O melanoma é a forma mais letal entre os cânceres de pele. Essa neoplasia freqüentemente apresenta-se resistente a abordagens terapêuticas. A angiogênese associada ao tumor representa um crítico passo da tumorigênese, resultado da ação de diferentes citocinas e fatores de crescimento como VEGF produzidos no microambiente tumoral. As galectinas extracelulares participam de múltiplos processos biológicos incluindo angiogênese tumoral e metástases, sua interação com as células presentes no microambiente tumoral pode ocorrer via receptores toll-like sugerindo seu envolvimento nos processos pro-inflamatórios e na secreção de citocinas. Recentemente mostramos que a ausência de gal-3 no estroma e parênquima tumoral diminui a angiogênese por interferir na resposta de macrófagos via VEGF e/ou TGFbeta1. Entretanto, o envolvimento de galectinas extracelulares na angiogênese e na modulação do sistema imune no microambiente tumoral ainda não está esclarecido. Assim, este estudo visa buscar respostas ao envolvimento das galectinas no crescimento tumoral e angiogênese contribuindo ao combate do melanoma maligno. Nossos resultados mostram a participação das galectinas 1 e 3 no crescimento tumoral e seu envolvimento com macrófagos via receptores toll-like, além de coordenarem a modulação do perfil de polarização de macrófagos derivados da medula óssea de camundongos wild-type. Dessa forma, podemos inferir que essas galectinas agem como coordenadoras de mudança de perfil dos macrófagos, uma vez que inibidas extracelularmente promovem uma diminuição do crescimento tumoral em camundongos wild-type, inoculados com células de melanoma murino e uma manutenção do perfil de macrófagos M1 in vitro. Assim, concluimos que as galectinas 1 e 3 extracelulares são importantes para o crescimento tumoral de melanomas murinos pois promovem o crescimento tumoral e são coordenadoras da mudança do perfil de macrófagos / Melanoma is the most aggressive form of skin cancer. This tumor often presents itself resistant to therapeutic approaches. The tumor-associated angiogenesis is a critical step in tumorigenesis and the result of the action of several cytokines and growth factors such as VEGF produced in the tumor microenvironment. The extracellular galectins participate in multiple biological processes including tumor angiogenesis and metastasis, their interaction with cells present in the tumor microenvironment may occur via toll-like receptors suggesting their involvement in pro-inflammatory processes and the secretion of cytokines. We have recently shown that the absence of Gal-3 the stroma and tumor parenchyma decreases angiogenesis by interfering with the macrophage response by VEGF and / or TGFbeta1. However, the involvement of extracellular galectins on angiogenesis modulation of the immune system in the tumor microenvironment is not yet clear. This study aims is to find answers to the involvement of galectins on tumor growth and angiogenesis contributing to the study of the malignant melanoma. Our results demonstrate the involvement of galectin 1 and 3 on tumor growth and its involvement in macrophage by toll-like receptors pathway, and coordinating the modulation of the polarization profile in wild-type mice bone marrow derived macrophages. Therefore, we show these galectins act as coordinators of macrophages profile change, since inhibited extracellularly promote a reduction in tumor growth in wild-type mice inoculated with murine melanoma cells and macrophages M1 maintenance of profile in vitro. Thus, we conclude that galectins 1 and 3 extracellular are important for tumor growth of murine melanomas because they promote tumor growth and are coordinators of change macrophages profile

Os objetivos deste estudo foram desenvolver um modelo experimental e avaliar o período bem como a viabilidade de retalhos cutâneos pré-fabricados com área cutânea de 100cm2 em parede abdominal lateral em coelhos. Os retalhos cutâneos foram confeccionados através da implantação direta de vasos gastroepiplóicos em arco com fluxo contínuo abaixo do subcutâneo da parede lateral em coelhos. Foram utilizados 18 animais da linhagem de coelhos New Zealand divididos em três Grupos: Grupo I (grupo controle), sem implantação de vasos gastroepiplóicos, e Grupo II e Grupo III, nos quais foram realizados os implantes de vasos gastroepiplóicos em arco no subcutâneo da parede abdominal lateral dos animais, os quais foram submetidos posteriormente a cirurgia para confecção de retalho axial, pediculado exclusivamente nos vasos gastroepiplóicos transpostos. O período entre a primeira cirurgia e a segunda foi de duas semanas no Grupo II e seis semanas no Grupo III. Quatorze dias após a segunda cirurgia os animais foram sacrificados e os retalhos avaliados. Nos animais do Grupo I, controle, foi observado 100% de área de necrose no tecido descolado, não preservando conexão vascular com o mesmo, e suturado novamente no leito original; nos animais do Grupo II foi observada área de necrose média de 56,83% e nos animais do Grupo III, ausência total de necrose nos retalhos. Amostras dos retalhos dos animais dos Grupos II e III foram avaliados histologicamente através de