Mycobacterium abscessus est une mycobactérie responsable principalement d’infections pulmonaires, en particulier chez les patients atteints de mucoviscidose ou de dilatation des bronches. M. abscessus est naturellement résistante aux antituberculeux, laissant peu d’options thérapeutiques. Le traitement de référence associait classiquement un aminoside, un macrolide (clarithromycine) et une β-lactamine (céfoxitine ou imipénème), avec un taux de succès d’environ 50 %. Cependant, des souches résistantes à la clarithromycine sont fréquemment isolées, remettant en cause l’utilisation de cet antibiotique. M. abscessus produit naturellement une β-lactamase à large spectre (BlaMab) mais les mécanismes d’action des β-lactamines n’ont pas été étudiés chez cette espèce, ce qui constitue une entrave à l’optimisation des traitements par cette classe d’antibiotiques. Le premier objectif était d’identifier et de caractériser les cibles des β-lactamines chez cette espèce. Inhibant la dernière étape de polymérisation du peptidoglycane, les cibles potentielles des β-lactamines sont trois familles d’enzymes : les D,D-transpeptidases et les D,D­carboxypeptidases appartenant à la famille des protéines de liaison à la pénicilline (PLP), ainsi que les L,D-transpeptidases qui sont majoritairement responsables de cette dernière étape chez cette espèce. Pour identifier les cibles, des mutants résistants aux β-lactamines ont été sélectionnés à partir de la souche de référence M. abscessus CIP104536 et d’un dérivé portant une délétion du gène blaMab (∆blaMab). Pour les deux souches, l’émergence de la résistance aux β-lactamines a requis de multiples étapes, ce qui constitue un atout pour leur utilisation thérapeutique. Pour les mutants obtenus à partir de la souche CIP104536, les analyses phénotypiques ont montré que la résistance aux β-lactamines n'est pas due à une augmentation de l’efficacité catalytique de BlaMab, à une surproduction de cette enzyme, ou à une diminution de la perméabilité. Le séquençage des génomes de mutants résistants n’a pas révélé de mutations dans les gènes codant pour les L,D-transpeptidases, mais des mutations ont été trouvées dans des gènes codant pour deux PLP. D’autres mutations se situent dans des gènes codant en particulier pour des protéines non caractérisées. L’acquisition de la résistance pourrait donc dépendre de mutations affectant des facteurs essentiels à l’activité des cibles des β­lactamines. Le deuxième objectif était d’étudier et de comparer l’activité in vitro des β-lactamines sur M. abscessus. Des expériences de bactéricidie et d’activité intracellulaire chez le macrophage infecté ont été effectuées pour les souches CIP104536 et ∆blaMab. Parmi les antibiotiques étudiés (amikacine, céfoxitine, imipénème, ceftaroline, et amoxicilline), l’imipénème est le plus efficace sur les deux souches. Sur la souche ∆blaMab, l’association d’imipénème et d’amikacine est bactéricide. En l’absence de BlaMab, l’amoxicilline est aussi efficace que l’imipénème. L’avibactam augmente l’activité de la ceftaroline mais l’inhibition de BlaMab est seulement partielle en intracellulaire. Les résultats obtenus in vitro montrent que l’imipénème est supérieur à la céfoxitine pour des concentrations atteignables dans le sérum. L’inhibition de BlaMab pourrait augmenter l’efficacité de l’imipénème et d’autres composés utilisés pour traiter les infections pulmonaires à M. abscessus. / Mycobacterium abscessus is an important pathogen responsible for pulmonary infections in cystic fibrosis patients or in patients suffering from bronchiectasis. The treatment of infections due to M. abscessus is complicated since this bacterium is naturally resistant to the anti­tuberculous agents. The recommended treatment includes an aminoglycoside, a macrolide (clarithromycin) and a β-lactam (cefoxitin or imipenem), with a success rate of about 50 %. However, strains resistant to clarithromycin are frequently isolated, questioning the use of this antibiotic. M. abscessus naturally produces a broad spectrum β-lactamase (BlaMab) but the mechanisms of action of the β-lactams have not been studied in this species, impairing the optimization of the treatment by these antibiotics. The first objective was to identify and characterize the targets of β-lactams antibiotics in this species. Inhibiting the final stage of the peptidoglycan polymerization, the potential targets of β-lactams are three families of enzymes: the D,D-transpeptidases and D,D­carboxypeptidases belonging to the family of penicillin-binding proteins (PBP), and the L,D-transpeptidases which are mainly responsible for this final stage in this species. To identify the targets, mutants resistant to β-lactams have been selected from the reference strain M. abscessus CIP104536 and from its β-lactamase-deficient derivative ΔblaMab. For both strains, the emergence of resistance to β­lactams has required multiple steps, which is an advantage for the therapeutic use of these antibiotics. For the mutants derived from the strain CIP104536, phenotypic analyzes showed that the resistance to β-lactams is not due to an increase in the catalytic efficiency of BlaMab, to an overproduction of this enzyme, or to a decrease in permeability. Genomes