Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1124939 bytes, checksum: fc1e814adfedce17cc2a8ab97331b5d8 (MD5) Previous issue date: 2014-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / There is a great interest in the selection of yeasts able to convert xylose, the main pentose released from the pretreatment of lignocellulosic biomass, into metabolites of industrial interest, such as fuel, food ingredients, drugs and antimicrobial drugs. Therefore, five xylose fermenting yeasts were selected from the culture collection of the Laboratory of Physiology of Microorganisms, Department of Microbiology, Universidade Federal de Viçosa. Among them, Meyerozyma guilliermondii UFV-1 was able to completely consume xylose available in the medium and convert it into ethanol and other metabolites of industrial relevance. Its fermentation potential was evaluated at different oxygen concentrations. Ethanol production was higher in hypoxia where the concentration of dissolved oxygen (DO) in the culture medium was 10% (1.98 g L -1). The higher production of xylitol, 5.34 g L-1, was also obtained in hypoxia. The effect of ethanol and acetic acid, furfural and hydroxymethyl furfural, inhibitors generated during the acid pre-treatment, on the growth of M. guilliermondii UFV-1 was evaluated. The yeast was able to grow in ethanol concentration of 13.5 g L-1 corresponding to the maximum amount that can be produced from the xylose released from hemicellulose. Furthermore, M. guilliermondii UFV-1 grew in concentrations of acetic acid, furfural and hydroxymethyl furfural which are normally found in hemicellulose hydrolysates. Analysis of M. guilliermondii UFV-1 exometaboloma revealed no difference in the metabolites profile produced in the two growth conditions evaluated: low specific growth rate and near maximum specific growth rate. Five metabolites of biotechnological interest were identified: valeric, caproic and butyric acids, used as antifungal; glicofuranoside used by the pharmaceutical industry in the control of diabetes; and malic acid, compound used in food industry as acidulant and flavor enhancer. Therefore, the identification of these extracellular metabolites demonstrates the biotechnology potential of this yeast not only to produce ethanol and xylitol, but other chemicals of industrial interest. / Existe grande interesse na seleção de leveduras que possam converter xilose, principal pentose liberada do pré-tratamento de biomassas lignocelulósicas, em metabólitos de interesse industrial, tais como combustíveis, ingredientes de alimentos, drogas antimicrobianas e fármacos. Portanto, cinco leveduras fermentadoras de xilose foram selecionadas a partir da coleção de culturas do Laboratório de Fisiologia de Micro-organismos do Departamento de Microbiologia da Universidade Federal de Viçosa. Dentre essas, destacou-se a levedura Meyerozyma guilliermondii UFV-1, capaz de consumir totalmente a xilose disponível no meio e convertê-la em etanol e outros metabólitos de interesse industrial. O potencial fermentativo dessa levedura foi avaliado em diferentes concentrações de oxigênio. A produção de etanol foi maior no cultivo em hipoxia cuja concentração de oxigênio dissolvido (OD) no meio de cultivo foi de 10% (1,98 g L-1). A maior produção de xilitol, 5,34 g L-1, foi obtida em hipoxia em Erlenmeyer. Verificou-se o efeito do etanol e dos inibidores ácido acético, furfural e hidroximetilfurfural, formados no pré-tratamento ácido, no crescimento de M. guilliermondii UFV-1. A levedura foi capaz de crescer em concentrações de etanol de 13,5 g L-1 que correspondem aos valores máximos que podem ser produzidos a partir da xilose liberada da hemicelulose. Além disso, M. guilliermondii UFV-1 cresceu nas concentrações de ácido acético, furfural e hidroximetilfurfural normalmente encontradas em hidrolisados hemicelulósicos. A análise do exometaboloma de M. guilliermondii UFV-1 revelou que não houve diferença no perfil de metabólitos produzidos nas duas condições de crescimento avaliadas: baixa velocidade específica de crescimento e velocidade específica de crescimento próxima da máxima. Foram identificados 5 metabólitos de interesse biotecnológico: os ácidos valérico, capróico e butírico, usados como antifúngicos; o glicofuranosídeo, utilizado pela indústria farmacêutica no controle de diabetes; e o ácido málico, composto utilizado na indústria alimentícia como acidulante e realçador de sabor. Portanto, a identificação desses metabólitos extracelulares demonstra o potencial biotecnológico dessa levedura não apenas para a produção de etanol e xilitol, mas de outros produtos químicos de interesse industrial.