature of this model is the abundance of centromeric instability manifested as centromere fragments and centromeric fusions. Taken together, our results illustrate for this melanoma model chromosomal instability with a structural signature of centromere breakage and telomeric loss. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Ingeniera Civil en Biotecnología / El melanoma es un cáncer de alta incidencia y mortalidad, que posee una inmunogenicidad suprimida por mecanismos de evasión propios, como la expresión aberrante del gangliósido GD2 en la superficie de las células tumorales. Entre las terapias experimentales, la hemocianina de Megathura crenulata, conocida como KLH, generó una respuesta inmune protectiva contra el tumor de melanoma al estar acoplada a un péptido que mimetiza a GD2 (péptido P10), induciendo anticuerpos anti-GD2 que dirigen la respuesta hacia el tumor. Así, se propuso que las hemocianinas de los moluscos del litoral chileno, Concholepas concholepas (CCH) y Fissurella latimarginata (FLH), acopladas a P10 generarían una respuesta inmune protectiva frente al desafío de ratones C57BL/6, con melanoma murino de la línea B16F10. Primero, los péptidos P10 y control (S266) fueron acoplados a las tres hemocianinas mediante el entrecruzador sulfo-SMCC. Luego, utilizando el adyuvante AddaVax, como potenciador inmunológico de los conjugados hemocianina-péptido, se inmunizó a los ratones encontrándose un elevado y similar título de anticuerpos contra las hemocianinas (de 1:2.500), y un menor título de anticuerpos específicos y predominantemente de clase IgG contra cada péptido (de 1:300). Posteriormente, se evaluó la terapia anti-tumoral inducida por tres inmunizaciones con los conjugados y con hemocianinas no acopladas, en ratones desafiados con células B16F10 y previamente sensibilizados con cada antígeno. Se encontró que FLH indujo una mayor respuesta inmune protectiva contra el tumor que CCH, dado que inhibió la incidencia y la velocidad de crecimiento tumoral, similar al control positivo con KLH, estando o no conjugada, y sin efectos tóxicos colaterales. Con ello, y según se verificó por inmunofluorescencia y indirecta citometría de flujo, los anticuerpos anti-hemocianinas presentaron reacción cruzada con epítopos presentes en las células B16F10 y en líneas de melanoma humano. En conclusión, no se encontraron diferencias entre las hemocianinas al actuar como carrier de péptidos miméticos, pero sí hubo diferencias significativas en la respuesta inmune antitumoral inducida por FLH y KLH, respecto a los controles y a CCH, resultados que son promisorios para continuar los estudios preclínicos con FLH, que potencien su uso como adyuvante o inmunomodulador en la terapia del melanoma.

Made available in DSpace on 2016-03-04T13:41:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 378.pdf: 1267997 bytes, checksum: 184b2d2e442cd0f0eea2814e9d8b52ae (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Com a transição epidemiológica, as neoplasias ganharam grande relevância como causa de morbidade e mortalidade, principalmente em uma população que envelhece. O melanoma tem despertado grande atenção uma vez que é uma das neoplasias malignas com maior aumento na incidência nas últimas décadas, sendo a maior causa de morte entre os tumores malignos primários da pele. O principal fator de risco ambiental (radiação ultravioleta) é conhecido e potencialmente controlável, e a população com maior exposição ao risco é identificada. Os objetivos deste estudo foram identificar o comportamento desta doença na população brasileira, e avaliar os padrões de recidiva e morte de acordo com fatores sociais e do tumor propriamente dito. Foi realizada uma análise de série temporal, com modelagem idade-período-coorte, que identificou uma tendência de queda na mortalidade no país para as coortes de nascimento mais recentes. Na análise da coorte hospitalar em Centro de Referência Oncológico no Rio de Janeiro, observou-se um aumento na sobrevida global e sobrevida livre de doença para aqueles indivíduos com maior nível socioeconômico (medido pela escolaridade), ajustado por outros fatores. Observou-se nesta mesma coorte o risco de recidiva e morte segundo o estágio da doença na apresentação: risco baixo e constante no estágio inicial, risco elevado porém decrescente em estágios mais avançados. / Por fim observou-se o comportamento do fator espessura da lesão (índice de Breslow) como variável contínua em pacientes com melanomas localizados na pele, identificando-se um componente linear em lesões de até cinco milímetros, tamanho a partir do qual verifica-se a existência de um platô, com estabilização do risco de recidiva e morte. Este conjunto de estudos tem impactos potenciais: na avaliação do comportamento desta doença nas coortes mais jovens, na identificação de aspectos sociais relacionados a evolução clínica e suas consequências, na determinação do risco e suas repercussões na política de seguimento dos pacientes, e no entendimento do principal fator determinante do prognóstico do melanoma em tumores localmente avançados.