sequencing of the resistant mutants did not reveal mutations in the genes encoding the L,D-transpeptidases, but mutations have been found in genes encoding two PBPs. Other mutations have been detected in genes encoding uncharacterized proteins. Acquisition of resistance could therefore depend on mutations affecting key factors essential for the activity of β-lactams targets. The second objective was to study and compare the in vitro activities of β-lactams against M. abscessus. Bactericidal experiments and intracellular activity in the infected macrophage were performed for the strains CIP104536 and ΔblaMab. Among the antibiotics tested (amikacin, cefoxitin, imipenem, ceftaroline, and amoxicillin), imipenem is the most effective agent against the two strains. Combination of imipenem and amikacin was bactericidal against the ΔblaMab mutant. In the absence of BlaMab, amoxicillin was as active as imipenem. Avibactam increased the intracellular activity of ceftaroline but inhibition of BlaMab was only partial intracellularly. Evaluation of the killing and intracellular activities of β-lactams indicates that imipenem is superior to cefoxitin at clinically achievable drug concentrations. Inhibition of BlaMab could improve the efficacy of imipenem and extend the spectrum of drug potentially useful to treat pulmonary infections.

Este trabalho analisou as condições microbiológicas em que se encontram os alimentos fornecidos aos cães errantes que se localizam na reserva florestal da Cidade Universitária Armando de Salles Oliveira Universidade de São Paulo. Trata-se de sobras de alimentos que foram consumidos em restaurantes locais e são fornecidos diariamente aos animais por um voluntário. Foram recolhidas amostras desses alimentos ao longo de cinco dias, e, em cada dia, foram escolhidas seis porções procurando a maior representatividade das amostras. Foram pesquisados os seguintes microrganismos: coliformes totais e termotolerantes, Staphylococcus coagulase positiva, Salmonella spp., Listeria monocytogenes e Mycobacterium spp. Para coliformes totais (Log NMP/g) nas amostras de produtos cárneos a média foi 4,1, variando de 2,4 até >7,0, e para o grupo de outros alimentos a média foi 3,8 variando de 2,0 até 5,7. Para os coliformes termotolerantes (Log NMP/g) nas amostras de produtos cárneos a média foi 3,6, variando de 1,2 até 7,0; e para o grupo de outros alimentos a média foi 3,2, variando de 1,0 até 5,7. Para Staphylococcus coagulase positiva (Log UFC/g) nas amostras de produtos cárneos a mediana (distribuição dos dados não foi normal) foi <2 e o valor máximo foi 5,4; e para o grupo de outros alimentos a mediana foi <2 e o valor máximo 5,8. Houve ausência de Salmonella spp. em 25 g em todas as amostras, para Listeria monocytogenes 33,3% (10/30) das amostras foram positivas e 3,3% (1/30) das amostras houve presença de Mycobacterium spp. não pertencente aos complexos M. tuberculosis, M. avium-intracelulare. Considerando a susceptibilidade dos cães aos patógenos transmitidos por alimentos e as incertezas sobre dose-resposta aos desafios microbiológicos e, considerando ainda, o direito dos animais à alimentos seguros e saudáveis, conclui-se que os alimentos ofertados aos cães na CUASO apresentaram características microbiológicas insatisfatórias, interpretado pelos padrões microbiológicos da legislação para alimentação humana tendo em vista a inexistência de padrões específicos para alimentação animal. / This study analyzed the microbiological conditions of the food provided stray dogs that are located in the University of São Paulo forest reserve. These foods are leftovers that were eaten in local restaurants and are provided daily to the animals by a volunteer. Samples were taken of these foods during five days, and every day six portions were selected for representative samples. We searched the following microrganisms: total and fecal coliforms, coagulase positive Staphylococcus, Salmonella spp., Listeria monocytogenes and Mycobacterium spp. For total coliforms (Log MPN/g) in samples of meat products, the average was 4.1, ranging from 2.4 to >7.0 and the group of other foods, the average was 3.8 ranging from 2.0 up to 5.7. For fecal coliforms (Log MPN/g) in samples of meat products, the average was 3.6, ranging from 1.2 to 7.0, and the group of other foods, the average was 3.2, ranging from 1.0 to 5.7. Staphylococcus coagulase positive (Log CFU/g) in samples of meat products the median (data distribution was not normal) was <2 and the maximum value was 5.4, and the other food group median was <2 and the value 5.8 max. There was no Salmonella spp. 25 g in all samples, Listeria monocytogenes 33.3% (10/30) of samples were positive, and 3.3% (1/30) samples showed the presence of Mycobacterium spp. not belonging to the complex M. tuberculosis, M. avium-intracellulare. Considering the susceptibility of dogs to foodborne pathogens and uncertainties about dose-response to microbial challenges, and considering also the right of animals to safe and healthy food, it is concluded that the food offered to dogs in CUASO showed unsatisfactory microbiological patterns, by microbiological standards for human food legislation due absence of specific standards for animal feed.

