Orientador: Daniel Galera Bernabé / Resumo: O estresse crônico aumenta os níveis sistêmicos dos hormônios do estresse norepinefrina e cortisol. Assim como o carcinógeno específico do tabaco NNK (4-(metilnitrosamina)-1-(3-piridil)-1-butanona), estes hormônios podem induzir danos expressivos no DNA, o que contribui para o desenvolvimento do câncer. No entanto, é desconhecido se os hormônios do estresse possuem efeitos genotóxicos em queratinócitos de boca. Este estudo investigou os efeitos dos hormônios do estresse sobre o dano no DNA de uma linhagem celular de queratinócitos humanos de boca (NOK-SI). Células NOK-SI estimuladas com norepinefrina ou cortisol apresentaram maior dano no DNA que as células não tratadas. O dano induzido pela norepinefrina foi revertido pelo pré-tratamento das células com um beta-bloqueador. Células tratadas com NNK combinado à norepinefrina apresentaram níveis reduzidos das caspases 3 e 7. O cortisol também reduziu a atividade das enzimas pro-apoptóticas em relação às células não estimuladas. O dano no DNA promovido pelo NNK e cortisol e pela combinação de ambos levou ao acúmulo de γH2AX intracelular. Os efeitos causados pelo NNK e cortisol foram bloqueados com propranolol e com o antagonista do receptor de glicorcorticoide RU486, respectivamente. As quebras no DNA induzidas pela norepinefrina, na presença ou ausência de NNK, resultaram em maiores níveis celulares de 8OHdG. Este efeito também foi induzido via receptores beta-adrenérgicos. Os hormônios do estresse induzem danos no DNA de quera... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chronic stress increases the systemic levels of stress hormones norepinephrine and cortisol. As well tobacco-specific carcinogen NNK (4-(methylnitrosamine)-1-(3-pyridyl)-1-butanone), they can induce expressive DNA damage contributing to the cancer development. However, it is unknown whether stress hormones have genotoxic effects in oral keratinocytes. This study investigated the effects of stress hormones on DNA damage in a human oral keratinocyte cell line (NOK-SI). NOK-SI cells stimulated with norepinephrine or cortisol showed higher DNA damage than untreated cells. Norepinephrine-induced DNA damage was reversed by pre-treatment with beta-adrenergic blocker propranolol. Cells treated with NNK combined to norepinephrine displayed reduced levels of caspases 3 and 7. Cortisol also reduced the activity of pro-apoptotic enzymes. DNA damage promoted by NNK or cortisol and carcinogen combined to the hormone led to intracellular γH2AX accumulation. The effects caused by NNK and cortisol were abolished by propranolol and glucocorticoid receptor antagonist RU486, respectively. DNA breaks induced by norepinephrine in the presence or absence of NNK resulted in higher 8OHdG cellular levels. This effect was also induced through beta-adrenergic receptors. Stress hormones induce DNA damage of oral keratinocytes and could contribute to oral carcinogenesis. / Doutor

Estima-se que no Brasil para os anos de 2016 e 2017, o diagnóstico de câncer em região de boca e laringe atingirá mais de 22 mil pessoas. Os principais tratamentos para esta doença são quimioterapia, cirurgia e radioterapia realizados de forma associada ou não. O tratamento antineoplásico gera diversos efeitos colaterais que prejudicam muito a qualidade de vida do paciente. Avaliando a radioterapia, os principais efeitos colaterais são: a mucosite oral, disgeusia e trismo, além do desenvolvimento de hipossalivação, cáries de radiação e osteorradionecrose. A Radioterapia de Intensidade Modulada de Feixe (IMRT) possibilita o tratamento oncológico com diferentes isodoses de radiação conforme a necessidade da região, possibilitando emitir menor quantidade de radiação em tecido livre do tumor próximo ao foco principal de tratamento, diferente dos tratamentos radioterápicos convencionais mais antigos. Nosso objetivo foi desenvolver um dispositivo intraoral confeccionado com resina acrílica para afastar tecido sadio do foco principal de radioterapia por IMRT, separando mecanicamente o palato, língua e assoalho bucal em pacientes com câncer em região de boca e orofaringe. Os pacientes foram divididos em dois grupos: controle (GC) sem uso do dispositivo intraoral e análise (GA) com uso do dispositivo intraoral. Os pacientes do GC foram avaliados através da retrospectiva de seus prontuários, o GA foi acompanhado durante planejamento e todo o tratamento radioterápico por IMRT. Foram avaliados grau de mucosite oral seguindo critérios da OMS (GC e GA) e OMAS (GA), questionário sobre impacto da saúde bucal na qualidade de vida antes e depois (GA) das sessões de radioterapia, sexo, idade, tratamentos