Os mecanismos que conferem resistência do Mycobacterium tuberculosis (Mtb) à destruição pelo hospedeiro, além da sua capacidade em permanecer e/ou multiplicar-se no interior das células fagocitárias são ainda pouco compreendidos. Nosso grupo de pesquisa tem contribuído para o entendimento do papel dos mediadores lipídicos, que incluem prostaglandinas (PGs) e leucotrienos (LTs) na tuberculose. PGs inibem a resposta imune celular TH1, a produção de citocinas e a fagocitose, e assim facilita a infecção. LTs estão envolvidos no recrutamento de leucócitos, e na modulação da síntese de citocinas, no aumento da fagocitose e dos mecanismos microbicidas, e assim contribui para a eliminação da micobactéria. Neste projeto, avaliamos in vivo e in vitro a produção dos mediadores lipídicos induzidos por cepas de Mtb isolados de pacientes com tuberculose ativa. Demonstramos neste trabalho que macrófagos alveolares infectados com os bacilos da cepa SV009 levam a maior produção de TNF- e nitrito, do que aqueles infectados com a cepa SV068. Em contraste, macrófagos alveolares infectados com os bacilos da cepa SV068 induzem a produção de muito mais LTB4, quando comparado aos bacilos da cepa SV009. Obtivemos maior recuperação de unidades formadoras de colônia (UFC) de macrófagos alveolares tratados com MK886 e infectados com bacilos da cepa SV068; enquanto que mais UFCs foram recuperadas após o tratamento com ácido caféico e infecção com a cepa SV009. Com relação a formação de corpúsculos lipídicos (CLs), observamos um maior número destes quando macrófagos alveolares foram infectados com bacilos da cepa SV068. Ainda, observamos diminuição de CLs quando tratados com MK886 ou ácido caféico. Os bacilos da cepa SV068 foram mais fagocitados, mas os macrófagos não foram muito eficazes na atividade microbicida dos mesmos. Nos experimentos in vivo vimos que camundongos balb/c infectados com a cepa SV068 morrem mais e o tratamento com MK886 parcialmente os protege e a mortalidade não está relacionada com a maior carga bacilar no pulmão ou baço. Houve aumento no recrutamento de neutrófilos induzido pela infecção especialmente após infecção com os bacilos da cepa SV068, sendo que o tratamento com MK886 inibe significativamente o recrutamento quando comparado à infecção com os bacilos da cepa SV009. Células mononucleares também foram recrutadas e permaneceram aumentadas até o final do período observado, sem muitas diferenças significativas quando comparamos a infecção com os isolados SV009 e SV068. A produção de nitrito também encontrou-se elevada em animais infectados com bacilos da cepa SV068. A análise histopatológica dos pulmões dos animais infectados mostrou intensa reação inflamatória com maior comprometimento do parênquima pulmonar dos camundongos infectados bacilos da cepa SV068, com intensa deposição de colágeno e multiplicação bacilar. Encontramos diferenças significativas em relação à producão de citocinas IL-6, IL-10, IL-1, IFN-, TNF- and IL-12 após infecção de 30 e 60 dias com as cepas SV009 e SV068. Também mostramos que há diferenças na produção de LTB4 e PGE2 após 30 e 60 dias de infecção com as cepas SV009 e SV068 em células do camundongos balb/c. Experimentos com animais 129 e 5LO-/- infectados com as duas cepas também foram realizados, e vimos que os animais 5LO-/- são mais suscetíveis à infecção especialmente quando infectados com a cepa SV068. Sugerimos que as cepas são diferentes, mas dependentes de um conjunto de fatores, e nossos dados sugerem que dentre estes mecanismos a produção de TNF- e também de mediadores lipídicos (LTB4 e PGE2) estão envolvidos. / The mechanisms that confer resistance to Mycobacterium tuberculosis (Mtb) for destruction by the host, in addition to its ability to retain and/or multiply within phagocytic cells are still poorly understood. Our research group has contributed to the understanding of the role of lipid mediators, including prostaglandins (PGs) and leukotrienes (LTs) in tuberculosis. PGs inhibit Th1 cell immune response, cytokine production and phagocytosis, thus facilitating the infection. LTs are involved in the leukocytes recruitment, and modulation of cytokine synthesis, phagocytosis and microbicidal mechanisms enhancement, and contribute to the elimination of the mycobacteria. In this project, we evaluated in vivo and in vitro the lipid mediators production induced by Mtb strains isolated from patients with active tuberculosis. We demonstrated in this study that alveolar macrophages infected with bacilli from SV009 strain lead to an increase of TNF- production and nitrite, than those infected with the strain SV068. In contrast, alveolar macrophages infected with bacilli from SV068 strain induced more LTB4 production when compared to SV009 infection. We obtained higher recovery colony forming units (CFU) of alveolar macrophages treated with MK886 and infected with