Introdução: A tuberculose é uma infecção curável causada pelo Mycobacterium tuberculosis. Requer tratamento prolongado e a combinação de vários fármacos implicando em efeitos colaterais que podem levar pacientes ao abandono do tratamento. Formulações de droga de liberação controlada como nanopartículas, nanoemulsões ou lipossomos têm tido sucesso contra doenças infecciosas. Em especial, brometo de dioctadecildimetilamônio (DODAB) disperso em água pode formar lipossomos ou vesículas grandes (LV) ou fragmentos de bicamada (BF) que podem carrear drogas hidrofóbicas ou hidrofílicas e ademais, podem atuar como microbicidas. Objetivos: determinar atividade do DODAB contra Mycobacterium tuberculosis e M. smegmatis tanto isoladamente como em combinação com duas drogas tuberculostáticas, rifampicina (RIF) e isoniazida (ISO); determinar a incorporação de RIF e ISO em dispersões de DODAB. Material e Métodos: Dispersões de DODAB foram obtidas por vortexação (LV) ou sonicação (BF) e sua interação com as drogas foi avaliada por espectros óticos das drogas, espalhamento de luz dinâmico para medida de distribuição de tamanhos e potencial-zeta e diálise para determinação de incorporação dos fármacos em DODAB LV ou BF. Viabilidade de M. smegmatis ou M. tuberculosis foi determinada por contagem de viáveis em função de concentração de DODAB. Combinações DODAB/droga contra micobactérias foram avaliadas por determinação de concentração inibitória minima (CIM), em &#181;g/ml. Resultados: DODAB mata M. smegmatis a partir de 4 &#181;M de concentração e 1 h de interação e M. tuberculosis, em 100 &#181;M e 120 h de interação. ISO resultou permeável através da bicamada de DODAB em contraste com RIF que adsorveu irreversivelmente nas bicamadas, resultando em 75% de incorporação com 0.1 e 2 mM de droga e DODAB, respectivamente. CIM de RIF contra M. smegmatis foi 32 e, em combinação com 2 de DODAB caiu para 2. Para M. tuberculosis CIM de 0,015 caiu para 0,007 em combinação com 4 DODAB. A combinação foi sinérgica contra M. smegmatis e de ação independente contra M. tuberculosis. / Introduction: Tuberculosis is potentially curable but remains a serious public health problem with large numbers of infected people in several countries. The long time that the patient should receive medication, associated with a large number of adverse effects often cause treatment failure. Nanoparticles, liposomes and emulsions have been used successfully in antibacterial therapy. In particular, dioctadecyldimethylammonium bromide (DODAB) bilayers in form of bilayer fragments (BF) or vesicles (LV) provided adequate environment for solubilization and stabilization of several drugs with an additional advantage: they acted as antimicrobial agents themselves. Objectives: investigation of DODAB bactericidal activity against mycobacteria, determination of entrapment efficiency for rifampicin (RIF) and isoniazid (ISO) in DODAB dispersions and determination of the DODAB/drug activity against Mycobacterium smegmatis and tuberculosis. Material and Methods: DODAB dispersions were obtained by sonication of dioctadecyldimethylammonium bromide (DODAB) synthetic lipid (BF)or by vortexing (LV) the lipid powder in aqueous solution. The physic-chemical characteristics of drugs in DODAB dispersions were determined from optical spectra and dynamic light scattering for evaluating size distribution and zeta-potentials. Drug incorporation in DODAB dispersions was determined from dialysis. Cell viability was determined from plating and colony forming unities (CFU) counting as a function of [DODAB]. Minimal inhibitory concentration (MIC) was obtained for drug or DODAB/drug combinations. Results: DODAB killed M. smegmatis and tuberculosis from 4¨&#181;M (1 h interaction) and 100 &#181;M (120 h interaction), respectively. Rifampicin drug particles above its solubilization limit could be solubilized by BF at 0.5 mM lipid. LV was leaky to ISO whereas RIF could be incorporated in BF or LV bilayer at high percentiles (0.1 mM RIF in 2 mM DODAB BF or LV). MIC for combination DODAB/RIF was 2/2 or 4/0.007 &#181;g/mL whereas synergism index was 0.5 or 1.0 against M. smegmatis or M. tuberculosis, respectively. DODAB and RIF acted synergistically when tested against M. smegmatis.

