A produção de leite e de seus derivados lácteos geram grande impacto no setor agroindustrial. Classificado como um dos alimentos mais completos, o leite é rico em nutrientes essenciais ao crescimento e à manutenção de uma vida saudável. Em contrapartida, os constituintes do leite propiciam excelente meio de cultura para o desenvolvimento de microrganismos, desde o momento da ordenha até a chegada ao consumidor final. Neste contexto, estudos acerca de novas alternativas que auxiliem no controle da qualidade do leite são essenciais. A fotoinativação com luz azul tem surgido como uma alternativa antimicrobiana em potencial na indústria alimentícia, pois exerce atividade antimicrobiana intrínseca, sem o envolvimento de substâncias fotossensibilizadoras exógenas. O objetivo deste estudo foi determinar a efetividade da fotoinativação por luz azul (LED azul, &lambda;&#61; 410 ± 15 nm, 100 mW) sobre Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Listeria monocytogenes e Mycobacterium fortuitum suspensos em leite integral UHT e solução PBS. Os resultados demonstraram a fotinativação de todas as cepas empregadas no estudo pela luz azul, em tempos distintos, independentemente do meio utilizado, isto é, M. fortuitum, S. aureus, E. coli e L. monocytogenes apresentaram cinética de fotoinativação diferentes entre si, quando suspensos no leite ou no PBS (p<0,0001). O fator de resistência R foi menor que 1 (R < 1) em meio leite, sendo 0,82, 0,78, 0,88 e 0,81 para S.aureus, E. coli, L. monocytogenes e M. fortuitum, nesta ordem, apresentando-se, portanto, mais sensíveis à luz azul nos tempos iniciais e ocorrendo fotoinativação em maior proporção neste período. Quando suspensos em PBS, à semelhança do meio leite, L. monocytogenes e E. coli, apresentaram valor de R < 1 (0,87 e 0,81, respectivamente), ao passo que S. aureus e M. fortuitum apresentaram R > 1, isto é, 1,06 e 1,46, respectivamente, demonstrando maior resistência à fotoinativação nos períodos iniciais e tornando-se mais sensíveis conforme o tempo de irradiação progredia. Concluiu-se que a luz azul foi capaz de fotoinativar, in vitro, cepas de S. aureus, E. coli, L. monocytogenes e M.fortuitum, suspensas em PBS e em leite integral UHT. A fotoinativação com luz azul apresenta caráter inovador, sendo uma alternativa potencialmente promissora no controle da contaminação por microrganismos na indústria láctea / The production of milk and its dairy products have great impact on the agro-industrial sector. Considered as one of the most complete foods, milk is full of essential nutrients required for growth and maintenance of a healthy life. On the other hand, the composition of milk makes it an excellent growth medium for many microorganisms, from the moment of milking to its arrival to the final consumer. In this context, studies toward the search for new alternatives are essential for milk quality improvement. The photoinactivation by blue light has emerged as an alternative antimicrobial approach in the food industry due to its intrinsic antimicrobial properties without the involvement of exogenous photosensitizers. The aim of this study was to assess the effectiveness of blue light photoinactivation (blue LED, &lambda; &#61; 410 ± 15 nm, 100 mW) on Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Listeria monocytogenes and Mycobacterium fortuitum strains suspended in UHT whole milk and PBS medium. All used strains was sucesssfully photoinactivated by the blue light, at different moments, regardless of the medium used, i.e., M. fortuitum, S. aureus, E. coli and L. monocytogenes presented different photoinactivation kinetics when suspended in the UHT whole milk or PBS (p < 0.0001). The resistance R factor was less than 1 (R < 1) in milk medium, with 0.82, 0.78, 0.88 and 0.81 for S. aureus, E. coli, L. monocytogenes and M. fortuitum, respectively, meaning that the strains were most sensitive to blue light in the initial times, when the photoinactivation was higher. When suspended in PBS, as occurred in the the milk medium, L. monocytogenes and E. coli presented R < 1 (0.87 and 0.81, respectively), whereas S. aureus and M. fortuitum demonstrated R > 1, i.e., 1.06 and 1.46, respectively, indicating higher photoinactivation resistance in the initial stages and higher sensibility as the irradiation time progressed. We concluded that blue light promoted in vitro photoinactivation of the strains of S. aureus, E. coli, L. monocytogenes and M.fortuitum, suspended in PBS and UHT whole milk. The photoinactivation by blue light presents an innovative approach and a promising and exciting alternative for microbial contamination control in dairy industry

