Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4055.pdf: 2221514 bytes, checksum: 7deb1678d13ce68f90502cabfae9d5ca (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Universidade Federal de Minas Gerais / Bees are obligatory floral visitors and are considered the main pollinators of angiosperms. The increasing interest in the services of bees has led to efforts to develop management strategies for conservation purposes. The sustainable use of pollinators requires knowledge on the regional diversity of floral visitors obtained from the identification of the agents responsible for the effective pollination of crops. Furthermore, understanding the reproductive biology and population structure of these species as well as the factors that enable the colonization of certain areas by a species of bee are necessary requirements to designing management and conservation strategies. To test the hypothesis that a certain area may be colonized by a small number of maternal lineages of female founders of a species of stingless bee, samples from 73 nests of Partamona helleri (Hymenoptera: Apidae: Meliponini) located on the Brazilian campuses of the Universidade Federal de São Carlos (UFSCar, n = 34), Universidade de São Paulo in São Paulo (USP-SP, n = 14) and Universidade de São Paulo in Ribeirão Preto (USP-RP, n = 25) were analyzed for two mitochondrial genes cytochrome b (cyt b) and cytochrome oxidase I (COI) in order to determine the number of different haplotypes. A fragment of the cytochrome b (485 bp) and cytochrome oxidase (611 bp) genes was sequenced for all nests sampled. The analysis of nucleotide sequences identified only one cyt b haplotype in samples from UFSCar and a second haplotype, distinct from the former by a base substitution, in samples from USP-SP, while samples from USP-RP exhibited three distinct haplotypes, one of which was shared by the samples from UFSCar. Among the nucleotide substitutions, some resulted in amino acid changes in the product of the cyt b gene. A similar result was observed with the COI gene. Fst values estimated for the mitochondrial DNA from the cyt b and COI genes were 31.8% and 36.1%, respectively. The estimated rate of nucleotide substitution for cyt b was higher than that found for COI. Thus, the former gene was found to be less conserved than the latter in stingless bees. The larger number of haplotypes observed in the samples from USP-RP may be due to the introduction of colonies from other regions of the country. To determine the occurrence of population structure for nuclear genes, the samples were also examined for several microsatellite loci. Among the 18 heterologous microsatellites loci tested, only four Mbi215, Mbi278, Mbi232 and Mbi254 exhibited genetic variation. The prospection of species-specific microsatellite loci for Partamona helleri using the enrichment method for the construction of DNA libraries allowed characterizing seven new loci. Samples from 73 nests (two workers per colony) were analyzed for eleven microsatellite loci. The populations exhibited significant differentiation (Fst = 0.129, P = 0.000). Fst values estimated for mitochondrial genes and nuclear genes (microsatellites) were compared to establish whether there is evidence for differential male and female dispersal ability in this species. No evidence was found of sex-asymmetrical dispersal (colonizing females are colonizers; males are dispersers). Analysis of phenotypic segregation in the progenies of several nests revealed the occurrence of monandry in the species studied and, consequently, a simple sociogenetic structure monogyny/monandry. The presence of 'foreign' workers was rarely observed in the nests analyzed. / As abelhas, por serem visitantes florais obrigatórios, são consideradas os principais agentes polinizadores das angiospermas. O crescente interesse pelos serviços das abelhas tem gerado esforços para o desenvolvimento de estratégias de manejo para fins conservacionistas. A utilização sustentável dos polinizadores requer o conhecimento da diversidade regional dos visitantes florais obtido mediante a identificação dos agentes efetivos responsáveis pela polinização das culturas. Além disso, conhecer a biologia reprodutiva e a estrutura populacional dessas espécies, bem como elucidar quais os fatores que tornam possível a colonização de certa área por uma espécie de abelha, são requisitos necessários para o delineamento de estratégias de manejo e conservação. Visando verificar a hipótese de que certa área pode ser colonizada por um número reduzido de linhagens maternas das fêmeas fundadoras de uma espécie de abelha sem ferrão , amostras de 73 ninhos de Partamona helleri (Hymenoptera: Apidae: Meliponini) localizados nos Campi da Universidade Federal de São Carlos (UFSCar, n = 34), da Universidade de São Paulo em São Paulo (USP-SP, n = 14) e da Universidade de São Paulo em Ribeirão Preto (USP-RP, n = 25) foram analisadas para dois genes mitocondriais, citocromo B (cyt b) e citocromo oxidase I (COI), com o fim de determinar o número de diferentes haplótipos. Um fragmento dos genes citocromo b e citocromo oxidase I, de 485 pb e 611 pb, respectivamente, foram seqüenciados para todos os ninhos amostrados. A análise das seqüências nucleotídicas permitiu identificar somente um haplótipo de cyt b para as amostras da UFSCar e um haplótipo, distinto do anterior por uma substituição de base, privativo das colônias do Campus da USP-SP; ao contrário, as amostras da USP-RP apresentaram três haplótipos distintos, um dos quais compartilhado com as amostras da UFSCar. Dentre as substituições nucleotídicas identificadas, algumas resultaram em alterações de aminoácidos no produto do gene cyt b. Resultado similar foi observado para o gene COI. Os valores do Fst estimado para o DNA mitocondrial a partir dos genes cyt b e COI foram iguais a 31,8% e 36,1%, respectivamente. A taxa de substituição nucleotídica estimada foi maior para cyt b em comparação com COI; dessa forma, o primeiro gene parece ser menos conservado em relação ao outro nas abelhas sem ferrão. O maior número de haplótipos observados na USP-RP pode ser resultante da introdução no local de colônias trazidas de outras regiões do país. A fim de verificar a ocorrência de estruturação populacional para genes nucleares, estas amostras foram igualmente analisadas para vários locos microssatélites. Dentre 18 microssatélites heterólogos testados, somente quatro - Mbi215, Mbi278, Mbi232 e Mbi254 - apresentaram variação genética. A prospecção de locos microssatélites específicos para Partamona helleri, utilizando o método do enriquecimento para a construção de bibliotecas de DNA, permitiu caracterizar sete locos espécie-específicos. Amostras dos 73 ninhos (duas operárias por colônia) foram analisadas para estes onze locos microssatélites. As populações apresentaram significativa diferenciação interpopulacional (Fst = 0,129; P = 0,000). Os valores do Fst estimados para genes mitocondriais e para genes nucleares (microssatélites) foram comparados para estabelecer se há evidências de dispersão diferencial de machos e fêmeas na espécie. Não foram detectadas evidências de dispersão sexo-assimétrica (fêmeas colonizadoras, marchos dispersores). Análises da segregação fenotípica nas progênies de vários ninhos revelaram a ocorrência de monandria na espécie estudada e, portanto, uma estrutura sociogenética simples - monoginia/monandria. A presença de operárias estranhas aos ninhos analisados foi raramente observada.