O carcinoma espinocelular de boca (CEB) é a neoplasia maligna mais comum da cavidade oral, correspondendo à aproximadamente 94% dos casos dessa região. Apesar dos diversos estudos moleculares e celulares do CEB, a taxa de sobrevida dos pacientes é de aproximadamente 50%, devido principalmente ao tamanho do tumor, metástase em linfonodos regionais, grau de diferenciação das células e sítio anatômico. O microambiente tumoral do CEB, é extremamente complexo e diversificado, tendo como característica principal um estado inflamatório crônico imunossupressivo. Este microambiente é sustentado pela liberação de diferentes citocinas inflamatórias, como IL-6, TNF- - atividades exercidas tanto pelas células tumorais quanto pelas estromais. Dentre essas atividades, tem sido relatado na literatura que as citocinas inflamatórias são capazes de aumentar a migração e a capacidade de invasão das células tumorais. Entre as células estromais, os macrófagos são as mais abundantes e participam da manutenção do microambiente tumoral. De acordo com o estímulo, podem ser polarizados M1, com papel pró-inflamatório e antitumoral, e M2, com papel anti-inflamatório e pró-tumoral. O objetivo desta tese foi compreender o papel dos macrófagos no prognóstico de CEB e das citocinas inflamatórias IL-6, TNF- - linhagens celulares de CEB. Para verificar o papel dos macrófagos no prognóstico, foi realizada uma revisão sistemática na qual foram incluídos apenas os estudos que utilizavam amostra de pacientes com CEB e avaliavam o prognóstico com marcadores para macrófagos. Foi observado que maiores concentrações de macrófagos CD68+ e CD163+ estavam relacionados com pior prognóstico de pacientes com CEB, embora não tenha sido possível concluir qual região tumoral a presença destas células seja mais importante 7 para o desfecho. Para analisar o papel das citocinas inflamatórias IL-6, TNFILensaios in vitro utilizando duas linhagens celulares, SCC25 e Cal27, em condições promotoras de migração sob a influência dessas citocinas. Foi observado que a citocina IL-6 foi capaz de aumentar a velocidade de migração e a direcionalidade tanto da SCC25 quanto da Cal 27 e que esta melhora na capacidade migratória ocorreu através de um crosstalk entre a via de sinalização relacionada a IL6 (STAT3) e a via reguladora de migração celular, Rho GTPase Rac1. Estes dados reforçam o papel do microambiente tumoral no processo de progressão tumoral e sugerem potenciais alvos terapêuticos como a modulação do perfil da população de macrófagos e o papel de interleucinas no controle de invasão tecidual e metástase. / Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common malignant neoplasm of the oral cavity, corresponding to approximately 94% of the cases in this region. Despite the diverse molecular and cellular studies of OSCC, the patient survival rate is approximately 50%, mainly due to tumor size, regional lymph node metastasis, cell differentiation and anatomic site. The OSCC tumor microenvironment is extremely complex and diverse, with the main characteristic being an immunosuppressive chronic inflammatory state. This microenvironment is supported by the release of different inflammatory cytokines, such as IL-6, TNF- - and enhance the activities of both tumor and stromal cells. Among these activities, it has been reported in the literature that inflammatory cytokines are capable of increasing migration and invasiveness of tumor cells. Among stromal cells, macrophages are the most abundant and participate in the maintenance of the tumor microenvironment. According to the stimulus, macrophages can be polarized in M1, with pro-inflammatory and anti-tumoral role, and M2, with antiinflammatory and pro-tumoral role. Thus, the aim of this thesis was to evaluate the role of macrophages in the prognosis of OSCC and the influence of inflammatory cytokines IL-6, TNF- - OSCC cell lines. To assess the role of macrophages in the prognosis, a systematic review was conducted in which only studies using a sample of OSCC patients were evaluated and the prognosis was evaluated with macrophage markers. It was observed that higher concentrations of CD68 + and CD163 + macrophages were related to worse prognosis in patients with OSCC, although it was not possible to conclude which tumor region the presence of these cells is more important for the outcome. In order to analyze the role of the inflammatory cytokines IL-6, TNF- - atory 9 behavior of OSCC cells, in vitro assays using two cell lines, SCC25 and Cal27, were performed in migration-promoting conditions under the influence of these cytokines. It was observed that IL-6 was able to increase the speed migration and directionality of both SCC25 and Cal 27 and that this improvement in migratory capacity occurred through a crosstalk between the IL6-related signaling pathway (STAT3) and cell migration-related pathway, RhoGTPase Rac1. These data reinforce the role of the tumor microenvironment in the tumor progression process and suggest potential therapeutic targets such as the modulation of the profile of the macrophages population and the role of interleukins in the control of tissue invasion and metastasis.

