Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-05T21:22:13Z No. of bitstreams: 1 Caroline Brandi Schlaaepfer Sales Expressao de componentes da via de sinalizacao....pdf: 1798926 bytes, checksum: d4bb00f0a9c879a36a9a0c59bc3a1be8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-05T21:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caroline Brandi Schlaaepfer Sales Expressao de componentes da via de sinalizacao....pdf: 1798926 bytes, checksum: d4bb00f0a9c879a36a9a0c59bc3a1be8 (MD5) Previous issue date: 2012 / Universidade Federal da Bahia. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Os mecanismos moleculares envolvidos no desenvolvimento do carcinoma escamocelular oral (CECO) ainda são pouco conhecidos. Vias de sinalização que participam do desenvolvimento embrionário, como a via Sonic Hedgehog (SHH), podem estar associadas ao desenvolvimento de tumores e ainda participar da progressão tumoral através do estímulo a angiogênese. Este trabalho teve como objetivo avaliar o perfil de expressão gênica de componentes da via de sinalização SHH, Sonic Hedegehog (SHH), Patched 1 (PTCH1) e Hedgehog interacting protein (HHIP), que possam estar relacionados a angiogênese em CECO, bem como os níveis de expressão do vascular endothelial growth factor (VEGF-A) e a microdensidade vascular (MDV) nestes tumores. Após aprovação do CEP (Parecer 229/10), a casuística foi composta por 66 casos de CECO no total. Para as reações de PCR quantitativo (qPCR) foram utilizadas amostras criopreservadas de 50 casos de CECOs, 8 casos de Mucosa Adjacente ao Tumor (MAT) e 2 casos de Mucosa Não Neoplásica de paciente saudável (MNN). Após extração de RNA, o DNA complementar foi obtido com o auxílio de High-Capacity cDNA Reverse-Transcription. As reações de qPCR foram conduzidas no aparelho ABI Prism 7900 utilizando o sistema Taqman, sendo a quantificação relativa avaliada pelo método comparativo de Cq (ΔΔCQ). Foram utilizados 56 blocos parafinizados para a confecção do tissue microarray (TMA) e análise da expressão de proteínas VEGF-A e CD34 (MDV), utilizando sistema EnVision AdvancedTM . Foi detectada expressão de HHIP e PTCH1 em CECO e MAT indicando ativação da via SHH nestas lesões. Dezessete (34%) casos de CECO não apresentaram expressão de SHH, os outros 33 (66%) tumores expressaram tal gene, indicando que a ativação desta via de sinalização pode ser através ou não do ligante. Correlação positiva foi observada entre a expressão de SHH e HHIP (rs=0.29; p=0.044, Teste de Spearman) e SHH e PTCH1 (rs=0.49; p=0.0003, Teste de Spearman) em CECO. A correlação positiva entre SHH e VEGF-A (rs=0.37; p=0.0086; Teste de Spearman) sugere uma participação da via SHH na angiogênese em CECOs, ao mesmo tempo maiores níveis de expressão de VEGFA, parecem favorecer um aumento da densidade de vasos sanguíneos (rs=0.55;p=0.0050; Teste de Sperman). Maiores níveis de transcritos e da proteína VEGF-A estavam relacionados a CECOs com invasão perineural e moderadamente diferenciados. Por último, maior expressão de VEGF-A foi detectada em MAT (p=0.034, Teste de Mann Whitney). Assim, a correlação positiva entre a expressão gênica de SHH e VEGF-A indica esta via pode participar da angiogênese tumoral. Além disso, isoladamente, a expressão do gene VEGF-A foi o fator que mais contribui para uma maior MDV e uma maior expressão deste, em nível de transcrito e de proteína, esteve relacionado a CECO de comportamentos mais agressivos. A expressão de HHIP, PTCH1 e VEGF-A em MAT indica que via SHH pode estar ativada nas margens tumorais e, corrobora para a existência de um campo de cancerização que envolve tecidos fenotipicamente normais. Além disso, maior expressão de VEGF-A nesta localização, sugere que a margem tumoral pode participar na secreção de fatores de crescimento para o tumor. / Sonic Hedgehog (SHH) signaling has been implicated in tumor development and progression by stimulating angiogenesis, and its molecular mechanisms involving these events are little known in oral squamous cell carcinomas (OSCC). The aim of this study was to characterize the transcripts expression involved in the SHH pathway (SHH, PTCH1, HHIP, VEGF-A) and microvessel density in these neoplasms. In this study, a total of 50 CECOs, eight non-tumor epithelium adjacent to oral cancer (NTEA), and two oral mucosa obtained from healthy individuals were included. After RNA extraction, complementary DNA was obtained using the High-Capacity cDNA Reverse-Transcriptio. qPCR reactions were conducted in the ABI Prism 7900 using Taqman Gene Expression System. Cq (ΔΔCQ) relative quantification method was perfomed for gene expression analysis. Fifty six paraffin-embedded specimens of OSCC were used for tissue microarray (TMA) and by immunohistochemistry, VEGF and CD34 using EnVision System Advanced TM were used. HHIP and PTCH1 transcripts were detected in OSCC and NTEA indicating their SHH pathway activation. Seventeen (34%) OSCC cases were negative for SHH gene expression. This results indicate that activation of SHH pathway may be either through SHH ligand or not. Our results showed a positive correlation between SHH and HHIP (rs=0.29; p=0.044, Spearman test) and SHH and PTCH1 (rs=0.49; p=0.0003, Spearman test) gene expression in OSCC. The positive correlation between the expression of SHH and VEGF-A (rs=0.37; p=0.0086; Spearman test) suggests an involvement of the SHH pathway on angiogenesis of OSCC, whereas higher levels of VEGF-A expression seems to increase the microvessel density of OSCC (rs=0.55;p=0.0050; Sperman test). Higher levels of transcripts