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4282.pdf: 3615075 bytes, checksum: 6892b5fe2df64eef0eef789c1ee1a527 (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / Universidade Federal de Sao Carlos / The Africanization process of Apis mellifera has raised several questions about the genetic makeup of resulting populations. This study aimed to identify the number, frequency and distribution of different mitochondrial haplotypes, as well as their origin in Africanized colonies sampled in different regions of the country. In this sense, 1626 colonies, 1048 from Brazil and the remaining from 12 other countries. Including samples from scutellata, iberiensis, and ligustica subspecies, Africanized and non-Africanized honeybees from South America and Central America were analyzed. Identification of patterns was done by PCR-RFLP of COI region with endonucleases BclI and TaqI, followed by sequencing of representative samples of these patterns. These results are then related to the patterns already described for COI-COII region of the same samples by Collet et al. (2206). Geographic association between observed electrophoretic patterns and the relationships among haplotypes allowed us to make certain inferences regarding geographical origin of these patterns. BclI generated three restriction patterns, designated 1, 2 and 3, while TaqI generated four restriction patterns, A, B, C and D. These patterns resulted in seven composite patterns formed by the association of patterns produced by the two nucleases in samples from Brazil. When previous data on the DraI restriction patterns of the intergenic region COI-COII were considered, 17 composite haplotypes were observed in those samples. Samples from Brazil, South Africa, Kenya, Portugal, Spain, Italy and Chile (n = 90) were submitted to sequencing reaction, generating 35 haplotypes and 13 different aminoacid sequences. Our data demonstrated that simple association of restriction patterns was not adequate to infer geographic origin of mitochondrial lineages in Africanized populations, a task which requires knowledge of their corresponding nucleotide sequences. It was possible to infer the origin of 11 of the 17 composite COI and COI-COII haplotypes found in samples from Brazil. COI patterns did not show a clinal distribution like the one observed with COI-COII patterns. Our data clearly indicates nucleotide and amino acid substitutions privative to European and African / Africanized samples, a matter that deserves subsequent research. / O processo de africanização de Apis mellifera fez surgir diversas questões acerca da constituição genética da população resultante. Esse trabalho teve por objetivo identificar o número, a freqüência e a distribuição dos diferentes haplótipos mitocondriais, bem como sua possível origem nas colônias africanizadas amostradas em diferentes regiões do país. Neste sentido, foram analisadas amostras de 1.626 colônias, sendo 1048 do Brasil e as demais de outros 12 países, incluindo amostras de A. m. scutellata, A. m. iberiensis, A. m. ligustica, africanizadas e não-africanizadas da América do Sul e Central. A identificação desses padrões foi feita por PCR-RFLP da região COI com as endonucleases BclI e TaqI, seguida pelo sequenciamento de amostras representativas desses padrões. Esses resultados foram, então, associados aos padrões já descritos para a região COI-COII das mesmas amostras por Collet et al. (2006). A associação geográfica entre os padrões eletroforéticos observados e as relações entre os haplótipos sequenciados estabelecidas em rede de haplótipos permitiram efetuar certas inferências quanto à origem geográfica destes padrões. Foram identificados três padrões BclI, denominados 1, 2 e 3 e quatro padrões TaqI, denominados A, B, C e D. Sete padrões compósitos, formados pela associação dos padrões das duas nucleases,foram identificados em amostras do Brasil. Quando dados anteriores de padrões de digestão da região intergênica COI-COII com a endonuclease DraI são considerados, 17 padrões foram verificados nestas amostras. Dentre as 90 amostras sequenciadas do Brasil, África do Sul, Quênia, Portugal, Espanha, Itália e Chile foram observados 35 haplótipos distintos que respondem por 13 diferentes sequências de aminoácidos. Nossos dados demonstraram que a simples associação entre padrões de restrição não se constituiu em meio seguro para se inferir a origem das linhagens mitocondriais em populações africanizadas, sendo mais indicado realizar subsequentemente o sequenciamento dos fragmentos que geraram estes padrões. Foi possível inferir a origem de 11 de 17 padrões associados COI-COII e COI encontrados no Brasil. Não foi observada distribuição clinal entre os padrões COI como o verificado em COI-COII. Os dados apontam claramente para substituições nucleotídicas e de aminoácidos exclusivas em amostras de origem européia e africanas/africanizadas, uma questão que merece uma pesquisa subsequente.

Introdução. Danos no DNA mitocondrial (DNAmt) têm sido descritos em pacientes com doença renal crônica (DRC). Estes danos podem ser avaliados através da deleção 4977pb do DNAmt em diversos tecidos. Métodos. Identificamos a prevalência da deleção 4977pb do DNAmt através da técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) no sangue de pacientes com DRC em tratamento conservador (creatinina >2mg/dl) ou submetidos a hemodiálise. Resultados. A freqüência da ocorrência da deleção do DNAmt foi de 73.1% (38/52) nos pacientes com DRC submetidos a hemodiálise, 57.1% (27/42) nos pacientes com DRC em tratamento conservador e 27.8% (15/54) nos controles (P< 0.001). Não encontramos aumento da freqüência desta deleção em relação a idade dos pacientes com DRC (P= 0.54) ou ao tempo de diálise (P= 0.70). Conclusão. Danos no DNAmt podem ser induzidos pela DRC em especial nos pacientes submetidos a hemodiálise. Desta forma, a deleção 4977pb do DNAmt pode servir como um marcador de danos moleculares em pacientes com DRC. / Background. Damage to mitochondrial DNA (mtDNA) has been described in patients with chronic renal disease (CRD). The presence of mtDNA 4977bp deletion in many different tissues can serve as a marker of this damage. Methods. Polymerase chain reaction techniques (PCR) were used to identify the prevalence of 4977bp deletion in mtDNA from the blood of hemodialysis patients or patients with CRD receiving conservative treatment. Results. The frequency of 4977bp deletion in mtDNA was 73.1% (38/52) in patients undergoing hemodialysis, 57.1% (27/42) in patients with CRD receiving conservative treatment and 27.8% (15/54) in control samples (P< 0.001). Higher frequencies of this mutation were not associated with patient age (P= 0.54) or time on dialysis (P= 0.70). Conclusion. Damage to mtDNA can be induced in CRD, especially in patients undergoing dialysis. Thus, mtDNA with 4977bp deletion can serve as a marker of molecular damage in patients with CRD.