bacilli from SV068 strain; while more CFUs were recovered after treatment with caffeic acid and infection with bacilli from SV009 strain. Regarding the lipid bodies (LBs) formation, we observed a greater number of these structures, when alveolar macrophages were infected with bacilli from SV068 strain. Still, we observed a decrease of LBs when the macrophages were treated with MK886 and caffeic acid. Bacilli from SV068 strain were more phagocytosed, but macrophages were not very effective in the microbicidal activity. In the in vivo experiments we found that mice infected with SV068 strain die more than the other and MK886 treatment partially protects the mice, besides, the mortality is not related to the higher bacterial load in the lung or spleen. There was an increase in neutrophil recruitment induced after infection, especially after infection with SV068 strain, and treatment with MK886 significantly inhibits recruitment when compared to infection with SV009 strain. Mononuclear cells were also recruited and remained increased until the end of the observed period, without many significant differences when comparing infection with SV009 and SV068 strains. The nitrite production was also found greater in animals infected with bacilli from SV068 strain. Histopathological analysis of the infected mice lungs showed an intense inflammatory reaction with greater impairment of the mice lungs when infected with bacilli from SV068 strain with an intense collagen deposition and multiplication of bacilli. We suggest that the SV068 strain is more virulent and participates of the immune response by lipid mediators dependent mechanisms.

Apesar da Organização Mundial de Saúde (OMS) ter adotado medidas de controle, a hanseníase permanece como um problema social e de saúde pública em muitos países. O diagnóstico clínico e a baciloscopia permanecem como as principais ferramentas utilizadas para a classificação dos pacientes e definição da terapêutica a ser instituída. A identificação de novos antígenos de M. leprae, o desenvolvimento de novos métodos laboratoriais e melhorar o desempenho de testes sorológicos já existentes são prioridades para tentar atingir as metas da OMS programadas para o período de 2011-2015. Neste estudo avaliamos o desempenho diagnóstico dos antígenos glicolipídeo sintético ND-O-BSA para pesquisa de anticorpos totais e recombinante LID-1, para pesquisa anticorpos IgG por ELISA; e o perfil de reatividade de anticorpos IgG contra proteínas nativas de M. leprae por Western Blotting, em amostras de soros de pacientes de área endêmica com diferentes formas clínicas da doença. Nossos resultados mostraram que os testes ELISA ND-O-BSA e LID-1 auxiliaram na detecção de 70% dos pacientes multibacilares com baciloscopia negativa. O valor preditivo negativo foi de 94% para ambos os testes. A análise do Western Blotting mostrou que pacientes multibacilares possuem anticorpos IgG para a fração de 38kDa e região de 3,5kDa, esta reatividade não foi observada no grupo controle. Nosso estudo sugere a utilização do ELISA, com antígenos recombinante e sintético, na rotina diagnóstica; e que a fração de 38kDa e região de 3,5kDa, de antígeno nativo de M. leprae, são bons marcadores no diagnóstico de hanseníase e no prognóstico de pacientes com as formas borderline e indeterminada da doença. / Although several control measures have been adopted by the World Health Organization, (WHO) leprosy continues to be a social and public health problem in many countries. Clinical diagnosis and acid-fast bacilli skin smear are the main tools used to classify patients and define therapy. According to the WHO program for 2011-2015, the identification of new Mycobacterium leprae antigens, the development of new laboratory methods and improved serological tests are the priorities. In the present study, we evaluated the diagnostic performance of the synthetic glycolipid antigen, ND-O-BSA, to detect total antibodies and the recombinant antigen LID-1 to detect IgG antibodies by ELISA and the IgG reactivity profile against native M. leprae proteins by Western blot in serum samples from leprosy patients classified in the wide spectrum of the disease. Our results showed that ND-O-BSA and LID-1 ELISA are able to detect the disease in 70% of multibacillary patients with negative skin smears. The negative predictive values were 94% for both tests. The Western blot analysis revealed that most multibacillary patients had IgG antibodies against the 38 kDa and 3.5 kDa regions; this reactivity was not observed in the control group. Our study suggests the use of ELISA, with recombinant or synthetic antigens, in routine diagnosis and that the 38 kDa fraction and the 3.5 kDa region, from native M leprae antigen, are good markers for the diagnosis of leprosy and its prognosis as shown for the borderline and indeterminate forms of the disease.