and VEGF-A protein were related to OSCC with perineural invasion and those moderately differentiated. Finally, increased expression of VEGF-A was detected in NTEA (p = 0.034, Mann Whitney test). Thus, the positive correlation between the gene expression of SHH and VEGF-A indicates that pathway could participate in tumor angiogenesis. Moreover, VEGF-A gene expression was the only factor that contributed to a greater MVD in our series. In addition, increased expression of this gene and protein was related to more aggressive behavior of OSCC. The expression of HHIP, PTCH1 and VEGF-A in NTEA also indicates that SHH pathway can be activated in the tumor margins and might suggest existence of a field cancerization involving phenotypically normal cells. At the same time, increased gene expression of VEGF-A in this location suggests that adjacent cells to oral cancer could actively participate in the secretion of important growth factors to the tumor developing.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A pesquisa para o desenvolvimento de novas drogas quimioterápicas, tem se baseado nas propriedades dos produtos de origem natural. Estudos experimentais em animais indicam que o álcool perílico (AP), um monoterpeno originalmente isolado dos óleos essenciais de várias plantas é capaz de causar a regressão de diferentes tipos de tumores. O tratamento clássico preconizado para os astrocitomas anaplásicos e glioblastoma multiforme consiste de: ressecção cirúrgica, radioterapia e/ou quimioterapia e raramente apresentam efeito curativo. O presente trabalho teve como objetivo analisar o efeito do AP na proliferação, na alteração da morfologia, na síntese de proteínas e migração celular de diferentes linhagens de glioblastoma murino e humano. Foram utilizados modelos in vitro de cultivo de células e ensaios in vivo de migração celular. O tratamento in vitro com o AP nas concentrações v/v de 0,003%, 0,02%, 0,03%, 0,3%, 3% e 30% nas linhagens de glioblastoma C6 de murinos e linhagens A172 e U87MG de glioblastoma humano, mostrou que mesmo nas concentrações (v/v) mais baixas (0,03% e 0,3%) o AP promove a inibição da proliferação celular e da síntese de proteínas. O tratamento in vitro com o AP a 0,3% v/v causou após 15 minutos perda da permeabilidade celular e mais tardiamente, 50 minutos, alterações acentuadas na citoarquitetura das linhagens C6, U87MG e A172. Nos ensaios in vivo com ovos embrionados, o tratamento com o AP nas concentrações v/v 0,3% e 0,03% causou efeito inibitório na migração celular da linhagem C6. Os resultados sugerem uma eficácia quimioterápica do AP na citotoxidade e na inibição da migração celular de linhagens de glioblastoma murino e humano. / The search for new chemotherapeutic drugs has increased, especially for those that have a natural origin. Perillyl alcohol (POH), is a naturally occurring monoterpene, found in the essential oils of citrus fruits and other plants, with pronounced chemotherapeutic activity and minimal toxicity in preclinical studies. Standard treatment of anaplastic gliomas and glioblastoma multiforme consisting of surgical resection, radiation therapy and/or chemotherapy is rarely curative. This work aimed to evaluate in vitro and in vivo effects of POH treatment, cell proliferation, changes in morphology, protein synthesis, and migration of distinct lineage of glioblastoma cells. It was chosen in vitro culture systems and in vivo assays for assessing cellular migration. In vitro treatment of POH at concentrations of (v/v) 0.003%, 0.02%, 0.03%, 0.3%, 3% and 30%, consistently inhibited proliferation of murine C6 and human A172 and U87MG of glioblastoma cells. In vitro treatment of POH at low concentrations 0.03% v/v and 0.3% v/v also produced marked changes in cell morphology and inhibited protein synthesis. Likewise in vitro assays with 0.3% v/v POH treatment for 15 minutes, initially caused marked alteration in membrane permeability and later (50 minutes) drastic changes in the cytoarchitecture of C6, U87MG and A172 cells. Furthermore, previous in vitro treatment of glioblastoma cells with 0.3% v/v and 0.03% v/v POH showed inhibition of cell migration and anti-metastatic activity in the in vivo model of the chick embryo with C6 cell line. Such results indicate the chemotherapeutic action of POH by promoting cytotoxicity and arresting migration of murine and human glioblastoma cell lines

Avaliar a expressão das MMPs 2 e 9 e CD31 por meio de imunoistoquímica em carcinomas espoinocelulares de soalho bucal, e correlacionar os resultados com variáveis demográficas, estadiamento tumoral TNM, parâmetros microscópicos, como invasão perineural, embolização, grau de diferenciação tumoral, e sobrevida. Material e métodos: dados de prontuários de 41 pacientes foram coletados e o diagnóstico histopatológico foi revisado com lâminas recém preparadas. Seções de 5 m foram montadas em lâminas silanizadas e submetidas à imunomarcação pelo sistema streptoavidina-biotina utilizando os anticorpos anti MMP2, MMP 9 e CD31 humanos. A presença de imunomarcação das MMPs foi quantificada utilizando um retículo com 100 pontos em 20 campos de cada lâmina obtidos com objetiva de 40x. Os vasos foram identificados pela imunomarcação com anti-CD31 contando-se aqueles que apresentavam lumem e e tamanho menor do que 50m em cinco campos (objetiva de 20x) na área de maior vascularização das lesões. Para verificar a associação entre as variáveis numéricas e os marcadores, o teste não paramétrico U de Mann-Whitney foi utilizado e, em tabelas de contingência, o teste de freqüências