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Neuropsychiatric diseases, as bipolar disorder (BD), have a very complex pathophysiology. Several times the diagnostic and to choose a correct treatment are difficult. Currently, have been developed studies related to mechanisms that can be associated with specific biomarkers present on mental illness. Some studies are describing an association between neuropsychiatric diseases and mitochondrial dysfunction and consequent cellular modifications. Additionally, some psychiatric illnesses are been associated with chronic inflammatory activation via pro-inflammatory cytokines production. In this sense, the search for drug development to treat psychiatric illness is very necessary. Euterpe oleracea, known as açaí, is an Amazonian fruit and a potential candidate for neuropharmacological study due to chemical matrix, including a variety of bioactive compounds with biological effects. There are molecules that could act at mitochondrial function and neurophysiology. Objective: to perform a literature review about the mitochondrial dysfunction impact at bipolar disorder and chemically analyse and evaluate the neupharmacological in vitro effect of açaí extract through mitochondrial function modulation and oxidative and inflammatory metabolisms. Methodology: initially we produced a review about the association between BD and cellular mitochondrial metabolism based on scientific articles published at last 20 years in different journals found at PUBMED-MEDLINE of American library. This review helped to create the ecperimental in vitro design of this study. After, we performed an in vitro experimental research using a cell line SH-SY5Y exposed to rotenone. SH-SY5Y cells were obtained from American Type Culture Collection (ATCC®), and treated with freeze-dried hydroalcoholic açaí extract which was analyzed by high performance liquid chromatography. Initially the açaí effect at cell viability was measured through different concentration-effect curves. We also induced mitochondrial complex I dysfunction using rotenone at 5, 15 and 30 nM. Before and after rotenone exposition 5 μg/mL of açaí extract was added to evaluate the potential effect of açaí to prevent and reverse rotenone damages. After all treatments were performed experimental assays to evaluate the mitochondrial transport chain, the mitochondrial complex I enzyme activity, the protein and gene expression of NDUFS7, S8, V1 and V2 of complex I, the total levels of reactive oxygen species and lipid peroxidation. For the third study we used RAW 264.7 macrophages from ATCC. Cells were activated with PHA and exposed to different concentrations of açaí extract during 72h. Using the most anti-inflammatory effective concentration of açaí extract, we developed all another experimental assays to evaluate oxidative metabolism parameters, cell cycle and protein expression of cytokines and NLRP3-inflammasome. The statistical analysis was performed by one way anova followed by Tukey or Dunnett post hoc. Results: the obtained results were organized in three scientific articles. The review paper was published at Canadian Journal of Psychiatry and indicated the relevance of studies that dentify plants with potential properties to modulate mitochondrial complex I. The obtained results of second study were published at Oxidative and Cellular Longevity journal where we observed that hydroalcoholic açaí extract presented high levels of orientin (8,05±0,03mg/g), p-cumaric acid (3,52±0,01mg/g) and apigenin (3,49±0,01mg/g). In vitro results related to mitochondrial dysfunction and oxidative stress showed that the most effective concentration of açaí extract was 5μg/mL after 48h of incubation. We observed that açaí extract at both experimental models presented protective effects under mitochondrial complex I and this effect was due to an increased protein and gene expression mainly for NDUFS7 and S8 subunits that form the active region of this complex. Despite, was observed a decreased rate of reactive oxygen species and of lipid peroxidation under açaí exposition. Results of third study were organized in a manuscript that will be submitted for publication at Inflammation Research journal. It was observed the anti-inflammatory activity of açaí in macrophage PHA-induced, where the effective concentration able to reduce 50% of cellular proliferation (EC50) 1 μg/mL. Complementary assays showed that this specific concentration is capable to decrease inflammatory markers as proliferation rate, cell cycle, ROS levels and nitric oxide. Açaí also reduced pro-inflammatory cytokines levels (IL-1β, IL-6, TNFα. INFγ), and the inflammasome NLRP3, increasing IL-10 levels. Conclusion: the results obtained until this moment are suggesting that açaí has neuropharmacological activity and is a potential candidate for drug development or food supplement for psychiatric diseases treatment, especially BD which is related to mitochondrial complex I dysfunction and chronic inflammatory activation. / As doenças neuropsiquiátricas, como o transtorno bipolar, possuem fisiopatologia bastante complexa. Muitas vezes o diagnóstico e a escolha de um tratamento eficaz são de difícil realização. Atualmente vêm sendo desenvolvidos estudos relacionados aos mecanismos causais e que podem ser direcionados a descoberta de novos biomarcadores característicos de doenças mentais. Alguns estudos descrevem a existência de uma forte associação entre doenças neuropsiquiátricas e disfunção mitocondrial e consequentes alterações celulares. Adicionalmente, algumas doenças psiquiátricas estão também associadas à inflamação crônica, via produção de citocinas pró-inflamatórias. Dessa forma, a busca pelo desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento de doenças psiquiátricas é de grande necessidade. A Euterpe oleracea, espécie conhecida popularmente como açaí, é uma fruta amazônica potencial candidata a estudos neurofarmacológicos devido a sua constituição química que inclui uma variedade de moléculas bioativas que poderiam atuar tanto melhorando a função mitocondrial e a resposta inflamatória. Objetivo: realizar revisão da literatura sobre o impacto da disfunção mitocondrial no transtorno bipolar, caracterizar quimicamente e avaliar o potencial efeito neurofarmacológico in vitro do extrato de açaí na modulação da função mitocondrial, do metabolismo oxidativo e inflamatório. Metodologia: inicialmente foi produzido um estudo de revisão teórico-literário sobre a associação entre o transtorno bipolar e o metabolismo mitocondrial celular baseado em artigos científicos publicados nos últimos 20 anos em revistas indexadas no PUBMED-MEDLINE da Biblioteca dos Estados Unidos da América. Esta revisão auxiliou na concepção do delineamento da parte experimental do trabalho. A pesquisa experimental in vitro