Avaliou-se a atividade micobactericida de cinco desinfetantes químicos frente a uma estirpe de Mycobacterium bovis isolada de caprinos, tipificada por PCR (polymerase chain reaction) e com 32 dias de cultivo no meio de Stonebrink. O teste de desinfetantes foi realizado utilizando-se a técnica de cultivo em camada delgada de ágar Middlebrook 7H11 modificado e foi comparado ao teste em tubos com meio de Stonebrink, tradicionalmente utilizado no laboratório de zoonoses bacterianas da FMVZ/USP. Os cinco desinfetantes ensaiados foram: \"A\" : grupo controle; \"B\" - hipoclorito de sódio (2,5 % de cloro ativo); \"C\"- glutaraldeído (2 %); \"D\" - ácido peracético 0,25 % e peróxido de hidrogênio 5 %; \"E\" - iodóforo (2,6% de iodo) e \"F\"- compostos fenólicos (orto-fenilfeno 12,243 g; orto-benzil paraclorofenol 11,080 g; para-terceário amilfeno 4,1222 g.). A diluição destes produtos foi feita conforme recomendação do fabricante. Os meios de cultura adotados para o procedimento de isolamento e preparo da suspensão bacteriana foram o meio de Stonebrink e o meio de Middlebrook 7H11 modificado. Os testes foram realizados na presença e ausência de matéria orgânica e à temperatura ambiente (21 ± 2°C) e à temperatura de 4 °C. Os resultados obtidos nas contagens de colônias foram transformados em percentual de redução para análise estatítica e demostraram que: a técnica de cultivo de micobactérias em camada delgada no meio de Middlebrook 7H11 permitiu uma visualização precoce das micobactérias e se mostrou viável para realização de testes de desinfetantes; os cinco tipos de desinfetantes analisados apresentaram atividade micobactericida e o melhor desempenho foi obtido pelo ácido peracético seguido pelo hipoclorito de sódio. A atividade micobactericida dos iodóforos foi instisfatória na presença de matéria orgânica. / The mycobactericidal activity of five chemical disinfectants was evaluated against a strain of Mycobacterium bovis isolated from a goat, typified by PCR (polymerase chain reaction) and with 32 days of growth in the Stonebrink medium. The disinfectants were tested using the modified thin layer Middlebrook 7H11 cultivation technique and it was compared to the test made in tubes with Stonebrink medium, which is tradicionally used at the Bacterian Zoonosis Laboratory of the Veterinary Medicice Faculty of the University of São Paulo. The five disinfectants were: \"A\" was the control group; \"B\"- sodium hypochlorite (2,5% of active chlorine); \"C\"- glutaraldehyde (2 %); \"D\"- peracetic acid (0,25 %) and hydrogen peroxide (5 %); \"E\" - iodine compounds (2,6%) e \"F\"- fenolic compounds (orto-fenilfeno 12,243 g; orto-benzil paraclorofenol 11,080 g; para-terceario amilfeno 4,122 g.). The products were diluted according to label instructions. The culture media used for the isolation procedure and preparation of the bacterian suspension were the Stonebrink and modified Middlebrook 7H11 medium. The assays were performed either in the presence or absence of organic matter, at temperatures of 4 °C and 21 ± 2°C The colony counting results were transformed into reduction percentages for the statistical analysis and concluded in: the modified thin layer Middlebrook 7H11 cultivation technique permitted an earlier visualization of the colonies and was practible for the realization of the disinfectants tests; the five disinfectants showed mycobactericidal activity and the peracetic acid had the best performance followed by the sodium hypochlorite. The mycobactericidal activity of the iodine compound was unsatisfactory when in the presence of organic matter.