protocolo padrão para coloração por hamatoxilina-eosina e através de estudo imunohistoquímico para avaliação de viabilidade do tecido através da quantificação da atividade de divisão celular, considerando índice de células marcadas para o Antígeno Nuclear de Células em Ploriferação (iPCNA) como parâmetro. Foi observado aumento significante no iPCNA (p<0,01, teste bicaudal de Mann-Whitney) entre os Grupos II e III, com índice mais alto no Grupo III; a avaliação da coloração por hematoxilina-eosina confirmam a maior viabilidade dos retalhos do Grupo III. O estudo demonstra a possibilidade de criar e transferir um pedículo vascular em arco para o subcutâneo e, depois de certo tempo, confeccionar e transpor um retalho com dimensões consideráveis cuja circulação seja exclusiva deste novo pedículo. Este estudo traz informações adicionais para elaboração de retalhos pré-fabricados microcirúrgicos ou em ilha para o reparo de defeitos complexos que precisam de grandes áreas de cobertura cutânea e pedículos longos, com mínima morbidade à área doadora. / The aim of this study was to develop an experimental model and to evaluate the period as well as the viability of prefabricated cutaneous flaps with a cutaneous area of 100cm2 in lateral abdominal wall in rabbits. The cutaneous flaps were made through the direct implantation of gastroepiploic vessels in arch with flow-through below the subcutaneous of the lateral wall in rabbits. Eighteen animals of the New Zealand rabbits lineage were used divided in three Groups: Group I (control group), without implantation of gastroepiploic vessels, and Group II and Group III, which the implant of gastroepiploic vessels was accomplished in arch in the subcutaneous of the lateral abdominal wall of the animals. These animals were submitted to surgery later for making of axial flap, exclusively based in the transposed gastroepiploic vessels. The period between the first surgery and the second one was of two weeks in the Group II and six weeks in the Group III. Fourteen days after the second surgery the animals were sacrificed and the flaps evaluated. In Group I animals, control, it was observed 100% of necrosis area in the detached skin portion that was sutured again at the original bed, not preserving vascular connection with the local tissue; in the animals of the Group II an average necrotic area of 56,83% was observed and in the animals of the Group III, total absence of necrosis in the flaps. Samples of flaps tissue from the animals of the Groups II and III were evaluated through standard histological hamatoxilin-eosin protocols and imunohistochemical protocol for evaluation of tissue viability through the activity of cellular division, considering the index of Proliferating cell nuclear antigen (iPCNA) marked cells. It was observed significant increase on the iPCNA (p<0,01, two-tailed Mann-Whitney test) between the Groups II and III, with higher index in the Group III; the standard hematoxilin-eosin evaluation confirm the better viability of the flaps from the Group III. The study demonstrates the possibility to create and transfer an arch vascular pedicle to subcutaneous and, after certain time, to make and to transpose a flap with considerable dimensions which circulation comes from this new pedicle. This study brings additional information for elaboration of prefabricated microsurgical or island flaps for repair of complex defects that need great areas of skin covering and long pedicles, with low morbosity to the donor area.

INTRODUÇÃO: O estudo das lesões mamárias teve um grande avanço com o uso da Ressonância Magnética com contraste. Contudo, muitos achados ainda são comuns nas lesões benignas e malignas, muitas vezes sendo difícil sua diferenciação. O objetivo deste estudo foi estudar a permeabilidade vascular e o volume extra-celular (VEC) nas lesões nodulares benignas e malignas da mama, para verificar se isto poderia aumentar a diferenciação destas lesoes. Para isto, utilizamos o aplicativo do Full Time Point (FTP), que utiliza a sequência dinâmica do contraste e converte em mapa de cores e calcula permeabilidade e VEC. MÉTODOS: Foram incluídas no estudo 31 pacientes, com 57 lesões nodulares, 29 malignas e 28 benignas. Todas as pacientes assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido. As lesões foram primeiramente classificadas pelo radiologista leitor quanto à análise dinâmica do contraste de acordo com a classificação do BI-RADS®. Posteriormente, as mesmas lesões foram selecionadas com o programa do FTP que calculou permeabilidade vascular e VEC das lesões. RESULTADOS: Os resultados mostraram que a permeabilidade foi diferente para lesões malignas e benignas, com média de 1,209 (±0,424) para maligno e 0,394 (±0,210) para benigno. O VEC não mostrou diferença estatisticamente significativa entre lesões benignas e malignas, com média de 0,666 (±0,123) para maligno e 0,708 (±0,151) para benigno. Quando correlacionado com a classificação das lesões pelo BI-RADS®, evidenciamos também que as lesões tiveram permeabilidade diferente nas diferentes classificações , sendo de 0,39 (±0,22) para BI-RADS®3, 0,56 (±0,39) para BI-RADS® 4 e 1,29 (±0,37) para