INTRODUÇÃO: A tuberculose é um problema grave de saúde pública, acometendo indivíduos em todas as faixas etárias e em todos os estratos socioeconômicos. Apesar de estarem sob grande risco de adoecimento, as crianças carecem de meios diagnósticos sensíveis e específicos. Neste estudo avaliou-se em crianças a acurácia de um teste baseado na dosagem de interferon-gama liberado por linfócitos após estímulo com antígenos específicos do Mycobacterium tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold In Tube® [Cellestis, Carnegie, Austrália] ).MÉTODO: Foram incluídas no estudo 184 crianças não infectadas e 11 crianças com infecção pelo Mycobacterium tuberculosis. Todas as crianças receberam previamente o BCG. Foram excluídas crianças com comprometimento do sistema imunológico. Obteve-se amostra de sangue de cada criança, e o material foi processado conforme as instruções do laboratório fabricante. O desempenho do teste foi avaliado pela construção de uma curva de características operacionais (ROC). RESULTADOS: Do total de 184 crianças sem infecção pela micobatéria, 74 (40,2%) eram do sexo feminino, e 130 (70,6%) tinham menos de quatro anos de idade. A idade média neste grupo foi de 35 meses. Seis (3,2%) crianças apresentaram resultado indeterminado do teste, uma criança (0,5%) apresentou um resultado positivo e 177 (96,2%) apresentaram resultado negativo. No grupo de 11 crianças infectadas, sete (63,0%) eram meninas, e a idade média era de 58,5 meses. Duas (18,0%) crianças neste grupo apresentaram resultado negativo do teste. A curva ROC obtida evidenciou uma área sob a curva de 0,876 (I. C 95% - 0,82 a 0,92; p<0,001), refletindo o desempenho preditivo elevado do teste. A sensibilidade do teste foi de 81,8% (IC 95% - 48,2% a 97,2%) e a especificidade de 98,8% (IC 95% - 96,0 a 99,8%), o valor preditivo positivo foi de 81,8% (IC 95%: 46,3% a 97,4%) e o valor preditivo negativo foi de 98,9% (IC 95%: 96,0% a 99,8%). CONCLUSÕES: Neste estudo o teste mostrou ter uma boa acurácia no diagnóstico da infecção pelo Mycobaterium tuberculosis em crianças previamente vacinadas com o BCG, e sua utilização rotineira pode contribuir para a melhor avaliação de crianças expostas a um doente bacilífero e na tomada de decisões sobre a introdução de quimioprofilaxia ou tratamento. / BACKGROUND: Tuberculosis is a major public health problem, affecting people from all ages and diverse socioeconomic incomes. Despite the high risk that children have to develop the disease, accurate methods for diagnosis are not yet available. In this study the accuracy of an interferon-gamma release assay (QuantiFERON-TB Gold In Tube® [Cellestis, Carnegie, Australia]) was evaluated for the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection in children. METHODS: 195 children were evaluated, 184 children without mycobacterial infection, and 11 children infected by the Mycobacterium tuberculosis. All the children had been previously vaccinated with BCG. Immunocompromised children were excluded from the study. A blood sample was obtained from each child, and it was processed according the manufacturer´s instructions. The performance of the assay was evaluated by a receiver operating characteristic (ROC) curve. RESULTS: In the group of 184 noninfected children, 74 (40.2%) were female and 130 (70.6%) were younger than four years old. The mean age in this group was 35 months. Six children (3.2%) had indeterminate test result, one child (0.5%) had a positive test result, and 177 (96.2%) children had negative test results. In the group of 11 infected children, seven (63.0%) were female, and the mean age in this group was 58.5 months. Two children (18.0%) in this group had a negative test result. The ROC curve determined an area under the curve of 0.876 (95% CI 0.82 to 0.92; p< 0.001), disclosing a high positive predictive value for the test. The assay sensibility was 81.8% (95% CI, 48.2% to 97.2%) and the assay specificity was 98.8% (95% CI, 96.0% to 99.8%), the positive predictive value was 81.8% (95% CI: 46.3% to 97.4%) and the negative predictive value was 98.9% (95% CI: 96.0% to 99.8%). CONCLUSIONS: In this study, the accuracy of the assay was high for the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection in children previously vaccinated with BCG. The use of this assay for the routine evaluation of children exposed to the disease may help physicians to decide on whether to start chemoprophylaxis or tuberculosis treatment.