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissetacao Arioldo Vasconcelos Junior.pdf: 3999475 bytes, checksum: fcfb183b016528e836128fc94bae53f7 (MD5) Previous issue date: 2008-02-21 / This work characterized the specific cellular immune response of TCD4 and TCD8 lymphocytes against recombinant Mycobacterium tuberculosis at the Hospital Anuar Auad, Goiania Brazil, and constituted of two experimental groups: 1) 22 active TB patients with positive acid fast aputum, X-ray indicative of tuberculosis, smear culture positive for M. tuberculosis and HIV negative. 2) 15 sex and age matched healthy controls, tuberculin skin test and HIV negative. Venous blood was drawn and processed to obtain PBMC that were cultivated for 96 hours with the specific antigens (1mg/106 cells). TCD8 and TCD4 cells were analyzed by flow citometry for IL-10 and IFN-g production. In general, the percentage of positive TCD4 and TCD8 cells for IFN-g and IL-10 were superior among the TB patients. Additionally, TCD4+IFNg+ (5,63±2,43) and IL-10+ (5,83± 2,19) cells were significantly higher in TB patients than in healthy controls (TCD4+IFNg+ =1,75±0,71 and IL-10+ =1,47±0,90), (p<0,01). Regarding the percentage of TCD8 cells, a higher percentage of IFNg+ (4,33±1,45) and IL-10+ (4,01±1,14) among TB patients than controls (TCD8+IFNg+ = 1,49±0,42 and IL- 10+ 1,62±0,59) was observed (p<0,01). TB treatment did not alter the response to the tested antigens immediately after the treatment initiation. In conclusion, the recombinant antigens MPT-51, ESAT-6, GLcB, Ag85A were recognized by the specific immune response of active TB patients. Key words: Tuberculosis, Mycobacterium tuberculosis, Recombinant antigens, Cellular immune response. to the tested antigens immediately after the treatment initiation. In conclusion, the recombinant antigens MPT-51, ESAT-6, GLcB, Ag85A were recognized by the specific immune response of active TB patients. / Este trabalho avaliou a resposta imune celular dos linfócitos TCD4 e TCD8 de pacientes com tuberculose pulmonar ativa antes e após o tratamento, contra os antígenos recombinantes MPT-51, ESAT-6, GLcB, Ag85A e o Filtrado Protéico de Cultura (CFP) de Mycobacterium tuberculosis atendidos no Hospital de Doenças Tropicais Anuar Auad. A população de estudo, composta de 37 indivíduos, foi dividida em dois grupos experimentais. 1) 22 pacientes com tuberculose pulmonar, selecionados de acordo com idade, diagnóstico confirmado por baciloscopia (BAAR), radiografia evidente de tuberculose, HIV1/2 negativos. 2) 15 controles saudáveis negativos para prova tuberculinica (PT) e HIV1/2, pareados por faixa etária e sexo aos pacientes selecionados. Coletou-se aproximadamente 20 ml de sangue com heparina. O sangue total foi processado e cultivado por 96 horas na presença dos antígenos recombinantes e os linfócitos TCD4 e TCD8 foram analisados quanto à positividade para as citocinas IL-10 e IFN-g por citometria de fluxo. As porcentagens de linfócitos responsivos aos diversos antígenos de M. tuberculosis apresentaram-se em geral superiores aos controles. A porcentagem dos linfócitos TCD4+IFNg+ (5,63±2,43) e IL-10+ (5,83±2,19) foram maiores em pacientes com tuberculose pulmonar ativa em comparação com os linfócitos TCD4+IFNg+ (1,75±0,71) e IL-10+ (1,47±0,90) dos controles (p<0,01). Também, as porcentagens dos linfócitos TCD8+IFNg+ (4,33±1,45) e IL-10+ (4,01 ±1,14) dos pacientes foram maiores que os linfócitos TCD8+IFNg+ (1,49±0,42) e IL-10+ (1,62±0,59) dos controles (p<0,01). Não houve diferença significativa antes (5,63±2,43) e após (5,0±2,0) o tratamento nas populações celulares TCD4+ e TCD8+ positivas para IFN-g e IL-10 quando estimuladas com o painel de antígenos (p>0,05). Com estes resultados podemos considerar que todos os antígenos testados (MPT-51, ESAT-6, GLcB, Ag85A) são reconhecidos pelos linfócitos TCD4+ e TCD8+ de pacientes com tuberculose pulmonar ativa.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-20T11:06:25Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rogerio Coutinho das Neves - 2015.pdf: 6048850 bytes, checksum: 1bac6d1d4aa28a3cf0ebbb228b593986 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-20T11:12:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rogerio Coutinho das Neves - 2015.pdf: 6048850 bytes, checksum: 1bac6d1d4aa28a3cf0ebbb228b593986 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-20T11:12:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rogerio Coutinho das Neves - 2015.pdf: 6048850 bytes, checksum: 1bac6d1d4aa28a3cf0ebbb228b593986 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Outbreaks caused by atypical mycobacteria are considered as an emerging problem in Brazil and Goias, being frequently associated with invasive procedures, such as laparoscopy, arthroscopy, and aesthetic surgeries among others. Treatment of mycobacteriosis requires highly toxic drugs with doubtful sterilizing effects. Consequently, several studies aim to search for new drugs or molecules with anti-mycobacterial biological activities. The objective of this study was to prospect biomolecules from the venom of the social wasp Polybia paulista (Vespoidea, Vespidae, Polistinae) and from the Tityus sp scorpion with antimycobacteria activity against Mycobacterium abscessus subsp. bolletii (GO06). Peptides from the wasp and scorpion venoms were evaluated in broth microdilution assay and in macrophage infected cultures to determine minimum inhibitory concentration. Peptides with antimycobacterial