OBJETIVO: A perda de heterozigosidade (LOH) é capaz de avaliar as alterações genéticas de lesões potencialmente malignas. Este ensaio avalia as regiões cromossômicas polimórficas que estão próximas ou na região dos oncogenes e genes supressores de tumor conhecidos. Os objetivos desta tese foram três principais: 1) Avaliar a frequência de perda de heterozigosidade de leucoplasias bucais com diferentes graus de severidade histopatológico em regiões cromossômicas próximas aos genes supressores de tumores. 2) Comparar e correlacionar o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos da British Columbia (Canadá) e Rio Grande do Sul (Brasil). 3) Avaliar os danos ao DNA que podem ocorrer durante o processamento e armazenamento das amostras de tecido parafinado. MÉTODOS: Amostras de leucoplasia bucal (com e sem displasias), fixadas em formalina tamponada 10% e parafinadas, obtidas nos laboratório de patologia bucal do Canadá e do Brasil foram selecionadas e microdissectadas. Procedeu-se a extração de DNA, amplificação por PCR das seguintes regiões microssatélites: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) e 17p13.1 (tp53 e D17S786). Após o produto do PCR foi separado e visualizado em gel de poliacrilamida por autoradiografia. RESULTADOS: Observou-se uma forte correlação entre o perfil de perda de heterozigosidade entre indivíduos com leucoplasia bucal de ambos os países, independentemente da etnicidade. Além disso, pode-se notar que amostras de tecidos parafinados submetidos a mais de 24 horas de fixação em formalina tamponada 10% não serão, em sua maioria, boas amostras para análises de DNA. CONCLUSÃO: As lesões potencialmente malignas, provavelmente não são influenciadas em sua etiopatogênia pelas diferenças étnicas. O modelo de risco genético validado por Zhang e colaboradores (2012) parece ser aplicável em nossa comunidade, sendo necessário a sua validação, respeitando procedimentos técnicos padronizados. Ainda, vale ressaltar, que é imprescindível que a comunidade científica passe a adotar metodologias que preservem o material genético das peças dos bancos de tecidos parafinados, que são de inestimável valor para a pesquisa biomédica. / OBJECTIVE: Loss of heterozygosity (LOH) can evaluate genetic alterations of pre-malignant lesions. This assay evaluates the chromosomal polymorphic regions that are present in tumor suppressor genes and oncogenes. The main objectives of this thesis were: 1) Evaluate the frequency of LOH of oral leukoplakias with different histopathological degrees at chromosomal regions of tumor suppressor genes. 2) Compare the profile of LOH between individuals from British Columbia (Canada) and Rio Grande do Sul (Brazil). 3) Evaluate the DNA damage that may occur with FFPE (formalin-fixed paraffin-embedded) tissues. METHODS: FFPE samples of oral leukoplakia (with and without dysplasia), obtained in Canadian and Brazilian oral pathology laboratories were selected and microdissected. DNA extraction and PCR amplification of the following microsatellite regions were conducted: 4q (D4S243, FABP2), 9p21 (IFNA, D9S171, D9S1748, D9S1751), 17p11.2 (CHRNB1) and 17p13.1 (tp53 and D17S786). PCR products were separated and visualized on polyacrylamide gel by autoradiography. RESULTS: A strong correlation between the LOH profile among individuals with oral leukoplakia from both countries was observed, regardless ethnicity. Furthermore, FFPE tissues subjected to more than 24 hours of fixation in 10% buffered formalin are not, generally, good samples for DNA analysis. CONCLUSION: Pre-malignant lesions etiopathogenesis may not be influenced by ethnicity. The genetic risk model validated by Zhang et al. (2012) seems to be applicable in our community, requiring its own validation, respecting standardized procedures. Still, it is important to emphasize that it is imperative that a scientific community adopts methodologies that preserve the genetic material FFPE tissues that are an invaluable resource for biomedical research.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014 / Objetivo: este estudo teve como objetivo avaliar a atividade moduladora da restricao e privacao de sono paradoxal no processo de carcinogenese bucal induzida pela 4-Nitroquinolina 1-oxido utilizando as proteinas envolvidas no processo da apoptose, do ciclo celular, e inflamacao por meio da analise imunoistoquimica em modelo experimental utilizando 4NQO. Material e metodos: Ratos Wistar machos foram distribuidos em 6 grupos de 10 animais cada, por um periodo de 4 e 12 semanas de tratamento com 4NQO. Para o periodo de 4 semanas, 3 grupos foram formados, sendo que um grupo os animais foram submetidos a privacao de sono, outro submetidos a restricao de sono e por ultimo, o grupo controle. A mesma divisao foi feita para o periodo de 12 semanas. Resultados: Os grupos de 4 semanas nao apresentaram alteracoes histologicas, ja no periodo de 12 semanas, os grupos apresentaram hiperplasia, hiperqueratose e displasia epitelial. No periodo de 4 semanas, quando comparamos a expressao das proteinas do grupo controle com o grupo que foi submetido a restricao de sono, observamos