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01 - capa_abstract.pdf: 368389 bytes, checksum: 8d0c846bf65c6ee5345758d74d1a07f8 (MD5) Previous issue date: 2007-04-04 / This work aimed at evaluating the role of the ectomycorrhizal fungi in the uptake and storage of calcium in Eucalyptus sp., grown for 2.5 years, in a mountainous area in the region of Viçosa, MG. Abundant accumulation of oxalate crystals as grains or druses was observed in 73.7 % of the ectomycorrhizas and fine lateral roots studied. The conspicuous presence of CaOx was observed in 56.2% of the ectomycorrhizae and in 17.5% of the nonmycorrhizal lateral fine roots, evidencing the role of the ectomycorrhizal association in the storage of calcium in the roots of Eucalyptus sp. The highest mycorrhizal colonization was observed in the Slope area that presented limited availability of nutrients and high Al saturation. Oxalic acid concentrations decreased in the following order, in mg Kg -1: leaves, 162.3 > ectomycorrhizas, 118.2 > non-mycorrhizal fine lateral roots, 116.0. Oxalic acid concentrations in the soil were higher in ectomycorhizospheric soil with 91.8 mg Kg-1, followed by the rhizospheric soil, with 67.2 mg Kg-1, and, finally, by the non-rhizospheric soil with 38 mg Kg-1. In the ectomycorrhizas collected in the Top area, the higher concentrations of oxalic acid and P, 173.3 mg Kg-1 and 6.35 mg Kg-1, respectively, probably resulted from nutrient solubilization by the ectomycorrhizal fungi associated with the host plants. The larger fraction of the litter layer corresponded to that showing the most advanced level of decomposition, being composed of dark fragments of leaves and branches in direct contact with the soil. Generally, nutrient content in the forest litter, in ka ha-1, decreased as follows: Ca (32.4) > Mg (5.4) > K (4.2) > P (1.7). Ca content in the litter and its low concentration in the soil shows the importance of the litter layer as a Ca reservoir for eucalypts. The highest concentrations and contents of P in the litter were verified in the Top position, however, the activity of acid phosphatases of ectomycorrhizas did not differ among the topographical positions evaluated. Fruit bodies of Laccaria, Pisolithus, Scleroderma, and of an unidentified fungus were observed in the area under study. The examination of the most decomposed litter layer and of the interface soil-litter showed an intense colonization by eucalypt roots, with eight distinct ectomycorrhizal morphotypes, hyphae, rhizomorphs, and basidiomes This work demonstrate that ectomycorrhizal fungi participate in the cycling of the eucalypt forest litter and in the storage of Ca when associated to eucalypt roots. / Este trabalho teve como objetivo determinar o papel dos fungos ectomicorrízicos na absorção e armazenamento de Ca por plantas de Eucalyptus sp., cultivado por 2,5 anos em área com topografia típica em meia laranja de vertente côncavo-convexa da região de Viçosa, MG. Em 73,7 % das ectomicorrizas e raízes observadas, observou-se abundante acúmulo de cristais de oxalato de cálcio (CaOx) nas células do córtex radicular, na forma de drusas e grânulos. A presença conspícua de CaOx foi observada em 56,2% das ectomicorrizas e em 17,5% das raízes laterais finas não-colonizadas, evidenciando o papel das micorrízas no acúmulo de cálcio em Eucalyptus sp. As maiores percentagens de colonização micorrízica foram observadas na área de Encosta, que apresenta limitada disponibilidade de nutrientes e alta saturação por Al. As concentrações de ácidos orgânicos foram quantificadas em diversas frações, a saber, em mg kg-1: folhas (162,3) > ectomicorrizas (118,2) > raízes laterais finas não-colonizadas (116). Os teores de ácido oxálico foram maiores no solo ectomicorrizosférico (91,8 mg kg-1), seguido pelo solo rizosférico (67,2 mg kg-1) e, finalmente, pelo não-rizosférico (38 mg kg-1). Nas ectomicorrizas da área Topo, os teores mais elevados (p<0,05) de ácido oxálico e P, 173,3 e 6,35 mg kg-1, respectivamente, possivelmente resultaram da solubilização