activity were further evaluated by scanning electron microscopy of M. abscessus subsp. bolletii treated cultures. The peptide toxicities were evaluated on macrophage cultures. Peptides Agelaia-MP, Polybia-MPII, and AVA, derived from wasp and peptides AMP 1, 2, 4, 6, and 8 derived from scorpion presented antimycobacterial activities. AVA and AMP 4 peptides were not toxic for macrophages. In this work three peptides derived from the wasp venom and five peptides derived from the scorpion venom were identified as having antimycobacterial activity. / Surtos causados por micobactérias atípicas são considerados emergentes no Brasil e em Goiás e têm tem sido associados a procedimentos invasivos, como a laparoscopia, artroscopia e cirurgia estética dentre outros. O tratamento de micobacterioses envolve drogas altamente tóxicas que apresentam efeito esterilizante relativo. Portanto, vários estudos têm como alvo a busca de novas drogas ou moléculas biológicas com atividade micobactericida. O objetivo deste estudo foi prospectar biomoléculas do veneno de vespa social Polybia paulista (Vespoidea, Vespidae, Polistinae) e de escorpiões do gênero Tityus com atividade micobactericida in vitro contra Mycobacterium abscessus subsp. bolletii (GO06). Peptídeos derivados do veneno da vespa e do escorpião foram avaliados por microdiluição em caldo, e em culturas de macrófagos infectados determinando a concentração inibitória mínima. Para os peptídeos com atividade micobactericida, o potencial dano causado à parede celular da micobactéria foi analisado por microscopia eletrônica de varredura. A toxicidade de dois peptídeos com potencial uso farmacológico foram avaliados em culturas de macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c. Os peptídeos Agelaia-MP, Polybia-MPII e AVA derivados do veneno da vespa e os peptídeos AMP 1, 2, 4, 6 e 8 derivados do veneno de escorpião apresentaram atividade micobactericida. Os peptídeos micobactericidas agem desestruturando os envoltório das bacilos de M. abscessos subsp. bolletti. Os peptídeos AVA e o AMP 4 não apresentaram toxicidade para culturas de macrófagos, e reduziram a carga bacilar de culturas de macrófagos infectadas com M. abscessus subsp. bolletii. Neste trabalho identificou-se três peptídeos derivados da peçonha de vespa e cinco peptídeos derivados de veneno de escorpião com atividade micobactericida.

La tuberculosis bovina es una enfermedad causada por el agente Mycobacterium bovis, que es parte del complejo Mycobacterium tuberculosis (MTC). Bacterias del MTC infectan una gran variedad de mamíferos, incluyendo al hombre. Mejorar el diagnostico de esta enfermedad permite identificar brotes y formular acciones de control. El objetivo de este trabajo fue evaluar la sensibilidad y especificidad de dos métodos de extracción en diferentes tipos de preservación, analizando cuatro tipos de muestras de la misma lesión tuberculosa: impresiones de la lesión en FTA elute card Whatman ®, ii. Lesiones congeladas y iii. Lesiones almacenadas en borato de sodio durante 30 y 60 días. Para las muestras congeladas, impresiones en tarjetas FTA y preservadas en borato, fue realizada la extracción usando el protocolo descrito por BOOM et al., 1990. Además, para cada tipo de muestra se realizaron aislamientos en los medios de cultivo Stonebrink y Lowenstein-Jensen. Fue realizada la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando los primers INS1-INS2 para identificar DNA de bacterias pertenecientes al MTC. Se encontró que las muestras congeladas tienen mejor sensibilidad, Fueron obtenidas colonias de Mycobacterium bovis de las tarjetas FTA. Estos resultados ayudan a mejorar el proceso de colecta y transporte de muestras del sistema de vigilancia en tuberculosis bovina / A tuberculose bovina é uma doença causada pelo agente Mycobacterium bovis, que é parte do complexo Mycobacterium tuberculosis (MTC). Bactérias do MTC infectam uma grande variedade de mamíferos, incluindo o homem. Melhorar o diagnóstico desta doença permite identificar surtos e formular ações de controle. O objetivo deste trabalho foi avaliar a sensibilidade e especificidade de dois métodos de extração em diferentes tipos de preservação, analisando quatro tipos de amostras da mesma lesão tuberculosa: impressões da lesão em FTA elute card Whatman ®, ii. lesões congeladas e iii. lesões armazenadas em borato de sódio durante 30 e 60 dias. Para as amostras congeladas, impressiones no papel FTA e preservadas em borato, foi realizada a extração usando o protocolo descrito por BOOM et al., 1990. Além disso, para cada tipo de amostra se realizaram isolamentos nos meios de cultura Stonebrink e Lowenstein-Jensen. Foi realizada a reação em cadeia da polimerasa (PCR) utilizando os primers INS1-INS2 para identificar DNA de bacterias pertencentes ao MTC. Encontrou-se que as amostras congeladas tem melhor sensibilidade, Foram obtidas colônias de Mycobacterium bovis dos papeis FTA. Estes resultados ajudam a melhorar o processo de colheita e transporte de amostras do sistema de vigilância em tuberculosis bovina.