antineoplásicos concomitantes, doses de radiação (GC e GA), desenvolvimento de disgeusia (GA) e trismo (GA). Ocorreu maior tendência na gravidade de mucosite oral para pacientes do GC. Os testes estatísticos foram significantes com p < 0,05 para menor grau de desenvolvimento de eritema e úlceras em mucosa bucal em GA. Todos os pacientes do GA desenvolveram disgeusia no período entre 7 e 14 dias após a última sessão de radioterapia. A capacidade de abertura bucal pós tratamento radioterápico no GA foi diminuída em média 8,35%. A avaliação do impacto da saúde bucal na qualidade de vida antes e após tratamento foi significativo em três dimensões e na avaliação geral do questionário. O planejamento de distribuição das isodoses em região de tumor e áreas adjacentes através de tomografia computadorizada foi facilitado pelo uso de dispositivo intraoral devido afastamento mecânico de estruturas bucais não comprometidas pelo câncer. A diminuição dos efeitos colaterais causados pela radioterapia melhoram a qualidade de vida durante e após o tratamento. A estabilização da posição de boca e língua durante a radioterapia deixou o tratamento mais confortável para os pacientes, além de beneficiar o trabalho do médico radioterapeuta e físico médico. / In Brazil, between 2016 and 2017, the cancer diagnosis in the mouth and larynx region is estimated to reach more than 22,000 people. The main treatment for this disease are chemotherapy, surgery and radiotherapy done in a conjunct way or not. The antineoplastic treatment generates several side effects that do much harm to the patient welfare. In radiotherapy, the main side effects are oral mucositis, dysgeusia and trismus, besides the salivation development, radiation cavities and osteoradionecrosis. The radiotherapy by IMRT allows the cancer treatment with different radiation isodoses according to the region allowing a reduced amount of free tumor region emission close to the main focus treatment, different from the older conventional radiotherapeutic treatment. Our goal was to develop an intraoral device using acrylic resin to put away healthy tissue from the IMRT treatment main focus, separating mechanically palate, tongue and mouth floor in mouth and oropharynx neoplasm region patients. The patients compused two groups: control (CG) without intraoral stent and analysis (AG) with intraoral stent usage. The CG patients were evaluated throughout their medical records historic; the AG was accompanied during planning and all the IMRT radiotherapeutic treatment. The oral mucositis degrees were evaluated according WHO (CG and AG) and OMAS (AG) criteria, survey about mouth health impact on welfare before and after (AG) the radiotherapy sessions, gender, age, concomitant antineoplastic treatment, radiation doses (CG and AG), dysgeusia treatment (AG) and trismus (AG). Higher incidence of oral mucositis severity to CG patients occurred; the statistic tests were significant with p < 0.05 to minor erythema and ulcer development degree in mouth mucosa in AG. In all AG patients developed dysgeusia in the period between 7 and 14 days after the last radiotherapy session. The mouth opening after radiotherapeutic treatment diminished a mean of 8.35%. The impact of mouth health on welfare before and after treatment was not significant. The isodoses distribution planning in tumor and nearby areas regions throughout computed tomography was eased by the intraoral stent usage due to mechanically spacing from the mouth structures not harmed by cancer. The side effects diminishing caused by radiotherapy improve welfare during and after the treatment and the mouth and tongue position stabilization during the radiotherapy left the treatment more comfortable for the patients, besides benefitting the medical radiotherapist and the medical physicist work.

Linfomas de boca: reclassificação e caracterização dascélulas dendríticas Este estudo teve como objetivo, a partir de um levantamento de casos de linfomas de boca, sua reclassificação de acordo com a classificação da Organização Mundial Saúde-2001 (OMS-2001), com imunofenotipagem, relação com o vírus Epstein-Barr (EBV-“Epstein-Barr virus“), com confirmação da monoclonalidade das neoplasias de células linfóides B, e a caracterização das células dendríticas e sua relação com os diferentes tipos histológicos. Para tanto se utilizou informações obtidas nas fichas de requisição para exame anatomo-patológico, da técnica de hematoxilia-eosina, da técnica de imuno-histoquímica, da técnica de hibridização “in situ", e da reação em cadeia da polimerase. Este estudo constou de 46 casos de linfomas de boca e as neoplasias de