que as expressoes da proteina p53 e Bcl-2 apresentaram diferencas estatisticamente significantivas;, ja no periodo de 12 semanas, essa diferenca foi observada entre as proteinas p53, Bcl-2, Bax e p16ink4a. Quando houve comparacao do grupo controle com o grupo de animais que foram submetidos a privacao de sono, na 4a semana, houve resultados significativos entre as proteinas p53 e Bcl-2, ja na 12a semana, as proteinas p53, Bax e p16ink4a mostraram resultados estatisticamente significantivos. Conclusao: A partir dos resultados apresentados, conclui-se que tanto a restricao e a privacao de sono paradoxal interferiram na expressao das proteinas relacionadas a apoptose e ciclo celular na mucosa bucal de ratos seguindo a carcinogenese / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-31 / Os papilomavírus humanos (HPVs) oncogênicos são importantes agentes na gênese do câncer ginecológico e têm sido implicados também nos cânceres da boca. Com objetivo de avaliar a relação entre o HPV e o carcinoma espinocelular (CEC) da língua, foram selecionados 50 pacientes do sexo masculino, da raça branca, fumantes e com diagnóstico histológico de CEC, e um grupo controle composto por 10 pacientes sem evidências clínicas de lesão na língua. A reação em cadeia pela polimerase (PCR) foi utilizada para detectar a presença do genoma HPV em amostras de tecido fresco, provenientes CEC da margem da língua. Trinta e sete pacientes (74%) apresentaram resultado positivo de PCR para papilomavírus oncogênicos, sendo que no grupo controle apenas uma amostra (10%) foi positiva para os papilomavírus não-oncogênicos. Pôde-se concluir através de análise estatística deste trabalho que o paciente portador de papilomavírus oncogênico na cavidade bucal possui 25,6 vezes mais chance de desenvolver o CEC da língua devendo, portanto ser acompanhado de forma sistemática, através de exames clínico e complementar. / The oncogenic human papillomavirus (HPVs) are important agents in the genesis of gynecological cancer and have been also related to mouth cancer. Aiming to assess the relation between HPV and squamous cell carcinoma (SCC) of the tongue, 50 white male smokers with a histological diagnosis of SCC and a control group composed of 10 subjects with no clinical evidence of lesions in the tongue were selected. Polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the presence of the HPV genome in fresh tissue samples from SCC in the edge of the mouth. Thirty-seven patients (74%) had a positive PCR for oncogenic papillomavirus, and in the control group only one sample (10%) was positive for non-oncogenic papillomavirus. Based on the statistical analysis, we concluded patients with oncogenic papillomavirus in the oral cavity are 25.6-fold more likely to develop SCC of the tongue and must be systematically followed-up by clinical and complementary tests. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

CHAVES, Filipe Nobre. Análise da marcação imunohistoquímica do fator induzido por hipóxia-1α em carcinoma epidermóide oral e em lesões potencialmente malignas. 2013. 79 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-01-08T16:15:00Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_fnchaves.pdf: 1827881 bytes, checksum: c7c49f65c0a2f8e3d6004b1075653d24 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-01-08T16:15:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_fnchaves.pdf: 1827881 bytes, checksum: c7c49f65c0a2f8e3d6004b1075653d24 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-08T16:15:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_fnchaves.pdf: 1827881 bytes, checksum: c7c49f65c0a2f8e3d6004b1075653d24 (MD5) Previous issue date: 2013 / Introduction: Hypoxia is a common feature in solid tumors, such as head and neck cancers, and in these conditions a signaling pathway involving a response regulator oxygen, called hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1) we have highlighted in an attempt to provide a better understanding of tumor biology of cancer. Objective: To investigate the role of HIF-1 in oral squamous cell carcinoma and premalignant lesions presenting oral epithelial dysplasia. Methods: Observational, analytical and cross through the diagnosis and immuno-molecular analysis of malignant and premalignant lesions. 10 biopsied cases with histopathological diagnosis of the CEO and DEO 10 cases were included. It was used the technique of immunohistochemistry Estreptoavitina-Biotin with HIF-1 antibody (Abcam mark, 1:200 dilution, 60 min pH6 citrate antigen retrieval Pascal) analysis of 05 fields each case at 400X magnification. The number of cells in each of five fields was added and the sample was considered as a unit the percentage of positive cells immuno-HIF-1α nuclear and cytoplasmic as well as intensity thereof. The results were obtained and compared between groups by the Student and multifactor ANOVA followed by Bonferroni post-test t test, based on the significance levels of 5%. Results: Cytoplasmic expression of HIF-1α was observed in 58.4 ± 6.0% of the epithelial cells of the DEO and 77.8 ± 3.9% of the cells of the CEO, with a