de nutrientes pelos fungos ectomicorrízicos associados. A fração que mais contribuiu para a massa de serapilheira foi a em avançado grau de decomposição, sendo constituída de fragmentos de folhas e galhos escuros em contato com o solo. Em geral, a ordem de acúmulo de nutrientes na serapilheira correspondeu a, em kg ha-1: Ca (32,4) > Mg (5,4) > K (4,2) > P (1,7). O conteúdo de Ca na serapilheira e a baixa concentração do elemento no solo revelam a importância da manta orgânica como reservatório de Ca para o eucalipto. A maior concentração e conteúdo de P na serapilheira foram verificados na posição Topo, no entanto, a atividade das fosfatases ácidas nas ectomicorrizas não diferiu entre as amostras das posições topográficas avaliadas. Observaram-se basidiocarpos de Laccaria, Pisolithus, Scleroderma e de fungo ectomicorrízico não-identificado. A existência de densa camada de raízes de eucalipto na fração mais decomposta da serapilheira e na interface desta com o solo revelou intensa colonização da manta orgânica por raízes de eucalipto, com a presença de oito morfotipos distintos de ectomicorrizas, além de hifas, rizomorfos e basidiocarpos. O trabalho demonstra que os fungos ectomicorrízicos participam na ciclagem da serapilheira e no armazenamento de cálcio quando associados a raízes de eucalipto.

nÃo hà / Improve technologies that seek to reduce the use of phosphate fertilizers is essential, considering that most Brazilian soils have low availability of phosphorus (P), ultimately limit the growth of plants and generating a high dependence of phosphate fertilizers. The use of microorganisms as the arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) which are associated with the majority of plant species is now a viable alternative, mainly by beneficial effects of these fungi for plant growth such as increased absorption of nutrient, especially, P. Association between AMF and fruit or annual plants can enhance productivity of these species, in addition to reducing the consumption of phosphate fertilizers. So to evaluate the morphological pattern of colonization by AMF, two studies were conducted, the first in areas of family farmers who grow acerola and reside in Maranguape-Ce. The second study was conducted in a greenhouse and in Soil Microbiology Laboratory of the Department of Soil Science of the University Federal of CearÃ, with cowpea plants and corn fertilized with increasing doses of P. In the first survey, Paris morphology, the presence of intracellular vesicles and hyphae was observed in all areas collected. With the extraction of soil AMF spores, the predominance of genres, Glomus sp. and Scutelospora sp, was found in the four areas where soil samples were collected. In research conducted in the greenhouse, it was observed that the growth of the cowpea and corn was favored by phosphorus fertilization to dose 150 mg P kg-1 soil and 120 mg P kg-1 soil, respectively. The mycorrhizal colonization was reduced by higher doses of P added to the soil and the morphology of mycorrhizal colonization intermediate was observed in both species, not occurring influence of phosphorus fertilization on their morphology. In addition, they identified up to fifteen morphotypes especeis AMF in the soil cultivated with cowpea or corn. / Aprimorar tecnologias que buscam a reduÃÃo do uso de fertilizantes fosfatados à essencial, considerando que grande parte dos solos brasileiros possui baixa disponibilidade de fÃsforo (P), acabando por limitar o crescimento das plantas e gerando uma dependÃncia elevada de adubos fosfatados. O uso de micro-organismos, como os fungos micorrÃzicos arbusculares (FMA), que se associam com a maioria das espÃcies vegetais à uma alternativa viÃvel principalmente pelos efeitos benÃficos desses fungos para o crescimento das plantas, como maior absorÃÃo de nutrientes, notadamente o P. A associaÃÃo entre FMA e plantas frutÃferas ou anuais poderà fomentar a produtividade dessas espÃcies, alÃm de reduzir o consumo de adubos fosfatados. Com o intuito de avaliar se diferentes manejos impostos ao sistema solo planta podem alterar o padrÃo de colonizaÃÃo micorrÃzica arbuscular em plantas cultivadas foram realizados dois estudos, o primeiro em Ãreas de agricultores familiares que cultivam acerola e residem em Maranguape-Ce. O segundo estudo, foi conduzido em casa de vegetaÃÃo e no