células linfóides B maduras foram 42 (91,3%) casos. Os linfomas de boca estiveram presentes preferencialmente em pacientes do sexo masculino e leucodermas. Os tipos histológicos foram diferentes de acordo com a idade. As lesões localizaram-se preferencialmente em tecido mole da maxila, a exceção do linfoma de Burkitt que teve como localização preferencial a mandíbula. Os anticorpos CD20 e CD79a foram imunodetectados em todos os tipos histológicos de neoplasias de células linfóides B maduras, e os anticorpos CD45RO e CD3 em todas as neoplasias de células linfóides T e NK maduras. Freqüências variáveis da detecção do EBV foram verificadas em casos de linfoma difuso de grandes células B, subtipo plasmoblástico, de linfoma de Burkitt e de linfoma de células NK/T extranodal, tipo nasal. Quatorze casos (87,5%) dos casos de neoplasias de células B maduras de boca apresentaram, na análise do gene da imunoglobulina de cadeia pesada (IgH), um padrão de banda monoclonal. As células dendríticas foliculares visualizadas pelos anticorpos CD21 e CD35 estiveram presentes em áreas de pseudofolículos e folículos linfóides de dois casos de linfoma difuso de grandes células B e em um caso de linfoma MALT, respectivamente; e no caso de linfoma de células do manto. As células dendríticas foliculares visualizadas pelo anticorpo caldesmona e as células dendríticas interdigitantes pela proteína S100, estavam presentes em todos os 46 casos de linfomas de boca. O linfoma de Burkitt apresentou índices de células dendríticas foliculares/caldesmona+ e células dendríticas interdigitantes/S100+ menores que o linfoma difuso de grandes células B e linfoma difuso de grandes células B, subtipo plasmoblástico. A associação do padrão morfológico com dados clínicos, perfil imuno-histoquímico, presença EBV e comprovação da monoclonalidade por análise molecular representam chaves para o diagnóstico dos linfomas de boca. O micro-ambiente dos linfomas é importante para o desenvolvimento das células dendríticas. / Oral lymphomas: reclassification and characterization of the dendritic cell The aim of this study was to evaluate and reclassificate oral lymphomas in accordance with WHO-2001. Forty-six oral lymphomas were included in the study. Clinical data, hematoxylin and eosin patterns were considered. The tumors were then submitted to immunohistochemical for unophenotype and characterize the dendritic cell, to “in situ" hybridization for Epstein-Barr virus (EBV) and to polymerase chain reaction for confirmation of the monoclonality in the B cell lymphoid neoplasm. The oral lymphomas were more frequent in white males. Mature B cell lymphoid neoplasm was the commonest lesion in these patients (91.3%). The age of the patients varied in the different histological types. The oral lymphomas were mainly found in oral soft tissue, except the Burkitt’s lymphoma, that was localized more frequently in the mandible. CD20/CD79a and CD45RO/CD3 antibodies were typically expressed in all cases of the mature B cell lymphoid neoplasm and mature T cell and NK cell lymphoid neoplasm, respectively. Epstein-Barr virus was present in diffuse large B cell lymphoma, plasmablastic subtype, in the Burkitt’s lymphoma and in the extranodal NK/T cell lymphoma, nasal type.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:54:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 390283.pdf: 2534634 bytes, checksum: ab29f9d2768dd48a41b1c0f31f4c8fac (MD5) Previous issue date: 2006-03-10 / O carcinoma epiderm?ide (CEB) ? a principal neoplasia maligna da cavidade bucal. A maior incid?ncia desse tumor ocorre entre a quarta e s?tima d?cada de vida, sendo que tem sido constatado um aumento no n?mero de adultos jovens com esta patologia em v?rias regi?es do mundo. O objetivo deste estudo foi comparar as caracter?sticas an?tomo-patol?gicas e a express?o da endoglina (CD105) em CEBS dos grupos et?rios adultos (< 60 anos) e idosos (>/= 60 anos). Foram utilizadas 27 amostras de CEBs, entre as quais 14 esp?cimens eram oriundas de pacientes adultos e 13 esp?cimens de pacientes idosos. Foram comparados os aspectos cl?nicos, an?tomopatol?gicos e os padr?es de neoangiog?nese, atrav?s da express?o da glicoprote?na endoglina (CD 105) entre os grupos de adultos e idosos. Os resultados mostraram que a baixa grada??o de malignidade, o baixo padr?o de invas?o, o alto grau de queratiniza??o e o baixo n?mero de mitoses no grupo de idosos foram estatisticamente significantes para (p<0,03), (p<0,04), (p<0,04), (p<0,04), respectivamente, quando comparado com o grupo de adulto a neo-angiog?nese avaliada atrav?s da quantifica??o da express?o da endoglina n?o apresentou diferen?as estatisticamente significante para (p<0,05) em ambos grupos estudados. Considerando os resultados apresentados neste estudo, pode-se concluir que os CEBs de pacientes idosos apresentam menor grada??o de malignidade e algumas caracter?sticas an?tomo-patol?gicas que sugerem menor agressividade tumoral em rela??o aos adultos, entretanto, n?o houve altera??o quantitativa da express?o da endoglina entre os grupos analisados