O gênero Mycobacterium compreende inúmeras espécies estudadas por sua capacidade de causar doenças. Surtos de tuberculose e micobacteriose em zoológicos, aquários, centros de pesquisa e criadouros evidenciaram a importância desses organismos em relação à saúde de animais silvestres mantidos em cativeiro. Duzentas e onze amostras, de 101 animais entre mamíferos, aves, répteis, anfíbios e peixes, foram submetidas à cultura. Foram isolados M. tuberculosis, M. bovis e 13 espécies de MNT associadas à doença. A natureza crônica dessas doenças, seu diagnóstico ante mortem limitado, juntamente com as características de interação social de cada espécie e o confinamento, favorecem a transmissão das micobactérias pelo contato com humanos ou outros animais infectados. Apesar de a presença de M. tuberculosis e M. bovis em instituições brasileiras já ter sido constatada, o presente estudo descreveu infecções em espécies animais utilizadas para consumo humano, e em espécies conhecidas pela suscetibilidade, mas que ainda não foram documentadas no Brasil. Doença causada por MNT foi relatada, mas sua importância deve ser considerada de acordo com a espécie animal acometida / Mycobacterium genus comprises several species, which have been studied for their capacity to cause diseases. Outbreaks of tuberculosis and mycobacteriosis in zoos, aquariums, research and breeding facilities have shown the importance of these organisms to health of wildlife animal maintained in captivity. Two hundred and eleven samples, from 101 animals among mammal, birds, reptiles, amphibians and fishes, were cultured. Mycobacterium tuberculosis, M. bovis and 13 species of non-tuberculous mycobacteria associated to diseases were isolated. The chronical nature of tuberculosis and mycobacteriosis, their limited ante mortem diagnosis, along with social behavior of each species and confinement, favor mycobacterial transmission through contact with infected humans and other animals. Despite the presence of M. tuberculosis and M. bovis has already been observed in Brazilian institutions, the present study described infections in animal species destined to human consumption, and species known for their susceptiblility, yet not documented in Brazil. Disease caused by non-tuberculous mycobacteria was reported, though its importance must be considered according to the animal species affected

L'ulcère de Buruli, maladie négligée, pouvant entraîner déformations et incapacités permanentes, causée par Mycobacterium ulcerans, une mycobactérie associée aux écosystèmes aquatiques. Les sources et réservoirs de M. ulcerans ne sont pas précisément connus limitant la prophylaxie. Ma thèse contribue à démasquer les sources de contamination par M. ulcerans. Ma revue de la littérature répertoriant les sources potentielles, met en exergue les pièces manquantes pour la compréhension de l’épidémiologie de l’ulcère de Buruli. Mon étude de coculture M. ulcerans-Acanthamoeba griffini indique que cette amibe n’est pas un réservoir de M. ulcerans. Ensuite, mon étude du métabolisme des substrats carbonés indique que les bactéries, champignons, algues et mollusques peuvent combiner des sources carbonées au profit de M. ulcerans dans l’environnement. Capitalisant sur ce résultat, mon étude de l’effet des mycolactones secrétées par M. ulcerans sur les champignons, montre une attraction sur Mucor circinelloides. Ces observations démasquent une nouvelle activité de la mycolactone d’attraction d’organismes fungiques. Le mode de transmission de M. ulcerans à l’homme reste également un mystère. Dans ce sens, j’ai détecté des séquences d'ADN spécifiques de M. ulcerans sur la peau saine d’individus asymptomatiques en zones d’endémie. Ces données pourraient aider à promouvoir une prophylaxie fondée sur le port des habits de protection au contact des environnements à risques. En perspective à mon travail de thèse, une collaboration est mise en place avec le PNLUB et l’Institut Pasteur de Côte d’Ivoire pour étudier les réservoirs de M. ulcerans en Côte d'Ivoire. / Buruli ulcer is a dermis, epidermis and sometimes bone infection leading to deformities and permanent disabilities. It is caused by Mycobacterium ulcerans, a mycobacterium associated to the aquatic ecosystems but its sources and reservoirs are not yet defined. Therefore, no prophylaxis is established. This thesis contribute to unmask the sources of contamination of M. ulcerans. My review has identified potential sources of M. ulcerans in the environment and highlighted the missing pieces for understanding the epidemiology of Buruli ulcer. My study on the role of amoeba in the survival of M. ulcerans in the environment, install M. ulcerans as susceptible to amoeba rendering amoeba an unlikely host of M. ulcerans. Hereafter, i studied carbon substrates metabolized by M. ulcerans strains. Literature survey indicated that the environmental sources of carbon substrates metabolized by M. ulcerans were bacteria, fungi, algae and mollusks. I therefore studied the interactions of M. ulcerans with fungi by testing the effect of mycolactones on fungi. Mycolactones showed an attraction effect on Mucor circinelloides. This observation suggest a novel role for mycolactones as chemoatractants to fungi. The mode of transmission of M. ulcerans to humans remains unknown. I showed that M. ulcerans DNA can be detected on the healthy skin of asymptomatic persons, suggesting an asymptomatic carriage. These data could help promote prophylaxis based on wearing protective clothing in contact with risky environments. In perspective to my thesis work, we set up a collaboration with the Buruli Ulcer Program (PNLUB) and Institut Pasteur Côte d'Ivoire to study the reservoirs of M. ulcerans.