do qui-quadrado foi aplicado. O teste exato de Fisher foi adotado quando pelo menos uma freqüência esperada foi menor do que 5 em tabelas 2X2. O Método de Kaplan-Meier foi utilizado para estimar as probabilidades de sobrevida global e o teste de logrank para comparar as curvas de sobrevida. O nível de significância de 5% foi adotado para todos os testes estatísticos. Resultados: houve correlação estatisticamente significante entre marcação para MMP 2 e metástase em linfonodo. Os fatores relacionados negativamente com a sobrevida foram estadiamento N, tipo histológico, invasão neural e marcação de MMP 9. Conclusão: a intensidade de imunomarcação de MMP 2 e MMP9 pode ser indicativa de metástase em linfonodo e menor probabilidade de sobrevida, respectivamente. / Compare the expression of MMPs 2 and 9 and CD31 by the use of immune histochemistry, in squamous cell carcinomas of the floor of the mouth, and obtain the relationship between those markers and demographic aspects, TNM stage, nerve invasion, blood vessel intravasation, degree of tumor differentiation and survival rates. Material and methods: data from 41 patients were reviewed. Tissue sections with 5 m were mounted in silanized glasses, and submmited to immune staining by the streptoavidin-biotin method, using the anti MMP2, MMP 9 and CD31 human antibodies. The presence of staining was quantified in a 100 points grade in 20 fields of each lesion, with a 40X magnification. Blood vessels smaller than 50m that were identified with the CD31 were counted in 5 fields of the hot spot area of the tumor. To verify the association between immune staining and numerical variables, the non parametric Mann-Whitney U test was used, and the chi-square test was verified. The exact Fisher test was adopted when at least one of the expected frequencies in 2X2 tables was less than 5. The Kaplan-Meier method was used to estimate the probabilities of global survival, and the log-rank test was used to compare the survival curves. Results: there was statistically significant association between MMP 2 immune staining and regional metastasis. The variables associated with poor survival rates were N stage, histological grade, nerve invasion and immune staining for MMP 9. Conclusion: the grade of immune staining can be an indicative of node metastasis and poor survival rate, respectively.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-04-05T14:15:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luiz Guilherme Azevedo de Freitas - 2015.rar: 1426984 bytes, checksum: c47c37209a55ad44e556ff3bdda85752 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-05T15:23:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luiz Guilherme Azevedo de Freitas - 2015.rar: 1426984 bytes, checksum: c47c37209a55ad44e556ff3bdda85752 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-05T15:23:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luiz Guilherme Azevedo de Freitas - 2015.rar: 1426984 bytes, checksum: c47c37209a55ad44e556ff3bdda85752 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) Previous issue date: 2015-07-21 / To evaluate the safety of single intravitreal injection of 0,1ml of sunitinib (one group with 1mg/ml and the other group with 10mg/ml), 0,1ml of a solution containing solid lipid nanoparticles and 0,1ml of a solution containing nanocapsules analyzing the possible toxic effects by the electrophysiology and histology in the albino rabbits retina. An experimental controlled study was performed with 20 eyes of albino rabbits. It were performed intravitreal injections of 0,1ml (1mg/ml) of sunitinib in 5 eyes, 0,1ml (10mg/ml) of sunitinib in 5 eyes, 0,1ml of nanocapsules solution in 5 eyes and 0,1ml of a solution containing solid lipid nanoparticles in 5 eyes. Contralateral eye did not receive any treatment and was used as control. Changes in electroretinography were not observed in groups of sunitinib (1mg/ml and 10mg/ml) and in the group of solid lipid nanoparticles. However, in the group of the nanocapsules significant changes were found. They were in the morphology and at the electroretinogram. At histological study only the group of nanocapsules degenerative changes were detected. Changes were severe edema and formation of cytoplasmic vacuoles, suggesting retinal toxicity. / O presente estudo teve por objetivo avaliar a segurança da injeção intravítrea de 0,1ml de sunitinibe (um grupo com 1mg/ml e o outro grupo com 10mg/ml), 0,1ml de solução contendo nanocápsulas e 0,1ml de solução contendo nanopartículas lipídicas sólidas analisando os possíveis efeitos tóxicos à retina de coelhos albinos detectados pela eletrofisiologia e histologia por microscopia óptica. Foi realizado estudo experimental, com 20 olhos de coelhos albinos, nos quais foram realizadas injeções intravítreas de 0,1ml (1mg/ml) de sunitinibe (5 olhos), 0,1ml (10mg/ml) de sunitinibe (5 olhos), 0,1ml de solução contendo nanocápsulas (5 olhos) e 0,1ml de solução contendo nanopartículas lipídicas sólidas (5 olhos). Os olhos adelfos não receberam injeção e foram utilizados com o controle. Não foram observadas alterações eletrorretinográficas nos grupos do sunitinibe (1mg/ml e 10mg/ml) e no grupo das nanopartículas lipídicas sólidas. No grupo das nanocápsulas houveram alterações significativas tanto na morfologia quanto na amplitude e tempo das ondas do eletrorretinograma. Ao estudo histológico, somente o grupo das nanocápsulas apresentou alterações degenerativas (núcleos tumefeitos) com acentuado edema e formação de vacúolos citoplasmáticos, sugerindo toxidade retiniana.