Este trabalho analisou as condições microbiológicas em que se encontram os alimentos fornecidos aos cães errantes que se localizam na reserva florestal da Cidade Universitária Armando de Salles Oliveira Universidade de São Paulo. Trata-se de sobras de alimentos que foram consumidos em restaurantes locais e são fornecidos diariamente aos animais por um voluntário. Foram recolhidas amostras desses alimentos ao longo de cinco dias, e, em cada dia, foram escolhidas seis porções procurando a maior representatividade das amostras. Foram pesquisados os seguintes microrganismos: coliformes totais e termotolerantes, Staphylococcus coagulase positiva, Salmonella spp., Listeria monocytogenes e Mycobacterium spp. Para coliformes totais (Log NMP/g) nas amostras de produtos cárneos a média foi 4,1, variando de 2,4 até >7,0, e para o grupo de outros alimentos a média foi 3,8 variando de 2,0 até 5,7. Para os coliformes termotolerantes (Log NMP/g) nas amostras de produtos cárneos a média foi 3,6, variando de 1,2 até 7,0; e para o grupo de outros alimentos a média foi 3,2, variando de 1,0 até 5,7. Para Staphylococcus coagulase positiva (Log UFC/g) nas amostras de produtos cárneos a mediana (distribuição dos dados não foi normal) foi <2 e o valor máximo foi 5,4; e para o grupo de outros alimentos a mediana foi <2 e o valor máximo 5,8. Houve ausência de Salmonella spp. em 25 g em todas as amostras, para Listeria monocytogenes 33,3% (10/30) das amostras foram positivas e 3,3% (1/30) das amostras houve presença de Mycobacterium spp. não pertencente aos complexos M. tuberculosis, M. avium-intracelulare. Considerando a susceptibilidade dos cães aos patógenos transmitidos por alimentos e as incertezas sobre dose-resposta aos desafios microbiológicos e, considerando ainda, o direito dos animais à alimentos seguros e saudáveis, conclui-se que os alimentos ofertados aos cães na CUASO apresentaram características microbiológicas insatisfatórias, interpretado pelos padrões microbiológicos da legislação para alimentação humana tendo em vista a inexistência de padrões específicos para alimentação animal. / This study analyzed the microbiological conditions of the food provided stray dogs that are located in the University of São Paulo forest reserve. These foods are leftovers that were eaten in local restaurants and are provided daily to the animals by a volunteer. Samples were taken of these foods during five days, and every day six portions were selected for representative samples. We searched the following microrganisms: total and fecal coliforms, coagulase positive Staphylococcus, Salmonella spp., Listeria monocytogenes and Mycobacterium spp. For total coliforms (Log MPN/g) in samples of meat products, the average was 4.1, ranging from 2.4 to >7.0 and the group of other foods, the average was 3.8 ranging from 2.0 up to 5.7. For fecal coliforms (Log MPN/g) in samples of meat products, the average was 3.6, ranging from 1.2 to 7.0, and the group of other foods, the average was 3.2, ranging from 1.0 to 5.7. Staphylococcus coagulase positive (Log CFU/g) in samples of meat products the median (data distribution was not normal) was <2 and the maximum value was 5.4, and the other food group median was <2 and the value 5.8 max. There was no Salmonella spp. 25 g in all samples, Listeria monocytogenes 33.3% (10/30) of samples were positive, and 3.3% (1/30) samples showed the presence of Mycobacterium spp. not belonging to the complex M. tuberculosis, M. avium-intracellulare. Considering the susceptibility of dogs to foodborne pathogens and uncertainties about dose-response to microbial challenges, and considering also the right of animals to safe and healthy food, it is concluded that the food offered to dogs in CUASO showed unsatisfactory microbiological patterns, by microbiological standards for human food legislation due absence of specific standards for animal feed.

A pasteurização do leite é obrigatória no Brasil e o sistema lento (65ºC/30 minutos) é o mais empregado na fabricação de queijos. Os parâmetros de tempo e temperatura empregados no mundo foram definidos após estudos sobre a resistência térmica do Mycobacterium tuberculosis e da Coxiella burnetti, reconhecidos como os microrganismos patogênicos, não formadores de esporos e que eventualmente podem estar presentes no leite cru, que apresentam a maior resistência térmica. Entretanto, não há estudos sobre a resistência térmica do M. bovis que circula nos bovinos no Brasil. Este estudo propôs-se a avaliar a resistência térmica (65ºC) de cinco espoligotipos de M. bovis, isolados de bovinos abatidos no estado de São Paulo, em leite integral experimentalmente contaminado. Leite UHT foi contaminado com M. bovis e, então, submetido a tratamento térmico em banho-maria a 65ºC por 30 minutos. Cada espoligotipo foi testado 3 vezes. As amostras foram retiradas do banho nos tempos 0 (o momento em que o leite atingiu 65ºC), 5, 10, 15, 20, 25 e 30 correspondendo ao tempo, em minutos, de tratamento térmico. O leite contaminado também foi analisado, para quantificação da carga inicial. O controle do processo envolveu o acompanhamento da temperatura do leite (um tubo com termômetro) e análise das enzimas fosfatase alcalina e peroxidase ao final do tratamento; para tal, amostras de leite cru foram tratadas juntamente com as amostras-teste. Para quantificação, foi realizada a diluição decimal seriada seguida da semeadura em duplicata em meio Stonebrink-Leslie (37ºC/45dias). Os resultados mostraram que foi na fase de aquecimento que ocorreu a maior taxa de morte. Houve diferença de resistência entre os espoligotipos ao processo que simulou a pasteurização lenta e o BR024 foi o mais resistente. Conclui-se que houve diferença da eficácia da pasteurização, de acordo com o espoligotipo testado, mas que os resultados precisam ser melhor investigados. / Milk pasteurization is mandatory in Brazil and the Low Temperature Long Time - LTLT - Pasteurization (62 to 65°C/30 min.) is normally used for cheese making. Permitted parameters were based on the reports of Myconbacterium bovis/tuberculosis inactivation made up to that time. Since then, just a few studies have been done to determine if the