As grandes mudanças para os pesquisadores da área de vacinas sao a optimizaçao das vacinas de DNA para uso em humanos ou animais de grande porte e criar vacinas efetivas de uma única dose usando sistemas de liberação controlada apropriados. O plasmídeo de DNA codificando a proteína de heatshock 65 (hsp65) (DNA-hsp65) foi capaz de induzir resposta imune protetora e terapêutica no modelo murino da tuberculose (TB). Apesar do sucesso da vacina baseada na DNA-hsp65 em solução para proteger camundongos contra TB, esta requer múltiplas doses de grande quantidade de DNA para imunização efetiva. No intuito de otimizar esta vacina e simplificar o protocolo de vacinação, nós co-encapsulamos DNA-hsp65 e o adjuvante dimicolato de trealose (DMT) em microesferas biodegradáveis de ácido polilático-poliglicólico (PLGA) para uma única administração. Além disso, foi também desenvolvida uma formulação prime-boost da vacina de dose única baseada na mistura de duas diferentes microesferas de PLGA, apresentando liberação rápida e lenta, de DNAhsp65 e proteína hsp65 recombinante, respectivamente. Essas formulações foram testadas em cobaias pela comparação da eficácia protetora (components efetores da imunidade protetora) e toxicidade (componentes efetores da patologia) induzida pela preparação da preparação do DNA em solução ou BCG. A formulação de dose única prime-boost nitidamente apresentou maior eficácia e reduziu a patologia nos pulmões de cobaias. / The great challenges for researchers working in the field of vaccinology are optimizing DNA vaccines for use in humans or large animals and creating effective single-dose vaccines using appropriated controlled delivery systems. Plasmid DNA encoding the heat-shock protein 65 (hsp65) (DNAhsp65) has been shown to induce protective and therapeutic immune responses in a murine model of tuberculosis (TB). Despite the success of naked DNAhsp65-based vaccine to protect mice against TB, it requires multiple doses of high amounts of DNA for effective immunization. In order to optimize this DNA vaccine and simplify the vaccination schedule, we coencapsulated DNAhsp65 and the adjuvant trehalose dimycolate (TDM) into biodegradable poly(DLlactide- co-glycolide) (PLGA) microspheres for a single dose administration. Moreover, a single-shot prime-boost vaccine formulation based on a mixture of two different PLGA microspheres, presenting faster and slower release of, respectively, DNAhsp65 and the recombinant hsp65 protein was also developed. These formulations were tested in guinea pigs by comparison with the efficacy (effector components of protective immunity) and toxicity (effector components of pathology) induced by the naked DNA preparation or BCG. The single-shot prime-boost formulation clearly presented good efficacy and diminished lung pathology in guinea pigs.

Objetivos: Identificar e comparar grupos de pacientes potencialmente de risco para tuberculose zoonótica (TBz), investigando a existência de fatores associados. Apresentar a distribuição espacial dos casos de tuberculose (TB) em bovinos e dos casos humanos. Método: Trata-se de estudo descritivo de casos confirmados de TB por todas as formas clínicas, residentes no estado de São Paulo, do período de 2006 a 2015. Definiram-se seis grupos potenciais de risco para TBz conforme critérios estabelecidos pela literatura. A análise descritiva foi realizada separadamente para pacientes menores de 15 anos e pacientes com 15 anos ou mais de idade, comparando os grupos identificados com a população de estudo por meio do teste do Qui-quadrado/Exato de Fisher. A existência de associação entre TB intestinal e/ou ganglionar (aceita como proxy de caso suspeito de TBz) e as exposições de interesse foi investigada pelas estimativas da odds ratio bruta e ajustada, com os respectivos intervalos de 95% de confiança, usando regressão logística. . A distribuição dos casos suspeitos foram apresentados em mapas temáticos. Resultados: Aplicados os critérios estabelecidos para o estudo, foram incluídos 190.368 casos de TB por todas as formas clínicas. Dentre estes: 134 tinham menos de 15 anos e residiam em municípios com até 20.000 habitantes (grupo A); os demais tinham 15 anos ou mais, sendo 1.238 trabalhadores rurais (grupo B); 201 magarefes (grupo C); 1.012 residiam em municípios com até 20.000 habitantes e com rebanhos infectados pela TB (grupo D); 2.776 imigrantes sul americanos (grupo E); e 160 imigrantes africanos (grupo F). Os grupos B e F foram os que mais apresentaram características semelhantes à TBz