A legislação permite o uso de leite cru para fabricar queijos com maturação superior a 60 dias em temperatura acima de 5°C, mas falta comprovação científica sólida sobre a eficácia desse processo quanto à inativação de importantes patógenos que podem estar presentes no leite, como o Mycobacterium bovis; além disso, não há metodologia oficial para pesquisa deste agente em alimentos. Desta forma, este trabalho se propôs a estabelecer um protocolo para estudar a curva de inativação do Mycobacterium bovis durante a cura do queijo. Foram fabricadas três partidas de queijo do tipo parmesão com leite pasteurizado e contaminado com uma cepa de Mycobacterium bovis isolada de bovinos abatidos no estado de São Paulo. O queijo foi curado a 18°C e analisado semanalmente até o 63ºdia. As amostras foram submetidas à diluição decimal seriada, semeadas em duplicata em meio Stonebrink-Leslie, acrescido de antibióticos, e incubadas a 37°C por 45 dias. Os resultados de um queijo foram perdidos por contaminação por fungos. O valor D18°C médio, ponderado pelas incertezas, foi de 37,5 dias ± 5,3 dias. Esse resultado indica a necessidade de outros estudos para ampliar o número de queijos estudados e obter, portanto, um resultado mais representativo do efeito da cura sobre o decaimento da população de M. bovis. Há também necessidade de melhorar o poder inibitório do meio de cultura para evitar perdas devido ao crescimento de fungos. / The legislation that regulates the specific conditions for the consumption of food allows the use of raw milk to produce cheese matured over 60 days at temperatures above 5°C; however, the effectiveness of this process in the inactivation of important pathogens that may be present in milk, such as Mycobacterium bovis, lacks solid scientific evidence. In addition, there is no official methodology for the research of this pathogen in foods. Considering that context, this study proposes to establish a protocol to study the inactivation curve of Mycobacterium bovis during cheese curing. Three matches were made with parmesan cheese and pasteurized milk contaminated with a strain of Mycobacterium bovis isolated from cattle slaughtered in the state of São Paulo. The cheese was cured at 18°C and analyzed weekly until the 63th day. The samples were submitted to decimal serial dilution, plated in duplicate in the Middle Stonebrink-Leslie, plus antibiotics, and incubated at 37° C for 45 days. The results of a single cheese were lost to fungal contamination. The value D 18°C average, weighted by the uncertainties, was 37.5 days ±5.3 days. This result indicates the need for further studies to expand the number of cheeses studied and to therefore obtain a more representative result of the effect of healing on the decay of the population of M. bovis. There is also the need to improve the inhibiting power of the culture medium to avoid losses due to fungal growth.

A biodiversidade de microrganismos encontrados nos ecossistemas constitui excelentes fontes para a descoberta de moléculas farmacologicamente ativas. Neste estudo, 32 isolados de actinobactérias coletadas do solo e 51 isolados de fungos de manguezais da costa brasileira foram avaliados quanto à ação antifúngica, antimicobacteriana, leishmanicida e tripanossomicida. Extratos orgânicos obtidos a partir do sobrenadante da cultura dos isolados foram testados e cinco apresentaram concentrações inibitórias mínimas iguais ou inferiores a 400 mg/mL sobre fungos patogênicos e dois demonstraram expressiva ação contra a forma tripomastigota de Trypanosoma cruzi. Para a forma promastigota de Leishmania amazonensis e Mycobacterium tuberculosis H37Rv, os extratos não foram efetivos. Os resultados indicam que fungos isolados de manguezais representam boas perspectivas na investigação de novos agentes antimicrobianos. / The biodiversity of microorganisms found in the ecosystems provide excellent perspectives for the discovery of pharmacologically active molecules. In this study, 32 actinobacteria from the soil and 51 fungi from the mangrove swamps of the Brazilian coast were analyzed with respect to their antifungal, antimycobacterial, leishmanicidal and trypanocidal actions. Organic extracts from the supernatant of the culture of the microorganisms were analyzed and five extracts presented MICs equal or less than 400 mg/mL over the pathogenic fungi and two presented significant action against the trypomastigote of Trypanosoma cruzi. The results indicate that fungi from mangrove swamps present promising perspectives for the research of new antimicrobial agents.

