MiRNAs são pequenas moléculas de RNAs endógenos não codificantes com aproximadamente 23nt que atuam na regulação da expressão gênica. A sua função é inibir a tradução de genes transcritos através de um mecanismo que viabiliza a ligação do miRNA com o mRNA alvo levando à inibição da tradução ou a degradação do RNA mensageiro. Estudos evidenciam a relação dos miRNAs com diversos processos biológicos como proliferação celular, diferenciação, desenvolvimento e doenças. Uma vez que estão envolvidos na regulação gênica, também alteram as vias metabólicas. Atualmente, as ferramentas computacionais disponíveis para o estudo dos miRNAs são o miRBase, microCosm, o miRGen e o miRNAmap. Elas possuem informações sobre as sequências dos miRNAs, genes alvos e sobre elementos que estão próximos à região dos miRNAs. Embora o avanço até o momento, não existia que relacionasse os miRNAs com as vias metabólicas, para isso foi construída a plataforma miRNApath que auxilia no estudo da função dos miRNAs por meio da análise do seus alvos dentro vias metabólicas. De modo semelhante, também não existia uma abordagem que relacione dados de expressão miRNAs e seus alvos dentro de um mesmo experimento. Para tanto, neste trabalho foi feita uma abordagem utilizando bibliotecas de SAGE (Serial Analysis of Gene Expression) que será incorporada no miRNApath. O miRNApath encontra-se disponível em http://lgmb.fmrp.usp.br/mirnapath. / MiRNAs are small molecules of endogenous non-coding RNAs with approximately 23nt in length that acts over gene expression regulation. Its function is inhibit the translation of gene transcripts through a mechanism that links the miRNA with its mRNA target leading to a translational repression or degradation. Studies show the relation of RNAs in many biological processes like cell proliferation, dierentiation and development of diseases. Since they are involved in gene regulation, they also change the metabolic pathways. Currently, the available computational tools for the study of miRNAs are miRBase, microCosm, miRGen and miRNAmap. They have information about miRNAs sequences, targets and features. Despite the the advances, until now, there is no tool that correlates the miRNAs with metabolic pathways, therefore we developed the miRNApath platform that helps in the analysis of miRNAs function through the study of its targets that are into the metabolic pathway. In the same way, there is no approach that put together information of expression of miRNAs and its targets in the same experiment. In this work we develop an approach with SAGE (Serial Analysis of Gene Expression ) libraries that will be integrated to miRNApath. The plataform is avaible at http://lgmb.fmrp.usp.br/mirnapath.

INTRODUÇÃO: A obesidade é uma doença crônica com crescimento alarmante no mundo todo. Atualmente, o tratamento cirúrgico, especialmente o Bypass Gástrico em Y de Roux (BGYR), tem se mostrado como a forma mais eficiente para perda de peso e sua manutenção a longo prazo. Contudo, com a formação do neo-estômago e a mudança na conformidade intestinal, há alterações significantes das muitas propriedades físicas e funcionais desses órgãos que levam à deficiência de nutrientes, inclusive de cálcio. Com isso, podem ocorrer modificações no metabolismo ósseo e, conseqüentemente, na estrutura óssea. OBJETIVOS: Avaliar a ingestão de cálcio, as alterações no metabolismo ósseo e mineral; e a ocorrência de osteopenia e osteoporose em mulheres que se submeteram ao BGYR há oito anos. MÉTODO: Neste estudo transversal, foram estudadas 30 mulheres que se submeteram ao BGYR no período de outubro de 1995 a janeiro de 1999, no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP. Para avaliação da ingestão de cálcio, utilizamos o recordatório de 3 dias (R3D) e o questionário de freqüência alimentar (QFA). Também foram realizados exames laboratoriais referentes ao metabolismo ósseo e mineral e densitometria óssea do seguimento L1-L4, colo femoral (CF) e fêmur proximal (FP). RESULTADOS: Em média, o consumo de cálcio foi de 525,5 ± 250,7 mg/dia pelo R3D e de 542,2 ± 195,6 mg/dia pelo QFA. Houve uma relação estatisticamente significativa entre a ingestão de cálcio por esses dois métodos (p<0,001). Não houve alteração nas determinações de cálcio total e ionizado, magnésio, fósforo e CTX. Os níveis de PTH, Fosfatase alcalina fração óssea (BSAP) e osteocalcina estavam elevados em 53%, 57% e 20% das mulheres, respectivamente; 90% apresentavam deficiência de 25 (OH) vitamina D (40% leve e 50% moderada), e em 70% a calciúria estava abaixo dos valores normais. Observou-se uma correlação positiva entre 25 (OH) vitamina D e a calciúria (p<0,04) e negativa entre 25 (OH) vitamina D e PTH (p<0,017). Com relação à densidade mineral óssea, 13% das mulheres foram diagnosticadas com osteoporose com relação ao CF e FP; 67%, 40% e 27% apresentavam osteopenia em L1-L4, CF e FP, respectivamente. CONCLUSÃO: Na maioria das mulheres estudadas verificou-se um consumo de cálcio cerca de 50% abaixo da recomendação diária para esta faixa etária. Observou-se também, uma deficiência de 25 (OH) vitamina D e elevação de PTH e BSAP. Além disso, houve uma ocorrência de osteopenia superior à esperada indicando que alterações no metabolismo ósseo são provavelmente uma complicação do BGYR. Mais estudos são necessários para definir uma rotina de suplementação de cálcio e vitamina D, e também para a prevenção das alterações ósseas. / INTRODUTION: Obesity is a chronic disease that rises rapidly around the world. Nowadays bariatric surgical procedures, especially Roux-en-Y Gastric Bypass (RYGB) has been shown the most efficient way to lose weight and maintain the weight loss for a long time. However, with the neo-stomach and the modification of intestinal anatomy by the surgery there are significant changes on physiological properties of these organs that lead to a nutrient deficiency, including calcium. Thus, bone