Submitted by BRUNO SATURNINO DE SOUZA null (br_saturnino@hotmail.com) on 2016-01-14T11:38:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Bruno Saturnino de Souza.pdf: 1024042 bytes, checksum: ec97801fa7722510ebbe5e6c15c6ab16 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-01-15T11:23:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 souza_bs_me_araca_int.pdf: 1024042 bytes, checksum: ec97801fa7722510ebbe5e6c15c6ab16 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-15T11:23:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 souza_bs_me_araca_int.pdf: 1024042 bytes, checksum: ec97801fa7722510ebbe5e6c15c6ab16 (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Não recebi financiamento / A estrutura óssea do ser humano bem como o processo de consolidação óssea são alvos de estudos constantes em todo o mundo. Fraturas e lesões são consequências da fragilidade óssea, normalmente causadas pela osteoporose, um grave problema de saúde pública. Estudos mostram que essa fragilidade pode ser atenuada pela atividade física regular e treinamento de força. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar a eficácia do exercício físico resistido frente a osteopenia induzida em ratos que permaneceram com ausência de carga em seus membros pélvicos. O modelo foi o de suspensão da cauda em ratos. Estes foram distribuídos em quatro grupos: C, controle, com período experimental em gaiola; S, suspenso por 21 dias e colocados em solo por mais 21 dias; E, submetido a exercício em escada durante 21 dias e, depois, mantido em solo por mais 21 dias e SE, suspenso por 21 dias e depois submetido a exercício em escada durante 21 dias. Foram realizadas análise de densitometria óssea e ensaio mecânico na tíbia dos animais para avaliar a qualidade do tecido ósseo após o período experimental. Pelos resultados, foi possível observar que o exercício físico com carga e intensidade adequada resulta em aumento da rigidez, força máxima, densidade mineral óssea e conteúdo mineral ósseo caracterizando uma recuperação da qualidade do osso proporcionada pelo exercício físico. Desta forma, conclui-se que o exercício físico com carga resistida e intensidade adequada resulta em remodelação óssea positiva frente a suspenção pela cauda, que por sua vez induz a fragilidade óssea semelhante a osteopenia, sendo eficaz no tratamento e prevenção dessa enfermidade. / The bone structure of the human being and the bone healing process are constant targets of studies worldwide. Fractures and injuries are consequences of bone frailty, usually caused by osteoporosis, a serious public health problem. Studies have shown that regular physical activity and strength training can mitigate this weakness. The purpose of this study was to evaluate the effectiveness of the resistance exercise against osteopenia induced in rats that remained with no load on their hind limbs. The suspension model used was the rat’s tail model suspension. These rats were divided into four groups: C, control, with trial cage; S, suspended for 21 days and placed in soil for 21 days; E subjected to exercise ladder for 21 days and then kept in the soil for 21 days, and SE suspended for 21 days and then subjected to exercise ladder for 21 days. Bone densitometry analysis and mechanical testing in the tibia of the animals were realized to verify the quality of bone tissue after the trial period. It was possible to observe in the results that the exercise load and proper intensity results in increased rigidity, maximum strength, bone mineral density and bone mineral content featuring a recovery of bone quality provided by exercise. In this way, it was concluded that physical exercise with appropriate intensity and repeated load results in a positive bone remodeling before the suspension by the tail, which in turn induces a similar bone fragility osteoporosis, being effective in the treatment and prevention of this disease.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4447.pdf: 11266317 bytes, checksum: 6b1120210ec06b96c9b2a338298384a7 (MD5) Previous issue date: 2011-08-26 / Universidade Federal de Sao Carlos / Microorganisms, known as being relatively simple, have shown a great adaptation power to different nutritional situations by changing their metabolism with lack or supply of nutrients in the culture medium. This feature allows a wide range of the use of microorganisms to produce metabolites with several interests. This study has been named OSMAC (One Strain Many Compounds) approach, which was applied in this study by using two fungi from Penicillium genus. Through culture medium modification with FeCl3 during growth of P. brasilianum, it was able to produce isoquinolinic alkaloid. On the other hand, the addition of CaCl2, another alkaloid belonging to tremogenic class was isolated and analysed by spectroscopic methods. When P. griseoroseum was cultivated with NH4Br, it was observed the production of a halogenated secondary metabolite, which was not reported before (brominated roquefortine C). Analyses by GC/MS led to detect three phenolic compounds with bromine atoms in its structure. The secondary metabolites of P. griseoroseum with no modification in the culuture medium were studied and three metabolites were