INTRODUÇÃO: O Carcinoma de Células Renais (CCR) é reposnsável por mais de 200.000 casos a cada ano no mundo, representando cerca de 2% de todos os cânceres. O CCR do tipo células claras (CRCC) é o subtipo mais comum da doença e é responsável por 75 a 80% dos casos, com maiores taxas de invasão local, desenvolvimento de metástases e mortalidade. As novas terapias alvo são baseadas em moléculas e anticorpos antiangiogênicos alterando o curso da doença, mas os resultados até agora não são satisfatórios. OBJETIVOS: Nosso objetivo nesse estudo foi estudar miRNAs e seus possíveis genes alvo relacionados com a angiogênese em CRCC tentando trazer novos conhecimentos relacionados às vias moleculares associadas à doença. MÉTODOS: Os níveis de expressão dos miRNAs miR-99a, 99b, 100, 199a, 106a, 106b, 29a, 29b, 29c, 126, 200a, 200b e seus respectivos genes alvo: mTOR, HIF1-alfa, VHL, PDGF, VEGF, VEGFR1 e VEGFR2 foram avaliados por alfaRT-PCR utilizando amostras de tecido tumoral de 56 pacientes com diagnóstico de CRCC e 5 amostras de tecido renal benigno como controle. Os resultados foram comparados com o tamanho tumoral, grau nuclear de Fuhrman e invasão microvascular, considerando os critérios de risco propostos por Dall\'Oglio et al (2007). RESULTADOS: Encontramos subexpressão da maioria dos genes, exceto VEGFA e PDGF, enquanto que a análise dos miRNAs mostrou subexpressão apenas dos miRs 100 e 126. Comparamos a expressão dos genes com seus possíveis miRNAs reguladores, e encontramos que mTOR apresentou subexpressão, enquanto miR99a apresentou superexpressão na maioria das amostras. Esta relação também ocorreu entre VEGFA e o miR126 e entre os miRNAs 106a, 106b, e seu gene alvo VHL. Considerando os grupos de risco, a superexpressão do miR200b foi associada com pacientes de alto risco (p = 0,01) e a superexpressão do miR126 foi associada com menor grau de Fuhrman (I-II) (p = 0,03). CONCLUSÕES: Os resultados mostram que em CRCC há um desequilíbrio na expressão de genes e miRNAs relacionadas com a angiogênese. Além disso através dos nossos achados podemos especular o papel do miR200b e do miR126 no prognóstico de CRCC / BACKGROUND: There are more than 200,000 cases of renal cell carcinoma (RCC) each year in the world, accounting for approximately 2% of all cancers. RCC clear cell type (ccRCC) is the most common subtype of RCC and accounts for 75 to 80% of the cases with highest rates of local invasion, development of metastasis and mortality. New target therapy is based on antiangiogenic antibodies and molecules, changing the course of the disease, but the results so far are disappointing. OBJECTIVES: Our aim is to study miRNAs and their target genes related to angiogenesis in ccRCC trying to bring some new knowledge to the molecular pathways related to the disease. METHODS: The expression levels of miRNAs miR-99a, 99b, 100; 199a; 106a; 106b; 29a; 29b; 29c; 126; 200a, 200b and their respective target genes: mTOR, HIF1-Î ±, VHL, PDGF, VEGF, VEGFR1 and VEGFR2 were evaluated using alfaRT-PCR.in snap-frozen tumor tissue samples from 56 patients diagnosed with ccRCC and 5 samples of benign renal tissue as control. The results were related to tumor size, Fuhrman nuclear grade and microvascular invasion, considering the risk criteria proposed by Dall\'Oglio et al. (2007). RESULTS: We compared the expression of genes with their possible regulatory miRNAs, and we found that mTOR was underexpressed while miR99a was overexpressed in most samples. This relationship also occurs between VEGFA and miR126 and between miRNAs 106a, 106b, and their target gene VHL. Considering the risk groups the overexpression of miR200b was associated with high-risk patients (p = 0.01) and the overexpression of miR126 was associated with lower Fuhrman grade (I-II) (p = 0.03). CONCLUSIONS: Our results show that in ccRCC there is an unbalance in the expression of genes and miRNAs related to angiogenesis and cell proliferation and survival. Furthermore with our findings we can speculate the role of miR200b and miR126 in the prognostic of ccRCC. We believe that the relationship between miRNAs and their respective genes should be more profoundly searched as markers and possible therapeutic agents in this neoplasia

O adenocarcinoma pancreático é a neoplasia maligna mais comum do pâncreas. A alta taxa de mortalidade deve-se ao diagnóstico tardio e a alta agressividade do tumor. Freqüentemente observam-se indivíduos com neoplasias de mesmo estadio apresentarem sobrevivência diferente. Isso demonstra a necessidade de incluir mais variáveis na caracterização da doença. O processo de angiogênese é essencial para o crescimento tanto do tumor primário, quanto para o metastático. A medida da densidade intratumoral da microvasculatura (DMV) por imunoistoquímica é o método mais confiável para medir a atividade angiogênica tumoral. A perda da função do gene p53 influencia a resposta à quimio e à radioterapia além de regular a angiogênese. A sobrevivência está inversamente relacionada à positividade do p53 e à DMV em neoplasias de mama, pulmão, ovários, estômago, cólon, laringe e bexiga. No adenocarcinoma pancreático os resultados