M. bovis in circulation nowadays among bovine population still presents the same pattern of inactivation. In this way, this study verified the behavior of recently isolated M. bovis against LTLT Pasteurization parameters reproduced in water bath. M. bovis isolated from bovines slaughtered in São Paulo State, Brazil. When milk reached 65°C the 0 tube was removed and refrigerated while the others taken out after 5, 10, 15, 20, 25 and 30 minutes and cooled. For controlling heat treatment a thermometer was adapted to one tube with 5 ml each of raw milk which were submitted together to heat treatment and used for analysis of peroxidase and alkaline phosphatase enzymes after 30 minutes of heat treatment. Milk samples were submitted to serial decimal dilution in peptone water (0.1%) and inoculated in the Stonebrink-Leslie media. After 45 days at 37°C, colonies were counted and the result expressed in CFU/ml. The results showed that heating phase determined more inactivation than the holding phase. The resentence was different between the spoligotypes that simulated the low pasteurization and BR024 was more resentence. The results enable us to speculate that in the worst scenario of natural contamination of the milk.

O Mycobacterium bovis causa a tuberculose bovina, doença zoonótica que propaga, provavelmente com baixa prevalência, em todo o território nacional e pode ser transmitida pelo leite. A adoção sistemática da pasteurização do leite contribuiu para a redução dos casos humanos da doença, mas em alguns países, como o Brasil, é comum o consumo de leite cru e de seus derivados, o que pode contribuir para ocorrência de casos humanos. A participação desse agente nos atuais índices de tuberculose humana, cujo principal agente é o M. tuberculosis, é pouco investigada, mas acredita-se que seja maior do que parece. As razões que contribuem para isso incluem o fato do tratamento humano ser o mesmo independentemente do agente,e as dificuldades e alto custo de distinguir as espécies. O método de diagnóstico \"gold standard\" em laboratório para Mycobacterium bovis em amostras clínicas é o isolamento do agente em meios como Stonebrink-Leslie ou similares. A riqueza em nutrientes dos meios, mais o lento metabolismo deste agente e o alto grau de contaminantes das amostras torna imprescindível o uso de descontaminantes que, via de regra, são tóxicos para o agente, dificultando o isolamento em amostras com níveis baixos do patógeno; cenário provável no caso do leite devido à mistura com o leite de animais sadios. Mas, a despeito de constituir-se uma importante zoonose transmitida pelo leite, não existe uma metodologia oficial para detecção desse agente em alimentos lácteos. Esses fatos justificam um estudo para avaliar o desempenho de meios líquidos, já utilizados em caros sistemas automatizados para detecção de micobactérias, como alternativa para um enriquecimento seletivo do M. bovis em amostras lácteas. Assim, amostras de leite integral esterilizado e de queijo tipo parmesão foram contaminadas com 10 a 100 UFC/ml ou g de M. bovis AN5 e enriquecidas em dois meios líquidos seletivos (MGIT e MGIT modificado), foram analisados nos dias 0, 7, 14, 21, 24, 28 e 32, mantidas em estufa a 37°C. Nessas datas, uma alíquota foi semeada em meio Stonebrink-Leslie e incubada a 37°C por 60 dias. No leite, houve crescimento exacerbado do M. bovis principalmente no MGIT modificado. No queijo, não foi possível isolar M. bovis de nenhuma amostra em MGIT modificado, devido à contaminação excessiva que deteriorou o meio de cultura. O MGIT modificado foi mais eficaz como enriquecimento para o Mycobacterium bovis, mas foi menos seletivo que o MGIT. Estudos futuros devem concentrar a investigação da curva de crescimento do agente na primeira semana de enriquecimento. / Mycobacterium bovis causes bovine tuberculosis, zoonotic disease raging, probably with low prevalence, throughout the national territory and can be transmitted through the milk. The systematic adoption of milk pasteurization helped reduce human cases of the disease, but in some countries, like Brazil, is the common consumption of raw milk and its derivatives, which may contribute to the occurrence of human cases. The participation of this agent in the current rates of human tuberculosis, the principal agent is M. tuberculosis, it is not investigated, but it is believed to be larger than it looks, the reasons contributing to this include the fact that human treatment is similar regardless of the agent and the difficulty / cost to distinguish between species. The diagnostic method \"gold standard\" for Mycobacterium bovis in clinical samples is the isolation of the agent means, Leslie as Stonebrink or the like. The species richness in nutrient media, over the slow metabolism this agent and the high degree of contamination of the samples makes indispensable using decontaminant that, as a rule, are toxic to the agent, making isolation in samples with low levels of the pathogen; scenario likely due to the milk mixture with the milk of healthy animals. But, despite constitute an important zoonosis transmitted by milk, there is no official method for detection of this agent in dairy foods. These facts justify a study to evaluate the performance of liquid media, as used in expensive automated systems for detection of mycobacteria, as alternative to a selective enrichment of M. bovis in milk samples. Thus, samples of sterilized milk and Parmesan cheese type were infected with 10 to 100 CFU / ml or g of M bovis AN5 and enriched in two selective liquid media (MGIT and modified MGIT) were analyzed on days 0, 7, 14, 21, 24, 28 and 32, maintaining at 37 ° C. On that date, an aliquot was plated on Stonebrink half- Leslie and incubated at 37 ° C for 60 days. In milk, there was overgrowth of M. bovis mainly in MGIT modified. Cheese, it was not possible to isolate M. bovis no sample in MGIT modified due to excessive contamination it deteriorated the culture medium. The modified MGIT was more effective as enrichment for Mycobacterium bovis, but was less selective than the MGIT. Future studies should focus on investigating the growth curve of the agent in the first week of enrichment.