CARVALHO, Adriana Andrade. Estudo da atividade antimetastática da biflorina, uma o-naftoquinona isolada das raízes da Capraria biflora. 2009. 106 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) -Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-01T16:30:22Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_aacarvalho.pdf: 10168239 bytes, checksum: c82f2913718a7edb557546fc613fab6c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-05T12:58:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_aacarvalho.pdf: 10168239 bytes, checksum: c82f2913718a7edb557546fc613fab6c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-05T12:58:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_aacarvalho.pdf: 10168239 bytes, checksum: c82f2913718a7edb557546fc613fab6c (MD5) Previous issue date: 2009 / The main cause of mortality in cancer patients is related to the incidence of secondary tumors in the body. Owning up to the deficiency of therapeutic schemes direct to the treatment of metastasis, many efforts are being launched to develop drugs with anti-metastatic potential. In previous studies performed in our laboratory, biflorin, an o-naphthoquinone isolated from the roots of Capraria biflora, was found to increase the survival rates of B16-bearing mice without significant toxicity. In spite of these findings we decided to evaluate the anti-metastatic activity of biflorin using B16-F10 (murine melanoma) and MDAMB-435 (human melanoma) cells line. The experimental metastasis model was achieved by injecting B16-F10 cells in the tail vein of C57BL/6 mice. In this assay, biflorin (25 and 50 mg/kg/day) inhibited the formation of metastatic nodules in 57 and 71 %, respectively. Nevertheless, histopathological analyses of biflorin-treated lungs showed the presence of erythrocytes and hemosiderin, indicating the occurrence of recent and late hemorrhage. In order to evaluate how biflorin inhibits metastasis, we carried out in vitro tests using two cell lines of metastatic melanoma, B16-F10 and MDAMB-435. In the cell adhesion assay, biflorin inhibited adhesion of both cells lines on type I collagen, a substrate of the extracellular matrix. Moreover, biflorin was able to inhibit cell motility in the wound healing assay. The concentrations used in these assays did not show any cytotoxicity after 24 h of incubation, excluding a false-positive. Even so, in the zymogram assay we observed that biflorin did not alter the release of metallopeptidases -2 and -9 into growth medium, thus excluding this as the means by which biflorin exerts the anti-metastatic effect. These data suggest that biflorin has a promising anti-metastatic potential, as shown by its anti-adhesion and anti-migration properties on metastatic melanoma cell lines, however further studies are indispensable to elucidate its action mechanism. / A principal causa de mortalidade em pacientes com câncer está relacionada com a presença de tumores secundários pelo organismo. Devido a falta de tratamento das metástases, muitos esforços estão sendo lançados para o desenvolvimento de novas drogas com potencial antimetastático. Em estudos realizados em nosso laboratório observamos que a biflorina, uma o-naftoquinona isolada das raízes da Capraria biflora, aumentava a sobrevida dos animais transplantados com o melanoma B16 sem expressiva toxicidade. Diante desse dado resolvemos avaliar a atividade antimetastática desta naftoquinona, em modelos experimentais in vivo e in vitro, utilizando as linhagens celulares B16-F10 (melanoma murino) e MDAMB-435 (melanoma humano). A indução da metástase experimental foi realizada pela inoculação da linhagem celular B16-F10 via veia caudal de animais C57BL/6. Neste ensaio, a biflorina (25 e 50 mg/kg/dia) inibiu a formação dos nódulos metastático em 57 e 71 %, respectivamente. Entretanto, em análise histopatológica dos pulmões dos animais tratados, foi observada a presença de hemácias e hemossiderina, o que indica a presença de hemorragia recente e tardia. Com objetivo de avaliar como a biflorina tem seu efeito sobre a metástase, foram realizados alguns ensaios in vitro utilizando duas linhagens de melanoma metastático: B16-F10 e MDAMB-435. Em ensaio de adesão celular, a biflorina foi capaz de inibir a adesão de ambas as células sobre o colágeno tipo I, um dos constituintes da matriz extracelular. Além disso, em ensaio de migração celular, utilizando o método Wound healing (cicatrização), a biflorina também foi capaz de inibir a motilidade destas células. Vale ressaltar que nesses ensaios foram utilizadas concentrações não-citotóxicas, o que exclue um efeito falso positivo. Por fim, em ensaio de zimograma com gelatina, foi observado que a biflorina não alterava a liberação das metaloproteinases -2 e -9 para o meio de crescimento, excluindo esse mecanismo de ação. Esses resultados sugerem que a biflorina apresenta um potencial antimetastático bastante promissor através da sua ação sobre a adesão e migração celular, eventos cruciais para que ocorra a formação de metástase. Entretanto, futuros estudos são necessários para elucidar seu mecanismo de ação.