significant difference (p = 0.022). The percentage of cells positive for HIF-1α nuclear staining also showed significant difference (p = 0.021) between DEO (0.2 ± 0.1%) and CEO (2.4 ± 0.8). There was no significant difference between the percentage of cells with weak positive immunostaining in the cytoplasm between DEO and CEO (p = 0.337), however, a significant increase in the percentage of cells with moderate cytoplasm staining (p = 0.029) and strong (p = 0.031) between DEO and CEO. Conclusion: One increasing the expression, nuclear and cytoplasmic HIF-1α DEO to CEO was observed, suggesting their involvement in the early stages of oral carcinogenesis. Clinical Relevance: Seek understanding of the complex signaling pathways, as well as the tumor microenvironment, and different biological behaviors in oral cancer. / Introdução: Hipóxia constitui em uma característica comum de tumores sólidos, como em cânceres de cabeça e pescoço, e nessas condições, uma via de sinalização envolvendo um regulador de resposta a oxigênio, chamado de Fator Induzido por Hipóxia-1 (HIF-1) tem-se destacado, na tentativa de permitir uma melhor compreensão sobre a biologia tumoral do câncer. Objetivo: Investigar o papel do HIF-1 em carcinoma epidermóide oral (CEO) e em lesões potencialmente malignas que apresentam displasia epitelial oral (DEO). Métodos: Estudo observacional, analítico e transversal, através do diagnóstico e análise imuno-molecular de lesões malignas e potencialmente malignas. Foram incluídos 10 casos biopsiados com diagnóstico histopatológico de CEO e 10 casos de DEO. Utilizou-se a técnica imunohistoquímica da Estreptoavitina-Biotina com o anticorpo HIF-1 (marca Abcam, diluição 1:200, 60 minutos, recuperação antigênica com citrato pH6 Pascal), analisando 05 campos de cada caso no aumento de 400X. O número de células em cada um dos cinco campos foi somado e considerou-se como unidade amostral o percentual de células imuno-positivas para HIF-1α conforme marcação nuclear e citoplasmática, bem como intensidade desta última. Os resultados foram obtidos e comparados entre grupos por meio dos testes t de Student e ANOVA multifatorial, seguido do pós-teste de Bonferroni, tomando como base os níveis de significância de 5%. Resultados: Foi observado uma expressão citoplasmática de HIF-1α em 58.4±6.0% das células epiteliais das DEO e em 77.8±3.9% das células dos CEO, com diferença significante (p=0.022). O percentual de células positivas para HIF-1α com marcação nuclear também mostrou diferença significante (p=0.021) entre DEO (0.2±0.1%) e CEO (2.4±0.8). Não houve diferença significante entre o percentual de células com imunomarcação positiva fraca em citoplasma entre DEO e CEO (p=0.337), no entanto, houve aumento significante no percentual de células com marcação citoplasmática moderada (p=0.029) e forte (p=0.031) entre DEO e CEO. Conclusão: Foi observada uma aumento da expressão, nuclear e citoplasmática, de HIF-1α de DEO para CEO, sugerindo seu envolvimento em estágios iniciais da carcinogênese oral. Relevância Clínica: Buscar o entendimento das complexas vias de sinalização, bem como do microambiente tumoral, e diferentes comportamentos biológicos no câncer oral.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:36:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 1188.pdf: 220841 bytes, checksum: f7c054d77ca6d6b60dbd16dfe2fd21ac (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / O uso de biomassa como combustível, carvão e queima de madeira, é a maior fonte de energia para cozimento, aquecimento e outras necessidades domésticas, sendo considerado também o maior causador da pobre qualidade do ar domiciliar nas áreas rurais de países em desenvolvimento. A queima de biomassa produz uma mistura de poluentes liberando uma quantidade de monóxidos de carbono, óxidos de nitrogênio, material particulado, hidrocarbonetos policíclicos aromáticos que são conhecidos ou suspeitos de serem agentes cancerígenos. Este trabalho buscou determinar a associação entre a exposição à fumaça de fogão a lenha e o desenvolvimento de câncer de boca e laringe. Os dados analisados foram coletados de um estudo multicêntrico realizado de 1999 a 2003. A população de estudo foi composta por participantes da investigação (casos e controles) recrutados em hospitais nas cidades do Rio de Janeiro, Goiânia e São Paulo. (...). Já as estimativas para o sexo feminino mostram situações mais alarmantes. Os resultados dos centros unidos mostram uma chance 4 vezes maior das mulheres terem câncer de laringe se fizerem uso de fogão a lenha do que aquelas que nunca usam. Já para o câncer de boca para todos os centros para as mulheres houve associação de 3,62 (IC 95% 1,06- 12,32) para o uso atual. As mulheres que haviam sido expostas por mais de 40 anos aos poluentes intradomiciliares possuíam uma chance de 3,10 e 1,18 de terem câncer de boca e laringe respectivamente em relação a aquelas que nunca haviam utilizado fogão a lenha. Conclui-se que o uso de fogão a lenha é um potencial fator de risco para os cânceres de boca e laringe, principalmente para as mulheres, que são a população que estão mais sob risco.