BI-RADS® 5, mostrando que nas lesões com maior malignidade, a permeabilidade foi maior. O VEC não foi diferente nas diversas classificações do BI-RADS®. CONCLUSÕES: O estudo nos permite concluir que a permeabilidade vascular pode ser um bom discriminante na diferenciação das lesões benignas e malignas da mama. Contudo, o mesmo não ocorreu com o VEC. / INTRODUCTION: There has been a great development in the study of breast lesions with the use of contrast-enhanced magnetic resonance. However, several findings are common in malignant and in benign lesions turning their differentiation difficult. The objective of this research was to study the vascular permeability and the extracellular volume fraction (EVF) to verify if these characteristics increase the differentiation between benign and malignant lesions. The Full Time Point application that converts contrast dynamic sequence in color hue maps to calculate permeability and EVF was used for this purpose. METHODS: 31 patients were included in this study with 57 lesions, 29 malignant and 28 benign. All patients signed an informed consent form. First the lesions were classified by the reader radiologist by dynamic analysis according to BI-RADS® classification. Later, the same lesions were selected with the FTP program that calculated vascular permeability and EVF. RESULTS: Results showed that permeability was different for malignant and benign lesions, mean 1.209(±0.424) for malignant and 0.394 (±0.210) for benign. The EVF did not show statistically significant difference between benign and malignant lesions, mean 0.666 (±0.123) for malignant and 0.708 (±0.151) for benign. When compared to BI-RADS® classification, it was observed that lesions had different permeability in different classifications: 0,39 (±0.22) for BI-RADS® 3, 0.56 (±0.39) for BIRADS ® 4 and 1.29 (±0.37) for BI-RADS® 5. This showed that higher malignity lesions had higher permeability. EVF was not different in the different BI-RADS® classifications. CONCLUSION: It can be concluded that vascular permeabilitiy can be a good discriminant in differentiating breast malignant and benign lesions. However the same was not true for EVF.

O significado prognóstico do fenômeno de regressão espontânea em melanoma, especialmente nas lesões finas, tem sido controverso. Estudos recentes sugerem que regressão extensa e tardia (fibrótica) possa estar relacionada a pior prognóstico. Linfangiogênese e angiogênese predizem metástase em melanoma. Objetivos: Analisar a densidade microvascular linfática e panvascular em melanomas extensivo-superficiais finos (Breslow 1,0 mm), comparando: melanomas regressivos e não-regressivos, área regressiva e não-regressiva de um mesmo tumor , os diferentes estágios de regressão (precoce ou inflamatória e tardia) de um mesmo tumor e correlacionar angiogênese e linfangiogênese a fase de crescimento tumoral. Métodos: Análise retrospectiva, histopatológica e estudo imunoistoquímico de melanomas com os anticorpos monoclonais D2-40 (37 tumores, sendo 16 regressivos e 21 não-regressivos como controles) e CD31 (29 tumores, sendo 13 regressivos e 16 não regressivos como controles), e posterior quantificação da densidade microvascular por análise de imagem. Resultados: Foi encontrada maior densidade microvascular linfática na fase tardia de regressão quando comparada à área dos melanomas regressivos que não apresentava regressão (controle interno). Conclusões: A fase tardia da regressão espontânea nos melanomas finos apresentou maior densidade microvascular linfática, fato que pode relacioná-la a pior prognóstico, já que densidade microvascular linfática estaria relacionada a risco aumentado de disseminação metastática. Essa suposição necessita ser confirmada por um maior seguimento dos nossos casos para detecção de metástases linfonodais / The prognostic significance of spontaneous regression in melanoma, especially thin lesions, has been a controversial issue. Recent studies suggest that extensive and late regression may be related to worse prognosis. Angiogenesis and lymphangiogenesis predict metastatic spread in melanoma. Objectives: To quantify lymphatic and panvascular microvascular density in thin (Breslow 1,0 mm) superficial spreading melanomas comparing: regressive and non-regressive melanomas, regressive and non-regressive areas from the same tumor; early and late histological stages of regression in the same tumor and to correlate angiogenesis and lymphangiogenesis and tumor growth phase. Methods: We conducted retrospective study, histological examinations and immunohistochemical analyses using the monoclonal antibodies D2-40 (37 melanomas, 16 regressive and 21 non-regressive as controls) and CD31 (29 melanomas, 13 regressive and 16 non-regressive as controls) with subsequent quantification of microvascular lymphatic and panvascular density by image analysis. Results: We found greater lymphatic microvascular density in the late stage of regression compared with non-regressive area (internal control) of regressive melanomas. Conclusions: The late stage of spontaneous regression in thin melanomas showed greater lymphatic microvascular density and this may be related to worse prognosis as lymphatic microvascular density is related with increased risk of metastatic spread. This supposition must be confirmed by a longer follow-up for detection of lymph node metastases