foi feita utilizando-se a linhagem comercial SH-SY5Y expostas a rotenona. As células SH-SY5Y foram obtidas da American Type Culture Collection (ATCC®) e foram tratadas com um extrato hidroalcólico de açaí liofilizado, no qual as principais substâncias bioativas foram quantificadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). O efeito do açaí sobre a viabilidade celular foi avaliado através de diferentes curvas concentração-efeito. Foi induzida disfunção no complexo I mitocondrial através do uso da rotenona nas concentrações de 5, 15 e 30 nM. Antes ou após o tratamento com rotenona, foi adicionado o extrato de açaí (5 μg/mL) a fim de avaliar a capacidade de prevenção e/ou reversão dos efeitos da rotenona. Após os tratamentos, foram desenvolvidos ensaios experimentais de avaliação da cadeia de transporte de elétrons, da atividade enzimática do complexo I mitocondrial, da expressão proteica e gênica das subunidades NDUFS7, S8, V1 e V2, da taxa total de espécies reativas de oxigênio e da lipoperoxidação. Já para o terceiro estudo, foi utilizada linhagem celular de macrófagos RAW 264.7, também obtidos da ATCC. Tais células foram ativadas com fitohemaglutinina (PHA) e expostas a diferentes concentrações de extrato de açaí durante 72h. Com base na concentração mais efetiva do extrato (1 μg/mL) frente à inflamação, foram realizadas as avaliações de parâmetros do metabolismo oxidativo, do ciclo celular e da expressão de citocinas inflamatórias e do inflamassoma NLRP3, via diferentes métodos experimentais. Os resultados foram estatisticamente comparados por análise de variância de uma via seguida de teste post hoc de Tukey ou Dunnet. Resultados: os resultados obtidos foram organizados sob a forma de três artigos científicos. A revisão de literatura foi publicada no Canadian Journal of Psychiatry e indicou a relevância de estudos que identifiquem plantas com potencial propriedade de modular o complexo I mitocondrial. Os resultados obtidos no segundo estudo foram publicados na revista Oxidative Medicine and Cellular Longevity onde se observou que o extrato hidroalcoólico de açaí apresentou níveis elevados das seguintes moléculas: orientina (8,05±0,03 mg/g), ácido p-cumárico (3,52±0,01 mg/g) e apigenina (3,49±0,01 mg/g). Os resultados in vitro relacionados à disfunção mitocondrial e estresse oxidativo mostraram que a concentração mais efetiva do extrato hidroalcoólico de açaí que aumentou a viabilidade celular foi a de 5 μg/mL após 48h de incubação. Foi observado que o extrato de açaí em ambos os modelos experimentais apresentou efeito protetor sobre o complexo I mitocondrial e este efeito deveu-se ao aumento da expressão proteica e gênica principalmente das subunidades NDUFS7 e S8 que constituem a região de atividade deste complexo. Além disso, foi evidenciada redução da taxa total de espécies reativas de oxigênio (EROs) e diminuição dos níveis de peroxidação lipídica. Os resultados do terceiro estudo foram organizados sob a forma de um manuscrito a ser submetido à revista Inflammation Research. Nele foi observada atividade anti-inflamatória do açaí em macrófagos RAW PHA-ativados, sendo a concentração estimada para diminuir em 50% a resposta inflamatória (EC50) de 1 μg/mL. Testes complementares mostraram que esta concentração foi capaz diminuir marcadores inflamatórios como taxa de proliferação celular, ciclo celular, níveis de EROs e de óxido nítrico. O açaí também reduziu os níveis de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-6, TNFα. INFγ) e relacionadas ao inflamassoma NLRP3, e também aumentou os níveis da citoticina anti-inflamatória IL-10. Conclusão: os resultados obtidos sugerem que o açaí possui atividade neurofarmacológica e que é um potencial candidato no desenvolvimento de novos fármacos ou suplementos alimentares direcionados ao tratamento de doenças psiquiátricas, em especial o transtorno bipolar que está relacionado à disfunção do complexo I mitocondrial e à ativação inflamatória crônica.

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No. of bitstreams: 1 DissJR.pdf: 2471700 bytes, checksum: 1cec0d156c66d81384b97543e61cdf97 (MD5) Previous issue date: 2016-04-29 / Não recebi financiamento / Introduction: As we age, human body goes through several important physiological changes, especially in women after menopause, during which estrogen levels are declining, causing changes in mitochondrial function both in skeletal muscle and brain. Menopause is mimicked experimentally by a technique called ovariectomy, that causes some alterations in rats, such as the loss of muscle mass (sarcopenia); however studies have demonstrated that loss of age-related muscle is a different process from strength loss. Whereas the loss of muscle strength is dissociated from this condition, it was renamed as dinapenia. Resistance Training (RT) has beneficial effects on postmenopausal women, but is not well established in the literature the possible effects of RT on mitochondrial function of the cerebral motor cortex and skeletal muscle of ovariectomized rats. Objective: This study aimed to investigate the effects of ovariectomy and resistance training on mitochondrial function (oxygen consumption) in tissue biopsy of the prefrontal cortex and vastus lateralis muscle (VL) in rats. Materials and Methods: were used 40 adult female rats divided into 4 experimental groups (Sham-SED, Sham- TR, OVX-SED and OVX-TR). The ovariectomy was performed at 13 weeks. The Resistance Training (RT) proposed was the climb stairs model, and held for 13 weeks. The masses of the prefrontal cortex, cerebellum, Vastus Lateralis (VL) and Retus Femoralis (RF) were analyzed after sacrifice, which took place 48 hours after the last training session. Oxygen consumption and mitochondrial respiratory parameters were performed on tissue biopsy of the prefrontal cortex and the vastus lateralis (VL) by technique of High Resolution Respirometry (Oroboros®). Results: it was found decreased muscle mass (VL and RF), as well as the cerebellum in OVX-SED group compared to other groups (p <0.05). TR prevented the loss of muscle and cerebelar mass. Mitochondrial oxygen consumption was decreased in OVX-SED group compared to the other experimental groups (p <0.05), effect once again prevented by TR. Conclusion: ovariectomy produced mitochondrial dysfunction in the prefrontal cortex and VL, deleterious effect prevented by RT. / A medida em que envelhecemos, o corpo humano passa por várias alterações fisiológicas importantes, especificamente em mulheres na pós-menopausa, período em que os níveis de estrogênio estão em declínio, provocando alterações na função mitocondrial tanto do músculo esquelético quanto do cérebro. A menopausa é mimetizada experimentalmente por uma técnica chamada ovariectomia, que provoca essas alterações em ratas, como a perda de massa muscular (sarcopenia), no entanto estudos têm demonstrado que essa perda de massa muscular relacionada à idade é um processo distinto da perda de força. Considerando que a perda de força muscular está dissociada dessa condição, passou a ser denominada como dinapenia. O treinamento resistido (TR) possui efeitos benéficos na pós-menopausa, porém ainda não está bem estabelecido na literatura os possíveis efeitos do TR sobre a função mitocondrial do córtex motor cerebral e músculo esquelético de ratas ovariectomizadas. Objetivo: O presente estudo tem como objetivo investigar os efeitos da ovariectomia e do treinamento resistido sobre a função mitocondrial (consumo de oxigênio) em biópsia tecidual do córtex motor pré-frontal e músculo Vasto Lateral (VL) em ratas. Materiais e Métodos: Foram utilizadas 40 ratas Wistar adultas, distribuídas em 4 grupos experimentais (Sham-SED, Sham-TR, OVX-SED e OVX-TR). A ovariectomia foi realizada com 13 semanas. O Treinamento Resistido (TR) proposto foi o modelo de subida em escada, e realizado por 13 semanas. As massas do córtex pré-frontal, cerebelo, Vasto Lateral (VL) e Reto Femoral (RF) foram analisadas após o sacrifício, que aconteceu 48h após o último treino. O consumo de oxigênio e os parâmetros respiratórios mitocondriais foram realizados em biópsia tecidual do córtex pré-frontal e do músculo Vasto Lateral (VL) por meio da técnica de Respirometria de Alta Resolução (Oroboros®). Resultados: foi encontrado diminuição da massa muscular do VL e RF, bem como do cerebelo no grupo OVX-SED comparado aos outros grupos (p<0,05). O TR preveniu essa perda da massa muscular e cerebelar. O consumo de oxigênio apresentou-se diminuído no grupo OVX-SED em comparação aos outros grupos experimentais (p<0,05), efeito novamente prevenido pelo TR. Conclusão: A ovariectomia produziu disfunção mitocondrial no córtex pré-frontal e no VL, efeito deletério prevenido pelo TR.

Submitted by ANALORENA CIFUENTES RINCÓN null (lorenacifuentesmvz@gmail.com) on 2016-12-05T19:02:32Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Lorena (Versão final)2.pdf: 4872200 bytes, checksum: 6e585a9162115d6ddb21dc9ffd88b0ee (MD5) Dissertação Lorena (Versão final)2.pdf: 4872200 bytes, checksum: 6e585a9162115d6ddb21dc9ffd88b0ee (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-12-06T15:42:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cifuentesrincon_a_me_jabo.pdf: 4872200 bytes, checksum: 6e585a9162115d6ddb21dc9ffd88b0ee (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-06T15:42:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cifuentesrincon_a_me_jabo.pdf: 4872200 bytes, checksum: 6e585a9162115d6ddb21dc9ffd88b0ee (MD5) Previous issue date: 2016-08-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A espécie Mazama americana (veado-mateiro) é conhecida como a maior espécie pertencente ao gênero Mazama, e também um dos cervídeos mais abundantes e amplamente distribuídos na floresta Neotropical. A espécie já passou por diferentes classificações taxonômicas ao longo do tempo devido a potencial existência de diversas espécies dentro do que hoje é conhecido como M. americana. É considerada um complexo de espécies crípticas, pois apresenta alta taxa de paralelismo morfológico entre indivíduos com uma variação cromossômica coerente em termos geográficos, sugerindo a existência de unidades evolutivamente distintas. Assim, o objetivo do trabalho foi propor um neótipo para M. americana a partir da caracterização morfológica, citogenética e molecular de um topótipo, no sentido de fazer uma descrição emendada da espécie a partir de uma visão integrativa, permitindo assim a comparação com outros padrões já descritos na literatura considerados M. americana. Para tanto, um indivíduo foi coletado na localidade tipo da espécie (Guiana Francesa), e caracterizado por técnicas de morfologia tradicional (medidas cranianas, coloração da pele, biometria corporal) e morfometria geométrica, assim como por análises citogenéticas (banda C, banda G, coloração Ag-NOR, coloração convencional de Giemsa) e moleculares (análises filogenéticas de genes mitocondriais e nucleares). Os resultados corroboram evidências da existência de um complexo de espécies dentro do que hoje se considera M. americana, já que, segundo os seus padrões citogenéticos, o topótipo não se enquadra em nenhuma variante da espécie até agora conhecida. Molecularmente, as análises indicam a existência de pelo menos duas espécies diferentes dentro deste táxon. A similaridade morfológica é clara dentro de todas as variantes, comprovando mais uma vez que as unidades taxonômicas do veado-mateiro são muito difíceis de se diferenciar só pelos caracteres morfológicos. Deste modo, no presente trabalho, é proposto um neótipo o qual é o ponto de partida para a descrição de novas espécies e possível mudança completa na nomenclatura do gênero Mazama. / The red brocket deer species, Mazama americana, is known as the largest species of the genus Mazama, and also one of the most abundant deer and widely distributed in Neotropical forests. This species has undergone different taxonomic classifications over time due to the potential existence of several species within what is currently known as M. americana, which is considered as a complex of cryptic species. Individuals included in this species show a high morphological convergence between them with a consistent chromosomal variation in geographical terms, suggesting the existence of different evolutionary units. The objective of this study, therefore, was to obtain the morphological, cytogenetic and molecular profile of a M. americana topotype to gain an exact description of the species and be able to compare them with other standards already described in the literature for M. americana. For this purpose, an individual was collected at the type locality of this species (French Guiana) and characterized by traditional morphological techniques (cranial measurements, skin color, body biometrics), geometric morphometry, cytogenetic analysis (Band C, Band G Ag-NOR staining, conventional Giemsa staining) as well as molecular analysis (phylogenetic analyzes of mitochondrial and nuclear genes). Among highlights of the results, cytogenetic analysis showed a pattern that does not fit into any of the Mazama americana variants until now known. Similarly, the molecular analysis revealed the existence of, at least, two different species within this taxon, being clear the morphological similarity in all variants, proving once again that the red brocket variants are impossible to differentiate only by morphological characters. All these results, therefore, corroborate the existence of several species within M. americana species, contributing largely to the taxonomy of this species, as well as to the description of new species within the genus Mazama and the generation of a new holotype.