metabolism changes may occur leading to a metabolic bone disease. OBJECTIVES: To evaluate calcium intake, bone and mineral metabolism changes and the prevalence of metabolic bone disease in women who were submitted to RYGB after eight years. METHOD: we studied 30 women who were submitted to RYGB during the period between October of 1995 and January of 1999 at Clinical Hospital of Medicine School of São Paulo University. To access calcium intake we used a 3 day dietary recall (3DR) and food frequency questionnaire (FFQ). Laboratory tests of bone metabolism and bone mass density of L1-L4, femoral neck (FN) and proximal femur (PF) were also accessed. RESULTS: calcium intake was 525,5 ± 250,7 mg/day according 3RD and 542,2 ± 195,6 mg/day according FFQ. There was a significantly relation between both methods (p<0,001). Total and ionic calcium, magnesium, phosphorus and CTX were not altered. PTH, bone specific alkaline phosphatase (BSAP) and osteocalcin levels were elevated respectively in 53%, 57% and 20% of women. 90% presented 25 (OH) vitamin D deficiency (40% mild and 50% moderate) and 70% had low urinary calcium. Was observed a positive correlation between 25 (OH) vitamin D and urinary calcium (p<0,04); and a negative correlation between 25 (OH) vitamin D and PTH (p<0,017). 13% of women had osteoporosis in FN and PF; 67%, 40% and 27% had metabolic bone disease in L1-L4, FN and PF respectively. CONCLUSION: Most studied women had a low calcium intake, about 50% of daily recommendation. We also noticed a 25 (OH) vitamin D deficiency and elevated levels of PTH and BSAP. Besides, there was a high prevalence of metabolic bone disease than expected, suggesting that this could be a complication of this surgery. Further studies are needed to define a supplementation routine of calcium and vitamin D to prevent bone metabolic diseases in these patients.

As células produtoras de anticorpos desempenham um papel chave na resposta efetora a microrganismos, sendo o foco principal da maioria das vacinas existentes. Entretanto, elas podem ter efeitos deletérios em doenças autoimunes e na rejeição a transplantes. Apesar de grandes avanços no controle da resposta humoral, alguns desafios permanecem e neste contexto, novos alvos terapêuticos têm sido explorados. Sabe-se que alterações metabólicas decorrentes da ativação de células B estão intimamente relacionadas com a função efetora destas células, o que anteriormente se imaginava ser apenas um reflexo de crescimento e proliferação celular. Estas alterações são controladas por sensores metabólicos ativados logo após a ativação de células B, como o mTOR, o qual é componente central de dois complexos: mTORC1 e mTORC2. Estudos anteriores já reportaram o papel positivo exercido por mTOR na via glicolítica em células T, bem como na função efetora destas células. Aqui, nós formulamos a hipótese de que a via do mTOR favorece a via glicolítica em detrimento de OXPHOS em células B, e que estas alterações metabólicas impactam as funções efetoras das mesmas. Desta maneira, para investigarmos alterações nestas vias em decorrência de mTOR, células B foram isoladas de animais controle (CT), ou de animais com células B deficientes de mTORC1 (Raptor&#916;B) ou mTORC2 (Rictor&#916;B) e então estimuladas com LPS (lipopolissacarídeo) in vitro. Nossos dados indicam que a deficiência de mTORC2 beneficia OXPHOS em detrimento da via gicolítica, bem como a ativação de células B e a formação de plasmablastos. Na sequência, confirmamos que a redução nas taxas de glicólise, assim como a elevação da oxidação lipídica e de OXPHOS são cruciais para manter a elevada ativação de células B e formação de plasmablastos a partir de células B Raptor&#916;B e Rictor&#916;B. Constatou-se ainda que a produção total de IgM é elevada em células Rictor&#916;B após estímulo com LPS. Entretanto, identificamos que isso é decorrente do aumento de plasmablastos formados e não da capacidade individual de secreção dos mesmos. Diferentemente das células B deficientes, observamos que plasmablastos Raptor&#916;B e Rictor&#916;B reduzem a atividade mitocondrial. Na sequência, confirmamos que a atividade mitocondrial via oxidação lipídica é fundamental para a produção de anticorpos. Além disso, demonstramos que a deficiência de mTORC2 eleva a troca de isotipo, enquanto a de mTORC1 a diminui após estimulo com LPS e IL4. Posteriormente, o impacto da deficiência de mTORC2 em células B foi avaliado in vivo em modelo de transplante de pele. Neste caso, não observamos diferenças significativas na sobrevida do enxerto entre CT e Rictor&#916;B, mas foi constatado que apesar de ambos apresentarem formação de plasmócitos similares, animais deficientes apresentaram um número significativamente menor de células B na periferia. Assim, concluímos que a deficiência de mTORC1 ou mTORC2 em células B implica em uma maior diferenciação de plasmablastos e em uma maior produção total de anticorpos em Rictor&#916;B in vitro, enquanto um papel funcional para essas moléculas no contexto das células B in vivo ainda precise ser determinado. / Antibodies are produced by Antibody Secreting Cells (ASCs), which are essential to fight infections. They are also the basis of most successful vaccines available, however they can present deleterious effects in autoimmune diseases and in graft rejection. Even though there have been great improvements in controlling the humoral response, its proper manipulation still remains a challenge, thus new targets need to be explored. It is known that metabolic shifts that occur upon B cell activation are not only essential for cell growth and proliferation, but are also interconnected with these cells effector function. Metabolic shifts are controlled by metabolic sensors, as the mTOR, which is a core component of two complexes, mTORC1 and mTORC2. Previous studies with T cells have already reported that mTOR exerts a positive role on glycolysis, which