A forte expressão do fator de crescimento endotelial vascular do tipo -C (VEGF-C) tem sido correlacionada com a presença de metástases linfonodais em carcinomas espinocelulares (CECs) de boca. O objetivo deste estudo consistiu em avaliar a expressão imuno-histoquímica do anticorpo anti-VEGF-C, nas células malignas de pacientes com CEC de boca em estádios iniciais, correlacionando-a com a ocorrência de metástases ocultas nos linfonodos cervicais e com o prognóstico dos pacientes. Um total de 87 pacientes com CEC de língua e assoalho de boca, estadiamento clínico I e II, tratados no Departamento de Cirurgia de Cabeça e Pescoço, do Hospital do Câncer A.C. Camargo, São Paulo, no período de 1968 a 2001, foram analisados quanto as características demográficas, clínicas, classificação pelo sistema TNM, tratamento e evolução clínica. Avaliou-se também o índice de malignidade tumoral histopatológico e a expressão imuno-histoquímica de VEGF-C foi comparada entre os CECs de boca sem (pN0) e com (pN+) comprometimento linfonodal (metástases ocultas). As probabilidades de sobrevidas global, livre de doença e específica por câncer dos pacientes com CEC, acumuladas nos períodos de cinco e dez anos, em relação a expressão tumoral de VEGF-C, foram calculadas pelo método de Kaplan-Meier. De sessenta e quatro pacientes submetidos ao esvaziamento cervical eletivo, quatorze deles (21,9%) apresentaram comprometimento linfonodal cervical histopatológico (metástase oculta). De acordo com os resultados, não houve correlação estatisticamente significativa entre a expressão de VEGF-C e as principais variáveis demográficas, clínicas, microscópicas e o índice histopatológico de malignidade tumoral (p=0,406), bem como com relação a ocorrência de metástases ocultas nos linfonodos cervicais (p=0,876). O único fator de prognóstico significativo para a sobrevida global (p=0,030) foi a ocorrência de metástase oculta comprovada por exame histopatológico. Concluiu-se que a expressão imuno-histoquímica isolada de VEGF-C nas células malignas não influenciou a evolução clínica e o prognóstico dos pacientes com CEC de língua e assoalho de boca nos estádios iniciais (I e II) e, portanto, o esvaziamento cervical eletivo permanece como uma intervenção terapêutica recomendada no tratamento destes pacientes. / The high expression of vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C) has been correlated with the presence of lymph node metastasis from oral squamous cell carcinoma (OSCC). The purpose of this study was to evaluate the immunoexpression of VEGF-C antibody in malignant cells of patients in early stages of OSCC, and to correlate it with occult cervical lymph node metastasis and patients prognosis. Eighty seven patients with OSCC of tongue and floor of the mouth, clinical stage I and II, treated at the Department of Head and Neck Surgery and Otorhinolaryngology of Cancer Hospital A. C. Camargo, São Paulo, from 1968 to 2001, were included in this study. It was evaluated the demographical and clinical characteristics, TNM classification, treatment and clinical outcome. The histopathological malignancy index and immunoexpression of VEGF-C and their correlation with OSCC with (pN+) and without (pN0) positive lymph node (occult metastasis) were also evaluated. The overall and disease-free survival for OSCC patients for five and ten years related to VEGF-C tumor expression were calculated by Kaplan-Meier method. Among 64 patients that were submitted to elective neck dissection, 14 (21,9%) showed positive histopathological lymph node (occult metastasis). Our results did not show statistically significant difference for VEGF-C expression and main demographical, clinical, microscopical characteristics and histopathological malignancy index (p=0,406), as well as to occult neck metastasis (p=0,876). The occult lymph node metastasis was a prognostic factor for overall survival of patients with OSCC (p=0,030). In conclusion, the immunoexpression of VEGF-C in malignant cells per se did not influence the clinical outcome and prognosis of patients with OSCC of tongue and floor of the mouth in early stages (I and II). Therefore, elective neck dissection seems to be a therapeutical recommendation for the treatment of these patients.