Orientador: Ida Maria Foschiani Dias Batista / Resumo: As bactérias Mycobacterium leprae e mais recentemente Mycobacterium lepromatosis são os agentes etiológicos da hanseníase que causam sérios danos neuromotores e podem evoluir para incapacidades irreversíveis. A incidência de casos novos de hanseníase em todo o mundo foi de 2.77/100 mil habitantes. No Brasil, em 2016, foram 2.665 casos somente do Estado de Mato Grosso na Amazônia Meridional, esses valores representam 88,9/100 mil habitantes no índice geral de detecção para a hanseníase. Foram capturados animais silvestres naturalmente infectados por Mycobacterium leprae e Mycobacterium lepromatosis das Ordens Cingulata, Didelphimorphia, e Rodentia, todos estavam em fragmentos florestais próximos a grupos humanos. Um total 327 amostras de biópsias foram avaliados, dos quais recuperou-se 254, sendo 187 amostras de orelhas, 77 baço, e 63 fígado de 187 animais silvestres das Ordens Cingulata, Rodentia e Didelphimorphia. Após extraídos DNA e RNA de baço, fígado, e orelha, foram avaliados por qPCR para os genes RLEP (enumerador) e 16S rRNA (viabilidade). Três gêneros apresentaram positividade nas orelhas para ambos os genes RLEP e 16S rRNA, sendo 18% para Dasypus (Cingulata), 60% para Proechimys (Rodentia) e 64% para Marmosa (Didelphimorphia). Enquanto que nos testes utilizando PCR multiplex obteve-se 12 amostras positivas para o gene henM referente a Mycobacterium lepromatosis, dos 13 gêneros avaliados apenas Proechimys e Marmosa apresentaram presença para o bacilo. A presença freq... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bacteria Mycobacterium leprae and more recently Mycobacterium lepromatosis are the etiological agents of leprosy that cause serious neuromotor damage and can progress to irreversible impairments. The incidence of new cases of leprosy worldwide was 2.77 / 100 thousand inhabitants. In Brazil, in 2016, there were 2,665 cases of the State of Mato Grosso alone in the Southern Amazon, which represent 88.9 / 100 thousand inhabitants in the general detection index for leprosy. Wild animals naturally infected with Mycobacterium leprae and Mycobacterium lepromatosis from the Cingulata, Didelphimorphia, and Rodentia orders were all captured in forest fragments close to human groups. A total of 327 biopsy specimens were evaluated, of which 254 were recovered, being 187 samples of ears, 77 spleen, and 63 liver of 187 wild animals of the Orders Cingulata, Rodentia and Didelphimorphia. After extracting DNA and RNA from spleen, liver, and ear, they were assessed by qPCR for the RLEP (enumerator) and 16S rRNA (viability) genes. Three genera presented positivity in the ears for both RLEP and 16S rRNA genes, 18% for Dasypus (Cingulata), 60% for Proechimys (Rodentia) and 64% for Marmosa (Didelphimorphia). While in the tests using multiplex PCR, 12 samples were positive for the henM gene for Mycobacterium lepromatosis, of the 13 genera evaluated only Proechimys and Marmosa showed presence for the bacillus. The frequent presence of man in the forest fragments where M. leprae or Mycobacterium lepro... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Considerando que os meios de cultura e as condições de incubação são os principais fatores para o sucesso do primo isolamento, além do método de descontaminação, quatro meios de cultura e três condições de incubação foram investigados. Noventa e sete amostras de lesões granulomatosas foram submetidas ao método de descontaminação com cloreto de 1-hexadecilpiridinio (HPC) a 1,5%, e semeadas em dois meios a base de ovo, Stonebrink e Löwenstein-Jensen com piruvato de sódio, e em dois meios a base de ágar, B83 e Middlebrook 7H11. Cada meio foi incubado a 37ºC por 90 dias em três condições de incubação, atmosfera com 10% de CO2, atmosfera normal e atmosfera com suposta tensão de CO2 obtida pela queima do algodão hidrófobo e fechamento do tubo com rolha de cortiça. O tipo de condição de incubação utilizado teve influência nos meios a base de ovo apenas no inicio da incubação (30 dias), mas nenhuma nos meios a base de ágar. A incubação em atmosfera com 10% de CO2 diminuiu o tempo de aparecimento da primeira colônia e aumentou o número de UFC. O meio B83 foi mais rápido no aparecimento das colônias e teve o maior sucesso de isolamento aos 30 dias, mas não houve diferença com os meios Stonebrink e Löwenstein-Jensen com piruvato, no sucesso de isolamento e número de UFC aos 60 e 90 dias. De acordo com os dados, em sete oportunidades houve isolamento de M. bovis apenas no meio de Stonebrink e em quatro apenas no B83, assim, sugere-se a utilização desses dois meios de cultura em paralelo, incubados em atmosfera com acréscimo de CO2 / Considering that the culture media and the incubation conditions are the main factors for the success of primary isolation, besides the decontamination procedure, four culture media and three incubation conditions were investigated. Ninety-seven samples of granulommatous lesions were submitted to the decontamination procedure by 1-hexadecylpyridinium chloride at 1,5% w/v, and inoculated on two egg-based media, Stonebrink and Löwenstein-Jensen with sodium pyruvate, and two agar-based media, B83 and Middlebrook 7H11. Each medium was incubated at 37ºC for 90 days in three incubation conditions, in air containing 10% CO2, in air, and in air with a supposed higher CO2 tension created by burning the hydrophobic cotton used to close the tubes and subsequently closing with a cork. The type of incubation condition used had influence on the egg-based media only at the beginning of incubation (30 days), but none on the agar-based media. The incubation in air containing 10% CO2 decreased the time to first appearance of colonies and increased the number of colonies. B83 medium showed a faster growth and detected more isolates at 30 days of incubation. However, there was no difference between B83, Stonebrink and Löwenstein-Jensen with pyruvate at 60 and 90 days of incubation. According to the data, seven M. bovis isolates grew only on Stonebrink and four only on B83, therefore, the use of both media, in parallel, incubated in air containing CO2 is suggested.