LaboratÃrio de Microbiologia do Solo pertencente ao Departamento de CiÃncias do Solo da Universidade Federal do CearÃ, com plantas de feijÃo de corda e milho adubadas com doses crescentes de P. Na primeira pesquisa, o padrÃo morfolÃgico Paris, com a presenÃa de hifas intracelulares e vesÃculas, foi observado em todas as Ãreas coletadas. Com a extraÃÃo de esporos de FMA do solo, a predominÃncia dos gÃneros, Glomus sp. e Scutelospora sp, foi constatada nas quatro Ãreas em que foram coletadas amostras de solo. Na pesquisa conduzida em casa de vegetaÃÃo, observou-se que o crescimento do feijÃo de corda e do milho foi favorecido pela adubaÃÃo fosfatada atà a dose 150 mg P kg-1 solo e 120 mg P kg-1 solo, respectivamente. A colonizaÃÃo micorrÃzica foi diminuÃda pelas maiores doses de P adicionados ao solo e o padrÃo morfolÃgico de colonizaÃÃo micorrÃzica intermediÃrio foi observado nas duas espÃcies vegetais, nÃo ocorrendo influÃncia da adubaÃÃo fosfatada sobre sua morfologia. AlÃm disso, foram identificados atà quinze morfotipos de espÃcies de FMA no solo cultivado com feijÃo de corda ou milho.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01 - capa_abstract.pdf: 189517 bytes, checksum: a57d5759fa8732c8db49cecf7b75a4da (MD5) Previous issue date: 2009-02-17 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Selenium (Se) is one of the essential nutrient for several physiological functions that include activity of the proteins catalytic centre, increase of the immune system functions and reduces the cancer risk, besides being the essential component of the antioxidative enzyme, glutatione peroxydase (GPx). In areas where the soil present low Se concentration, such as the Brazilian soils, the agricultural products also presents low concentrations of this element and this deficiency causes serious risks for the human health. Besides the plants, mushrooms have the capacity to accumulate great quantities of Se, and, this characteristic associated to the elevated nutritional value, being a source of proteins, carbohydrates vitamin B1, B2 and B3, calcium and iron, makes of mushrooms aliments that alleviate various nutritional deficiencies. The bioavailability is defined as the proportion of ingested nutrient that is used for normal physiological functions or stored, so, it must be considered in the nutritional food evaluation. The objective of this work was to enrich and determine the bioavailability of Se in Pleurotus ostreatus mushroom. The mushrooms were produced in coffee rusk as substrate base enriched with different concentration of Se 3,2; 6,4; 12,8; 25,4; 51; 76,4; 102 mg kg-1), using sodium setenite. Biological efficiency (BE) and Se, Ca, Cd, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Na, N, P, Pb and Zn concentration were evaluated, in three consecutive flushing, in the same substrate. For Se bioavailability, 64 rats (Wistar) were fed using P. ostreatus mushrooms enriched or not with Se, and as positive control sodium selenite was used. BE of the mushrooms was affected by both flushing number and Se concentration in the substrate. The highest value of BE among 13,06 to 37,56% were observed at the first flushing, white BE among 2,47 to 11,09% were obtained at third flushing which period varied from 43 to 79 days after inoculation. Mushrooms groduced in the substrate with 3.2 mg kg -1 present about 55 &#956;g g-1 of Se in the dry matter. The maximum Se concentration absorbed by the fungus was when it was growth in the substrate with 0.64 mmol kg-1 of Se, although the best use of added Se occurred with 12,8 mg kg-1 where 34% of added Se was present in the mushroom. Biological assay showed that Se present in the mushroom was able to cross the intestinal barrier reaching the blood circulation of the animals. The rats using mushroom Se enriched mushroom presents 700 &#956;g L- 1 of Se in the blood plasma, while ones receiving the same quantity of Se as sodium selenite present about 500 &#956;g L-1 (P<0,05). The plasma GPx enzyme activity was about 2000 nmol min-1 mL-1 in rats fed with all diets (P>0,05). The blood plasma protein showed no difference among diet in relation to chromatographic profiles. The peptide in high concentration was detected at 24 min presenting molecular weight estimated to 7,7 kDa. However, Se concentration in this peptide was 2.76, 6. 