O auto-relato de qualidade de vida de pacientes com câncer de cabeça e pescoço é registrado por questionários que dimensionam impactos da doença e do tratamento sobre diferentes domínios de ordem fisiológica, psicológica e social. O presente estudo objetivou estimar valores de referência para os diferentes domínios de qualidade de vida incluídos no Questionário da Universidade de Washington sobre Qualidade de Vida (UW-QOL, 4ª edição) para pessoas sem câncer e comparar estes valores com aqueles obtidos para os pacientes com câncer de boca e orofaringe em estágio pré-cirúrgico. Para estimar os valores de referência foram entrevistados 141 pacientes atendidos nos ambulatórios do Hospital Heliópolis, pareados por sexo e idade com 47 pacientes com câncer de boca e orofaringe em estágio pré-cirúrgico, atendidos no mesmo hospital. A média global e os escores específicos dos domínios de qualidade de vida podem variar de 0 a 100, com valores mais elevados indicando melhor condição funcional. A pontuação média de QV para pacientes sem câncer foi 91,1. Essa medida foi significantemente (p<0,01) mais elevada que para os pacientes com câncer, cuja pontuação global foi 80,6. Para os pacientes sem câncer, os escores de ombros, recreação ansiedade e mastigação foram modificados por sexo, estado conjugal, renda, grau de instrução e presença de problemas na boca. A pequena redução dos valores de referência, em relação aos parâmetros máximos passíveis de aferição (100%) indica favoravelmente a especificidade do questionário. No entanto, nem toda redução de QV dos pacientes com câncer de boca e orofaringe pode ser atribuída à doença ou ao tratamento, pois uma redução do escore médio global de cerca de 9% pode ser decorrente de perdas naturais sofridas pelos indivíduos ao longo da vida. Os domínios dor, aparência, deglutição, fala, paladar e ansiedade apresentaram escores significantemente mais reduzidos nos pacientes com câncer de boca e orofaringe que nos pacientes não afetados pela doença. / The self report of quality of life, for patients with head and neck cancer is documented by questionnaires assessing the impact of the disease and its treatment on several physiological, psychological and social domains. This study aimed at assessing reference values for quality of life domains comprised by the University of Washington Quality of Life Questionnaire (UW-QOL, 4th edition) for persons without cancer, and comparing their answers with results obtained for patients with oral and oropharyngeal cancer previoulsly to the primary surgery of tumor resection. A total of 141 patients attended at outpatients units of the Heliópolis Hospital were interviewed to assess reference values for the UW-QOL questionnaire, paired by sex and age with 47 patients hospitalized for surgery of oral and oropharyngeal cancer in the same hospital. Overall and domain specific ratings for QOL can vary from 0 to 100, with higher figures for improved functional status. The overall rating of QOL for patients without cancer was 91.1. This rating was significantly (p<0.01) higher than the corresponding figure for patients affected by cancer, whose global score was 80.6. For patients without cancer, ratings for shoulders, recreation, anxiety and chewing were modified by sex, conjugal status, income, instruction and the self-report of problems in the mouth. The small reduction of reference values, in relation to the maximum parameters that may be assessed (100%) suggests that the questionnaire is specific for head and neck cancer. However, the reduction of QOL for patients with oral and oropharyngeal cancer should not be entirely attributed to the disease and its treatment, because nearly 9% of reduction in QOL ratings may be due to other causes associated with the aging process. Pain, appearance, swallowing, speech, taste and anxiety were the QOL domains with ratings significantly lower for patients with oral and oropharyngeal cancer, in the comparison with those not affected by the disease.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 413481.pdf: 1430442 bytes, checksum: e220e9605982f141faabbfa549358e7e (MD5) Previous issue date: 2009-04-23 / O c?ncer bucal atinge cerca de 7% da popula??o mundial, sendo um importante problema de sa?de p?blica, tanto pelas seq?elas apresentadas pelos pacientes, como pelos custos envolvidos com o seu tratamento. Entre os c?nceres da cavidade bucal, 95% s?o representados pelo carcinoma espinocelular bucal (CECB). Estudos t?m mostrado que esse tumor ocorre preferencialmente em homens com mais de 40 anos, de pele branca, que apresentam os fatores de risco tradicionais, principalmente o uso de tabaco e/ou de ?lcool e a exposi??o aos raios solares. Todavia, a literatura demonstra o desenvolvimento do CECB em pacientes que n?o apresentavam exposi??o aos fatores de risco acima citados, tendo sido sugerida a associa??o com o papilomav?rus humano (HPV). Apesar de ser um importante v?rus oncog?nico, o papel do HPV na carcinog?nese bucal ainda ? controverso. O objetivo deste estudo foi detectar e tipar o HPV e verificar sua associa??o com a exposi??o ao tabaco e ao ?lcool em uma popula??o do Rio Grande do Sul/Brasil. Dezessete amostras de tecido fresco congelado foram