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PriscilaAM.pdf: 370438 bytes, checksum: 93995dd721c298f0b6f78207c20d0453 (MD5) Previous issue date: 2009-07-24 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Extensive studies using molecular markers on butterflies have shown how a highly fragmented landscape may result in the reduction of gene flow among patches of habitat and, consequently, increase genetic differentiation among populations. However, little is known about Heliconius geographical structure and the effects of fragmentation on the connectivity of populations. Furthermore, findings on the effects of the population structure on the dynamics of mimicry evolution in Heliconius butterflies need to be tested in H. erato and H. melpomene specimens found in other locations other than Central and northern South Americas. For the present study, we had two motivations: (1) compare the population structure of H. erato and H. melpomene given the highly fragmented Brazil s Atlantic Forest habitat; and (2) studying population structure of co-mimics could give us insights into the dynamics of mimicry evolution. For this, we analysed the spatial structure and connectivity of eight populations of Heliconius butterflies, in a total of 137 H. erato specimens and 145 H. melpomene specimens, using nine microsatellites loci, 1144 AFLPs markers and 282 mitochondrial DNA sequences. In general, both species exhibited evidence of population subdivision but no isolation by distance indicating some extent of genetic differentiation among populations. Contrary to Kronforst & Gilbert s (2008) Costa Rican Heliconius, H. melpomene exhibited more genetic differentiation than H. erato based on nuclear markers. However, for mitochondrial DNA, H. erato populations showed more genetic differentiation than H. melpomene. Our results corroborate to other studies on Heliconius butterflies concerning the pronounced population subdivision and local genetic drift found in this genus. Nevertheless, the pattern of this differentiation varies significantly from the pattern found in studies conducted in Central America, where H. erato is generally more differentiated and structured than H. melpomene, based on nuclear markers. This different pattern may reflect different evolutionary histories of Heliconius species in Northeastern Brazil s Atlantic Forest / Estudos utilizando marcadores moleculares em borboletas t?m mostrado como uma paisagem altamente fragmentada pode resultar na redu??o do fluxo g?nico entre as manchas de habitat e, conseq?entemente, aumentar a diferencia??o gen?tica entre as popula??es. No entanto, pouco se sabe sobre a estrutura geogr?fica e os efeitos da fragmenta??o sobre a conectividade das popula??es do g?nero Heliconius. Al?m disso, as conclus?es sobre os efeitos da estrutura populacional sobre a din?mica da evolu??o do mimetismo de borboletas do g?nero Heliconius precisam ser testados em esp?cimes de H. erato e H. melpomene encontrados em outros locais, al?m dos da Am?rica Central norte da Am?rica do Sul. Neste estudo, tivemos duas motiva??es: (1) comparar a estrutura populacional de H. erato e H. melpomene dada a elevada fragmenta??o do Mata Atl?ntica Brasileira, e (2) estudar a estrutura populacional de esp?cies co-m?micas poderia nos fornecer insights a respeito da din?mica da evolu??o do mimetismo. Para isso, analisamos a estrutura espacial e conectividade de oito popula??es de Heliconius, em um total de 137 esp?cimes de H. erato e 145 de H. melpomene, utilizando nove loci de microssat?lites, 1144 marcadores AFLPs e 282 sequ?ncias de DNA mitocondrial. Em geral, ambas as esp?cies apresentaram evid?ncias de subdivis?o populacional, mas nenhum isolamento por dist?ncia indicando alguma diferencia??o gen?tica entre as popula??es. Contrariamente ao Heliconius da Costa Rica (Kronforst & Gilbert 2008), H. melpomene exibiu maior diferencia??o gen?tica que H. erato, baseado em marcadores nucleares. No entanto, para DNA mitocondrial, as popula??es de H. erato apresentaram maior diferencia??o gen?tica que H. melpomene. Nossos resultados corroboram com outros estudos sobre Heliconius no tocante ? subdivis?o populacional e deriva g?nica local encontrada neste g?nero. No entanto, o padr?o dessa diferencia??o varia significativamente do padr?o encontrado em estudos realizados na Am?rica Central, onde H. erato ? geralmente mais diferenciado e estruturado. Esse padr?o pode refletir diferentes hist?rias evolutivas de esp?cies de Heliconius na Mata Atl?ntica do Nordeste do Brasil

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A toxoplasmose é uma zoonose amplamente distribuída que afeta mais de um terço da população mundial e de grande importância na saúde pública. A maioria das infecções em humanos por Toxoplasma gondii é assintomática. A toxoplasmose é amplamente investigada visto que se apresenta como uma doença grave em pessoas imunodeprimidas (portadores da síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA), não tratados, indivíduos transplantados, paciente em tratamento quimioterápico ou em uso de drogas supressoras e gestantes). A toxoplasmose congênita frequentemente pode levar ao aborto espontâneo ou até mesmo resultar na formação de crianças com algum grau de atraso no desenvolvimento mental e/ou físicos, deste modo, a transmissão congênita pode ser muito mais importante do que se pensava, pois os parasitos encontrados na circulação sanguinea são capazes de infectar as células endoteliais dos vasos e os tecidos circunjacentes, podendo resultar no encistamento do T. gondii. Atualmente a toxoplasmose vem sendo investigada devido a sua associação a inúmeras outras doenças, assim, estudos sobre a evolução da infecção por T. gondii em diferentes tipos de células hospedeiras se fazem necessários para uma abordagem terapêutica adequada. Ao invadir a célula hospedeira o parasito possui a capacidade de recrutar as mitocôndrias promovendo mudanças na organização mitocondrial ao longo da progressão da infecção, garantindo um ambiente favorável a sua multiplicação. Diante disso, investigamos se o parasito possui a capacidade de interferir no metabolismo mitocondrial e na resposta apoptótica da célula endotelial. O presente trabalho teve como objetivo analisar o metabolismo mitocondrial através da respirometria de alta-resolução e da resposta apoptótica através do western blotting das células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) infectadas por 2, 6 e 20 horas por taquizoítos de T. gondii. A respirometria de alta-resolução revelou que o parasito interfere no metabolismo energético da célula hospedeira. A análise do conteúdo de proteínas da família Bcl-2 por western blotting revelou maior estímulo apoptótico no tempo inicial de infecção, quando comparado aos demais tempos. Os resultados dos