são controversos. Idealizou-se essa pesquisa retrospectiva analisando-se dados clínicos e os resultados de estudos imunoistoquímicos obtidos de adenocarcinomas de pâncreas ressecados com intenção curativa. Analisou-se dados clínicos, patológicos, re-estadiamento e resultados da DMV e da expressão do gene p53 em 49 pacientes. A densidade média de microvasos foi de 46,2 vasos/mm2 sendo que esse valor foi utilizado para dividir os pacientes em grupos de baixa ou alta densidade de vasos. A coloração para p53 nuclear foi considerada positiva em 20 de 49 pacientes (40,8%). A DMV foi significativamente maior nos pacientes com tumores maiores que 3,0 cm e nos pacientes com ressecções incompletas. A expressão do gene p53 e a DMV, não foram fatores preditivos da sobrevivência pós-operatória. Não foi possível verificar relação entre a expressão do gene p53 e a densidade da microvasculatura tumoral / The prognostic significance of microvessel density and the p53 expression was evaluated. Between 1993 and 2006, 49 patients with pancreatic adenocarcinoma were ressected with curative intention. Specimens were stained immunohistochemically with antibodies anti- p53 anti-CD34. Microvessel density (MVD) was assessed scanning ten areas of the tumoral section and counted at a high power in an adequate area. The MVD ranged from 21,2 to 54,2 vessels/mm2 (mean 46,2 vessels/mm2). Specific nuclear staining for p53 was determined positive in 20 patients (40,8%). The overall median survival was 24,1 months after resection and there was no difference in survival rates according to the MVD and p53 positivity. There was also no relation between the MVD and p53 expression. MVD and p53 expression could not predict survival in these patients with pancreatic adenocarcinoma. There was no correlation with p53 expression and intratumoral microvessel density. High MVD was associated with tumor size grater than 3,0 cm and positive margins

A galectina-3, um membro da família das proteínas de ligação a glicanas, tem sido objeto de intensa pesquisa nos últimos anos devido ao seu importante papel na biologia tumoral, como a proliferação, transformação, apoptose, angiogênese, adesão, invasão e metástase tumoral. As diferentes funções de galectina-3 nas células tumorais resultam das suas diversas localizações inter- e subcelulares que lhe permite interagir com diferentes proteínas. Esta tese teve como objetivo identificar um papel específico de galectina-3 na regulação da via de sinalização Notch, que cada vez mais tem sido associada com a progressão tumoral e angiogênese. Inicialmente, demonstramos que galectina-3 interage com o receptor Notch-1 e modula diferencialmente a ativação da via pelos ligantes DLL4 e Jagged1. A galectin-3 regulou a expressão dos ligantes de Notch assim como o receptor Notch-1 e extracelularmente recuperou a ativação de Notch na ausência de galectina-3 endógena. Em câncer gástrico humano, a galectina-3 encontrou-se positivamente correlacionada com a expressão de Jagged1, enquanto que a galectina-1, um outro membro da família das galectinas, foi positivamente correlacionado com DLL4. De seguida estudou-se o papel biológico da regulação da via Notch pela galectina-3 na angiogênese. Demonstramos que nas células endoteliais, galectina-3 liga e aumenta a meia vida de Jagged1 promovendo a ativação preferencial da Jagged1/Notch em vez de DLL4/Notch de uma forma independente de VEGF. Verificamos que condições de hipóxia alteraram a expressão de galectina-3 assim como o status de glicosilação das células endoteliais de forma a promover a ativação de Jagged1/Notch e o aumento de angiogênese. A superexpressão de Jagged1 num modelo de carcinoma de pulmão de Lewis, acelerou o crescimento tumoral in vivo que foi inibido em camundongos Lgals3-/-. Por fim, avaliou-se o papel de galectina-3 na resistência das células tumorais a quimioterápicos. Observamos que a expressão de sialil-Tn, um produto biossintético da ST6GalNAc-I, diminuiu in vitro como in vivo a presença e os sítios de ligação de galectina-3 na superfície da células levando à sua acumulação no meio intracelular. Extracelularmente, galectina-3 não levou à indução de morte celular, no entanto contribuiu para a morte induzida por quimioterápicos. As células expressando sialil-Tn encontraram-se protegidas. Em amostras de tumor gástrico, os sítios de ligação de galectina-3 encontraram-se negativamente correlacionados com a expressão de sialil-Tn. Este conhecimento possui implicações diretas no desenvolvimento de estratégias visando o controle do crescimento tumoral e angiogênese e abre novas perspectivas no combate à resistência tumoral à terapia / Galectin-3, a member of a family of glycan binding proteins has been the subject of an intense research over the past few years due to its important role in cancer biology, such as cancer cell growth, transformation, apoptosis, angiogenesis, adhesion, invasion and metastasis. The different roles of galectin-3 on cancer cells behavior appears to have originated from its diverse inter- and subcellular localizations where it interacts with several different binding partners. The aim of this thesis was to pinpoint