Os objetivos deste estudo foram desenvolver um modelo experimental e avaliar o período bem como a viabilidade de retalhos cutâneos pré-fabricados com área cutânea de 100cm2 em parede abdominal lateral em coelhos. Os retalhos cutâneos foram confeccionados através da implantação direta de vasos gastroepiplóicos em arco com fluxo contínuo abaixo do subcutâneo da parede lateral em coelhos. Foram utilizados 18 animais da linhagem de coelhos New Zealand divididos em três Grupos: Grupo I (grupo controle), sem implantação de vasos gastroepiplóicos, e Grupo II e Grupo III, nos quais foram realizados os implantes de vasos gastroepiplóicos em arco no subcutâneo da parede abdominal lateral dos animais, os quais foram submetidos posteriormente a cirurgia para confecção de retalho axial, pediculado exclusivamente nos vasos gastroepiplóicos transpostos. O período entre a primeira cirurgia e a segunda foi de duas semanas no Grupo II e seis semanas no Grupo III. Quatorze dias após a segunda cirurgia os animais foram sacrificados e os retalhos avaliados. Nos animais do Grupo I, controle, foi observado 100% de área de necrose no tecido descolado, não preservando conexão vascular com o mesmo, e suturado novamente no leito original; nos animais do Grupo II foi observada área de necrose média de 56,83% e nos animais do Grupo III, ausência total de necrose nos retalhos. Amostras dos retalhos dos animais dos Grupos II e III foram avaliados histologicamente através de protocolo padrão para coloração por hamatoxilina-eosina e através de estudo imunohistoquímico para avaliação de viabilidade do tecido através da quantificação da atividade de divisão celular, considerando índice de células marcadas para o Antígeno Nuclear de Células em Ploriferação (iPCNA) como parâmetro. Foi observado aumento significante no iPCNA (p<0,01, teste bicaudal de Mann-Whitney) entre os Grupos II e III, com índice mais alto no Grupo III; a avaliação da coloração por hematoxilina-eosina confirmam a maior viabilidade dos retalhos do Grupo III. O estudo demonstra a possibilidade de criar e transferir um pedículo vascular em arco para o subcutâneo e, depois de certo tempo, confeccionar e transpor um retalho com dimensões consideráveis cuja circulação seja exclusiva deste novo pedículo. Este estudo traz informações adicionais para elaboração de retalhos pré-fabricados microcirúrgicos ou em ilha para o reparo de defeitos complexos que precisam de grandes áreas de cobertura cutânea e pedículos longos, com mínima morbidade à área doadora. / The aim of this study was to develop an experimental model and to evaluate the period as well as the viability of prefabricated cutaneous flaps with a cutaneous area of 100cm2 in lateral abdominal wall in rabbits. The cutaneous flaps were made through the direct implantation of gastroepiploic vessels in arch with flow-through below the subcutaneous of the lateral wall in rabbits. Eighteen animals of the New Zealand rabbits lineage were used divided in three Groups: Group I (control group), without implantation of gastroepiploic vessels, and Group II and Group III, which the implant of gastroepiploic vessels was accomplished in arch in the subcutaneous of the lateral abdominal wall of the animals. These animals were submitted to surgery later for making of axial flap, exclusively based in the transposed gastroepiploic vessels. The period between the first surgery and the second one was of two weeks in the Group II and six weeks in the Group III. Fourteen days after the second surgery the animals were sacrificed and the flaps evaluated. In Group I animals, control, it was observed 100% of necrosis area in the detached skin portion that was sutured again at the original bed, not preserving vascular connection with the local tissue; in the animals of the Group II an average necrotic area of 56,83% was observed and in the animals of the Group III, total absence of necrosis in the flaps. Samples of flaps tissue from the animals of the Groups II and III were evaluated through standard histological hamatoxilin-eosin protocols and imunohistochemical protocol for evaluation of tissue viability through the activity of cellular division, considering the index of Proliferating cell nuclear antigen (iPCNA) marked cells. It was observed significant increase on the iPCNA (p<0,01, two-tailed Mann-Whitney test) between the Groups II and III, with higher index in the Group III; the standard hematoxilin-eosin evaluation confirm the better viability of the flaps from the Group III. The study demonstrates the possibility to create and transfer an arch vascular pedicle to subcutaneous and, after certain time, to make and to transpose a flap with considerable dimensions which circulation comes from this new pedicle. This study brings additional information for elaboration of prefabricated microsurgical or island flaps for repair of complex defects that need great areas of skin covering and long pedicles, with low morbosity to the donor area.