INTRODUÇÃO: O carcinoma espinocelular de origem bucal (CEC) apresenta uma alta taxa de mortalidade devido à invasividade das células tumorais. A migração celular, principal evento da invasão e metástase, pode ser regulada tanto por fatores intrínsecos, como adesão e contratilidade celular, quanto extrínsecos, como composição, densidade e remodelagem da matriz extracelular (MEC). OBJETIVO: Avaliar o papel de elementos intrínsecos e extrínsecos sobre o processo invasivo do carcinoma espinocelular de origem bucal. MÉTODOS: Foi realizada imuno-histoquímica para as proteínas: Miosina II (isoformas A, B e C), metaloproteinases de matriz (1, 2, 9 e 14); imunofluorescência as proteínas: e-caderina, n-caderina, FAK, paxilina, vinculina e fibronectina em amostras de CEC oral. Foi realizado ensaio de migração nas seguintes condições: 1 – matriz 2D com o substrato de fibronectina, ou laminina ou matrigel; 2 – matriz 3D com colágeno na presença ou não de fibronectina ou laminina; 3 – matriz 3D com diferentes concentrações de colágeno (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) + fibronectina na presença ou não de um inibidor de MMP. Foi realizado análise de adesão celular utilizando-se o microscópio TIRF e o microscópio confocal, tanto em matrizes 2D quanto 3D. Foram realizados esferoides celulares para avaliar a contratilidade celular, através do plaqueamento das células em gel de agarose e a utilização de drogas que inibem ou que induzem a contratilidade, bem como a partir de células transfectadas com versões fosfomiméticas para a cadeia leve de miosina. Foi realizado ainda western blotting para proteínas: e-caderina, FAK, vinculina, paxilina, N-caderina, integrinas e as isoformas de miosina II, bem como foi avaliado os níveis de ativação das proteínas da família RhoGTPase, as quais estão envolvidas no controle da migração celular. RESULTADOS: A expressão das MMPs analisadas e das isoformas de miosinas foi maior nas zonas de invasão tumoral, sendo que o CEC oral também apresenta uma maior expressão de proteínas associadas à adesão com a MEC. A migração celular foi afetada pela densidade e a composição da MEC, bem como pela atividade das MMPs. Adicionalmente, a modulação das proteínas de adesão célula-matriz altera a velocidade de migração, a direcionalidade dessa migração e também a forma de migração, mudando de uma migração coletiva para uma migração individual. O aumento na contratilidade células resulta numa dispersão celular enquanto que a diminuição da contratilidade resulta numa melhor adesão célula – célula. CONCLUSÕES: O comportamento das células tumorais pode ser modulado através de fatores extrínsecos como, por exemplo, a alteração no microambiente tumoral, seja ela por mudança no substrato ou na densidade da matriz, e também dos fatores intrínsecos como a alteração nos níveis de miosina. / INTRODUCTION: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) presents high mortality index due to the invasive phenotype of tumor cells. Cell migration is the main event in cell invasion and metastasis and it can be regulated by intrinsic factor, such as adhesion and cell contractility, and extrinsic factors, such as density and extracellular matrix (EMC) remodeling. OBJECTIVE: Analyze the role of intrinsic and extrinsic factor during the invasive process of oral squamous cell carcinoma. METHODS: We performed immunostaining in OSCC samples for the following proteins: myosin II (isoforms A, B and C), matrix metalloproteinase (1, 2, 9 and 14) e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and fibronectin. We also performed migration assays with OSCC cell line in the following conditions 1 – 2D matrix with fibronectin or laminin or matrigel; 2 – 3D matrix with collagen in the presence or not of fibronectin or laminin; 3 – 3D matrix with different collagen concentration (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) with fibronectin in the presence or not of the MMP inhibitor. In order to analyze cell adhesion, it was performed Total Internal Reflectance Fluorescence and Confocal microscopy, in 2D and 3D matrix. To analyze cell contractility, cells were plated in agarose gel in order to produce spheroids, which were treated with drugs that inhibit or induce cell contractility or cells were previously transfected with Myosin Light Chain phosphomimetics mutants. It was also performed western blotting to: e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and myosin II isoforms, as well as it was analyze the levels in RhoGTPase family, which are involved in cell migration control. RESULTS: The expression to MMPs and myosin II isoforms were higher at invasion zone of the tumor, and the OSCC presented higher expression of proteins associated to adhesion to ECM. Cell migration was affected by the EMC composition and density and by MMP activity. Also, the modulation of cell-matrix adhesion proteins altered migration speed, cell directionality as well as influenced the switch between collective and single cell migration. The increase in cell contractility resulted in cell dispersion while the decrease in cell contractility resulted in a better cell-cell adhesion. CONCLUSIONS: The behavior of cell tumor can be modulate by extrinsic factors, for example, the change in tumor microenvironment, by the change in the EMC substrate or density and by intrinsic factors such as the alteration in myosin levels.