descrita na literatura, destacando-se no grupo B as maiores proporções de casos de residentes em municípios com caso de TB em bovinos e das formas intestinal e ganglionar periférica. Enquanto que no grupo F verificou-se maior proporção de casos com a forma clínica ganglionar periférica e de coinfecção HIV/TB. Os grupos A, C e D também apresentaram características distintas em relação ao total de casos de TB e associadas à TBz segundo a literatura, porém de maneira menos nítida. O grupo E não apresentou características relacionadas aos casos típicos da TBz. Dentre os pacientes menores de 15 anos de idade, após ajustes, destacaram-se como fatores associados à TB ganglionar e/ou intestinal, residir em município com menores índices de urbanização e com casos de TB em bovino conforme registro oficial. Entte os pacientes com 15 anos ou mais de idade, destacaram-se as associações com a ocupação de trabalhador rural e com a de magarefe. A distribuição dos tipos de rebanhos bovinos foi ampla sendo registrados casos da doença em animais em praticamente todas as regiões do estado. Conclusões: Os dados de vigilância da TB humana e animal, permitiram identificar grupos de pacientes com características associadas à TBz, salietando a importância da aplicação da proposta de Saúde Única, além de oferecerem subsídios para o desenvolvimento de um componente para TBz na vigilância da TB no estado de São Paulo, assim como, para pesquisas sobre o tema. / Objectives: To identify and compare groups of patients potentially at risk for zoonotic tuberculosis (zTB), investigating the existence of associated factors. To present the spatial distribution of cases of tuberculosis (TB) in cattle and human cases. Method: This is a descriptive study of confirmed cases of TB by all clinical forms, residents in the state of São Paulo, from 2006 to 2015. Six potential risk groups for zTB were defined according to literature. The descriptive analysis was performed separately for patients younger than 15 years and patients 15 years of age or older, comparing the groups identified with the study population using the Chi-square / Fisher\'s Exact test. The existence of an association between intestinal and/or ganglion TB (accepted as a proxy for a suspected zTB case) and the exposures of interest was investigated by the estimates of the crude and adjusted odds ratio, with the respective 95% confidence intervals, using logistic regression. The distribution of suspected cases was presented in thematic maps. Results: After applying the criteria established for the study, 190,368 TB cases were included in all clinical forms. Among them: 134 were less than 15 years old and lived in municipalities with up to 20,000 inhabitants (group A); the others were 15 years old or over, with 1,238 rural workers (group B); 201 magarefes (group C); 1,012 resided in municipalities with up to 20,000 inhabitants and with herds infected by TB (group D); 2,776 South American immigrants (group E); and 160 African immigrants (group F). Groups B and F were the ones that presented the most similar characteristics to the zTB described in the literature. In group B, the highest proportions of cases of residents in municipalities with cases of TB in cattle and of the intestinal and peripheral ganglion forms were highlighted. While in the F group there was a higher proportion of cases with peripheral ganglionic form and HIV / TB co-infection. Groups A, C and D also presented distinct characteristics in relation to total TB cases and associated with TB, according to the literature, but less clearly. Group E did not present characteristics related to typical zTB cases. Among patients younger than 15 years of age, after adjustments, they were identified as factors associated with lymph node and/or intestinal TB, living in a municipality with lower rates of urbanization and with cases of TB in cattle according to official records. Among the patients aged 15 years and over, the associations with the occupation of rural workers and magarefe stood out. The distribution of bovine herd types was extensive and cases of the disease were recorded in animals in practically all regions of the state. Conclusions: Human and animal TB surveillance data allowed the identification of groups of patients with characteristics associated with zTB, stressing the importance of applying the One Health proposal, as well as providing subsidies for the development of a component for zTB in TB surveillance in the state of São Paulo, as well as for research on the subject.

