Orientador : Sergio Marangoni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T11:36:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camara_PaulaRubyadeSouza_M.pdf: 3153329 bytes, checksum: fb99d8d7c48803cbe26b33c704d1c14c (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: o fracionamento do veneno total de Crotalus durissus terrificus (C.d.terrificus), Crotalus duríssus collilineatus (C.d.collilíneatus) e Crotalus durissus cascavella (C.d.cascavella) em coluna Superdex G-75 mostrou a presença de quatro picos principais. O pico reconhecido como crotoxina nas três espécies crotálicas foi purificado em HPLC de fase reversa, e mostrou a presença das isoformas de crotapotinas (CA) e fosfolipase A2 (PLA2), que variam quantitativamente entre os três venenos. A eletroforese também foi compatível quanto as regiões de massa molecular esperadas para a frações (Crtx, PLA2 e CA) dos três venenos, mostrando que há alta homogeneidade molecular entre as mesmas. O extravasamento plasmático evocado pela (CA; 1j../g/sítio) e (P_ ; O,5j../g/sítio) de C.d.terrificus, C.d.collílineatus e C.d.cascavells foi avaliado na microvasculatura de pele dorsal de ratos através do acúmulo local da mistura de albumina bovina marcada com 125 e azul de Evans, previamente administrada pela via endovenosa (e.v.). A injeção intradérmica (Ld.) das CA e PLA2 dos três venenos crotálicos induziu aumento na permeabilidade microvascular de maneira significativa para as PLA2s, mas não para as Caso tratamento prévio (30 min) com o antagonista de receptores de histamina e 5-HT (ciproheptadina; 2mg/Kg) inibiu significativamente o extravasamento plasmático evocado pelas PLA2 dos três venenos testados (0,5 j../g/sítio). O antagonista seletivo de receptores NK1 de taquicininas, SR140333 (1nmol/sítio), inibiu significativamente o extravasamento plasmático evocado pelas PLA2S. Em ratos neonatos tratados com capsaicina (50mg/Kg; s.c.), o extravasamento plasmático induzido pelas três PLA2S crotálicas foi significativamente inibido. Em resumo, nossos resultados fornecem evidências que PLA2S de C.d.terrlficus, C.d.coIlilineatus e C.d.cascavella podem atuar como substâncias neurogênicas próinflamatórios, enquanto que as CAs não têm papel semelhante / Abstract: The fractionament of the crude poison of Crotalus durissus terrificus (C.d.terrificus) , Crotalus durissus collilíneatus (C.d.coJlílíneatus) and Crotalus. durissus cascaveiJa (C.d.cascaveJ/a) in calumn Supherdex G-75 showed the presence of faur main picks. The pick recognized as crotoxina in the three species crotalics was purified in reverse phase HPLC , and showed the presence of the crotapotins (CA) and fosfolipase Az (PLAz) isoforms, that vary Quantitativamente amang the three poisans. The eletrofaresis was also compatible as the areas af molecular mass expected for the fractions (Crtx, PLA2 and CA) af the three poisans, showing that there is discharge malecular hamogeneity among them. Plasma extravasation evoked by the (CA; 1(Jg/site) and (PLA2; O,5jJg/site) af C.d.terrificus, C.d.colfilíneatus and C.d.cascavella was evaluated in the mierovasculature af rats dorsal skin through the local accumulation of the mixture of bovine albumin marked with 1125 and Evans bJue previously administered by the endovenosa road (e.v.). The intradermic injection (Ld.) of CA and PLA2 of the three erotalics poisons indueed an inerease in the mierovaseular permeability in a sígnificant way for PLA2S, but not for Caso Previous treatment (30 min) with histamine and 5HT receptor antagonist (ciproheptadina; 2mg/Kg; i.p.) inhibited the plasma extravasation signmcantJy evoked by PLA2 from the three venons tested (0,5 (Jglsíte). The takicinin NK1 receptor selective antagonist, SR140333 (1 nmol/site), inhibited the plasma extravasation significantly evoked by PLAzs. In neonatal capsaiein treated rats (50mglKg; s.e.), the plasma extravasation induced by three crotalics PLA2S was significantly inhibited. In summary, our results supply evidences that PLA2S trom C.d.terrificus, C.d.co/lilíneatus and C.d.cascaveJ/a can aet as proinflammatory neurogenics substances, while CAs don't have similar role / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia

Orientadores: Gilberto de Nucci, Elen Cristina Teizem Landucci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T21:27:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_Tatiane_M.pdf: 838991 bytes, checksum: fcfc9182e3cb79df03511f3867236e61 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A habilidade do veneno bruto de Lachesis muta muta e da fosfolipase A2 básica (LmTX-I) de induzir aumento da permeabilidade microvascular na pata e pele de ratos foi investigada nesse trabalho. O veneno bruto ou LmTX-I foi injetado subplantar ou intradermicamente e o edema foi medido após intervalos de tempo específicos. O volume da pata foi medido usando um hidropletismômetro, enquanto o extravasamento na pele foi medido através do acúmulo de albumina humana marcada com 125I (injetada previamente i.v.) nos sítios de pele. A liberação de histamina dos mastócitos de ratos foi medida por espectrofluorometria. O veneno bruto (0,3-3 µg/pata) ou LmTX-I (0,1-1 µg/pata) induziu edema de pata de maneira dose-dependente. A injeção intradérmica do veneno bruto (0,003-10 µg/sítio) ou LmTX-I (0,003-0,3 µg/sítio) na pele dorsal também resultou em extravasamento de proteínas plasmáticas de maneira dose-dependente. O extravasamento plasmático induzido pelo veneno bruto foi significativamente diminuído pelo tratamento com mepiramina (antagonista de receptor H1, 6 mg/kg), ciproeptadina (antagonista H1 e 5-HT2, 2 mg/kg), LNAME (inibidor não seletivo da síntese de óxido nítrico, 100 nmol/sítio), SR140333 (antagonista de receptor NK1, 1 nmol/sítio), icatibant (antagonista de receptor B2, 0,6 mg/kg) e indometacina (inibidor não seletivo das cicloxigenases, 5 mg/kg), mas não pelo tratamento com PCA4248 (antagonista de receptor de PAF, 5 mg/kg). O extravasamento na pele induzido pela LmTX-I foi significativamente inibido pela ciproeptadina, mepiramina, indometacina e PCA4248, enquanto que L-NAME, SR140333 e icatibant não tiveram efeito. Tanto o veneno bruto quanto a LmTX-I induziram a liberação de histamina de mastócitos peritoneais de ratos de maneira concentração-dependente. Em conclusão, o veneno de L. m. muta e a LmTX-I aumentam a permeabilidade microvascular por mecanismos envolvendo a ativação de mastócitos e a formação de metabólitos do ácido araquidônico. A resposta induzida pelo veneno bruto também envolve liberação de substância P, bradicinina e óxido nítrico enquanto a resposta induzida pela LmTX-I conta com a participação do PAF. / Abstract: The ability of crude venom and a basic phospholipase A2 (LmTX-I) from Lachesis muta muta venom to increase the microvascular permeability in the rat paw and skin has been investigated. Crude venom or LmTX-I were injected subplantarly or intradermically, after which oedema was measured at selected times thereafter. Paw volume was measured using a hydropletismometer, whereas skin extravasation at the skin sites was measured as accumulation of i.v. injected 125I-human serum albumin. Histamine liberation from rat mast cell was measured spectrofluorometrically. Crude venom (0.3-3 µg/paw) or LmTX-I (0.1-1 µg/paw) induced a dose-dependent rat paw oedema. Intradermal injection of crude venom (0.03-10 µg/site) or LmTX-I (0.003-0.3 µg/site) in the dorsal skin also resulted in dosedependent plasma extravasation. Crude venom-induced plasma extravasation was significantly inhibited by the histamine H1 receptor antagonist mepyramine (6 mg/kg), the histamine/5-hydroxytriptamine antagonist cyproheptadine (2 mg/kg), the nitric oxide synthesis inhibitor N?-L-nitro-arginine methyl ester (L-NAME; 100 nmol/site), the tachykinin NK1 receptor antagonist SR140333 (1 nmol/site), the bradykinin B2 receptor antagonist Icatibant (0.6 mg/kg) and the cyclooxygenase inhibitor indomethacin (5 mg/kg). The platelet-activating factor receptor antagonist PCA4248 (5 mg/kg) had no significant effect. LmTX-I-induced skin extravasation was significantly inhibited by cyproheptadine, mepyramine, indomethacin and PCA4248, while L-NAME, SR140333 and Icatibant had no effect. Additionally, both Lachesis muta muta venom and LmTX-I concentration-dependently induced histamine release from rat peritoneal mast cells. In conclusion, Lachesis muta muta venom and LmTX-I increase microvascular permeability by mechanisms involving mast cell activation and both had arachidonic acid metabolites participation. Crude venom-induced responses also involves substance P, bradykinin and nitric oxide release, whether LmTX-I-induced response involves PAF. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Infecções por Plasmodium sp. podem levar a um quadro respiratório grave, com complicações pulmonares denominadas lesão pulmonar aguda e síndrome do desconforto respiratório agudo (LPA/SDRA). Inflamação aguda, lesão do endotélio alveolar e do parênquima pulmonar, disfunção e aumento da permeabilidade da barreira alvéolo-capilar e, consequente, formação de edema, caracterizam esta síndrome. O modelo experimental, que utiliza o parasita murino Plasmodium berghei ANKA e camundongos da linhagem DBA/2, é empregado no estudo de mediadores imunológicos e fatores que propiciam o estabelecimento das lesões pulmonares associados à LPA/SDRA. Diversos estímulos podem atuar diretamente no aumento da permeabilidade endotelial por meio da desestabilização dos microtúbulos, rearranjo dos microfilamentos de actina