isolated. Two of them belong to the tetronic acid class and the other one was isolated as a dimer from clavatol. Analyses by LC/ MS-MS were able to identify other tetronic acids in the ethyl acetate extract from P. griseoroseum. / Os microorganismos, por serem de organização relativamente simples, têm um poder de grande adaptação a variadas situações nutricionais, modificando seu metabolismo com a carência ou com o fornecimento de nutrientes ao meio de cultivo. Isso permite uma ampla flexibilidade em sua utilização, podendo-se induzir microorganismos a produzir determinadas substâncias de interesse. Esta abordagem pode levar a uma variedade de novos metabólitos secundários interessantes a partir de uma única cepa de um microorganismo. Este estudo vem sendo denominado de abordagem OSMAC (One Strain Many Compounds), a qual foi utilizada no presente trabalho com dois fungos do gênero Penicillium. Foi verificado que ao modificar o meio de cultura com FeCl3 durante o crescimento de P. brasilianum houve a produção de um alcalóide isoquinolínico, enquanto com a adição de CaCl2 houve a produção de outro alcalóide pertencente à classe dos alcalóides tremogênicos. Com relação ao fungo P. griseoroseum, foi isolado um metabólito halogenado (roquefortina C contendo um átomo de bromo) quando ao meio de cultura foi adicionado NH4Br. As substâncias isoladas foram analisadas por técnicas espectroscópicas. Também foram detectados por GC/MS mais três compostos fenólicos contendo átomos de bromo em sua estrutura. O metabolismo secundário de P. griseoroseum foi analisado e foram isolados policetídeos pertencentes à classe dos ácidos tetrônicos e um dímero do clavatol, inédito na literatura. Análises por LC/MS-MS detectaram outros ácidos tetrônicos presentes no extrato de acetato de etila.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-10-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:43Z : No. of bitstreams: 1 000848151.pdf: 1207361 bytes, checksum: 2b8b50bc45f9ec60b8daf94c7b8fb5dc (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste estudo foram avaliados os efeitos que a obesidade, induzida pelo consumo de sacarose, proporciona no tecido ósseo de ratos Wistar machos idosos, em duas situações opostas: em sedentarismo extremo e com realização de exercícios de força. O sedentarismo foi induzido pela suspensão pela cauda, simulando situações de pouca ou nenhuma carga nos membros pélvicos e os exercícios foram realizados em escada adaptada. Foram estudados 54 ratos machos com 16 meses de idade. Ao completarem 13 meses de idade, 27 ratos foram aleatoriamente selecionados para receberem dieta rica em sacarose durante 3 meses. Foram realizadas análises com o densitômetro DXA para a mensuração do conteúdo mineral ósseo, área e densidade mineral óssea nos fêmures e tíbias; Ensaios mecânicos de compressão da cabeça do fêmur, compressão da tíbia e compressão do osso cortical e análises imunoistoquímica com marcações para OCN e TRAP. Os resultados mostraram que os animais obesos que realizaram exercícios obtiveram melhora significativa no CMO dos fêmures, ao passo que os animais não obesos que realizaram exercícios obtiveram melhora no CMO dos fêmures e tíbias, DMOA dos fêmures e tíbias, e na força máxima admitida das tíbias. Os animais suspensos obtiveram uma perda significativa na qualidade óssea em todos os parâmetros analisados, com exceção da área. Baseado nos achados deste estudo, conclui-se que a falta de uso de um segmento ósseo, em Rattus novergicus albinus em idade avançada, tanto obesos quanto não obesos, leva a um rápido enfraquecimento de todos os parâmetros ósseos. Exercícios produzem moderado efeito positivo nos animais não obesos e baixo efeito positivo nos animais obesos. / In this study was evaluated the effects that obesity induced by sucrose intake provides in bone tissue of aged male Wistar rats in two opposite situations: in extreme inactivity, and performing strength exercises. Physical inactivity was induced by tail suspension, simulating situations of little or no load on the hindlimbs and the exercises were performed on adapted ladder. 54 male rats with 16 months old were studied. Upon completion 13 months old, 27 rats were randomly selected to receive sucrose-rich diet for 3 months. Analyzes were made: with densitometer to measure bone mineral content, bone mineral density and area in the femurs and tibias; Mechanical tests of compression of the femoral head, tibial compression and compression of the cortical bone and Immunohistochemical analysis with markings for OCN and TRAP. The results showed obese animals that performed exercises had significant improvement (p<0,05) in BMC of femurs, while non-obese animals that performed exercises showed improvement in BMC of femurs and tibias, ABMD of femurs and tibias, and the maximum allowed force of tibias. The suspended animals had a significant bone quality loss (p<0,05) in all parameters analyzed, except for the area. Based on our findings, we can conclude that lack of use of a bone segment in Rattus norvegicus albinus in old age, both obese and non-obese, leads to a rapid weakening of all bone parameters. Exercises provides moderate positive effect in non-obese animals and low positive effect in obese animals.