Comparou-se a eficácia da baciloscopia in natura e pós concentração (Coloração Ziehl Neelsen) e cultura tradicional e automatizada MA de amostras de escarro ou saliva/muco para a detecção do Complexo M. tuberculosis (MTB) em Centro de Referencia Ambulatorial para Tuberculose na Cidade de São Paulo. A identificação do grupo MTB baseou-se no crescimento em meio com Ácido para nitrobenzóico, e visualização do fator corda. Do total de 374 amostras, 228 eram de pacientes sob diagnóstico inicial e 146 em tratamento. 83 amostras eram saliva/muco. Destas, sete foram positivas à baciloscopia, 03 (3,6%) no material concentrado e uma (1,2%) in natura (p=0.5 McNemar Test). Cinco amostras (6%) positivas na cultura pelo método tradicional e 07 (8,4%) p=0.5 pelo MA. As amostras de escarro eram 74 foram positivas na baciloscopia, sendo 34 (11,7%) in natura e 45 (15,5%) no material concentrado, p=0.001. No método tradicional 56 (19,2%) e 67 (23%) pelo MA p=0.001. Independente da característica da amostra a baciloscopia pós concentração e a cultura pelo MA foram mais sensíveis. / Effectiveness of bacilloscopy were compared in natura and pos-concentrated (Ziehl Neelsen staining), and tradicional and automated culture-AM of sputum or saliva/mucus samples for detection of M. tuberculosis complex (MTB) in Ambulatory Reference Center in the city of São Paulo. Identification of MTB group was based on growth in medium with para nitrobenzoic acid, and cord factor visualization. From the total 374 samples, 228 were from patients under initial diagnostic and 146 in treatment. 83 samples were saliva/mucus. Seven of these were bacilloscopy positive, 03 (3.6%) in concentrated material and one (1.2%) in natura (p=.500ª McNemar Test). Five samples (6%) positive for culture by traditional method and 07 (8.4%) p=0.5 for AM. For sputum 74 were bacilloscopy positive, being 34 (11.7%) in in natura and 45 in concentrated material, p=0.001. In traditional method, 56 (19.2%) and 67 (23%) for AM, p=0.001. Independently of sample characteristics, pos-concentrated bacilloscopy and culture by AM were more effectiveness.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-07-20T14:22:48Z No. of bitstreams: 1 paulovictorpintodossantos.pdf: 2264483 bytes, checksum: d32e0acf15af39bf9bd4b8f4027d8daf (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2017-08-04T11:41:19Z (GMT) / Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-08-04T11:43:52Z No. of bitstreams: 1 paulovictorpintodossantos.pdf: 2264483 bytes, checksum: d32e0acf15af39bf9bd4b8f4027d8daf (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-09T14:50:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paulovictorpintodossantos.pdf: 2264483 bytes, checksum: d32e0acf15af39bf9bd4b8f4027d8daf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-09T14:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paulovictorpintodossantos.pdf: 2264483 bytes, checksum: d32e0acf15af39bf9bd4b8f4027d8daf (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / No presente trabalho são descritas as sínteses e as caracterizações dos ligantes salizid, o-vanizid, m-vanizid e p-vanizid e de seus respectivos complexos de prata(I), na proporção 1:2 (M:L). Todos os compostos foram analisados por métodos analíticos, técnicas espectroscópicas, como RMN de 1H e de 13C e por difração de raios X, porém somente para o complexo [Ag(o­vanizid)2(NO3)].H2O foi obtida a estrutura cristalina pura, através dos métodos por monocristal e por policristais. Pôde­se concluir que para todos os complexos sintetizados a coordenação ocorre através do átomo de nitrogênio do anel piridínico, e mesmo que os complexos Ag(m-vanizid) e Ag(p-vanizid) não tiveram suas estruturas cristalinas determinadas, os resultados das análises espectroscópicas no IV e RMN de 1H e 13C realizadas para esses compostos corroboram para uma afirmação nesse sentido. Ao comparar­se a estrutura obtida pela difração por policristais com a difração por monocristal do composto Ag(o­vanizid)2(NO3)].H2O, verificou­se que ocorreu empacotamento em sistemas e grupo espaciais diferentes, uma vez que na primeira técnica citada o complexo apresenta­se em um grupo espacial P­1, enquanto que na segunda, o complexo apresenta­se em grupo espacial Pbcn. Isso se deve, possivelmente, pela diferença dos solventes utilizados em cada síntese. Notou­se também que as estruturas obtidas por esses dois métodos de difração se diferenciam pelo tipo de coordenação, uma vez que na forma policristalina há um íon nitrato coordenado à prata. Porém na forma de monocristal, o íon nitrato não se coordena à prata. Assim, pode­se dizer que se trata de um caso de isomeria de coordenação. Foram realizados testes biológicos in vitro para todos os compostos sintetizados, nos quais determinou­se a concentração inibitória mínima (CIM90) dos compostos frente ao Mycobacterium tuberculosis H37Rv (ATCC 27294). Através dos dados obtidos nesse teste biológico pode­se afirmar que todos os compostos apresentaram atividade antimicobacteriana sobre esta bactéria, sendo