Apesar da incidência per capita da tuberculose (TB) ter se mantido estável em 2005, o número de novos casos que surgem a cada ano continua a aumentar no mundo todo. De acordo com a Organização Mundial de Saúde, foram estimados 9,4 milhões de novos casos de TB em 2008, dos quais 1,4 milhões eram HIV - positivos, e com 1,8 milhões de mortes - o equivalente a 4.500 mortes por dia. Fatores como migração, privação sócio-econômica, co-infecção TB-HIV e o aparecimento de cepas resistentes contribuíram para o aumento do número de casos de TB no mundo, principalmente nos países onde a TB já foi considerada erradicada, e criaram a necessidade do desenvolvimento de novas terapêuticas. Alvos moleculares específicos, que são essenciais para o patógeno, e ausentes no hospedeiro, como as enzimas da via do ácido chiquímico são alvos atraentes para o desenvolvimento de novas drogas antituberculose. Essa via leva à síntese de compostos aromáticos, como aminoácidos aromáticos, e é encontrada em plantas, fungos, bactérias e parasitas do phylum Apicomplexa, mas está ausente em humanos. No ano de 2000, foi comprovada a essencialidade dessa via para a viabilidade do bacilo, tornando todas essas enzimas alvos validados para estudo. A segunda enzima da via, deidroquinato sintase (DHQS), catalisa a conversão de 3-deoxi-D-arabino heptulosonato-7-fosfato em 3-deidroquinato, o primeiro composto cíclico. Neste trabalho, são descritos o requerimento de metais divalentes na reação e a determinação do mecanismo cinético da DHQS. Os parâmetros cinéticos verdadeiros foram determinados e, juntamente com os experimentos de ligação, o mecanismo rápido-equilíbrio aleatório foi proposto. O tratamento com EDTA aboliu completamente a atividade de DHQS, sendo que a adição de Co+2 e Zn+2 levam a recuperação total e parcial da atividade enzimática, respectivamente. O excesso de Zn+2 inibe a atividade DHQS, e os dados de ITC indicaram a presença de dois sítios seqüenciais de ligação, o que é consistente com a existência de um sítio secundário inibitório. O protocolo de cristalização foi estabelecido e experimentos em andamento proporcionarão a elucidação da estrutura tridimensional da DHQS, que irá beneficiar tanto o desenho de novos inibidores como uma análise detalhada dos rearranjos do domínio da proteína. Em conjunto, estes resultados representam um passo essencial para o desenho racional de inibidores específicos que podem fornecer uma alternativa promissora para um novo, eficaz, e mais curto de tratamento para TB. / Although the estimated per capita tuberculosis (TB) incidence was stable in 2005, the number of new cases arising each year is still increasing globally. According with World Health Organization, there were estimated 9.4 million new TB cases in 2008, from which 1.4 million were HIV-positive, with 1.8 million deaths total – equal to 4500 deaths a day. Migration, socio-economic deprivation, HIV co-infection and the emergence of extensively-resistance strains, have all contributed to the increasing number of TB cases worldwide, mainly in countries where it was once considered eradicated, and have created an urgent need for the development of new therapeutics against TB. Specific molecular targets, that are essential to the pathogen, and absent in the host, like the enzymes of the shikimate pathway, are attractive targets to development of new antitubercular drugs. This pathway leads to the biosynthesis of aromatic compounds, including aromatic amino acids and it is found in plant, fungi, bacteria and Apicomplexa parasites, but is absent in humans. In 2000, this pathway was proved to be essential to the viability of the pathogen, which validates all its enzymes as potential targets. The second enzyme of this pathway, dehydroquinate synthase (DHQS), catalyzes the conversion of 3-deoxy-D-arabinoheptulosonate 7-phosphate in 3-dehydroquinate, the first cyclic compound. In this work, we described the metal requirement and kinetic mechanism determination of the dehydroquinate synthase. The determination of the true kinetic parameters was performed, and, in addition to ligand binding experiments, the rapid-equilibrium random mechanism was determined. The treatment with EDTA abolished completely the activity of DHQS, and the addition of Co+2 and Zn+2 leads to full and partial recovery of enzyme activity, respectively. Excess of Zn+2 inhibits the DHQS activity, and the ITC data revealed two sequential binding sites, which is consistent with the existence of a secondary inhibitory site. The crystallization protocol was established and ongoing experiments will provide the three-dimensional structure of mtDHQS, which will benefit both the design of novel inhibitors as well as detailed analysis of domain rearrangements of protein. Taken together, these results represent an essential step for the rational design of specific inhibitors that can provide a promising alternative to a new, effective, and shorter treatment for TB.