Introdução: Recém-nascidos prematuros hospitalizados costumam receber manuseio mínimo com objetivo de protegê-los de estresse. Como resultado desta inatividade pode ocorrer aumento da reabsorção óssea e desmineralização. Objetivo: Avaliar a formação óssea de recém-nascidos prematuros antes e após um protocolo de fisioterapia motora, por meio dos marcadores bioquímicos fosfatase alcalina óssea específica (FAO) e deoxipiridinolina urinária (DPID). Método: Ensaio clínico randomizado que incluiu 30 recém-nascidos com idades gestacionais de até 35 semanas e peso adequado para a idade gestacional randomizados em grupo controle (GC) e grupo fisioterapia (GF). No GF foi aplicado o protocolo de fisioterapia motora que consistiu de 15 minutos diários de movimentos passivos com compressões articulares suaves, cinco dias por semana. Diariamente foram obtidos dados sobre alimentação e peso corporal. FAO e DPID foram coletados na entrada e na alta hospitalar, em ambos os grupos. Foi realizado teste de ANCOVA para comparar as médias dos grupos. Resultados: No início do estudo a idade gestacional, a idade gestacional corrigida, o peso de nascimento e o gênero foram similares entre os grupos. Na oferta de nutrientes, tempo de uso de nutrição parenteral total e ventilação mecânica os grupos mostraram-se homogêneos. No GF o aumento nos níveis de FAO foi de 22,44 ± 3,49 U/L após a intervenção, ao passo que o GC apresentou aumento de 2,87 ± 3,99 U/L (p= 0,003). No GF houve redução nos níveis de DPID de 28,21 ± 11,05 nmol/mmol, enquanto no GC houve aumento de 49,95 ± 11,05 nmol/mmol (p<0,001). Conclusão: Uma proposta de intervenção fisioterapêutica aplicada por meio de exercícios passivos e por um curto período de tempo (15 minutos), diariamente ao longo de quatro semanas, associada com adequada alimentação, resulta em efeitos favoráveis ao metabolismo ósseo dos recém-nascidos prematuros. Os benefícios da prevenção e do tratamento da doença metabólica óssea da prematuridade, além de uma alimentação adequada, devem incluir estes exercícios passivos com suaves compressões articulares a fim de melhorar a qualidade óssea do prematuro. / Introduction: Preterm infants need minimal handling in order to protect them from stress, resulting in bone resorption and demineralization. Objetives: To evaluate bone formation in newborn preterm infants before and after a physical therapy protocol, by means of biochemical markers bone-specific alkaline phosphatase (BAP) and urinary deoxypyridinoline (DPD). Method: Randomized controlled clinical trials included 30 newborn preterm infants with gestational ages of 35 weeks or less and appropriate weight for gestational age were randomized into control group (CG) and physiotherapy group (PG). Physical therapy protocol consisted of 15 minutes of daily passive movements with gentle joint compression, five days a week. Daily data were obtained on feeding and body weight. BAP and DPD were collected before and after intervention in both groups. ANCOVA test was performed to compare the means of both groups. Results: At baseline, gestational age and corrected gestational age, birth weight and gender were similar between groups. The supply of nutrients, time of use of Total Parenteral Nutrition and mechanical ventilation were similar among groups. The increase of BAP levels for PG was 22.44 ± 3.49 U/L, whereas CG presented an increase of 2.87 ± 3.99 U/L (p= 0.003). There was a reduction on DPD levels for PG of 28.21 ± 11.05 nmol/mmol, and an increase of 49.95 ± 11.05 nmol/mmol (p< 0.001) in GC. Conclusion: Physiotherapy intervention results in beneficial effects to bone metabolism of preterm infants and should be included in the standard care of preterm infants.