a specific role for galectin-3 in regulating Notch signaling pathway in cancer. Notch signaling has emerged as an important pathway in carcinogenesis, and activated Notch-1 signaling has being associated with cancer progression and angiogenesis. Initially, we found that galectin-3 was able to interact with Notch-1 receptor and to differentially modulate Notch signaling activation by DLL4 and Jagged1 ligands. Galectin-3 was found to regulate the expression of the Notch ligands and Notch-1 receptor and its extracellular form was able to rescue Notch activation in the absence of endogenous galectin-3. In human gastric cancer, galectin-3 was positively correlated with the expression of Jagged1 whereas galectin1, another member of the galectin family, was positively correlated with DLL4. Furthermore, we studied the biological role of Notch regulation by galectin-3 in angiogenesis. We showed that, in endothelial cells, galectin-3 binds to and increases Jagged1 protein half-life promoting Jagged1/Notch over DLL4/Notch signaling in a VEGF independent way. Hypoxic conditions changed galectin-3 expression and the glycosylation status of endothelial cells, acting in concert to promote Jagged1/Notch activation and sprouting angiogenesis. Jagged1 overexpression in Lewis lung carcinoma accelerated tumor growth in vivo that was prevented in Lgals3-/- mice. Finally, we evaluated the role of galectin-3 in cancer cell resistance to therapy. We found that the expression of sialyl-Tn, a biosynthetic product of ST6GalNAc-I, was able to decrease cell surface galectin-3 and galectin-3-binding sites both in vitro and in vivo leading to an intracellular accumulation of this protein. Exogenously added galectin-3 was found to have no effect on cancer cell death but contributed to chemotherapy-induced apoptosis. Sialyl-Tn expressing cells were protected. In human gastric cancer samples, galectin-3 binding sites were negatively correlated with the expression of sialyl-Tn. This knowledge has direct implications for the development of strategies aimed at controlling tumor growth and angiogenesis and open novel perspectives to overcome tumor resistance to therapy

A falência de ultrafiltração (UFF) é uma causa importante de interrupção da diálise peritoneal (DP) enquanto terapia renal substitutiva. Além da inflamação crônica e aguda causadas à membrana peritoneal (MP) pelos produtos de degradação da glicose, produtos avançados da glicosilação, pH ácido das soluções e infecções, -bloqueadores (BB) também foram implicados na gênese da UFF. A vasoconstrição arteriolar esplâncnica é considerada a causa provável da UFF por BB. O nebivolol (NV), um bloqueador 1-adrenérgico altamente seletivo que, diferente de outros BB, possui efeito vasodilatador por aumento de óxido nítrico (NO) por ativar a via L-arginina-NO, foi testado em pacientes idosos com ICC e levou à redução na mortalidade. O objetivo desse estudo é analisar os efeitos do NV sobre a ultrafiltração (UF), MP e características do efluente em um modelo animal de DP, através do estudo de fenômenos envolvidos na degeneração da MP e UFF, como transição epitélio mesenquimal (EMT) e fibrose, além de parâmetros humorais e celulares de inflamação. 21 camundongos C57BL/6 fêmeas, não urêmicos, com 12 a 14 semanas, foram submetidos à colocação de cateter peritoneal. Após uma semana, foram divididos em 3 grupos de 7 animais: grupo controle (observação 30 dias), grupo SDP (2 mL/ dia de solução glicosada de diálise peritoneal a 4,25% através do cateter, por 30 dias) e grupo NV (além da infusão, receberam 8 mg/kg/dia de NV por gavagem, por 30 dias). Após 30 dias, comparou-se espessura submesotelial, volume de UF, velocidades de transporte de pequenos solutos, marcação submesotelial de pan-citoqueratina, para quantificar EMT, contagem de vasos, linfangiogênese diafragmática e concentração de IL-6 e IL-10 no efluente. A espessura da MP foi de 23,14 m no grupo controle, no grupo SDP foi de 102,4 m e no grupo NV, 29,04 m, com p<0,05. O volume de UF foi 1,94mL para o grupo controle, para o grupo SDP, 1,56 mL e, para o grupo NV, 2,05 mL, também com p<0,05. Houve menor EMT, menor angiogênese e tendência a transporte mais lento de solutos no grupo tratado, assim como menor concentração de IL-6 e proporções de populações de linfócitos semelhantes às do grupo controle. Concluímos que a droga impediu o desenvolvimento de UFF, através do bloqueio de fenômenos como EMT, espessamento da MP e neoangiogênese, além de preservar características de imunidade celular e humoral locais, merecendo ser estudada em pacientes submetidos à DP / Ultrafiltration failure (UFF) is a major cause of peritoneal dialysis (PD) discontinuation. Besides peritoneal membrane (PM) acute and chronic inflammation caused by glucose degradation products, advanced glycation end-products, acidic pH of the solutions and peritoneal infections, also -blockers (BBs) have been implicated in UFF genesis. Splanchnic arteriolar vasoconstriction has been considered the probable cause of UFF induced by BBs. Nebivolol (NV), a highly selective 1-adrenergic blocker, unlike other BBs, has a vasodilatory effect caused by its ability to increase nitric oxide (NO) through L-arginine-NO pathway activation. NV has been tested in elderly patients with congestive heart failure and led to mortality reduction. The aim of this work is to analyze the effects of NV over ultrafiltration (UF), PM and effluent characteristics in an animal model of PD. For that end, phenomena known to be involved in PM degeneration and UFF, such as epithelial-to-mesenchymal transition (EMT), fibrosis, as well as cellular and humoral parameters of inflammation have been studied. 