90 and 5.27 &#956;g L-1 in animals fed, respectively, without Se, Se enriched mushroom and sodium selenite. Based on these results, it can be concluded that: mushroom production was stimulated by low concentration of Se added to the substrate; BE in the first flushing is higher than second and third; concentration of 12,8 mg kg-1 of Se in the substrate resulted in the best use of added Se; Se in the mushroom was better absorbed bay the animals than when as sodium selenate. Selenium present in the mushroom shows high bioavailability, since Se was detected not only in the blood plasma but also into the seric peptides; Over all, P. ostreatus shows an excellent food source of Se. / O selênio (Se) é um nutriente essencial envolvido em diversas funções fisiológicas que incluem atividade no centro catalítico de proteínas, aumento de funções do sistema imune e redução do risco de câncer, além de ser o componente essencial da enzima antioxidativa glutationa peroxidase (GPx). Em áreas onde os solos têm baixa disponibilidade de Se, como os solos brasileiros, os produtos agrícolas também apresentam baixas concentrações desse elemento e essa deficiência causa graves riscos para a saúde humana. Além das plantas, os cogumelos têm a capacidade de acumular grandes quantidades de Se, e, essa característica associada ao elevado valor nutricional, por ser fonte de proteínas carboidratos vitaminas B1, B2 e B3, cálcio e ferro, faz dos cogumelos alimentos para suprir carências nutricionais diversas. A biodisponibilidade, definida como a proporção de nutrientes ingeridos que é utilizada para funções fisiológicas normais ou armazenados, deve ser considerada na avaliação nutricional de um alimento. O objetivo deste trabalho foi enriquecer e determinar a biodisponibilidade de Se nos cogumelos Pleurotus ostreatus. Os cogumelos foram produzidos em substrato à base de casca de café enriquecido com diferentes concentrações de Se (0; 3,2; 6,4; 12,8; 25.4; 51; 76,4; 102 mg kg-1), na forma de selenito de sódio. Determinou-se a eficiência biológica (EB), as concentrações de Se e também de Ca. Cd, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Na, N, P, Pb, Zn, em três colheitas consecutivas do cogumelo em um mesmo substrato Para avaliar a biodisponibilidade do Se 64 ratos da linhagem Wistar, receberam dietas contendo cogumelos P. ostreatus enriquecidos ou não com Se. A EB de P. ostreatus foi afetada tanto pelo número de colheitas quanto pelas doses de Se adicionadas ao substrato. Os maiores valores de EB, situados entre 13,06 e 37,56 foram constatados na primeira colheita. Valores de EB entre 2,47 e 11,09 foram obtidos na terceira colheita, após um período que variou de 43 a 79 dias. Na concentração de 3,2 mg kg-1 de Se os cogumelos apresentaram cerca de 55 ug g-1 de Se na massa seca. A quantidade de Se máxima absorvida pelo fungo ocorreu quando foi adicionada ao substrato 51 mg kg-1 de Se, embora, o melhor aproveitamento do Se tenha ocorrido na concentração de 0,16 mmol kg-1 com absorção de 34 % do Se adicionado. O ensaio biológico mostrou que o Se presente nos cogumelos foi capaz de atravessar a barreira intestinal e atingir a circulação dos animais. Os ratos alimentados com dietas contendo cogumelos enriquecidos com Se apresentaram cerca de 700 ug L-1 de Se no plasma sangüíneo, enquanto os alimentados com a mesma quantidade de Se na forma de selenito de sódio apresentaram cerca de 500 ug L-1 (P<0,05). A atividade da enzima Gpx plasmática foi de cerca de 2000 nmol mm-1 mL-1 nos animais que se alimentaram de dietas contendo ou não cogumelos enriquecidos com Se (P>0,05). A análise protéica do plasma sangüíneo por cromatografia mostrou não haver diferença no perfil cromatográfico das amostras. O peptídeo em maior concentração foi detectado aos 24 min de corrida cromatográfica e foi estimado o peso molecular de, aproximadamente, 7,7 kDa. Entretanto, a concentração de Se nesse peptídeo foi 2,76, 6,90 e 5,27 ug L-1, respectivamente nos ratos alimentados sem Se, com cogumelos enriquecidos com Se e com selenito de sódio. Com base nestes resultados pode-se concluir que o selenito de sódio adicionado ao substrato em concentrações de 3,2 a 12,8 mg kg-1 estimulou a produção de cogumelos que foram capazes de acumular Se quando cultivados na presença desse elemento, a EB foi maior na primeira colheita do cogumelo; as concentrações de 3,2 e 12,8 mg kg-1 resultaram em 34% de aproveitamento do Se adicionado ao substrato; o Se presente no cogumelo foi mais absorvido pelos animais do que o Se na forma de selenato de sódio; o Se presente no cogumelo está não só no plasma sangüíneo como também è metabolizado e inserido nos peptídeos séricos; o cogumelo P. ostreatus pode ser uma excelente fonte alimentar de Se.