Introdução: Beribéri é uma doença causada pela deficiência de tiamina (vitamina B1) que, apesar de facilmente tratável, pode levar a óbito. Há pelo menos setenta anos não se tinha referência de surtos de beribéri no Brasil. Objetivo: Descrever o perfil epidemiológico dos casos de beribéri e óbitos notificados no Estado do Maranhão. Método: Estudo descritivo-retrospectivo que analisou 1.207 casos notificados de beribéri e 40 óbitos ocorridos no Maranhão no período de 2006 a 2008. As informações foram obtidas do banco de dados da Vigilância Epidemiológica e fichas de notificação. Resultados: Os casos distribuíram-se em 434 (36,0%) em 2006, 551 (45,6%) em 2007 e 222 (18,4%) em 2008. Afetou dois terços das Unidades Regionais de Saúde e 26,3% dos municípios localizados nas regiões centro-oeste, noroeste e sudoeste do Estado. As notificações foram maiores nos meses de março a agosto, com pico em junho. O coeficiente de incidência no período foi de 4,32/10.000 hab. Homens foram mais acometidos (81,9%), com concentração de casos na faixa etária de 20-40 anos (57,0%). Predominou a ocorrência do beribéri seco (84,6%) e o tempo decorrido entre os primeiros sintomas e a notificação foi inferior a três meses para dois terços dos casos. A hospitalização ocorreu para 50% dos casos em 2006, 30% em 2007 e 15% em 2008. O consumo de álcool foi referido por 53,2% dos acometidos em 2006, com proporção discretamente menor nos anos subseqüentes, e o hábito de fumar por cerca de um terço dos acometidos. Sintomas mais comuns foram: diminuição da força, dormência e edema das pernas, dificuldade para caminhar e dor na panturrilha. Em relação à escolaridade, constatou-se que mais da metade (57,2%) tinha quatro anos ou menos de estudo, dois terços (66,2%) desempenhava atividade laboral pesada e 72,9% tinham renda familiar inferior a um salário mínimo. Foram registrados 40 óbitos (3,3% do total de casos notificados) apenas em 2006, concentrados no mês de junho (61,9%) e distribuídos em 21 municípios (9,7%). A taxa de mortalidade para o Estado foi de 0,45/10.000 hab. Praticamente a totalidade dos óbitos ocorreu no sexo masculino (97,5%), sendo 72,5% na faixa etária de 20-30 anos. Para dois terços, o tempo decorrido entre os primeiros sintomas e a notificação foi inferior a três meses e a hospitalização ocorreu para 42,5%. Hábito de consumir álcool e fumar foi elevado entre aqueles que foram a óbito, 75,0% e 66,7%, respectivamente. Conclusão: O estudo se destaca por abranger análise de todas as notificações de beribéri do estado do Maranhão. Constatou-se que os casos e óbitos apresentaram distribuição espacial e temporal relacionado à realidade do estado. A ausência de óbitos em 2007 e 2008 e redução dos casos em 2008 sugerem efeitos positivos das ações de enfretamento governamentais implementadas. Esta avaliação descritiva é importante para nortear as atividades e áreas a serem priorizadas no planejamento das ações de combate, tanto no nível central (federal, estadual e municipal), como para os profissionais da atenção básica e especializada, no direcionamento de suas práticas. Os resultados contribuem também para o delineamento de outras pesquisas que possam auxiliar no estudo da determinação do beribéri no Brasil. / Introduction: Beriberi is a disease caused by a deficiency of thiamine (vitamin B1) which, although easily treatable, may lead to death. There had been no register of beriberi outbreaks in Brazil for at least seventy years. Objective: To describe the epidemiological profile of reported beriberi cases in the State of Maranhão. Method: A descriptive retrospective study of 1,207 reported beriberi cases and 40 deaths in the State of Maranhão from 2006 to 2008. The information was obtained from the database of Epidemiological Surveillance and the reporting forms. Results: The cases were distributed in 434 (36.0%) in 2006, 551 (45.6%) in 2007 and 222 (18.4%) in 2008. It affected two thirds of the Regional Health Units and 26.3% of the municipalities located in the Central-Western, Northwestern and Southwestern of the State. The notifications were higher in the months from March to August, peaking in June. The incidence rate in the period was 4.32 / 10,000 inhabitants. Men were more affected (81.9%), with more concentration of cases in the age group 20-40 years (57.0%). Dry beriberi was predominant (84.6%) and the elapsed time between first symptoms and reporting was less than three months in two thirds of cases. Hospitalization occurred for 50.0% of cases in 2006, 30.0% in 2007 and 15.0% in 2008. Alcohol consumption was reported by 53.2% of patients in 2006 and slightly lower proportion in subsequent years, and smoking was reported for about one-third of patients. Main symptoms were loss of strength, numbness and swelling of the legs, difficulty in walking and calf pain. Regarding education it was found that more than half (57.2%) had four or fewer years of study, two thirds (66.2%) performed heavy labor activity and 72.9% had a family income lower than minimum wage. Forty deaths were recorded (3.3% of all reported cases) only in 2006, concentrated in the month of June (61.9%) and distributed in 21 municipalities (9.7%). The mortality rate for the State was 0.45 per 10,000 inhabitants. Almost all the deaths occurred in males (97.5%), and 72.5% aged 20-30 years. For two-thirds of the patients who died, the elapsed time between first symptoms and reporting was less than three months and hospitalization occurred in 42.5%. Alcohol consumption and smoking were higher among those who died, 75.0% and 66.7% respectively. Conclusion: This study stands out for including analysis of all reported beriberi cases in the State of Maranhão. It was found that cases and deaths showed spatial and temporal distribution related to the social reality of the State. The absence of deaths in 2007 and 2008 and reduction of cases in 2008 suggest positive effects of the implemented governmental actions. This descriptive evaluation is important to guide the activities and areas to be prioritized in the planning of actions at the central level (federal, state and municipal), as well as for guiding the practice of primary and specialized healthcare professionals. The results also contribute to the design of other research that may support the study of beriberi in Brazil.