21 C57BL/ 6 female non uremic mice, ageing 12 to 14 weeks, underwent peritoneal catheter placement. One week later, they were divided into 3 groups of 7 animals: control group (observation for 30 day), PDF group (2 mL/ day of 4.25% dextrose peritoneal dialysis fluid injected through the catheter for 30 days) and NV group (besides the PDF infusion, this group received 8 mg/ kg/ day of NV by gavage, for 30 days). After 30 days, submesotelial thickness, UF volume, small solute transport speed, submesotelial pan-cytokeratin staining (EMT quantification), vessel count, diaphragmatic lymphangiogenesis and IL-6 and IL-10 concentrations in the effluent were compared. PM thickness was 23.14 m in the control group, 102.4 m in the PDF group and 29.04 m in the NV group, p <0.05. UF volume was 1.94 mL in the control group, 1.56 mL in the SDP group, and in the NV group, 2.05 mL, p <0.05. There was less EMT, less angiogenesis and a tendency to a slower solute transport in the treated group. Lower levels of IL-6 and similar lymphocyte populations proportions to the control group were also found. We conclude that the drug can prevent UFF development, through blockade of phenomena such as EMT, PM thickening and neoangiogenesis, while characteristics of local cellular and humoral immunity were preserved. These results warrant a clinical study of the drug in PD patients

Células endoteliais provenientes da medula óssea (MO) participam da fisiopatologia de várias doenças que possuem dano vascular como fator em comum. Apesar de consideradas evento raro, encontram-se em quantidade aumentada na circulação periférica de pacientes oncológicos. Evidências sugerem que células endoteliais progenitoras (CEPs) contribuem para a angiogênese tumoral. Com esta descoberta, CEPs e células endoteliais maduras (CEMs) vêm sendo estudadas como potenciais alvos terapêuticos com o uso de drogas anti-angiogênicas. Portadores do vírus linfotrópico humano de células T do tipo 1 (HTLV1) têm possibilidade de desenvolver doenças causadas pelo vírus com elevada taxa de mortalidade, com destaque para a Leucemia/Linfoma de células T do Adulto (ATL). O tratamento para a forma sintomática da doença permanece desapontador. Este foi um estudo transversal desenvolvido com o objetivo de quantificar células endoteliais circulantes no sangue de portadores assintomáticos do HTLV1 em comparação a indivíduos saudáveis, por citometria de fluxo. Foram estudados 30 indivíduos portadores do vírus HTLV1, pareados por idade e sexo com o grupo controle. Três pacientes tiveram o diagnóstico de ATL sendo retirados da pesquisa. Foi utilizada como critério de inclusão a sorologia para HTLV1+, e negativa para as demais doenças transmissíveis por transfusão. Em nosso estudo os valores de CEPs encontrados foram maiores na população portadora assintomática (mediana: 0,8288 células / mm 3 ) em relação à população controle (mediana: 0,4905 células / mm 3 ; p = 0,035). Não houve diferença estatística entre a quantificação de CEMs e células endoteliais ativadas entre os portadores assintomáticos e o grupo controle saudável. Nossos achados sugerem que exista atividade angiogênica mesmo na ausência de transformação neoplásica, e que o valor de CEPs pode ser utilizado como marcador de atividade de doença e aplicado para monitorar a eficácia antitumoral da terapia antiangiogênica / Endothelial cells originated from the bone marrow (BM) take part in the physiopathology of several diseases which have vascular damage as a common factor. In spite of being a rare event, they are found in augmented quantity in the peripheral circulation of cancer patients. Evidence indicates that bone marrow-derived endothelial progenitor cells (CEPs) can contribute to tumor angiogenesis. Upon such a finding, circulating CEPs and mature endothelial cells (CEMs) have been researched as potential therapeutic targets and antiangiogenic drugs can be an option in anti-tumor therapy. Human T Cell Lymphotropic Virus Type 1 (HTLV1) carriers may develop diseases caused by the virus with high mortality rate, especially adult T-cell leukemia/lymphoma (ATL). The treatment for the symptomatic form of the disease remains disappointing. This cross-sectional study aimed at quantifying circulating endothelial cells in the blood of HTLV1 asymptomatic carriers in comparison to healthy individuals by flow cytometry. A sample of 30 individuals, HTLV1 carriers, age and sex paired, has been compared to the control group. Three patients were diagnosed with ATL, and deleted. HTLV1+ serology has been utilized as inclusion criteria, and negative for the remaining transfusion-transmittable diseases. CEPs values were greater in the asymptomatic carrier population (median: 0,8288 cells/mm 3 ) in relation to the control population (median: 0,4905 cells/mm 3 ; p = 0,035). There was no statistically significant difference in the quantification of CEMs and activated endothelial cells between asymptomatic carriers and the control group. This evidence suggest that there is angiogenic activity without neoplasic transformation, and the level of circulating endothelial progenitor cells can be used as biologic marker of disease activity and can reflect the antitumor efficacy of angiogenesis inhibitors