O corpo de evidências científicas a respeito da inter-relação entre câncer oral e doenças periodontais vem aumentando consideravelmente. Entretanto, estudos avaliando os mecanismos biológicos que permeiam esta associação ainda são escassos. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da exposição ao carcinógeno 4-nitroquinolina 1-óxido (4NQO), sobre a perda óssea alveolar induzida por ligadura e espontânea em ratos Wistar. Foram utilizados 84 ratos Wistar machos, divididos em quatro grupos experimentais: Grupo 1 (Controle total); Grupo 2 (Exposição ao 4NQO); Grupo 3 (Perda óssea alveolar); Grupo 4 (Exposição ao 4NQO e perda óssea alveolar). Os grupos 2 e 4 foram expostos ao carcinógeno, diluído em água (50ppm), por vinte semanas. A perda óssea alveolar foi induzida, por meio de ligadura com fio de seda no segundo molar da hemiarcada direita dos animais, nos grupos 3 e 4, sendo no grupo 4, após a exposição ao 4NQO. O peso corporal dos animais foi monitorado ao longo do estudo. Após decorridas vinte semanas do período experimental, os animais foram mortos e as peças maxilares e línguas foram analisadas em relação à perda óssea alveolar e lesões macroscópicas linguais. 71 animais completaram o estudo. Todos os animais expostos ao 4NQO apresentaram lesões macroscópicas na língua, demonstrando que o modelo experimental de exposição ao carcinógeno foi efetivo. A análise da perda óssea alveolar demonstrou diferenças significativas entre grupos expostos em relação a não expostos ao 4NQO na ocorrência de perda óssea alveolar espontânea. Essas diferenças não foram observadas nos lados com ligadura. Pode-se concluir que a exposição ao carcinógeno 4NQO potencialmente influencia a perda óssea alveolar espontânea em ratos. / Scientific evidence about the inter-relationship between periodontal disease and oral cancer has increased considerably. However, studies evaluating the biological mechanisms related to this association are still scarce. The aim of this study was to evaluate the effect of exposure to 4-nitroquinoline 1-oxide (4NQO) on spontaneous and ligature-induced alveolar bone loss. For this, 84 male Wistar rats were divided into four groups: Group 1 (Full Control), Group 2 (4NQO exposure), Group 3 (Alveolar bone loss), Group 4 (4NQO exposure and alveolar bone loss). Groups 2 and 4 were exposed to the carcinogen, diluted in water (50ppm) for twenty weeks. Alveolar bone loss was induced by silk ligatures at the upper right maxillae, around the second molar, for animals in groups 3 and 4; in group 4, ligatures were placed after exposure to 4NQO. Body weight of the animals was monitored throughout the study. After twenty weeks of the experimental period, the animals were killed and the maxillae and tongues were analyzed. Morphometric analysis of alveolar bone loss and macroscopic lesions in tongue were analyzed in 71 animals which completed the study. All animals exposed to 4NQO presented macroscopic lesions in dorsal part of tongue, demonstrating that the experimental model of carcinogen exposure was effective. The analysis of alveolar bone loss, was performed by medians and interquartile ranges and showed significant differences between animals exposed or not to 4NQO in terms of spontaneous alveolar bone loss. This was not observed in sites with ligatures. It can be concluded that exposure to carcinogenic 4NQO potentially influences spontaneous alveolar bone loss in rats.