conteúdos de caspase 3, proteína efetora da apoptose, não demonstrou diferença nos tempos iniciais de infecção Entretanto, em tempos mais tardios, o conteúdo de caspase 3 mostrou-se significativamente aumentado quando comparado às HUVEC não infectadas. A dinâmica de replicação do parasito foi observada através do monitoramento pelo sistema Time-Lapse Nikon BioStation IMQ em tempo real das células infectadas por T.gondii. Portanto, nossos resultados sugerem que o protozoário ao recrutar as mitocôndrias da célula hospedeira interfere no metabolismo mitocondrial e na modulação da apoptose para garantir um ambiente favorável a sua multiplicação. / Toxoplasmosis is a widespread zoonosis that affects more than a third of the world population and of great public health importance. Most human infections with Toxoplasma gondii are asymptomatic. Toxoplasmosis is widely investigated since it presents itself as a serious disease in immunocompromised persons (holders of acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), untreated, transplant recipients, patients undergoing chemotherapy or suppressing drugs and pregnant). Congenital toxoplasmosis can often lead to miscarriage or even result in the formation of children with some degree of developmental delay mental and / or physical, thus congenital transmission may be much more important than previously thought, because the parasites found In the bloodstream are able to infect endothelial cells of blood vessels and surrounding tissues, which may result in encystment T. gondii. Currently toxoplasmosis has been investigated because of their association with other diseases, so, studies of the evolution of T.gondii infection in different types of host cells are necessary for an adequate therapeutic approach. To invade the host cell, the parasite has the ability to recruit mitochondria promoting changes in mitochondrial organization along the progression of infection, ensuring a favorable environment for their multiplication. Therefore, we investigated whether the parasite has the ability to interfere with mitochondrial metabolism and apoptotic response of endothelial cells. This study aimed to analyze the mitochondrial metabolism by high-resolution respirometry and apoptotic response by western blotting of endothelial cells of human umbilical vein (HUVEC) infected for 2, 6 and 20 hours per tachyzoites of T. gondii. The high-resolution respirometry revealed that the parasite interferes with the energy metabolism of the host cell. The analysis of the family protein content of Bcl-2 by western blotting revealed higher apoptotic stimulus at the initial time of infection, as compared to other times. The results of the contents of caspase 3 protein effector of apoptosis, showed no difference in the initial days of infection However, in more recent times, the content of caspase 3 was significantly increased when compared to non-infected HUVEC. The dynamics of parasite replication was observed by monitoring the system Time-Lapse Nikon BioStation IMQ in real time from infected cells by T. gondii. Therefore, our findings suggest that mitochondria in recruiting protozoan host cell interfere with mitochondrial metabolism and in the modulation of apoptosis to ensure a favorable environment for multiplication.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A insuficiência cardíaca (IC) é a evolução final das várias formas de doenças cardiovascular, sendo resultado de modificações estruturais, metabólicas e de contratilidade miocárdica. A fim de compreender o papel na dinâmica do metabolismo cardíaco no estado basal e na sobrecarga de pressão, utilizamos os modelos de cre-lox com deleção específica no coração para substrato do receptor de insulina (IRS) e co-ativador do PPAR (PGC-1&#946;) e analisamos a estrutura cardíaca (histologia e estereologia), função cardíaca (ecocardiograma e técnica de Working heart), o metabolismo (isolamento de cardiomiócito e captação de glicose), ação hormonal (Western Blotting), expressão gênica (PCR-RT) de enzimas do metabolismo (lipídico, glicídico, da cadeia respiratória fatores transcricionais e hipertróficos) e a função mitocondrial. Verificamos, nos CIRS12KO, disfunção cardíaca grave, disfunção mitocondrial e prejuízo na expressão gênica das enzimas do metabolismo energético. Nos PGC-1&#946;KO observamos disfunção mitocondrial e alteração de expressão gênica das enzimas do metabolismo energético quando submetidos à sobrecarga de pressão. Através do estudo do metabolismo cardíaco e da expressão gênica nestes diferentes modelos conseguimos explorar as vias metabólicas que levam a hipertrofia compensada à IC. Sugerimos que o mecanismo responsável pela descompensação seja a disfunção mitocondrial em conseqüência à alteração da expressão gênica. E que IRS e o PGC-1&#946; são fatores chaves da dinâmica cardíaca, e que são indispensáveis para a estrutura e funcionamento cardíaco. Além de representar alvo promissor para limitar a transição da hipertrofia cardíaca compensada a insuficiência cardíaca. / Heart failure (HF) is the end stage of different types of cardiovascular diseases and it is characterized by changes in the metabolic and myocardial contractility. We use the models cre-lox with specific knockout for insulin receptor substrate (IRS) and co-activator of PPAR (PGC-1b) (basal and pressure overload). The objective was understood the role in the dynamics of cardiac metabolism. We analyzed cardiac structure (histology and stereology), cardiac function (echocardiography and the working heart technique), metabolism (glucose uptake), hormonal action (Western Blotting), gene expression (RT-PCR) from enzyme metabolism (lipid, carbohydrates, respiratory chain, transcriptional and hypertrophic factors) and mitochondrial function. We found in CIRS12KO, severe cardiac dysfunction, mitochondrial dysfunction and reduction of gene expression. And in the PGC-1bKO when subjected to pressure overload, the progression to heart failure, with mitochondrial dysfunction, and alteration of gene expression from enzyme metabolism. The data show that changes on cardiac metabolism and gene expression in both models explain the metabolic pathways that lead to compensated hypertrophy to HF. We suggest that the mitochondrial dysfunction and the gene expression was possible mechanisms for HF. We conclude that IRS and PGC-1b are key factors of cardiac dynamics, which are essential to the structure and heart function. IRS and PGC-1b represent a promising target for limiting the transition from compensated cardiac hypertrophy to heart failure.