obtidas de bi?psias de CECB. O ?cido desoxirribonucl?ico (DNA) do HPV foi extra?do por meio de m?todo padr?o que utiliza proteinase K. Para testar a viabilidade do DNA extra?do, foi realizada uma rea??o em cadeia da polimerase (PCR) para o gene da R-globina humana. A pesquisa molecular de HPV foi realizada utilizando os testes comerciais da Roche AMPLICOR (AMP) e LINEAR ARRAY (LA) HPV. Os resultados mostraram que 76,5% da popula??o estudada eram do g?nero masculino, com idade m?dia de 61,71 (?12.96), 29,4% dos indiv?duos n?o fumavam e 29,4% pertenciam ao grupo dos que n?o bebiam. O DNA do HPV foi detectado em 47,1% dos casos de CECB. Em todas as 8 amostras positivas, foi identificado o HPV 16, 75% (6/8) dos tumores foram diagnosticados histologicamente como moderadamente diferenciados e 37,5% (3/8) estavam localizados no assoalho da boca. Nenhuma associa??o foi observada entre a infec??o por HPV e a exposi??o ao tabaco ou ao ?lcool. O estudo encontrou uma preval?ncia consideravelmente alta de infec??o por HPV 16 nas les?es de CECB (aproximadamente a metade), suportando a possibilidade de um poss?vel papel do HPV na carcinog?nese bucal.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-06-11T19:45:55Z No. of bitstreams: 1 470271 - Texto Completo.pdf: 601264 bytes, checksum: 631a8bec7a15cd2f97fae4e0bb07768a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-11T19:45:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 470271 - Texto Completo.pdf: 601264 bytes, checksum: 631a8bec7a15cd2f97fae4e0bb07768a (MD5) Previous issue date: 2015-03-24 / The esophageal and oral tumors are classified as the most frequent malignancies in Brazil. Esophageal cancer is the eighth most common in the world and oral cancer is ranked as the 5th among malignant neoplasms affecting man in Brazil. The lipopolysaccharide (LPS) are characteristic compounds of the cell wall of gram-negative bacteria. They are able to regulate gene expression of pro-inflammatory cytokines by binding to toll-like receptor 4 (TLR4) via NF-kB pathway. Recent studies show that LPS can increase the migration ability of cell lines of human esophageal cancer HKESC-2 by increasing its binding properties. In the meantime, it has not been tested the effect of LPS on esophageal cancer cells OE19 and OE21 and human oral carcinoma HN30. Thus, this study aimed to determine the action of LPS compounds on the proliferation and viability of cell lines of human esophageal cancer and human oral carcinoma HN30. Were used as treatment LPS for OE19 and OE21 cell lines and the PgLPS (lipopolysaccharide of Porphyromonas gingivalis) for HN30 cell line. Cell viability was assessed using the MTT assay and cell counting. The TLR4 expression by real-time PCR was also evaluated. LPS at higher concentrations decreased significantly cell viability in both cell lines, adenocarcinoma (OE19) and squamous esophageal carcinoma (OE21) at different times of treatment. In addition, both cell lines, OE19 and OE21, expressed TLR4 receptor. Taken together, our data demonstrated that LPS at high concentrations might contribute to tumor death, in agreement with previously data. / Os tumores de es?fago e de boca est?o classificados como as neoplasias malignas mais frequentes no Brasil. O c?ncer de es?fago ? o oitavo mais comum no mundo e o c?ncer de boca ? classificado como o 5? dentre as neoplasias malignas que afetam o homem no Brasil. Os lipopolissac?ridos (LPS) s?o compostos caracter?sticos da parede celular de bact?rias gram-negativas. Eles s?o capazes de regular a express?o de genes de citocinas pr?-inflamat?rias, atrav?s da liga??o ao receptor toll-like 4 (TLR4) via NF-kB. Estudos recentes mostram que o LPS pode aumentar a habilidade de migra??o de linhagens c?lulares de c?ncer de es?fago humano HKESC-2 atrav?s do aumento de suas propriedades de ades?o. Entretanto, ainda n?o foi testado o efeito do LPS sobre as c?lulas de c?ncer de es?fago e de carcinoma oral humano HN30. Deste modo, este estudo teve como objetivo determinar a a??o dos compostos de LPS (derivado de bact?rias) sobre a prolifera??o e viabilidade de linhagens celulares de c?ncer de es?fago humano, e de carcinoma oral humano. Foram utilizados como tratamento o LPS para as linhagens OE19 e OE21 e o PgLPS (lipopolissacar?deo da Porphyromonas gingivalis) para a linhagem HN30. A viabiliadade celular foi avaliada utilizando o ensaio MTT e contagem celular. Tamb?m foi avaliada a express?o do receptor TLR4 por PCR em tempo real. LPS em concentra??es mais elevadas reduziu significativamente a viabilidade celular em ambas as linhagens celulares de c?ncer de es?fago, o adenocarcinoma (OE19) e o carcinoma de c?lulas escamosas (OE21) em diferentes tempos de tratamento. Al?m disso, ambas as linhagens celulares, OE19 e OE21, expressaram o receptor TLR4. Avaliados em conjunto, os nossos dados demonstram que o LPS em concentra??es elevadas pode contribuir para a morte tumoral, de acordo com dados pr?vios.