Objetivos: Os objetivos deste estudo foram: 1) determinar a eficácia da transferência gênica do vetor de adenovírus sorotipo 5, carreando o gene do receptor do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) solúvel humano (sVEGFR1) para a glândula lacrimal (GL); 2) investigar se a expressão de sVEGFR1 interfere na neovascularização da córnea (NVC), induzida por queimadura alcalina; 3) avaliar a segurança do procedimento. Métodos: Trinta e dois ratos Wistar foram submetidos à queimadura central da córnea direita com solução de hidróxido de sódio (NaOH) 1 M. Os animais foram divididos em três grupos e injetados diretamente em sua GL direita 25 ?l de vetores virais AdVEGFR1 (1x1010 pfu) (12 animais), 25 ?l do vetor AdNull (1x1010pfu) (10 animais), ou 25 ?l de solução salina (Controle). Após sete dias, a NVC foi observada e fotografada na lâmpada de fenda. A secreção lacrimal foi medida com fenol. A presença do sVEGFR1 na GL foi testada por qPCR (quantitative polymerase chain reaction) e a coloração, por imunofluorescência. O qPCR foi também utilizado para comparar o RNA mensageiro (RNAm) de ilterleucina-1beta (IL-1?), ilterleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-?) na GL e no gânglio do trigêmeo (GT). Resultados: O vetor AdVEGFR1 transfectou 83% dos ratos. O sVEGFR1 estava presente nas células acinares da GL. A NVC foi prevenida em nove de doze animais do grupo AdVEGFR1, em comparação com o grupo Ad-Null (3:10) e o grupo Controle (1:10) (p=0,0317). A secreção lacrimal e o RNAm das citocinas na GL e no GT foram semelhantes nos três grupos (p>0,05). Conclusões: A transferência gênica do vetor adenoviral para a GL demonstrou expressão local do sVEGFR1 humano, e evitou a NVC na maioria dos olhos expostos a queimaduras alcalinas, se mostrando seguro para a estrutura e função da GL. / Purpose: The aims of this study were: 1) to determine the efficacy of adenovirus vector serotype 5 (Ad) encoding human soluble VEGF receptor 1 (sVEGFR1) gene transfer to the lacrimal gland (LG); 2) to investigate whether expression of sVEGFR1 acts in corneal neovascularization (CNV), induced by alkali burn and; 3) to evaluate the safety of the procedure. Methods: AdVEGFR1viral vectors (25 ?l, 1x1010pfu) were injected in the right LG of rats and compared with AdNull vector (25 ?l, 1x1010pfu) or 25?l saline (Control) before cornea alkali burn with 1 M NaOH. After seven days, CNV was observed and photographed in the slit lamp. Tear secretion was measured with phenol red thread. The animals were tested for human VEGFR1 mRNA and protein in the LG by qPCR and immunofluorescence staining, respectively. qPCR was also used to compare the mRNA of IL-1?, IL-6, and TNF-? in LG and ipsilateral trigeminal ganglion (TG). Results: Ad-VEGFR1 transfected 83% of the rats. VEGFR1 was present in LG acinar cells. CNV was prevented in 9 of 12 animals of Ad-VEGFR1 group, compared to Ad-Null (3:10) and Control (1:10) (p=0.0317). The tear secretion and the cytokines mRNA in LG and TG were similar all three groups (p>0.05). Conclusion: Adenoviral vector gene transfer to LG as the has shown local expression of human sVEGFR1, as It prevented CNV in most of the eyes exposed to alkali burn and was safe for LG structure and function.

Introdução: O Fator de Crescimento Endotelial Vascular - A (VEGF) é um dos principais promotores da angiogênese e demonstra relação com prognóstico no câncer gástrico (CG). Objetivos: Correlacionar a expressão imunoistoquímica do VEGF com o estadiamento e sobrevida no câncer gástrico. Métodos: 45 espécimes de adenocarcinomas foram avaliados para expressão imunoistoquímica do VEGF. O estadiamento patológico (pTNM), características histológicas e sobrevida foram avaliados empregando os testes ANOVA, análise multivariada e curva de Kaplan-Meier. Resultados: Foi observada maior expressão do VEGF na comparação entre os estadiamentos IA e IB vs II,III e IV (p<0,001). O VEGF menos expresso estava relacionado com maior penetração do tumor na parede gástrica (p<0,003) e presença de comprometimento linfonodal (p<0,001). Pacientes apresentando tumores com maior expressão de VEGF tiveram maior sobrevida (HR 0,37; IC 95%: 0,17-0,79). Conclusão: Houve associação inversa na expressão do VEGF com o estadiamento dos tumores gástricos. A análise multivariada demonstra a expressão do VEGF como fator prognóstico independente na sobrevida dos pacientes com câncer gástrico. / Background: Vascular endothelial growth factor A (VEGF) is one of the main promoters of angiogenesis and correlates with gastric cancer (GC) prognosis. Aims: To evaluate the correlation between immunohistochemical VEGF expression and the gastric cancer stage and survival rate. Methods: VEGF expression was evaluated by immunohistochemistry in 45 adenocarcinoma specimens. Pathologic staging (pTNM), histological characteristics and survival were assessed using an ANOVA test, a multivariate analysis and the Kaplan-Meier method. Results: A higher VEGF expression level was observed in stages IA and IB compared with II, III and IV (p<0.001). A lower VEGF expression level correlated with a greater tumor penetration level in the gastric wall (p<0.003) and the extent of tumor spread to the lymph nodes (p<0.001). Higher VEGF scores correlated with a longer survival time (HR 0.37; 95% CI: 0.17 - 0.79). Conclusion: An inverse correlation was observed between VEGF expression and gastric tumor stage. A multivariate analysis demonstrates that VEGF expression is an independent prognostic factor for survival in gastric cancer.