e contração das células endoteliais, via sinalização de Rho-GTPases, causando disfunção da barreira endotelial. Desta forma, este trabalho tem como objetivo avaliar as alterações do citoesqueleto em células endoteliais primárias pulmonares de camundongos DBA/2 (CEPP-DBA/2), as vias de sinalização das principais Rho-GTPases e o estresse oxidativo, causados pela presença de eritrócitos parasitados com esquizontes de P. berghei ANKA (EP-PbA). As CEPP-DBA/2 foram estimuladas com TNF, VEGF ou IFNγ, em diferentes tempos de exposição, seguido da incubação com EP-PbA. Assim, foram realizados ensaios de imunofluorescência para análise do rearranjo de microfilamentos de actina e da desestabilização de microtúbulos. As vias de sinalização das Rho-GTPases foram avaliadas por Western blot, para as expressões proteicas de RhoA, Cdc42 e MLC. Além disso, ensaio fluorométrico foi realizado para detectar a produção de espécies reativas de oxigênio, resultantes do estímulo com eritrócitos parasitados. CEPP-DBA/2 estimuladas por EP-PbA, VEGF, TNF ou IFNγ, em associação ou não, apresentaram alterações morfológicas nos microfilamentos de actina e aumento dos espaços interendoteliais. Imagens de imunofluorescência também mostram desestabilização de microtúbulos e desfosforilação de FAK, causadas por EP-PbA. Os ensaios de permeabilidade validam que os eritrócitos parasitados com formas maduras de P. berghei induziram aumento da permeabilidade microvascular nas CEPP-DBA/2. Além disso, estas células, estimuladas com EP-PbA, demonstraram elevada produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), o que pode estar contribuindo com o desenvolvimento de estresse oxidativo e com a injúria endotelial, assim como, com o aumento da permeabilidade vascular. O mais interessante é que estas alterações endoteliais podem estar relacionadas ao aumento da razão RhoA/Cdc42, da expressão proteica de MLC fosforilada e do sinal de ativação de RhoA. Em conjunto, estes resultados mostram envolvimento dos eritrócitos parasitados com esquizontes de Plasmodium berghei ANKA na desorganização do citoesqueleto e na disfunção da barreira alvéolo-capilar, via RhoA/Rho-kinase, o que pode estar contribuindo com a patogênese da LPA/SDRA associada à malária. / Infections by Plasmodium sp. can lead to a serious respiratory condition with pulmonary complications, named acute lung injury and acute respiratory distress syndrome (ALI/ARDS). Acute inflammation, alveolar endothelium and lung parenchyma injuries, dysfunction and increased permeability of the pulmonary alveolar-capillary barrier and consequent formation of edema characterize this syndrome. Several stimuli can directly increase endothelial permeability through actin microfilaments rearrangement, via Rho- GTPases signaling, leading to endothelial barrier dysfunction. DBA/2 mice infected with Plasmodium berghei ANKA develop ALI/ARDS similar to that observed in humans. The purpose of this research was to assess cytoskeletal changes in DBA/2 mice primary microvascular lung endothelial cells (PMLEC), verify the signaling pathways of the Rho- GTPases and analyze the oxidative stress on these cells in the presence of P. berghei ANKA-infected red blood cells (PbA-iRBC). PMLEC were stimulated by TNF, VEGF or IFNγ followed by incubation with PbA-iRBC. Immunofluorescence assays were performed to analyze actin microfilaments rearrangement and microtubules destabilization. Western blot for RhoA, Cdc42 and MLC proteins were conducted to assess alterations in signaling pathways of Rho-GTPases. In addition, a fluorimetric assay was performed to detect the production of reactive oxygen species resulting from PbA-iRBC stimulus. P. berghei ANKA, VEGF, TNF and IFNγ stimuli, in association or not, caused morphological disturbances in actin microfilaments of PMLEC and an increase of intercellular spaces. Moreover, immunofluorescence images showed microtubules destabilization and FAK dephosphorylation in these cells, caused by PbA-iRBC. The permeability assay showed that PbA-iRBC induced an increase of microvascular permeability in PMLEC. In addition, PMLEC stimulated by PbA-iRBC, showed elevated production of ROS, which may be contributing to oxidative stress and increasing the damage of endothelial cells, as well as an increase of vascular permeability. Interestingly, these endothelial changes may be related to the increased RhoA/Cdc42 protein expressions ratio, augmented protein expression of phosphorylated MLC and RhoA activation signal. Taken together, these data demonstrate the involvement of P. berghei ANKA-infected red blood cells in cytoskeleton disorganization and alveolar-capillary barrier dysfunction, through of RhoA / Rho-kinase signaling pathway, which may contribute to ALI/ARDS pathogenesis.

INTRODUÇÃO: O estudo das lesões mamárias teve um grande avanço com o uso da Ressonância Magnética com contraste. Contudo, muitos achados ainda são comuns nas lesões benignas e malignas, muitas vezes sendo difícil sua diferenciação. O objetivo deste estudo foi estudar a permeabilidade vascular e o volume extra-celular (VEC) nas lesões nodulares benignas e malignas da mama, para verificar se isto poderia aumentar a diferenciação destas lesoes. Para isto, utilizamos o aplicativo do Full Time Point (FTP), que utiliza a sequência dinâmica do contraste e converte em mapa de cores e calcula permeabilidade e VEC. MÉTODOS: Foram incluídas no estudo 31 pacientes, com 57 lesões nodulares, 29 malignas e 28 benignas. Todas as pacientes assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido. As lesões foram primeiramente classificadas pelo radiologista leitor quanto à análise dinâmica do contraste de acordo com a classificação do BI-RADS®. Posteriormente, as mesmas lesões foram selecionadas com o programa do FTP que calculou permeabilidade vascular e VEC das lesões. RESULTADOS: Os resultados mostraram que a permeabilidade foi diferente para lesões malignas e benignas, com média de 1,209 (±0,424) para maligno e 0,394 (±0,210) para benigno. O VEC não mostrou diferença estatisticamente significativa entre lesões benignas e malignas, com média de 0,666 (±0,123) para maligno e 0,708 (±0,151) para benigno. Quando correlacionado com a classificação das lesões pelo BI-RADS®, evidenciamos também que as lesões tiveram permeabilidade diferente nas diferentes classificações , sendo de 0,39 (±0,22) para BI-RADS®3, 0,56 (±0,39) para BI-RADS® 4 e 1,29 (±0,37) para BI-RADS® 5, mostrando que nas lesões com maior malignidade, a permeabilidade foi maior. O VEC não foi diferente nas diversas classificações do BI-RADS®. CONCLUSÕES: O estudo nos permite concluir que a permeabilidade vascular pode ser um bom discriminante na diferenciação das lesões benignas e malignas da mama. Contudo, o mesmo não ocorreu com o VEC. / INTRODUCTION: There has been a great development in the study of breast lesions with the use of contrast-enhanced magnetic resonance. However, several findings are common in malignant and in benign lesions turning their differentiation difficult. The objective of this research was to study the vascular permeability and the extracellular volume fraction (EVF) to verify if these characteristics increase the differentiation between benign and malignant lesions. The Full Time Point application that converts contrast dynamic sequence in color hue maps to calculate permeability and EVF was used for this purpose. METHODS: 31 patients were included in this study with 57 lesions, 29 malignant and 28 benign. All patients signed an informed consent form. First the lesions were classified by the reader radiologist by dynamic analysis according to BI-RADS® classification. Later, the same lesions were selected with the FTP program that calculated vascular permeability and EVF. RESULTS: Results showed that permeability was different for malignant and benign lesions, mean 1.209(±0.424) for malignant and 0.394 (±0.210) for benign. The EVF did not show statistically significant difference between benign and malignant lesions, mean 0.666 (±0.123) for malignant and 0.708 (±0.151) for benign. When compared to BI-RADS® classification, it was observed that lesions had different permeability in different classifications: 0,39 (±0.22) for BI-RADS® 3, 0.56 (±0.39) for BIRADS ® 4 and 1.29 (±0.37) for BI-RADS® 5. This showed that higher malignity lesions had higher permeability. EVF was not different in the different BI-RADS® classifications. CONCLUSION: It can be concluded that vascular permeabilitiy can be a good discriminant in differentiating breast malignant and benign lesions. However the same was not true for EVF.

INTRODUÇÃO: O estudo das lesões mamárias teve um grande avanço com o uso da Ressonância Magnética com contraste. Contudo, muitos achados ainda são comuns nas lesões benignas e malignas, muitas vezes sendo difícil sua diferenciação. O objetivo deste estudo foi estudar a permeabilidade vascular e o volume extra-celular (VEC) nas lesões nodulares benignas e malignas da mama, para verificar se isto poderia aumentar a diferenciação destas lesoes. Para isto, utilizamos o aplicativo do Full Time Point (FTP), que utiliza a sequência dinâmica do contraste e converte em mapa de cores e calcula permeabilidade e VEC. MÉTODOS: Foram incluídas no estudo 31 pacientes, com 57 lesões nodulares, 29 malignas e 28 benignas. Todas as pacientes assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido. As lesões foram primeiramente classificadas pelo radiologista leitor quanto à análise dinâmica do contraste de acordo com a classificação do BI-RADS®. Posteriormente, as mesmas lesões foram selecionadas com o programa do FTP que calculou permeabilidade vascular e VEC das lesões. RESULTADOS: Os resultados mostraram que a permeabilidade foi diferente para lesões malignas e benignas, com média de 1,209 (±0,424) para maligno e 0,394 (±0,210) para benigno. O VEC não mostrou diferença estatisticamente significativa entre lesões benignas e malignas, com média de 0,666 (±0,123) para maligno e 0,708 (±0,151) para benigno. Quando correlacionado com a classificação das lesões pelo BI-RADS®, evidenciamos também que as lesões tiveram permeabilidade diferente nas diferentes classificações , sendo de 0,39 (±0,22) para BI-RADS®3, 0,56 (±0,39) para BI-RADS® 4 e 1,29 (±0,37) para BI-RADS® 5, mostrando que nas lesões com maior malignidade, a permeabilidade foi maior. O VEC não foi diferente nas diversas classificações do BI-RADS®. CONCLUSÕES: O estudo nos permite concluir que a permeabilidade vascular pode ser um bom discriminante na diferenciação das lesões benignas e malignas da mama. Contudo, o mesmo não ocorreu com o VEC. / INTRODUCTION: There has been a great development in the study of breast lesions with the use of contrast-enhanced magnetic resonance. However, several findings are common in malignant and in benign lesions turning their differentiation difficult. The objective of this research was to study the vascular permeability and the extracellular volume fraction (EVF) to verify if these characteristics increase the differentiation between benign and malignant lesions. The Full Time Point application that converts contrast dynamic sequence in color hue maps to calculate permeability and EVF was used for this purpose. METHODS: 31 patients were included in this study with 57 lesions, 29 malignant and 28 benign. All patients signed an informed consent form. First the lesions were classified by the reader radiologist by dynamic analysis according to BI-RADS® classification. Later, the same lesions were selected with the FTP program that calculated vascular permeability and EVF. RESULTS: Results showed that permeability was different for malignant and benign lesions, mean 1.209(±0.424) for malignant and 0.394 (±0.210) for benign. The EVF did not show statistically significant difference between benign and malignant lesions, mean 0.666 (±0.123) for malignant and 0.708 (±0.151) for benign. When compared to BI-RADS® classification, it was observed that lesions had different permeability in different classifications: 0,39 (±0.22) for BI-RADS® 3, 0.56 (±0.39) for BIRADS ® 4 and 1.29 (±0.37) for BI-RADS® 5. This showed that higher malignity lesions had higher permeability. EVF was not different in the different BI-RADS® classifications. CONCLUSION: It can be concluded that vascular permeabilitiy can be a good discriminant in differentiating breast malignant and benign lesions. However the same was not true for EVF.

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T07:59:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T23:05:48Z : No. of bitstreams: 1 145055.pdf: 1760692 bytes, checksum: faacb278b963edf1252e8f840d9e0652 (MD5)

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2190162 bytes, checksum: 9763593619be7b764f8c70a928a7dba5 (MD5) Previous issue date: 2012-03-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Bornyl Salicylate (BS) is a salicylic derivative, obtained by sterification of salicylic acid and monoterpene (-)-borneol, and its topical use in inflammatory diseases has been described in the beginning of 20th century. It is also known that salicylic derivatives have anti-inflammatory activity and borneol have neuroprotective, genoprotective and analgesic activity. The goal of this study was to evaluate activity of BS in experimental models of acute inflammation. The toxicity of BS was analyzed by measuring water and food intake, weight, mortality and weight of major organs. To assess its anti-inflammatory effect, mice pre-treated with BS were subjected to carrageenan, prostaglandin E2, bradikynin or histamine-induced paw edema, zymosan-induced peritonitis and increased vascular permeability induced by acetic acid. NO production was analyzed in peritoneal macrophage cell culture. There were no signs of acute toxicity with the administration of 1000 mg/kg BS in male and female mice. Furthermore, pretreatment with BS was significantly (p<0.05) effective in reducing paw edema induced by carrageenin in early and late times; this effect is related to eicosanoid mediators and bradikynin, and independent of histamine. Neutrophils migration and the release of pro-inflammatory cytokines (TNF-, IL-1 and IL-6) induced by zimosan, and the fluid leakage induced by acetic acid were also reduced in animals treated with BS. In vitro, BS reduced NO release in LPS-stimulated macrophage. These data suggest that BS has anti-inflammatory effects related to different mechanisms of inflammation, and further studies are needed to explore its potential. / O Salicilato de Borneol (SB) é um derivado salicílico, obtido pela esterificação do ácido salicílico e do monoterpeno (-)-borneol, e seu uso tópico em doenças inflamatórias foi descrito no início do século XX. Derivados salicílicos possuem excelente atividade anti-inflamatória e sabe-se que o borneol possui atividade neuroprotetora, genoprotetora e analgésica. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade do SB em modelos experimentais de inflamação aguda. A toxicidade do SB foi analisada, mensurando-se o consumo de água e ração, peso, letalidade e peso dos principais órgãos. Para avaliar seu efeito anti-inflamatório, camundongos pré-tratados com SB foram submetidos aos protocolos de edema de pata induzido por carragenina, prostaglandina E2, bradicinina ou histamina, peritonite induzida por zimosan e aumento da permeabilidade vascular induzido por ácido acético. A produção de óxido nítrico (NO) foi analisada em cultura de macrófagos peritoneais. Não foram observados sinais de toxicidade aguda com a administração de 1000 mg/kg de SB em camundongos machos e fêmeas. Além disto, o pré-tratamento com SB foi significativamente (p<0,05) eficaz na redução do edema de pata induzido por carragenina em tempos precoces e tardios, pela modulação de eicosanoides e bradicinina, e independente de histamina. A migração de neutrófilos e a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF-, IL-1 e IL-6) provocadas pelo zimosan, bem como o extravasamento de fluidos mediado pelo ácido acético também foram reduzidos em animais tratados com SB. In vitro, o SB reduziu a liberação de NO em células estimuladas por lipopolissacarídeo de E. coli (LPS). Estes dados sugerem que SB tem efeitos anti-inflamatórios relacionados com diferentes mecanismos da inflamação, e novos estudos são necessários para explorar seu potencial.

Orientador: Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T19:41:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bifaroni_RenataManoScatamburlo_M.pdf: 12304500 bytes, checksum: a5c3c67724b7ea654b79231b9f69925a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A heme oxigenase (HO) é uma enzima envolvida na degradação de grupos heme, levando à formação de biliverdina IX, ferro e monóxido de carbono. Em baixas concentrações, esses produtos exercem diversos efeitos protetores, inclusive antiapoptóticos, antiinflamatórios, antiproliferativos e antitrombóticos, enquanto, em concentrações elevadas, podem resultar em hipóxia, comprometimento neurológico, disfunções mitocondriais e hiperbilirrubinemia. Neste estudo, investigamos o envolvimento da HO no aumento da permeabilidade vascular, na hemorragia e na mionecrose causadas pela peçonha de Bothrops jararacussu. A peçonha de B. jararacussu (0,3-3 µg/sítio) aumentou a permeabilidade vascular no dorso de pele de camundongos. Este aumento foi inibido pelo zinco deuteroporfirina 2,4-bis-glicol (ZnDPBG), um inibidor não seletivo da HO, quando administrado i.p. (45 e 90 µmol/kg), mas não quando i.d. (25-200 nmol/sítio). O co-tratamento com o inibidor do óxido nítrico sintase, N?-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME, 100 nmol/sítio), não potencializou a inibição por ZnDPBG. ZnDPBG (45 ou 90 µmol/kg, i.p.) não reduziu a hemorragia na pele (3 e 10 µg de peçonha/sítio), mas aumentou esta resposta na dose maior. A peçonha (25 µg e 75 µg) aumentou a atividade da HO em músculo gastrocnêmio de camundongos em dois momentos - um precoce (nas primeiras horas após o envenenamento - fase de lesão aguda) e um tardio (alguns dias após a injeção de peçonha, fase de regeneração muscular). Na dose de 75 µg da peçonha, ocorreu aumento da expressão gênica da HO-1, entre 3 e 12 horas após o envenenamento, com pouca alteração na expressão da HO-2. As alterações histológicas causadas pela peçonha (25 µg e 75 µg) consistiram de três fases: fase 1 (até 6 h ou 12 h pós-peçonha - p.p.), caracterizada por hemorragia e mionecrose, fase 2 (de 12 h a 72 h p.p.), caracterizada por um extenso infiltrado inflamatório e fase 3 (7-28 dias p.p.), caracterizada por células regenerativas e maior deposição de colágeno ao redor destas células. O tratamento com ZnDPBG (90 µmol/kg, i.p.), 15 minutos após a injeção da peçonha (75 µg), inibiu parcialmente a mionecrose, diminuindo também os níveis de CK nas primeiras horas (1-3 h) pós-peçonha. Estes resultados indicam um envolvimento da HO no edema e na mionecrose causadas pela peçonha de B. jararacussu, e mostram que a inibição desta atividade com ZnDPBG pode proporcionar alguma proteção contra esses efeitos locais / Abstract: Heme-oxygenase (HO) is an enzyme involved in the degradation of heme groups that results in the formation of biliverdin IX, iron and carbon monoxide. At low concentrations, these reaction products have anti-apoptotic, anti-inflammatory, anti-proliferative, and anti-thrombotic activities, whereas at high concentrations they can cause hypoxia, neurological damage, mitochondrial dysfunction and hiperbilirrubinemia. In this study, we investigated the involvement of HO in the increase in vascular permeability, hemorrhage and myonecrosis caused by Bothrops jararacussu snake venom. Bothrops jararacussu venom (0.3-3 µg/site) increased the vascular permeability in mouse dorsal skin. This increase was inhibited by zinc deuteroporphyrin 2,4-bis-glycol (ZnDPBG), a non-selective HO inhibitor, when administered i.p. (45 and 90 µmol/kg). In contrast, ZnDPBG given i.d. (25-200 µmol/site) did not affect the increase in vascular permeability. Co-treatment with the nitric oxide synthase inhibitor N?-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME, 100 nmol/site) did not potentiate the inhibition by ZnDPBG. ZnDPBG (45 or 90 µmol/kg, i.p.) did not reduce the dorsal skin hemorrhage (3 and 10 µg of venom/site), but rather, increased this response at the highest dose. Venom (25 and 75µg) increased the HO activity of mouse gastrocnemius muscle. The increase in activity was biphasic and included early (first few hours after envenoming, corresponding to acute damage) and late (7-18 days after envenoming - muscle regeneration) phases. Enhanced gene expression of HO-1 was seen 3-12 h after envenomation (75 µg), with little change in HO-2 expression. Histological analysis showed that the muscle damage consisted of three phases: phase 1 (up to 6-12 h post-venom), characterized mostly by hemorrhage and myonecrosis, phase 2 (12-72 h post-venom), characterized by an extensive inflammatory infiltrate, and phase 3 (7-28 days post-venom), characterized mainly by regenerative cells and an increase in collagen deposition around these cells. Treatment with ZnDPBG (90 µmol/kg, i.p.) 15 min after venom (75 µg) injection partially attenuated the myonecrosis and also decreased the creatine kinase (CK) levels after 1 and 3 h. Together, these results indicate that HO activity is involved in the edema and myonecrosis caused by B. jararacussu venom, and that the inhibition of this activity with ZnDPBG provides some protection against these local effects / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2018-06-15T14:44:25Z No. of bitstreams: 1 Cristiane Miranda da Silva.pdf: 605974 bytes, checksum: f05e2d4bf1f27e00cd1beccd0a8ffe3d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-15T14:44:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristiane Miranda da Silva.pdf: 605974 bytes, checksum: f05e2d4bf1f27e00cd1beccd0a8ffe3d (MD5) Previous issue date: 2015-09-21 / The overall recognition on the growth of lung inflammatory diseases has led to efforts to develop new therapies, particularly for the control of inflammation. Among the therapies used for disorders that affecting the lung, laser therapy has been highlighted, since it is a noninvasive therapy without side effects and anti-inflammatory and antioxidants actions. Studies have shown beneficial effects of low level laser therapy (LLLT) for the treatment of lung diseases, however, the operative mechanisms need to be better understood. Thus, lung inflammation models are important tools to extend the mechanistic knowledge of LLLT. Accordingly, we used Formaldehyde (FA), an environmental and occupational pollutant, which induces airway inflammation. FA is a chemical widely used in many industries, in anatomy laboratories, pathology, histology and is also expelled in cigarette smoke. Lung inflammation induced by exposure to FA is an interesting and important respiratory disease model. For this, we decided to investigate the effects of LLLT in the model of lung inflammation induced by FA, which is already well established. Our studies prioritized the analysis of cells recruited in the lung, blood and bone marrow, the enzyme myeloperoxidase activity, release and gene expression of cytokine, evaluation of lung vascular permeability and mast cell degranulation. Our results suggest a beneficial effect of LLLT on model of lung inflammation induced by pollutant; since the LLLT treatment significantly reduced the number of neutrophils recruited to the lung, lung vascular permeability, mast cell degranulationand also reduced the release of IL-6 and TNF levels in the bronchoalveolar lavage fluidassociated with increased release and gene expression of IL-10. This study may provide important information of a possible therapy to minimize the undesirable effects of pollutants on health. / O reconhecimento global no crescimento de doenças inflamatórias pulmonares tem levado a esforços para o desenvolvimento de novas terapias, particularmente para o controle da inflamação. Dentre as terapias usadas para patologias que acometem o pulmão, a laserterapia tem merecido destaque, uma vez que é uma terapia não invasiva, sem efeitos colaterais e com ações antiinflamatórias e antioxidantes importantes. Estudos apontam para efeitos benéficos do laser de baixa intensidade (LBI) para o tratamento de doenças pulmonares, no entanto, os mecanismos operantes necessitam ser melhor compreendidos. Assim, modelos de inflamação pulmonar são importantes ferramentas para ampliar os conhecimentos mecanicistas do LBI. Nesse sentido, utilizamos o Formaldeído (FA), um poluente ambiental e ocupacional, para indução da inflamação das vias aéreas. O FA é um agente químico amplamente utilizado em diversas indústrias, em laboratórios de anatomia, patologia, histologia, emitido pela queima de combustíveis, pela queima do gás de cozinha e também expelido na fumaça do cigarro, o que o caracteriza como um poluente ambiental e ocupacional. A inflamação pulmonar induzida pela exposição ao FA constitui um interessante e importante modelo de doença respiratória. Nesse sentido, resolvemos investigar os efeitos do LBI no modelo de inflamação pulmonar induzido pelo FA o qual já está bem estabelecido. Nossos estudos priorizaram a análise de células presentes no pulmão, sangue e medula óssea, atividade da enzima mieloperoxidase,liberação e expressão gênica de citocinas, avaliação da permeabilidade vascular pulmonar e desgranulação de mastócitos. Nossos resultados apontam para efeitos benéficos do LBI sobre modelo de inflamação pulmonar induzida por poluente, uma vez que o tratamento com LBI reduziu significativamente o número de neutrófilos recrutados para o pulmão, a permeabilidade vascular pulmonar, desgranulação de mastócitos e também reduziu a liberação de IL-6 e TNF concomitantemente ao aumento na liberação e expressão gênica de IL-10. Assim, este estudo pode fornecer subsídios importantes de uma possível terapia para minimizar os efeitos indesejáveis dos poluentes na saúde.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1182383 bytes, checksum: 1ff4fac23517aa4b22351ae87d21b4be (MD5) Previous issue date: 2010-07-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The a, b-epoxy-carvone (EC) monoterpene is found in many essential oils from plants, but can also be obtained through organic synthesis from the R-(-)-carvone. Previous studies have demonstrated that this compound exerts depressant effect on central nervous system (CNS), and is also known to have anticonvulsant effects, antioxidant and antimicrobial activities. This study investigated the antinociceptive and antiinflammatory effects of EC in adult male Swiss mice, as well as, its effect on glutamatergic neurotransmission in rats using behavioral tests, vascular permeability test, measurement of paw edema and electrophysiological recordings in vitro, respectively. Intraperiotoneal administration (ip) of EC at doses of 200 or 300 mg/kg provided a significant antinociceptive effect as shown in the writhing test induced by acetic acid. The EC also caused a reduction in formalin-induced nociception in the first (at 300 mg/ g) and second phase (at 200 or 300 mg/kg). In the hot plate test an increase in latency was found at 30 min (at 200 or 300 mg/kg) and 60 min (300 mg/kg) after administration of EC, the effect that was reversed by naloxone, an opioid receptor antagonist. After administration of EC (300 mg / kg), the increased vascular permeability induced by acetic acid was reduced, as well as the paw edema induced by carrageenan. The EC reduced by 70% the excitatory postsynaptic potentials (EPSP) field, as well as the glutamatergic EPSP of the pyramidal neurons from the CA1 hippocampal region and the neurons from the nucleus of the solitary tract (NTS). These results suggest that EC has peripheral and central antinociceptive activity in mice, probably related to opioid system activation and inhibition of acute inflammatory reaction. In addition, EC has depressant effects on excitatory postsynaptic neurotransmission. / A a,b-epoxy-carvona (EC) é um monoterpeno encontrado em muitos óleos essenciais (OE s) de plantas, mas também pode ser obtida por meio da síntese orgânica a partir da R-(-)-carvona. Estudos prévios demonstraram que esse composto exerce efeito depressor no sistema nervoso central (SNC), e é também conhecida por ter efeitos anticonvulsivantes, antioxidante e antimicrobial. O presente estudo investigou os efeitos antinociceptivo e anti-inflamatório da EC, em camundongos suíços machos adultos, bem como seu efeito sobre a neurotransmissão glutamatérgica em ratos usando testes comportamentais, teste da permeabilidade vascular, medida de edema de pata e registros eletrofisiológicos in vitro, respectivamente. A administração intraperiotoneal (i.p.) da EC nas doses de 200 ou 300 mg/kg promoveu um efeito antinociceptivo significante como mostrado no teste das contorções abdominais induzidas pelo ácido acético. A EC também provocou redução na nocicepção induzida pela formalina na primeira (300 mg/kg) e na segunda fase (200 e 300 mg/kg). No teste da placa quente foi encontrado um aumento da latência aos 30 min (nas doses de 200 ou 300 mg/kg) e aos 60 min (na dose de 300 mg/kg) após a administração da EC, um efeito que foi revertido pela naloxona, um antagonista do receptor opióide. Após a administração da EC (300 mg/kg), o aumento da permeabilidade vascular provocado pelo ácido acético foi reduzido, bem como, o edema de pata em camundongos provocada pela carragenina. A EC reduziu em 70% os potenciais pós-sinápticos excitatórios (PEPS) de campo como também os PEPS glutamatérgicos dos neurônios piramidais da região CA1 do hipocampo e dos neurônios do núcleo do trato solitário (NTS). Estes resultados sugerem que EC apresenta atividade antinociceptiva periférica e central em camundongos, provavelmente associada à ativação do sistema opioidérgico, e inibição da reação inflamatória aguda. Além disso, EC exerce efeito depressor na neurotransmissão pós-sináptica excitatória.