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo .pdf: 1092167 bytes, checksum: 8586b9a4bcc728e0319bbbdb012ca136 (MD5) Previous issue date: 2012-07-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Viruses are organisms with small genomes of simple organization, which coding about 3 to encode 10 viral proteins. The success of the infection depends on the manipulation of the cell by the virus, by means of complex interactions occurring between viral factors and host factors. The induced changes by virus infection include cell morphology changes, cell cycle changes and alterations in gene expression, among others. Understanding the processes that favor viral infection necessarily involves the study of virus-host interactions. In order to better understand the processes related to infection by tomato potyvirus Pepper yellow mosaic virus (PepYMV) a subtractive library was built 72 hours after infection. Several genes were identified as induced or repressed by viral infection. Among the induced genes, is the gene encoding the Translationally controlled tumor protein (TCTP). TCTP protein is highly conserved in all eukaryotes. Its functions are related to growth control and cell cycle, anti-apoptotic activity, and response to different biotic and abiotic stresses. The involvement of this protein in infection PepYMV has not been established, but studies in a strain of transgenic tomato plants silenced for TCTP showed that the silenced plants have a lower accumulation of PepYMV, indicating that TCTP promotes viral infection. In this study, we sought to advance the understanding of mechanisms involving TCTP in the process of infection by PepYMV. N. benthamiana plants silenced by VIGS TCTP were used to study the effect of silencing in viral infection, and the silenced plants accumulate fewer viruses in early stages of virus infection. Individual expression of viral proteins in N. benthamiana identified P3 and CP as capable of inducing TCTP expression at similar levels to those induced during PepYMV infection, and expression of NIb reduced expression of TCTP. The verification of direct interactions occurrence between viral proteins and TCTP by double-hybrid assay showed that TCTP not interact separately with any of the proteins of viral origin. Purification of proteins of health and infected N. benthamiana plants by affinity with TCTP identified several proteins that putativaly interacts with TCTP. As in two hybrid assay, interactions involving PepYMV proteins were not detected. These results sugests that TCTP actuation must involve the formation of protein complexes involving viral and plant proteins or contribute indirectly to PepYMV infection, without involving direct interactions between TCTP and viral proteins. / Os vírus são organismos com genomas pequenos, de organização simples, que codificam em média 3 a 10 proteínas. O sucesso da infecção depende da manipulação da célula pelo vírus, por meio de interações complexas que ocorrem entre fatores virais e fatores do hospedeiro. As modificações induzidas na célula incluem alterações morfológicas, alteração do ciclo celular e na expressão gênica, entre outras. A compreensão dos processos que favorecem a infecção viral passa necessariamente pelo estudo de interações vírus-hospedeiro. No intuito de compreender melhor os processos relacionados à infecção de tomateiros pelo potyvírus Pepper yellow mosaic virus (PepYMV) uma biblioteca subtrativa foi construída 72 horas após a infecção. Diversos genes cuja expressão foi alterada pela infecção foram identificados. Dentre os genes induzidos, se encontra o gene que codifica a Translationally controlled tumor protein (TCTP). A proteína TCTP é altamente conservada em todos os eucariotos. Suas funções estão relacionadas a controle do crescimento e ciclo celular, atividade anti-apoptótica, e resposta a diferentes tipos de estresses abióticos e bióticos. O envolvimento desta proteína na infecção pelo PepYMV ainda não foi estabelecido, porém