Submitted by FERNANDA FERNANDES null (fernanda.fernandes.ata@gmail.com) on 2016-09-08T15:50:56Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FERNANDA FERNANDES.pdf: 3056607 bytes, checksum: d763bb262cd01286f3a01d7fb1bcbab4 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-09-09T13:14:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fernandes_f_me_araca.pdf: 3056607 bytes, checksum: d763bb262cd01286f3a01d7fb1bcbab4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T13:14:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernandes_f_me_araca.pdf: 3056607 bytes, checksum: d763bb262cd01286f3a01d7fb1bcbab4 (MD5) Previous issue date: 2016-08-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Este estudo teve como objetivo analisar e comparar a ação da ocitocina (OT) no metabolismo ósseo de ratas Wistar cíclicas (12 meses) e acíclicas (18 meses/período de periestropausa). Os animais foram distribuídos em quatro grupos: (1) animais com 12 meses que receberam injeção com veículo NaCl (Veh/12); (2) animais com 12 meses que receberam injeção de OT (Ot / 12); (3) animais com 18 meses que receberam injeção com veículo NaCl (Veh/18); (4) animais com 18 meses que receberam injeção de OT (Ot / 18). Cada grupo foi composto por 8 animais. Os animais receberam duas injeções intraperitoneais de NaCl (0,15 M – grupo controle) ou OT (134 ug / kg – grupo tratado) com 12 horas de intervalo. Força, microarquitetura e biomarcadores ósseos [fosfatase alcalina (FAL) e fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP)] foram analisados. Imunoistoquímica foi realizada para fator de transcrição relacionado com o Runt 2 (RUNX2), osterix (OSX), osteocalcina (OCN), osteopontina (OPN), proteína óssea morfogenética 2 e 4 (BMP-2/4), periostina (PER), esclerostina (ESC) e TRAP. Os animais que receberam OT demonstraram melhora significante na dosagem plasmática: aumento na FAL dos animais de 12 meses (p < 0,0001) e 18 meses (p = 0,0138); diminuição na TRAP dos animais de Ot / 12 (p = 0,0465) e Ot / 18 (p = 0,0045). Houve melhora nos parâmetros biomecânicos: força máxima (N) do grupo Ot / 18 (p = 0,0003); rigidez óssea (x103N/mm) do grupo Ot / 12 (p = 0,0223) e Ot / 18 (p = 0,0145); microarquitetura óssea cortical do grupo Ot / 18 para Ct.Ar (mm2 ) (p = 0,0416) e Ct.Po (%) (p = 0,0102); microarquitetura óssea trabecular para Tb.N (1/mm) (p = 0,0016) e Tb.Sp (p = 0,00010); todos os grupos foram comparados ao seus respectivos controles (Veh/12; Veh/18). Em resumo, os resultados demonstraram que a administração de OT foi eficaz para prevenir a perda de massa óssea em ratas Wistar velhas com hipoestrogenismo, reforçando este agente anabólico como forte alternativa terapêutica para prevenção e tratamento da osteoporose (OP), reduzindo os índices da doença e fraturas osteoporóticas. / This study aimed to analyze and compare the acting of oxytocin (OT) on bone metabolism of cyclic (12 months) and acyclic Wistar rats (18 months/peri-estropause period). Animals were allocated to four groups: (1) animals with 12 months that received vehicle injection NaCl (Veh/12); (2) animals with 12 months that received OT injection (Ot / 12); (3) animals with 18 months that received vehicle (Veh/18) and (4) animals with 18 months that received OT injection (Ot / 18). Eight animals composed each group. The animals received two intraperitoneal injections of NaCl (0.15 M - control group) or OT (134 ug / kg - treated groups) with 12 hours apart. Bone strength, microarchitecture, and biomarkers [alkaline phosphatase (ALP) and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP)] were assessed. Immunohistochemistry was performed for runt-related transcription factor 2 (RUNX2), osterix (OSX), osteocalcin (OCN), osteopontin (OPN), bone morphogenetic protein 2 and 4 (BMP- 2/4), periostin (PER), sclerostin (ESC) and TRAP. Animals that received OT showed significant improvements at plasma assay: increase in the ALP from the animals with 12 months (p < 0.0001) and 18 months (p = 0.0138); decrease in the TRAP from the Ot / 12 (p = 0.0465) and Ot / 18 (p = 0.0045). There was improvements at biomechanical parameters: maximum load (N) from the Ot / 18 (p = 0.0003); bone stiffness (x103N/mm) from the Ot / 12 (p = 0.0223) and Ot / 18 (p = 0.0145); cortical bone microarchitecture from the Ot / 18 to Ct.Ar (mm2 ) (p = 0.0416) and Ct.Po (%) (p = 0.0102); trabecular bone microarchitecture to Tb.N (1/mm) (p = 0.0016) and Tb.Sp. (p = 0.00010); all groups compared to its respective controls (Veh/12; Veh/18). In summary, the results showed the OT administration was effective to prevent the bone loss in old Wistar rats with hypoestrogenism, reforcing this anabolic agent as powerful therapeutic alternative to prevention and treatment for osteoporosis (OP), to reduce the rates of disease and osteoporotic fractures. / CNPq: 133834/2014-0