in turn impacts the effector function of T cells. We then hypothesized that mTOR favors glycolysis over Oxidative Phosphorylation (OXPHOS) in B cells, and that these metabolic changes impact the effector function of B cells. Thus, to investigate the impact of the mTOR pathway on B cells, we isolated B cells from mice with mTORC1 deficient B cells (Raptor&#916;B) or mTORC2 deficient B cells (Rictor&#916;B) or Control mice (CT), and stimulated them in vitro with lipopolysaccharide (LPS). Our results indicate that the deficiency of mTORC2 favors OXPHOS over glycolysis, as well as B cell activation markers expression and plasmablast formation. Next, we confirmed that the reduced glycolysis levels, improved lipid oxidation and OXPHOS are in fact crucial for the enhanced activation and plasmablast formation observed in Raptor&#916;B and Rictor&#916;B B cells. We also described that IgM secretion was elevated in B cells from Rictor&#916;B after stimuli with LPS, however we found that this increase was due to the overall increase in plasmablasts in this group and not to their individual antibody secretion capacity. Interestingly, Raptor&#916;B and Rictor&#916;B plasmablasts differently from B cells, reduce their mitochondrial activity. Subsequently, we confirmed that the mitochondria via lipid oxidation is actually essential for antibody secretion. In addition, we showed that mTORC2 deficiency increases isotype switching, while mTORC1 deficiency diminishes it when IL4 was added to LPS. We then sought to determine if mTORC2 deficiency in B cells would present an impact in vivo in a skin graft model. However, we did not observe a significant difference in graft survival between the CT and Rictor&#916;B mice and in plasmacyte numbers, but we did observe a significant reduction in B cells in the periphery. Thus, we conclude that mTORC1 and mTORC2 deficiency leads to an improved plasmablast differentiation and an overall increase in antibody secretion in the last one in vitro, whereas the role of these sensors remains to be determined in vivo.

O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos de dois modelos experimentais de dietas hipercalóricas em comportamentos de ansiedade, processos de aprendizagem e memória e alterações metabólicas. Os animais foram divididos em seis grupos experimentais, de acordo com a condição nutricional. 1) Controle (C); 2) Dieta de Cafeteria (DC); 3) Dieta Hiperlipídica (DH); 4) Controle AIN-93 (C/AIN-93); 5) Dieta de Cafeteria AIN-93 (DC/AIN-93), e 6) Dieta Hiperlipídica AIN-93 (DH/AIN-93). Posteriormente, os grupos foram subdivididos em dois grupos independentes, conforme a tarefa à qual foram submetidos. Pesagens foram realizadas semanalmente até os 98 dias de vida; foram verificados os pesos do fígado, do coração e o peso de tecido adiposo retroperitoneal e epididimal e foram realizadas dosagens de glicose, triglicérides, TGO e TGP no soro e gordura total, colesterol total e triglicérides no fígado. Os testes utilizados: Labirinto em T Elevado (LTE), Caixa Claro/Escuro e Labirinto Aquático de Morris (LAM). Os resultados de peso corporal, os dados comportamentais do LAM, do LTE e os dados de peso dos tecidos extraídos no dia do sacrifício e as análises bioquímicas foram submetidos a uma Análise de Variância (ANOVA). Quando apropriado, foi utilizado o teste de comparações múltiplas de Newman-Keuls (p< 0,05). Os dados comportamentais do teste claro/escuro foram submetidos ao teste t-Student (p< 0,05). Animais tratados com dieta hiperlipídica apresentaram maiores medidas de peso e ganho de peso comparados aos animais controle e dieta de cafeteria, tratados com pellet e com dieta AIN-93. Animais DH1, DC1, DH1 AIN-93, DH2 AIN-93 e DH2 apresentaram maior peso no dia do sacrifício. Animais DH1, DH1 AIN-93, DH2 e DH2 AIN-93 apresentaram maior acúmulo dos tecidos adiposos retroperitoneal e epididimal. Animais DH1 AIN-93 e DC2 AIN-93 apresentaram maiores níveis de glicose. Animais C2, DH2 e DC2 apresentaram maiores níveis de triglicérides. Animais DH1 e C1 apresentaram menores valores de TGO. Animais C2 e C2 AIN-93 apresentaram maiores níveis de TGO. Animais C1, DH1, C2 e DH2 apresentaram maiores níveis de TGP. Animais DH1 AIN-93, DH1, DH2 e DH2 AIN-93 apresentaram maiores valores de gordura total no fígado. Animais DH1 AIN-93 e DH2 apresentaram maiores níveis de colesterol no fígado. Animais DH1, DC1, DH2 e DH2 AIN-93 apresentaram maiores níveis de triglicérides no fígado. Com relação ao consumo alimentar, animais DH apresentaram maior consumo calórico e maior consumo lipídico quando comparados aos animais C e DC, com ração em pellet ou dieta AIN-93. Com relação ao LTE, não foram verificadas diferenças nas esquivas e na fuga. Animais DC1, DH1 e DH1 AIN-93 apresentaram menores níveis de ansiedade verificados a partir dos dados do teste da caixa claro-escuro. Animais DC2 AIN-93 apresentaram pior desempenho em tarefa de memória. Os dados obtidos a partir deste estudo demonstraram que as dietas utilizadas foram capazes de acarretar ganho de peso, acúmulo de tecido adiposo, alterações metabólicas, diminuição da ansiedade nos animais e pior desempenho em uma tarefa de memória em um dos grupos nutricionais. / The aim of this study was to investigate the effects of two experimental hypercaloric diets on anxiety behaviors, learning and memory processes and metabolic changes. The animals were divided into six experimental groups, according to the nutritional condition. 