estudos em uma linhagem de tomateiro transgênica silenciadas para a TCTP, mostraram que as plantas silenciadas apresentam um menor acúmulo de PepYMV, indicando que a TCTP favorece a infecção por este vírus. Neste trabalho, buscou-se avançar na compreensão dos mecanismos que envolvem a TCTP no processo de infecção pelo PepYMV. Plantas de Nicotiana benthamiana silenciadas para TCTP por VIGS (Virus Induced Gene Silence) foram utilizadas para estudar o efeito do silenciamento na infecção viral, sendo que as plantas silenciadas acumularam menos vírus no início da infecção. A expressão individual das proteínas de origem viral em N. benthamiana identificou a P3 e a CP como capazes de induzir a expressão de TCTP em níveis semelhantes aos observados durante a infecção pelo PepYMV, sendo que a expressão da proteína NIb reduziu a expressão de TCTP. A verificação da ocorrência de interações diretas entre a TCTP e as proteínas virais, por ensaio de duplo híbrido, mostrou que a TCTP não interage separadamente com as proteínas de origem viral. A purificação de proteínas de plantas de N. benthamiana, sadias e infectadas, por afinidade com a TCTP identificou diversas proteínas que possivelmente 7 interagem com a TCTP. Assim como no ensaio de duplo híbrido, a interação com proteínas virais não foi detectada. Estes resultados sugerem que o papel da TCTP deve envolver a formação de complexos proteicos entre proteínas virais e da planta, ou favorecer a infecção de forma indireta.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 248917 bytes, checksum: 84bc05c660ca867229222e12c0fa08ec (MD5) Previous issue date: 2003-03-31 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Phylogenetic analysis of Lactobacillus UFV H2b20 based on the 16S rDNA sequence positions this isolate among the Lactobacillus delbrueckii subspecies. It confirms the classification by DNA/DNA hybridization. Comparisons of the substituted bases along the 16S rDNA sequence show that most are probably caused by 5-methylcytosine deamination that results in GC/AT transition. Presence of polymorphic copies of the 16S rRNA gene in Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 were confirmed by PCR-DGGE. Five distinct bands of rDNA amplified sequences confirm at least five different copies of the gene. The intensity of one of the bands allows the inference of two identical copies. The DGGE profile of this isolate was different from those of other L. delbrueckii strains, providing a mean to distinguish it in mixed cultures. Analysis of the nucleotide sequences along the rDNA region revealed the presence of putative insertion sequences. One of them, 915 bp long, was characterized and denominated ISLdH2b20. It presents a single ORF that encodes a putative transposase with some homology to the one of ISL5 of L. delbrueckii subsp. bulgaricus. All the characteristic elements of an IS were located as well as the putative regulatory sequences of the transposase. / O estudo de filogenia baseado em seqüências de rDNA de Lactobacillus UFV H2b20 mostrou que esse microrganismo foi agrupado entre as subespécies de Lactobacillus delbrueckii. Este resultado confirma a nova classificação do isolado, baseada na hibridização DNA-DNA. A análise das substituições de bases mostra que a maioria é causada pela desaminação da 5-metilcitosina, o que causa uma transição GC/AT. A técnica PCR-DGGE de L. delbrueckii UFV H2b20 demonstrou resultados satisfatórios na análise de polimorfismos do operon rrn em microrganismos isolados. Foram encontradas cinco bandas diferentes para o L. delbrueckii UFV H2b20, confirmando a presença de cinco cópias distintas do rDNA 16S nesse microrganismo e possivelmente seis no total. O isolado L. delbrueckii UFV H2b20 apresentou um perfil de bandas diferente das outras linhagens de Lactobacillus, o que poderá ser utilizado para diferenciá-lo dos demais, uma vez que outros métodos baseados em PCR, como RAPD, mostram-se pouco discriminatórios. A análise das seqüências da região do rDNA 16S revelou uma seqüência de inserção putativa, de 915 pb, que foi caracterizada e denominada ISLdH2b20. Ela apresenta uma única ORF e codifica uma transposase putativa que apresenta homologia com a transposase de ISL5. Todos os elementos característicos de uma IS foram identificados bem como as seqüências regulatórias putativas da transposase.