O modelo experimental de Cor pulmonale é caracterizado por um processo de remodelamento vascular pulmonar devido a um insulto inflamatório inicial. O remodelamento vascular é influenciado por apoptose de células endoteliais, hipertrofia da túnica média de arteríolas e pequenas artérias, rarefação vascular e estresse oxidativo. Ao mesmo tempo em que nota-se um remodelamento vascular adverso é importante salientar que o ventrículo direito desempenha um trabalho contra a vasculatura pulmonar, com o objetivo de manter a oxigenação sanguínea. Devido ao aumento de póscarga imposto ao ventrículo direito, essa câmara hipertrofia, na tentiva de manter um débito cardíaco adequado. Entretanto, o exercício físico estimula a angiogênese, atenua o estresse oxidativo e a apoptose celular e melhora a função cardíaca. Assim, o principal objetivo desta tese foi avaliar o impacto de um programa de exercício físico aeróbio sobre as concentrações de peróxido de hidrogênio (H2O2), um importante mediador intracelular, e a influência do estresse oxidativo sobre o sinal para a angiogênese pulmonar. Além disso, se essas alterações podem diminuir a sinalização apoptótica, e assim, exercer alguma influência positiva sobre a estrurura e função do ventrículo direito. Para isso, dividimos os nossos resultados em dois estudos. O experimento I apresenta os resultados obtidos no parênquima pulmonar e a avaliação funcional do ventrículo direito através da ecocardiografia, e o experimento II os resultados obtidos no tecido ventricular direito. experimento I mostrou que o exercício físico aeróbio promoveu um aumento em proteínas envolvidas com a angiogênese dependentes de H2O2/VEGF/Akt, no parênquima pulmonar de ratos com Cor pulmonale. Ao mesmo tempo, o fortalecimento da resposta angiogênica no grupo treinado e com Cor pulmonale esteve associado a benefícios na função do ventrículo direita (tais como a mudança de área fracional, fração de encurtamento e excursão sistólica do plano do anel da tricúspide), avaliados pela ecocardiografia transtorácica. Concomitantemente, o sinal para a angiogênese dependente do H2O2 nos indica uma angiogênese fisiológica, caracterizada por uma resposta antioxidante enzimática preservada (avaliada pela a atividade da glutationa peroxidase e da catalase) e por um aumento de Ang-1 (medida por imunohistoquímica). No experimento II, avaliou-se a influência do exercício físico aeróbio sobre proteínas apopóticas mitocondriais dependentes do H2O2 e sua influência sobre a estrutura e função do ventrículo direito. Notou-se que o exercício físico aeróbio atenuou o sinal apoptótico mitocondrial (relação Bax/Bcl-2) e diminuiu o imunoconteúdo da caspase-3. Simultaneamente, observou-se um aumento do imunoconteúdo da proteína p-Akt, envolvida com a sobrevivência celular e inibição do sinal apoptótico mitocondrial. Ademais, essa melhora no perfil molecular, em termos de apoptose mitocondrial, esteve associado a uma atenuação da resistência vascular pulmonar, avaliada através da ecocardiografia transtorácica. Em síntese, o exercício físico aeróbio aumentou o imunoconteúdo de proteínas envolvidas com a angiogênese pulmonar e diminui o sinal apoptótico mitocondrial no ventrículo direito. Essas respostas parecem estar associadas a uma melhora, promovida pelo exercício aeróbio, na função do ventrículo direito de ratos com Cor pulmonale, um dos principais fatores envolvidos com os altos índices mortalidade e morbidade da hipertensão arterial pulmonar. / E xperimental model of Cor pulmonale is characterized by pulmonary vascular remodeling due to an initial inflammatory insult. Vascular remodeling is affected by endothelial cell apoptosis, hypertrophy of the tunica media of small arteries and arterioles, oxidative stress and vascular rarefaction. At the same time that is noted an adverse vascular remodeling, it is important to know that the right ventricle performs work against pulmonary vasculature in order to maintain blood oxygenation. Due to increased afterload imposed to the right ventricle, this chamber hypertrophy, to try to maintain an adequate cardiac output. However, exercise stimulates angiogenesis, attenuate oxidative stress and apoptosis, and improves cardiac function. Therefore, the main objective of this thesis was to evaluate the impact of aerobic exercise on the H2O2 concentrations, an important intracellular mediator, and the influence of oxidative stress on lung signal for angiogenesis. Also, if these changes can decrease the apoptotic signaling, and thus, exert some positive influence on the structure and function of the right ventricle. For this purpose, we divided our results in two experiments. The experiment I showed the results obtained in the lung parenchyma and the functional assessment of the right ventricle by echocardiography; and the experiment II the results obtained in right ventricular tissue. The experiment I showed that aerobic exercise promoted an increase in H2O2/VEGF/Akt dependent angiogenic signaling in the lung parenchyma of rats with Cor pulmonale. At the same time, the strengthening of the angiogenic response in the TM group was associated with benefits in the function of the right ventricle (such as fractional area change, fractional shortening and tricuspid annular p0:;< =>=?