que para os compostos com substituições nas posições 1,3 (meta) e 1,4 (para) no anel aromático notou­se CIM90 abaixo de 0,09 mg/L indicando um maior impacto na atividade antimicobacteriana que os compostos com substituintes na posição 1,2 (orto). / In the present work, syntheses and characterizations of the salizid, o­vanizid, m­vanizid and p­vanizid ligands and their respective silver complexes in the ratio 1:2 (M:L) have been described. All compounds were analyzed by analytical methods, spectroscopic techniques, such as 1H and 13C NMR and by X­ray diffraction, All compounds were analyzed by analytical methods, spectroscopic techniques such as 1H and 13C NMR and by X­ray diffraction, but only for the complex [Ag(o­vanizid)2(NO3)].H2O was obtained the pure crystalline structure, through single crystal and polycrystalline methods. The Ag(I) coordination of all the synthesized complexes occurs by the nitrogen atom of the pyridine ring, and even considering the absence of crystallography model for Ag(m­vanizid) and Ag(p­vanizid) complexes the obtained results of IR and 1H and 13C NMR spectroscopic analyzes corroborate the coordination about silver(I) ions through N of the pyridine moiety. The [Ag(o­vanizid)2(NO3)].H2O crystalline structure has been solved by X Ray diffraction in both monocrystal and polycrystalline methods. The structure obtained by powder diffraction belongs to triclinic system and P­1 space group while the single­crystal method provide us a structure in orthorhombic system and Pbcn as space group. However, the basic structure is the same in both models. It was also observed that the structures obtained by these two methods of diffraction are differentiated by the type of coordination, since in the polycrystalline form there is a nitrate ion coordinated to silver. However in monocrystal form, the nitrate ion does not coordinate with silver. Thus, it can be said that this is a coordination isomerism case. Biological assays, in vitro, were performed for all the compounds synthesized, in which the minimum inhibitory concentration (MIC90) of compounds against Mycobacterium tuberculosis H37Rv (ATCC 27294) was determined. Higher antibacterial activities against M. tuberculosis were found when the compounds have substitutions in the 1,3 (meta) and 1,4 (para) positions in comparing with ortho (1,2) position in the aromatic ring, showing MIC90 below than 0.09 mg/L.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2018-03-27T15:52:21Z No. of bitstreams: 1 analuizadasilvaalbertoni.pdf: 1260028 bytes, checksum: cc0af4aab8dc00d61833430e0eb2ce88 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-04-09T19:21:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 analuizadasilvaalbertoni.pdf: 1260028 bytes, checksum: cc0af4aab8dc00d61833430e0eb2ce88 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-09T19:21:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 analuizadasilvaalbertoni.pdf: 1260028 bytes, checksum: cc0af4aab8dc00d61833430e0eb2ce88 (MD5) Previous issue date: 2017-08-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A obesidade é uma doença crônica multifatorial caracterizada pelo excesso de gordura corporal e por um estado inflamatório de baixo grau, conhecido como metainflamação. Atualmente, é um dos principais problemas de saúde pública do mundo. Dados da OMS indicam que 13% da população mundial é obesa e no Brasil, o índice subiu para 17,9% da população em 2014. Fatores genéticos, dieta, desordens metabólicas, como intolerância à glicose, dislipidemias, hipertensão arterial sistêmica, desbalanço hormonal e mudanças na microbiota intestinal, são gatilhos da inflamação envolvendo adipócitos. O tecido adiposo obeso é caracterizado pelo aumento da infiltração de macrófagos, sendo estes uma fonte importante de inflamação neste tecido. Fatores transcricionais com propriedades imunorregulatórias estão envolvidos em processos inflamatórios e na adipogênese. PPARγ é um importante receptor ativado por ligantes lipídicos, regulador central da adipogênese, com funções na ativação de células do sistema imune e no metabolismo lipídico. Dados de nosso grupo demonstraram que ativação de PPARγ induz a biogênese de organelas dinâmicas denominadas Corpúsculos Lipídicos (CLs) durante infeção micobacteriana. Estas organelas possuem funções ativas no estoque de lipídios para geração de energia, síntese de membrana, síntese de mediadores inflamatórios, sinalização celular e inflamação. Além disso, os CL em macrófagos funcionam como sítios para sobrevivência de patógenos, como as micobactérias. Apesar do impacto da obesidade em doenças metabólicas e cardiovasculares ser bem compreendido, os mecanismos envolvidos na relação entre adipócitos e macrófagos infectados com patógenos intracelulares não são conhecidos, sendo este esclarecimento o objetivo de nosso estudo. Para isso, diferencianciamos células NIH3T3-L1 em adipócitos e utilizamos o sobrenadante obtido, para estimular macrófagos peritoneais infectados ou não com M. bovis BCG. Nós avaliamos