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:06:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kim Vinicius.pdf: 1711922 bytes, checksum: 8cc4a90994011dd026aa6483a81d0384 (MD5) Previous issue date: 2013-11-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Exposure to Mycobacterium tuberculosis can trigger three distinct events in the human body, which are: elimination of bacilli; latent infection, where there is infection control, but not its elimination; or development of tuberculosis, when the immune response is insufficient to contain the infection. Undergraduate nursing students can become exposed to these bacteria, due to their curricula activities. The purpose of this study was to identify latent tuberculosis infection and its associated risk factors among undergraduate nursing students according to their college year. This is an epidemiological, cross-sectional, case detection study with primary collection of data on knowledge and situation of latent tuberculosis infection among first and last year undergraduate nursing students from the Federal University of Amazonas and the University of the State of Amazonas in which were conducted test release interferon-gamma (Quantiferon TB Gold in Test) and Tuberculin Test to detect TB infection . Data were analyzed using the Statistical Package program for the Social Sciences in univariate approaches for describing the distribution of variables, and bivariate approaches to identify how variables relate to each other and the associated risk factors within latent tuberculosis infection . The first year students test results showed positive in four cases simultaneously, while the last year students results detected both positive results in a single individual. The total of 38 positive test results was obtained in correspondence to 33 students at both universities. Statistically significant differences were detected between the first and last year students, and the age group with positive result for Tuberculin Test as well as latent infection, use of Tuberculin Test to guide treatment, sharing environments with patients and mandatory reporting of case tuberculosis situation with first or last year students. Data from this study allowed a profile analysis of the students and compared it between the groups of first and last years. We suggest Nursing Schools better preparation for learning more accurately about tuberculosis. / A exposição ao Mycobacterium tuberculosis pode desencadear três eventos distintos no organismo humano, quais sejam: eliminação dos bacilos; infecção latente, onde há controle, mas não eliminação da infecção; ou adoecimento por tuberculose, quando a resposta do sistema imune é insuficiente para conter a infecção. Entre estudantes de enfermagem estas ocorrências são possíveis, visto as situações de contágio aos quais são expostos em atividades curriculares. O objetivo deste trabalho foi identificar infecção latente por tuberculose e seus fatores associados em acadêmicos do curso de graduação em enfermagem, conforme a situação de iniciante ou finalista. Trata-se de um estudo epidemiológico, transversal, de detecção de caso, com coleta primária de dados sobre conhecimentos e situação de infecção latente por tuberculose de acadêmicos iniciantes e finalistas dos cursos de enfermagem da Universidade Federal do Amazonas e da Universidade do Estado do Amazonas, nos quais foram realizados Ensaios de Liberação de Interferon-gama (Quantiferon-TB Gold In Test) e Prova Tuberculínica a fim de detectar infecção por tuberculose. Os dados foram analisados no Programa Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) em abordagens univariadas para descrição da distribuição das variáveis, e bivariadas para identificar como as variáveis se relacionam entre si e os fatores associados à infecção latente por tuberculose. Nos estudantes iniciantes, o resultado dos dois exames foi simultaneamente positivo em quatro casos, e nos finalistas detectamos ambos os resultados positivos em um único indivíduo. No total obtivemos 38 exames positivos correspondentes a 33 estudantes de enfermagem, em ambas as instituições. Detectamos diferenças estatisticamente significativas entre as variáveis de situação no curso (iniciante ou finalista) e faixa etária com o resultado positivo de Prova Tuberculínica, bem como infecção latente, uso de Prova Tuberculínica para guiar tratamento, compartilhamento de ambientes com pacientes e notificação compulsória de caso de TB com situação de iniciante ou finalista do curso. Os dados deste estudo permitiram uma análise do perfil dos estudantes e de comparação entre os grupos de iniciantes e finalistas. Sugerimos às escolas de enfermagem melhor preparação para facilitar no processo de aprendizado um conhecimento mais acurado sobre TB.