@0CD <GDHI=C@; ), assessed by transthoracic echocardiography. The H2O2 dependent angiogenic signal indicates a physiological angiogenesis, characterized by a maintained enzymatic antioxidant response (as measured by the activity of catalase and glutathione peroxidase) and increased Ang-1 (measured by immunohistochemistry). In the experiment II, it was evaluated the influence of aerobic exercise on H2O2 dependent mitochondrial apoptotic proteins and its influence on the structure and function of the right ventricle. It was noted that aerobic exercise attenuated mitochondrial apoptotic signal (through Bax/Bcl-2 ratio) and decreased immunocontent of caspase-3. Simultaneously, there was observed an increase in immunocontent of p-Akt, a protein involved in cell survival and inhibition of mitochondrial apoptotic signal. Moreover, this improvement in the molecular profile in terms of mitochondrial apoptosis, was associated with a pulmonary vascular resistance attenuation, assessed by transthoracic echocardiography. In short, aerobic exercise increased the immunocontent of proteins involved with physiological pulmonary angiogenesis and decreased mitochondrial apoptotic signal in the right ventricle. These responses appear to be associated with an improvement, promoted by aerobic exercise, in right ventricle function of rats with Cor pulmonale, one of the main factors involved with high rates mortality and morbidity of pulmonary arterial hypertension.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-20Bitstream added on 2015-04-09T12:47:47Z : No. of bitstreams: 1 000814346.pdf: 1337951 bytes, checksum: 9ed960afb83960e3296a726e4541f251 (MD5) / A literatura cita que 1 a 5% dos casos de tumor venéreo transmissível (TVT) primário são metastáticos. Sendo assim, é importante estudar os mecanismos que colaborem para a invasão metastática assim como para sua implantação. Dentre estes mecanismos as metaloproteinases (MMP-2 e MMP-9) e seus inibidores (TIMP-1 e TIMP-2), assim como o ATM, COX-2, VEGF e CDH-1 podem explicar a implantação tumoral no sítio primário e a ocorrência da invasão metastática do TVT no cão. O objetivo do presente trabalho é avaliar a expressão gênica dos marcadores acima e correlacionar a sua expressão com o poder de implantação e invasão metastática no TVT. Para este estudo foram avaliadas 32 amostras tumorais, que foram congeladas e delas extraídos RNAm. Utilizou-se o método de qRT-PCR para todos os transcritos. Os resultados foram comparados com sangue periférico de 10 cães saudáveis (grupo controle) com o teste de Mann Whitney. A expressão gênica de MMP-2 e TIMP-1 foi significativamente maior do que o grupo controle (p < 0,001; p = 0,037; respetivamente). A expressão dos transcritos dos genes MMP-9 e TIMP-2 não apresentou diferença estatística entre o TVT e grupo controle (p = 0,535; p = 0, 906; respetivamente). A avaliação de expressão de transcritos do ATMapresentou aumento significativo (p < 0,0001) de sua expressão no tecido tumoral (TVT) quando comparado com o grupo controle, enquanto a expressão dos transcritos do gene TP53 não apresentou diferença estatística entre os grupos (p = 0,26). Na avaliação da COX-2, VEGF, CDH-1 foi verificado aumento significativo (p < 0,0001; p < 0,0001; p = 0,04, respectivamente) da expressão de transcritos dos genes no tecido tumoral (TVT) em relação ao grupo controle. A super-expressão de MMP-2 e o TIMP-1 pode explicar a capacidade de implantação das células tumorais assim como a maior expressão de VEGF e COX-2 pode explicar o crescimento rápido local do tumor e ... / The literature reports that 1-5% of cases of primary trasmissible venereal tumor (TVT) are metastatic. Thus, it is interesting to study the mechanisms that collaborate to the metastatic invasion and implantation of TVT. Among these mechanisms, the metalloproetinases (MMP-2 and MMP-9) and their inhibitors (TIMP-1 and TIMP-2), as well as ATM, COX-2, VEGF and CDH-1 may explain the tumoral implantation in the primary site and metastatic invasion of TVT in dogs. The objectives of this study are to evaluate the gene expression of these markers and to correlate their expression with the high ability of deployment and metastatic invasion of TVT. For this study, 32 tumor samples were frozen and their mRNA were extract using the qRT-PCR method for all transcripts. The results were compared with peripheral blood of 10 healthy dogs (control group) using the Mann Whitney test. The expression of MMP-2 and TIMP-1 were significantly higher than the control group (p <0.001, p = 0.037, respectively). The expression of MMP-9 and TIMP-2 showed no statistical difference between the TVT and the control group (p = 0.535, p = 0, 906, respectively). The expression of ATM was increased in tumor tissue (TVT) when compared with the control group, while the expression of TP53 had no statistical difference between groups (p = 0.26). The evaluation of COX-2, VEGF and CDH-1 were increas in tumor tissue when compared with control group. The over expression of MMP-2 and TIMP-1 may explain the implantation ability of the tumor cells, as well as the increase of VEGF and COX-2 may explain the rapid tumor growth and the rich vasculatization. While the over expression of ATM, TP53 and CDH-1 may contribute to the low metastatic capacity of the TVT tumor

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6292.pdf: 2287765 bytes, checksum: b3d00bafed75c8cbfaf179911ce21881 (MD5) Previous issue date: 2014-09-09 / Financiadora de Estudos e Projetos / Ovariectomy in animals (surgical removal of ovaries) is a model used to mimic the menopause in women. The ovarian hormone deficiency alters the lipid profile, increases inflammation and the risk of type 2 diabetes mellitus, sarcopenia, osteopenia, obesity and cardiovascular diseases. Resistance training (RT) has been used as a non-pharmacological tool to prevent or reverse the postmenopausal effects. However, there are few studies evaluating the ovariectomy (Ovx) and RT effects on the morphology and angiogenesis of visceral adipose tissue (VAT). Thus, the aim of this study was to investigate the Ovx and RT influence at the size and adipocytes number, gene expression and VEGF-A protein levels and microvessel density in VAT of rats. Adult Sprague-Dawley rats were divided into four groups (n=6 per group): Sham-operated sedentary (Sham-Sed), ovariectomized sedentary (Sed-Ovx), Sham-operated resistance training (Sham-Tr) and ovariectomized resistance training (Ovx- Tr). During the resistance training period, the animals climbed a 1.1m vertical ladder with weights attached to their tails, which were progressively increased; the sessions were performed three times a week, with 4-9 climbs and 8-12 dynamic movements per climb with intervals of 2 minutes between climbs. Histological analysis was performed to analyze vascular micro density and morphology of VAT; gene expression and VEGF-A protein levels were analyzed by real-time PCR and ELISA, respectively. Ovx resulted in higher body weight, adipocyte hypertrophy, decreased both VEGF-A mRNA and protein and VEGF-R2 mRNA expression, and decreased the micro vascular density in the VAT of sedentary rats. However, RT was not able to prevent any changes induced by ovariectomy. The data indicated that Ovx impaired the morphology and angiogenesis of rats VAT and that RT protocol adopted did not prevent these changes. We suggest future studies performing adaptations in this resistance training program, associated or not to hypocaloric diet and treatment with estradiol. / A ovariectomia em animais (remoção cirúrgica dos ovários) é um modelo de estudo utilizado para mimetizar a menopausa em mulheres. A deficiência dos hormônios ovarianos altera o perfil lipídico, aumenta a inflamação e o risco de diabetes tipo 2, sarcopenia, osteopenia, obesidade e doenças cardiovasculares. O treinamento resistido (TR) tem sido empregado como ferramenta não farmacológica na tentativa prevenir ou reverter os efeitos da pósmenopausa. No entanto, são escassos os estudos sobre os efeitos da Ovx e TR na morfologia e angiogênese do tecido adiposo visceral (TAV). Diante disto, o objetivo desta pesquisa foi verificar a influência da Ovx e do TR no tamanho e no número dos adipócitos, expressão gênica e concentração proteica de VEGF-A e densidade microvascular do TAV de ratas. Ratas Sprague-Dawley adultas foram dividas em quatro grupos experimentais (n=6 por grupo): Sham operado sendentário (Sham-Sed); Ovariectomizado sedentário (Ovx-Sed); Sham operado treinamento resistido (Sham-Tr) e Ovariectomizado treinamento resistido (Ovx-Tr). Durante o período de treinamento resistido, os animais escalaram uma escada vertical de 1,1 m com pesos atados em suas caudas, que foram aumentados progressivamente; as sessões foram realizadas três vezes na semana, com 4-9 escaladas por sessão de treino e 8- 12 movimentos por escalada com intervalos de 2 minutos entre as escaladas. A morfologia e densidade vascular foram avaliadas por meio de análises histológicas, a expressão gênica e proteica do VEGF-A foram analisadas por PCR em tempo real e ELISA, respectivamente. A ovariectomia aumentou a massa corporal e provocou hipertrofia dos adipócitos, diminuição da expressão de VEGF-A e seu receptor, diminuição da concentração de VEGF-A e redução da densidade microvascular no TAV das ratas. O treinamento resistido não foi eficiente em prevenir nenhuma destas alterações. Sugere-se futuros estudos realizando adaptações neste programa de treinamento resistido, associadas ou não à dieta hipocalórica e ao tratamento com o estradiol.