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 suelisuzigan_tese_parte5.pdf: 78044 bytes, checksum: ede6079670fe7d13ddd7e25ead03f505 (MD5) Previous issue date: 2002-05-03 / Introduction. Tumor growth and metastasis depend greatly on angiogenesis. There are several angiogenic growth factors able to induce new vessels in renal tumors, but the most important are vascular endothelial growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (b-FGF). The aim of our study was to investigate expression of b-FGF and to quantify microvessel density (MVD) in oncocytomas and renal cell carcinomas (RCCs) and to relate these parameters of tumor vascularity to other clinicopathological features. Material and Methods. b-FGF and CD31 immunostaining were performed on formalin-fixed paraffin-embedded archival tissues from Larpac Laboratories files, including 36 RCCs (10 conventional, 10 papillary, 8 sarcomatoid, and 8 chromophobe) and 5 oncocytomas. Angiogenesis was quantified microscopically by two independent observers. Results. b-FGF was positive in all five oncocytomas and only in seven of 36 RCCs: 5 of conventional type, 1 papillary, and 1 chromophobe. All sarcomatoid carcinomas were negative. The expression of b-FGF was not related to tumor size, grade, stage, or short survival in either group. MVD mean value was 124.16 ± 50.1 in oncocytomas and 91.54 ± 52.4 in RCCs. The pattern of vascularization observed in oncocytomas was characterized by a fine vascular network around groups of tumor cells although in RCCs the microvessels tended to be more disorganized. When analyzing only carcinomas, patients who died within 12 months after the diagnosis had a tumoral MVD mean value significantly higher (124.12 ± 75.2) than that observed in patients who were still alive one year after diagnosis (80.34 ± 37.8). ix Conclusion. We demonstrate that b-FGF is expressed more often in oncocytomas than in RCCs but MVD is similar in both groups of tumors. The high expression of b-FGF in oncocytomas may reflect the peculiar pattern of vascularization of these tumors. High MVD in rapidly lethal RCCs is an indication that angiogenesis may be correlated with the degree of malignancy of these tumors. / O desenvolvimento dos tumores e das suas metastases dependem em grande parte da angiogenese tumoral. Existem varios fatores de crescimento capazes de induzir à neoformação vascular nas neoplasias renais, porém, os mais importantes são o fator de crescimento do entotélio vascular (vegf) e o fator de crescimento fibroblástico básico (bfgf). O objetivo deste estudo foi o de investigar a expressão do b-fgf e a densidade microvascular (dmv) nos oncocitomas e nos carcinomas de células renais (ccrs) e correlacionar estes parâmetros da vascularização tumoral com outros ascpectos clínico-patológicos. Material e métodos. O estudo imunohidtoquímico para o b-fgf e o cd31 (densidade microvascular) foi realizado em material fixado em formalina e incluído em parafina de 36 casos de ccrs (10 convencionais, 10 papilíferos, 8 sarcomatóides e 8 cromófobos) e 5 oncocitomas, oriundos de exames anátomo-patológicos por dois observadpres independentes. Resultados. Nota de Resumo Foi encontrada positividade para o b-fgf em todos os 5 casos de oncocitomas e em 7 dos 36 casos de ccrs: 5 do tipo convencional, um papilífero, e um cromófobo. Todos os carcinomas sarcomatóides mostraram-se negativos. A expressão tumoral do b-fgf não apresentou correlação com tamanho tumora, grau histológico, estadio patológico, ou sobrevida a curto prazo em nenhum dos grupos. O valor médio da dvm foi de 124,16 +/- 50,1 nos oncocitomas e de 91,54 +/- 52,4 nos ccrs. O padrão de vascularização observado nos oncocitomas era caracterizado por um delicado leito vascular envolvendo grupos de celulas tumorais, enquanto que nos ccrs a microvascularização se apresentou de forma mais organizada. Entre os carcinomas, os tumores que se mostraram letais nos 12 primeiros meses após o diagnóstico, apresentaram um ídice angiogênico significativamente maior (124,12 +/- 75,2) em relação aos pacientes que ainda permaneciam vivos um ano após o diagnóstico (80,34 +/- 37,8). Conclusão. Demostramos que o b-fgf está expresso mais freqüentemente nos oncocitomas do que nos ccrs. Nota de Resumo Apesar de as dmv ser semelhante em ambos os grupos tumorais, observou-se um padrão de vascularização característico nos oncocitomas. Uma dvm mais elevada nos ccrs, rapidamente letais é indicativo de que a angiogenese possa estar correlacionada com grau de malignidade destes tumores.