Zebrafish are becoming increasingly popular to use in different kinds of research projects as research animals, replacing rodents in many fields. When using animals for research, it is important to keep track of the animal health in order to get reliable results. The purpose of the study was to investigate whether these pathogens could be found analyzing environmental materials with real-time PCR instead of euthanizing fish and submitting them for histopathology. Also, to see if any material differentiated from the rest regarding accessibility to work with in a routine diagnostic laboratory.     This study was performed on environmental samples, such as filters, swabs, detritus and water, from a recirculating water system holding zebrafish. The pathogens analyzed were Mycobacterium chelonae, M. haemophilum, M. abscessus, M. marinum, M. fortuitum and Pseudoloma neurophilia, all common pathogens that can affect zebrafish.     All materials tested gave at least one positive result for most of the pathogens tested. Two pathogens were not detected, M. marinum and M. abscessus. Due to poorly working PCR-system for M. fortuitum, the results for that bacteria were deemed inconclusive. The filter materials and the swabs of the filter materials gave the best results in this small study, although all materials gave satisfactory results. In conclusion this study shows that environmental samples can be used to detect pathogens in zebrafish, but larger studies should be performed to better evaluate which material is the best one to use.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2017-08-09T14:43:56Z No. of bitstreams: 1 ANA KARLA ARAÚJO NASCIMENTO COSTA.pdf: 1400423 bytes, checksum: e9bf32acb70ffbbeb661ca0fb11442c4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-09T14:43:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANA KARLA ARAÚJO NASCIMENTO COSTA.pdf: 1400423 bytes, checksum: e9bf32acb70ffbbeb661ca0fb11442c4 (MD5) Previous issue date: 2017-03-29 / Leprosy is a chronic and infectious disease caused by Mycobacterium leprae, a bacillus that has high infectivity and low pathogenicity. The present study aimed to describe the epidemiological characteristics of leprosy in the state of Bahia into period from 2005 to 2015. The type of study was descriptive and quantitative, on leprosy in the period from 2005 to 2015 in the State of Bahia. The study population corresponded to cases of leprosy diagnosed in the State of Bahia. In addition, SINAN data were used and the statistical analyzes were done with the aid of the statistical package SPSS, version 23.0. The level of significance was 5% (p <0.05). Regarding the results, it was observed that in the period from 2005 to 2015, 35,853 cases of leprosy were reported in the state of Bahia, with the majority of them being male (51.9%), in the range of 40-59 (35.0%), Browns (58%), with an incomplete baseline level (61.4%), resided in urban areas (72.1%), dimorphic clinical form (26.9%), MB (57.3%), the degree of physical disability (61.1%), the mode of entry was that of new cases (86.5%), the cure was the main output form (74.5%), the smear was not done in most cases (20.7%) and the initial regimen was MDT / MB (56.5%). Were found in the urban area (72.1%), the dimorphic form (26.9%), multibacillary (MB) (57.3%), the degree of physical incapacity (61.1%), entry was of new cases (86.5%), cure was the main form of exit (74.5%), bacilloscopy was not performed in most cases (20.7%) and the initial therapeutic scheme was MDT / MB (56.5%). The majority of pregnant women were in the second trimester (0.6%). In the history series, the incidence coefficient of the PB form decreased, however, the incidence coefficient of the MB form presented stability (p <0.001). The PB operational classification was more frequent in females (59.9%) and the PQT / PB / 6 doses regimen was the most used; While for males, MB (60.7%) with MDT / MB / 12 doses was the most identified. The general distribution indicated that the MB form was the most incidence in males (p <0.0001). In the study region, the detection rate of leprosy cases / 10,000 inhabitants was very high in the historical series. In the treatment abandonment, the dimorphic clinical form presented the highest number of cases (26.4%). The results indicate an increasing tendency of the incidence coefficient / 100,000 inhabitants to the dimorphic clinical form (R2 = 0.2301; p <0.001) and stability to virchowiana clinical form (R2 = 0.3678; p <0.001). They also indicate that degree II of physical disability presents stability of the incidence coefficient (R2 = 0.0032, p <0.001). From this study it is concluded that leprosy in the State of Bahia is endemic and is still a public health problem. / A hanseníase é uma doença crônica e infectocontagiosa, causada pelo Mycobacterium leprae, um bacilo que possui alta infectividade e baixa patogenicidade. O presente estudo teve como objetivo descrever as características epidemiológicas da hanseníase no Estado da Bahia no período de 2005 a 2015. O tipo de estudo foi descritivo e quantitativo, sobre