Ampliar nosso conhecimento sobre a biologia do carcinoma espinocelular bucal é fundamental para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas e para melhorar a sobrevida dos pacientes acometidos por essa patologia. Para tanto, compreender as contribuições do microambiente tumoral à carcinogênese é muito importante. Um característica importante a ser avaliada do microambiente tumoral é a acidificação do meio extracelular. Considerando que o pH ácido tumoral está relacionado à maior agressividade da lesão, o objetivo deste projeto é estudar os efeitos de um microambiente ácido na biologia de células de carcinoma espinocelular bucal. Para tanto, foram realizadas duas revisões da literatura, nas quais foram avaliados os seguintes temas: influência da acidez extracelular na invasão e migração; e os mecanismos moleculares envolvidos na resistência ao tratamento quimioterápico, induzida pela acidez do microambiente tumoral. Tais revisões embasaram a construção do terceiro artigo desta tese, o qual se propôs a comparar o comportamento de células linhagens de carcinoma espinocelular bucal (SCC-4 e SCC-9) e queratinócitos (HaCat) cultivadas em meio de cultura de pH 6.8 com células mantidas em meio neutro pH 7.4. As células foram expostas de forma contínua ou intermitente ao pH 6.8 e a adaptação das células foi avaliada pelo ensaio clonogênico. Além disso, as células foram avaliadas quanto à sua capacidade migratória pelo ensaio de cicatrização de feridas e de time lapse. A expressão gênica relacionada à indiferenciação e pluripotência foi investigada por PCR em tempo real com os marcadores Bmi-1 e CD44, assim como pelo ensaio de orosferas. A resistência desses grupos de células ao tratamento anti-câncer foi avaliada pelo ensaio de viabilidade celular da sulforodamina B após o tratamento com Cisplatina. Para a análise estatística, inicialmente foi realizada a distribuição dos dados, seguido da comparação estatística dos grupos utilizando, para distribuição normal, os testes ANOVA e ANOVA de duas vias. Toda a análise foi realizada no programa GraphPad Prism 5.0 e o nível de significância considerado foi de p< 0.05.Observamos que ambas as linhagens mudaram sua morfologia para um aspecto mesenquimal. Ao avaliar o perfil migratório observou-se que as células SCC-9 apresentaram maior capacidade de migração após a exposição ao pH6.8. O aumento da migração celular pode ser causado pela indução da transição epitélio-mesênquima, visto que observamos o aumento da expressão de N-caderina (SCC-4:p<0.05) concomitante à diminuição de E-caderina (SCC-4: p<0.05). A exposição à acidez também provocou, em ambas as linhagens, aumento da capacidade de formar orosferas em placa de baixa aderência, denotando um fenótipo pluripotente (SCC-4: p=0.007/ SCC-9: p= 0.1202). Tal resultado foi reforçado com aumento da expressão gênica do marcador de célula-tronco tumoral CD44 (p= 0.0325). na linhagem SCC-4. No entanto, observamos diminuição da expressão de Bmi-1(p=0.0572) em relação ao controle. A resistência à Cisplatina aumentou nos casos de exposição contínua à acidez (SCC-4: p<0,05). O recondicionamento em meio neutro reverteu a sensibilidade celular (SCC-4: p>0,05). Concluímos que a acidez extracelular no carcinoma espinocelular bucal aumenta a capacidade de migração, induz o fenótipo de células tronco-tumorais e aumenta a resistência a quimioterápicos. / To expand our knowledge about the biology of oral squamous cell carcinoma is crucial for the development of new therapeutic strategies and to improve the survival of the patients affected by this pathology. Therefore, understanding the contributions of the tumor microenvironment to carcinogenesis is very important. An important feature to be evaluated of the tumor microenvironment is the acidification of the extracellular medium. Considering that acidic pH is related to the greater aggressiveness of the tumor, the aim of this study is to analyze the effects of an acidic microenvironment on the biology of oral squamous cell carcinoma cells. We realized two reviews of the literature, in which the following themes were evaluated: the influence of extracellular acidity on the invasion and migration; and the molecular mechanisms involved in the resistance to chemotherapeutic treatment, induced by the acidity of the tumor microenvironment. These revisions helped to construct the third article of this thesis, which proposed to compare the behavior of squamous cell carcinoma lines (SCC-4 and SCC-9) and keratinocytes (HaCat), cultured under pH 6.8 was compared to cells maintained at pH 7.4. For the statistical analysis, the data distribution was initially performed, followed by the statistical comparison of the groups using, for normal distribution, ANOVA and ANOVA two-way tests. All analysis was performed in the GraphPad Prism 5.0 program and the level of significance considered was p <0.05.After continuous or intermittent exposure to pH 6.8, cell adaptation was assessed by the clonogenic assay. In addition, the migratory capacity of the cells was evaluated by the wound healing and time-lapse assays. The gene expression related to undifferentiation and pluripotency was assessed by real-time PCR analysis of the Bmi-1 and CD44 markers, as well as by the orosphere assay. The resistance of these cell groups to anti-cancer treatment was assessed by the sulforhodamine B cell viability assay after treatment with Cisplatin. We observed that both cell lines changed their morphology to a mesenchymal aspect. When assessed the migratory profile, it was observed that SCC-9 cells showed higher migration capacity after exposure to pH6.8. Increased cell migration may be caused by the induction of the epithelial-mesenchymal transition, as we observed increased N-cadherin (SCC-4:p<0.05) expression concomitant with decreased E-cadherin (SCC-4: p<0.05). Exposure to acidity also led to increased ability to form orospheres on low-attachment dishes, denoting a pluripotent phenotype in both strains (SCC-4: p=0.007/ SCC-9: p= 0.1202). This result was reinforced by increased expression of the CD44 (p= 0.0325) tumor cell marker in the SCC- 4 cells. However, we observed a decrease in the expression of Bmi-1(p=0.0572) in relation to the control. Resistance to Cisplatin increased when cells were continuously exposed to acidity(SCC-4: p<0,05). Neutral reconditioning reversed cell sensitivity (SCC-4: p>0,05). We conclude that extracellular acidity in oral squamous cell carcinoma increases the migration capacity, induces the cancer stem cell phenotype and increases resistance to chemotherapy.