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-02-17T19:43:31Z No. of bitstreams: 1 LucianaMariaAraujoRabelo_TESE.pdf: 3802625 bytes, checksum: 997bf48b7638b7c1490b5a664ca3194e (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-02-20T18:59:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LucianaMariaAraujoRabelo_TESE.pdf: 3802625 bytes, checksum: 997bf48b7638b7c1490b5a664ca3194e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T18:59:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LucianaMariaAraujoRabelo_TESE.pdf: 3802625 bytes, checksum: 997bf48b7638b7c1490b5a664ca3194e (MD5) Previous issue date: 2016-10-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / O c?ncer ? um termo utilizado para representar um conjunto de mais de 200 patologias, incluindo tumores malignos de diferentes localiza??es. V?rios s?o os mecanismos que contribuem para a carcinog?nese: sinal proliferativo sustentado, desregula??o da energia celular, evas?o a apoptose, indu??o a angiog?nese, replica??o ilimitada, entre outros. Dentre os principais tipos de c?ncer existentes, o c?ncer de pele se destaca: surge nos melan?citos e ? o mais frequente no Brasil, correspondendo a 30% de todos os tumores malignos registrados no Pa?s. Melanomas em est?gio inicial podem, na maioria das vezes, ser tratados apenas com cirurgia, por?m os c?nceres mais avan?ados requerem outros tratamentos. Neste trabalho, um inibidor de tripsina do tipo Kunitz foi purificado de sementes da leguminosa Mimosa regnellii Benth (ITJ), parcialmente caracterizado e avaliado quanto sua toxicidade frente a linhagens de c?lulas tumorais, atuando especificamente com um IC50 de 0,65 ?M em linhagem celular B16-F10, n?o apresentando toxicidade frente a linhagens de c?lulas n?o transformadas. Sua capacidade de induzir morte celular pela via de apoptose em c?lulas de melanoma de camundongo B16-F10 tamb?m foi avaliada, atrav?s de citometria de fluxo com os marcadores Anexina V-FITC/PI, induzindo cerca de 45% das c?lulas a apoptose. Al?m disso, o inibidor tamb?m foi avaliado quanto a sua capacidade de: alterar o potencial de membrana mitocondrial, visualizado por experimentos em citometria de fluxo utilizando a sonda Rodamina123 e microscopia confocal com o marcador Mitotracker Red, onde foi capaz de alterar de forma significativa o ??m; Liberar esp?cies reativas de oxig?nio e nitrog?nio, atrav?s de sondas espec?ficas visualizadas por t?cnicas de microscopia, causando libera??o de ROS na concentra??o de IC50, por?m n?o influenciando libera??o de ERNs; Liberar c?lcio citos?lico, evento que influencia na ativa??o de apoptose, com efeito significativo em c?lulas B16-f10; Inibir atividade angiog?nica de c?lulas endoteliais de coelho, atrav?s de experimentos de inibi??o de forma??o de novos vasos em matrigel, an?lise da express?o de VEGF por t?cnicas de western Blotting e redu??o da express?o de IL-6 analisado por microscopia confocal; Inibir o processo de migra??o celular em ensaio de indu??o de ferimento e an?lise em microscopia e, por fim, a alterar a morfologia celular de B16-F10, analisada por incuba??o com anticorpos espec?ficos para componentes da matriz extracelular e filamentos intermedi?rios das c?lulas de melanoma, realizados em microscopia de fluoresc?ncia. Todos esses resultados reunidos favorecem a proposi??o de um poss?vel mecanismo de a??o de ITJ na indu??o de morte celular por apoptose em c?lulas B16-F10, onde o inibidor atuaria inicialmente aumentando os n?veis de c?lcio citos?lico e ROS, alterando posteriormente a express?o de p53 em 36h de incuba??o, que agiriam alterando o metabolismo mitocondrial, ativando vias de apoptose dependentes da participa??o de caspases; ITJ tamb?m atuaria inibindo processos migrat?rios at? 18 horas de exposi??o, al?m de influenciar de forma tardia na inibi??o do processo angiog?nico in vitro. Estes resultados sugerem que ITJ apresenta potencial para ser utilizado como f?rmaco em tratamento adjuvante contra melanomas, devido a sua especificidade e baixa dosagem quando comparado a outras mol?culas bioativas. / Cancer is a term used to represent a set of more than 200 diseases, including malignant tumors of different localizations. There are several mechanisms that contribute to carcinogenesis: sustained proliferative signals, deregulation of cellular energy, evasion of apoptosis, angiogenesis induction and unlimited replication, among others. Among the main types of cancer, skin cancer stands out: arises in melanocytes and is the most common in Brazil, accounting for 30% of all malignant tumors registered in the country melanomas at an early stage can, in most cases,. It is treated with surgery, but the most advanced cancers require other treatments. In this work a Kunitz-type trypsin inhibitor was purified from Mimosa regnellii Benth (ITJ) legume seeds, partially characterized and evaluated for their toxicity front tumor cell lines, specifically acting with an IC50 of 0.65 ?M in B16-F10 cell line, showing no toxicity compared to non-transformed cell lines. Its ability to induce cell death by apoptosis pathway in mouse B16-F10 melanoma cells was evaluated by flow cytometry with Annexin V-FITC / PI markers, inducing about 45% apoptosis of cells. In addition, the inhibitor was also evaluated for their ability to: change the mitochondrial membrane potential, visualized by flow cytometry experiments using Rhodamine123 probe and confocal microscopy with Mitotracker Red marker, which was able to significantly change the ??m; Release of ROS and RNs through specific probes visualized by microscopy techniques, causing release of ROS in the concentration of IC50, but not influencing release RNS; Liberation of cytosolic calcium, an event that influences the apoptosis activation, with significant effect on B16-F10 cells; Inhibition of angiogenic activity on rabbit endothelial cells through experiments of inhibition of new vessel formation in Matrigel, analysis of VEGF expression by western blotting techniques and reduction of IL-6 expression analyzed by confocal microscopy; Inhibition of cell migration process in wound induction assay and microscopy analysis and, finally, to alter the cellular morphology of B16-F10 analyzed by incubation with specific antibodies to extracellular matrix components and intermediate filaments of melanoma cells, conducted in fluorescence microscopy. All these combined results favor the proposal of a possible ITJ action mechanism in the induction of cell death by apoptosis in B16-F10 cells, where the inhibitor initially act by altering the p53 expression in 36h of incubation, increasing calcium cytosolic levels and ROS, which would act changing the mitochondrial metabolism, activating dependent apoptosis pathways of caspase participation; ITJ also act by inhibiting migration processes up to 18 hours of exposure, as well as influence belatedly in inhibiting the angiogenic process in vitro. These results suggest that ITJ has the potential to be used as a drug adjuvant treatment for melanomas, due to their specificity and low-dose when compared to other bioactive molecules.