hanseníase no período de 2005 a 2015 no Estado da Bahia. A população de estudo correspondeu aos casos de hanseníase diagnosticados no Estado da Bahia. Além disso, foram utilizados os dados do SINAN e as análises estatísticas foram feitas com o auxílio do pacote estatístico SPSS, versão 23.0. O nível de significância utilizado foi de 5% (p < 0,05). Quanto aos resultados, observou-se que no período de 2005 a 2015, foram notificados 35.853 casos de hanseníase no Estado da Bahia sendo que a maioria desses eram do sexo masculino (51.9%), na faixa etária entre 40-59 (35.0%), pardos (58%), com nível fundamental incompleto (61.4%) e residiam em zona urbana (72.1%). A forma clínica dimorfa (26.9%), multibacilares (MB) (57.3%), o grau zero de incapacidade física (61,1%), modo de entrada foi a de casos novos (86.5%), a cura foi a principal forma de saída (74.5%), a baciloscopia não foi realizada na maioria dos casos (20.7%) e o esquema terapêutico inicial foi a PQT/MB (56.5%). A maioria das gestantes (n=1,4%) estavam no 2º trimestre gestacional (0.6%). Na série história, o coeficiente de incidência da forma PB diminuiu, contudo, o coeficiente de incidência da forma MB apresentou estabilidade (p<0,001). A classificação operacional PB foi mais frequente no sexo feminino (59,9%) e o esquema terapêutico PQT/PB/6 doses foi o mais usado; enquanto que para o sexo masculino, a forma MB (60,7%) com PQT/MB/12 doses foi a mais identificada. A distribuição geral indicou que a forma MB foi a mais frequente no sexo masculino (p<0,0001). Na região em estudo a taxa de detecção dos casos de hanseníase/10.000 habitantes foi muito alta na série histórica. No abandono do tratamento a forma clínica dimorfa foi a que apresentou o maior número de casos registrados (26.4%). Os resultados indicam tendência crescente do coeficiente de incidência/100.000 habitantes para a forma clínica dimorfa (R2= 0,2301; p < 0,001) e estabilidade para forma clínica virchowiana (R2 = 0,3678; p < 0,001). Indicam ainda que grau II de incapacidade física apresenta estabilidade do coeficiente de incidência (R2=0,0032; p < 0,001). A partir desse estudo conclui-se que a hanseníase no Estado da Bahia é endêmica e ainda constitui um problema de saúde pública.

A resistência térmica dos microrganismos sofre influência, entre outros fatores, das características do agente e das características do substrato, como o teor de gordura. Um dos objetivos da pasteurização do creme é a eliminação dos patógenos eventualmente presentes no leite. Entretanto, não há padrão de tempo e temperatura de pasteurização para este produto na legislação. O Mycobacterium bovis é considerado o patógeno não formador de esporo de maior resistência térmica que pode normalmente ser transmitido pelo leite. Assim, este trabalho se propõe a avaliar a inativação de Mycobacterium bovis (espoligotipo BR024) em creme de leite fresco submetido a alguns parâmetros comerciais de pasteurização. Creme de leite foi contaminado e pasteurizado em Banho-Maria a 75°C, 80°C, 85°C e 90°C, por 5 e 15 segundos. O agente foi quantificado por semeadura em duplicata das diversas diluições em meio Stonebrink, após incubação a 36°C/45 dias. A redução na população variou de 3,9 log UFC/mL até a 6,8 log UFC/mL o que mostra que, nas condições do estudo, todos os binômios estudados mostraram-se capazes de reduzir a carga contaminante para níveis tão baixos ou menores que 0,1 log UFC/mL, considerando a máxima contaminação inicial natural do leite por M. bovis (4 log UFC/mL), segundo Ball (1943) / The thermal resistance of microorganisms is influenced by the agent in question, the initial microbial load and the characteristics of the substrate that can exert a protective effect on the cell, for example, the fat content. The pasteurization of whipping cream aims to eliminate pathogen microorganisms that may occasionally be present in milk. However, there is no standard in the law of time and temperature for this product, making it necessary more detailed study to consider the specific feature of thermal resistance of microorganisms at different temperatures for pasteurization, especially considering the high fat product. Mycobacterium spp is considered the pathogen spore-non-forming of higher heat resistance that can be transmitted by milk, among species, M.bovis is the most pathogenic. Therefore, this study aims to evaluate the inactivation of Mycobacterium bovis (spoligotype BR024) in fresh whipping cream subjected to some parameters of commercial pasteurization. Whipping cream was contaminated and pasteurized in a water bath at 75°C, 80°C, 85°C and 90°C for 5 and 15 seconds. The agent was measured in duplicate in the middle Stonebrink after incubation at 36°C/45 days. The reduction in the population ranged from 3.9 log CFU / mL up to 6.8 log CFU/ mL which shows that under the conditions of the study, all binomials studied were able to reduce the contaminant load to such low levels or lower than 0.1 log CFU / ml, the maximum initial natural contamination of milk by M. bovis (4 log CFU / mL), according to Ball (1943)