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-07-10T11:53:31Z No. of bitstreams: 1 471993 - Texto Completo.pdf: 2126269 bytes, checksum: f86f75c4cb3e97d7b63c12ed82e07361 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-10T11:53:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 471993 - Texto Completo.pdf: 2126269 bytes, checksum: f86f75c4cb3e97d7b63c12ed82e07361 (MD5) Previous issue date: 2015-04-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Head and neck cancer represents a group of diseases affecting the face and upper aerodigestive tract. Early diagnosis of these neoplasms and their etiologic factors is crucial for patient?s survival and treatment. In the last decades, cause-and-effect relationship between some viruses and malignancies has been widely accepted. Recently, the role of Human papillomavirus (HPV) and Epstein-Barr virus (EBV) has been shown in the pathogenesis of oropharyngeal carcinoma, undifferentiated nasopharyngeal carcinoma and lymphomas. Nevertheless, the role of such viral agents in oral squamous cell carcinoma (OSCC) is still controversial. This study aimed to investigate HPV, EBV, p53 and Ki-67 in OSCC and oral lymphoma, considering clinical and histological features. The sample was composed of archived material (medical records and paraffin blocks of biopsied specimens) from patients with OSCC, oral lymphoma, and oral traumatic fibrous hyperplasia. The biopsied specimens and medical records were allocated into five groups: (1) 16 samples from patients with OSCC grade I (well-differentiated); (2) 16 samples from patients with OSCC grade II (moderately-differentiated); (3) 19 samples from patients with OSCC grade III (poorly-differentiated); (4) 14 samples from patients with oral non-Hodgkin lymphoma; and (5) 19 samples from patients with oral traumatic fibrous hyperplasia. Biopsied specimens were analyzed for HPV, EBV, p53 and Ki-67 expression by immunohistochemistry, and clinical data concerning age and gender of the patients, size and duration of the lesion as well as habits and comorbidities were collected. Marker expression was evaluated according to clinical features and histological grade of the tumors. There was no association of HPV and EBV with the tumors analyzed. Ki-67 expression was significantly lower in the fibrous hyperplasia group with no other significant differences. p53 expression was significantly lower in the lymphoma and fibrous hyperplasia groups than the OSCC groups, with no other significant differences. OSCC grade II and III were associated with male gender and tobacco smoking, while grade III was also associated with alcohol consumption. There was no association of the tumors with either chimarr?o or comorbidities. Duration of the lesion was inversely correlated to lesion size, which in turn was inversely correlated to HPV. EBV and HPV were positively correlated to each other, as was Ki-67 to lesion size and p53, which was correlated to HPV. / Os tumores malignos da regi?o de cabe?a e pesco?o constituem um grupo de doen?as que afeta a face e o trato aerodigestivo superior. O diagn?stico precoce dessas neoplasias e de seus fatores etiol?gicos ? de extrema import?ncia para a sobrevida e para o tratamento do paciente. Nas ?ltimas d?cadas, a rela??o de causa e efeito entre certos v?rus e tumores malignos tem sido amplamente aceita. Recentemente, foi relatado o papel do Human papillomavirus (HPV) e do Epstein-Barr virus (EBV) na patogenia do carcinoma espinocelular de orofaringe, no carcinoma indiferenciado de nasofaringe e em linfomas, sendo ainda controverso o papel desses agentes virais no carcinoma de c?lulas escamosas oral (CCEO). O presente estudo teve por objetivo investigar, por meio de exame imunoistoqu?mico, os v?rus HPV e EBV, bem como os marcadores Ki-67 e p53 em carcinomas e linfomas orais considerando fatores cl?nicos e histol?gicos. Esp?cimes de bi?psia arquivados em blocos de parafina e prontu?rios de pacientes portadores de les?es orais de CCEO, linfoma e hiperplasia fibroepitelial foram distribu?dos em cinco grupos: (1) 16 amostras de CCEO grau I (bem diferenciado); (2) 16 amostras de CCEO grau II (moderadamente diferenciado); (3) 19 amostras de CCEO grau III (pobremente diferenciado); (4) 14 amostras de linfoma n?o-Hodgkin e (5) 19 amostras de hiperplasia fibroepitelial. Os esp?cimes de bi?psia foram submetidos a processamento imunoistoqu?mico para HPV, EBV, p53 e Ki-67. Dados cl?nicos referentes a idade e sexo dos pacientes, tamanho e dura??o da les?o, comorbidades e h?bitos foram coletados dos prontu?rios. A express?o dos marcadores foi analisada de acordo com os aspectos cl?nicos e grau histol?gico dos tumores. N?o houve associa??o entre HPV e EBV com os tumores analisados. A express?o do Ki-67 foi significativamente menor no grupo hiperplasia fibroepitelial, n?o havendo outras diferen?as significativas entre os demais grupos. Os linfomas e as hiperplasias fibroepiteliais exibiram express?o de p53 significativamente menor que os carcinomas, sem outras signific?ncias. CCEO grau II e III foram associados ao sexo masculino e ao tabagismo, enquanto o CCEO grau III foi tamb?m associado ao consumo de ?lcool. N?o houve associa??o dos tumores avaliados com chimarr?o ou comorbidades. Houve correla??o negativa entre dura??o e tamanho da les?o, bem como entre tamanho da les?o e HPV. EBV e HPV exibiram correla??o positiva, assim como o Ki-67 foi correlacionado ao tamanho da les?o e ? p53, que por sua vez exibiu correla??o positiva com o HPV.