Autofagia é o processo catabólico que ocorre nos lisossomos, e tem por finalidade degradar os componentes celulares e proteínas que já não são mais funcionantes e, assim manter seu equilíbrio homeostático para sobreviverem adequadamente em condições estressantes. Diante das funções biológicas da autofagia identificadas até hoje, a relação entre autofagia celular e neoplasias está provavelmente entre as mais estudadas, devido ao papel duplo que a autofagia exerce sobre o desenvolvimento do câncer, podendo atuar como um mecanismo supressor de tumor ou, podendo ser um mecanismo fundamental para a sobrevivência de células neoplásicas. No entanto, em lesões potencialmente malignas não se sabe sobre o comportamento do processo autofágico. Dessa forma, nosso estudo se propôs a estudar o comportamento da autofagia em neoplasias e em lesões potencialmente malignas bucais e correlacionar com os parâmetros clínicos e a evolução dessas lesões. Para tal finalidade foi utilizado a técnica de imunoistoquímica para avaliar em amostras de mucosa normal, leucoplasias e carcinomas espinocelulares bucais, o percentual de células positivas para o marcador LC3-II. Foram avaliadas 7 amostras de mucosa bucal normal, 51 leucoplasias e 120 carcinomas espinocelulares. Para a análise de carcinomas espinocelulares foi construído um microarranjo tecidual com 2 cilindros de cada paciente. Observamos o aumento dos níveis de autofagia no carcinoma espinocelular bucal (p<0,001) em relação aos outro grupos, porém sem associação com a evolução e sobrevida desses pacientes. Entre as leucoplasias, observamos maior percentual de células positivas na camada intermediária de leucoplasias 12 displásicas (p=0,0319) e na camada basal de lesões com pior evoluação (p=0,0133). Concluimos que os níveis de autofagia aumentam durante o processo de carcinogênese bucal e estão correlacionados com o pior comportamento das leucoplasias. / Autophagy is a catabolic process to digest the cell components and proteins that are no functional anymore. Autophagy maintains the homeostasis in order to cells survive in stressful conditions. In view of the biological functions of autophagy identified to date, the relationship between cellular autophagy and neoplasia is probably among the most studied, due to the dual role that autophagy exerts on the development of cancer. Cell autophagy can act as a tumor suppressor mechanism, or as a key mechanism for the survival of neoplastic cells. However, it is not known in potentially malignant lesions how the autophagic process is controlled. Therefore, the purpose of this study is to assess the autophagic process in oral cancer and potentially malignant oral lesions and to correlate with clinical parameters and the evolution of these lesions. For this purpose, the immunohistochemical technique was used to evaluate the percentage of cells positive for the LC3-II marker in the normal mucosa, leukoplakia and oral squamous cell carcinoma samples. Seven samples of normal buccal mucosa, 51 leukoplakia and 120 squamous cell carcinomas were evaluated. For the squamous cell carcinomas analysis, a tissue microarray with 2 cylinders of each patient was constructed. We observed increased levels of autophagy in oral squamous cell carcinoma (p <0.001) in relation to the other groups, however no association with the prognosis and survival of these patients was detected. Among the leukoplakias, we observed a higher percentage of positive cells in the intermediate layer of dysplastic leukoplakias (p = 0.0319) and in the basal layer of lesions with worse prognosis (p = 0.0133). We conclude that autophagy levels increase during the process of oral carcinogenesis and are correlated with the worse behavior of leukoplakia