Sarcosina é um N-metil-aminoácido derivado da glicina e a sua elevação em tecidos e fluidos fisiológicos de pacientes com sarcosinemia pode refletir na quantidade de unidades de um carbono. A sarcosinemia é uma condição metabólica rara, de natureza hereditária, associada a um possível retardo mental. Primeiramente, desenvolvemos um modelo agudo induzido quimicamente de sarcosinemia em ratos Wistar. Os ratos de 7, 14 e 21 dias de idade pós-parto receberam sarcosina intraperitonealmente em doses de 0,5 mol/g de peso corporal três vezes por dia em intervalos de 3 h. Os animais do grupo controle receberam solução salina (NaCl a 0,85 g%) no mesmo volume (10 l/kg de peso corporal). Eles foram mortos após 0,5, 1, 2, 3 ou 6 horas depois da última injeção e o cérebro e o sangue foram coletados para a dosagem da sarcosina. Os resultados mostraram que as concentrações plasmáticas e cerebrais de sarcosina atingiram níveis de três a quatro vezes mais elevados do que os níveis normais. Além disso, esses níveis diminuíram ao longo do tempo, atingindo a normalidade após 6 horas. Em um segundo momento, investigamos a administração aguda da sarcosina e/ou creatina mais piruvato sobre alguns parâmetros de estresse oxidativo e metabolismo energético em homogeneizados de córtex cerebral de ratos Wistar com 21 dias de idade. A administração aguda de sarcosina induziu o estresse oxidativo e diminuiu as atividades da adenilato cinase (AK), gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH), atividade do complexo IV e CK citosólica e mitocondrial. Por outro lado, a atividade da succinato desidrogenase (SDH) foi aumentada em córtex cerebral de ratos. Além disso, o conteúdo total de sulfidrilas foi significativamente reduzido, enquanto a oxidação do DCFH, níveis de TBARS e as atividades da superóxido dismutase (SOD) e glutationa-peroxidase (GPx) foram significativamente aumentadas por essa administração. A co-administração de creatina mais piruvato foi eficaz na prevenção de alterações provocadas pela administração de sarcosina sobre o estresse oxidativo e as enzimas da rede de fosforiltransferência. Esses resultados indicam que a administração aguda de sarcosina pode estimular o estresse oxidativo e alterar o metabolismo energético em córtex cerebral de ratos. No caso de esses efeitos também ocorrerem em humanos, eles podem contribuir, juntamente com outros mecanismos, para a disfunção neurológica de sarcosinemia sendo que a administração de creatina mais piruvato poderia ser benéfica para os pacientes. / Sarcosine is an N-methyl derivative of the amino acid glycine, and its elevation in tissues and physiological fluids of patients with sarcosinemia could reflect a deficient pool size of activated 1-carbon units. Sarcosinemia is a rare inherited metabolic condition associated with mental retardation. Firstly, we developed an acute chemically induced model of sarcosinemia in Wistar rats. Wistar rats of 7, 14 and 21 postpartum days received sarcosine intraperitoneally in doses of 0.5 mol/g of body weight three time a day at intervals of 3 hours. Control animals received saline solution (NaCl 0.85 g%) in the same volume (10 ml/kg of body weight). The animals were killed after 0.5, 1, 2, 3 or 6 h after the last injection and the brain and the blood were collected for sarcosine measurement. The results showed that plasma and brain sarcosine concentrations achieved levels three to four times higher than the normal levels and decreased in a time-dependent way, achieving normal levels after 6 hours. In a second moment, we investigated the acute effect of sarcosine and/or creatine plus pyruvate on some parameters of oxidative stress and energy metabolism in cerebral cortex homogenates of 21-day-old Wistar rats. Acute administration of sarcosine induced oxidative stress and diminished the activities of adenylate kinase, GAPDH, complex IV and mitochondrial and cytosolic creatine kinase. On the other hand, succinate dehydrogenase activity was enhanced in cerebral cortex of rats. Moreover, total sulfhydryls content was significantly diminished, while DCFH oxidation, TBARS content, and activities of SOD and GPx were significantly enhanced by acute administration of sarcosine. Co-administration of creatine plus pyruvate was effective in the prevention of alterations provoked by sarcosine administration on the oxidative stress and the enzymes of phosphoryltransfer network. These results indicate that acute administration of sarcosine may stimulate oxidative stress and alter the energy metabolism in cerebral cortex of rats. In case these effects also occur in humans, they may contribute, along with other mechanisms, to the neurological dysfunction of sarcosinemia. Creatine and pyruvate adminstration could be beneficial to the patients.