INTRODUÇÃO: O carcinoma espinocelular de origem bucal (CEC) apresenta uma alta taxa de mortalidade devido à invasividade das células tumorais. A migração celular, principal evento da invasão e metástase, pode ser regulada tanto por fatores intrínsecos, como adesão e contratilidade celular, quanto extrínsecos, como composição, densidade e remodelagem da matriz extracelular (MEC). OBJETIVO: Avaliar o papel de elementos intrínsecos e extrínsecos sobre o processo invasivo do carcinoma espinocelular de origem bucal. MÉTODOS: Foi realizada imuno-histoquímica para as proteínas: Miosina II (isoformas A, B e C), metaloproteinases de matriz (1, 2, 9 e 14); imunofluorescência as proteínas: e-caderina, n-caderina, FAK, paxilina, vinculina e fibronectina em amostras de CEC oral. Foi realizado ensaio de migração nas seguintes condições: 1 – matriz 2D com o substrato de fibronectina, ou laminina ou matrigel; 2 – matriz 3D com colágeno na presença ou não de fibronectina ou laminina; 3 – matriz 3D com diferentes concentrações de colágeno (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) + fibronectina na presença ou não de um inibidor de MMP. Foi realizado análise de adesão celular utilizando-se o microscópio TIRF e o microscópio confocal, tanto em matrizes 2D quanto 3D. Foram realizados esferoides celulares para avaliar a contratilidade celular, através do plaqueamento das células em gel de agarose e a utilização de drogas que inibem ou que induzem a contratilidade, bem como a partir de células transfectadas com versões fosfomiméticas para a cadeia leve de miosina. Foi realizado ainda western blotting para proteínas: e-caderina, FAK, vinculina, paxilina, N-caderina, integrinas e as isoformas de miosina II, bem como foi avaliado os níveis de ativação das proteínas da família RhoGTPase, as quais estão envolvidas no controle da migração celular. RESULTADOS: A expressão das MMPs analisadas e das isoformas de miosinas foi maior nas zonas de invasão tumoral, sendo que o CEC oral também apresenta uma maior expressão de proteínas associadas à adesão com a MEC. A migração celular foi afetada pela densidade e a composição da MEC, bem como pela atividade das MMPs. Adicionalmente, a modulação das proteínas de adesão célula-matriz altera a velocidade de migração, a direcionalidade dessa migração e também a forma de migração, mudando de uma migração coletiva para uma migração individual. O aumento na contratilidade células resulta numa dispersão celular enquanto que a diminuição da contratilidade resulta numa melhor adesão célula – célula. CONCLUSÕES: O comportamento das células tumorais pode ser modulado através de fatores extrínsecos como, por exemplo, a alteração no microambiente tumoral, seja ela por mudança no substrato ou na densidade da matriz, e também dos fatores intrínsecos como a alteração nos níveis de miosina. / INTRODUCTION: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) presents high mortality index due to the invasive phenotype of tumor cells. Cell migration is the main event in cell invasion and metastasis and it can be regulated by intrinsic factor, such as adhesion and cell contractility, and extrinsic factors, such as density and extracellular matrix (EMC) remodeling. OBJECTIVE: Analyze the role of intrinsic and extrinsic factor during the invasive process of oral squamous cell carcinoma. METHODS: We performed immunostaining in OSCC samples for the following proteins: myosin II (isoforms A, B and C), matrix metalloproteinase (1, 2, 9 and 14) e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and fibronectin. We also performed migration assays with OSCC cell line in the following conditions 1 – 2D matrix with fibronectin or laminin or matrigel; 2 – 3D matrix with collagen in the presence or not of fibronectin or laminin; 3 – 3D matrix with different collagen concentration (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) with fibronectin in the presence or not of the MMP inhibitor. In order to analyze cell adhesion, it was performed Total Internal Reflectance Fluorescence and Confocal microscopy, in 2D and 3D matrix. To analyze cell contractility, cells were plated in agarose gel in order to produce spheroids, which were treated with drugs that inhibit or induce cell contractility or cells were previously transfected with Myosin Light Chain phosphomimetics mutants. It was also performed western blotting to: e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and myosin II isoforms, as well as it was analyze the levels in RhoGTPase family, which are involved in cell migration control. RESULTS: The expression to MMPs and myosin II isoforms were higher at invasion zone of the tumor, and the OSCC presented higher expression of proteins associated to adhesion to ECM. Cell migration was affected by the EMC composition and density and by MMP activity. Also, the modulation of cell-matrix adhesion proteins altered migration speed, cell directionality as well as influenced the switch between collective and single cell migration. The increase in cell contractility resulted in cell dispersion while the decrease in cell contractility resulted in a better cell-cell adhesion. CONCLUSIONS: The behavior of cell tumor can be modulate by extrinsic factors, for example, the change in tumor microenvironment, by the change in the EMC substrate or density and by intrinsic factors such as the alteration in myosin levels.