The aim of this thesis was to find optimal anticancer regimen of therapy, based on a naturally occuring polysaccharide laminarin. It was studied on the Mus musculus skin melanoma B16-F10. There were explored an ajuvant effect of LTA. Mixture of laminarin with LPS was applied with various anchorings and was tryed out the possible replacement of LPS. Using the flow cytometry there were determined progress of immune cells during application. This therapy resulted in reduction of tumor volume and the prolongation of overall survival.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2013-07-16T03:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 265976.pdf: 1266582 bytes, checksum: b97305d88626a2ba8a9b167ca43ffbb3 (MD5) / A vetorização de agentes antineoplásicos através de nanopartículas é uma estratégia promissora para o tratamento do câncer. Dentre os fármacos existentes, a curcumina, composto natural extraído do açafrão (Curcuma longa L.), tem sido extensivamente estudada devido a sua ampla variedade de propriedades farmacológicas, em especial a atividade antitumoral. Porém, os problemas de baixa estabilidade e biodisponibilidade inerentes a este composto requerem o aprimoramento da forma farmacêutica. Assim, o presente trabalho teve como objetivo principal o desenvolvimento de suspensões coloidais de nanocápsulas lipídicas e poliméricas contendo curcumina a fim de melhorar a estabilidade e eficácia terapêutica deste fármaco. As suspensões de nanocápsulas lipídicas e poliméricas foram preparadas pelas técnicas de inversão de fases e nanoprecipitação, respectivamente. Após o desenvolvimento e validação de um método fluorimétrico para quantificação da curcumina nas formulações, a influência da quantidade de curcumina inicialmente adicionada sobre a eficiência de encapsulação, taxa de recuperação e teor de fármaco foi avaliada. A eficiência de encapsulação foi superior a 99 % e a curcumina foi completamente recuperada em todas as preparações, enquanto o teor de fármaco variou entre 127,04 a 509,49 g/mL. Ambos os métodos permitiram a obtenção de partículas submicrônicas com um diâmetro médio de 140 nm para os sistemas poliméricos e 40 nm para os lipídicos. Partículas esféricas, apresentando uma estrutura do tipo núcleo-casca foram visualizadas por microscopia eletrônica de transmissão. Os ensaios de liberação in vitro realizados em tampão acetato pH 5,0 a 37 °C contendo 0,25 % (p/v) de lauril sulfato de sódio demonstraram um efeito burst inicial, seguido por uma liberação sustentada por até 48 horas para todas amostras testadas. As nanocápsulas lipídicas conduziram a mais rápida liberação da curcumina, quando comparadas as nanocápsulas poliméricas, podendo este resultado ser relacionado ao tamanho reduzido, à maior área superficial e à parede mais fina das partículas. Estudos de estabilidade hidrolítica e fotoquímica mostraram que a associação da curcumina às nanocápsulas reduz a velocidade de degradação do fármaco frente à exposição à luz UV e em pH 7,4. A captura da curcumina livre e encapsulada foi observada por microscopia de fluorescência, após incubação com células de macrófagos murino J774. Os resultados indicaram que a captura do fármaco é reduzida pelo uso destes sistemas coloidais. A eficácia das suspensões de nanocápsulas foi avaliada em linhagem celular de melanoma murino B16-F10 in vitro e in vivo. A curcumina livre e encapsulada reduziu significativamente a viabilidade das células tumorais de maneira concentração e tempo dependente, por indução de apoptose celular. Nos estudos in vivo, estas formulações induziram a redução significativa do volume tumoral formado. Assim, a encapsulação da curcumina em nanocápsulas poliméricas e lipídicas mostrou ser benéfica no que diz respeito à melhoria da estabilidade e da eficácia terapêutica deste fármaco.