Análise de Redes Metabólicas foi aplicada à cepa de Saccharomyces cerevisiae CEN.PK113-7D, e a alguns mutantes interrompidos em genes que codificam para proteínas regulatórias envolvidas no fenômeno de repressão por glicose. Todas as cepas foram cultivadas em aerobiose, em meio mínimo contendo [1-13C]glicose como substrato limitante. As células eram recolhidas em situação de crescimento balanceado e submetidas à hidrólise, seguida de derivação e posterior injeção da amostra resultante num cromatógrafo gasoso acoplado a um espectrômetro de massa, para análise da marcação em alguns fragmentos de metabólitos intracelulares. Estes dados serviram como base para a identificação da atividade de algumas vias metabólicas no metabolismo central de S. cerevisiae. Além disto, utilizando-os juntamente com um modelo estequiométrico, foi possível obter uma estimativa para os fluxos no metabolismo central na cepa referência e nos mutantes estudados. Num primeiro momento, a metodologia foi validada para cultivos contínuos e descontínuos. Calculou-se um desvio padrão para a medida da marcação em cada fragmento de metabólito detectado pela metodologia empregada. Na cepa referência, observou-se que o ciclo de Krebs opera de forma cíclica em células que respiram e de forma não cíclica em células que apresentam metabolismo respiratório-fermentativo. Verificou-se que uma maior parte da glicose consumida é desviada para a via das pentoses fosfato no primeiro caso, em relação ao segundo. Foram encontradas evidências para a biossíntese de glicina através da enzima treonina aldolase e para a atividade da enzima málica. A ausência das proteínas Mig1 e Mig2 não altera os padrões de crescimento, produção de etanol e de marcação em metabólitos intracelulares de S. cerevisiae. Já a ausência de Hxk2, Reg1 ou Grr1 provoca alívio na repressão por glicose, observado pelo aumento das atividades respiratórias. / Metabolic Network Analysis was applied to the reference strain CEN.PK113-7D of Saccharomyces cerevisiae, as well as to some mutants disrupted in genes which code for regulatory proteins involved in the glucose repression cascade. All strains were cultivated under aerobic conditions, using minimal medium with [1-13C]glucose as the limiting substrate. Cells were harvested under balanced growth conditions and submitted to hydrolysis, derivatization and injection of the sample into a gas chromatograph coupled to a mass spectrometer for analysis of the labeling pattern in some fragments of intracellular metabolites. These data were used for identifying the activity of some pathways in the central metabolism of S. cerevisiae. Furthermore, using the data together with a stoichiometric model, it was possible to estimate the fluxes in the central metabolism of the reference strain and in the mutant strains. First, the methodology was validated for batch and continuous cultivations. Standard deviations were calculated for the measurement of the fractional labeling in each of the detected fragments. In the reference strain, it was observed that the Krebs cycle operates in a cyclic manner in respiratory cells, whereas it operates in a non cyclic manner under respiro-fermentative metabolism. It was also seen that a greater part of the glucose consumed by the cells enters the pentose phosphate pathway in the former than in the later case. Evidence for the activity of the threonine aldolase and the malic enzyme catalyzed reactions was also found. The absence of the Mig1 and Mig2 proteins does not alter the growth, ethanol formation and labeling pattern of intracellular metabolites in S. cerevisiae. In contrast, the absence of Hxk2, Reg1, or Grr1 provoques a relief in glucose repression, which was observed by an increased respiratory activity.