a biogênese de corpúsculos lipídicos, expressão de PPARγ, síntese e secreção de citocinas, adipocinas e NO. Os resultados comprovaram que a diferenciação de células NIH3T3-L1 em adipócitos é um processo eficiente que envolve mudanças na morfologia celular e acúmulo de Corpúsculos Lipídicos. O estímulo de macrófagos com sobrenadante de adipócitos potencializou a biogênese de CLs, assim como a expressão de PPARγ, na presença de infecção micobacteriana. Nos tempos de 6 e 48 horas de estímulo com sobrenadante e infecção, a produção de TNF-α também foi potencializada, porém um decréscimo significativo foi observado no tempo de 24 horas. Quanto aos níveis de IL-10, um aumento foi observado na presença de infecção e estímulo com sobrenadante nos três tempos analisados. Além disso, apenas no tempo de 24 h observamos a secreção de nitrito de modo significativo pelos macrófagos peritoneais infectados, efeito este independente do estímulo com sobrenadante. Quanto às adipocinas, importantes no desenvolvimento da obesidade e síndrome metabólica, analisamos os níveis de leptina produzida pelos macrófagos que não foram significativos, enquanto a produção de adiponectina, apresentou-se aumentada nos macrófagos controles estimulados com sobrenadante, efeito este, que foi inibido durante a infecção por BCG. Assim, nossos resultados sugerem, um efeito modulador de fatores secretados por adipócitos na ativação de macrófagos, atribuídos a formação de corpúsculos lipídicos, expressão de PPARγ, síntese de citocinas como TNF-α e IL-10 e uma modulação negativa da produção de adiponectina durante a infecção por M. bovis BCG. / Obesity is a chronic multifactorial disease characterized by excess of body fat and a low- grade inflammatory state, known as meta-inflammation. It is currently one of the world's leading public health problems. WHO data indicate that 13% of the world population is obese, in Brazil, the obesity index was 17.9% of the population in 2014. In addition to genetic factors, diet and metabolic disorders, such as glucose intolerance, dyslipidemia, systemic arterial hypertension, hormonal imbalance and changes in the intestinal microbiota have been proposed as triggers for inflammation involving adipocytes. Recent studies have shown that obese adipose tissue is characterized by increased infiltration of macrophages, suggesting that these are an important source of inflammation in this tissue. Transcriptional factors with immunoregulatory properties are involved in inflammatory processes and adipogenesis. Such as the PPARγ, is a receptor activated by lipid ligands, central regulator of adipogenesis, with functions in the immune cells activation and lipid metabolism. Data from our group, demonstrated that PPARγ activation induces the biogenesis of dynamic organelles, the Lipid Droplets (LD) during mycobacterial infection. These organelles have functions in lipid storage for energy generation, membrane synthesis, inflammatory mediators synthesis, cell signaling and inflammation. Moreover, the LD in macrophages are niches for the pathogens survival. Although the impact of obesity on metabolic and cardiovascular diseases is understood, the mechanisms involved in the interactions between adipocytes and macrophages infected with intracellular pathogens are not known. In this study we differentiated NIH3T3-L1 cells into adipocytes and used the supernatant obtained to stimulate peritoneal macrophages infected or not with M. bovis BCG. We analyze the lipids droplets formation, PPARγ expression, cytokine, adipokines and NO synthesis. The results have shown that NIH3T3-L1 cells differentiation into adipocytes is an efficient process involving changes in cell morphology and LD storage. The macrophages stimulation with adipocyte supernatant was able to potentiated LD biogenesis, as well as, PPARγ activation, during mycobacterial infection. After 6 and 48 hours of stimulation and infection, the TNF-α levels were also potentiated, although a significant decrease was observed after 24 hours of infection. The IL-10 levels, was increase in the presence of infection and supernatant stimulation at 6, 24 and 48 hours after infection. To nitrite analysis, we observe that after 24 h of infection, there was an increase of levels secreted by macrophages, however this effect was independent of the supernatant stimulation. The adipokines, as leptin and adiponectin, are important factors in the obesity and metabolic syndrome development. Therefore, we analyzed the levels of leptin and adiponectin produced by macrophages during BCG infection. The Leptin levels were not detect, while adiponectin production, was increased in the control macrophages in presence of supernatant, an effect that was inhibited during BCG infection. Thus, our results suggest a modulating effect of secreted factors by adipocytes on the macrophages activation, attributed to the lipid droplets formation, PPARγ expression, cytokines synthesis as TNF-α and IL-10 and a dowmodulation of adiponectin during M. bovis BCG, infection.