1) Control (C); 2) Cafeteria Diet (CD); 3) Fat Diet (FD); 4) Control AIN-93 (C/AIN-93); 5) Cafeteria Diet AIN-93 (CD/AIN-93), and 6) Fat Diet AIN-93 (FD/AIN-93). Posteriorly, the groups were subdivided into two independent groups, according to the task that they were submitted. Weighing were carried out weekly until 98 days of life; weights of liver, heart, retroperitoneal and epididymal adipose tissue were checked and glucose, triglycerides, AST, ALT levels in serum and total fat liver, total cholesterol and triglycerides levels in liver were measured. Elevated T Maze (ETM), Light/Dark Box and Morris Water Maze (MWM) tests were used. The body weight data, the behavioral data of MWM and ETM, the tissues weight data extracted on the sacrifice day and the biochemical analysis were subjected to analysis of variance (ANOVA). When appropriate, the multiple comparisons of Newman-Keuls test were used (p<0.05). The behavioral data at the light/dark box were subjected to the t-Student test (p<0.05). Animals treated with fat diet presented higher body weight and weight gain compared to the control and cafeteria diet animals, treated with lab chow and AIN-93 diet. FD1, CD1, FD1 AIN-93, FD2 AIN-93 and FD2 animals presented higher weight at the sacrifice day. FD1, FD1 AIN-93, FD2 and FD2 AIN-93 animals presented higher retroperitoneal and epididymal adipose tissue accumulation. FD1 AIN-93 and CD2 AIN-93 animals presented higher glucose levels. C2, FD2 and CD2 animals presented higher triglycerides levels. FD1 and C1 animals presented lower AST levels. C2 and C2 AIN-93 animals presented higher AST levels. C1, FD1, C2 and FD2 animals presented higher ALT levels. FD1 AIN-93, FD1, FD2 and FD2 AIN-93 animals presented higher total liver fat. FD1 AIN-93 and FD2 animals presented higher total cholesterol levels at liver. FD1, CD1, FD2 and FD2 AIN-93 animals presented higher triglycerides levels at liver. Relative to food consumption, FD animals presented higher caloric intake and higher lipid intake compared to C and CD animals, whether they have received lab chow or AIN-93 diet. Regarding the ETM, it has not been verified differences regarding the avoidances and escape. CD1, FD1 and FD1 AIN-93 animals presented lower anxiety levels checked at the light/dark box. CD2 AIN-93 animals presented worse performance at the memory retention test. The data obtained from this study suggest that the diets were capable of causing weight gain, adipose tissue accumulation, metabolic changes, decreased anxiety levels and lead to worse performance memory at a memory retention test in one of the nutritional groups.

Análise de Redes Metabólicas foi aplicada à cepa de Saccharomyces cerevisiae CEN.PK113-7D, e a alguns mutantes interrompidos em genes que codificam para proteínas regulatórias envolvidas no fenômeno de repressão por glicose. Todas as cepas foram cultivadas em aerobiose, em meio mínimo contendo [1-13C]glicose como substrato limitante. As células eram recolhidas em situação de crescimento balanceado e submetidas à hidrólise, seguida de derivação e posterior injeção da amostra resultante num cromatógrafo gasoso acoplado a um espectrômetro de massa, para análise da marcação em alguns fragmentos de metabólitos intracelulares. Estes dados serviram como base para a identificação da atividade de algumas vias metabólicas no metabolismo central de S. cerevisiae. Além disto, utilizando-os juntamente com um modelo estequiométrico, foi possível obter uma estimativa para os fluxos no metabolismo central na cepa referência e nos mutantes estudados. Num primeiro momento, a metodologia foi validada para cultivos contínuos e descontínuos. Calculou-se um desvio padrão para a medida da marcação em cada fragmento de metabólito detectado pela metodologia empregada. Na cepa referência, observou-se que o ciclo de Krebs opera de forma cíclica em células que respiram e de forma não cíclica em células que apresentam metabolismo respiratório-fermentativo. Verificou-se que uma maior parte da glicose consumida é desviada para a via das pentoses fosfato no primeiro caso, em relação ao segundo. Foram encontradas evidências para a biossíntese de glicina através da enzima treonina aldolase e para a atividade da enzima málica. A ausência das proteínas Mig1 e Mig2 não altera os padrões de crescimento, produção de etanol e de marcação em metabólitos intracelulares de S. cerevisiae. Já a ausência de Hxk2, Reg1 ou Grr1 provoca alívio na repressão por glicose, observado pelo aumento das atividades respiratórias. / Metabolic Network Analysis was applied to the reference strain CEN.PK113-7D of Saccharomyces cerevisiae, as well as to some mutants disrupted in genes which code for regulatory proteins involved in the glucose repression cascade. All strains were cultivated under aerobic conditions, using minimal medium with [1-13C]glucose as the limiting substrate. Cells were harvested under balanced growth conditions and submitted to hydrolysis, derivatization and injection of the sample into a gas chromatograph coupled to a mass spectrometer for analysis of the labeling pattern in some fragments of intracellular metabolites. These data were used for identifying the activity of some pathways in the central metabolism of S. cerevisiae. Furthermore, using the data together with a stoichiometric model, it was possible to estimate the fluxes in the central metabolism of the reference strain and in the mutant strains. First, the methodology was validated for batch and continuous cultivations. Standard deviations were calculated for the measurement of the fractional labeling in each of the detected fragments. In the reference strain, it was observed that the Krebs cycle operates in a cyclic manner in respiratory cells, whereas it operates in a non cyclic manner under respiro-fermentative metabolism. It was also seen that a greater part of the glucose consumed by the cells enters the pentose phosphate pathway in the former than in the later case. Evidence for the activity of the threonine aldolase and the malic enzyme catalyzed reactions was also found. The absence of the Mig1 and Mig2 proteins does not alter the growth, ethanol formation and labeling pattern of intracellular metabolites in S. cerevisiae. In contrast, the absence of Hxk2, Reg1, or Grr1 provoques a relief in glucose repression, which was observed by an increased respiratory activity.

Sarcosina é um N-metil-aminoácido derivado da glicina e a sua elevação em tecidos e fluidos fisiológicos de pacientes com sarcosinemia pode refletir na quantidade de unidades de um carbono. A sarcosinemia é uma condição metabólica rara, de natureza hereditária, associada a um possível retardo mental. Primeiramente, desenvolvemos um modelo agudo induzido quimicamente de sarcosinemia em ratos Wistar. Os ratos de 7, 14 e 21 dias de idade pós-parto receberam sarcosina intraperitonealmente em doses de 0,5 mol/g de peso corporal três vezes por dia em intervalos de 3 h. Os animais do grupo controle receberam solução salina (NaCl a 0,85 g%) no mesmo volume (10 l/kg de peso corporal). Eles foram mortos após 0,5, 1, 2, 3 ou 6 horas depois da última injeção e o cérebro e o sangue foram coletados para a dosagem da sarcosina. Os resultados mostraram que as concentrações plasmáticas e cerebrais de sarcosina atingiram níveis de três a quatro vezes mais elevados do que os níveis normais. Além disso, esses níveis diminuíram ao longo do tempo, atingindo a normalidade após 6 horas. Em um segundo momento, investigamos a administração aguda da sarcosina e/ou creatina mais piruvato sobre alguns parâmetros de estresse oxidativo e metabolismo energético em homogeneizados de córtex cerebral de ratos Wistar com 21 dias de idade. A administração aguda de sarcosina induziu o estresse oxidativo e diminuiu as atividades da adenilato cinase (AK), gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH), atividade do complexo IV e CK citosólica e mitocondrial. Por outro lado, a atividade da succinato desidrogenase (SDH) foi aumentada em córtex cerebral de ratos. Além disso, o conteúdo total de sulfidrilas foi significativamente reduzido, enquanto a oxidação do DCFH, níveis de TBARS e as atividades da superóxido dismutase (SOD) e glutationa-peroxidase (GPx) foram significativamente aumentadas por essa administração. A co-administração de creatina mais piruvato foi eficaz na prevenção de alterações provocadas pela administração de sarcosina sobre o estresse oxidativo e as enzimas da rede de fosforiltransferência. Esses resultados indicam que a administração aguda de sarcosina pode estimular o estresse oxidativo e alterar o metabolismo energético em córtex cerebral de ratos. No caso de esses efeitos também ocorrerem em humanos, eles podem contribuir, juntamente com outros mecanismos, para a disfunção neurológica de sarcosinemia sendo que a administração de creatina mais piruvato poderia ser benéfica para os pacientes. / Sarcosine is an N-methyl derivative of the amino acid glycine, and its elevation in tissues and physiological fluids of patients with sarcosinemia could reflect a deficient pool size of activated 1-carbon units. Sarcosinemia is a rare inherited metabolic condition associated with mental retardation. Firstly, we developed an acute chemically induced model of sarcosinemia in Wistar rats. Wistar rats of 7, 14 and 21 postpartum days received sarcosine intraperitoneally in doses of 0.5 mol/g of body weight three time a day at intervals of 3 hours. Control animals received saline solution (NaCl 0.85 g%) in the same volume (10 ml/kg of body weight). The animals were killed after 0.5, 1, 2, 3 or 6 h after the last injection and the brain and the blood were collected for sarcosine measurement. The results showed that plasma and brain sarcosine concentrations achieved levels three to four times higher than the normal levels and decreased in a time-dependent way, achieving normal levels after 6 hours. In a second moment, we investigated the acute effect of sarcosine and/or creatine plus pyruvate on some parameters of oxidative stress and energy metabolism in cerebral cortex homogenates of 21-day-old Wistar rats. Acute administration of sarcosine induced oxidative stress and diminished the activities of adenylate kinase, GAPDH, complex IV and mitochondrial and cytosolic creatine kinase. On the other hand, succinate dehydrogenase activity was enhanced in cerebral cortex of rats. Moreover, total sulfhydryls content was significantly diminished, while DCFH oxidation, TBARS content, and activities of SOD and GPx were significantly enhanced by acute administration of sarcosine. Co-administration of creatine plus pyruvate was effective in the prevention of alterations provoked by sarcosine administration on the oxidative stress and the enzymes of phosphoryltransfer network. These results indicate that acute administration of sarcosine may stimulate oxidative stress and alter the energy metabolism in cerebral cortex of rats. In case these effects also occur in humans, they may contribute, along with other mechanisms, to the neurological dysfunction of sarcosinemia. Creatine and pyruvate adminstration could be beneficial to the patients.

A doença arterial coronária (DAC) tem sido a maior causa de morte por doenças nos paises ocidentais. Existem vários fatores responsáveis pela iniciação e progressão desta doença - fatores ambiental ou genético. Muitos fatores de risco para a DAC estão relacionados a alterações do metabolismo lipídico, como acúmulo de lipoproteína de baixa densidade (LDL) no plasma seguida da deposição da lipoproteína na parede arterial. Recentemente, foi demonstrado que uma emulsão rica em colesterol que se assemelha a composição lipídica da LDL liga-se aos receptores que captam a lipopoteína da circulação e internalizam-na no citoplasma. A emulsão, denominada LDE, é feita sem proteína mas quando injetada na circulação sangüínea adquire várias apolipoproteínas (apo) como apo E que pode ser reconhecida pelo receptor de LDL. A apo E tem mais afinidade pelo receptor do que a apo B, a apo que liga a LDL nativa ao receptor. No presente estudo, para esclarecer o processo metabólico que a LDL enfrenta no plasma e o processo de captação da lipoproteína pelos vasos, a LDE marcada com colesterol livre-3H (CL) e oleato de colesterol-14C (CE) foi injetada em 10 pacientes portadores de DAC (57 ± 2,2 anos) submetidos à cirurgia de revascularização miocárdica. Amostras de sangue foram coletadas em intervalos de tempo pré-determinados. A radioatividade presente nas alíquotas de plasma foi determinada por cintilação líquida e a taxa fracionai de remoção (TFR) calculada por análise compartimental. Os fragmentos dos enxertos de aorta, artérias radial e torácica interna, veia safena e pericárdio removidos durante o procedimento cirúrgico foram coletados para extração lipídica, separação por cromatografia de camada delgada e quantificação radioativa. A remoção plasmática do CE da LDE foi similar a do CL da LDE (0,0617 ± 0,0087 vs 0,0528 ± 0,0123, p = 0,5635, respectivamente). A captação do CL da LDE foi maior do que a do CE da LDE na aorta (21% vs 3,1%, p = 0,0049), artéria torácica interna (10,3% vs 2%, p = 0,0007) e veia safena (8% vs 2%, p = 0,0326). Nos fragmentos de artéria radial (14,4% vs 4,3%) e de pericardio (2,2% vs 0,3%), a captação do CL tendeu ser maior do que a captação do CE, porém não foi estatisticamente confirmado. A taxa de esterificação foi maior nos fragmentos de aorta, de toráxica interna e de pericárdio do que nos fragmentos de veia safena (p < 0,001). Concluindo, a LDE foi captada pelos vasos e pericardio em quantidades concideráveis e a captação do CL pelos tecidos foi maior do que a do CE. Ainda, a taxa de esterificação do colesterol livre foi mais intensa nos fragmentos de aorta e torácica interna do que nos fragments de veia safena. / Coronary artery disease (CAD) is the main mortality cause in western countries. There are many factors responsible for the onset and progression of the disease - either environmental or genetic. Many risk factors in CAD are related with disorders of lipid metabolism, such as accumulation of low-density lipoprotein (LDL) in the plasma with deposition of the lipoprotein in the arterial wall. Recently, it was shown that a cholesterol-rich emulsion that mimics the lipid composition of LDL binds to the receptors that take-up the lipoprotein from the circulation and internalizes it into the cytoplasm. The emulsion, denominated LDE, is made without protein but when injected into the bloodstream it picks-up several apolipoproteins (apo) such as apo E that can be recognized by the LDL receptor. Apo E has even more affinity for the receptor than apo B, the apo that binds native LDL to the receptors. In the current study, aiming to clarity the metabolic processes that LDL undergoes in the plasma and the process of lipoprotein uptake by the vessels, LDE labeled with 3H- Cholesterol (CL) and 14C-Cholesteryl Oleate (CE) was injected into 10 CAD patients (57 ± 2,2 yr.) scheduled to be submitted to myocardial revascularization surgery. Blood samples were collected over 24 hour at pre-established intervals. Radioactivity present in plasma aliquots was determined in a scintillation solution and the fractional clearance rate (FCR) was calculated by compartimental analysis. The gratt\'s fragments of aortic, radial, internal thoracic arteries, safenous vein and pericardium discarded during the surgical procedure were collected for lipid extraction, separation by thin layer chromatography and radioactive counting. The removal from plasma of the LDE CE was similar to that of the LDE CL (0,0617 ± 0,0087 vs 0,0528 ± 0,0123, p = 0,5635, respectively). The uptake of LDE CL was greater than that of LDE CE in aorta (21% vs 3,1%, p = 0,0049), internal toracic artery (10,3% vs 2%, p = 0,0007) and safenous vein (8% vs 2%, p = 0,0326). In the radial artery (14,4% vs 4,3%) and pericardium (2,2% vs 0,3%) fragments, the CL uptake also tended to be greater than that of CE, but this was not statistically confirmed. The esterification rate was greater in the aorta, internal thoracic artery and pericardium fragments than in safenous vein fragments (p < 0,001). In conclusion, LDE was taken-up by vessels and pericardium at considerable amounts and LDE CL uptake by those tissues was greater than that of CE. In addition, the cholesterol esterification rate was more intense in the aorta and internal thoracic artery than in venous fragments.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-04Bitstream added on 2014-06-13T20:00:58Z : No. of bitstreams: 1 leme_jaca_dr_rcla.pdf: 1133844 bytes, checksum: 96fcdb51142a4b6ddf31ece437a39c75 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Para investigar os efeitos do treinamento físico moderado nas concentrações de grelina, leptina, GH e IGF-I em ratos diabéticos, ratos wistar foram distribuídos nos seguintes grupos: controle sedentário, controle treinado, diabético sedentário e diabético treinado. A indução do diabetes foi feita por aloxana (32 mg/kg). Após determinação da carga equivalente à máxima fase estável do lactato (MFEL), o protocolo de treinamento físico de natação consistiu de 1 hora/dia, 5 dias/semana durante 8 semanas suportando uma carga equivalente à 90% da MFEL. Durante o período experimental foram registradas semanalmente a massa corporal e ingestão hídrica e alimentar. Ao final do período experimental, foi feita a eutanásia dos animais e o sangue foi coletado para determinação das concentrações de glicose, insulina, albumina, triglicerídeos, GH, IGF-I, grelina acilada e leptina. A massa do estômago foi registrada e foram coletadas amostras dos seguintes tecidos: fígado para determinação de IGF-I, proteína, DNA e triglicerídeos; pâncreas para determinação de IGF-I, proteína e DNA; hipófise para determinação de GH, estômago para determinação de grelina, proteína e DNA e tecido adiposo epididimal para determinação de leptina, proteína e DNA. O diabetes experimental reduziu a massa e comprimento corporal além das concentrações no sangue de insulina, leptina, GH e IGF-I, mas aumentou as ingestões hídrica e alimentar, e as concentrações de triglicerídeos, glicose e grelina acilada sanguíneas. Nos animais diabéticos, o exercício físico promoveu redução da ingestão alimentar, diminuiu as concentrações sanguíneas de glicose e triglicerídeos e recuperou os valores de IGF-I. No fígado, o diabetes reduziu os valores de IGF-I, proteína e razão proteína/DNA, aumentou os valores de triglicerídeos que foram recuperados pelo treinamento físico... / In order to investigate the effects of moderate physical training in the concentrations of ghrelin, leptin, GH and IGF-I in diabetic rats, Wistar rats were distributed in four groups: sedentary control, trained control, sedentary diabetic and trained diabetic. Experimental diabetes was induced by alloxan (32 mg / bw). After workload determination equivalent to maximal lactate steady-state (MLSS), the exercise training protocol consisted in swimming 1 h / day, 5 days / week during 8 weeks supporting a load equivalent to 90% of the MLSS. During the experimental period, weekly body mass, and water and food intake were recorded. At the end of the experiment, euthanasia was performed and the blood was collected to determine the level of glucose, insulin, albumin, triglycerides, GH, IGF-I, acylated ghrelin and leptin. The weight of the stomach was recorded and samples of the following tissues were collected: liver to determine IGF-I, protein, DNA and triglycerides; pancreas to determine IGF-I, protein and DNA; pituitary to determine GH; stomach to determine of ghrelin, protein and DNA and epididymal adipose tissue to determine leptin, protein and DNA. In addition to body weight and length, experimental diabetes also reduced blood concentrations of insulin, leptin, GH and IGF-I. Nevertheless, it increased water and food intake, and also the concentrations of triglycerides, blood glucose and acylated ghrelin. In diabetic rats, exercise caused a reduction of food intake, blood concentrations of glucose and triglycerides, and recovery blood IGF-I. In the liver, diabetes reduced the IGF-I, protein and protein/DNA ratio values, and increased triglycerides level, which was recovered by physical training in these parameters. Diabetes also reduced pituitary GH concentrations, which did not alter by physical training. On the other hand, training increased IGF-I and protein / DNA ratio values... (Complete abstract click electronic access below)

Introdução: Beribéri é uma doença causada pela deficiência de tiamina (vitamina B1) que, apesar de facilmente tratável, pode levar a óbito. Há pelo menos setenta anos não se tinha referência de surtos de beribéri no Brasil. Objetivo: Descrever o perfil epidemiológico dos casos de beribéri e óbitos notificados no Estado do Maranhão. Método: Estudo descritivo-retrospectivo que analisou 1.207 casos notificados de beribéri e 40 óbitos ocorridos no Maranhão no período de 2006 a 2008. As informações foram obtidas do banco de dados da Vigilância Epidemiológica e fichas de notificação. Resultados: Os casos distribuíram-se em 434 (36,0%) em 2006, 551 (45,6%) em 2007 e 222 (18,4%) em 2008. Afetou dois terços das Unidades Regionais de Saúde e 26,3% dos municípios localizados nas regiões centro-oeste, noroeste e sudoeste do Estado. As notificações foram maiores nos meses de março a agosto, com pico em junho. O coeficiente de incidência no período foi de 4,32/10.000 hab. Homens foram mais acometidos (81,9%), com concentração de casos na faixa etária de 20-40 anos (57,0%). Predominou a ocorrência do beribéri seco (84,6%) e o tempo decorrido entre os primeiros sintomas e a notificação foi inferior a três meses para dois terços dos casos. A hospitalização ocorreu para 50% dos casos em 2006, 30% em 2007 e 15% em 2008. O consumo de álcool foi referido por 53,2% dos acometidos em 2006, com proporção discretamente menor nos anos subseqüentes, e o hábito de fumar por cerca de um terço dos acometidos. Sintomas mais comuns foram: diminuição da força, dormência e edema das pernas, dificuldade para caminhar e dor na panturrilha. Em relação à escolaridade, constatou-se que mais da metade (57,2%) tinha quatro anos ou menos de estudo, dois terços (66,2%) desempenhava atividade laboral pesada e 72,9% tinham renda familiar inferior a um salário mínimo. Foram registrados 40 óbitos (3,3% do total de casos notificados) apenas em 2006, concentrados no mês de junho (61,9%) e distribuídos em 21 municípios (9,7%). A taxa de mortalidade para o Estado foi de 0,45/10.000 hab. Praticamente a totalidade dos óbitos ocorreu no sexo masculino (97,5%), sendo 72,5% na faixa etária de 20-30 anos. Para dois terços, o tempo decorrido entre os primeiros sintomas e a notificação foi inferior a três meses e a hospitalização ocorreu para 42,5%. Hábito de consumir álcool e fumar foi elevado entre aqueles que foram a óbito, 75,0% e 66,7%, respectivamente. Conclusão: O estudo se destaca por abranger análise de todas as notificações de beribéri do estado do Maranhão. Constatou-se que os casos e óbitos apresentaram distribuição espacial e temporal relacionado à realidade do estado. A ausência de óbitos em 2007 e 2008 e redução dos casos em 2008 sugerem efeitos positivos das ações de enfretamento governamentais implementadas. Esta avaliação descritiva é importante para nortear as atividades e áreas a serem priorizadas no planejamento das ações de combate, tanto no nível central (federal, estadual e municipal), como para os profissionais da atenção básica e especializada, no direcionamento de suas práticas. Os resultados contribuem também para o delineamento de outras pesquisas que possam auxiliar no estudo da determinação do beribéri no Brasil. / Introduction: Beriberi is a disease caused by a deficiency of thiamine (vitamin B1) which, although easily treatable, may lead to death. There had been no register of beriberi outbreaks in Brazil for at least seventy years. Objective: To describe the epidemiological profile of reported beriberi cases in the State of Maranhão. Method: A descriptive retrospective study of 1,207 reported beriberi cases and 40 deaths in the State of Maranhão from 2006 to 2008. The information was obtained from the database of Epidemiological Surveillance and the reporting forms. Results: The cases were distributed in 434 (36.0%) in 2006, 551 (45.6%) in 2007 and 222 (18.4%) in 2008. It affected two thirds of the Regional Health Units and 26.3% of the municipalities located in the Central-Western, Northwestern and Southwestern of the State. The notifications were higher in the months from March to August, peaking in June. The incidence rate in the period was 4.32 / 10,000 inhabitants. Men were more affected (81.9%), with more concentration of cases in the age group 20-40 years (57.0%). Dry beriberi was predominant (84.6%) and the elapsed time between first symptoms and reporting was less than three months in two thirds of cases. Hospitalization occurred for 50.0% of cases in 2006, 30.0% in 2007 and 15.0% in 2008. Alcohol consumption was reported by 53.2% of patients in 2006 and slightly lower proportion in subsequent years, and smoking was reported for about one-third of patients. Main symptoms were loss of strength, numbness and swelling of the legs, difficulty in walking and calf pain. Regarding education it was found that more than half (57.2%) had four or fewer years of study, two thirds (66.2%) performed heavy labor activity and 72.9% had a family income lower than minimum wage. Forty deaths were recorded (3.3% of all reported cases) only in 2006, concentrated in the month of June (61.9%) and distributed in 21 municipalities (9.7%). The mortality rate for the State was 0.45 per 10,000 inhabitants. Almost all the deaths occurred in males (97.5%), and 72.5% aged 20-30 years. For two-thirds of the patients who died, the elapsed time between first symptoms and reporting was less than three months and hospitalization occurred in 42.5%. Alcohol consumption and smoking were higher among those who died, 75.0% and 66.7% respectively. Conclusion: This study stands out for including analysis of all reported beriberi cases in the State of Maranhão. It was found that cases and deaths showed spatial and temporal distribution related to the social reality of the State. The absence of deaths in 2007 and 2008 and reduction of cases in 2008 suggest positive effects of the implemented governmental actions. This descriptive evaluation is important to guide the activities and areas to be prioritized in the planning of actions at the central level (federal, state and municipal), as well as for guiding the practice of primary and specialized healthcare professionals. The results also contribute to the design of other research that may support the study of beriberi in Brazil.

Orientador: Fernando Gomes Romeiro / Banca: Giovanni Faria Silva / Banca: Ana Cláudia de Oliveira / Resumo: Pacientes com cirrose hepática são comumente acometidos por deficiências nutricionais e perda de massa óssea, por mecanismos como baixa ingestão de nutrientes e falta de atividade física. O objetivo deste estudo foi aferir a prevalência de doença óssea na cirrose e avaliar se alterações nutricionais e hepáticas estariam correlacionadas à perda de massa óssea (osteopenia ou osteoporose) em pacientes ambulatoriais atendidos na Faculdade de Medicina de Botucatu (FMB) - UNESP. Avaliações nutricionais e da massa óssea foram feitas por meio de antropometria, medidas de força muscular (pelo handgrip), absorciometria de raios X de dupla energia (dual-energy X-ray absorptiometry - DXA) e exames bioquímicos. A amostra foi de 129 indivíduos (77 homens e 52 mulheres), classificados em Child A (69%), Child B (24,8%) e Child C (6,2%). A média do escore Model for End-Stage Liver Disease (MELD) foi de 10,60 ± 3,99. A prevalência de osteoporose foi de 31,01% e a de osteopenia foi de 32,56%. Os resultados foram avaliados pelo modelo de regressão linear de Backward, mostrando que baixos valores de força muscular pelo handgrip, níveis elevados de paratormônio (PTH) e baixo índice de massa corporal (IMC) foram preditores de baixo t-escore da coluna, enquanto a idade e o IMC foram fatores preditores de baixo t-escore de quadril. A gravidade da doença hepática não influenciou a presença da doença óssea. Como a cirrose acomete mais os ossos da coluna, sugerimos que exames de PTH, handgrip e o IMC sejam utilizados rotineiramente na avaliação de portadores de cirrose, e se esses exames estiverem alterados a densidade óssea seja medida com mais frequência, mesmo na cirrose compensada / Abstract: Cirrhotic patients are often compromised by nutritional deficiencies and loss of bone density through mechanisms as low ingestion of nutrients and lack of physical activity. The aim of this study was evaluate the prevalence of bone alterations and investigate if nutritional and hepatic tests would be related to the bone loss (osteoporosis or osteopenia) in cirrhotic outpatients from the Botucatu medical school (FMB-UNESP). Nutritional, hepatic and bone assessments were performed through anthropometric measurement, handgrip strength, dualenergy X-Ray absorptiometry (DXA) exam and laboratory tests. The study sample was composed by 129 subjects (77 men and 52 women), who were divided according to the Child-Pugh classification as follows: Child-Pugh A (69%), Child- Pugh B (24.8%) and Child-Pugh C (6.2%). The mean of the Model for End-Stage Liver Disease (MELD) score was 10.6 ± 3.99. The rates of osteoporosis and osteopenia were 31.01% and 32.56%, respectively. The results were assessed by backward linear regression model, showing that low handgrip strength, high parathyroid hormone (PTH) and low body mass index (BMI) were predictors of low t-score values in the lumbar spine. Additionally, only age was a predictor of low t-score values in the femoral neck. The model did not select the liver disease severity as a significant predictor of bone disease. As the liver cirrhosis is more aggressive in the lumbar spine, we suggest that handgrip strength, BMI and PTH should be tested in all cirrhotic patients to select the ones with higher risk of bone disease, in order to perform specific bone exams more often when these tests are altered, even in compensated cirrhosis / Mestre