Introdução: Recém-nascidos prematuros hospitalizados costumam receber manuseio mínimo com objetivo de protegê-los de estresse. Como resultado desta inatividade pode ocorrer aumento da reabsorção óssea e desmineralização. Objetivo: Avaliar a formação óssea de recém-nascidos prematuros antes e após um protocolo de fisioterapia motora, por meio dos marcadores bioquímicos fosfatase alcalina óssea específica (FAO) e deoxipiridinolina urinária (DPID). Método: Ensaio clínico randomizado que incluiu 30 recém-nascidos com idades gestacionais de até 35 semanas e peso adequado para a idade gestacional randomizados em grupo controle (GC) e grupo fisioterapia (GF). No GF foi aplicado o protocolo de fisioterapia motora que consistiu de 15 minutos diários de movimentos passivos com compressões articulares suaves, cinco dias por semana. Diariamente foram obtidos dados sobre alimentação e peso corporal. FAO e DPID foram coletados na entrada e na alta hospitalar, em ambos os grupos. Foi realizado teste de ANCOVA para comparar as médias dos grupos. Resultados: No início do estudo a idade gestacional, a idade gestacional corrigida, o peso de nascimento e o gênero foram similares entre os grupos. Na oferta de nutrientes, tempo de uso de nutrição parenteral total e ventilação mecânica os grupos mostraram-se homogêneos. No GF o aumento nos níveis de FAO foi de 22,44 ± 3,49 U/L após a intervenção, ao passo que o GC apresentou aumento de 2,87 ± 3,99 U/L (p= 0,003). No GF houve redução nos níveis de DPID de 28,21 ± 11,05 nmol/mmol, enquanto no GC houve aumento de 49,95 ± 11,05 nmol/mmol (p<0,001). Conclusão: Uma proposta de intervenção fisioterapêutica aplicada por meio de exercícios passivos e por um curto período de tempo (15 minutos), diariamente ao longo de quatro semanas, associada com adequada alimentação, resulta em efeitos favoráveis ao metabolismo ósseo dos recém-nascidos prematuros. Os benefícios da prevenção e do tratamento da doença metabólica óssea da prematuridade, além de uma alimentação adequada, devem incluir estes exercícios passivos com suaves compressões articulares a fim de melhorar a qualidade óssea do prematuro. / Introduction: Preterm infants need minimal handling in order to protect them from stress, resulting in bone resorption and demineralization. Objetives: To evaluate bone formation in newborn preterm infants before and after a physical therapy protocol, by means of biochemical markers bone-specific alkaline phosphatase (BAP) and urinary deoxypyridinoline (DPD). Method: Randomized controlled clinical trials included 30 newborn preterm infants with gestational ages of 35 weeks or less and appropriate weight for gestational age were randomized into control group (CG) and physiotherapy group (PG). Physical therapy protocol consisted of 15 minutes of daily passive movements with gentle joint compression, five days a week. Daily data were obtained on feeding and body weight. BAP and DPD were collected before and after intervention in both groups. ANCOVA test was performed to compare the means of both groups. Results: At baseline, gestational age and corrected gestational age, birth weight and gender were similar between groups. The supply of nutrients, time of use of Total Parenteral Nutrition and mechanical ventilation were similar among groups. The increase of BAP levels for PG was 22.44 ± 3.49 U/L, whereas CG presented an increase of 2.87 ± 3.99 U/L (p= 0.003). There was a reduction on DPD levels for PG of 28.21 ± 11.05 nmol/mmol, and an increase of 49.95 ± 11.05 nmol/mmol (p< 0.001) in GC. Conclusion: Physiotherapy intervention results in beneficial effects to bone metabolism of preterm infants and should be included in the standard care of preterm infants.

Orientador: Eduardo Galembeck / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T00:57:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brum_ItarajuJuniorBaracuhy_M.pdf: 1893501 bytes, checksum: 59afb345a47fb8e963452a41b2327f1c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A área de proteômica visa estudar um conjunto completo de proteínas expressas por um organismo ou tecido numa dada situação, através da identificação e quantificação. Apesar de limitações nas técnicas disponíveis, vem se aumentando o volume de informações oriundos desta área, situação que exige o emprego de ferramentas computacionais para permitir o uso eficiente de dados disponíveis, além de buscar-se novas formas de análise destes. Este projeto visa o desenvolvimento de ferramentas de bioinformática para aplicação em proteômica. Estas ferramentas abrangem as seguintes aplicações: Cálculo Teórico de Ponto Isoelétrico e Peso Molecular de seqüências de aminoácidos, eletroforese-bidimensional teórica, digestão teórica e simulação de eletroforese e identificação de peptídeos, ferramenta para análise de Vias Metabólicas a partir de dados de proteômica / Abstract: The proteomics field aims to study sets of proteins expressed in a cell or tissue, according to a specific situation, through protein identification and quantification. Though technical limitations do exist, the amount of information derived from this field increases each day. And so, there is a need for employing computational tools that enable efficient analysis of data. This project aims developing bioinformatics tools for application in proteomics. The tools here presented comprehend the following tasks: theoretical computation of isoeletric point and molecular weight of aminoacid sequences, theoretical two-dimensional electrophoresis, theoretical triptic digestion and electrophoresis simulation for peptide identification, and analysis of metabolic pathways with proteomics data / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular