El documento digital no refiere asesor / El síndrome de ovario poliquístico (SOPQ) es una de las enfermedades endocrinas más frecuentes en las mujeres en edad fértil, se ha relacionado a alteraciones metabólicas y a un mayor riesgo de desarrollar DMT2 y ECV. El objetivo de este estudio es establecer las características clínicas y metabólicas de las pacientes con SOPQ. Se realiza un estudio descriptivo y prospectivo evaluándose clínica, bioquímica y ecográficamente a pacientes con diagnóstico de SOPQ en el Hospital E. Rebagliati - EsSalud; durante el año 2005. Se evaluaron 100 mujeres, edad 27.21 + 7.36 años, cuyo principal motivo de consulta fue oligo-amenorrea, obesidad e infertilidad. El hirsutismo, acné y alopecia estuvieron presentes en 89%, 44% y 21% respectivamente; el IMC medio fue de 27.97 + 6.44 Kg/m2; El 47% presentó una cintura >88 cm. El 24 y 40% tuvo una PAS > 130 y PAD > 80 mmHg respectivamente y el 37% presentó acantosis nigricans. Las concentraciones de LH y FSH fue de 8.9 + 5.67 y 4.45 + 2.45 UI/L respectivamente y se encontró una relación LH / FSH > 2 en 61%. La testosterona libre y la Androstenediona estuvieron elevadas en más del 60%. En la ultrasonografía de 78 a 95% presentaron ovarios poliquísticos según los criterios establecidos. El 66.3 y 30.9% presentó HDL < 50 y Triglicéridos > 150 mg% respectivamente. La PCR fue positiva en 22% y la Homocisteína estuvo elevada en 14%. El 14.58% presentó una glicemia basal > 100 mg% y 43.75% una Insulinemia basal > 12.5 uUI/ml. Un 47.92% presentó un HOMA-IR > 2.5; 68.75% presentó un QUICKI < 0.357 y 21.87% presentó una relación Glucosa / Insulina < 4.5. El HOMA %B fluctuó entre 30.94 y 928.8%. El 64.58 % mostró un valor < 405 en el OGIS y 52.08 % presentó un valor ISI composite < 3. Concluye que el SOPQ es frecuente en nuestra población y la presencia de alteraciones en el metabolismo de carbohidratos y lípidos es importante mas no es universal. Existen varios métodos para evaluar la IR pero la correlación entre éstos deberá ser estudiada. / Trabajo académico

La presente investigación tuvo como objetivo explorar las experiencias de un grupo de 7 mujeres jóvenes de Lima Metropolitana, con un rango de edad entre 22 y 25 años, diagnosticadas con síndrome de ovario poliquístico (SOP). Para este propósito, se llevaron a cabo entrevistas semi-estructuradas con el fin de conocer los efectos psicosociales que el SOP estaba teniendo en las vidas de las participantes. Entre los resultados se encontraron los siguientes temas: reacción inicial ante el diagnóstico, manejo de información respecto a la enfermedad, percepción de enfermedad, citas médicas, tratamiento farmacológico, preocupaciones en torno al futuro con la enfermedad, rol del paciente, salud sexual, ámbitos de la vida afectados por la enfermedad y fuentes de apoyo, percepción de sí misma, y cambios emocionales y cognitivos. Se observan indicios de que esta condición puede representar un riesgo para la salud mental de las mujeres y que existe un estrés emocional relacionado a la presencia de los diversos síntomas propios del SOP. Finalmente, se identifican factores protectores que podrían ayudar a prevenir problemas de salud mental a futuro. / This study aimed to explore the experiences of 7 young women from Lima diagnosed with polycystic ovary syndrome (PCOS) between 22 and 25 years of age. Semi-structured interviews were conducted with the idea of recognizing the psychosocial effects that PCOS was having in participants’ lives. The following themes emerged after analyzing participants’ responses: initial reaction to diagnosis, managing information about the condition, illness perception, medical appointments, pharmaceutical treatment, concerns for the future, patient’s role, sexual health, areas of life affected by the condition and sources of social support, self-perception, and emotional and cognitive changes. There is evidence that this condition could represent a risk for women’s mental health and that emotional stress related to the presence of diverse PCOS symptoms is present in these women’s lives. Finally, protective factors that could help prevent long-term mental health problems are identified. / Tesis

Memoria para optar el título de Bioquímico / El síndrome de ovario poliquístico (PCOS) es una patología neuroendocrina muy común en mujeres en edad fértil y está relacionada con más del 75% de los casos de infertilidad anovulatoria. Aunque la etiología del PCOS se desconoce, en este último tiempo se ha acumulado mucha evidencia que señala a los nervios simpáticos del ovario como un componente importante en la patología. De hecho, en el modelo de ovario poliquístico inducido por la administración de una dosis única de valerato de estradiol se observó una activación de los nervios simpáticos del ovario, reflejado en un aumento del contenido y en la liberación de noradrenalina (NA) de los terminales nerviosos. Se cree que el PCOS puede ser adquirido en etapas tempranas, como lo demuestran experimentos realizados en ratas en donde se les administró EV en el período neonatal y prepuberal. En ambos casos hubo una activación de la inervación simpática. Para probar la hipótesis de una activación temprana de los nervios simpáticos como factor etiológico, en el presente trabajo se administró isoproterenol (ISO), un agonista beta adrenérgico, en dosis crecientes de 125µg/kg peso (1X), 10X y 1000X, para remedar un tono adrenérgico aumentado a ratas neonatas y se vio cómo se afectaba la función reproductiva de este órgano cuando las ratas llegaron al estado adulto. Como resultado del tratamiento se adelantó el inicio de la pubertad en las ratas tratadas con la dosis 1000X de ISO. Aunque no regular, todos los grupos tratados presentaron ciclicidad estral y los niveles de esteroides plasmáticos no se vieron afectados en las ratas tratadas respecto al grupo control. Se observó una disminución en el contenido de NA en ovario en la dosis 1000X de ISO, mientras que el contenido de NGF ovárico aumentó en las dosis 1X y 1000X. Al parecer, la administración neonatal de ISO no produjo cambios permanentes en la foliculogénesis y esteroidogenesis, ya que es probable que la ventana en que se estimuló no fuera la adecuada para cambiar el desarrollo folicular. Sin embargo, se verificaron cambios importantes en las catecolaminas adrenales y en el tamaño del corazón por efecto del tratamiento. El adelantamiento del inicio de la pubertad nos indica que la estimulación adrenérgica podría modificar la sincronización del eje hipotálamo-hipófisis-ovario / The polycystic ovary syndrome (PCOS) is the most frequent neuroendocrine disease in women during their reproductive years and corresponds to 75% of the anovulatory fertility cases. Although the ethiology of PCOS remains unknown, a sizeable body of evidence points to the ovarian sympathetic innervation as a major component of the disease. Indeed, in the PCO model induced by the injection of a single dose of estradiol valerate, an activation of the ovarian sympathetic nerves has been demonstrated, as indicated by the increase in norepinephrine content and release from the nerve terminals. As it is suggested in epidemiologic studies in women and later confirmed in rats, it is believed that the PCOS can be developed in early stages of life. Neonatal and prepubertal rats injected with a single dose of estradiol valerate developed PCOS in the adult life. In both cases, an activation of the ovarian sympathetic nerves occurs. To test the hypothesis of an early activation of ovarian sympathetic nerves as an ethiological factor of PCOS, in the present study we administered increasing doses of the beta-adrenergic agonist isoproterenol (ISO) in concentration of 125 μg/kg of body weight (ISO 1X), ISO 10X and ISO 1000X, to simulate an enhanced adrenergic tone in neonatal rats and to study the ovarian reproductive function when adults. The results show an early onset of puberty in the rats treated with the ISO 1000X dose. Although non-regular, all of the treated rats show estrous ciclicity and the plasma steroids levels did not change in the treated rats compared to the control group. The NE content in the ovary decreased in the ISO 1000X treated rats, while the NGF content in the ovary increase in the ISO 1X and in the ISO 1000X treated rats. It seems that the neonatal administration of ISO did not produce long term effects in the foliculogénesis and esteroidogenesis. It is quite possible that the window in which the stimulation occurs was not the most indicated to change the follicular development. However, the adrenal and heart function was “programmed” by the neonatal ISO administration. In addition, the early onset of puberty indicates that the adrenergic stimulation could modify the synchronization of the hypothalamus-hipophysis-ovary axis

Orientador: André Almeida Schenka / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T05:00:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nicolosi_JacquelineSpacagna_M.pdf: 1558921 bytes, checksum: 35ee58bf52c7629b47f27930a374f9fa (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Em neoplasias malignas, a angiogênese parece favorecer não só o crescimento celular como a disseminação sistêmica, tendo, potencialmente, valor diagnóstico, prognóstico e para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Contudo, que este papel é variável de um tumor para outro, o que provavelmente reflete diferenças biológicas entre as neoplasias e limitações ou variações metodológicas dos estudos realizados. Nas neoplasias ovarianas, devido à escassez de trabalhos e grande variabilidade metodológica destes, o papel da angiogênese ainda não está estabelecido. Objetivos: (1) avaliar a influência de diferentes variáveis metodológicas na quantificação da angiogênese em tumores ovarianos; (2) estabelecer funções matemáticas para a conversão de resultados obtidos com variantes metodológicas. Metodologia: em tumores ovarianos diagnosticados no CAISM-Unicamp entre 1997 a 2003, a vascularização identificada por meio imunocoloração foi quantificada através da determinação de densidade microvascular e área endotelial. Foram avaliadas comparativamente as variantes metodológicas: formato de imagem (TIFF vs. JPEG) e número de campos de análise (1, 3, 5, 10, 15 e 20 campos de médio aumento) Resultados e conclusões: O impacto do formato de imagem sobre a quantificação vascular em tumores epiteliais ovarianos pode ser considerada pequena, já que a concordância entre imagens TIFF e JPEG é elevada (ICC>0,75). Constitui exceção o contraste TIFF vs. JPEGs de baixa qualidade, na variável densidade microvascular automática. Nesse caso, a interconversão de valores pode ser realizada através de funções de correção. Finalmente, no universo amostral avaliado, não foi possível caracterizar uma curva com platô de estabilização que permitisse a estimativa de N mínimo de campos capaz de garantir uma análise fidedigna de angiogênese em tumores ovarianos epiteliais / Abstract: In malignant neoplasms, angiogenesis seems to facilitate tumour growth and metastasis, thus, bearing a potential role in diagnostic/prognostic assessment, as well as in the development of new therapeutic strategies. However, the relative importance of such a role is variable from one entity to another, probably reflecting biological differences between tumours, as well as limitations or methodological variations among studies. In ovarian neoplasms, due to paucity of studies and great methodological variability among them, the role of angiogenesis is yet to be established. The present study aims: (1) to evaluate the influence of different methodological variables on angiogenesis quantitation in ovarian tumours and (2) to establish, by linear regression, functions that may be used to interconvert values obtained from different methodological variants. Methods: using ovarian tumours diagnosed in our Academic Women's Hospital (CAISM-Unicamp) from 1997-2003, tumour-related vascularity was detected by CD34 immunostaining and quantified by assessment of microvessel density and endothelial. Furthermore, the following methodological variants were tested: image file format (TIFF vs. JPEG), and total number of analyzed fields (1, 3, 5, 10 and 20 medium-power fields). Results and conclusions: the impact of image format over vascular quantitation was considered small, since the agreement between TIFF and JPEG was found to be high (ICC>0,75). The only exception was represented by the contrast TIFF vs. low quality JPEGs in automatic microvessel density assessments. Even in these cases, interconversion could be achieved using prediction models developed in this study. As for the second objective of the study, given the sampling universe used, we could not properly characterize a stabilization plateau curve which could allow for extrapolation of the minimum number of analysis fields (as required for an accurate morphometric analysis of angiogenesis in ovarian epithelial tumors) / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Memoria para optar al título de Bioquímico / Debido a la demanda social, la mujer ha tenido que postergar la maternidad. Esto presenta el inconveniente de que con el aumento de la edad decrece el número y la calidad de los folículos, disminuyendo progresivamente la fertilidad. Además, se ha descrito que los ovarios de mujeres pre y posmenopáusicas presentan características del desarrollo folicular similares al del ovario poliquístico (PCO) descrito en mujeres en edad fértil. También se ha descrito que mujeres con PCO y posmenopáusicas (entre 51 y 94 años de edad) presentan una mayor densidad de fibras nerviosas ováricas comparadas con ovarios de mujeres normales. En el modelo múrido, la rata presenta un aumento en la concentración de noradrenalina (NA) intraovárica y un incremento en el número de folículos tipo III (FTIII) y quistes ováricos a medida que envejece. Como consecuencia, disminuye el número de cuerpos lúteos (CL), el porcentaje de ovulación y el número de partos y crías. Por otro lado, en PCO en rata inducido con estímulos hormonales y/o ambientales, se generan características similares a las descritas en el envejecimiento ovárico. Además, PCO en ratas es acompañado de un aumento en la activación noradrenérgica ovárica, la cual es gatillada por un aumento previo en la producción de NGF intraovárico y su receptor de baja afinidad p75NTR. Mas aún, incremento de NGF intraovárico mediante al inyección de células sobreproductoras en el ovario de ratas jóvenes, induce un incremento del número de FTIII y prequistes. Por lo tanto, proponemos que NGF como factor neurotrófico y/o factor de crecimiento, durante el periodo de subfertilidad, acelera el envejecimiento ovárico siendo un importante componente para el control del final del periodo reproductivo en la rata. Ratas Sprague-Dawley de 6, 8 y 10 meses de edad fueron tratadas con NGF localmente en el ovario durante 28 días mediante una minibomba osmótica. Durante el procedimiento la ciclicidad estral fue estudiada por frotis vaginal. Posteriormente las ratas fueron eutanasiadas y se determinó la concentración de NGF intraovárico, la concentración de NA por HPLC, hormonas esteroidales en suero por EIA, y la morfología ovárica fue analizada mediante cortes de 6 um teñidos con hematoxilina-eosina. Los resultados demostraron los mayores efectos de la administración de NGF se observaron a los 10 meses de edad, donde observamos un incrementó en la concentración de NA y el número de FTIII en ovario, como esperábamos, disminuyó el número de CL y el porcentaje de ovulación. En los tratamientos de 6 y 8 meses no se observaron cambios tan importantes. Sin embargo, se observaron algunas características típicas del envejecimiento ovárico, como incremento de la concentración de noradrenalina, disminución de la población folicular y aumento de folículos tipo III. En la función esteroidogénica, se observó un perfil hormonal sérico similar al del envejecimiento. Estos resultados sugieren que el aumento intraovárico de NGF participa en el envejecimiento del ovario, favoreciendo la aparición de las características observadas al final del periodo reproductivo. / Woman has delayed their motherhood still after 30 years old because of social demand, but ovarian follicle numbers and quality decreases with age, progressively decreasing the fertility with age. Furthermore, it has been described that ovaries from women during the pre- and/or post-menopausal period show a follicular development similar to polycystic ovary (PCO) in fertile women. It has been also found that the ovary of women with PCO (between 18 and 44 years old) or during postmenopausal period (between 51 and 94 years old) shows increased nerves fibers in contrast with the ovary of normal women. In the murine model, the ovary of ageing rat is characterized by increased concentration of noradrenaline (NA) and elevated number of type III follicles (FTIII) and cysts in the ovary. As a consequence, it decreased the number of corpus luteum (CL), the ovulation rate, pregnancy and the number of live pups. PCO in rat, either induced by hormonal and/or environmental stimulus, presents similar characteristics as most of ovarian ageing. In addition PCO in rats is accompanied by an increase in the activity of sympathetic nerves induced by a previous increase in the intraovarian levels of NGF (nerve growth factor) and its receptor p75NTR. Moreover, local increase of NGF by injection of overproducing cells in the ovaries of young rats induces an elevated number of FTIII and pre-cysts. Therefore, now we propose that NGF, during the subfertile period, could act either as a neurotrophic factor or as a growth factor to accelerate the ovarian ageing being a principal component to control the end of reproductive period in rats. Sprague-Dawley rats 6, 8 and 10 months old (before at the end of the reproductive period) were used. We administered NGF during 28 days trough an osmotic mini-pumps, connected to the ovary by a sylastic cannula. During the procedure the estrual cycling activity was followed by vaginal smear. Rats were euthanized and the ovarian concentration of NGF was determined by ELISA, NA was determined by HPLC, the concentration of steroid hormones in serum by EIA and the morphological analysis of the ovary was done in 6 um slices stained with hematoxylineosin measured. The major effects of NGF occurred in the 10 months old rats, at this age we observe an increase in the concentration of NA and in the number of FTIII. As we can expect, the number of CL and the ovulation rate were decreased. In the NGF treatment at 6 and 8 months old there were no important changes. However, we observed the appearance of some ovarian ageing characteristics such as an increase in the concentration of NA, decrease of follicular population and an elevate number of FTIII (it was observed at 8 month old, as we can expect if the ageing is accelerated). In the steroidogenic function, we observe in all treatments the normal ageing-hormonal profile. These results suggest that the intraovarian excess of NGF accelerate the ageing ovarian, maybe increasing the rises of the typical characteristic at the end of the reproductive period

OBJETIVO: Determinar si el síndrome de ovario poliquístico es un factor asociado para diabetes mellitus tipo 2 en pacientes de 15 a 45 años atendidos en el servicio de Endocrinología del Hospital María Auxiliadora de enero-julio del 2015. METODOLOGIA: El estudio es observacional, analítico, retrospectivo, de casos y controles. Se estudio a 360 pacientes 15 a 45 años, de las cuales eran 180 mujeres con diagnóstico de DM-2 (casos) y 180 mujeres sin diagnóstico de DM-2(controles). Fue realizado de datos dados por la Oficina de Estadística de la consulta externa del Servicio de Endocrinología. El análisis estadístico se realizó mediante SPSS versión 20. RESULTADOS: Las <40 años fue mayor con 58.3%. La edad y DM-2 tuvo X2 0,011 y p=0.915, los <40años tuvieron OR 1.047; IC95%, 0,688-1,592, que los >o=40 para DM-2. Los <30kg/m2 fue mayor con 53.1%. El IMC y DM-2 tuvo X2 1,606 y p=0.205, los >o=30kg/m2 tuvieron OR 1.337; IC95%, 0,883-2,025 que los <30kg/m2 para DM-2. De las >o=40años con SOP y DM-2 tuvo X2 0,103 y p=0.748, las >o=40 años con SOP tuvieron OR 1.365; IC95%, 0,480-3,878 que los sin SOP para DM-2. De las pacientes >o=30kg/m2 con SOP y DM-2 tuvo X2 0,17 y p=0.895, las >o=30kg/m2 con SOP tuvieron OR 1,203; IC95%, 0,458-3,160 que los sin SOP para DM-2. Las pacientes con SOP fue de 7.5%. El factor SOP y DM-2 tuvo X2 1,441 y p=0.230, SOP tuvo OR 1.773; IC95%, 0.789-3.986 que los sin SOP para DM-2. CONCLUSIONES: La DM-2 fue más frecuente en los <40 años. La edad no se asoció con DM-2. La DM-2 fue más frecuente en los >o=30kg/m2. El IMC no se asoció con DM-2. El factor SOP fue mayor en las >o=40 años y obesas (>o= 30kg/m2) con DM-2. Las pacientes >o=40años con SOP no se asociaron con DM-2. Las pacientes >o=30kg/m2 con SOP no se asociaron con DM-2. El SOP fue mayor en DM-2. El SOP no se asoció con DM-2.

Doctor en Bioquímica / Reproduction is regulated through the integration of information that comes from the hypothalamus, hypophysis, and the ovary. There are critical hormone sensitive periods during development during which they are especially vulnerable to exposure to abnormal hormonal levels resulting from metabolic problems or environmental sources. These exposures may permanently alter the differentiation and function of reproductive organs. Several studies performed in humans and animal models have suggested that polycystic ovary syndrome (PCOS) originates during early development due to exposure to abnormal steroidal hormone levels. Supporting this, our group recently reported that the administration of a single dose of estradiol valerate (EV) to newborn rats can irreversibly program the polycystic ovary condition during adulthood. However, there is no information about how this neonatal exposure to a single dose of EV can determine the functional and structural changes seen in the adult ovary. The aim of this research was to determine if there are genes—primarily those most reported to be related to PCOS in humans—with permanently altered expression and if these expression patterns are due to modifications in the methylation pattern in their DNA sequence. A single dose (10 mg/kg) of EV was administered to neonatal rats, and PCR array and real-time PCR analyses were conducted to examine the subsequent gene expression patterns of growth factors, nuclear receptors, and coregulators. Twenty-four hours after the exposure, the EV-exposed rat ovaries expressed more androgen receptor (Ar) than did the control ovaries; in the 60-day old rats, the Ar mRNA levels decreased 6.4-fold relative to the controls. The interstitial tissue and antral follicles from the adult EV-treated rats expressed more Ar than did the control preantral follicles, suggesting a failure of the control mechanism for Ar expression in antral follicles. Using the mass-array technique, the methylation patterns of different transcription factor binding sites were found to be associated with the Ar gene. NBRE, the response element of nerve growth factor-induced B (Ngfi-b), was hypomethylated in the Ar gene from the EV-treated ovaries. There was also an increase in anti-Müllerian hormone (AMH) expression in adult ovaries (mRNA and protein) that was induced by the neonatal exposure to estradiol. The EV-treated rat ovaries had a higher level of AMH immunoreactivity in the antral follicles than did the controls; however, no significant differences were seen between the preantral follicles of the treated and control groups. The methylation pattern of the Amh gene from the ovaries of EV-treated adult rats showed differential methylation in the CpGs related to the estradiol response element (ERE) in the Amh gene. The neonatal ovary samples had hypermethylated CpGs in comparison to the 30- and 60-day old rats; the samples (granulosa cells) from the 60-day old rats had more methylation of the CpGs than did those from the 30-day old rats; thus, the methylation pattern depended on the stage of development. When we compared the EV-exposed and control rats, we found more methylation of the CpGs in the samples from the 60-day old EV-exposed rats than in those from the controls; there were no differences between the groups for the 2- and 30-day old rats. This work demonstrated that the neonatal exposure to estradiol induces an overexpression of AMH and AR in the rat ovary. The mechanism by which these changes are induced may involve an increase in the methylation of the ERE associated with the Amh gene, suggesting that the change in methylation allows ESR1 to induce Amh expression. The hypomethylation of NBRE associated with the AR gene suggests that AR expression may be induced in response to nerve growth factor or luteinizing hormone. These epigenetic modifications found in the current rat model provide a new framework for understanding the genesis of the polycystic ovary and its maintenance in humans, allowing more focus on the effects due to estrogen exposure / Die Fortpflanzung in Säugetieren wird durch Signale aus dem Hypothalamus, der Hypophyse und der Gebärmutter gesteuert. Während der Anlage der Gebärmutter in der Embryonalentwicklung gibt es ein kritisches Zeitfenster bei dem die Entwicklung durch veränderte Hormonspiegel oder andere äußere Einflüsse gestört werden kann. Dabei kann es zur permanenten Schädigung der reproduktiven Organe kommen. Studien am Menschen und in Tiermodellen legen nahe, dass das sogenannte Polyzystische Ovarialsyndrom durch erhöhte Steroidhormonspiegel verursacht wird. So konnte unsere Arbeitsgruppe kürzlich zeigen, dass bei neugeborenen Ratten die Gabe einer einzigen Dosis Estradiolvalerat (EV) ausreicht um ein Polyzystisches Ovarialsyndrom in den erwachsenen Tieren zu erzeugen. Die zugrundeliegenden Mechanismen sind allerdings bis heute nicht bekannt. Ziel dieser Arbeit war es zu untersuchen, ob die Expression bestimmter Gene in erwachsenen Ratten durch die Estradiolvaleratgabe im neonatalen Stadium permanent verändert wird und ob die veränderte Genexpression mit epigenetischen Veränderungen auf der Ebene der DNA Methylierung einhergeht. Hierzu wurden neugeborene Ratten mit einer einzigen Dosis EV (10 mg/Kg) behandelt um anschließend die Genexpression von Wachstumsfaktoren, nukleären Hormonrezeptoren und ihre Kofaktoren mittels PCR Arrays und quantitativer RT-PCR zu untersuchen. Wir konnten zeigen, dass die Ovarien von EV-behandelten Ratten das Androgenrezeptorgen (Ar) nach 24h stärker exprimierten als die Kontrollen. Nach 60 Tagen ging die ovariale Ar Expression allerdings um das 4-6-fache gegenüber unbehandelten Tieren zurück. Histologisch war die Ar Expression in antralen Follikeln und im Interstitium vom EV-behandelten adulten Tieren stärker als in preantralen Follikeln, was auf eine Störung von Regulationsmechanismen in antralen Follikeln hindeutet. Mittels MassArray-Technologie konnte außerdem gezeigt werden, dass die veränderte Ar Expression in EV-behandelten Tieren mit der verringerten DNA Methylierung einer potentiellen Transkriptionsfaktorbindestelle (NBRE: nerve growth factor-induced B response element) korreliert. Daneben war die Expression des Anti-Müller-Hormons (AMH) in Ovarien von EV-behandelten adulten Tieren sowohl auf mRNA als auch auf Proteinebene erhöht. Immunhistologisch zeigten insbesondere die antralen Follikeln von EV-behandelten adulten Tieren (nicht aber Interstitium und preantrale Follikeln) eine stärkere Färbung für AMH. Auch im Amh Gen konnten entwicklungs- und behandlungsabhängige Veränderungen der DNA Methylierung gemessen werden. Eine Bindungsstelle für den Estrogenrezeptor (ERE: estradiol response element) im Amh Gen zeigte Methylierungsunterschiede in Ovarien von adulten EV-behandelten Ratten. In normalen Tieren war der Methylierungsstatus dieser Region abhängig vom Entwicklungsstadium: im Vergleich zu 30 und 60 Tage alten Ratten war das Element in neugeborenen Ratten hypermethyliert und in Granulosazellpräperaten von 30 Tage alten Ratten weniger methyliert als in Präparaten von 60 Tage alten Tieren. Im Vergleich mit EV-behandelten Tieren zeigten Proben von 60 Tage alten Tieren eine signifikant erhöhte DNA Methylierung, während EV-behandelte neugeborene und 30 Tage alte Tiere sich nicht signifikant von den Kontrollen unterschieden. In dieser Arbeit konnte also gezeigt werden, dass bei Ratten die Gabe von Estradiol im neonatalen Stadium zu einer ovarialen Überproduktion von AMH und AR führt. Die Mechanismen die zu diesen Veränderungen führen könnten mit dem Verlust der DNA Methylierung im ERE des Amh Gens zusammenhängen, was vermutlich zu einer erhöhten ESR1-Bindung und AMH Expression führt. Die Hypomethylierung des NBRE im Ar Gen deutet darauf hin, dass hier NGF (nerve growth factor) oder LH (luteinisierende Hormon) an der veränderten Regulation beteiligt sind. Die im Rattenmodel gefundenen epigenetischen Veränderungen bieten neue Anhaltspunkte um die Entstehung und die Persistenz des Polyzystische Ovarialsyndroms im Menschen besser zu verstehen und zukünftige Forschung wird sich noch gründlicher mit den Effekten der Estrogenexposition auseinandersetzen müssen / Conicyt Mecesup Fondecyt

Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado de Doctora en Bioquímica / Antecedentes: El síndrome de ovario poliquístico (SOP), patología endocrinometabólica, afecta alrededor del 15% de mujeres en edad fértil, afectando principalmente la función del ovario, aunque también altera la función de otros tejidos de importancia reproductiva, como el endometrio. El 70% de las mujeres con SOP son obesas y entre el 60 – 80 % de ellas presentan resistencia a la insulina. La obesidad genera un ambiente pro-inflamatorio leve pero crónico, caracterizado por una alta producción de citoquinas pro-inflamatorias. Además, adiponectina y TNF-α, marcadores de obesidad, tienen un papel importante en la sensibilidad y la acción de insulina en los tejidos. Los niveles de adiponectina (sensibilizador de insulina) disminuyen, mientras que los de TNF-α (regulador negativo de la vía de la insulina) aumentan en mujeres obesas. Estos cambios podrían afectar el estado energético del endometrio, tejido que exhibe una anormal señalización de insulina bajo la condición SOP (ambiente hiperandrogénico / hiperinsulínico). Objetivo: Evaluar si el ambiente proinflamatorio representado por TNF-α, afecta la señalización de insulina a través de una disminución de la señalización de adiponectina o por la inactivación de IRS1, en endometrios de mujeres obesas con SOP. Metodología: En muestras de suero provenientes de cuatro grupos de estudio: Delgadas (peso normal), Delgadas-SOP, Obesas y Obesas-SOP (este último grupo es el único con hiperinsulinemia / hiperandrogenemia) (n=7 para cada grupo), se determinaron mediante ELISA los niveles de adiponectina, TNF-α e IL-6. En endometrios provenientes de los cuatro grupos de estudio, se determinó los niveles de proteína / mRNA de moléculas asociadas a las vías de señalización de TNF-α (TNF-α, TNFR1, TNFR2, NFκB (p65), IKK, IκB) y adiponectina (adiponectina, AdipoR1, AdipoR2, APPL1, AMPK) por IHQ / WB y qPCR; además, se evaluó el ambiente pro-inflamatorio a través de la proteína CD68 y los niveles de IL-6 e IL-6R, mediante IHQ. Los estudios in vitro se realizaron en cultivos de células estromales endometriales humanas (líneas T-HESC / St-T1b) bajo condiciones hiperandrogénicas / hiperinsulínicas, y se determinó el efecto de TNF-α sobre moléculas asociadas a su vía de señalización y a la vía de adiponectina. Se analizó además, la participación de NFκB, usando un inhibidor de NFκB (PDCT), en el efecto de TNF-α sobre la expresión de adiponectina en células St-T1b, por ICQ / WB; finalmente, se evaluó el efecto de TNF-α sobre los niveles de IRS1 fosforilado en tirosina (activante) o serina (inactivante) y sobre la activación de quinasas (S6K, JNK, AKT), posiblemente involucradas en la inactivación de IRS1 en una condición de resistencia a la insulina. Resultados: Se observó una menor concentración de adiponectina en sueros de Obesas-SOP (p<0,05), no se observaron cambios en las concentraciones de TNF-α sérica, mientras que IL-6 aumenta en sueros de Delgadas-SOP y ambos grupos de Obesas versus Delgadas (p<0,05). A nivel tisular, los niveles de adiponectina disminuyen (p<0,05) y los de TNF-α aumentan (p<0,001) en endometrios de Obesas-SOP. El contenido proteico de los receptores de TNF-α son mayores en grupos Delgadas-SOP y ambos grupos de Obesas (p<0,05); sin embargo, el nivel de TNFR2 y de NFκB nuclear presenta un importante aumento en endometrios de Obesas-SOP (p<0,001). En relación a IL-6 endometrial, ésta es menor en Delgadas versus los otros grupos (p<0,05), mientras que su receptor no cambia. Además, un mayor ambiente pro-inflamatorio se observó en endometrios de Obesas-SOP versus los otros grupos (p<0,01). Los ensayos in vitro, los cuales confirman en gran medida lo observado en el modelo ex vivo, muestran que la condición hiperandrogénica / hiperinsulínica disminuye los niveles de adiponectina y moléculas asociadas a su vía (APPL1 / AMPK), al igual que el efecto observado con TNF-α a través de la activación de NFκB (p<0,05). Además, TNF-α induce la expresión de su propia vía de señalización, aumentando los niveles de TNFR1 y -2, moléculas que activan NFκB y el contenido nuclear de NFκB. Por último, TNF-α aumenta la fosforilación en serina de IRS1 y la activación de S6K, JNK y AKT. Conclusión: En consecuencia, la obesidad podría afectar la señalización de insulina en el endometrio, a través del aumento del ambiente pro-inflamatorio y la producción de TNF-α local, lo que generaría una disminución de la señalización de adiponectina a través de NFκB y/o una inactivación de IRS1 a través de S6K/JNK bajo condiciones hiperandrogénicas / hiperinsulínicas, lo que comprometería el metabolismo energético necesario para el normal funcionamiento del tejido endometrial, lo que explicaría, en parte, las fallas reproductivas observadas en endometrios de mujeres obesas e hiperinsulínicas con SOP / Background: Polycystic ovary syndrome (PCOS), an endocrine-metabolic disorder, affects about 15% of women of childbearing age, mainly affecting ovarian function, but also alters the function of other tissues of reproductive importance, such as the endometrium. Seventy percent of women with PCOS are obese and between 60 - 80% of them have insulin resistance. Obesity generates a mild but chronic pro-inflammatory environment, characterized by high production of pro-inflammatory cytokines. In addition, TNF-α and adiponectin, obesity markers, have an important role in insulin sensitivity and action in tissues. In fact, adiponectin level (insulin sensitizer) decreases, whereas those of TNF-α (negative regulator of insulin pathway) increases in obese women. These changes could affect the energy state of the endometrium, tissue exhibiting abnormal insulin signaling under the SOP condition (hyperandrogenic / hyperinsulinemic environment). Objective: To evaluate whether the proinflammatory environment represented by TNF-α, affects insulin signaling through a decrease in adiponectin signaling or inactivation of IRS1, in endometrium of obese women with PCOS. Methodology: In serum samples from the four study groups: Lean (normal-weight), Lean-PCOS, Obese and Obese-PCOS (the latter group is the only one with hyperinsulinemia / hyperandrogenaemia) (n = 7 for each group) were determined: adiponectin, TNF-α and IL-6 levels by ELISA. In endometrium from the four study groups, was determined the levels of protein / mRNA of molecules associated with the signaling pathways of TNF-α (TNF-α, TNFR1, TNFR2, NFκB (p65), IKK, IκB) and adiponectin molecules (adiponectin, AdipoR1, AdipoR2, APPL1, AMPK) by IHC / WB and qPCR; additionally, the proinflammatory environment through CD68 protein and IL-6 / IL-6R levels, was evaluated by IHC. In vitro studies were conducted in human endometrial stromal cells (lines T-HESC / St-T1b) under hyperandrogenic / hyperinsulinic conditions, and the effect of TNF-α on molecule levels associated with its signaling pathway and adiponectin pathway, was determined by WB. NFκB participation was further analyzed using a NFκB inhibitor (PDCT) of TNF-α action on adiponectin expression in St-T1b cells by ICC; finally, it was evaluated the effect of TNF-α on in tyrosine phosphorylated levels of IRS1 (activating) or serine (inactivating) and kinases activation (S6K, JNK, AKT), possibly involved in the inactivation of IRS1 in an insulin resistance condition. Results: A lower concentration of adiponectin in serum from Obese- PCOS (p <0.05) was observed, no changes were found in serum concentrations of TNF-α, whereas IL-6 increases in serum from Lean-PCOS and both Obese groups versus the Lean group (p <0.05). At tissue level, adiponectin content decreases (p <0.05) and TNF-α increases (p <0.001) in Obese-PCOS endometrium. The protein content of TNF-α receptors are higher in Lean-PCOS groups and both Obese groups (p <0.05); however, nuclear NFκB and TNFR2 levels present an important increase in endometrium from Obese-PCOS (p <0.001). Regarding endometrial IL-6, a lower level in Lean versus the other groups was observed (p <0.05), while receptor content does not change. In addition, a higher pro-inflammatory environment was observed in Obese-PCOS endometrium versus the other studied groups (p <0.01). In vitro assays, which largely confirm what was observed in the ex vivo model, show a decrease of adiponectin levels and molecules associated with their pathway (APPL1 / AMPK) under hyperandrogenic / hyperinsulinic conditions, as well as, the effect observed with TNF-α through NFκB activation (p <0.05). In addition, TNF-α induces the expression of their own signaling pathway, increasing levels of TNFR1 and -2, molecules that activate NFκB and nuclear NFκB content. Finally, TNF-α increases phosphorylated IRS1 levels in serine and activation of S6K, JNK and AKT. Conclusion: Consequently, obesity may affect insulin signaling in the endometrium, by increasing the proinflammatory environment and local production of TNF-α, generating a decrease in adiponectin signaling through NFκB and / or inactivation of IRS1 through S6K / JNK under hyperandrogenic / hyperinsulinic conditions, which compromise the energy metabolism necessary for normal functioning of endometrial tissue. These abnormalities may explain in part, reproductive failures observed in endometria from obese and hyperinsulinic women with PCOS / Conicyt; Fondecyt

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